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CN116410228A - 一种抗冠状病毒核苷类化合物的制备方法及其应用 - Google Patents

一种抗冠状病毒核苷类化合物的制备方法及其应用 Download PDF

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CN116410228A
CN116410228A CN202310488939.6A CN202310488939A CN116410228A CN 116410228 A CN116410228 A CN 116410228A CN 202310488939 A CN202310488939 A CN 202310488939A CN 116410228 A CN116410228 A CN 116410228A
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CN202310488939.6A
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翟虎渠
钟南山
陈化兰
耿志远
鲍甫义
薛金华
陆冬晓
周伟
王小明
袁仁涛
周明
彭盛
叶小新
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Guoqing Biomedical Shanghai Co ltd
Guoqing Future Co ltd
Nanjing Aixinbei Electronic Technology Co ltd
Nanjing Yiyuan Biomedical Research Institute Co ltd
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Guoqing Biomedical Shanghai Co ltd
Guoqing Future Co ltd
Nanjing Aixinbei Electronic Technology Co ltd
Nanjing Yiyuan Biomedical Research Institute Co ltd
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    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
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    • A—HUMAN NECESSITIES
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Abstract

本发明公开了一种抗冠状病毒核苷类化合物的制备方法及其应用，其结构式为：
Figure ZY_1
；药效试验结果显示在目前高浓度背景下，试验样品在0.04uM浓度下仍具有一定的抗病毒活性，与已上市对照药莫努匹拉韦抗病毒活性相当，具备进一步研究的价值。

Description

一种抗冠状病毒核苷类化合物的制备方法及其应用
技术领域
本发明属于抗病毒化合物研发技术领域，特别涉及一种抗冠状病毒核苷类化合物的制备方法及其应用。
背景技术
冠状病毒（英文名：Coronavirus）属于套式病毒目、冠状病毒科、冠状病毒属，是一类具有囊膜、基因组为线性单股正链的RNA病毒，是自然界广泛存在的一大类病毒。此病毒在电子显微镜下可见如日冕般外围的冠状， 因此被称为冠状病毒（Coronaviridae）。1975年，病毒命名委员会，正式命名冠状病毒科。包括鼻病毒、B814病毒、229E病毒、OC43株、以及会感染人类并引起严重呼吸系统疾病的，比如中东呼吸综合征（MERS）、严重急性呼合征（SARS，SARS是冠状病毒的一个变种，是引起非典型肺炎的病原体）以及新型冠状病毒（SARS-CoV-2）等，其感染症状可从普通感冒到重症肺部感染。
新型冠状病毒COVID-19潜在靶标分为结构蛋白与非结构蛋白以及其他冠状病毒治疗相关靶标三大类，结构蛋白(structure protein)包括棘突蛋白（SurfaceGlycoprotein, Spike Protein)、E蛋白 (Envelope protein, E Protein)、M蛋白(membrane protein)和N蛋白 (Nucleocapsid Phosphoprotein, N protein)，非结构蛋白包括复制酶多蛋白1ab、3C样蛋白酶（3C-like protease）、木瓜样蛋白酶（Papain-likeprotease)、NSP12(RDRP，RNA依赖性RNA聚合酶)、Helicase, Nsp13(RNA解旋酶)、Nsp14(Guanine-N7 methyltransferase)、Nsp15 (Uridylate-specific endoribonuclease)、Nsp16 (2'-O-methyl transferase，2'-O-甲基转移酶)，其他冠状病毒治疗相关靶标主要是ACE2（血管紧张素转化酶2）。
新冠病毒治疗药物主要包括三种类型，各有不同的侧重方向和适用人群：小分子抗病毒药物可针对轻中重症患者、中和抗体主要针对轻中症患者、免疫调节药物基本只用于重症患者。目前，根据作用机制不同，新冠小分子抗病毒药物主要包括RNA聚合酶抑制剂、3CL蛋白酶抑制剂等。全球已获批的作用于新型冠状病毒聚合酶(RdRp)的新冠治疗小分子药物仅有3款，包括吉利德科学公司的瑞德西韦（Remdesivir）、默沙东和Ridgeback公司共同研制的莫努匹拉韦（Molnupiravir）、河南真实生物科技有限公司的阿兹夫定、以及上海旺实生物医药科技有限公司的氢溴酸氘瑞米德伟（VV116）。但是，截至目前为止，没有一款药物能够成为新冠病毒或者冠状病毒的特效药。
综上所述，本领域迫切需要开发针对抑制冠状病毒复制的更有效的抑制剂以用于冠状病毒感染引起的相关疾病。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗冠状病毒核苷类化合物，从而克服上述现有技术中的缺陷。
为实现上述目的，本发明提供了一种抗冠状病毒的核苷类化合物，抗冠状病毒化合物的结构式为：
式（I）中：
Figure SMS_1
。
进一步优选的，波浪线表示的单键所连的碳原子有R和S两种构型，或者呋喃糖环有D/L两种构型。
一种药用组合物，组合物包含前文所述的抗冠状病毒化合物或药学上可以接受的盐，结晶水合物或其溶剂化物或其前药或者其与其它化合物的组合。
进一步优选的，波浪线表示的单键所连的碳原子有R和S两种构型，或者呋喃糖环有D/L两种构型。
进一步优选的，组合物在制备抗冠状病毒药物中的应用，所述抗冠状病毒药物为抗2019-nCoV，HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV的药物。
一种抗冠状病毒的核苷类化合物的合成方法，包括如下步骤：
Step 1 ：
Figure SMS_2
；
在氮气保护和冰水浴条件下，在溶有5克化合物A的100ml干燥甲醇溶液中，滴加0.6ml浓硫酸；浓硫酸滴加完成后，在室温下搅拌过夜；加入2.34g碳酸氢钠固体调节至pH＞7，垫硅藻土过滤，甲醇洗涤滤饼，滤液浓缩后获得无色油状化合物B共计6.31g；
Step 2 ：
Figure SMS_3
；
在氮气保护和冰水浴条件下，33.3mmol化合物B溶于100ml干燥DMF溶液中，加入6.66g 60%钠氢室温搅拌10min，0℃滴加22.8g苄溴；苄溴滴加完成后，在室温搅拌过夜；倒入饱和氯化氨的冰水溶液，用乙酸乙酯萃取三次；有机相用饱和食盐水洗涤、用无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩、柱层析（EA/PE=20/1 -10/1）得9.74g无色透明油状化合物C；
Step 3 ：
Figure SMS_4
；
在0℃条件下，溶有2g化合物C的30ml乙酸溶液中，滴加0.2ml硫酸；滴加完成后，反应液加热到80℃反应6小时；反应完成后减压浓缩至5-6ml溶剂, 浓缩后用乙酸乙酯和水溶解，有机相用碳酸钠固体洗涤至PH＞7，有机相用饱和食盐水洗涤、用无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩、柱层析（PE/EA=5/1）得到1.05g无色透明油状化合物D；
Step 4 ：
Figure SMS_5
；
把1.05g化合物D溶在10ml干燥DMSO中，在氮气保护条件下，滴加1.27g乙酸酐，室温反应过夜；反应液倒入冰水中、乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗有机相，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩、PE/EA=20/1柱层析得787mg无色透明油状化合物E；
Step 5 ：
Figure SMS_6
；
在氮气保护条件下，在溶有504mg 化合物F的5ml干燥四氢呋喃溶液中，加514mgTMSCl；加完后，反应室温反应20分钟，然后，反应液冷却至-78℃，5.38ml的BuLi滴加到反应液中，1小时后滴加0℃的化合物5溶液，化合物5溶液包含900mg化合物E和5ml干燥的四氢呋喃；滴加完成后在-78℃搅拌反应1小时；升温至0℃后加饱和氯化氨淬灭；乙酸乙酯萃取有机相，用饱和食盐水洗有机相，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩、PE/EA=1/1-1/2柱层析得棕色固体化合物G 375mg；
Step 6 ：
Figure SMS_7
；
在氮气保护条件下，把375mg化合物G溶在10ml干燥二氯甲烷溶液中，冷却至-78℃，滴加204mgTfOH并搅拌10min；然后-78℃滴加317mg的TMSOTf到反应液中，反应30min；-78℃缓慢加入269mg的TMSCN，-78℃搅拌2h，滴加241mg三乙胺反应液缓慢升温至室温；顺序加入514mg固体碳酸氢钠、2ml水搅拌10min，二氯甲烷萃取有机相，有机相用饱和食盐水清洗，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩、PE/EA=1/1柱层析得288mg浅黄色固体化合物H；
Step 7 ：
Figure SMS_8
；
在氮气保护条件下，把2.5g化合物H溶在20ml干燥二氯甲烷溶液中，冷却至-78℃，滴加1M BCl3的正己烷溶液16.91ml；升温至-40℃搅拌2h，反应完成后，在-78℃滴加3.85g甲醇、4.5g三乙胺和7.7g甲醇，反应升温至室温后旋转干燥反应液得到粗品；粗品加正己烷打浆、倾掉上层清液，打浆、倾倒步骤反复3次；加入甲醇（20 mL）加热至45℃，按照与甲醇1比1的体积比例加入水，45℃旋蒸掉部分溶液并冷却至室温过滤，少许甲醇洗涤滤饼，滤饼干燥既得686mg白色固体化合物I；
Step 8 ：
Figure SMS_9
；
在氮气保护条件下，686化合物I和1.18g 2,2`-二甲氧基丙烷溶在10ml丙酮中，室温下滴加0.17ml浓硫酸并搅拌30min, 加热至45 ℃搅拌30min；室温下加入694mg碳酸氢钠固体和680mg水搅拌15min；浓缩反应液后加水和乙酸乙酯分出有机相，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩、DCM/MEOH=50/1-20/1柱层析得617mg白色固体化合物J；
Step 9 ：
Figure SMS_10
；
在氮气保护条件下，10g的化合物K和19.82g的化合物L溶在300ml甲苯中，加对18.45g的对甲苯磺酸一水合物，加热至135 ℃并用分水器分水，反应24小时；反应完成后反应液浓缩，加乙醚打浆过滤，乙醚洗涤滤饼并干燥后即得白色固体化合物M；
Step 10 ：
Figure SMS_11
；
在氮气保护条件下，5.76g的化合物M溶在100 mL干燥二氯甲烷中，0℃下加入3.38g的化合物N，搅拌45min后滴加3.57g三乙胺（1.38 g， 13.69 mmol，2.1 eq）后反应三小时，0℃下加入2.23g的对硝基苯酚，再滴加1.62g三乙胺室温反应过夜。反应液加水洗，分出有机相，有机相用饱和食盐水洗，然后用无水硫酸钠干燥，过滤除去无水硫酸钠你，滤液浓缩，PE/EA=5/1-4/1过柱得到4.92 g，无色透明油状液体化合物O；
Step 11 ：
Figure SMS_12
；
617mg的化合物O、951mg的化合物P和177mg的氯化镁混合于100ml的干燥乙腈中，N2保护下50℃搅拌10min，加入601mg的N,N-异丙基乙胺继续搅拌20min，冷却至室温加乙酸乙酯稀释，先后加5%柠檬酸溶液、饱和氯化铵溶液、饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水溶液洗涤，分出有机相用无水硫酸钠干燥过滤浓缩、柱层析（DCM/MeOH=40:1-20/1）得化合物Q（731mg白色固体）；
Step 12 ：
Figure SMS_13
；
室温下，4.22g化合物Q溶于100ml甲酸中，室温下搅拌过夜，反应液浓缩，过柱（DCM/MeOH=20/1）得化合物g1-A（1.66 g，白色固体）；
化合物g1-A经手性拆分得到两个单一构型得化合物。（色谱柱： DaicelCHIRALPAK® IB 250*30 mm, 10µm，流动相A：正己烷，流动相B：异丙醇，检测波长：254nm/214nm，流速：25mL/min，等度洗脱程序：流动相A：流动相B=60:40（V/V））。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
药效试验结果显示在目前高浓度背景下，试验样品在0.04uM浓度下仍具有一定的抗病毒活性，与已上市对照药莫努匹拉韦（Molnupiravir）抗病毒活性相当，具备进一步研究的价值。
附图说明
图1.1-图1.3为产物g1-A手性液相谱图；
图2为产物g1-A核磁谱图图；
图3为本发明的合成路线示意图；
图4-图11为合成各分步骤产物的核磁谱图。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或 组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
一种抗冠状病毒的核苷类化合物，抗冠状病毒化合物的结构式为：
式（I）中：
Figure SMS_14
；波浪线表示的单键所连的碳原子有R和S两种构型，或者呋喃糖环有D/L两种构型。
一种药用组合物，组合物包含下式化合物或其药学上可接受的盐：根据权利要求1所述的抗冠状病毒化合物或药学上可以接受的盐，结晶水合物或其溶剂化物或其前药或者其与其它化合物的组合。
抗冠状病毒药物为抗2019-nCoV，HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV的药物。冠状病毒选自：2019-nCoV（引发COVID-19），HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV（引发重症急性呼吸综合征） 和MERS-CoV（引发中东呼吸综合征）。
一种抗冠状病毒的核苷类化合物的合成方法，包括如下步骤：
Step 1 ：
Figure SMS_15
；
在氮气保护和冰水浴条件下，在溶有5克化合物A的100ml干燥甲醇溶液中，滴加0.6ml浓硫酸；浓硫酸滴加完成后，在室温下搅拌过夜；加入2.34g碳酸氢钠固体调节至pH＞7，垫硅藻土过滤，甲醇洗涤滤饼，滤液浓缩后获得无色油状化合物B共计6.31g；
Step 2 ：
Figure SMS_16
；
在氮气保护和冰水浴条件下，33.3mmol化合物B溶于100ml干燥DMF溶液中，加入6.66g 60%钠氢室温搅拌10min，0℃滴加22.8g苄溴；苄溴滴加完成后，在室温搅拌过夜；倒入饱和氯化氨的冰水溶液，用乙酸乙酯萃取三次；有机相用饱和食盐水洗涤、用无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩、柱层析（EA/PE=20/1 -10/1）得9.74g无色透明油状化合物C；
Step 3 ：
Figure SMS_17
；
在0℃条件下，溶有2g化合物C的30ml乙酸溶液中，滴加0.2ml硫酸；滴加完成后，反应液加热到80℃反应6小时；反应完成后减压浓缩至5-6ml溶剂, 浓缩后用乙酸乙酯和水溶解，有机相用碳酸钠固体洗涤至PH＞7，有机相用饱和食盐水洗涤、用无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩、柱层析（PE/EA=5/1）得到1.05g无色透明油状化合物D；
Step 4 ：
Figure SMS_18
；
把1.05g化合物D溶在10ml干燥DMSO中，在氮气保护条件下，滴加1.27g乙酸酐，室温反应过夜；反应液倒入冰水中、乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗有机相，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩、柱层析（PE/EA=20/1）得787mg无色透明油状化合物E；
Step 5 ：
Figure SMS_19
；
在氮气保护条件下，在溶有504mg 化合物F的5ml干燥四氢呋喃溶液中，加514mgTMSCl；加完后，反应室温反应20分钟，然后，反应液冷却至-78℃，5.38ml的BuLi滴加到反应液中，1小时后滴加0℃的化合物5溶液，化合物5溶液包含900mg化合物E和5ml干燥的四氢呋喃；滴加完成后在-78℃搅拌反应1小时；升温至0℃后加饱和氯化氨淬灭；乙酸乙酯萃取有机相，用饱和食盐水洗有机相，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩、柱层析（PE/EA=1/1-1/2）得化合物G（375mg，棕色固体）；
Step 6 ：
Figure SMS_20
；
在氮气保护条件下，把375mg化合物G溶在10ml干燥二氯甲烷溶液中，冷却至-78℃，滴加204mgTfOH并搅拌10min；然后-78℃滴加317mg的TMSOTf到反应液中，反应30min；-78℃缓慢加入269mg的TMSCN，-78℃搅拌2h，滴加241mg三乙胺反应液缓慢升温至室温；顺序加入514mg固体碳酸氢钠、2ml水搅拌10min，二氯甲烷萃取有机相，有机相用饱和食盐水清洗，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩、柱层析（PE/EA=1/1）得化合物H（288mg浅黄色固体）；
Step 7 ：
Figure SMS_21
；
在氮气保护条件下，把2.5g化合物H溶在20ml干燥二氯甲烷溶液中，冷却至-78℃，滴加1M BCl3的正己烷溶液16.91ml；升温至-40℃搅拌2h，反应完成后，在-78℃滴加3.85g甲醇、4.5g三乙胺和7.7g甲醇，反应升温至室温后旋转干燥反应液得到粗品；粗品加正己烷打浆、倾掉上层清液，打浆、倾倒步骤反复3次；加入甲醇（20 mL）加热至45℃，按照与甲醇1比1的体积比例加入水，45℃旋蒸掉部分溶液并冷却至室温过滤，少许甲醇洗涤滤饼，滤饼干燥既得686mg白色固体化合物I；
Step 8 ：
Figure SMS_22
；
在氮气保护条件下，686化合物I和1.18g 2,2-二甲氧基丙烷溶在10ml丙酮中，室温下滴加0.17ml浓硫酸并搅拌30min, 加热至45 ℃搅拌30min；室温下加入694mg碳酸氢钠固体和680mg水搅拌15min；浓缩反应液后加水和乙酸乙酯分出有机相，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩、柱层析（DCM/MEOH=50/1-20/1）得化合物J（617mg白色固体）；
Step 9 ：
Figure SMS_23
；
在氮气保护条件下，10g的化合物K和19.82g的化合物L溶在300ml甲苯中，加对18.45g的对甲苯磺酸一水合物，加热至135 ℃并用分水器分水，反应24小时；反应完成后反应液浓缩，加乙醚打浆过滤，乙醚洗涤滤饼并干燥后即得白色固体化合物M；
Step 10 ：
Figure SMS_24
；
在氮气保护条件下，5.76g的化合物M溶在100 mL干燥二氯甲烷中，0℃下加入3.38g的化合物N，搅拌45min后滴加3.57g三乙胺（1.38 g， 13.69 mmol，2.1 eq）后反应三小时，0℃下加入2.23g的对硝基苯酚，再滴加1.62g三乙胺室温反应过夜。反应液加水洗，分出有机相，有机相用饱和食盐水洗，然后用无水硫酸钠干燥，过滤除去无水硫酸钠你，滤液浓缩，过柱（PE/EA=5/1-4/1）得到化合物O（4.92 g，无色透明油状液体）；
Step 11 ：
Figure SMS_25
；
617mg的化合物O、951mg的化合物P和177mg的氯化镁混合于100ml的干燥乙腈中，N2保护下50℃搅拌10min，加入601mg的N,N-异丙基乙胺继续搅拌20min，冷却至室温加乙酸乙酯稀释，先后加5%柠檬酸溶液、饱和氯化铵溶液、饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水溶液洗涤，分出有机相用无水硫酸钠干燥过滤浓缩、柱层析（DCM/MeOH=40:1-20/1）得化合物Q（731mg白色固体）；
Step 12 ：
Figure SMS_26
；
室温下，4.22g化合物Q溶于100ml甲酸中，室温下搅拌过夜，反应液浓缩，过柱（DCM/MeOH=20/1）得化合物g1-A（1.66 g，白色固体）；
化合物g1-A经手性拆分得到两个单一构型得化合物。（色谱柱： DaicelCHIRALPAK® IB 250*30 mm, 10µm，流动相A：正己烷，流动相B：异丙醇，检测波长：254nm/214nm，流速：25mL/min，等度洗脱程序：流动相A：流动相B=60:40（V/V））。
细胞毒性测试步骤：
莫努匹拉韦（购自江苏艾康生物医药研发有限公司 ），Bel7402细胞（由复旦大学药学院抗病毒药物研究室提供），胎牛血清（FBS）（赛默飞世尔生物化学制品有限公司出品），DMEM培养基（赛默飞世尔生物化学制品有限公司），二氧化碳培养箱（赛默飞世尔生物化学制品有限公司），荧光定量PCR（赛默飞世尔生物化学制品有限公司）。
96孔板接种Bel7402细胞（1.5*104/孔），培养24 h。吸去培养液，加入100 μL/孔的待测药物溶液，每个浓度设2个复孔，正常对照组加入等体积培养液。37℃，5% CO2孵箱孵育48 h后，每孔加入浓度为5 mg/mL的MTT溶液15 µL，继续孵育4 h。吸去上清，每孔加入100 µL DMSO，低速振荡溶解，490 nm测定OD值，与正常组细胞相对，计算细胞存活率（药物组平均OD值 – 空白OD值） / （正常对照组平均OD值 - 空白OD值） ×100％。
抗冠状病毒229E活性测试步骤：
96孔板接种Bel7402细胞（2.5*104/孔），培养24 h。吸去上清，药物实验组和病毒对照组加入10-2 HCoV病毒液（229E病毒）100 μL/孔，37℃、5% CO2培养箱吸附5 h。吸去培养液，药物实验组加入100 μL/孔的待测药物溶液，每个浓度设2个复孔，正常对照组和病毒对照组加入等体积维持培养液。37℃，5% CO2孵箱孵育72 h后，MTT法测定细胞活性（方法同上），计算细胞存活率（药物组平均OD值 – 空白OD值） / （正常对照组平均OD值 - 空白OD值） ×100％。
测试结论：
细胞毒性试验显示试验样品在125μM以下，在没有感染背景的情况下，细胞毒性不明显，且毒性比对照药较低。
药效试验结果显示在目前高攻毒背景下，试验样品在0.04uM浓度下仍具有一定的抗病毒活性，与已上市对照药莫努匹拉韦（Molnupiravir）抗病毒活性相当，具备进一步研究的价值。
Figure SMS_27
（注：莫努匹拉韦（Molnupiravir）是美国默沙东和Ridgeback公司共同研制的美国仅有的两款已批准上市的小分子核苷类抗新冠病毒抑制剂之一，并正式被中国引进和批准使用）。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

Claims (6)

1.一种抗冠状病毒的核苷类化合物，其特征在于：所述抗冠状病毒化合物的结构式为：
Figure QLYQS_1
。
2.根据权利要求1所述的抗冠状病毒的核苷类化合物，其特征在于：波浪线表示的单键所连的碳原子有R和S两种构型，或者呋喃糖环有D/L两种构型。
3.一种药用组合物，其特征在于：所述组合物包含权利要求1或2所述的抗冠状病毒化合物或药学上可以接受的盐，结晶水合物或其溶剂化物或其前药或者其与其它化合物的组合。
4.如权利要求3所述的组合物在制备抗冠状病毒药物中的应用，所述抗冠状病毒药物为抗2019-nCoV，HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV的药物。
5.一种抗冠状病毒的核苷类化合物的合成方法，其特征在于：包括如下步骤：
Step 1 ：
Figure QLYQS_2
;
在氮气保护和冰水浴条件下，在溶有5克化合物A的100ml干燥甲醇溶液中，滴加0.6ml浓硫酸；浓硫酸滴加完成后，在室温下搅拌过夜；加入2.34g碳酸氢钠固体调节至pH ＞7，垫硅藻土过滤，甲醇洗涤滤饼，滤液浓缩后获得无色油状化合物B共计6.31g；
Step 2 ：
Figure QLYQS_3
;
在氮气保护和冰水浴条件下，33.3mmol化合物B溶于100ml干燥DMF溶液中，加入6.66g60%钠氢室温搅拌10min，0℃滴加22.8g苄溴；苄溴滴加完成后，在室温搅拌过夜；倒入饱和氯化氨的冰水溶液，用乙酸乙酯萃取三次；有机相用饱和食盐水洗涤、用无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩、柱层析EA/PE=20/1 -10/1得9.74g无色透明油状化合物C；
Step 3 ：
Figure QLYQS_4
;
在0℃条件下，溶有2g化合物C的30ml乙酸溶液中，滴加0.2ml硫酸；滴加完成后，反应液加热到80℃反应6小时；反应完成后减压浓缩至5-6ml溶剂, 浓缩后用乙酸乙酯和水溶解，有机相用碳酸钠固体洗涤至PH＞7，有机相用饱和食盐水洗涤、用无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩、柱层析PE-PE/EA=5/1得到1.05g无色透明油状化合物D；
Step 4 ：
Figure QLYQS_5
;
把1.05g化合物D溶在10ml干燥DMSO中，在氮气保护条件下，滴加1.27g乙酸酐，室温反应过夜；反应液倒入冰水中、乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗有机相，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩、柱层析PE-PE/EA=20/1得787mg无色透明油状化合物E；
Step 5 ：
Figure QLYQS_6
;
在氮气保护条件下，在溶有504mg 化合物F的5ml干燥四氢呋喃溶液中，加514mgTMSCl；加完后，反应室温反应20分钟，然后，反应液冷却至-78℃，5.38ml的BuLi滴加到反应液中，1小时后滴加0℃的化合物5溶液，化合物5溶液包含900mg化合物E和5ml干燥的四氢呋喃；滴加完成后在-78℃搅拌反应1小时；升温至0℃后加饱和氯化氨淬灭；乙酸乙酯萃取有机相，用饱和食盐水洗有机相，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩、柱层析PE/EA=1/1-1/2得375mg棕色固体化合物G；
Step 6 ：
Figure QLYQS_7
;
在氮气保护条件下，把375mg化合物G溶在10ml干燥二氯甲烷溶液中，冷却至-78℃，滴加204mg TfOH并搅拌10min；然后-78℃滴加317mg的TMSOTf到反应液中，反应30min；-78℃缓慢加入269mg的TMSCN，-78℃搅拌2h，滴加241mg三乙胺反应液缓慢升温至室温；顺序加入514mg固体碳酸氢钠、2ml水搅拌10min，二氯甲烷萃取有机相，有机相用饱和食盐水清洗，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩、柱层析PE/EA=1/1得288mg浅黄色固体化合物H；
Step 7 ：
Figure QLYQS_8
;
在氮气保护条件下，把2.5g化合物H溶在20ml干燥二氯甲烷溶液中，冷却至-78℃，滴加1M BCl3的正己烷溶液16.91ml；升温至-40℃搅拌2h，反应完成后，在-78℃滴加3.85g甲醇、4.5g三乙胺和7.7g甲醇，反应升温至室温后旋转干燥反应液得到粗品；粗品加正己烷打浆、倾掉上层清液，打浆、倾倒步骤反复3次；加入甲醇20 mL加热至45℃，按照与甲醇1比1的体积比例加入水，45℃旋蒸掉部分溶液并冷却至室温过滤，少许甲醇洗涤滤饼，滤饼干燥既得686mg白色固体化合物I；
Step 8 ：
Figure QLYQS_9
;
在氮气保护条件下，686化合物I和1.18g 2,2-二甲氧基丙烷溶在10ml丙酮中，室温下滴加0.17ml浓硫酸并搅拌30min, 加热至45 ℃搅拌30min；室温下加入694mg碳酸氢钠固体和680mg水搅拌15min；浓缩反应液后加水和乙酸乙酯，分出有机相，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩、柱层析DCM/MEOH=50/1-20/1得617mg白色固体化合物J；
Step 9 ：
Figure QLYQS_10
;
在氮气保护条件下，10g的化合物K和19.82g的化合物L溶在300ml甲苯中，加对18.45g的对甲苯磺酸一水合物，加热至135 ℃并用分水器分水，反应24小时；反应完成后反应液浓缩，加乙醚打浆过滤，乙醚洗涤滤饼并干燥后即得白色固体化合物M；
Step 10 ：
Figure QLYQS_11
;
在氮气保护条件下，5.76g的化合物M溶在100 mL干燥二氯甲烷中，0℃下加入3.38g的化合物N，搅拌45min后滴加3.57g三乙胺后反应三小时，0℃下加入2.23g的对硝基苯酚，再滴加1.62g三乙胺室温反应过夜；反应液加水洗，分出有机相，有机相用饱和食盐水洗，然后用无水硫酸钠干燥，过滤除去无水硫酸钠你，滤液浓缩，柱层析PE/EA=5/1-4/1得到4.92 g无色透明油状液体化合物O；
Step 11 ：
Figure QLYQS_12
;
617mg的化合物O，951mg的化合物P和177mg的氯化镁混合于100ml的干燥乙腈中，N2保护下50℃搅拌10min，加入601mg的N,N-异丙基乙胺继续搅拌20min，冷却至室温加乙酸乙酯稀释，先后加5%柠檬酸溶液、饱和氯化铵溶液、饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水溶液洗涤，分出有机相用无水硫酸钠干燥过滤浓缩、柱层析DCM/MEOH=40:1-20/1得731mg 白色固体化合物Q；
Step 12 ：
Figure QLYQS_13
;
室温下，4.22g化合物Q溶于100ml甲酸中，室温下搅拌过夜，反应液浓缩，柱层析DCM/MeOH=20/1得1.66 g白色固体化合物g1-A；
化合物g1-A经手性拆分得到两个单一构型得化合物。
6.根据权利要求5所述的抗冠状病毒的核苷类化合物的合成方法，其特征在于：手性拆分条件为色谱柱：Daicel CHIRALPAK® IB 250*30 mm, 10µm，流动相A：正己烷，流动相B：异丙醇，检测波长：254nm/214nm，流速：25mL/min，等度洗脱程序体积比：流动相A：流动相B=60:40。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102711765A (zh) * 2009-11-16 2012-10-03 加利福尼亚大学董事会 激酶抑制剂
CN108285438A (zh) * 2018-01-18 2018-07-17 上海仁实医药科技有限公司 一种苄基核糖内酯的合成工艺
CN108348526A (zh) * 2015-09-16 2018-07-31 吉利德科学公司 治疗沙粒病毒科和冠状病毒科病毒感染的方法
CN114641299A (zh) * 2020-01-27 2022-06-17 吉利德科学公司 用于治疗SARS CoV-2感染的方法
CN115996928A (zh) * 2020-06-24 2023-04-21 吉利德科学公司 1’-氰基核苷类似物及其用途

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102711765A (zh) * 2009-11-16 2012-10-03 加利福尼亚大学董事会 激酶抑制剂
CN108348526A (zh) * 2015-09-16 2018-07-31 吉利德科学公司 治疗沙粒病毒科和冠状病毒科病毒感染的方法
CN108285438A (zh) * 2018-01-18 2018-07-17 上海仁实医药科技有限公司 一种苄基核糖内酯的合成工艺
CN114641299A (zh) * 2020-01-27 2022-06-17 吉利德科学公司 用于治疗SARS CoV-2感染的方法
CN115996928A (zh) * 2020-06-24 2023-04-21 吉利德科学公司 1’-氰基核苷类似物及其用途

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