CN117210379B

CN117210379B - 一种促进猫化毛排毛的屎肠球菌jyef-355及应用

Info

Publication number: CN117210379B
Application number: CN202311482499.XA
Authority: CN
Inventors: 曹维超; 刘锦程; 司书锋; 于宏博; 周文浩
Original assignee: Shandong Weiman Pet Food Co ltd
Current assignee: Shandong Weiman Pet Food Co ltd
Priority date: 2023-11-09
Filing date: 2023-11-09
Publication date: 2024-01-30
Anticipated expiration: 2043-11-09
Also published as: CN117210379A

Abstract

本发明提供一种促进猫化毛排毛的屎肠球菌JYEF‑355及应用，属于微生物技术领域；所述屎肠球菌JYEF‑355于2023年4月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.27222，分类命名为屎肠球菌Enterococcus faecium；所述屎肠球菌JYEF‑355在制备促进猫化毛排毛产品中的应用。本发明所述屎肠球菌JYEF‑355能够促进猫毛在胃肠模拟环境中的分解；所述屎肠球菌JYEF‑355能够帮助猫通过排便的方式排出肚子里的毛球，具有促进排毛的效果，可以预防或治疗毛球症；所述屎肠球菌对于猫的健康状况具有改善作用。

Description

一种促进猫化毛排毛的屎肠球菌JYEF-355及应用

技术领域

本发明涉及一种促进猫化毛排毛的屎肠球菌JYEF-355及应用，属于微生物技术领域。

背景技术

由于猫有舔毛梳毛习惯，并且舌头上有许多倒刺，毛发无法吐出就会被卷入腹中，逐渐团结成小球状。这些无法被消化的毛发，有些会跟随粪便排出，有些会以呕吐的形式从口中吐出。但是，日积月累，大量不易消化的毛发被卷入猫消化道内，当大量毛发聚集，形成难以排出的球结时，就会堵塞肠道，导致猫精神沉郁、食欲不振、嗜睡、喜卧，出现呕吐、腹部鼓胀、腹部疼痛以及便秘等症状，严重影响猫的健康成长，如不及时治疗，甚至会威胁猫生命。

为了预防或治疗毛球症，帮助猫将毛发排出体内，需要定期给猫喂食化毛膏、化毛片、猫草等化毛球产品辅助其排出体内毛球。

化毛膏主要通过油脂的润滑作用使毛发从消化道滑出，同时也会造成营养物质一并滑出，容易造成猫营养不良，长期食用影响肠胃对营养物质的吸收，而且有可能引发腹泻；化毛片含有大量诱食成分和填充剂，有效成分少，经常食用会使猫摄入大量不必要的填充剂，给肠胃造成一定的负担，长期服用造成胃功能减弱，不利于猫健康；猫草的获取不够便捷，适口性一般，有些猫不喜欢吃植物，会引发采食量不足、排毛效果不好等问题，并且猫草主要促使猫通过呕吐的方式吐出毛球，不能做到无痛排毛。

益生菌是猫肠道中存在且对猫健康有益的一类微生物，目前已被应用于治疗猫腹泻、改善软便、提升免疫力等方向，但目前并未见报道可以帮助猫化毛排毛的菌株。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供一种促进猫化毛排毛的屎肠球菌JYEF-355及应用，实现以下发明目的：促进猫毛分解；帮助猫通过排便的方式排出肚子里的毛球；改善猫的健康状况。

为解决上述技术问题，本发明采取以下技术方案：

一种促进猫化毛排毛的屎肠球菌JYEF-355，所述屎肠球菌JYEF-355于2023年4月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.27222，分类命名为屎肠球菌Enterococcus faecium；

一种利用所述屎肠球菌JYEF-355制备得到的菌剂；

所述菌剂中屎肠球菌JYEF-355的数量为1.4-1.6×10¹⁰cfu/g；

所述菌剂的制备方法为屎肠球菌JYEF-355经过活化、培养得到菌液，离心后收集菌体，重悬于复原脱脂乳中，获得菌悬液，冷冻干燥后得到菌粉，再与葡萄糖混合，得到屎肠球菌的菌剂；

所述菌悬液中，屎肠球菌JYEF-355的浓度为1.8-2.2×10¹⁰cfu/mL；

所述复原脱脂乳的质量浓度为14-16%；

所述屎肠球菌JYEF-355在制备促进猫化毛排毛产品中的应用。

所述屎肠球菌JYEF-355，于2023年4月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏编号：CGMCCNo.27222；该菌株具有促进猫化毛排毛的效果。

与现有技术相比，本发明取得以下有益效果：

本发明所述屎肠球菌JYEF-355能够促进猫毛在胃肠模拟环境中的分解；所述屎肠球菌JYEF-355能够帮助猫通过排便的方式排出肚子里的毛球，具有促进排毛的效果，可以预防或治疗毛球症；所述屎肠球菌JYEF-355能改善猫的健康状况，帮助猫减轻体内毛球聚集带来的呕吐、厌食、喜卧、便秘、精神萎靡、掉毛、毛发粗糙无光泽等症状，粪便评分、呕吐程度、精神状态、掉毛程度、毛发顺滑度、食欲、活动量、腹部状态八个方面的评分值均有提升。

附图说明

图1为猫粪便中毛发排出量的柱状图；

*表示与对照组相比差异显著（P＜0.05）；***表示与对照组相比差异非常显著（P＜0.001）；

图2为屎肠球菌JYEF-355对猫身体状况的影响评分图。

具体实施方式

实施例1菌种的分离鉴定

1、菌株分离纯化

（1）菌株来源：健康猫粪便，2022年9月20日采集于山东省临沂市沂水县柴阳村。

（2）制备MRS固体培养基：取蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母浸粉5g、葡萄糖20g、醋酸钠5g、柠檬酸三铵2g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.25g、吐温-80 1mL、琼脂粉15g，用去离子水溶解，定容至1000mL，115℃高压蒸汽灭菌20min，将灭菌后的培养基倒入平皿中，放凉凝固后待用。

（3）菌株的分离纯化：取10mL无菌生理盐水（0.85%）于无菌三角瓶中，然后取1g步骤（1）的健康猫粪便加入其中，振荡混匀后用无菌生理盐水进行梯度稀释，制成浓度梯度为10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7的稀释液。将稀释液分别涂布到MRS固体培养基平板上，置于厌氧培养箱中37℃恒温静置培养48h。培养结束后挑选边缘整齐、微白色中间有凸起、直径1~2mm的菌落。挑取单菌落在MRS固体平板上进行三区划线，于37℃、厌氧条件下培养48h，重复上述操作，共经过3次划线，挑取单菌落，置于甘油管中-80℃保藏。

2、鉴定

将步骤(3)分离纯化后的单菌落送至中国工业微生物菌种保藏管理中心进行鉴定，鉴定得到16S rDNA的基因序列如序列表中的SEQ ID NO.1所示。

该菌株被鉴定为屎肠球菌Enterococcus faecium，将鉴定后的菌株命名为屎肠球菌JYEF-355，将该菌株送至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏信息如下：

菌株名称：屎肠球菌JYEF-355；分类命名：屎肠球菌Enterococcus faecium；保藏日期：2023年4月27日；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101；保藏编号：CGMCC No.27222。

实施例2屎肠球菌JYEF-355菌剂的制备

（1）制备MRS液体培养基：取蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母浸粉5g、葡萄糖20g、醋酸钠5g、柠檬酸三铵2g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.25g、吐温-80 1mL，用去离子水溶解，定容至1000mL，115℃高压蒸汽灭菌20min，将灭菌后的培养基倒入平皿中，放凉后待用。

（2）制备菌液：将-80℃保藏的屎肠球菌JYEF-355在MRS固体培养基平板上活化，挑取活化后的1个单菌落转接到100mL MRS液体培养基中，37℃恒温静置培养12h制得种子液，将种子液按照1%（v/v）接种量接种于MRS液体培养基中，然后在厌氧条件下37℃恒温静置培养48h，获得大量菌液，菌液中菌的浓度为2.0×10⁹cfu/mL。

（3）制备菌剂：将菌液离心，收集菌体，用无菌生理盐水洗涤后，重悬于15%（w/w）的复原脱脂乳中，获得浓度为2.0×10¹⁰cfu/mL的菌悬液，将菌悬液冷冻干燥后，获得菌粉；将菌粉与葡萄糖混合，制成菌剂；葡萄糖购自山东西王糖业有限公司；在本实施例中，制备的菌剂中菌体数量为1.5×10¹⁰cfu/g。

实施例3猫毛发体外仿生消化试验

1、试验材料：选择皮肤健康状况良好的3只猫(品种分别为布偶、银渐层、美短)，每只猫采集1g猫毛，置于50mL离心管中。将猫毛取出，置于65℃烘箱中烘干至恒重。

2、模拟胃液、模拟肠液的制备

（1）模拟胃液的制备：称取0.2g氯化钠与0.32g的胃蛋白酶，加入100mL蒸馏水搅拌溶解，使用1mol/L的盐酸溶液调节pH至2.5，过0.2μm滤膜，备用。

（2）模拟肠液的制备：称取磷酸二氢钾0.68g，加入50mL蒸馏水溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.75。称取胰酶1g，加50mL蒸馏水搅拌溶解。将上述两溶液混合，即为模拟肠液。

3、试验方法：

（1）取6个相同的烧杯（实验组和对照组各3个），每个烧杯中加入0.3g步骤1中恒重后的猫毛（3种猫毛各0.1g），试验组加入20mL实施例2步骤（2）制备的菌液，对照组加入20mL无菌的MRS液体培养基。

（2）在每个烧杯中分别加入50mL的模拟胃液，摇匀，放置摇床，胃模拟消化4h（37℃60rpm）。取出胃模拟产物，利用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.75，加入40mL模拟肠液，密封，放置摇床肠模拟消化9h（37℃ 60rpm），胃肠模拟结束后取出产物。

（3）用80目尼龙网过滤猫毛，蒸馏水洗涤三次，置于65℃烘箱中干燥至恒重。

（4）称量恒重后猫毛的重量，计算失重率，结果计入表1。

表1 猫毛发失重率

注：*表示与对照组相比差异显著（P＜0.05）。

由表1可以看出，在加入屎肠球菌JYEF-355菌液后，猫毛失重率有所增加。猫毛试验组与对照组相比失重率提高了5.43个百分点，有显著性变化。说明屎肠球菌JYEF-355能够促进猫毛在胃肠模拟环境中的分解，并且对于猫毛分解有较强促进作用。

实施例4屎肠球菌JYEF-355体内化毛试验

（1）试验选取20只1~2岁健康成年布偶猫，体重在3.5~4.5kg，随机分为2组（试验组和对照组），每组10个重复，每个重复1只猫，（每组中公母猫各占1/2），所有猫在试验开始前半年之内未服用过任何化毛产品。

（2）试验前进行必要的免疫以及驱虫处理，猫砂每日更换，猫舍每日清扫。

（3）试验期间每只猫单笼饲养，对照组和试验组每日饲喂等量相同的基础饲粮，对照组每日补充2g葡萄糖，试验组每日补充2g实施例2制备的菌剂。

（4）试验预试期为1周，正试期为8周，第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天、第49、第56天时，收集猫当天全部粪便，观察有无排出猫毛，将粪便中的猫毛分离出来，清水冲洗后65℃干燥箱中干燥至恒重，称重并记录数据，结果见图1。

由图1可知，在试验期间，试验组猫粪便中毛发排出量呈现出先上升后下降然后趋于平缓的趋势，而对照组猫在整个过程中粪便毛发排出量变化不大。在试验第7天，试验组猫通过排便排出大量毛发，一直到第21天时，粪便中毛球重量还在上升，而对照组猫粪便毛球重量一直趋于稳定，说明猫腹中聚集了大量毛球，若不服用任何有助于化毛的产品，日常只能通过排便排出少量毛发，肠道仍有残留，久而久之会影响健康。而服用实施例2制备的菌剂一段时间后，试验组猫粪便中毛发排出量明显高于对照组，说明该菌剂有助于猫通过排便的方式排出肚子里的毛球，具有促进排毛的效果，且见效快，有利于健康。第28天时，试验组猫粪便毛球重量开始出现下降趋势，第42天后，粪便中毛发排出量趋于稳定，可能是此前已经将腹中积累的大部分毛球排出，但由于猫有舔毛梳毛的习惯，会不断将毛发卷入，所以会一直有毛发排出，并且试验组的粪便毛发排出量在试验期间一直高于对照组。对照组的猫由于长时间未服用化毛效果的产品，日常只能排出少量毛球，大量毛球都被留在腹中，无法消化也无法排出。在第60天时，由专业猫医生对20只猫都进行触诊，其中对照组有一半以上的猫小肠内有柔软异物，并对这部分猫进行了后续治疗。

实施例5屎肠球菌JYEF-355对猫身体状况的影响试验

当猫消化道内有大量毛发聚集或患有毛球症时，常伴有呕吐、厌食、喜卧、便秘、精神萎靡、掉毛、毛发粗糙无光泽等症状。根据以上症状制定猫健康状况评定标准（表2），并由专业评定人员对实施例4中的猫进行健康状况打分，评定时间为实施例4的第56天，评定结果见图2和表3。

表2 猫健康状况评定标准

表3屎肠球菌JYEF-355影响猫身体状况评分结果

由图2和表3可以看出，试验组在粪便、呕吐程度、精神状态、掉毛程度、毛发顺滑度、食欲、活动量、腹部状态八个方面的评分值均高于对照组，说明屎肠球菌JYEF-355菌剂对于猫的健康状况有具有改善作用。其中，在改善猫精神状态方面尤为突出，试验组猫对于精神状态的评分与对照组相比有显著性差异（P<0.001）。除此之外，试验组猫在掉毛程度（P=0.039）、食欲（P=0.044）和腹部状态（P=0.014）三个方面的评分值均显著高于对照组。

Claims

1.一株促进猫化毛排毛的屎肠球菌（Enterococcus faecium）菌株JYEF-355，所述菌株的保藏编号为CGMCC No.27222。

2.一种利用权利要求1所述屎肠球菌菌株JYEF-355制备得到的菌剂。

3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于：所述菌剂中屎肠球菌菌株JYEF-355的数量为1.4-1.6×10¹⁰cfu/g。

4.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于：所述菌剂的制备方法为屎肠球菌菌株JYEF-355经过活化、培养得到菌液，离心后收集菌体，重悬于复原脱脂乳中，获得菌悬液，冷冻干燥后得到菌粉，再与葡萄糖混合，得到菌剂。

5.根据权利要求4所述的菌剂，其特征在于：所述菌悬液中，屎肠球菌菌株JYEF-355的浓度为1.8-2.2×10¹⁰cfu/mL；所述复原脱脂乳的质量浓度为14-16%。

6.权利要求1所述屎肠球菌菌株JYEF-355在制备预防或治疗毛球症的菌剂中的应用。