CN116549487A - 一种诱导g1/s-特异性周期蛋白-d1类泛素化的方法、用途及制剂 - Google Patents
一种诱导g1/s-特异性周期蛋白-d1类泛素化的方法、用途及制剂 Download PDFInfo
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Abstract
本发明适用于抗肿瘤药物领域，提供了一种诱导G1/S‑特异性周期蛋白‑D1类泛素化的方法，所述G1/S‑特异性周期蛋白‑D1存在的环境中包含SUMO蛋白，诱导所述SUMO蛋白修饰所述G1/S‑特异性周期蛋白‑D1，促进所述G1/S‑特异性周期蛋白‑D1降解以及肿瘤细胞的凋亡。砷剂及其衍生物和SUMO激动剂N106诱导G1/S‑特异性周期蛋白‑D1类泛素化，提高G1/S‑特异性周期蛋白‑D1降解的效率，利于被蛋白酶体降解，降低其积累量，促进肿瘤细胞的凋亡。
Description
本申请是2021年11月01日提交、发明名称为“一种诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的方法、用途及制剂”申请号为202111284748.5的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明属于抗肿瘤药物领域，涉及诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的方法、用途及制剂。
背景技术
在观察肿瘤的不协调生长和增生时，发现了与细胞周期调控有关的蛋白，并认为肿瘤与细胞周期调控失常有着密切的关系。G1/S-特异性周期蛋白-D1是细胞周期调节因子之一，其在各类型肿瘤细胞中均有异常高表达。因此，抑制G1/S-特异性周期蛋白-D1的高表达和异常积累成为治疗癌症的重要方法。抑制套细胞淋巴瘤中G1/S-特异性周期蛋白-D1的高表达同样可以达到治疗套细胞淋巴瘤的效果。现有技术中，G1/S-特异性周期蛋白-D1降解可以部分通过磷酸化诱导的泛素/蛋白酶体系统，但是G1/S-特异性周期蛋白-D1降解的效率不高。
Small ubiquitin-like modifier(SUMO)是近年来发现的与泛素蛋白类似的蛋白质，应用于修饰底物蛋白。现有技术中，已经证实可以被SUMO所修饰的底物蛋白超过了200种，由于SUMO所修饰的底物蛋白的多样性，因而在底物蛋白的修饰领域有着广泛的应用。但是其修饰G1/S-特异性周期蛋白-D1，降低其表达的方法及制剂没有被披露。
鉴于以上现有技术中存在的缺陷，本发明提供一种诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的方法、用途及制剂。
发明内容
本发明实施例的目的在于提供一种诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的方法、用途及制剂，旨在利用SUMO诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化，解决G1/S-特异性周期蛋白-D1降解的效率低的问题。
本发明实施例是这样实现的，一种诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的方法，所述G1/S-特异性周期蛋白-D1存在的环境中包含SUMO蛋白，诱导所述SUMO蛋白修饰所述G1/S-特异性周期蛋白-D1，促进所述G1/S-特异性周期蛋白-D1降解。
进一步地，用砷剂和/或砷剂衍生物诱导所述SUMO蛋白修饰所述G1/S-特异性周期蛋白-D1。
进一步地，所述SUMO蛋白为SUMO-1、SUMO-2和SUMO-3蛋白中的一种或多种。
进一步地，所述G1/S-特异性周期蛋白-D1存在的环境中还存在Ubc9 E2结合酶。
进一步地，所述Ubc9 E2结合酶将所述G1/S-特异性周期蛋白-D1和SUMO蛋白通过异肽键偶联。
进一步地，所述砷剂衍生物包括砷剂衍生物选自亚砷酸氢二钠(Na2HAsO3)及其水合物、砷酸二氢钾(H2AsKO4)、卡巴胂(Carbarsone)和硝苯砷酸(Nitarsone)中的一种或多种。
进一步地，用SUMO激动剂N106诱导所述SUMO蛋白修饰所述G1/S-特异性周期蛋白-D1。
所述G1/S-特异性周期蛋白-D1为套细胞淋巴瘤、白血病、乳腺癌、结直肠癌、膀胱癌、甲状旁腺肿瘤、黑色素瘤、肺癌、前列腺癌或骨肉瘤病变细胞中的细胞周期蛋白。
本发明实施例的另一目的在于提供一种砷剂和/或砷剂衍生物与SUMO激动剂N106的组合在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。
进一步地，所述砷剂衍生物选自亚砷酸氢二钠及其水合物、砷酸二氢钾、卡巴胂和硝苯砷酸中一种或多种。
本发明实施例的另一目的在于提供一种诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的制剂，所述制剂包括砷剂、砷剂衍生物和SUMO激动剂N106中的一种或多种。
砷剂及其衍生物和N106诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化，提高G1/S-特异性周期蛋白-D1降解的效率，利于被蛋白酶体降解，降低其积累量。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对本申请实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1是本发明提供的三氧化二砷(ATO)、砷剂衍生物及N106的化学结构式；
图2是本发明实施例提供的细胞转染谱图；
图3是本发明实施例提供的构建、转染Ψ-K-x-D/E中的赖氨酸突变质粒谱图；
图4是本发明实施例提供的ATO促进类泛素化谱图；
图5是本发明实施例提供的N106和砷剂及其衍生物促进类泛素化谱图；
图6是本发明实施例提供的细胞体外衰变分析谱图；
图7是本发明实施例提供的细胞活力检测谱图；
图8是本发明实施例提供的生物活性测试谱图。
具体实施方式
为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
与泛素化类似，SUMO对底物的修饰是一个多步酶促反应。SUMO前体在特异性蛋白酶(Sentrin/SUMO-specific protease,SENP)作用下切除羧基端(C端)数个氨基酸，从而暴露出双甘氨基酸残基，成为成熟的SUMO。首先，成熟的SUMO的C末端甘氨基酸通过硫脂键与E1激活酶(SUMO-activating enzyme)的半胱氨基酸残基相连。然后SUMO被转移到E2结合酶(SUMO-conjugating enzyme)的半胱氨基酸残基上。目前仅发现一种E2结合酶，即Ubc9。Ubc9可以直接识别底物，从而最终将SUMO通过异肽键偶联到底物蛋白的赖氨酸残基上。在某些情况下，E3连接酶(SUMO E3 ligase)可以增强Ubc9转移SUMO到底物蛋白的效率及特异性。在哺乳动物中，目前已发现四种SUMO基因，分别为SUMO-1、SUMO-2、SUMO-3及SUMO-4。在人类中存在6种去SUMO化酶，即被称为SENP的特异性蛋白酶。SENP1和SENP2可以剪切前三种类型的SUMO，而SENP3、SENP5及SENP6更偏好剪切SUMO-2及SUMO-3。
SUMO激动剂N106
(4-Methoxy-N-[5-(4-methoxyphenyl)-1,3,4-oxadiazol-2-yl-2-benzothiazolami ne，CAS：862974-25-2),主要通过激活SUMO的E1活化酶达到促进类泛素化修饰的作用。
砷剂的主要成分为三氧化二砷(ATO)，在临床上应用于治疗急性早幼粒细胞性白血病的化学疗法。目前报道三氧化二砷治疗急性早幼粒白血病主要作用机制为促进癌蛋白PML类泛素化修饰(SUMO化，SUMOylation)，即三氧化二砷直接与癌蛋白PML端的“锌指”结构中的半胱氨酸结合，诱导蛋白质发生构象变化和多聚化，继而发生SUMO化、泛素化修饰而被蛋白酶体降解。
本发明提供一种诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的方法，提高G1/S-特异性周期蛋白-D1降解的效率，利于被蛋白酶体降解，降低其在细胞内的累积量。
该诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的方法中G1/S-特异性周期蛋白-D1存在的环境中包含SUMO蛋白，诱导SUMO蛋白修饰G1/S-特异性周期蛋白-D1，促进G1/S-特异性周期蛋白-D1降解。
砷剂及砷剂衍生物和SUMO激动剂N106诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化，利于被蛋白酶体降解，提高G1/S-特异性周期蛋白-D1降解的效率。
在一个实施例中，用砷剂和/或砷剂衍生物诱导SUMO蛋白修饰G1/S-特异性周期蛋白-D1。
进一步地，上述SUMO蛋白为SUMO-1、SUMO-2和SUMO-3蛋白中的一种或多种。
进一步地，所述G1/S-特异性周期蛋白-D1存在的环境中还存在Ubc9 E2结合酶。
进一步地，所述Ubc9 E2结合酶将所述G1/S-特异性周期蛋白-D1和SUMO蛋白通过异肽键偶联。
进一步地，砷剂衍生物包括砷剂衍生物选自亚砷酸氢二钠(Na2HAsO3)及其水合物、砷酸二氢钾(H2AsKO4)、卡巴胂(Carbarsone)和硝苯砷酸(Nitarsone)中的一种或多种。请参阅图1，图1本发明提供的三氧化二砷(ATO)、砷剂衍生物及N106的化学结构式。
在另一个实施例中，用SUMO激动剂N106诱导SUMO蛋白修饰G1/S-特异性周期蛋白-D1。
在上述实施例中，G1/S-特异性周期蛋白-D1为套细胞淋巴瘤、白血病、乳腺癌、结直肠癌、膀胱癌、甲状旁腺肿瘤、黑色素瘤、肺癌、前列腺癌或骨肉瘤病变细胞中的细胞周期蛋白。
本发明还提供了一种砷剂和/或砷剂衍生物与SUMO激动剂N106的组合在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。
进一步地，所述砷剂衍生物选自亚砷酸氢二钠及其水合物、砷酸二氢钾、卡巴胂和硝苯砷酸中一种或多种。
在上述实施例中，G1/S-特异性周期蛋白-D1为套细胞淋巴瘤、白血病、乳腺癌、结直肠癌、膀胱癌、甲状旁腺肿瘤、黑色素瘤、肺癌、前列腺癌或骨肉瘤病变细胞中的细胞周期蛋白。
本发明还提供了一种诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的制剂，所述制剂包括砷剂、砷剂衍生物和SUMO激动剂N106中的一种或多种。
下面通过具体实验实施例来对本发明作进一步的阐述。
实施例1细胞培养
人类结肠癌HCT-116细胞和人类胚胎肾293(HEK293)细胞在96孔孔板中培养，孔板中添加杜尔贝科改良的Eagle培养基(DMEM)和占培养基体积分数10％的胎儿牛血清。在37℃下，CO2浓度低于5％的条件下的培养箱中培养。人类地衣细胞淋巴瘤JeKo-1细胞在96孔孔板中培养，孔板中添加RPMI-1640培养基。在37℃下，CO2浓度低于5％的条件下的培养箱中培养。
实施例2细胞转染
(1)对数生长后期，收集实施例1中的HCT-116细胞。G1/S-特异性周期蛋白-D1质粒的DNA使用脂化胺3000在6厘米培养皿中瞬时转移到HCT-116细胞中。空载体用于保持每组转染DNA质粒的总量不变。Flag-EGFP质粒作为内部控制进行共控，以评估转染效率。收集细胞提取G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白在转染24小时后进行免疫印迹和免疫沉淀(IP)检测。
(2)在步骤(1)的基础上转染Ubc9质粒
收集步骤(1)中转染了G1/S-特异性周期蛋白-D1质粒的细胞，以步骤(1)中相同的操作方法进行Ubc9质粒的转染。收集细胞提取G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白在转染24小时后进行免疫印迹和免疫沉淀(IP)检测。
(3)在步骤(2)的基础上转染SUMO-1、SUMO-2、SUMO-3或SENP1质粒
收集步骤(2)中转染了Ubc9质粒的细胞，以步骤(1)中相同的操作方法进行SUMO-1、SUMO-2、SUMO-3或SENP1质粒的转染。收集细胞提取G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白在转染24小时后进行免疫印迹和免疫沉淀(IP)检测。
(4)在步骤(2)的基础上加入MG132蛋白酶抑制剂
收集(2)中转染了Ubc9质粒的细胞，在选择性培养基中加入MG132蛋白酶体抑制剂对HCT-116细胞进行培养。收集细胞提取G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白在转染24小时后进行免疫印迹和免疫沉淀(IP)检测。
结果：请参阅图2，图2中+表示对应的质粒或酶显阳性，-表示对应的质粒或酶显阴性，条带对应蛋白的含量。图a中共有四组条带，每组条带从左至右第一列显示细胞转染了G1/S-特异性周期蛋白-D1质粒，并且G1/S-特异性周期蛋白-D1进行了蛋白表达，第二列显示细胞转染了Ubc9/SUMO-1/2/3质粒或G1/S-特异性周期蛋白-D1质粒，仅有微量的G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白积累，第三列表示转染了G1/S-特异性周期蛋白-D1质粒、Ubc9/SUMO-1/2/3质粒和SENP1质粒，G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白有明显积累，第四列表示转染了G1/S-特异性周期蛋白-D1质粒和Ubc9/SUMO-1/2/3质粒并添加了MG132蛋白酶体抑制剂，G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白有明显积累。
HEK293细胞转染G1/S-特异性周期蛋白-D1质粒后，细胞中G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白的表达量上调。SUMO-1/2/3或Ubc9质粒通过诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白的SUMO化，利于其分解，细胞中G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白的积累变少，当存在逆SUMO化的SENP1质粒时，能够阻碍Ubc9或SUMO-1/2/3诱导的G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白的SUMO化，不利于G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白的分解，累积量上升。Ubc9及SUMO-1/2/3质粒能够产生诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白的SUMO化的酶，实现G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白的SUMO化，当存在MG132蛋白酶体抑制剂时，能够降低Ubc9及SUMO-1/2/3酶的活性，从而抑制G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白的SUMO化。
实施例3构建、转染Ψ-K-x-D/E中的赖氨酸突变质粒
在Addgene上购得pcDNA G1/S-特异性周期蛋白-D1 HA原始质粒(#166130)，G1/S-特异性周期蛋白-D1 HA质粒是G1/S-特异性周期蛋白-D1质粒中的一种。采用sitedirected mutagenesis kit(Agilent,California,USA)试剂盒，通过合成需要突变位点的引物将G1/S-特异性周期蛋白-D1HA原始质粒不同位点的K(赖氨酸)点突变为R(精氨酸)，使突变后的G1/S-特异性周期蛋白-D1 HA质粒表达得到的G1/S-特异性周期蛋白-D1可以参与SUMO位于48，72,149,238,269位点的K的结合。Ubc9质粒可以诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白的SUMO化，促进其分解。对以上SUMO的K位点对应在G1/S-特异性周期蛋白-D1 HA原始质粒的K位点进行依次突变，检测K位点突变后的G1/S-特异性周期蛋白-D1 HA原始质粒能否使G1/S-特异性周期蛋白-D1 SUMO化。
突变质粒转染细胞按以下方法进行：
种植细胞密度约70％～80％，换无血清培养基；将15μl lipofectamine3000试剂溶于150μl*4无血清培养基(lipofectamine试剂与无血清培养基体积比1:10)；将14μl小干或质粒溶于700ul无血清培养基中(DNA为浓度0.5～5μg/μl)；将溶有DNA的培养基加入到溶有lipofectamine试剂的培养基中；室温静置5min；将DNA-lipid混合液加入细胞培养皿中，于37℃、5％CO2浓度条件下的细胞培养箱中培养6小时后更换血清正常培养基；24～72小时后进行下一步实验检测分析。
结果：请参阅图3,图3中+表示对应的质粒或酶显阳性，-表示对应的质粒或酶显阴性，条带对应蛋白的含量。
将编码149位K(赖氨酸)的序列aag突变为cgg，cgg对应编码的氨基酸为R(精氨酸)，不再满足SUMO蛋白修饰四肽共有基序Ψ-K-x-D/E，结果发现G1/S-特异性周期蛋白-D1无法被SUMO蛋白类泛素化，因此G1/S-特异性周期蛋白-D1特异性SUMO化位点位于其第149位的K。
实施例4ATO促进类泛素化
常规六孔板每孔约5*106细胞量，每孔培养基体积为2ml，每孔加入的ATO浓度为2.5μM(即2.5μmol/L)，蛋白酶抑制剂MG132的浓度为10μM(即10μmol/L)。在2.5μM ATO与10μM MG132处理套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞2h后，离心收集悬浮细胞，加入RIPA裂解和缓冲液提取细胞总蛋白。细胞在RIPA裂解和缓冲液中均质化和孵育，RIPA裂解和缓冲液中辅助添加1mM PMSF、1mM Na3VO4和蛋白酶体抑制剂混合物MG132。13000克RIPA裂解和缓冲液在4℃下离心15分钟，收集总蛋白。随后用结合有SUMO-2/3抗体的珠子将总蛋白中所有与SUMO结合的相关蛋白“拖拽”下来，随后对这些蛋白进行WB免疫印迹检测，用G1/S-特异性周期蛋白-D1抗体检测SUMO化的G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白含量。
结果：请参阅图4，谱图左侧代表蛋白质分子量，右侧代表不同蛋白质带对应的蛋白质的种类。谱图上方+表示对应的质粒或酶显阳性，-表示对应的质粒或酶显阴性。谱图中条带对应蛋白的含量。见上方较长条带代表总蛋白量，下方较短条带为总蛋白中的G1/S-特异性周期蛋白-D1含量。
结果如图4所示，经ATO处理后，诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的酶的积累显著增加，G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白的积累显著减少。
实施例5N106和砷剂及其衍生物促进类泛素化
常规六孔板每孔约5*106细胞量，每孔培养基体积为2ml，每孔加入的浓度为2.5uM的ATO、50μM的N106或500μM的HAsNa2O3·7H2O、H2AsKO4、Carbarsone、Nitarsone中的一种物质。ATO处理时间为4h；HAsNa2O3·7H2O、H2AsKO4、Carbarsone、Nitarsone和N106处理时间为12h。处理后离心收集悬浮细胞，加入RIPA裂解和缓冲液提取细胞总蛋白。细胞在RIPA裂解和缓冲液中均质化和孵育，RIPA裂解和缓冲液中辅助添加1mM PMSF、1mM Na3VO4和蛋白酶体抑制剂混合物MG132。13000克RIPA裂解和缓冲液在4℃下离心15分钟，收集总蛋白。随后进行常规WB检测G1/S-特异性周期蛋白-D1表达，α-Tublin作为对照。
结果：请参阅图5，谱图上方对应添加的促进类泛素化的物质，谱图中条带对应蛋白的含量。
添加了N106和砷剂及其衍生物中任一种物质均可以促进G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白类泛素化，利于其降解，G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白的累积变少。其中，添加ATO、Carbarsone，Nitarsone或N106的效果较优。
实施例6细胞体外衰变分析
实施例2中步骤(1)的得到的转染G1/S-特异性周期蛋白-D1质粒的细胞转染后24小时，细胞被分在8个10厘米的盘子，每个盘子中细胞个数约为13.7×106。分别用2.5μM的ATO、50μM的N106或500μM的HAsNa2O3·7H2O、H2AsKO4、Carbarsone、Nitarsone中一种物质处理，处理后培养12小时，用流式细胞术检测G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白的衰变。
结果：请参阅图6，图6中Q4：(AnnexinV-FITC)-/PI-，此区域的细胞为活细胞；Q3：(AnnexinV-FITC)+/PI-，此区域的细胞为早期凋亡细胞；Q2:(AnnexinV+FITC)+/PI+，此区域的细胞为晚期凋亡细胞；Q1：(AnnexinV-FITC)-/PI+，此区域的细胞为坏死细胞。细胞凋亡率为Q2与Q3象限百分率的和。
和对照组相比较，经过2.5μM的ATO、50μM的N106或500μMHAsNa2O3·7H2O、H2AsKO4、Carbarsone、Nitarsone中任一种物质处理的套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞的细胞凋亡生物标记物PI-AnnexinV阳性率显著增加，细胞凋亡率上调。说明N106、ATO或其衍生物HAsNa2O3·7H2O，H2AsKO4，Carbarsone、Nitarsone中的任一种物质均能促进G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白的SUMO化，促进细胞的凋亡。
实施例7细胞活力检测
实施例2中步骤(1)的得到的转染G1/S-特异性周期蛋白-D1质粒的细胞转染后24小时，细胞被分在8个10厘米的盘子，每个盘子中细胞个数约为13.7×106。分别用0、1、2.5、10μM的ATO处理，处理后培养12小时，收集1、6、24和48小时细胞，用80μg/ml环酰胺在常规介质中培养。用CCK8试剂盒对细胞活力进行检测。
结果：请参阅图7，图a中每个时间点，每个ATO浓度处理的细胞有3组重复实验。图b是不同时间点的吸光度。
图a中，6h后用不同浓度ATO处理的细胞的死亡率上调；图b中，和对照组相比，ATO处理的细胞吸光度小，说明ATO处理的Jeko-1细胞活力随着处理时间延长而降低。
实施例8生物活性测试
对免疫缺陷小鼠(品系为NOD-Prkdcem26 Il2rgem26/Gpt)进行套细胞淋巴瘤的移植瘤实验，移植Jeko-1细胞量为5×106，当移植瘤达到1cm3后，采用ATO(3.2mg/kg)瘤内注射治疗,每周三次，对照组注射生理盐水。
结果：请参阅图8，图a中采用ATO注射治疗的免疫缺陷小鼠的肿瘤明显小于注射生理盐水的免疫缺陷小鼠的肿瘤。
图b，剥离出免疫缺陷小鼠的肿瘤进行对比，采用ATO注射治疗的免疫缺陷小鼠的肿瘤明显小于注射生理盐水的免疫缺陷小鼠的肿瘤。
图c为不同时间点免疫缺陷小鼠肿瘤体积的大小，可以看出，10天之后，采用ATO(3.2mg/kg)瘤内注射治疗的免疫缺陷小鼠的肿瘤体积明显小于注射生理盐水的免疫缺陷小鼠的肿瘤体积，并随时间的推移，体积差距逐步增大。
图d为剥离出肿瘤组织，测得的实验组和对照组免疫缺陷小鼠肿瘤重量。采用ATO注射治疗的免疫缺陷小鼠的肿瘤重量明显小于注射生理盐水的免疫缺陷小鼠的肿瘤重量。
ATO能够靶向定位于肿瘤组织，加速肿瘤细胞的凋亡，影响肿瘤细胞的生长。
以上具体实施例的结果说明，N106、砷剂、砷剂衍生物靶向肿瘤细胞的SUMO化位点，诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1 SUMO化，促进G1/S-特异性周期蛋白-D1的分解，使得G1/S-特异性周期蛋白-D1的累积量减少，促进肿瘤细胞的凋亡。其中，经砷剂处理的细胞诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1 SUMO化的酶的积累量增加。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种砷剂和/或砷剂衍生物与SUMO激动剂N106的组合在制备诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的药物中的用途。
2.如权利要求1所述的砷剂和/或砷剂衍生物与SUMO激动剂N106的组合在制备诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的药物中的用途，其特征在于，所述G1/S-特异性周期蛋白-D1存在的环境中包含SUMO蛋白，所述砷剂和/或砷剂衍生物与SUMO激动剂N106通过诱导SUMO蛋白修饰G1/S-特异性周期蛋白-D1蛋白来实现G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化。
3.如权利要求1所述的砷剂和/或砷剂衍生物与SUMO激动剂N106的组合在制备诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的药物中的用途，其特征在于，所述砷剂衍生物选自亚砷酸氢二钠及其水合物、砷酸二氢钾、卡巴胂和硝苯砷酸中一种或多种。
4.如权利要求2所述的砷剂和/或砷剂衍生物与SUMO激动剂N106的组合在制备诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的药物中的用途，其特征在于，所述SUMO蛋白为SUMO-1、SUMO-2和SUMO-3蛋白中的一种或多种。
5.如权利要求2所述的砷剂和/或砷剂衍生物与SUMO激动剂N106的组合在制备诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的药物中的用途，其特征在于，所述G1/S-特异性周期蛋白-D1存在的环境中还存在Ubc9E2结合酶。
6.如权利要求5所述的砷剂和/或砷剂衍生物与SUMO激动剂N106的组合在制备诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的药物中的用途，其特征在于，所述Ubc9E2结合酶将所述G1/S-特异性周期蛋白-D1和SUMO蛋白通过异肽键偶联。
7.如权利要求1所述的砷剂和/或砷剂衍生物与SUMO激动剂N106的组合在制备诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的药物中的用途，其特征在于，所述G1/S-特异性周期蛋白-D1为套细胞淋巴瘤、白血病、乳腺癌、结直肠癌、膀胱癌、甲状旁腺肿瘤、黑色素瘤、肺癌、前列腺癌或骨肉瘤病变细胞中的细胞周期蛋白。
8.如权利要求1或2所述的砷剂和/或砷剂衍生物与SUMO激动剂N106的组合在制备诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的药物中的用途，其特征在于，所述G1/S-特异性周期蛋白-D1特异性类泛素化位点为G1/S-特异性周期蛋白-D1第149位的K。
9.如权利要求3所述的砷剂和/或砷剂衍生物与SUMO激动剂N106的组合在制备诱导G1/S-特异性周期蛋白-D1类泛素化的药物中的用途，其特征在于，所述砷剂的作用浓度为1～10μM，优选为2.2μM，所述亚砷酸氢二钠及其水合物、所述砷酸二氢钾、所述卡巴胂或硝苯砷酸的作用浓度为500μM，所述SUMO激动剂N106的作用浓度为50μM。
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