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CN117042806A - 抗体-免疫激动剂缀合物及其应用 - Google Patents

抗体-免疫激动剂缀合物及其应用 Download PDF

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CN117042806A
CN117042806A CN202280020287.7A CN202280020287A CN117042806A CN 117042806 A CN117042806 A CN 117042806A CN 202280020287 A CN202280020287 A CN 202280020287A CN 117042806 A CN117042806 A CN 117042806A
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ser
val
thr
lys
leu
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CN202280020287.7A
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宋鎬英
秦刚
刘冲
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Original Assignee
Genequantum Healthcare Suzhou Co Ltd
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Abstract

本公开涉及用于靶向分子‑药物缀合物的连接单元分子以及其相应缀合物、制备和用途，尤其涉及作为一类新颖癌症疗法的抗体‑免疫激动剂缀合物(AIAC)。

Description

抗体-免疫激动剂缀合物及其应用
技术领域
本公开涉及生物医药领域，尤其涉及用于靶向分子-免疫激动剂缀合物的连接单元，以及其相应缀合物、制备方法和用途。
背景技术
在开发和临床环境中，治疗剂的靶向递送仍是癌症疗法的一大难题。被FDA批准的本发明的靶向分子-药物缀合物主要是抗体-药物缀合物(ADC)，其中药物(弹头(warhead))通常是小分子细胞毒素。
免疫疗法是一种新的癌症治疗模式，显示出较高的效力。以CLTA-4和PD-1/L1单克隆抗体为代表的免疫检查点阻断，作为基本上基于T细胞的疗法，已被批准用于多种癌症适应症，同时还在努力探索免疫系统对抗癌症的其它机制。靶向骨髓细胞，主要是巨噬细胞、DC，已成为一个颇具前景的方向。利用激动剂或利用巨噬细胞检查点抑制剂激活巨噬细胞和DC不仅增强它们通过吞噬作用清除肿瘤细胞的能力，还增强它们的抗原呈递功能，从而更稳健地激发适应性抗肿瘤免疫。
TLR7/8是位于巨噬细胞、DC和单核细胞的内体膜中的两种重要的模式识别受体。它们天然地感知来源于病毒的ssRNA，介导免疫细胞的激活和促炎性细胞因子的释放。大量研究已证实，TLR7/8激动剂具有抗肿瘤活性。咪喹莫特(Imiquimod)，作为一种TLR7激动剂，已被批准通过体表施用来治疗生殖器疣、浅表型基底细胞癌和光化性角化症。瑞喹莫德(Resiquimod)，作为一种TLR7/8双重激动剂，已批准用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤。尽管如此，由全身施用TLR7/8激动剂所诱发的副作用限制了它们在更广泛范围的癌症中的使用。
本发明提供一种抗体-免疫激动剂缀合物(AIAC)，这是一类新颖的肿瘤靶向疗法。
发明内容
一方面，提供了一种式(I)的化合物：
其中n是3至10的整数；
Lm2是或其混合物；
x选自氢、OH、NH2、包含1-10个氨基酸的氨基酸片段、包含1-10个核苷酸的核苷酸片段；
Lk是L1-L2-L3的组合；
L1和L3各自独立地选自：
-CH2-、-NH-、-C(O)-、-NHC(O)-、-C(O)NH-；以及C1-4亚烷基与以下基团中的一者的组合：-CH2-、-NH-、-C(O)-、-NHC(O)-、-C(O)NH-；
L2不存在或是C7-34亚烷基，并且其中所述亚烷基中的一个或多个(-CH2-)结构任选被-O-置换；
Y和W各自独立地是不存在、PABC或选自包含1-10个，优选地1-6个，更优选地1-4个氨基酸的间隔子；
B2选自以下基团或其组合：-(CH2)kC(O)-、-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-、-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-、-(CH2)k1C(O)-NH-(C2H4-O)j-(CH2)k2C(O)-Lys-、-(CH2)kC(O)-NH-(C2H4-O)j-、-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-NH-(C2H4-O)j-、-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d；
a和b各自独立地是0或1；
每个k、k1和k2独立地是0至10的整数，优选地是0、1或2；尤其是1或2；
d是1至10的整数，尤其是1或2；
j是1至10的整数，尤其是1、3或4；
R1和R2各自独立地选自：氢、-OH、-NH2、-C1-6烷基、-O-C1-6烷基、-NH-C1-6烷基、-C1-6烷基-NH2、-N(C1-6烷基)-C1-6烷基、-C1-6烷基-O-C1-6烷基、-C1-6烷基-NH-C1-6烷基、-C(O)-C1-6烷基、-NHC(O)-C1-6烷基、-C(O)-NH2、-C(O)NH-C1-6烷基、-C(O)N(C1-6烷基)-C1-6烷基、-S(＝O)2-C1-6烷基、-NHS(＝O)2-C1-6烷基、-S(＝O)2O-C1-6烷基、-S(＝O)2NH-C1-6烷基和-S(＝O)2N(C1-6烷基)-C1-6烷基；
PL是有效载荷(payload)，所述有效载荷是免疫激动剂。
另一方面，提供一种具有式(II)的抗体-药物缀合物：
其中n、Y、Lk、W、Lm2、B2、x、PL、a和b如式(I)中所定义；
z是1至20的整数；
A是靶向分子，所述靶向分子是抗体或抗原结合片段。
本发明的抗体-免疫激动剂缀合物(AIAC)提供一类新颖的肿瘤靶向疗法。体外实验证实，与未修饰的裸抗相比较，AIAC可诱导较高的TNFα产量。AIAC的体内实验显示出抗肿瘤作用。
附图说明
在图23至图30中，在X轴下方的箭头指示施用的时间点。
图1：式(I')的化合物的示例性实例。R7如本文所定义。
图2a和图2b：式(II')的化合物的示例性实例。
图3：式(III')的化合物示例性实例。
图4a和图4b：式(IV')的化合物的示例性实例。
图5：连接单元片段LU102至LU110。
图6：在人PBMC-NCI N87共培养测定中缀合物AC102-6-1-1和相应未修饰的裸抗体Ab0001(曲妥珠单抗(Trastuzumab))与激动剂瑞喹莫德的TNFα诱导活性。
图7：在人PBMC-NCI N87共培养测定中缀合物AC102-6-1-1、AC102-8-1-1和其相应未修饰的裸抗体Ab0001的TNFα诱导活性。
图8：在PBMC与NCI N87或MDA-MB-468细胞的共培养物中AC102-6-1-1和抗体的TNFα诱导活性。
图9：PBMC与HCC1954细胞的共培养物中AC102-8-1-1和抗体的TNFα诱导活性。
图10：PBMC与SK-BR-3细胞的共培养物中AC102-8-1-1和抗体的TNFα诱导活性。
图11：PBMC与BT474细胞的共培养物中AC102-8-1-1和抗体的TNFα诱导活性。
图12：PBMC与JIMT1细胞的共培养物中AC102-8-1-1和抗体的TNFα诱导活性。
图13：PBMC与Colo205细胞的共培养物中AC102-8-1-1和抗体的TNFα诱导活性。
图14：PBMC与MDA-MB-468细胞的共培养物中AC102-8-1-1和抗体的TNFα诱导活性。
图15：PBMC与NCI N87细胞的共培养物中AC102-1-1-1、AC102-1-1-2、AC102-2-1-1、AC102-3-1-1、AC102-4-1-1和抗体的TNFα诱导活性。
图16：在PBMC与NCI N87细胞的共培养物中AC201-1-1-1和抗体的TNFα诱导活性。
图17：在PBMC与NCI N87细胞的共培养物中AC102-1-1-4、AC102-1-1-5、AC102-1-1-6和抗体的TNFα诱导活性。
图18：在PBMC与NCI N87细胞的共培养物中AC102-8-2-1和AC102-6-2-1以及抗体的TNFα诱导活性。
图19：在PBMC与过表达人紧密连接蛋白18.2的人胃癌细胞NCI-N87(又称为NCI-N87-紧密连接蛋白(Claudin)18.2)的共培养物中AC102-8-3-1、AC201-1-3-1和抗体的TNFα诱导活性。
图20：紧密连接蛋白18.2阴性NCI-N87亲本细胞中AC102-8-3-1、AC201-1-3-1和抗体的TNFα诱导活性。
图21：在PBMC与SK-BR-3细胞的共培养物中AC102-6-1-1和抗体的INF-γ诱导活性。
图22：在PBMC与HCC1954细胞的共培养物中AC102-6-1-1和抗体的INF-γ诱导活性。
图23：被给予以下各物的SCID Beige小鼠NCI N87 CDX模型中肿瘤体积随时间的变化：媒剂(PBS pH 6.5)、抗体以及缀合物AC102-6-1-1和AC102-8-1-1，5mg/kg。
图24：给予0.5、1和3mg/kg AC102-8-1-1的SCID Beige小鼠NCI N87 CDX模型中肿瘤体积随时间的变化。
图25：给予5mg/kg AC102-8-1-1的SCID Beige小鼠JIMT1 CDX模型中肿瘤体积随时间的变化。
图26：给予3mg/kg和10mg/kg AC102-6-1-1的过表达hHER2的MC38模型中肿瘤体积随时间的变化。
图27：给予3mg/kg和10mg/kg AC102-8-1-1的过表达hHER2的MC38模型中肿瘤体积随时间的变化。
图28：给予5mg/kg AC102-6-2-1和AC102-8-2-1的NCI-N87异种移植模型中肿瘤体积随时间的变化。
图29：给予3mg/kg AC102-8-2-1和AC201-1-2-1的MDA-MB-468异种移植模型中肿瘤体积随时间的变化。
图30：给予5mg/kg AC102-8-3-1和抗体的NUGC4模型中肿瘤体积随时间的变化。
具体实施方式
以下提供具体实施例以说明本公开的技术内容。本领域的技术人员通过本说明书中所公开的内容可容易地了解本公开的其它优点和作用。本公开也可通过其它不同的具体实施例实施或应用。在不脱离本公开的精神的情况下，本领域的技术人员可以作出各种修改和变化。
定义
除非下文另外定义，否则在此使用的所有技术和科学术语都具有与本领域的技术人员通常所理解相同的含义。本文中使用的技术是指本领域中一般理解的技术，包括本领域的技术人员显而易见的变体和等效取代。尽管相信本领域的技术人员可容易地理解以下术语，但阐述以下定义将更好地说明本公开。当本文中存在商品名时，它是指相应的商品或其活性成分。本文所引用的所有专利、公开的专利申请和出版物都特此以引用的方式并入。
当特定量、浓度或者其它值或参数以范围、优选范围或者优选上限或优选下限的形式阐述时，应理解，它相当于具体地披露通过组合任何上限或优选值与任何下限或优选值所形成的任何范围，不管所述范围是否明确地叙述。除非另外陈述，否则本文中所列的数值范围意图包括该范围的端点以及在该范围内的所有整数和分数(小数)。例如，表述“i是2至20的整数”意思指，i是2至20的任何整数，例如i可以是2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。其它类似的表述也应以类似方式理解。
除非本文中另外陈述，否则单数形式如“一个(种)”和“所述”包括复数形式。表述“一个(种)或多个(种)”或“至少一个(种)”可以指1、2、3、4、5、6、7、8、9个(种)或更多。
术语“约”和“大约”当与数字变量结合使用时，一般意味着该变量的值和该变量的所有值都在实验误差范围内(例如在平均值的95％置信区间内)或在指定值的±10％范围内，或在更宽范围内。
术语“化学计量比”意思指根据以重量计的特定量匹配各种物质。例如，在本公开中，将活性成分与填充剂、粘合剂和润滑剂以指定重量比混合。
术语“可选的”或“任选地”意思指，随后描述的事件可能但未必会发生，并且该描述包括所述事件或情况发生或不发生的情形。
表述“包含”或类似表述“包括”、“含有”和“具有”是开放式的，并且不排除另外未陈述的元件、步骤或成分。表述“由……组成”不包括未指明的任何元件、步骤或成分。表述“基本上由……组成”意思指，范围限于指定元件、步骤或成分，以及任选地存在且大体上不会影响所要求主题的基本和新颖特征的元件、步骤或成分。应理解，表述“包含”涵盖表述“基本上由……组成”和“由……组成”。
术语“靶向分子”是指对特定靶标(例如受体、细胞表面蛋白质、细胞因子等)具有亲和力的分子。靶向分子可通过靶向递送将有效载荷递送至体内特定部位。靶向分子可识别一个或多个靶标。具体靶标位点是由靶向分子所识别的靶标界定。例如，靶向受体的靶向分子可将有效载荷递送至含有大部分受体的位点。靶向分子的实例包括但不限于抗体、抗体片段、针对给定抗原的结合蛋白、抗体模拟物、对给定靶标具有亲和力的支架蛋白、配体等。
如本文所使用，术语“抗体”是以广义方式使用，并且特定地包括完整单克隆抗体、多克隆抗体、单特异性抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)及抗体片段，只要它们具有所希望的生物活性即可。抗体可以属于任何亚型(如IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)或亚类，并且可来源于任何适合的物种。在一些实施例中，抗体是人类或鼠类来源的。抗体还可以是完全人抗体、人源化抗体或通过重组方法制备的嵌合抗体。
单克隆抗体在本文中用于指从大体上同质的抗体群体获得的抗体，即，除了少量可能存在的天然突变外，构成该群体的各个抗体是相同的。单克隆抗体对单一抗原位点具有高度特异性。“单克隆”一词是指抗体的特征是来源于大体上同质的抗体群体，而不应解释为需要一些特定的方法来制备抗体。
完整抗体或全长抗体基本上包含一个或多个抗原结合可变区，以及一个或多个轻链恒定区(CL)和一个或多个重链恒定区(CH)，该一个或多个重链恒定区取决于抗体的亚型而可以包括CH1、CH2、CH3和CH4。抗原结合可变区(又称为片段可变区、Fv片段)典型地包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)。恒定区可以是具有天然序列(如具有人天然序列的恒定区)或其氨基酸序列变体的恒定区。可变区识别靶标抗原并与之相互作用。恒定区可被免疫系统识别并与之相互作用。
抗体片段可包含完整抗体的一部分，优选地其抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2、由VH和CH1结构域组成的Fd片段、Fv片段、单结构域抗体(dAb)片段以及分离的互补决定区(CDR)。Fab片段是通过用木瓜蛋白酶消化全长免疫球蛋白获得的抗体片段，或具有通过例如重组表达产生的相同结构的片段。Fab片段包含轻链(包含VL和CL)和另一条链，其中所述另一条链包含重链的可变结构域(VH)和重链的恒定区结构域(CH1)。F(ab')2片段是通过在pH 4.0-4.5下用胃蛋白酶消化免疫球蛋白获得的抗体片段，或具有通过例如重组表达产生的相同结构的片段。F(ab')2片段基本上包含两个Fab片段，其中每个重链部分包含几个另外的氨基酸，包括半胱氨酸，所述半胱氨酸形成连接两个片段的二硫键。Fab'片段是包含F(ab')2片段的一半(一条重链和一条轻链)的片段。抗体片段可包含例如通过二硫键和/或通过肽连接单元接合在一起的多条链。抗体片段的实例还包括单链Fv(scFv)、Fv、dsFv、双功能抗体、Fd和Fd'片段，以及其它片段，包括修饰过的片段。抗体片段典型地包含至少或约50个氨基酸并且典型地包含至少或约200个氨基酸。抗原结合片段可包括当插入抗体构架中(例如通过取代相应区域)时可产生免疫特异性结合至抗原的抗体的任何抗体片段。
根据本公开的抗体可使用本领域众所周知的技术，如以下技术或其组合制备：重组技术、噬菌体展示技术、合成技术或本领域中已知的其它技术。例如，基因工程化的重组抗体(或抗体模拟物)可利用适合培养系统(例如大肠杆菌或哺乳动物细胞)表达。工程化可以指例如在抗体的末端引入连接酶特异性识别序列。
HER2是指人表皮生长因子受体-2，属于表皮生长因子(EGFR)受体酪氨酸激酶家族。在本申请中，术语ErbB2和HER2具有相同的含义并且可以互换使用。
TROP2是Tacstd2基因所编码的跨膜糖蛋白。TROP2是细胞内钙信号转导蛋白并且在多种肿瘤中过表达。
CLDN18.2(紧密连接蛋白-18同工型2)是人紧密连接蛋白家族的成员。CLDN18.2是在若干人类癌症类型的原发病变和转移中表达的泛癌症靶标。
如本文所使用，术语“靶向分子-药物缀合物”称为“缀合物”。缀合物的实例包括但不限于抗体-药物缀合物。
小分子化合物是指大小与药品中常用有机分子的大小相当的分子。这一术语不包含生物大分子(例如蛋白质、核酸等)，但包含低分子量肽或其衍生物，如二肽、三肽、四肽、五肽等。典型地，小分子化合物的分子量可以是例如约100至约2000Da、约200至约1000Da、约200至约900Da、约200至约800Da、约200至约700Da、约200至约600Da、约200至约500Da。
免疫激动剂是指可以如通过激活免疫细胞来诱导或增强针对肿瘤的免疫反应的激动剂，所述免疫细胞包括但不限于DC、B细胞、巨噬细胞、NK细胞和T细胞。本领域中已知免疫激动剂的非限制性实例，如TLR激动剂，包括但不限于TLR7和/或TLR8和/或TLR9的激动剂(例如咪喹莫特、瑞喹莫德、852A和VTX-2337)；以及STING激动剂(例如ADU-S100和MK-1454)。
连接单元是指共价键接化合物或材料中的两个或更多个部分的官能团。例如，连接单元可用来共价键接一个或多个靶向分子和/或一种或多种有效载荷的辅助部分。
间隔子是位于不同结构模块之间并且能在空间上隔开各结构模块的结构。间隔子的定义不受它是否具有某一功能或它是否能在体内裂解或降解限制。间隔子的实例包括但不限于氨基酸和非氨基酸结构，其中非氨基酸结构可以是但不限于氨基酸衍生物或类似物。“间隔子序列”是指充当间隔子的氨基酸序列，并且其实例包括但不限于单一氨基酸，如Leu、Gln等；含有多个氨基酸的序列，例如含有两个氨基酸如GA的序列等；或例如GGGGS、GGGGSGGGGS、GGGGSGGGGSGGGGS等。间隔子的其它实例包括例如自分解型间隔子，如PABC(对苯甲氧羰基)等。
术语“烷基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链饱和脂肪烃基，该基团通过单键连接至分子的其余部分。烷基可以含有1至20个碳原子，参考C1-C20烷基，例如C1-C4烷基、C1-C3烷基、C1-C2烷基、C3烷基、C4烷基、C3-C6烷基。烷基的非限制性实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基，或它们的异构体。二价基团是指由相应单价基团，通过从具有自由价电子的碳原子去除一个氢原子获得的基团。二价基团具有两个连接至分子其余部分的连接位点。例如，“亚烷基”或“次烷基”是指直链或支链饱和二价烃基。亚烷基的实例包括但不限于亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-C2H4-)、亚丙基(-C3H6-)、亚丁基(-C4H8-)、亚戊基(-C5H10-)、亚己基(-C6H12-)、1-甲基亚乙基(-CH(CH3)CH2-)、2-甲基亚乙基(-CH2CH(CH3)-)、甲基亚丙基、乙基亚丙基等。
如本文所使用，当将一个基团与另一基团组合时，所述基团的连接可以是线性或分支的，只要形成化学上稳定的结构即可。由此类组合形成的结构可通过该结构中的任何适合原子，优选地通过指定化学键连接至分子的其它部分。例如，当描述C1-4亚烷基与包括-CH2-、-NH-、-C(O)-、-NHC(O)-、-C(O)NH-在内的基团中的一者的组合时，C1-4亚烷基可与以上基团形成线性连接，如C1-4亚烷基-CH2-、C1-4亚烷基-NH-、C1-4亚烷基-C(O)-、C1-4亚烷基-NHC(O)-、C1-4亚烷基-C(O)NH-、-CH2-C1-4亚烷基、-NH-C1-4亚烷基、-C(O)-C1-4亚烷基、-NHC(O)-C1-4亚烷基、-C(O)NH-C1-4亚烷基。所得到的二价结构可另外连接至分子的其它部分。
单独或与其它术语组合使用的术语“杂环”(和其变化形式，如“杂环的”或“杂环基”)广泛地指单一脂肪族环，通常具有3至12个环原子，含有至少2个碳原子以及一个或多个，优选地一至三个独立地选自氧、硫、氮和磷的杂原子，以及包含前述杂原子中的至少一者的组合。或者，上文所定义的杂环可以是多环系统(例如双环系统)，在该环系统中，两个或更多个环可稠合或桥接或螺环连接在一起，其中至少一个此类环含有一个或多个独立地选自氧、硫、氮和磷的杂原子。
杂环基可以是例如四元环，如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基；或五元环，如四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基、氧代吡咯烷基、2-氧代咪唑烷-1-基；或六元环，如四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基、1,1-二氧代-1,2-硫氮杂环己烷-2-基或三噻烷基；或七元环，如二氮杂环庚三烯环。任选地，杂环基可以是苯并稠合的。
杂环基可以是但不限于双环杂环基，例如五元稠合的五元环，如六氢环戊烷[c]吡咯-2(1H)-基；或五元稠合的六元双环，如六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基。
如上文所提及，杂环可以是不饱和的，也就是说，它可以含有一个或多个双键，但不限于此。例如，含有氮原子的不饱和杂环可以是1,6-二氢嘧啶、1,2-二氢嘧啶、1,4-二氢嘧啶、1,6-二氢吡啶、1,2-二氢吡啶、1,4-二氢吡啶、2,3-二氢-1H-吡咯、3,4-二氢-1H-吡咯、2,5-二氢-1H-吡咯基、4H-[1,3,4]噻二嗪基、4,5-二氢噁唑基或4H-[1,4]噻嗪基环，含有氧原子的不饱和杂环可以是2H-吡喃、4H-吡喃或2,3-二氢呋喃，并且含有硫原子的不饱和杂环可以是2H-硫代吡喃或4H-硫代吡喃。杂环可以是但不限于苯并稠合杂环，例如二氢异喹啉基环。
术语“杂芳基”应理解为优选地指具有5、6、7、8、9或10个环原子，尤其是5或6或9或10个环原子的单价单环、双环或三环芳香族环系统(“5至10元杂芳基”)，并且所述环原子中的至少一者(适当地1-4个，更适当地1、2或3个)可以是相同或不同的杂原子，如氧、氮或硫环系统。此外，在每种情况下，杂芳基可以是苯并稠合杂芳基。具体点说，杂芳基选自由以下组成的组：噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等，以及它们的苯并衍生物，如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并稠合衍生物，如喹啉基、喹唑啉基、异喹啉基等，或吖辛因基、吲哚嗪基、嘌呤基等，以及它们的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喏啉基、萘啶基、咔唑基、吖啶基等。
式(I')的化合物
一方面，提供一种式(I')(式(I'-1)或式(I'-2))的化合物：
D1―Ya―Lk―Wb―A2p―Lm2p―B2 (I'-1)；
B1―Lm1p―A1p―Wb―Lk―Ya―D2 (I'-2)；
其中
D1和D2独立地是包含连接酶受体或供体底物的识别序列的部分；
B1和B2各自独立地是以下各物的组合：1)C2-30亚烷基，并且其中所述亚烷基中的一个或多个-CH2-结构任选地被-CR1R2-、-O-、-C(O)-、-NR3-、可裂解序列1或间隔子Sp1；以及2)端基；
端基是氢或R7；
R7是当与有效载荷中的基团反应时可离去的基团；
R1、R2和R3各自独立地选自氢、-OH、-NH2、-C1-6烷基、-O-C1-6烷基、-NH-C1-6烷基、-C1-6烷基-NH2、-N(C1-6烷基)-C1-6烷基、-C1-6烷基-O-C1-6烷基、-C1-6烷基-NH-C1-6烷基、-C(O)-C1-6烷基、-NHC(O)-C1-6烷基、-C(O)-NH2、-C(O)NH-C1-6烷基、-C(O)N(C1-6烷基)-C1-6烷基、-S(＝O)2-C1-6烷基、-NHS(＝O)2-C1-6烷基、-S(＝O)2O-C1-6烷基、-S(＝O)2NH-C1-6烷基和-S(＝O)2N(C1-6烷基)-C1-6烷基；
Lm1和Lm2各自独立地是开环的琥珀酰亚胺部分；
A1和A2各自独立地是通过二硫键、硫醚键、硫酯键或氨基甲酸酯键与Lm1或Lm2缀合的部分，
Lk是L1-L2-L3的组合；
L1和L3各自独立地选自：
-CH2-、-NH-、-C(O)-、-NHC(O)-、-C(O)NH-；以及C1-4亚烷基与以下基团中的一者的组合：-CH2-、-NH-、-C(O)-、-NHC(O)-、-C(O)NH-；
L2不存在或是C7-34亚烷基，并且其中所述亚烷基中的一个或多个(-CH2-)结构任选被-O-置换；
L1、L2和L3各自任选地并且独立地被1、2或3个选自-OR4和-NR5R6的取代基取代；
R4、R5和R6各自独立地选自氢、-C1-6烷基、-C(O)-C1-6烷基和-S(＝O)2-C1-6烷基；
Y和W各自独立地不存在或选自可裂解序列2、间隔子Sp2和其组合；
可裂解序列1包含可被酶裂解的氨基酸序列，并且可裂解序列1包含1-10个氨基酸；
可裂解序列2包含可被酶裂解的氨基酸序列，并且可裂解序列2包含1-10个氨基酸；
Sp1和Sp2各自独立地选自含有1-20个氨基酸的间隔子序列、PABC和其组合；
b和p各自独立地是0或1。
在一个实施例中，a和b均为0。在一个实施例中，a是1，b是0。在一个实施例中，p是0。
在一个实施例中，R1和R2均为氢，或均为-C1-6烷基。在一个实施例中，R1和R2各自独立地选自氢、-C(O)-C1-6烷基、-C(O)-NH2、-C(O)NH-C1-6烷基、-C(O)N(C1-6烷基)-C1-6烷基、-S(＝O)2-C1-6烷基、-S(＝O)2O-C1-6烷基、-S(＝O)2NH-C1-6烷基和-S(＝O)2N(C1-6烷基)-C1-6烷基，或各自独立地选自-C1-6烷基、-C(O)-NH2、-C(O)NH-C1-6烷基、-C(O)N(C1-6烷基)-C1-6烷基以及-S(＝O)2-C1-6烷基、-S(＝O)2O-C1-6烷基、-S(＝O)2NH-C1-6烷基和-S(＝O)2N(C1-6烷基)-C1-6烷基。在一个实施例中，R1和R2均为氢，或均为-C1-6烷基，或各自独立地选自氢、-C(O)-C1-6烷基和-S(＝O)2-C1-6烷基，或各自独立地选自-C1-6烷基、-C(O)-C1-6烷基和-S(＝O)2-C1-6烷基。
在一个实施例中，L1、L2和L3独立地被1、2或3个选自-OR4和-NR5R6的取代基取代。取代例如发生于-CH3、-CH2-或结构上，尤其是-CH2-上。
在一个实施例中，L1是-NH-，或是C1-4亚烷基与-NH-的组合。在另一实施例中，L1是-C(O)-，或是C1-4亚烷基与-C(O)-的组合。
在一个实施例中，L3是-NH-，或是C1-4亚烷基与-NH-的组合。在另一实施例中，L3是-C(O)-，或是C1-4亚烷基与-C(O)-的组合。
在一个实施例中，L2是C7-34亚烷基，其中所述亚烷基是直链或分支链亚烷基，并且任选地，所述亚烷基中的一个或多个-CH2-结构可被-O-置换，并且所述亚烷基任选地被1、2或3个选自-OR4和-NR5R6的取代基取代。在又另一实施例中，L2选自任选被1、2或3个选自-OR4和-NR5R6的取代基取代的二价基团，其中所述二价基团如下：亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、亚己基、1-甲基亚乙基、2-甲基亚乙基、2-甲基亚丙基和2-乙基亚丙基。
在另一实施例中，L2是-(C2H4-O)i-C1-4亚烷基；i是2至10的整数。在一个实施例中，L2是C1-4亚烷基-(O-C2H4)i-。“-(C2H4-O)i-”或“-(O-C2H4)i-”表示由PEG单元聚合形成的结构，其中i指示PEG单元的数目。在另一实施例中，L2是-(C2H4-O)i-C1-2亚烷基。在一个特定实施例中，L2是-(C2H4-O)i-C2H4-。在另一实施例中，L2是C1-2亚烷基-(O-C2H4)i-。在一个特定实施例中，L2是-C2H4-(O-C2H4)i-。在一个实施例中，i选自以下值：2-10、2-8、2-6、2-4或4-6。在一个特定实施例中，i是4。
在一个实施例中，Y和W各自独立地不存在或选自可裂解序列1、间隔子Sp2和其组合。在一个特定实施例中，a是0，并且因此Y不存在。在另一特定实施例中，b是0，并且因此W不存在。在又一特定实施例中，Y和W均不存在。在一个实施例中，可裂解序列2包含可被识别为酶底物并且可被酶裂解的氨基酸序列。在一个特定实施例中，可裂解序列2可以在细胞中，尤其是在溶酶体中被酶裂解。在另一特定实施例中，可裂解序列2可以被蛋白酶，特别是组织蛋白酶裂解。在又一特定实施例中，可裂解序列2可被谷氨酰胺酶裂解。在一个实施例中，可裂解序列2选自组织蛋白酶限制位点、谷氨酰胺酶限制位点及其组合。在一个实施例中，可裂解序列2选自Phe-Lys、Val-Cit、Val-Lys、GLy-Phe-Leu-Gly、Ala-Leu-Ala-Leu和其组合。
在一个实施例中，Y和W各自独立地不存在或选自间隔子Sp2。在另一实施例中，Sp2是包含1-10个，优选地1-6个，更优选地1-4个氨基酸的间隔子序列。在一个特定实施例中，Sp2是Leu。在另一特定实施例中，Sp2是Gln。在一个实施例中，Sp2是PABC。在又另一实施例中，Y和W各自独立地选自Phe-Lys-PABC、Val-Cit-PABC和Val-Lys-PABC。
在一个实施例中，Y和/或W包含的氨基酸可以是天然或非天然的。在一个特定实施例中，Y是氨基酸片段1。氨基酸片段1包含1-30个天然或非天然氨基酸，这些氨基酸各自独立地相同或不同。而且氨基酸片段1选自：包含1-10个氨基酸的可裂解序列、包含1-20个氨基酸的间隔子序列和其组合。在另一特定实施例中，W是氨基酸片段2。氨基酸片段2包含1-30个天然或非天然氨基酸，这些氨基酸各自独立地相同或不同。而且氨基酸片段2选自：包含1-10个氨基酸的可裂解序列、包含1-20个氨基酸的间隔子序列和其组合。
包含连接酶受体或供体底物的识别序列的部分
在一个实施例中，连接酶是转肽酶。在一个实施例中，连接酶选自天然转肽酶、非天然转肽酶、其变体和其组合。非天然转肽酶可以是但不限于通过天然转肽酶工程化获得的那些。在一个优选实施例中，连接酶选自天然分选酶(Sortase)、非天然分选酶和其组合。天然分选酶的种类包括分选酶A、分选酶B、分选酶C、分选酶D、植物乳酸杆菌(L.plantarum)分选酶等(US20110321183A1)。连接酶的类型对应于连接酶识别序列并由此被用于实现不同分子或结构片段之间的特异性缀合。在一个实施例中，连接酶受体底物的识别序列选自低聚甘氨酸、低聚丙氨酸以及聚合度是3-10的低聚甘氨酸/丙氨酸的混合物。在一个特定实施例中，连接酶受体底物的识别序列是Gn，其中G是甘氨酸(Gly)，并且n是3至10的整数。在另一特定实施例中，连接酶是来自金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的分选酶A。因此，连接酶识别序列可以是酶的典型识别序列LPXTG。在又一特定实施例中，连接酶供体底物的识别序列是LPXTGJ，并且连接酶受体底物的识别序列是Gn，其中X可以是任何单一天然或非天然氨基酸；J不存在或是包含1-10个氨基酸的任选被标记的氨基酸片段。在一个实施例中，J不存在。在又另一实施例中，J是包含1-10个氨基酸的氨基酸片段，其中每个氨基酸独立地是任何天然或非天然氨基酸。在另一实施例中，J是Gm，其中m是1至10的整数。在又一特定实施例中，连接酶供体底物的识别序列是LPETG。在另一特定实施例中，连接酶供体底物的识别序列是LPETGG。在一个实施例中，连接酶是来自金黄色葡萄球菌的分选酶B并且相应供体底物识别序列可以是NPQTN。在另一实施例中，连接酶是来自炭疽杆菌(Bacillusanthracis)的分选酶B并且相应供体底物识别序列可以是NPKTG。在又另一个实施例中，连接酶是来自酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)的分选酶A并且相应供体底物识别序列可以是LPXTGJ，其中J如上文所定义。在另一实施例中，连接酶是来自天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)的分选酶亚家族5，并且相应供体底物识别序列可以是LAXTG。在另一实施例中，连接酶是来自植物乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum)的分选酶A并且相应供体底物识别序列可以是LPQTSEQ。连接酶识别序列还可以是通过人工筛选优化的其它全新的转肽酶识别序列。
包含反应性基团的部分
用于与有效载荷连接的反应性基团
在一个实施例中，B1或B2被用于连接至有效载荷。对于与有效载荷连接，式(I')的化合物包含反应性基团。在一个实施例中，式(I')的化合物中的B1或B2通过酰胺键或酯键或醚键连接至有效载荷。在一个实施例中，式(I')中B1或B2中的反应性基团独立地是用于缩合反应、亲核加成或亲电子加成的反应性基团(如反应性C＝O部分、反应性C＝C-C＝O部分、氨基、胺基、羟基、硫醇基)或用于取代反应的反应性基团(如连接到O、C、N或S原子的离去基团)。在一个实施例中，B1或B2中的反应性基团独立地选自羧基、磺酸基、具有游离-OH末端的磷酰基、活性酯、醛基、异氰酸酯基、迈克尔加成(Michael addition)的受体基团(如顺丁烯二酰亚胺基)、氨基、胺基、羟基、硫醇基、吡啶基二硫醇基和卤代乙酸基。在一个具体实施例中，用于连接到有效载荷的B1或B2中的反应性基团独立地选自氨基、胺基、羟基、硫醇基、羧基和活性酯。在另一特定实施例中，B1或B2通过选自以下的基团连接至有效载荷：-OH和-COOH，尤其是烷基醇的羟基或烷基羧酸的羧基。
在一个实施例中，B1或B2中的反应性基团独立地是氨基、胺基或羟基，所述基团与有效载荷中的相应基团(如羧基、磺酸基、具有游离-OH末端的磷酰基、活性酯、酰氯或异氰酸酯基)反应。在另一实施例中，B1或B2中的反应性基团独立地是羧基、磺酸基、具有游离-OH末端的磷酰基、活性酯或异氰酸酯基，所述基团与有效载荷中的相应基团(如氨基、胺基或羟基)反应。
在一个实施例中，B1或B2中的反应性基团独立地是氨基、羟基或硫醇基，所述基团与有效载荷中的相应基团(如卤素、羟基、硫醇基、醛基)反应。在另一实施例中，B1或B2中的反应性基团独立地是羟基，所述基团与有效载荷中的相应基团(如卤素或羟基)反应。
B1和B2
在一个实施例中，B1和B2各自独立地是1)和2)的组合：
1)选自以下的二价基团中的一者或者两者或更多者的组合：-(CH2)kC(O)-、-NR3-、-(C2H4-O)j-、-(NH-CR1R2-C(O))d-、-(C2H4)g-、-C(O)(CH2)k-、-(O-C2H4)j-、-(C(O)-CR1R2-NH)d-、可裂解序列1和间隔子Sp1；以及2)端基；其中
端基是氢或R7；
k是0至20的整数，j是1至20的整数，d是1至20的整数，g是1至20的整数；
每个-(CH2)kC(O)-、-C(O)(CH2)k-和-(C2H4)g-独立地未被取代或被一个或多个选自以下的基团取代：-OH、-NH2、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、-NH-C1-6烷基、-C1-6烷基-NH2、-N(C1-6烷基)-C1-6烷基、-C(O)-C1-6烷基、-NHC(O)-C1-6烷基、-S(＝O)2-C1-6烷基和-NHS(＝O)2-C1-6烷基。
在一个实施例中，端基是氢。在一个实施例中，R7是羟基或
在一个实施例中，端基R7表示不会出现在B1或B2与有效载荷反应产生的产物分子中的结构的部分，并因此，在连接单元-有效载荷中间体(参见下文)中，对应于B1或B2的结构部分是所述二价基团中的一者或者两者或更多者的组合。
在一个实施例中，每个-(CH2)kC(O)-、-C(O)(CH2)k-和-(C2H4)g-独立地未被取代或被一个或多个选自以下的基团取代：-OH、C1-6烷基、-O-C1-6烷基、-N(C1-6烷基)-C1-6烷基、-C(O)-C1-6烷基、-NHC(O)-C1-6烷基、-S(＝O)2-C1-6烷基和-NHS(＝O)2-C1-6烷基，更优选地被一个或多个选自以下的基团取代：-C1-6烷基或-NHC(O)-C1-6烷基。在另一实施例中，每个-(CH2)kC(O)-、-C(O)(CH2)k-和-(C2H4)g-独立地未被取代或被一个或多个选自以下的基团取代：-C(O)-NH2、-NH2、-C1-6烷基-NH2、-NH-C1-6烷基，优选被一个或多个选自以下的基团取代：-C(O)-NH2、-C1-6烷基-NH2、-NH-C1-6烷基。
在一个实施例中，k选自以下值：0、1、2-10、2-9、2-8、2-7、2-6、2-5、2-4或2-3，优选地是0、1或2；尤其是1或2。在一个实施例中，j选自以下值：1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4，尤其是1、3或4。在一个实施例中，d选自以下值：1-10、1-8、1-6、1-4、1-3、1-2。在一个特定实施例中，d是1或2。在一个特定实施例中，d是1。在一个实施例中，g选自以下值：2-10、2-9、2-8、2-7、2-6、2-5、2-4。
应理解，当在分子中存在两个或更多个-(CH2)kC(O)-基团时，每个k的值是独立选择的。在一些实施例中，分子中的“k”是用或不用另外的数字表示，例如k1、k2、k3等，其中数字不指示任何顺序，而仅用于区别各“k”。其它脚注如g、j、d应以类似方式理解。
应理解，当存在两个或更多个Rx(x是1、2、3、4、5、6、7等)时，每个Rx是独立选择的。在一些实施例中，分子中的“x”是用或不用另外的单撇号(')或多个撇号(如”、”'、””等)表示，例如R、R1'、R1”、R1”'、R2'、R2”、R2”'等。其它Rx，如R3、R4、R5、R6、R7，如R3、R4、R5、R6、R7应以类似方式理解。
在另一实施例中，可裂解序列1包含酶裂解位点，该位点选自对蛋白酶敏感的低聚肽、组织蛋白酶裂解位点、谷氨酰胺酶裂解位点和其组合。在一个特定实施例中，可裂解序列1选自Phe-Lys、Val-Cit和Val-Lys。
在另一实施例中，Sp1是包含1-10个，优选地1-6个，更优选地1-4个氨基酸的间隔子序列。在一个实施例中，Sp1是PABC。
在一个实施例中，B1和B2各自是任选被衍生化的赖氨酸。在另一实施例中，赖氨酸的衍生化选自：1)羧基的酰胺化，由此得到的酰胺NH2任选地被C1-6烷基取代；2)羧基和/或氨基与包含1-10个氨基酸的氨基酸片段或包含1-10个核苷酸的核苷酸片段键联，其中氨基酸片段优选地是Gly。
在一个实施例中，当端基与二价基团组合时，以下二价基团各自形成以下结构部分：-(CH2)kC(O)-形成-(CH2)kC(O)-OH；-NR3-形成-NHR3或R3HN-；-(C2H4-O)j-形成-(C2H4-O)j-H；-(NH-CR1R2-C(O))d-形成-(NH-CR1R2-C(O))dOH；-(C2H4)g-形成-(C2H4)g-H、-(C2H4)g-OH、H-(C2H4)g-或HO-(C2H4)g-；-C(O)(CH2)k-形成HO-C(O)(CH2)k-；-(O-C2H4)j-形成H-(O-C2H4)j-；-(C(O)-CR1R2-NH)d-形成HO-(C(O)-CR1R2-NH)d-，其中每个-(CH2)kC(O)-、-C(O)(CH2)k-和-(C2H4)g-独立地未被取代或被一个或多个如上文所定义的基团取代。
在一个实施例中，B2选自-(CH2)kC(O)-OH、-(NH-CR1R2-C(O))d-OH、-NH-(C2H4-O)j-H、-Val-Cit-PABC、-(Lys-NH2)、-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-OH、-(CH2)kC(O)-NH-(C2H4-O)j-H、-(NH-CR1R2-C(O))d-NH-(C2H4-O)j-H、-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-NH-(C2H4-O)j-H、-(CH2)k1C(O)-NH-(C2H4-O)j-(CH2)k2C(O)-(Lys-OH)、-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-OH、-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC和-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-OH。
在一个实施例中，B2选自-(CH2)kC(O)-OH、-(NH-CR1R2-C(O))d-OH、-NH-(C2H4-O)j-H、-Val-Cit-PABC、-(Lys-NH2)、-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-OH、-(CH2)kC(O)-NH-(C2H4-O)j-H、-(NH-CR1R2-C(O))d-NH-(C2H4-O)j-H、-(CH2)k1C(O)-NH-(C2H4-O)j-(CH2)k2C(O)-(Lys-OH)、-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-OH、-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC和-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-OH。
在一个实施例中，B2选自-(CH2)kC(O)-OH、-(NH-CR1R2-C(O))d-OH、
-NH-(C2H4-O)j-H、-Val-Cit-PABC、-(Lys-NH2)、-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-OH、-(CH2)kC(O)-NH-(C2H4-O)j-H、-(NH-CR1R2-C(O))d-NH-(C2H4-O)j-H、-(CH2)k1C(O)-NH-(C2H4-O)j-(CH2)k2C(O)-(Lys-OH)、-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-OH和-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC。
在一个实施例中，B2是-(Lys-NH2)。在一个实施例中，B1是(Lys-NH2)-。
在一个实施例中，B2选自-(CH2)kC(O)-OH、-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-OH、-(CH2)kC(O)-NH-(C2H4-O)j-H、-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-NH-(C2H4-O)j-H、-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC和-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-OH。
在一个实施例中，B2选自-(CH2)kC(O)-OH、-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-OH、-(CH2)kC(O)-NH-(C2H4-O)j-H、-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC和-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-OH。
在一个实施例中，B2选自-(CH2)kC(O)-OH、-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-OH、-(CH2)kC(O)-NH-(C2H4-O)j-H和-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC。
在一个实施例中，B1选自HO-C(O)(CH2)k-、HO-(C(O)-CR1R2-NH)d-、H-(O-C2H4)j-NH-、(Lys-NH2)-、HO-(C(O)-CR1R2-NH)d-C(O)(CH2)k-、H-(O-C2H4)j-NH-C(O)(CH2)k-、H-(O-C2H4)j-NH-(C(O)-CR1R2-NH)d-、H-(O-C2H4)j-NH-(C(O)-CR1R2-NH)dC(O)(CH2)k-、(Lys-OH)-C(O)(CH2)k1-(O-C2H4)j-NH-C(O)(CH2)k2-、HO-(C(O)-CR1R2-NH)d-Val-Cit-PABC-和HO-(C(O)-CR1R2-NH)d-Val-Cit-PABC-C(O)(CH2)k1-。
在一个实施例中，B1选自HO-C(O)(CH2)k-、HO-(C(O)-CR1R2-NH)d-、H-(O-C2H4)j-NH-、(Lys-NH2)-、HO-(C(O)-CR1R2-NH)d-C(O)(CH2)k-、H-(O-C2H4)j-NH-C(O)(CH2)k-、H-(O-C2H4)j-NH-(C(O)-CR1R2-NH)d-、(Lys-OH)-C(O)(CH2)k1-(O-C2H4)j-NH-C(O)(CH2)k2-、HO-(C(O)-CR1R2-NH)d-Val-Cit-PABC-和HO-(C(O)-CR1R2-NH)d-Val-Cit-PABC-C(O)(CH2)k1-。
在一个实施例中，R1和R2均为氢或均为-C1-6烷基，优选地均为氢或均为-C1-3烷基，更优选地均为氢或均为-C1-2烷基，尤其均为氢或均为甲基。在一个实施例中，R3是氢或-C1-6烷基，优选地为氢或-C1-2烷基，尤其是氢。
A和Lm
在一个实施例中，式(I')中的A1和A2各自独立地是由反应性基团产生的残基，该反应性基团选自氨基化合物、硫醇化合物、吡啶基二硫醇化合物和异氰酸酯。在另一实施例中，A1和A2各自独立地是通过反应性基团与Lm1或Lm2缀合的部分，该反应性基团选自氨基、硫醇基、吡啶基二硫基和异氰酸酯基。在一个特定实施例中，A1和A2各自独立地选自任选被衍生化的氨基酸，优选地为任选被衍生化的半胱氨酸或赖氨酸。
在另一特定实施例中，A1和A2各自独立地选自任选被衍生化的半胱氨酸。在一个优选的实施例中，半胱氨酸的衍生化选自：1)羧基的酰胺化，由此得到的酰胺NH2任选地被C1-6烷基取代；2)氨基的酰化；及3)羧基和/或氨基与包含1-10个氨基酸的氨基酸片段或包含1-10个核苷酸的核苷酸片段键联，其中氨基酸片段优选地是Gly。在一个特定实施例中，半胱氨酸的衍生化是指甘氨酸与半胱氨酸羧基的酰胺化或键联。
在一个实施例中，A2是其中x选自氢、OH、NH2、包含1-10个氨基酸的氨基酸片段和包含1-10个核苷酸的核苷酸片段，优选地为NH2。在一个实施例中，A1是其中x选自氢、包含1-10个氨基酸的氨基酸片段和包含1-10个核苷酸的核苷酸片段，优选地为NH2。在一个实施例中，氨基的酰化是指用C1-6烷基羰基取代半胱氨酸的氨基。
在一个实施例中，A部分与Lm部分之间的键联可以通过以下方式形成：半胱氨酸结构中的硫醇基与Lm所包含的顺丁烯二酰亚胺基反应，产生硫代琥珀酰亚胺结构。
在一个特定实施例中，半胱氨酸结构中的硫醇基通过迈克尔加成连接至顺丁烯二酰亚胺基。
硫代琥珀酰亚胺在生理条件下不稳定并且易于发生反向迈克尔加成，导致在缀合位点处裂解。此外，当系统中存在另一种硫醇化合物时，硫代琥珀酰亚胺还可与该另一种硫醇化合物发生硫醇基交换。这些反应都会引起有效载荷的掉落并产生有毒副作用。在本公开中，在迈克尔加成步骤后，使用了开环反应来进行琥珀酰亚胺的开环。开环之后，琥珀酰亚胺不再经历反向迈克尔加成或硫醇基交换，并由此使产物更稳定。开环反应的方法可见于WO2015165413A1。
式(I')的开环化合物可通过半制备型/制备型HPLC或其它适合的分离手段纯化以获得高纯度并具有确定的组成的带有效载荷的式(I')化合物，不管琥珀酰亚胺开环反应的效率如何。
在一个实施例中，Lm1和Lm2各自独立地是 的混合物；或的混合物。在一个实施例中，Lm1是或其混合物。在一个实施例中，Lm2是 或其混合物。
式(I')化合物的具体实施例
1.存在A和Lm的式(I')化合物
式(I'-1)的连接单元，其中p是1，D1是Gn，G是甘氨酸，A2是它是硫醇基与Lm2反应之后的剩余残基；并且所述式(I'-1)的化合物的结构如下式(I'-1-1)中所示：
其中n是3至10的整数，Lm2是或其混合物；
x选自氢、OH、NH2、包含1-10个氨基酸的氨基酸片段、包含1-10个核苷酸的核苷酸片段；
Y、Lk和W分别如式(I')中所定义。
在一个优选实施例中，在式(I'-1-1)中，x选自OH、NH2和Gly，尤其是NH2。
在一个特定实施例中，在式(I'-1-1)中，a是0，b是0，n＝3，Lk是L1-L2-L3，L1是-NH-，L3是-C(O)-，L2是-(C2H4-O)i-C2H4-，i＝4，并且x是NH2，并且所述连接单元的结构如下(连接单元LN102)：
在一个实施例中，在连接单元LN102中，B2选自下表：
-(CH2)kC(O)-R7
-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC
-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-R7
-(CH2)k1C(O)-NH-(C2H4-O)j-(CH2)k2C(O)-Lys-R7
-(CH2)kC(O)-NH-(C2H4-O)j-H
-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-NH-(C2H4-O)j-H
-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-R7
在一个实施例中，在连接单元LN102中，B2选自下表：
-(CH2)kC(O)-R7
-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC
-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-R7
-(CH2)k1C(O)-NH-(C2H4-O)j-(CH2)k2C(O)-Lys-R7
-(CH2)kC(O)-NH-(C2H4-O)j-H
-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-R7
在一个实施例中，在连接单元LN102中，Lm2是或其混合物，B2是-(CH2)kC(O)-R7，k是2，并且所述连接单元的结构是以下两种结构的混合物(连接单元LN102-1)：
在一个实施例中，在连接单元LN102中，Lm2是或其混合物，B2是-(CH2)kC(O)-R7，k是5，并且所述连接单元的结构是以下两种结构的混合物(连接单元LN102-2)：
在一个实施例中，在连接单元LN102中，Lm2是或其混合物，B2是-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC，k是5，并且所述连接单元的结构是以下两种结构的混合物(连接单元LN102-3)：
在一个实施例中，在连接单元LN102中，Lm2是或其混合物，B2是-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-R7，k是5，d是1，R1和R2是氢，并且所述连接单元的结构是以下两种结构的混合物(连接单元LN102-4)：
在一个实施例中，在连接单元LN102中，Lm2是或其混合物，B2是-(CH2)kC(O)-NH-(C2H4-O)j-H，k是2，j是1，并且所述连接单元的结构是以下两种结构的混合物(连接单元LN102-6)：
在一个实施例中，在连接单元LN102中，Lm2是或其混合物，B2是-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-NH-(C2H4-O)j-H，k是2，d是1，j是1，R1和R2是甲基，并且所述连接单元的结构是以下两种结构的混合物(连接单元LN102-7)：
在一个实施例中，在连接单元LN102中，Lm2是或其混合物，B2是-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-，k是2，d是1，R1和R2是氢，并且所述连接单元的结构是以下两种结构的混合物(连接单元LN102-8)：
在一个实施例中，在连接单元LN102中，Lm2是或其混合物，B2是-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-R7，k是2，d是2，R1和R2是甲基，R1'和R2'是氢，并且所述连接单元的结构是以下两种结构的混合物(连接单元LN102-11)：
在一个特定实施例中，在式(I'-1-1)中，a是0，b是0，n＝3，B2是-Cys-NH2，并且所述连接单元的结构如下(连接单元LN105)：
在一个特定实施例中，在式(I'-1-1)中，a是0，b是0，n＝3，Lk是L1-L2-L3，L1是-NH-，L3是-C(O)-，L2是-(C2H4-O)i-C2H4-，i＝4，x是OH，并且所述连接单元的结构如下(连接单元LN106)：
在一个特定实施例中，在式(I'-1-1)中，a是1，b是0，Y是L，L是亮氨酸(Leu)，n＝3，Lk是L1-L2-L3，L1是-NH-，L3是-C(O)-，L2是-(C2H4-O)i-C2H4-，i＝4，x是NH2，并且所述连接单元的结构如下(连接单元LN107)：
在另一特定实施例中，在式(I'-1-1)中，a是1，b是0，Y是Q，Q是谷氨酰胺(Gln)，n＝3，Lk是L1-L2-L3，L1是-NH-，L3是-C(O)-，L2是-(C2H4-O)i-C2H4-，i＝4，x是NH2，并且所述连接单元的结构如下(连接单元LN108)：
在一个特定实施例中，在式(I'-1-1)中，a是0，b是0，n＝3，Lk是L1-L2-L3，L1是-NH-，L3是-C(O)-，L2是-C5H10-，并且所述连接单元的结构如下(连接单元LN109)：
在另一特定实施例中，在式(I'-1-1)中，a是0，b是0，n＝3，Lk是L1-L2-L3，L1是-NH-，L3是-C(O)-，L2是被一个-NR1R2基团取代的-C5H10-基团，R1是氢，R2是-C(O)CH3，x是NH2，并且所述连接单元的结构如下(连接单元LN110)：
式(I'-2)的连接单元，当D2是LPXTG并且A1是它是在硫醇基与Lm2反应之后的剩余残基时；所述式(I'-2)的化合物的结构如下式(I'-2-1)中所示：
其中x选自氢、包含1-10个氨基酸的氨基酸片段、包含1-10个核苷酸的核苷酸片段，Lm1是或其混合物；
Y、Lk和W分别如式(I')中所定义。
在一个实施例中，x是氢。
2.不存在A和Lm的式(I')化合物
式(I'-1)的连接单元，其中p是0，D1是Gn，G是甘氨酸；并且所述式(I'-1)的化合物的结构如下式(I'-1-2)中所示：
其中n是3至10的整数；
Y、Lk、W、a和b分别如式(I')中所定义。
在一个实施例中，在(I'-1-2)式中，a是0，b是0，n＝3，B2是-(Lys-NH2)，并且所述连接单元的结构如下(连接单元LN201)：
其中n是3至10的整数。
在一个实施例中，式(I')的化合物是如图1所示的化合物中的一者。
作为连接单元的式(I')的化合物
在一个实施例中，B1或B2所包含的反应性基团可用于与含有另一反应性基团的有效载荷共价缀合，由此使式(I')的化合物携带有效载荷。
在另一实施例中，D1或D2所包含的连接酶识别序列可用于通过连接酶与相应连接酶识别序列进行的缀合。因此，式(I')的化合物可连接至包含连接酶识别序列的分子，其中所述分子所包含的连接酶识别序列是对应于D1或D2所包含的连接酶识别序列的连接酶供体/受体底物识别序列。
在一个实施例中，所述分子包含连接酶供体底物的识别序列，并且相应地，D1或D2独立地是连接酶受体底物的识别序列。在另一实施例中，所述分子包含连接酶受体底物的识别序列，并且相应地，D1或D2独立地是连接酶供体底物的识别序列。
因此，式(I')的化合物可以用作连接单元，该连接单元可连接至靶向分子(如抗体或其抗原结合片段)和/或有效载荷。连接单元可以含有连接酶识别序列以便将连接单元与靶向分子缀合。连接单元也可含有反应性基团以与有效载荷共价缀合。
取决于打算缀合的靶向分子的末端修饰的类型，连接单元所包含的连接酶识别序列是连接酶受体底物的识别序列或连接酶供体底物的识别序列。识别序列对应于所采用的连接酶。
取决于打算缀合的有效载荷的反应性基团的类型，连接单元所包含的反应性基团属于可与之发生缩合反应的类型。
连接单元可影响由此形成的药物缀合物的特性。例如，连接单元可任选地用于提供适合的亲水性，并且可任选地含有裂解位点以实现有效载荷的适合释放特征。
在一个替代实施例中，连接单元另外包含一个或多个非酶裂解位点，各自独立地位于任何适合的位置。在一个实施例中，非酶裂解位点可以是对pH值敏感的腙。在另一实施例中，非酶裂解位点是对还原剂敏感的二硫键。在另一个替代性实施例中，连接单元另外包含一个或多个酶裂解位点，各自独立地位于除Y和W外的任何适合位置。在一个实施例中，酶裂解位点选自对蛋白酶敏感的低聚肽、组织蛋白酶裂解位点、谷氨酰胺酶裂解位点和其组合。
在又一替代性实施例中，为了增加靶向分子-药物缀合物的DAR，连接单元可另外包含分支结构片段。这一分支结构的主链是由多官能分子根据特定连接模式形成的，并且分支的数目和结构可被制成适应所希望的有效载荷数目。每个分支可包含以上描述的线性连接单元的结构。
本领域的技术人员可通过常规固相或液相方法合成连接单元。
带有效载荷的式(I')化合物
B1或B2所包含的反应性基团与含有另一反应性基团的有效载荷共价缀合，得到带有效载荷的式(I')化合物。
在又另一方面，提供一种具有式(II')(式(II'-1)或式(II'-2))的结构的化合物
(式(I')的化合物)―PLt (II'-1)
PLt―(式(I')的化合物) (II'-2)
其中
PL是连接至式(I')化合物的B1或B2部分的有效载荷；
t是1至20的整数。
t表示连接至式(I')化合物的PL的数目。
在一个实施例中，t是1至10的整数；例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在一个实施例中，t是1并且式(II'-1)和式(II'-2)的化合物分别具有下式(II'-1-1)或式(II'-2-1)的结构：
D1―Ya―Lk―Wb―A2p―Lm2p―B2―PL (II'-1-1)
PL―B1―Lm1p―A1p―Wb―Lk―Ya―D2 (II'-2-1)
其中A1、A2、Lm1、Lm2、B1、B2、D1、D2、Y、Lk、W、a、b和p分别如上文所定义。
在另一实施例中，t是2-20，式(II')化合物的结构如下式(II'-3)至式(II'-6)中的任一者中所示：
D1―Ya―Lk―Wb―A2p―Lm2p―(B2―PL)t (II'-1-2)
D1―Ya―Lk―Wb―(A2p―Lm2p―B2―PL)t (II'-1-3)
D1―(Ya―Lk―Wb―A2p―Lm2p―B2―PL)t (II'-1-4)
(PL―B1)t―Lm1p―A1p―Wb―Lk―Ya―D2 (II'-2-2)
(PL―B1―Lm1p―A1p)t―Wb―Lk―Ya―D2 (II'-2-3)
(PL―B1―Lm1p―A1p―Wb―Lk―Ya)t―D2 (II'-2-4)
其中A1、A2、Lm1、Lm2、B1、B2、D1、D2、Y、Lk、W、a、b和p分别如式(II'-1)或式(II'-2)中所定义。
有效载荷
在本公开中，有效载荷可选自小分子化合物、核酸和类似物、示踪分子(包括荧光分子等)、短肽、多肽、拟肽及蛋白质。在一个实施例中，有效载荷选自小分子化合物、核酸分子和示踪分子。在一个优选实施例中，有效载荷选自小分子化合物。在一个更优选的实施例中，有效载荷选自细胞毒素和其片段。在一个更优选的实施例中，有效载荷选自免疫激动剂和其片段。
在一个实施例中，免疫激动剂选自TLR激动剂和STING激动剂，优选地选自TLR激动剂如TLR激动剂(例如TLR 7激动剂、TLR 8激动剂、TLR 7/8激动剂)和STING激动剂。在一个实施例中，免疫激动剂选自TLR激动剂。
在一个实施例中，免疫激动剂选自咪唑并喹啉。在一个实施例中，免疫激动剂具有式i的结构：
其中
每个R9独立地选自氢、卤素、C1-7烷基-OC(O)-C1-7烷基、C1-7烷基-OC(O)-C2-7烯基和5-7元杂环；
R10和R11各自独立地选自氢和C1-7烷基；
R12选自C1-7烷基和C1-7烷氧基-C1-7烷基；
R13选自C1-7烷基，所述烷基任选地被选自-OH和-NH2的取代基取代；
u是1、2、3或4。
在一个实施例中，免疫激动剂选自化合物i-1至i-5：
在一个实施例中，免疫激动剂选自9H-嘌呤。在一个实施例中，免疫激动剂具有式ii的结构：
其中
L4选自-CH2-、-NH-、-O-、-C(O)-；
R14选自C1-7烷基、C1-7烷氧基和C1-7烷基-OC(O)-C1-7烷基；
R15和R16各自独立地选自氢和C1-7烷基；
R17选自-NH2、-OH、C1-7烷基、C1-7烷氧基和-NH-C1-7烷基；
R18选自-CH2-芳基和-CH2-杂芳基，其中所述芳基和所述杂芳基各自独立地任选被选自以下的取代基取代：-C(O)OH或
在一个实施例中，免疫激动剂选自化合物ii-1和ii-2：
在一个实施例中，免疫激动剂选自5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶。在一个实施例中，免疫激动剂具有式iii的结构：
其中
R19选自-OH、-NH2、C1-7烷基、C1-7烷氧基和-NH-C1-7烷基；
R20选自-CH2-芳基，其中所述芳基任选地被选自以下的两个取代基取代：-OH、C1-7烷氧基和-C1-7烷基-哌啶基。
在一个实施例中，免疫激动剂是化合物iii-1：
在一个实施例中，免疫激动剂选自3H-苯并[b]氮杂环庚三烯。在一个实施例中，免疫激动剂具有式iv的结构：
其中
L5选自-CH2-、-NH-、-C(O)-、-NHC(O)-和-C(O)NH-；
R21选自，其中B是杂芳基环；
R22选自氢和C1-7烷基；
R23和R24各自独立地选自氢和C1-7烷基；
L6选自-CH2-和-C(O)-；
R25选自-N(C1-7烷基)(C1-7烷基)；
R26、R27和R28各自独立地选自氢和C1-7烷基；
v是1、2或3。
在一个实施例中，免疫激动剂是化合物iv-1：
带有效载荷的式(I')化合物的制备
在一个实施例中，连接单元与有效载荷是使用本领域中已知的任何反应，通过如上文所定义的反应性基团连接，所述反应包括但不限于缩合反应、亲核加成、亲电子加成等。
在一个实施例中，有效载荷是免疫激动剂，抗体-免疫激动剂缀合物(编号为LPx)是如下表以及图2a和图2b中所示化合物中的一者。
式(II')的化合物 连接单元 PL(免疫激动剂)
LP102-1-1 LN102-1 iii-1
LP102-1-2 LN102-1 ii-1
LP102-1-3 LN102-1 i-2
LP102-1-4 LN102-1 i-3
LP102-1-5 LN102-1 i-4
LP102-1-6 LN102-1 i-5
LP102-2-1 LN102-2 iv-1
LP102-3-1 LN102-3 iv-1
LP102-4-1 LN102-4 i-1
LP102-6-1 LN102-6 i-1
LP102-7-1 LN102-7 i-1
LP102-8-1 LN102-8 i-1
LP102-11-1 LN102-11 i-1
LP201-1-1 LN201 ii-1
式(III')的化合物
一方面，提供一种式(III')(式(III'-1)或式(III'-2))的化合物：
其中B1和B2如式(I')中所定义。
在一个实施例中，式(III')的化合物可用于通过以下途径制备带有效载荷的式(I')化合物：
将带有效载荷的式(III')化合物转化成带有效载荷的式(I')化合物可使用本领域中或如本文所描述的任何已知方法进行。例如，可进行单步骤或多步骤合成以将结构片段“D1―Ya―Lk―Wb―A2p”或“A1p―Wb―Lk―Ya―D2”引入带有效载荷的式(III')化合物的顺丁烯二酰亚胺环中，接着所得到的含有琥珀酰亚胺部分的分子可以经历开环反应以打开琥珀酰亚胺环并获得带有效载荷的式(I')化合物(即，式(II')化合物)。在一个实施例中，通过式(III')化合物中所包含的顺丁烯二酰亚胺基与硫醇基或氨基反应将“D1―Ya―Lk―Wb―A2p”或“A1p―Wb―Lk―Ya―D2”引入带有效载荷的式(III')化合物中，并且硫醇基或氨基是构建块“D1―Ya―Lk―Wb―A2p”或“A1p―Wb―Lk―Ya―D2”的一部分。在一个实施例中，硫醇基包含在任选被衍生化的胱氨酸中。在一个实施例中，氨基包含在任选被衍生化的赖氨酸中。
在一个实施例中，式(III')的化合物是如图3所示的化合物中的一者。
缀合物和其制备
此外，具有包含连接酶识别序列的部分的带有效载荷的式(I')化合物可与包含连接酶识别序列的其它分子缀合，并由此可用于例如制备靶向分子-药物缀合物，如抗体-药物缀合物。因此，在又另一方面，提供一种缀合物，该缀合物包含式(I')的化合物、靶向分子和有效载荷。
缀合物的具体构成
在又另一方面，提供一种具有式(IV')(式(IV'-1)或式(IV'-2))的结构的缀合物
A―((式(I')的化合物)―PLt)z (IV'-1)
((式(I')的化合物)―PLt)z―A (IV'-2)
其中
PL是连接至式(I')的化合物的A1或A2部分的有效载荷；
A是连接至式(I')的化合物的D1或D2部分的靶向分子；
z是1至20的整数；
t是1至20的整数。
t表示连接至式(I')化合物的PL的数目。
在一个实施例中，有效载荷是如上文所定义的免疫激动剂。在一个实施例中，缀合物是抗体-免疫激动剂缀合物。
在一个实施例中，由式(I')化合物中的D1或D2表示的连接酶识别序列对应于打算与其缀合的靶向分子中的连接酶识别序列，并由此实现靶向分子与式(I')的化合物的位点特异性缀合。当打算缀合的靶向分子的末端修饰是基于连接酶供体底物的识别序列的末端修饰，D1或D2独立地是连接酶受体底物的识别序列。或者，当打算缀合的靶向分子的末端修饰是基于连接酶受体底物的识别序列的末端修饰时，D1或D2独立地是连接酶供体底物的识别序列。
在一个实施例中，z是1至10的整数；例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在一个实施例中，t是1至10的整数；例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在一个实施例中，t是1，式(IV')的缀合物具有下式(IV'-1-1)或式(IV'-2-1)的结构：
A―(D1―Ya―Lk―Wb―A2p―Lm2p―B2―PL)z (IV'-1-1)
(PL―B1―Lm1p―A1p―Wb―Lk―Ya―D2)z―A (IV'-2-1)
其中PL、A1、A2、D1、D2、Y、W、Lk、a、b和p分别如上文所定义。
在另一实施例中，t是2-20，式(IV')的缀合物具有下式中的任一者的结构：(IV'-1-2)、(IV'-1-3)、(IV'-1-4)、(IV'-2-2)、(IV'-2-3)和(IV'-2-4)：
A―(D1―Ya―Lk―Wb―A2p―Lm2p―(B2―PL)t)z (IV'-1-2)
A―(D1―Ya―Lk―Wb―(A2p―Lm2p―B2―PL)t)z (IV'-1-3)
A―(D1―(Ya―Lk―Wb―A2p―Lm2p―B2―PL)t)z (IV'-1-4)
((PL―B1)t―Lm1p―A1p―Wb―Lk―Ya―D2)z―A (IV'-2-2)
((PL―B1―Lm1p―A1p)t―Wb―Lk―Ya―D2)z―A (IV'-2-3)
((PL―B1―Lm1p―A1p―Wb―Lk―Ya)t―D2)z―A (IV'-2-4)
其中PL、A1、A2、D1、D2、Y、W、Lk、a、b、p和z分别如式(IV'-1-1)或式(IV'-2-1)中所定义。
靶向分子
在一个实施例中，靶向分子是抗体或其抗原结合片段。
在本公开的一些实施例中，所述靶向分子(例如抗体或其抗原结合片段)识别的一个或多个靶标包括但不限于CD19、CD22、CD25、CD30/TNFRSF8、CD33、CD37、CD44v6、CD56、CD70、CD71、CD74、CD79b、CD117/KIT、CD123、CD138、CD142、CD174、CD227/MUC1、CD352、CLDN18.2、DLL3、ErbB2/HER2、CN33、GPNMB、ENPP3、粘连蛋白(Nectin)-4、EGFRvIII、SLC44A4/AGS-5、间皮素(mesothelin)、CEACAM5、PSMA、TIM1、LY6E、LIV1、粘连蛋白4、SLITRK6、HGFR/cMet、SLAMF7/CS1、EGFR、BCMA、AXL、NaPi2B、GCC、STEAP1、MUC16、间皮素、ETBR、EphA2、5T4、FOLR1、LAMP1、钙粘蛋白(Cadherin)6、FGFR2、FGFR3、CA6、CanAg、整合素(Integrin)αV、TDGF1、蝶素(Ephrin)A4、Trop2、PTK7、NOTCH3、C4.4A、FLT3、ROR1、ROR2和ROR1/2。
在一个实施例中，靶向分子是抗人HER2抗体或其抗原结合片段。抗人HER2抗体的实例包括但不限于帕妥珠单抗(Pertuzumab)和曲妥珠单抗。帕妥珠单抗结合至HER2的第二细胞外结构域(ECD2)并且被批准用于治疗HER2阳性乳腺癌。曲妥珠单抗结合至HER2的第四细胞外结构域(ECD4)并且被批准用于治疗Her2阳性乳腺癌和胃癌。
在一个优选实施例中，抗人HER2抗体是选自基于曲妥珠单抗的工程化抗HER2抗体中的一者或多者。
在一个实施例中，靶向分子是选自抗人TROP2抗体或其抗原结合片段的一者或多者。在一个特定实施例中，抗人TROP2抗体是选自基于Ab0064的任选工程化的抗TROP2抗体中的一者或多者。
在一个实施例中，靶向分子是选自抗人CLDN18.2抗体或其抗原结合片段的一者或多者。在一个特定实施例中，抗人CLDN18.2抗体是选自基于Ab0098的任选工程化的抗CLDN18.2抗体中的一者或多者。
在一个优选实施例中，抗人HER2、TROP2或CLDN18.2抗体是选自单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、抗体片段和抗体模拟物的重组抗体。在一个实施例中，抗体模拟物选自scFv、微型抗体、双功能抗体、纳米抗体。对于与式(I')的化合物缀合，本公开的靶向分子可包含修饰过的部分以与式(I')的化合物中的D1或D2连接。此类修饰过的部分的引入位置不受限制，例如，当靶向分子是抗体时，其引入位置可以是但不限于位于抗体重链或轻链的C末端或N末端。
在一个替代性实施例中，供与式(I')的化合物中的D1或D2缀合的修饰过的部分可使用例如化学修饰方法引入抗体重链或轻链的非末端位置。
在一个实施例中，本公开的靶向分子是抗体或其抗原结合片段，其可包含末端修饰。末端修饰是指在抗体重链或轻链的C末端或N末端处的修饰，该修饰例如包含连接酶识别序列。在另一实施例中，末端修饰可另外包括含2-100个氨基酸的间隔子Sp3，其中抗体、Sp3和连接酶识别序列是依序连接的。在一个优选实施例中，Sp3是含有2-20个氨基酸的间隔子序列。在一个特定实施例中，Sp3是选自GA、GGGGS、GGGGSGGGGS和GGGGSGGGGSGGGGS的间隔子序列，尤其是GA。
在一个优选实施例中，抗体或其抗原结合片段的轻链包括3种类型：野生型(LC)；C末端修饰的轻链(LCCT)，它是通过直接引入连接酶识别序列LPXTG修饰的；以及C末端修饰的轻链(LCCTL)，它是通过引入短肽间隔子加连接酶供体底物识别序列LPXTG修饰的。抗体或其抗原结合片段的重链包括3种类型：野生型(HC)；C末端修饰的重链(HCCT)，它是通过直接引入连接酶识别序列LPXTG修饰的；以及C末端修饰的重链(HCCTL)，它是通过引入短肽间隔子加连接酶供体底物识别序列LPXTG修饰的。X可以是任何天然或非天然单一氨基酸。当式(IV')的化合物中的z是1或2时，以上重链和轻链的组合可形成8种优选的抗体分子，参见氨基酸序列表。
在一个优选实施例中，抗体或其抗原结合片段的轻链包括3种类型：野生型(LC)；N末端修饰的轻链(LCNT)，它是通过直接引入连接酶识别序列GGG修饰的；以及N末端修饰的轻链(LCNTL)，它是通过引入短肽间隔子加连接酶受体底物识别序列GGG修饰的。抗体或其抗原结合片段的重链包括3种类型：野生型(HC)；N末端修饰的重链(HCNT)，它是通过直接引入连接酶识别序列GGG修饰的；以及N末端修饰的重链(HCNTL)，它是通过引入短肽间隔子加连接酶受体底物识别序列GGG修饰的。
本公开的缀合物还可包含有效载荷。有效载荷如上文所描述。
缀合物的具体实施例
1.存在A和Lm的式(IV')化合物
式(IV'-1-1)的缀合物，其中p是1，D1是Gn，G是甘氨酸，A2是它是硫醇基与Lm2反应之后的剩余残基；并且所述式(IV'-1-1)的化合物的结构如下式(表示为式IV'-1-1-1或式II)中所示：
其中n是3至10的整数，Lm2是或其混合物；
x选自氢、OH、NH2、包含1-10个氨基酸的氨基酸片段、包含1-10个核苷酸的核苷酸片段；
Y、Lk和W分别如式(IV')中所定义。
在一个优选实施例中，在式(II)中，x选自OH、NH2和Gly，尤其是NH2。
在一个实施例中，在式(II)中，a是0，b是0，n＝3，Lk是L1-L2-L3，L1是-NH-，L3是-C(O)-，L2是-(C2H4-O)i-C2H4-，i＝4，并且x是NH2，并且所述式(II)的化合物的结构如下式(II-1)中所示：
在一个实施例中，在式(II-1)中，B2选自下表：
-(CH2)kC(O)-
-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-
-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-
-(CH2)k1C(O)-NH-(C2H4-O)j-(CH2)k2C(O)-Lys-
-(CH2)kC(O)-NH-(C2H4-O)j-
-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-NH-(C2H4-O)j-
-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-
在一个实施例中，在式(II-1)中，B2选自下表：
-(CH2)kC(O)-
-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-
-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-
-(CH2)k1C(O)-NH-(C2H4-O)j-(CH2)k2C(O)-Lys-
-(CH2)kC(O)-NH-(C2H4-O)j-
-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-
在一个实施例中，在式(II-1)中，Lm2是或其混合物，B2是-(CH2)kC(O)-，k是2，并且所述缀合物的结构如下(式AC102-1)：
在一个实施例中，在式(II-1)中，Lm2是或其混合物，B2是-(CH2)kC(O)-，k是5，并且所述缀合物的结构如下(式AC102-2)：
在一个实施例中，在式(II-1)中，Lm2是或其混合物，B2是-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-，k是5，并且所述缀合物的结构如下(式AC102-3)：
在一个实施例中，在式(II-1)中，Lm2是或其混合物，B2是-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-，k是5，d是1，R1和R2是氢，并且所述缀合物的结构如下(式AC102-4)：
在一个实施例中，在式(II-1)中，Lm2是或其混合物，B2是-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-NH-(C2H4-O)j-，k是2，d是1，j是1，R1和R2是甲基，并且所述缀合物的结构如下(式AC102-7)：
在一个实施例中，在式(II-1)中，Lm2是或其混合物，B2是-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-，k是2，d是1，R1和R2是氢，并且所述缀合物的结构如下(式AC102-8)：
在一个实施例中，在式(II-1)中，Lm2是或其混合物，B2是-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-，k是2，d是2，R1和R2是甲基，R1'和R2'是氢，并且所述缀合物的结构如下(式AC102-11)：
在一个特定实施例中，在式(II)中，a是0，b是0，n＝3，B2是-(Cys-NH2)-，并且所述缀合物的结构如下(式AC105)：
在一个特定实施例中，在式(II)中，a是0，b是0，n＝3，Lk是L1-L2-L3，L1是-NH-，L3是-C(O)-，L2是-(C2H4-O)i-C2H4-，i＝4，x是OH，并且所述缀合物的结构如下(式AC106)：
在一个特定实施例中，在式(II)中，a是1，b是0，Y是L，L是亮氨酸(Leu)，n＝3，Lk是L1-L2-L3，L1是-NH-，L3是-C(O)-，L2是-(C2H4-O)i-C2H4-，i＝4，x是NH2，并且所述缀合物的结构如下(式AC107)：
在另一特定实施例中，在式(II)中，a是1，b是0，Y是Q，Q是谷氨酰胺(Gln)，n＝3，Lk是L1-L2-L3，L1是-NH-，L3是-C(O)-，L2是-(C2H4-O)i-C2H4-，i＝4，x是NH2，并且所述缀合物的结构如下(式AC108)：
在一个特定实施例中，在式(II)中，a是0，b是0，n＝3，Lk是L1-L2-L3，L1是-NH-，L3是-C(O)-，L2是-C5H10-，并且所述缀合物的结构如下(式AC109)：
在另一特定实施例中，在式(II)中，a是0，b是0，n＝3，Lk是L1-L2-L3，L1是-NH-，L3是-C(O)-，L2是被一个-NR1R2基团取代的-C5H10-基团，R1是氢，R2是-C(O)CH3，x是NH2，并且所述缀合物的结构如下(式AC110)：
式(IV'-2)的缀合物，当D2是LPXTG并且A1是它是硫醇基与Lm2反应之后的剩余残基时；所述式(IV'-2-1)的化合物的结构如下式(IV'-2-1-1)中所示：
其中x选自氢、包含1-10个氨基酸的氨基酸片段、包含1-10个核苷酸的核苷酸片段，Lm1是或其混合物；
Y、Lk和W分别如式(IV')中所定义。
在一个实施例中，x是氢。
2.不存在A和Lm的式(IV')化合物
式(IV'-1-1)的连接单元，其中p是0，D1是Gn，G是甘氨酸；并且所述式(IV'-1-1)的化合物的结构如下式(IV'-1-1-2)中所示：
其中n是3至10的整数；
Y、Lk、W、a和b分别如式(IV')中所定义。
在一个实施例中，在式(IV'-1-1-2)中，a是0，b是0，n＝3，Lk是L1-L2-L3，L1是-NH-，L3是-C(O)-，L2是-(C2H4-O)i-C2H4-，i＝4，B2是-(Lys-NH2)-，并且所述缀合物的结构如下(式AC201)：
缀合物的制备
本公开的缀合物可以由本领域中已知的任何方法制备。在一些实施例中，缀合物是通过连接酶催化的靶向分子与带有效载荷的式(I')化合物的位点特异性缀合来制备，其中靶向分子被连接酶识别序列修饰。所述方法包含步骤A和步骤B。
步骤A.连接单元-有效载荷中间体的制备
在一个优选实施例中，式(I')的化合物中的B1或B2各自独立地通过反应性基团共价连接至含有相应反应性基团的有效载荷，其中所述反应性基团分别如上文所定义。
使用本公开的式(I')化合物制备的连接单元-有效载荷中间体具有确定的结构、确定的组成和高纯度，由此使得当与抗体进行缀合反应时，较少的杂质被引入或无其它杂质引入。当使用此类中间体进行连接酶催化的与含有连接酶识别序列的修饰过的抗体的位点特异性缀合时，获得具有高度可控的质量的均质ADC。
步骤B.将靶向分子连接至带有效载荷的式(I')化合物
本公开的靶向分子可通过本领域中已知的任何方法与带有效载荷的式(I')化合物(即，式(II')的化合物)缀合。例如，应用连接酶催化的位点特异性缀合技术，并且靶向分子与带有效载荷的式(I')化合物通过连接酶特异性底物识别序列相互连接。识别序列取决于所采用的特定连接酶。在一个实施例中，靶向分子是具有在轻链和/或重链的C末端处引入的基于识别序列的末端修饰的抗体，并且靶向分子与式(II')的化合物在野生型或优化的工程化连接酶或其任何组合催化下以及在适合催化反应条件下缀合。
在一个具体实施例中，连接酶是分选酶A并且缀合反应可由以下方案表示：
三角形和五边形分别表示以下中的任一者：抗体的一部分或式(II')化合物的一部分，并且位置是可互换的。n、X和J分别如上文所定义。当与相应的受体底物识别序列Gn缀合时，在LPXTGJ序列中甘氨酸上游的肽键被分选酶A裂解，并将由此得到的中间体连接至Gn的游离N末端，产生新肽键。所得到的氨基酸序列是LPXTGn。序列Gn和LPXTGJ如上文所定义。
具体缀合物表
在一个实施例中，有效载荷是免疫激动剂。在一个实施例中，抗体是修饰的曲妥珠单抗，优选地是Ab0001-LCCTL-HC(轻链：SEQ ID NO:1，重链：SEQ ID NO:2)。Ab0001-LCCTL-HC的序列是基于Ab0001(曲妥珠单抗)的氨基酸序列，并且GALPETGG被引入轻链的C末端，其中LPETGG是连接酶供体底物的识别序列，并且GA是间隔子序列。在一个实施例中，抗体-免疫激动剂缀合物如下表以及图4a和图4b中所示。
AIAC 式 PL(免疫激动剂) A(靶向分子)
AC102-1-1-1 AC102-1 iii-1 Ab0001-LCCTL-HC
AC102-1-1-2 AC102-1 ii-1 Ab0001-LCCTL-HC
AC102-1-1-3 AC102-1 i-2 Ab0001-LCCTL-HC
AC102-1-1-4 AC102-1 i-3 Ab0001-LCCTL-HC
AC102-1-1-5 AC102-1 i-4 Ab0001-LCCTL-HC
AC102-1-1-6 AC102-1 i-5 Ab0001-LCCTL-HC
AC102-2-1-1 AC102-2 iv-1 Ab0001-LCCTL-HC
AC102-3-1-1 AC102-3 iv-1 Ab0001-LCCTL-HC
AC102-4-1-1 AC102-4 i-1 Ab0001-LCCTL-HC
AC102-6-1-1 AC102-6 i-1 Ab0001-LCCTL-HC
AC102-7-1-1 AC102-7 i-1 Ab0001-LCCTL-HC
AC102-8-1-1 AC102-8 i-1 Ab0001-LCCTL-HC
AC102-11-1-1 AC102-11 i-1 Ab0001-LCCTL-HC
AC201-1-1-1 AC201 ii-1 Ab0001-LCCTL-HC
AC102-6-2-1 AC102-6 i-1 Ab0064-LCCTL-HC
AC102-8-2-1 AC102-8 i-1 Ab0064-LCCTL-HC
AC201-1-2-1 AC201 ii-1 Ab0064-LCCTL-HC
AC102-8-3-1 AC102-8 i-1 Ab0098-LCCTL-HC
AC201-1-3-1 AC201 ii-1 Ab0098-LCCTL-HC
药物组合物和药物制剂
本公开的另一目的是提供一种药物组合物，该药物组合物包含预防或治疗有效量的本公开的缀合物，以及至少一种药学上可接受的载体。
本公开的药物组合物可通过任何方式施用，只要它实现预防、缓解、预防或治愈人类或动物的症状的作用即可。例如，可根据施用途径制备各种适合的剂型，尤其是注射剂，如注射用冻干粉、注射液或注射用无菌粉末。
术语“药学上可接受的”意思指当在正常医学判断的范围内与患者的组织接触时，不应产生过度毒性、刺激或过敏反应等，具有合理的优点-缺点比并对预定用途有效。
术语药学上可接受的载体是指药学上可接受的且不会干扰缀合物的生物活性和特性的载体材料。水性载体的实例包括但不限于缓冲盐水等。药学上可接受的载体还包括使组合物接近生理条件的载体材料，如pH调节剂、缓冲剂、毒性调节剂等，以及乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。
在一个实施例中，本公开的药物组合物具有1至20，如1-10、1-8、1-6、1-4、1-3.5、1-3、1-2.5，优选地1-2的整数或非整数药物与抗体比(DAR)。在一个实施例中，本公开的药物组合物具有约1.5至约2，优选地约1.6至约2，更优选地约1.7至约2的DAR。
治疗方法和用途
本公开的缀合物可用于治疗肿瘤和/或自身免疫疾病。对缀合物治疗敏感的肿瘤包括以特定肿瘤相关抗原或细胞表面受体为特征的肿瘤，并且这些肿瘤将被缀合物中的靶向分子识别，并且会受到缀合物中激动剂的免疫细胞激活活性影响。
因此，在又另一方面，还提供了本公开的缀合物或本公开的药物组合物在制造用于治疗选自肿瘤或自身免疫疾病的疾病、病症或疾患的药剂中的用途。
另一方面，提供了用于治疗肿瘤或自身免疫疾病的本公开的缀合物或本公开的药物组合物。
在另一方面，提供了一种治疗肿瘤或自身免疫疾病的方法，所述方法包括向有需要的个体施用有效量的本公开的缀合物或本公开的药物组合物。
在一个优选实施例中，通过抗人HER2抗体与有效载荷缀合形成的本公开的缀合物可特异性结合至肿瘤细胞表面上的HER2并选择性杀灭表达HER2的肿瘤细胞。在另一个优选实施例中，提供了本公开的缀合物或本公开的药物组合物在制造用于治疗选自HER2阳性肿瘤的疾病、病症或疾患的药剂中的用途。在一个更优选的实施例中，所述疾病、病症或疾患选自乳腺癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、尿道上皮癌等。
在一个优选实施例中，通过抗人TROP2抗体与有效载荷缀合形成的本公开的缀合物可特异性结合至肿瘤细胞表面上的TROP2并选择性杀灭表达TROP2的肿瘤细胞。在另一个优选实施例中，提供了本公开的缀合物或本公开的药物组合物在制造用于治疗选自TROP2阳性肿瘤的疾病、病症或疾患的药剂中的用途。在一个更优选的实施例中，所述疾病、病症或疾患选自乳腺癌、尿道上皮癌、肺癌、肝癌、子宫内膜癌、头颈癌、卵巢癌等。
在一个优选实施例中，通过抗人CLDN18.2抗体与有效载荷缀合形成的本公开的缀合物可特异性结合至肿瘤细胞表面上的CLDN18.2并选择性杀灭表达CLDN18.2的肿瘤细胞。在另一个优选实施例中，提供了本公开的缀合物或本公开的药物组合物在制造用于治疗选自CLDN18.2阳性肿瘤的疾病、病症或疾患的药剂中的用途。在一个更优选的实施例中，所述疾病、病症或疾患选自胃癌或胰腺癌等。
施用给受试者的缀合物的剂量可在相当大的范围内调整。剂量可根据特定施用途径和受试者的需要而变化，并且可由健康护理专业人员判断。
有益效果
本公开利用了具有独特结构的连接单元并使用连接酶催化靶向分子与激动剂的缀合。本公开的缀合物具有良好均质性、高活性和高选择性。具体点说，细胞内代谢物对具有低靶标抗原表达或无靶标抗原表达的细胞显示出明显降低的细胞增殖毒性。此外，连接单元-激动剂中间体的毒性比游离激动剂的毒性低得多，并因此，药物制造过程的危害较小，这将有利于工业生产。
本公开的缀合物实现以下技术作用中的至少一者：
(1)针对靶标细胞的高抑制活性或对靶标细胞的强大杀灭作用。
(2)良好的物理化学特性(例如溶解度、物理和/或化学稳定性)。
(3)良好的药物动力学特性(例如在血浆中良好的稳定性、适当的半衰期和作用持续时间)。
(4)良好的安全性(对非靶标正常细胞或组织的低毒性，和/或较少的副作用、较宽的治疗窗口)等。
实例
制备实例
为了更清楚地说明目的和技术方案，以下将参照具体实例进一步描述本公开。应理解，这些实例并不打算限制本公开的范围。以下实例中未提到的特定实验方法是根据常规实验方法进行。
仪器、材料和试剂
除非另外陈述，否则实例中使用的仪器和试剂是可商购的。试剂可不经进一步纯化即直接使用。
MS：Thermo Fisher Q Exactive Plus，Water2795-Quattro micro三重四极杆质谱仪
HPLC：Waters 2695、Agilent 1100、Agilent 1200
半制备型HPLC：Lisure HP plus 50D
流式细胞术：CytoFLEX S
HIC-HPLC：Butyl-HIC；流动相A：25mM PB、2M(NH4)2SO4，pH 7.0；流动相B：25mM PB，pH 7.0；流动速率：0.8ml/min；采集时间：25min；注入量：20μg；柱温度：25℃；检测波长：280nm；样品室温度：8℃。
SEC-HPLC：柱：TSK凝胶G3000 SWXL，TOSOH 7.8mm ID×300mm，5μm；流动相：0.2MKH2PO4、0.25M KCl，pH 6.2；流动速率：0.5ml/min；采集时间：30min；注入体积：50μl；柱温度：25℃；检测波长：280nm；样品盘温度：8℃。
CHO获自Thermo Fisher Scientific；pcDNA 3.3获自Life Technology；HEK293F获自Prejin；PEIMAX转染试剂获自Polyscience；MabSelect Sure ProA获自GE；CaptoSImpAct获自GE；Rink-酰胺-MBHA树脂和二氯树脂获自Nankai synthesis；HCC1954获自ATCC目录号CRL-2338；SK-BR-3获自ATCC目录号HTB-30；BT474细胞获自ATCC目录号HTB-20；JIMT1细胞获自DSMZ目录号ACC589；Colo205细胞获自ATCC目录号CRL-222；NCI-N87-紧密连接蛋白18.2人胃癌细胞获自KYinno Biotechnology Co.,Ltd；紧密连接蛋白18.2阴性NCI-N87亲本细胞获自ATCC目录号CRL-5822；MC38hHER2鼠结直肠癌细胞获自Biocytogen；NUGC4人胃癌细胞获自JCRB目录号JCRB0834；NCI-N87细胞(ATCC目录号CRL-5822)；MDA-MB-468获自ATCC目录号HTB-132。
实例1抗体表达载体的构建、抗体表达、纯化和鉴别
1.1修饰过的抗人HER2抗体Ab0001-LCCTL-HC的生产
如下构建抗体Ab0001-LCCTL-HC(轻链：SEQ ID NO:1，重链：SEQ ID NO:2)的表达质粒。抗体Ab0001-LCCTL-HC的序列：基于曲妥珠单抗的氨基酸序列，并将GALPETGG引入轻链的C末端，其中LPETGG是连接酶供体底物的识别序列，并且GA是间隔子序列。将质粒转染至CHO细胞中并建立细胞群，并且筛选高表达的细胞群，将该细胞群在5-10L反应器中参照曲妥珠单抗的培养方法培养，并收集上清液。
1.2抗体Ab0001-LCCTL-HC的纯化
使用MabSelect亲和色谱法和琼脂糖凝胶S阳离子交换色谱法的组合，以标准程序纯化Ab0001-LCCTL-HC，将纯化的产物溶解于原始曲妥珠单抗药物缓冲液(5mM盐酸组氨酸、2％海藻糖、0.009％聚山梨醇酯20，PH 6.0)中，并分数份小等分试样冷冻。
1.3抗体Ab0001-LCCTL-HC的质量控制
经SDS-PAGE确定，以上纯化的抗体Ab0001-LCCTL-HC的纯度是98.5％；经SEC-HPLC确定，样品中高分子量聚合物的含量小于0.4％；内毒素含量小于0.098EU/mg。
1.4其它修饰过的抗人抗体的制备
根据类似方法，将基于连接酶识别序列的末端修饰分别引入曲妥珠单抗轻链和/或重链的C末端，得到修饰过的抗体。
基于Ab0001(曲妥珠单抗)的修饰过的抗人HER2抗体列于表1中。末端修饰序列中的LPETGG是连接酶供体底物的识别序列，并且GA是间隔子序列。
表1修饰过的抗人HER2抗体
序列 引入末端处的序列
Ab0001-LCCTL-HC轻链 SEQ ID NO:1 GALPETGG
Ab0001-LCCTL-HC重链 SEQ ID NO:2 -*
Ab0001-LC-HCCT轻链 SEQ ID NO:3 -
Ab0001-LC-HCCT重链 SEQ ID NO:4 LPETGG
Ab0001-LC-HCCTL轻链 SEQ ID NO:5 -
Ab0001-LC-HCCTL重链 SEQ ID NO:6 GALPETGG
Ab0001-LCCT-HC轻链 SEQ ID NO:7 LPETGG
Ab0001-LCCT-HC重链 SEQ ID NO:8 -
Ab0001-LCCT-HCCT轻链 SEQ ID NO:9 LPETGG
Ab0001-LCCT-HCCT重链 SEQ ID NO:10 LPETGG
Ab0001-LCCT-HCCTL轻链 SEQ ID NO:11 LPETGG
Ab0001-LCCT-HCCTL重链 SEQ ID NO:12 GALPETGG
Ab0001-LCCTL-HCCT轻链 SEQ ID NO:13 GALPETGG
Ab0001-LCCTL-HCCT重链 SEQ ID NO:14 LPETGG
Ab0001-LCCTL-HCCTL轻链 SEQ ID NO:15 GALPETGG
Ab0001-LCCTL-HCCTL重链 SEQ ID NO:16 GALPETGG
*：“-”表示无末端修饰
修饰过的抗人TROP2抗体Ab0064-LCCTL-HC列于表2中。末端修饰序列中的LPETGG是连接酶供体底物的识别序列，并且GA是间隔子序列。
表2修饰过的抗人TROP2抗体
序列 引入末端的序列
Ab0064-LCCTL-HC轻链 SEQ ID NO:19 GALPETGG
Ab0064-LCCTL-HC重链 SEQ ID NO:20 _*
*：“-”表示无末端修饰
修饰过的抗人CLDN18.2抗体列于表3中。末端修饰序列中的LPETGG是连接酶供体底物的识别序列，并且GA是间隔子序列。
表3修饰过的抗人CLDN18.2抗体
*：“-”表示无末端修饰
实例2中间体的制备
2.1连接单元的制备
2.1.1存在A和Lm的连接单元
通过常规固相多肽合成，使用Rink-酰胺-MBHA树脂或二氯树脂合成含有式(I')的部分A的连接单元片段LU102至LU110。使用Fmoc保护连接单元中Lk结构的氨基酸和氨基。缀合试剂选自HOBT、HOAt/DIC、DCC、EDCI或HATU。合成之后，使用三氟乙酸裂解树脂。通过HPLC纯化产物，冻干并储存待用。连接单元片段列于下表和图5中。
表
使上表中的连接单元片段与含有顺丁烯二酰亚胺结构或其衍生物的连接单元片段反应，接着使用如WO2015165413A1中所描述的方法进行开环反应，获得连接单元LN102-1-1、LN102-2-1、LN102-3-1、LN102-4-1、LN102-7-1、LN102-8-1、LN102-11-1。其结构如上文所示。参见下表：
2.1.2不存在A和Lm的连接单元
通过常规固相多肽合成，使用Rink-酰胺-MBHA树脂合成连接单元LN201。使用Fmoc保护连接单元中的氨基酸。缀合试剂选自HOBt、HOAt/DIC、DCC、EDCI或HATU。合成之后，使用三氟乙酸裂解树脂。通过HPLC纯化产物，冻干并储存待用。理论分子量：785.9，测量值：[M+H]+＝786.8。
2.2连接单元-激动剂中间体的制备
2.2.1连接单元-激动剂中间体LP102-1-4的制备
步骤1：将4-氯-3-硝基喹啉(6.25g，30.0mmol)溶解于DCM(100mL)中并用BocNH(CH2)4NH2(5.76g，30.6mmol)处理，随后用TEA(8.0mL，61.8mmol)处理。在室温下保持反应24小时，接着用H2O(80mL)、盐水(50mL)洗涤，经MgSO4干燥并在真空中浓缩。获得呈黄色固体状的目标化合物HX20099-a(10.0g，92.5％)，MS m/z 361.5[M+H]+。
步骤2：将硝基化合物(HX20099-a)(3.0g，8.33mmol)溶解于THF(100mL)和水(80mL)中。一次性添加锌(13.54g，208.3mmol)，随后添加NH4Cl(13.4g，250.0mmol)。在室温下，将悬浮液剧烈搅拌1小时(TLC)。过滤后，用THF(20mL×2)洗涤滤饼。向滤液中添加NaCl，直至水相饱和。收集液相并分离THF层。将水层用THF/EA(50mL/50mL)萃取。将有机层合并，经MgSO4干燥，并浓缩，获得残余物(HX20099-b)用于下一步骤(3.1g，>100％)。MS m/z331.5[M+H]+。
步骤3：将胺化合物(HX20099-b)(660mg，粗品，<2.0mmol)和原戊酸三乙酯(816mg，4.0mmol)悬浮于甲苯(50mL)中并加热至110℃。接着，添加盐酸吡啶(23.2mg，0.2mmol)。加热反应4小时。将混合物在室温下保持48小时(TLC)。倾析液体，并将剩余固体/残余物在与液体合并的甲苯(10mL×2)存在下搅动，并浓缩。将残余物溶解于DCM中，并通过硅胶柱色谱法(甲醇/DCM，0-10-20％，30g柱)纯化，获得目标化合物HX20099-c(300mg，两个步骤37.8％)。MS m/z 397.5[M+H]+。
步骤4：将化合物HX20099-c(200mg，0.51mmol)溶解于DCM(8mL)中并用mCPBA(261.5mg，1.52mmol)处理。在室温下保持反应4小时。将混合物用NaHCO3饱和溶液(15mL×3)洗涤，干燥并浓缩，获得粗产物HX20099-d用于下一步骤。MS m/z 413.5[M+H]+。
步骤5：在压力管中，将化合物HX20099-d(200mg，<0.48mmol)溶解于二氯乙烷(15mL)中并用浓氢氧化铵(28％，0.24mL)处理，并使温度达到0℃。冷却后，经3分钟向这一混合物中缓慢添加甲苯磺酰氯(104mg，0.54mmol)。添加浓氢氧化铵(0.12mL)并将管密封。将管在80℃加热4小时(TLC)。冷却后，将混合物用DCM(25mL)稀释，用水(30mL)洗涤，干燥，并通过硅胶柱色谱法纯化，获得目标化合物(HX20099-e)(150mg，76％)。MS m/z 412.5[M+H]+。
步骤6：在室温下，将化合物HX20099-e(150mg，0.36mmol)用TFA/DCM(2mL/6mL)处理2小时(HPLC)。接下来，将反应物真空干燥，并通过半制备型/制备型HPLC纯化残余物，并且冻干，得到化合物i-3(74mg，66％)。MS m/z 312.5[M+H]+。
步骤7：将化合物i-3(62mg，0.2mmol)溶解于DMF(5mL)中并用DIPEA(66μL，0.4mmol)和N-琥珀酰亚胺基3-顺丁烯二酰亚胺基丙酸酯(63.9mg，0.24mmol)处理。在室温下保持反应3小时(HPLC)，接着将混合物直接用于下一步骤。
步骤8-9：将来自步骤7的混合物用连接单元LU102(161mg，0.3mmol)和H2O(5mL)的溶液处理。使混合物在0-40℃反应0.5-20小时。接着，将反应混合物与适量的Tris碱溶液或促进开环反应的其它溶液混合，并使其在0-40℃反应0.2-20小时。反应完成之后，通过半制备型/制备型HPLC纯化产物，并冻干，获得连接单元-激动剂LP102-1-4(60mg，三个步骤30％)。MS m/z 1019.5[M+H]+。
2.2.2连接单元-激动剂LP201-1-1的制备
步骤1：Fmoc-LP201-1-1的制备
称取购买的激动剂ii-1并溶解于DMF中。接着，添加DIEA或Et3N和缀合试剂，所述缀合试剂选自HOBt、HOAt/DIC、DCC、EDCI或HATU。将混合物搅拌10-120分钟。接着，将连接单元LN201和DMF的溶液添加至反应混合物中，使其在0-40℃反应0.5-20小时。反应完成之后，将产物通过半制备型/制备型HPLC纯化并冻干，得到Fmoc-LP201-1-1。理论分子量：1127.2，测量值：[M+H]+＝1127.7。
步骤2：连接单元-激动剂LP201-1-1的制备
称取Fmoc-LP201-1-1并溶解于哌啶/DMF(v/v＝1:4)中。接着，使混合物在0-40℃反应0.5-20小时。反应完成之后，将产物通过半制备型/制备型HPLC纯化并冻干，得到LP201-1-1。理论分子量：905.0，测量值：[M+H]+＝905.6。
实例3靶向分子-药物缀合物的制备
将连接单元-激动剂中间体分别通过连接酶以位点特异性方式与抗体缀合，形成AIAC。缀合反应的方法可见于WO2015165413A1。所得到的AIAC列于下表中：
AIAC 连接单元-激动剂中间体 A(靶向分子) DAR
AC102-1-1-1 LP102-1-1 Ab0001-LCCTL-HC 1.89
AC102-1-1-2 LP102-1-2 Ab0001-LCCTL-HC 1.92
AC102-1-1-3 LP102-1-3 Ab0001-LCCTL-HC 1.98
AC102-1-1-4 LP102-1-4 Ab0001-LCCTL-HC 1.90
AC102-1-1-5 LP102-1-5 Ab0001-LCCTL-HC 1.84
AC102-1-1-6 LP102-1-6 Ab0001-LCCTL-HC 1.83
AC102-2-1-1 LP102-2-1 Ab0001-LCCTL-HC 1.86
AC102-3-1-1 LP102-3-1 Ab0001-LCCTL-HC 1.88
AC102-4-1-1 LP102-4-1 Ab0001-LCCTL-HC 1.82
AC102-6-1-1 LP102-6-1 Ab0001-LCCTL-HC 1.74
AC102-7-1-1 LP102-7-1 Ab0001-LCCTL-HC 1.72
AC102-8-1-1 LP102-8-1 Ab0001-LCCTL-HC 1.79
AC102-11-1-1 LP102-11-1 Ab0001-LCCTL-HC 1.70
AC201-1-1-1 LP201-1-1 Ab0001-LCCTL-HC 1.86
AC102-6-2-1 LP102-6-1 Ab0064-LCCTL-HC 1.76
AC102-8-2-1 LP102-8-1 Ab0064-LCCTL-HC 1.80
AC201-1-2-1 LP201-1-1 Ab0064-LCCTL-HC 1.84
AC102-8-3-1 LP102-8-1 Ab0098-LCCTL-HC 1.7
AC201-1-3-1 LP201-1-1 Ab0098-LCCTL-HC 1.79
效果实例1抗体免疫激动剂缀合物的体外评估
人外周血单核细胞的分离
使用SepMate 50和Lymphoprep(Stem Cell Technologies)从健康血液供体中分离出人外周血单核细胞。对活细胞计数并将细胞浓度在含10％ FBS的RPMI1640培养基中调至1.25×106个/毫升。利用胰蛋白酶剥离肿瘤细胞，并收集起来。对活细胞计数并将细胞浓度在含10％ FBS的RPMI1640培养基中调至2.5×105个/毫升。将12.5×104个人PBMC和2.5×104个肿瘤细胞(PBMC:肿瘤细胞＝5:1)添加至96孔板各孔中，接着添加指定浓度的抗体或缀合物。将细胞混合物与药物一起培育18小时，接着收集无细胞上清液用于人TNFαELISA。
为了评价靶向HER2的免疫缀合物的活性，将人PBMC和NCI N87人胃癌细胞以5:1的比率共培养，并添加指定浓度的抗体或测试免疫缀合物(AC102-6-1-1或AC102-8-1-1)。相比抗体Ab0001，AC102-6-1-1诱导较高的TNFα产量，并且AC102-6-1-1的有效浓度比有效载荷瑞喹莫德低得多(图6)。相比Ab0001，AC102-8-1-1诱导较高的TNFα水平，该水平与AC102-6-1-1类似(图7)。在人PBMC和MDA-MB-468HER2阴性细胞的共培养物中未观察到AC102-6-1-1的活性，表明AC102-6-1-1的活性主要取决于靶标肿瘤细胞上HER2的表达(图8)。根据这一数据，在人PBMC与其它具有不同HER2表达水平的癌细胞的共培养物中测试免疫缀合物的活性，所述癌细胞包括HCC1954(图9)、SK-BR-3(图10)、BT474(图11)、JIMT1(图12)、Colo205(图13)、MDA-MB-468(图14)。数据显示，AC102-8-1-1只能诱导PBMC与高HER2的肿瘤细胞的共培养物中的TNFα。
在类似实验设置中，评价若干其它缀合物的体外活性(图15至图17)。AC102-2-1-1和AC102-3-1-1具有相同的激动剂有效载荷，但连接单元不同，并且诱导不同的TNFα产生水平(图15)。
效果实例2抗体免疫激动剂缀合物的体外评估
为了评价靶向TROP2的免疫缀合物的活性，将人PBMC和NCI-N87人胃癌细胞以5:1的比率共培养，并添加指定浓度的测试免疫缀合物(AC102-8-2-1或AC102-6-2-1)或未修饰的裸抗TROP2抗体。人PBMC的分离和实验设置与效果实例1类似。相比抗体Ab0064(轻链：SEQID NO.17，重链：SEQ ID NO.18)，AC102-8-2-1和AC102-6-2-1诱导较高的TNFα产量(图18)。
效果实例3抗体免疫激动剂缀合物的体外评估
紧密连接蛋白18.2也可充当AIAC靶标的实例。为了评价靶向紧密连接蛋白18.2的免疫缀合物的活性，将过表达人紧密连接蛋白18.2的NCI-N87-紧密连接蛋白18.2人胃癌细胞或亲本NCI-N87细胞与人PBMC以1:5的比率共培养，并分别添加指定浓度的测试免疫缀合物(AC102-8-3-1或AC201-1-3-1)或未修饰的裸抗紧密连接蛋白18.2抗体。人PBMC的分离和实验设置与效果实例1类似。与抗体Ab0098相比较，AC102-8-3-1和AC201-1-3-1缀合物诱导较高TNFα产量(图19)，而这些缀合物在极高剂量下于紧密连接蛋白18.2阴性NCI-N87亲本细胞中仅显示可忽略的诱导TNFα产生的作用(图20)。相较于使用连接子-有效载荷中间体LP102-8-1与Ab0098-LCCTL-HC制备的缀合物，使用连接子-有效载荷中间体LP201-1-1与Ab0098-LCCTL-HC制备的缀合物展现较温和的活性，这与这两种有效载荷的效力相符。
效果实例4抗体免疫激动剂缀合物的体外评估
为了评价靶向HER2的免疫缀合物的活性，将人PBMC和SK-BR-3(图21)或HCC1954(图22)人乳腺癌细胞以5:1的比率共培养，并添加指定浓度的免疫缀合物(AC102-6-1-1)和抗体(Ab0001)。将细胞与药物一起培育18小时，接着收集无细胞上清液，利用ELISA检测人IFNγ。人PBMC的分离和实验设置与效果实例1类似。与抗体Ab0001相比，AC102-6-1-1诱导较高的IFNγ产量，表明潜在的激活T细胞反应的能力。
效果实例5抗体免疫激动剂缀合物的体内评估
对于体内抗肿瘤功效研究，将1×107个NCI-N87人胃癌细胞皮下接种于SCIDBeige小鼠的右侧腹中。6天之后，当肿瘤体积达到平均173mm3时，将荷瘤小鼠分组并静脉内施用5mg/kg的Ab0001或测试免疫缀合物(AC102-6-1-1或AC102-8-1-1)。每周两次用测径规测量肿瘤体积。抗体Ab0001本身显示出极其有限的抗肿瘤活性。AC102-6-1-1和AC102-8-1-1在结束时大致治愈肿瘤(图23)。在独立研究中，AC102-8-1-1在0.5、1和3mg/kg下展示剂量依赖性活性(图24)。
将5×106个JIMT1人乳腺癌细胞皮下接种于SCID Beige小鼠的右侧腹中以产生异种移植模型。9天之后，当肿瘤体积达到平均149mm3时，向荷瘤小鼠静脉内施用5mg/kg的AC102-8-1-1。肿瘤生长明显受到抑制(图25)。
将5×105个过表达人HER2的MC38hHER2鼠结直肠癌细胞皮下接种于C57BL/6小鼠的右侧腹中。8天之后，当肿瘤体积达到平均90mm3时，将荷瘤小鼠分组并静脉内施用Ab0001或AC102-6-1-1。10mg/kg Ab0001未显示明显抗肿瘤活性。3mg/kg和10mg/kg AC102-6-1-1以剂量依赖性方式抑制肿瘤生长(图26)。在类似环境中，3mg/kg和10mg/kg的AC102-8-1-1都在100％小鼠中诱导完全肿瘤消退(图27)。
效果实例6抗体免疫激动剂缀合物的体内评估
为了测试抗TROP2 AIAC的体内抗肿瘤作用，将1×107个NCI-N87人胃癌细胞皮下接种于SCID Beige小鼠的右侧腹中。当肿瘤体积达到平均182mm3时，将荷瘤小鼠分组并静脉内施用媒剂或5mg/kg的测试免疫缀合物(AC102-6-2-1、AC102-8-2-1或AC201-1-2-1)。每周两次用测径规测量肿瘤体积。与媒剂对照相比较，AC102-6-2-1和AC102-8-2-1显示出强抗肿瘤活性(图28)。
将一千万个MDA-MB-468人乳腺癌细胞皮下接种于SCID Beige小鼠的右侧腹中以产生异种移植模型。在肿瘤体积达到平均183mm3之后，将荷瘤小鼠分组并静脉内施用媒剂或测试免疫缀合物(AC102-8-2-1或AC201-1-2-1)。AC102-8-2-1和AC201-1-2-1在3mg/kg下显示良好且相当的抗肿瘤活性。AC102-8-2-1在3mg/kg下展现的抗肿瘤反应要高于0.5mg/kg下展现的反应，表明剂量依赖性作用(图29)。
效果实例7抗体免疫激动剂缀合物的体内评估
使用NUGC4模型评价抗紧密连接蛋白18.2-AIAC的体内抗肿瘤功效。将一百万个NUGC4人胃癌细胞皮下接种于BALB/c裸小鼠的右侧腹中以产生异种移植模型。在肿瘤体积达到平均108mm3之后，将荷瘤小鼠分组并在第0天和第14天，静脉内施用5mg/kg的测试抗紧密连接蛋白18.2缀合物(AC102-8-3-1)或相应未修饰的裸抗体。每周两次用测径规测量肿瘤体积。单独抗体Ab0098(轻链：SEQ ID NO.21，重链：SEQ ID NO.22)未显示抗肿瘤活性，并且AC102-8-3-1显示抗肿瘤活性(图30)。序列表
SEQ ID No.1：Ab0001-LCCTL-HC轻链：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGALPETGG
SEQ ID No.2：Ab0001-LCCTL-HC重链：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID No.3：Ab0001-LC-HCCT轻链：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID No.4：Ab0001-LC-HCCT重链：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKLPETGG
SEQ ID No.5：Ab0001-LC-HCCTL轻链：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID No.6：Ab0001-LC-HCCTL重链：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGALPETGG
SEQ ID No.7：Ab0001-LCCT-HC轻链：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECLPETGG
SEQ ID No.8：Ab0001-LCCT-HC重链：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID No.9：Ab0001-LCCT-HCCT轻链：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECLPETGG
SEQ ID No.10：Ab0001-LCCT-HCCT重链：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKLPETGG
SEQ ID No.11：Ab0001-LCCT-HCCTL轻链：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECLPETGG
SEQ ID No.12：Ab0001-LCCT-HCCTL重链：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGALPETGG
SEQ ID No.13：Ab0001-LCCTL-HCCT轻链：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGALPETGG
SEQ ID No.14：Ab0001-LCCTL-HCCT重链：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKLPETGG
SEQ ID No.15：Ab0001-LCCTL-HCCTL轻链：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGALPETGG
SEQ ID No.16：Ab0001-LCCTL-HCCTL重链：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGALPETGG
SEQ ID No.17：Ab0064轻链
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQGINNYLSWYQQKPGKAPKSLIYRANRLVSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQYDEFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID No.18：Ab0064重链
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYRFTDYVINWVRQAPGQGLEWMGQIYPGSDTFHYNQKFQGRATLTADKSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARFFEGLAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID No.19：Ab0064-LCCTL-HC轻链
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQGINNYLSWYQQKPGKAPKSLIYRANRLVSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQYDEFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGALPETGG
SEQ ID No.20：Ab0064-LCCTL-HC重链
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYRFTDYVINWVRQAPGQGLEWMGQIYPGSDTFHYNQKFQGRATLTADKSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARFFEGLAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID No.21：Ab0098轻链
DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSYPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID No.22：Ab0098重链QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTSYWINWVKQRPGQGLEWIGNIYPSDSYTNYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMQLSSPTSEDSAVYYCTRSWRGNSFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID No.23：Ab0098-LCCTL-HC轻链DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSYPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGALPETGG
SEQ ID No.24：Ab0098-LCCTL-HC重链
QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTSYWINWVKQRPGQGLEWIGNIYPSDSYTNYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMQLSSPTSEDSAVYYCTRSWRGNSFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
序列表
<110> 启德医药科技（苏州）有限公司
<120> 抗体-免疫激动剂缀合物及其应用
<130> P2023TC8447CS
<160> 24
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 222
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Ab0001-LCCTL-HC Light chain
<400> 1
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Ala Leu Pro Glu Thr Gly Gly
210 215 220
<210> 2
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Ab0001-LCCTL-HC Heavy chain
<400> 2
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
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Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
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Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
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Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
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Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
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Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
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195 200 205
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Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
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355 360 365
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225
<210> 24
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Ab0098- LCCTL-HC Heavy chain
<400> 24
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
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Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445

Claims (36)

1.一种具有式(I)的化合物：
其中n是3至10的整数；
Lm2是或其混合物；
x选自氢、OH、NH2、包含1-10个氨基酸的氨基酸片段、包含1-10个核苷酸的核苷酸片段；
Lk是L1-L2-L3的组合；
L1和L3各自独立地选自：
-CH2-、-NH-、-C(O)-、-NHC(O)-、-C(O)NH-；以及C1-4亚烷基与以下基团中的一者的组合：-CH2-、-NH-、-C(O)-、-NHC(O)-、-C(O)NH-；
L2不存在或是C7-34亚烷基，并且其中所述亚烷基中的一个或多个(-CH2-)结构任选被-O-置换；
Y和W各自独立地是不存在、PABC或选自包含1-10个，优选地1-6个，更优选地1-4个氨基酸的间隔子；
B2选自以下基团或其组合：-(CH2)kC(O)-、-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-、-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-、-(CH2)k1C(O)-NH-(C2H4-O)j-(CH2)k2C(O)-Lys-、-(CH2)kC(O)-NH-(C2H4-O)j-、-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-NH-(C2H4-O)j-、-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d；
a和b各自独立地是0或1；
每个k、k1和k2独立地是0至10的整数，优选地是0、1或2；尤其是1或2；
d是1至10的整数，尤其是1或2；
j是1至10的整数，尤其是1、3或4；
R1和R2各自独立地选自：氢、-OH、-NH2、-C1-6烷基、-O-C1-6烷基、-NH-C1-6烷基、-C1-6烷基-NH2、-N(C1-6烷基)-C1-6烷基、-C1-6烷基-O-C1-6烷基、-C1-6烷基-NH-C1-6烷基、-C(O)-C1-6烷基、-NHC(O)-C1-6烷基、-C(O)-NH2、-C(O)NH-C1-6烷基、-C(O)N(C1-6烷基)-C1-6烷基、-S(＝O)2-C1-6烷基、-NHS(＝O)2-C1-6烷基、-S(＝O)2O-C1-6烷基、-S(＝O)2NH-C1-6烷基和-S(＝O)2N(C1-6烷基)-C1-6烷基；
PL是有效载荷，所述有效载荷是免疫激动剂。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，Lk是L1-L2-L3，L1是-NH-，L3是-C(O)-，L2是-(C2H4-O)i-C2H4-。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中，i是2至10的整数，尤其是4。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中，B2是-(CH2)kC(O)-。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中，B2是-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中，B2是-(CH2)kC(O)-Val-Cit-PABC-(NH-CR1R2-C(O))d-。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中，B2是-(CH2)kC(O)-NH-(C2H4-O)j-。
8.根据权利要求1所述的化合物，其中，B2是-(CH2)k1C(O)-NH-(C2H4-O)j-(CH2)k2C(O)-Lys-。
9.根据权利要求1所述的化合物，其中，B2是-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-NH-(C2H4-O)j-。
10.根据权利要求1所述的化合物，其中，B2是-(CH2)kC(O)-(NH-CR1R2-C(O))d-。
11.根据权利要求4至10中任一项所述的化合物，其中，每个k、k1和k2独立地是1或2。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中，Y和W独立地选自亮氨酸(Leu)、谷氨酰胺(Gln)、PABC、Phe-Lys-PABC、Val-Cit-PABC和Val-Lys-PABC。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物，其中，a和b是0。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物，R1和R2各自独立地是氢或C1-6烷基；优选地，R1和R2各自独立地都是氢或都是C1-6烷基；更优选地，R1和R2都是甲基。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中，x是NH2。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中，所述免疫激动剂选自咪唑并喹啉。
17.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中，所述免疫激动剂具有式i的结构：
其中
每个R9独立地选自氢、卤素、C1-7烷基-OC(O)-C1-7烷基、C1-7烷基-OC(O)-C2-7烯基和5-7元杂环；
R10和R11各自独立地选自氢和C1-7烷基；
R12选自C1-7烷基和C1-7烷氧基-C1-7烷基；
R13选自C1-7烷基，所述C1-7烷基任选地被选自-OH和-NH2的取代基取代；
u是1、2、3或4。
18.根据权利要求17所述的化合物，其中，所述免疫激动剂选自化合物i-1至i-5：
19.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中，所述免疫激动剂具有式ii的结构：
其中
L4选自-CH2-、-NH-、-O-和-C(O)-；
R14选自C1-7烷基、C1-7烷氧基和C1-7烷基-OC(O)-C1-7烷基；
R15和R16各自独立地选自氢和C1-7烷基；
R17选自-NH2、-OH、C1-7烷基、C1-7烷氧基和-NH-C1-7烷基；
R18选自-CH2-芳基和-CH2-杂芳基，其中所述芳基和所述杂芳基各自独立地任选被选自以下的取代基取代：-C(O)OH和
20.根据权利要求19所述的化合物，其中，所述免疫激动剂选自化合物ii-1至ii-2：
21.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中，所述免疫激动剂具有式iii的结构：
其中
R19选自-OH、-NH2、C1-7烷基、C1-7烷氧基和-NH-C1-7烷基；
R20选自-CH2-芳基，其中所述芳基任选地被选自以下的两个取代基取代：-OH、C1-7烷氧基和-C1-7烷基-哌啶基。
22.根据权利要求21所述的化合物，其中，所述免疫激动剂是化合物iii-1：
23.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中，所述免疫激动剂具有式iv的结构：
其中
L5选自-CH2-、-NH-、-C(O)-、-NHC(O)-和-C(O)NH-；
R21选自，其中B是杂芳基环；
R22选自氢和C1-7烷基；
R23和R24各自独立地选自氢和C1-7烷基；
L6选自-CH2-和-C(O)-；
R25选自-N(C1-7烷基)(C1-7烷基)；
R26、R27和R28各自独立地选自氢和C1-7烷基；
v是1、2或3。
24.根据权利要求23所述的化合物，其中，所述免疫激动剂是化合物iv-1：
25.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选自以下结构：
26.一种抗体-药物缀合物，具有式(II)，
其中，n、Y、Lk、W、Lm2、B2、x、PL、a和b如权利要求1至25中任一项中所定义；
z是1至20的整数；
A是靶向分子，所述靶向分子是抗体或抗原结合片段。
27.根据权利要求26所述的抗体-药物缀合物，所述缀合物选自以下结构：
28.根据权利要求27所述的抗体-药物缀合物，所述缀合物选自以下结构：
29.根据权利要求26至28中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中，所述靶向分子识别的一个或多个靶标选自：CD19、CD22、CD25、CD30/TNFRSF8、CD33、CD37、CD44v6、CD56、CD70、CD71、CD74、CD79b、CD117/KIT、CD123、CD138、CD142、CD174、CD227/MUC1、CD352、CLDN18.2、DLL3、ErbB2/HER2、CN33、GPNMB、ENPP3、Nectin-4、EGFRvIII、SLC44A4/AGS-5、间皮素、CEACAM5、PSMA、TIM1、LY6E、LIV1、Nectin、SLITRK6、HGFR/cMet、SLAMF7/CS1、EGFR、BCMA、AXL、NaPi2B、GCC、STEAP1、MUC16、间皮素、ETBR、EphA2、5T4、FOLR1、LAMP1、钙粘蛋白6、FGFR2、FGFR3、CA6、CanAg、整合素αV、TDGF1、Ephrin A4、Trop2、PTK7、NOTCH3、C4.4A、FLT3、ROR1、ROR2和ROR1/2。
30.根据权利要求26至28中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中，所述抗体是抗人HER2抗体。
31.根据权利要求30所述的抗体-药物缀合物，其中，抗人HER2抗体包含具有SEQ IDNO:1的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链；或具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链；或具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链；或具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链；或具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链；或具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链；或具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链和具有SEQID NO:14的氨基酸序列的重链；或具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链和具有SEQ IDNO:16的氨基酸序列的重链。
32.根据权利要求26至28中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中，所述抗体是抗人TROP2抗体。
33.根据权利要求32所述的抗体-药物缀合物，其中，所述抗人TROP2抗体包含具有SEQID NO:17的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链；或具有SEQ IDNO:19的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的重链。
34.根据权利要求26至28中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中，所述抗体是抗人CLDN18.2抗体。
35.根据权利要求34所述的抗体-药物缀合物，其中，所述抗人CLDN18.2抗体包含具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链；或具有SEQID NO:23的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链。
36.根据权利要求26至35中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中，所述缀合物具有1-20、1-10、1-8、1-6、1-4、1-3.5、1-3、1-2.5、1-2、1.5-2、1.6-2或1.7-2的整数或非整数药物与抗体比率(DAR)。
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6666264B2 (ja) 2014-04-29 2020-03-13 ジーンクアンタム ヘルスケア （スーチョウ） シーオー．， エルティーディー．Ｇｅｎｅｑｕａｎｔｕｍ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ （Ｓｕｚｈｏｕ）Ｃｏ．， Ｌｔｄ． 新規安定型抗体薬物複合体の作製およびその応用
CN118475372A (zh) * 2021-10-29 2024-08-09 博尔特生物治疗药物有限公司 具有半胱氨酸突变抗体的tlr激动剂免疫缀合物及其用途
US11814394B2 (en) 2021-11-16 2023-11-14 Genequantum Healthcare (Suzhou) Co., Ltd. Exatecan derivatives, linker-payloads, and conjugates and thereof
WO2024051747A1 (en) * 2022-09-06 2024-03-14 Genequantum Healthcare (Suzhou) Co., Ltd. A pharmaceutical composition of anti-her2 antibody-immune agonist conjugate and applications thereof
WO2024078612A1 (en) * 2022-10-14 2024-04-18 Genequantum Healthcare (Suzhou) Co., Ltd. Linker-payload compound, conjugates and applications thereof
WO2024137619A1 (en) 2022-12-20 2024-06-27 Bolt Biotherapeutics, Inc. Anti-claudin, bis-benzimid azole sting agonist immunoconjugates, and uses thereof
WO2024173384A1 (en) 2023-02-14 2024-08-22 Bolt Biotherapeutics, Inc. Aza-benzazepine immunoconjugates, and uses thereof

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4427582A (en) 1982-06-08 1984-01-24 Smithkline Beckman Corporation Antimicrobial disulfide prodrugs
US5229490A (en) 1987-05-06 1993-07-20 The Rockefeller University Multiple antigen peptide system
DE10305463A1 (de) 2003-02-04 2004-08-12 Schering Ag Enantiomerenreines (4S,8S)- und (4R,8R)-4-p-Nitrobenzyl-8-methyl-3,6,9-triza-3N,6N,9N-tricarboxymethyl-1,11-undecandisäure und deren Abkömmlinge, Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung zur Herstellung pharmazeutischer Mittel
EP2478912B1 (en) 2003-11-06 2016-08-31 Seattle Genetics, Inc. Auristatin conjugates with anti-HER2 or anti-CD22 antibodies and their use in therapy
AU2005249490B2 (en) 2004-06-01 2010-07-29 Genentech, Inc. Antibody drug conjugates and methods
EP1942949A1 (en) 2005-09-09 2008-07-16 Therapharm GmbH Method for the synthesis of pentapendant enantiomer-pure chelators and process for therapeutically active bio-conjugates preparation by a covalent binding of thereof
WO2009043900A1 (en) 2007-10-03 2009-04-09 Covalys Biosciences Ag Drug transfer based on coenzyme a and acyl carrier protein
CN102083461B (zh) 2008-04-30 2014-09-17 伊缪诺金公司 有效的偶联物和亲水性连接体
WO2012142659A1 (en) 2011-04-19 2012-10-26 Baker Idi Heart And Diabetes Institute Holdings Limited Site-selective modification of proteins
WO2013003555A1 (en) 2011-06-28 2013-01-03 Whitehead Institute For Biomedical Research Using sortases to install click chemistry handles for protein ligation
US9504756B2 (en) 2012-05-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
WO2014055877A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Immunogen, Inc. Use of a pvdf membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
CN111420045B (zh) * 2012-10-10 2023-03-31 深圳大学 免疫受体调节剂偶联体及其制备方法和应用、制备其的偶联前体以及合成偶联前体的化合物
US20180104349A9 (en) 2013-04-28 2018-04-19 Gang Qin Novel linker, preparation method, and application thereof
JP6666264B2 (ja) * 2014-04-29 2020-03-13 ジーンクアンタム ヘルスケア （スーチョウ） シーオー．， エルティーディー．Ｇｅｎｅｑｕａｎｔｕｍ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ （Ｓｕｚｈｏｕ）Ｃｏ．， Ｌｔｄ． 新規安定型抗体薬物複合体の作製およびその応用
US10239862B2 (en) * 2017-03-15 2019-03-26 Silverback Therapeutics, Inc. Benzazepine compounds, conjugates, and uses thereof
CN112771161A (zh) * 2018-07-09 2021-05-07 启德医药科技（苏州）有限公司 滋养层细胞表面抗原2(trop2)特异性抗体
CA3134411A1 (en) * 2019-04-01 2020-10-08 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Anti-claudin 18.2 antibody and application thereof
CN114901694A (zh) * 2019-12-31 2022-08-12 启德医药科技（苏州）有限公司 抗trop2抗体、抗体-药物缀合物及其应用
WO2021136475A1 (en) * 2019-12-31 2021-07-08 Genequantum Healthcare (Suzhou) Co., Ltd. A drug conjugate and applications thereof

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