CN116574648A - 一种植物乳杆菌及其在缓解便秘中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种植物乳杆菌(Lactiplantibacillusplantarum)HM‑22，保藏编号：CCTCCNO：M2023282；其分离方法包括以下步骤：将采集的新疆传统发酵酸牛乳样品混匀，进行梯度稀释，在琼脂培养基上进行涂布，37℃下厌氧培养48h，取单菌落后在琼脂培养基上划线纯化，获得纯培养物，即得。本发明能够便秘小鼠粪便含水量和小肠推进率显著提升，首粒排黑时间与便秘小鼠相比缩短了约30％；兴奋性胃肠调节肽和5‑HT浓度显著上升，短链脂肪酸中的丙酸、丁酸、乙酸与总酸浓度均显著高于便秘小鼠，具有较强缓解便秘症状的效果。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术技术领域，具体涉及一种具有益生功能的植物乳杆菌及在缓解便秘症状中的应用。
背景技术
便秘是最常见的胃肠道疾病之一，发生在全世界各个年龄段的人身上。便秘的特点是排便障碍，主要症状是粪便干燥、排便困难或不规则，并伴有腹痛、腹胀等症状。形成原因主要有饮食结构的改变；心理或精神压力大；其他疾病引起；药物刺激：滥用泻药造成。目前便秘的治疗包括一般饮食调节治疗、药物治疗、生物反馈治疗和外科治疗等。现阶段，药物治疗仍然是最主要的治疗手段，但是长期使用、滥用刺激性泻药也会对身体产生副作用。
益生菌是一种在肠道中自然生长的有益细菌，是促进人类健康的活微生物。有研究资料证实，便秘患者存在肠道微生态失衡。益生菌可以调节肠道微生态平衡，增加肠道内有益菌的丰度，提高肠道微生物多样性。肠道内有益菌的增加会促进短链脂肪酸的代谢，从而升高兴奋性胃肠调节肽浓度来改善肠道运动，增加粪便含水量，进而改善便秘的症状。目前应用于缓解便秘症状中最常见的菌属为双歧杆菌和肠球菌。
发明内容
本发明目的是提供一种新的具有益生功能的植物乳杆菌及在缓解便秘症状中的应用，以解决现有技术中从调节肠道菌群结构方面缓解便秘症状菌株不足的问题。
为实现上述目的，本发明提供一种植物乳杆菌(Lactiplantibacillusplantarum)HM-22，保藏编号：CCTCCNO：M2023282。
本发明提供一种植物乳杆菌HM-22的分离方法，包括以下步骤：
将采集的新疆传统发酵酸牛乳样品混匀，进行梯度稀释，在琼脂培养基上进行涂布，37℃下厌氧培养48h，取单菌落后在琼脂培养基上划线纯化，获得纯培养物，即得。
优选的，所述琼脂培养基为MRS琼脂培养基或者M17琼脂平板培养基中的一种。
优选的，所述MRS琼脂培养基制备方法包括将葡萄糖、蛋白胨、酵母浸粉、牛肉膏、磷酸氢二钾、柠檬酸氢二胺、乙酸钠、MgSO4·7H2O、MnSO4·5H2O与Tween-80混合均匀溶于去离子水中，灭菌得到MRS培养基，再添加琼脂粉，灭菌后得到MRS琼脂培养基。
优选的，按照20-25g/L葡萄糖、10-15g/L蛋白胨、5-10g/L酵母浸粉、10-15g/L牛肉膏、2-7g/L磷酸氢二钾、1.5-2g/L柠檬酸氢二胺、5-8g/L乙酸钠、0.58-1g/L的MgSO4·7H2O、0.25-0.5g/L的MnSO4·5H2O与1mL/L的Tween-80的配比配置MRS琼脂培养基。
优选的，所述灭菌的方法包括在温度120-121℃下灭菌15-20min。
优选的，所述琼脂粉用量为15-20g/L。
优选的，所述梯度稀释方法包括用0.85％的无菌生理盐水进行十倍梯度稀释为10-4，10-5，10-6。
本发明提供一种植物乳杆菌HM-22的应用，用于缓解便秘症状。
优选的，在以下任一项中的应用：
A、用于调节粪便含水量及胃肠蠕动能力；
B、用于缓解结肠组织病变；
C、用于增加兴奋性胃肠调节肽和5-HT含量；
D、用于促进短链脂肪酸代谢；
E、用于增加肠道菌群多样性。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
本发明植物乳杆菌HM-22作用下，由洛哌丁胺(Loperamide)诱导的BALB/c便秘小鼠粪便含水量和小肠推进率显著提升，首粒排黑时间与便秘小鼠相比缩短了约30％；兴奋性胃肠调节肽和5-HT浓度显著上升，短链脂肪酸中的丙酸、丁酸、乙酸与总酸浓度均显著高于便秘小鼠，应用于缓解便秘症状益生菌制品中，具有较强缓解便秘症状的效果。
由本发明乳杆菌HM-22制备的益生菌制剂缓解便秘相比药物治疗更安全，适合人群范围更广。
保藏说明
本发明涉及的生物材料样品的保藏信息：参据的微生物(株)为HM-22，分类命名为植物乳杆菌(Lactiplantibacillusplantarum)，于2023年3月9日由中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)保藏，保藏编号：CCTCC NO：M 2023282。CCTCC地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号。
附图说明
图1是本发明植物乳杆菌HM-22菌落形态图；
图2是本发明植物乳杆菌HM-22菌体放大1000倍后的显微镜图；
图3是本发明植物乳杆菌HM-22系统发育树状图；
图4是本发明植物乳杆菌HM-22溶血活性效果对比图；
图5是本发明植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠粪便含水量影响统计图；
图6是本发明植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠胃肠首粒排黑时间统计图；
图7是本发明植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠小肠推进率统计图；
图8是本发明植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠肠组织病理学影响的统计图；
图9是本发明植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠胃肠中P物质浓度影响的统计图；
图10是本发明植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠胃肠中胃泌素浓度影响的统计图；
图11是本发明植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠胃肠中胃动素浓度影响的统计图；
图12是本发明植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠胃肠中生长抑素浓度影响的统计图；
图13是本发明植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠胃肠中血管活性肠肽浓度影响的统计图；
图14是本发明植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠胃肠中内皮素-1浓度影响的统计图；
图15是本发明植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠5-羟色胺浓度影响的统计图；
图16是本发明植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠粪便中SCFAs含量影响的统计图；
图17是本发明植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠肠道微生物α多样性影响的统计图；
图18是本发明植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠肠道微生物β多样性影响的统计图；
图19是本发明植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠肠道菌群影响的统计图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步说明，但不以任何方式限制本发明。
下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法、检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法、检测方法等。
实施例1:菌株培养
本发明的植物乳杆菌HM-22是从新疆传统发酵酸牛乳中分离获得的，具体步骤如下：
I.MRS培养基制备：按照20g/L葡萄糖、10g/L蛋白胨、5g/L酵母浸粉、10g/L牛肉膏、2g/L磷酸氢二钾、2g/L柠檬酸氢二胺、5g/L乙酸钠、0.58g/L的MgSO4·7H2O、0.25g/L的MnSO4·5H2O与1mL/L的Tween-80称取原料，混合均匀溶于去离子水中，在120-121℃下灭菌15-20min，得到所述的MRS培养基；培养基中添加15-20g/L琼脂粉，在温度120-121℃下灭菌15-20min，得到MRS琼脂培养基。
II.菌种分离：如附图1所示，将采集的新疆传统发酵酸牛乳样品混匀称取0.5mL，用0.85％的无菌生理盐水进行十倍梯度稀释(10-4，10-5，10-6)，接下来在在MRS琼脂培养基或者M17琼脂平板培养基上进行涂布，37℃下厌氧培养48h，挑取单菌落后继续在MRS琼脂培养基上划线纯化，得到纯培养物。
III.菌种形态鉴定：如附图2所示，将革兰氏染色阳性和过氧化氢酶实验阴性的菌暂定为乳酸菌，本发明菌株菌落形态呈乳白色圆形凸起菌落，边缘整齐、不透明，革兰氏染色后细胞呈长杆状，单个或链状。
Ⅳ.分子生物学鉴定：将菌株接种在MRS液体培养基中，在37℃下培养24h后进行16SrRNA测序鉴定，鉴定结果为植物乳杆菌(Lactiplantibacillusplantarum)，并命名为植物乳杆菌HM-22，其系统发育树状图见图3所示。
本发明涉及的生物材料样品的保藏信息：参据的微生物(株)为HM-22，分类命名为植物乳杆菌(Lactiplantibacillusplantarum)，于2023年3月9日由中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)保藏，保藏编号：CCTCC NO：M 2023282。CCTCC地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号。
实施例2：菌株益生性
I.胃肠液耐受实验:将活化好的植物乳杆菌HM-22菌液离心(4℃、3500r/min、10min)，用0.1mol/L的PBS洗涤3次并重悬作为初始菌液。以1％(v/v)的接种量接种于含胃蛋白酶的模拟胃液中，37℃水浴3h，结束后进行平板倾注。接下来取经模拟胃液处理的菌液以1％(v/v)的接种量接种于含胰蛋白酶的模拟肠液中，37℃水浴8h，水浴结束后进行平板倾注。并根据公式计算菌株存活率。结果如表1，植物乳杆菌HM-22表现出较强的胃肠液耐受性，在胃肠液中的存活率分别达到88.28％和89.05％。
式中：N1是指用模拟人工胃液或肠液处理过后的存活菌数(CFU/mL)；
N0是指处理前菌株活菌数(CFU/mL)；
II.黏附实验：将活化好的植物乳杆菌HM-22菌液离心(4℃、3500r/min、5min)，菌体沉淀用0.1mol/L的PBS缓冲液洗涤3次，并重悬于RPMI-1640培养液(不含灭活胎牛血清和双抗)，将菌体浓度调整为5×108CFU/mL以待备用。用RPMI-1640培养液(含1％双抗、10％胎牛血清)培养人结肠癌腺细胞系HT-29细胞，细胞生长至培养瓶面积约90％时以2×105个/mL接种到12孔板，置于37℃恒温恒湿培养箱(90％湿度、5％的CO2)中培养用于黏附实验。弃去培养后的12孔板废液，用上述PBS缓冲液洗涤后加入菌悬液(1mL)，培养2h后用PBS缓冲液洗涤5次，加入0.5％的Triton-X100，冰浴10min后进行平板倾注。黏附指数按照下式计算：
式中：黏附菌落数是指平板倾注法测定菌株黏附于HT-29细胞的菌落数(CFU/mL)；
细胞数是指平均每孔细胞个数(cell/mL)；
益生菌黏附于肠道表面对于人类肠道是非常重要的，它可以防止肠道蠕动对益生菌的清除。结果如表1所示，黏附指数达到19.11cfu/cell，表明植物乳杆菌HM-22具有较强的黏附能力。
表1、本发明植物乳杆菌HM-22在模拟胃肠液中的存活率和对HT-29细胞的黏附指数实施例3：菌株安全性测试
I.评价植物乳杆菌HM-22的溶血性：将活化好的植物乳杆菌HM-22和单核细胞增生李斯特氏菌(L.Monocytogenes)划线接种至加入了7％(v/v)山羊血的Columbia固体培养基上，于37℃培养48h。若无透明圈出现，则表示该菌株具有γ-溶血性是安全的。若长出菌落周围有透明圈出现则具有β-溶血性，通常具有致病性。如附图4所示，将L.Monocytogenes作为本实验的阳性对照，L.Monocytogenes的菌落周围出现溶血环，而本发明植物乳杆菌HM-22的菌落周围没有溶血环，说明植物乳杆菌HM-22是较为安全的菌株。
II.评价植物乳杆菌HM-22抗生素敏感性：依据美国临床实验室标准化委员会(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)发布的标准方法，选择如下抗生素种类(卡那霉素、红霉素、氨苄西林、氯霉素、四环素、克林霉素、庆大霉素、万古霉素)进行植物乳杆菌HM-22对抗生素的敏感性试验。将植物乳杆菌HM-22对抗生素的最小抑制浓度(MIC)与临界值相比，MIC值小于或等于临界值的时候，说明乳酸菌对该抗生素敏感。结果如表2所示，植物乳杆菌HM-22对七种抗生素均具有敏感性，具有安全性。
S:对抗生素敏感
表2、本发明植物乳杆菌HM-22对抗生素的敏感性
III.评价植物乳杆菌HM-22产生物胺能力：将植物乳杆菌HM-22在MRS培养基(添加七种前体氨基酸0.1％和0.005％吡哆醛)中37℃培养18h。将得到的培养物离心(8000r/min,4℃),取上清液(750μL)加等量丹磺酰氯衍生试剂(750μg丹磺酰氯、100mL丙酮)加150μL碳酸钠饱和溶液，水浴锅45℃下30min后用高效液相定量测定产生生物胺的含量。
结果如表3所示，植物乳杆菌HM-22产生微量生物胺，具有安全性。
ND：即未检出生物胺
表3、本发明植物乳杆菌HM-22产生物胺的能力表
实施例4：对便秘小鼠粪便含水量的影响
I.动物分组：六周龄雄性BALB/c小鼠适应性喂养一周后，随机分为5组，分别为正常组(Nor)、便秘模型组(Lop)、菌对照组(Lop+JCM1132)、菌对照组(Lop+LGG)、HM-22组(Lop+HM-22)每组10只。以嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)JCM1132和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GG为菌对照。除Nor组外，所有组小鼠灌胃洛哌丁胺(10mg/kg·BW，0.2mL)，每天一次，持续7d，以建立便秘模型。同时，Nor组的小鼠灌入相同体积的0.9％无菌生理盐水。便秘模型建立成功后，Nor组小鼠给予无菌生理盐水，Lop组、Lop+JCM1132组、Lop+LGG组、Lop+HM-22组小鼠灌胃洛哌丁胺(10mg/kg·BW，0.2mL)，1h后分别灌胃生理盐水和各菌悬液(109CFU/mL)，连续14d，具体见表4所示。
表4、动物分组及每日灌胃内容
II.对便秘小鼠粪便含水量的影响
在实验第7d和第21d收集粪便样本，称取湿重后在105℃下干燥5h至恒重，恒重后称取重量记为干重，按以下公式计算粪便含水量。结果如图5所示，在第7d时，Lop组、Lop+JCM1132组、Lop+LGG组、Lop+HM-22组的粪便含水量显著低于Nor组，说明此时便秘模型被成功建立。在第21d时，便秘组小鼠相比，经本发明植物乳杆菌HM-22干预的便秘小鼠粪便含水量显著上升至63.96±4.47％并高于两组菌对照组。说明本发明植物乳杆菌HM-22可以有效缓解由便秘带来的粪便含水率下降。
实施例5：植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠胃肠蠕动能力的影响
在第20d，给除Nor组之外的所有组小鼠灌胃洛哌丁胺，1h后，Nor组和Lop组灌胃活性炭溶液，其余组灌胃含各自菌悬液(109CFU/mL)的活性炭溶液(10％的活性炭和0.5％的羧甲基纤维素悬浮液，0.2mL)。记录第一次黑色粪便的排出时间(第一次黑便排便时间，min)。
在第21d给除Nor组之外的所有组小鼠灌胃洛哌丁胺，1h后，Nor组和Lop组灌胃活性炭溶液，其余组灌胃含各自菌悬液(109CFU/mL)的活性炭溶液。在30min后处死小鼠，取出小肠(上端自幽门，下端至盲肠)计算活性炭通过距离。
首粒排黑时间和小肠推进率是评价胃肠蠕动能力的重要指标。结果如图6、图7所示，Lop组的首粒排黑时间和小肠推进率分别为147.67±19.64min和42.35±3.74％。经植物乳杆菌HM-22干预后，首粒排黑时间显著缩短，小肠推进率显著增加，分别为97.5±4.98min和79.65±0.49％。并且Lop+HM-22组小鼠的胃肠蠕动能力优于Lop+JCM 1132组(首粒排黑时间：101±3.46min，小肠推进率：76.81±1.32％)和Lop+LGG组(首粒排黑时间：106.33±1.67min，小肠推进率：76.29±5.68％)的小鼠，这进一步证明了植物乳杆菌HM-2改善便秘小鼠胃肠动力的优势。
实施例6：植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠结肠组织病理学的影响
取出各组小鼠的结肠组织置于4％多聚甲醛中进行固定，常温保存送至上海茁彩生物科技有限公司进行H&E染色。结果如图8所示，与Lop组小鼠相比，植物乳杆菌HM-22有效恢复了便秘小鼠结肠组织完整性，肠上皮褶皱相对完整和规则，隐窝结构得到恢复，杯状细胞增多，其结肠特征与Nor组接近。说明植物乳杆菌HM-22可以有效改善便秘带来的结肠组织结构损伤。
实施例7：植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠胃肠调节肽及5-HT的影响
小鼠处死前进行眼眶取血，使用ELISA试剂盒测定血清中胃肠调节肽和5-HT的浓度，每次测量都重复三次。胃肠调节肽在调节胃肠道运动中起着关键作用。兴奋性胃肠调节肽(P物质、胃动素和胃泌素)和5-羟色胺通过调节收缩肠道平滑肌和水电解质运输来缓解便秘症状。抑制性胃肠调节肽(生长抑素、内皮素-1和血管活性肠肽)通过抑制胃动素和胃泌素的释放延长了肠道运输时间。结果如图9-15所示，与便秘小鼠相比，植物乳杆菌HM-22显著增加了兴奋性胃肠调节肽(P物质、胃动素和胃泌素)和5-HT浓度，分别为70.32±6.44ng/mL、936.71±28.07ng/L、721.23±49.34ng/L、157.44±10.22ng/mL。并显著降低抑制性胃肠调节肽(生长抑素、血管活性肠肽和内皮素-1)浓度，分别为34.65±1.05ng/L、102.49±8.82ng/L、412.44±18.45ng/L。其中Lop+HM-22组的生长抑素浓度、内皮素-1浓度显著低于Lop+JCM1132组(81.11±8.43ng/L)和Lop+LGG组(116.19±3.84ng/L)；5-羟色胺浓度显著高于Lop+JCM1132组(131.74±12.14ng/mL)和Lop+LGG组(129.40±9.70ng/mL)。说明本发明植物乳杆菌HM-22可以通过改善胃肠调节肽和5-HT含量来缓解便秘。
实施例8：植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠粪便中SCFAs含量影响
将第21天d取得的小鼠粪便放入2mL无菌冻存管中，经液氮速冻后保存在-80℃条件下。干冰条件下送至上海美吉生物医药科技有限公司进行SCFAs含量测定。由于LGG缓解便秘效果与L.acidophilus JCM1132相比较差，故而不对其进行短链脂肪酸和肠道菌群分析。结果如图16所示，其中图16(a)为乙酸浓度对比图、图16(b)为丁酸浓度对比图、图16(c)为丙酸浓度对比图、图16(d)为总短链脂肪酸浓度对比图，与Lop组相比，Lop+HM-22组显著增加了乙酸(3405.51±301.07μg/g)、丁酸(1160.13±50.80μg/g)、丙酸(760.84±133.56μg/g)及总SCFAs(4785.66±561.83)浓度。并且Lop+HM-22组所有的有机酸含量均显著高于Lop+JCM1132组，说明本发明植物乳杆菌HM-22可以通过提高SCFAs浓度来缓解便秘。
实施例9：植物乳杆菌HM-22对便秘小鼠肠道菌群含量影响
将第21d取得的小鼠粪便放入2mL无菌冻存管中，经液氮速冻后保存在-80℃条件下。干冰条件下送至上海美吉生物医药科技有限公司利用Miseq PE300平台进行肠道菌群测序。如附图17显示Lop+HM-22组chao1指数显著高于Nor组、Lop组和Lop+JCM1132组，说明肠道菌群多样性增加。附图18所示的非度量维度评分显示了经过植物乳杆菌HM-22干预后与Lop组有一定程度的分离，说明对肠道菌群结构有一定的调节。由附图19所示，在科水平上植物乳杆菌HM-22处理下调了莫拉菌科(Moraxellaceae)和气球菌科(Aerococcaceae)的丰度，上调了乳酸菌科(Lactobacillaceae)丰度，肠道菌群得到平衡，乳酸杆菌丰度得到升高。说明植物乳杆菌HM-22可以通过调节肠道菌群来缓解便秘症状。
综上所述，本发明植物乳杆菌HM-22可以有效调节粪便含水量及胃肠蠕动能力，缓解结肠组织病变，增加兴奋性胃肠调节肽和5-HT含量，促进短链脂肪酸代谢，增加肠道菌群多样性，具有缓解便秘症状的作用，应用于缓解便秘中，可有效缓解便秘患者症状，得到更加安全的治疗。
对于任何熟悉本领域的技术人员而言，在不脱离本发明技术方案范围情况下，都可利用上述揭示的技术内容对本发明技术方案作出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化及修饰，均应仍属于本发明技术方案保护的范围内。
Claims (10)
1.一种植物乳杆菌(Lactiplantibacillusplantarum)HM-22，其特征在于，保藏编号：CCTCCNO：M2023282。
2.一种植物乳杆菌HM-22的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
将采集的新疆发酵酸牛乳样品混匀，进行梯度稀释，在琼脂培养基上进行涂布，37℃下厌氧培养48h，取单菌落后在琼脂培养基上划线纯化，获得纯培养物，即得。
3.根据权利要求2所述植物乳杆菌HM-22的分离方法，其特征在于，所述琼脂培养基为MRS琼脂培养基或者M17琼脂平板培养基中的一种。
4.根据权利要求3所述植物乳杆菌HM-22的分离方法，其特征在于，所述MRS琼脂培养基制备方法包括将葡萄糖、蛋白胨、酵母浸粉、牛肉膏、磷酸氢二钾、柠檬酸氢二胺、乙酸钠、MgSO4·7H2O、MnSO4·5H2O与Tween-80混合均匀溶于去离子水中，灭菌得到MRS培养基，再添加琼脂粉，灭菌后得到MRS琼脂培养基。
5.根据权利要求4所述植物乳杆菌HM-22的分离方法，其特征在于，按照20-25g/L葡萄糖、10-15g/L蛋白胨、5-10g/L酵母浸粉、10-15g/L牛肉膏、2-7g/L磷酸氢二钾、1.5-2g/L柠檬酸氢二胺、5-8g/L乙酸钠、0.58-1g/L的MgSO4·7H2O、0.25-0.5g/L的MnSO4·5H2O与1mL/L的Tween-80的配比配置MRS琼脂培养基。
6.根据权利要求4所述植物乳杆菌HM-22的分离方法，其特征在于，所述灭菌的方法包括在温度120-121℃下灭菌15-20min。
7.根据权利要求4所述植物乳杆菌HM-22的分离方法，其特征在于，所述琼脂粉用量为15-20g/L。
8.根据权利要求2所述植物乳杆菌HM-22的分离方法，其特征在于，所述梯度稀释方法包括用0.85％的无菌生理盐水进行十倍梯度稀释为10-4，10-5，10-6。
9.一种植物乳杆菌HM-22的应用，其特征在于，用于缓解便秘症状。
10.根据权利要求9所述植物乳杆菌HM-22的应用，其特征在于，在以下任一项中的应用：
A、用于调节粪便含水量及胃肠蠕动能力；
B、用于缓解结肠组织病变；
C、用于增加兴奋性胃肠调节肽和5-HT含量；
D、用于促进短链脂肪酸代谢；
E、用于增加肠道菌群多样性。
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