CN116322757A

CN116322757A - 用于疫苗的剂量方案

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Publication number: CN116322757A
Application number: CN202080087086.XA
Authority: CN
Inventors: 克里斯蒂安·布兰德; 比阿特丽斯·莫特-普哈达斯
Original assignee: Alex Therapeutics
Current assignee: Alex Therapeutics
Priority date: 2019-11-14
Filing date: 2020-11-12
Publication date: 2023-06-23
Also published as: BR112022009421A2; AU2020384323A1; US20210145961A1; WO2021094984A1; CA3161633A1; US11666651B2; EP4058058A1

Abstract

本发明涉及用于治疗或预防人免疫缺陷病毒(HIV)感染或与HIV感染相关的疾病的免疫原性治疗。

Description

用于疫苗的剂量方案

相关申请

本申请要求于2019年11月14日提交的美国临时申请第62/935,519号的优先权，其通过引用整体并入本文。

以电子方式提交的序列表的引用

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技术领域

本发明涉及用于治疗或预防人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染或与HIV感染相关的疾病的免疫原性治疗。

背景技术

获得高效组合抗逆转录病毒治疗(combination antiretroviral therapy，cART)的机会增加已导致与HIV感染相关的发病率和死亡率急剧下降。然而，尽管有新类别的抗逆转录病毒药物，但目前可用的cART方案仍无法从体内根除HIV。因此，在维持检测不到的病毒载量的参与者中停止cART之后，病毒血症会快速反弹。Moltó et al.，AIDS Res HumRetroviruses.2004；20(12)：1283-8；El-Sadr et al.，N Engl J Med.2006；355(22)：2283-96。这反映了：标准cART无法消除由潜伏感染细胞形成的病毒储库，在潜伏感染细胞中整合的原病毒在感染早期阶段保持静止和稳定；以及免疫应答无法在治疗中断之后有效遏制病毒反弹。

尽管cART导致对病毒载量的控制(从而阻止AIDS的发展和病毒传播)，但它有几个缺点：

1.非治愈性：cART是终身治疗。如果一个人停止治疗，即使是停止很短的时间，病毒载量也会在2至4周内反弹到初始水平，使这个人再次感染。

2.依从性问题：30％至50％的患者无法控制病毒载量，因为他们没有足够严格地遵循治疗方案。这与心理压力有很大关系-与看不到治愈希望的HIV共存影响患者的生命质量-并且即使没有这种心理压力，所有患者都会在不同程度上因他们的例行治疗而感到不便(“药丸疲劳(pill fatigue)”)。

3.抗性：HIV可以对cART产生抗性。

4.副作用：由于cART的高长期毒性，患者会经受严重的不良事件，例如心血管疾病、血脂异常、高血压、糖尿病、骨质疏松症和肾疾病。

5.高昂且永久的成本：使用cART治疗患者每年花费约

而患者一生中健康系统的总花费计算为/>

6.社会污名：围绕HIV的污名使人们不愿接受检测，或不愿透露他们的HIV状况；这还限制了他们获得可用的HIV治疗。

因此，在没有持续cART的情况下实现持续病毒控制的HIV治疗是所期望的。

已经评价了多种尝试在没有cART的情况下实现对HIV感染的最佳控制的策略。这些包括：早期治疗(在感染HIV之后的前6个月内开始)；cART强化；免疫治疗，包括白介素施用(IL-2、IL-7、IL-10、IL-12和IL-15)，用环孢素、霉酚酸、羟基脲、沙利度胺进行的治疗，抗体的被动施用等；以及旨在扩大由细胞毒性T淋巴细胞介导的应答的广泛多种治疗性疫苗。Buzón et al.，Nat Med.2010；16(4)：460-5；Autran et al.，AIDS.2008；22(11)：1313-22；Schooley et al.，J Infect Dis.2010；202(5)：705-16；Harrer et al.，Vaccine.2014；32(22)：2657-65。

已经在用自体树突细胞疫苗接种方法进行的疫苗接种策略之后观察到极小的临床作用，其能够显示在停止治疗之后与未接种疫苗的患者相比，接种疫苗的病毒设定点(setpoint)瞬时降低1log。García et al.，Sci Transl Med.2013；5(166)：166ra2。另外，来自一项试点研究的最新数据表明，在早期接受治疗的患者(感染HIV的6个月内)中通过治疗性疫苗使T细胞朝向HIV的保守区再教育可有助于使相当一部分参与者在治疗停止之后实现持久的HIV控制。Mothe et al.，CROI 2017，119LB。两组结果都为改进治疗性疫苗概念奠定了基础。

治疗性疫苗失败的一个重要原因是在载体中表达的抗原插入物(免疫原)的组合物、用于疫苗施用的其组合以及待施用的疫苗组分的给药方案。特别是，包含作为抗原的完整的HIV蛋白限制了疫苗对非特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)扩增的免疫原性作用：CTL应答模式，其在自然HIV感染情况下，已显示在大多数个体中对控制病毒复制无效。Mothe et al.，J Transl Med.2011；9(1)：208；Pereyra et al.，JVirol.2014；88(22)：12937-48。

在这方面，需要通过选择能够诱导对宿主更有益的T细胞应答的病毒序列来改进免疫原设计。Létourneau et al.，PLoS One.2007；2(10)：e984；Rolland et al.，PLoSPathogens.2007；3：1551-5；Mothe et al.，J Transl Med.2015；13(1)：60。

此外，HIV-1感染诱导强烈且广泛定向的I类和II类HLA限制性T细胞应答，对此一些特异性表位和限制性HLA等位基因与相对的体内病毒控制或其缺乏相关。Brander etal.，Curr Opin Immunol.2006；18(4)：430-7；

et al.，Virol.2006；80(6)：3122-5；Frahmet al.，Nat Immunol.2006；7(2)：173-8。其中，CD8+CTL对HIV-1Gag的应答最一致地与HIV-1进化枝B和C感染的二个组中的病毒载量降低相关。/>

et al.，Virol.2006；80(6)：3122-5；Kiepiela et al.，Nat Med.2007；13(1)：46-53。CD4+T细胞对Gag的应答也与相对HIV-1控制相关。Ranasinghe et al.，J Virol.2012；86(1)：277-83；Ranasinghe etal.，Nat Med.2013；19(7)：930-3。另外，CTL逃逸变体引起的严重健康降低以及病毒分离株之中Gag的保守水平提高可为Gag特异性T细胞应答提供特别的优势。

同时，也清楚并非所有Gag特异性应答都发挥相同的抗病毒活性，这表明对Gag组分的合理选择可以帮助将疫苗诱导的应答集中到最具保护性的靶标上。这也可能适用于所有其他病毒蛋白，因为它们可能含有一些对包含在疫苗中具有特殊价值的区域，而其他区域或蛋白质可能诱导不太有用的T细胞应答。因此，有效的疫苗设计应可能旨在诱导针对病毒的保守和易受攻击位点的广泛且均匀分布的应答，同时避免诱导针对如下区域的应答：该区域具有高度免疫原性但可充当潜在“诱饵”靶标并将应答递送远离更相关靶标。Rolland et al.，PLoS Pathogens.2007；3：1551-5；Kulkarni et al.，PLoS One.2013；8(3)：e60245；Kulkarni et al.，PLoS One.2014；9(1)：e86254；Dinges et al.，JVirol.2010；84(9)：4461-8；Kunwar et al.，PLoS One.2013；8(5)：e64405；Niu et al.，Vaccine.2011；29(11)：2110-9。

此外，还需要开发保护人免受HIV感染的预防性疫苗。尽管自1997年的峰值以来新的HIV感染已减少40％，但仅在2018年就有约170万人新感染HIV。

该目标已被证明是难以达到的。在迄今为止报告的HIV疫苗效力试验中，只有一项显示出泰国普通人群的HIV感染适度地相对减少了31％。Rerks-Ngarm S，PitisuttithumP，Nitayaphan S，et al.，N Engl J Med.2009；361：2209-2220。

表达完整HIV-1蛋白的多个T细胞疫苗候选者在大型人体临床试验中的失败和来自试验后分析的数据表明了对感染病毒毒株的筛选作用并表明需要改进疫苗免疫原设计。Buchbinder et al.，Lancet.2008；372(9653)：1881-93；Rerks-Ngarm et al.，N Engl JMed.2009；361(23)：2209-20；Hammer et al.，N Engl J Med.2013；369(22)：2083-92；Rolland et al.，Nat Med.2011；17(3)：366-71。

发明内容

在一个实施方案中，本发明涉及在有此需要的对象(例如，感染HIV的人)中诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的方法，其包括(a)向对象施用免疫原性有效量的编码免疫原性多肽的第一病毒载体的1至10次施用；以及(b)向对象施用免疫原性有效量的编码所述免疫原性多肽的第二病毒载体的1至10次施用；其中所述免疫原性多肽包含：

(i)与SEQ ID NO：1的序列具有至少90％同一性的序列，

(ii)与SEQ ID NO：2的序列具有至少90％同一性的序列，

(iii)与SEQ ID NO：3的序列具有至少90％同一性的序列，

(iv)与SEQ ID NO：4的序列具有至少90％同一性的序列，

(v)与SEQ ID NO：5的序列具有至少90％同一性的序列，

(vi)与SEQ ID NO：6的序列具有至少90％同一性的序列，

(vii)与SEQ ID NO：7的序列具有至少90％同一性的序列，

(viii)与SEQ ID NO：8的序列具有至少90％同一性的序列，

(ix)与SEQ ID NO：9的序列具有至少90％同一性的序列，

(x)与SEQ ID NO：10的序列具有至少90％同一性的序列，

(xi)与SEQ ID NO：11的序列具有至少90％同一性的序列，

(xii)与SEQ ID NO：12的序列具有至少90％同一性的序列，

(xiii)与SEQ ID NO：13的序列具有至少90％同一性的序列，

(xiv)与SEQ ID NO：14的序列具有至少90％同一性的序列，

(xv)与SEQ ID NO：15的序列具有至少90％同一性的序列，和

(xvi)与SEQ ID NO：16的序列具有至少90％同一性的序列。

在一个实施方案中，所述方法包括第一病毒载体的至少2次、至少3次、至少4次、至少5次、至少6次、至少7次、至少8次或至少9次施用和/或第二病毒载体的至少2次、至少3次、至少4次、至少5次、至少6次、至少7次、至少8次或至少9次施用。在一些实施方案中，所述免疫原性多肽包含：

(i)与SEQ ID NO：1的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，

(ii)与SEQ ID NO：2的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，

(iii)与SEQ ID NO：3的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，

(iv)与SEQ ID NO：4的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，

(v)与SEQ ID NO：5的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，

(vi)与SEQ ID NO：6的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，

(vii)与SEQ ID NO：7的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，

(viii)与SEQ ID NO：8的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，

(ix)与SEQ ID NO：9的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，

(x)与SEQ ID NO：10的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，

(xi)与SEQ ID NO：11的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，

(xii)与SEQ ID NO：12的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，

(xiii)与SEQ ID NO：13的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，

(xiv)与SEQ ID NO：14的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，

(xV)与SEQ ID NO：15的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列，和

(xvi)与SEQ ID NO：16的序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列。

在一个实施方案中，本发明涉及在有此需要的对象中治疗或预防入免疫缺陷病毒(HIV)感染或与HIV感染相关的疾病的方法，其包括(a)向对象施用免疫原性有效量的编码免疫原性多肽的第一病毒载体的1至10次施用；以及(b)向对象施用免疫原性有效量的编码所述免疫原性多肽的第二病毒载体的1至10次施用；其中所述免疫原性多肽包含：

(i)与SEQ ID NO：1的序列具有至少90％同一性的序列，

(ii)与SEQ ID NO：2的序列具有至少90％同一性的序列，

(iii)与SEQ ID NO：3的序列具有至少90％同一性的序列，

(iv)与SEQ ID NO：4的序列具有至少90％同一性的序列，

(v)与SEQ ID NO：5的序列具有至少90％同一性的序列，

(vi)与SEQ ID NO：6的序列具有至少90％同一性的序列，

(vii)与SEQ ID NO：7的序列具有至少90％同一性的序列，

(viii)与SEQ ID NO：8的序列具有至少90％同一性的序列，

(ix)与SEQ ID NO：9的序列具有至少90％同一性的序列，

(x)与SEQ ID NO：10的序列具有至少90％同一性的序列，

(xi)与SEQ ID NO：11的序列具有至少90％同一性的序列，

(xii)与SEQ ID NO：12的序列具有至少90％同一性的序列，

(xiii)与SEQ ID NO：13的序列具有至少90％同一性的序列，

(xiv)与SEQ ID NO：14的序列具有至少90％同一性的序列，

(xv)与SEQ ID NO：15的序列具有至少90％同一性的序列，和

(xvi)与SEQ ID NO：16的序列具有至少90％同一性的序列。

在一个实施方案中，该方法包括第一病毒载体的至少2次、至少3次、至少4次、至少5次、至少6次、至少7次、至少8次或至少9次施用和/或第二病毒载体的至少2次、至少3次、至少4次、至少5次、至少6次、至少7次、至少8次或至少9次施用。在另一个实施方案中，免疫原性多肽包含：

在一些实施方案中，本发明涉及在有此需要的对象中治疗或预防HIV感染或与HIV感染相关的疾病的方法，其包括(a)向对象施用免疫原性有效量的编码免疫原性多肽的第一病毒载体的1至5次施用；以及(b)向对象施用免疫原性有效量的编码所述免疫原性多肽的第二病毒载体的1至5次施用；其中所述免疫原性多肽包含：

(i)与SEQ ID NO：1的序列具有至少90％同一性的序列，

(ii)与SEQ ID NO：2的序列具有至少90％同一性的序列，

(iii)与SEQ ID NO：3的序列具有至少90％同一性的序列，

(iv)与SEQ ID NO：4的序列具有至少90％同一性的序列，

(v)与SEQ ID NO：5的序列具有至少90％同一性的序列，

(vi)与SEQ ID NO：6的序列具有至少90％同一性的序列，

(vii)与SEQ ID NO：7的序列具有至少90％同一性的序列，

(viii)与SEQ ID NO：8的序列具有至少90％同一性的序列，

(ix)与SEQ ID NO：9的序列具有至少90％同一性的序列，

(x)与SEQ ID NO：10的序列具有至少90％同一性的序列，

(xi)与SEQ ID NO：11的序列具有至少90％同一性的序列，

(xii)与SEQ ID NO：12的序列具有至少90％同一性的序列，

(xiii)与SEQ ID NO：13的序列具有至少90％同一性的序列，

(xiv)与SEQ ID NO：14的序列具有至少90％同一性的序列，

(xv)与SEQ ID NO：15的序列具有至少90％同一性的序列，和

(xvi)与SEQ ID NO：16的序列具有至少90％同一性的序列。

附图说明

图1示出了显示本发明的初免/加强策略在HIV-1阴性个体中的安全性和免疫原性的研究。

图2示出了显示本发明的初免/加强策略在HIV-1阳性个体中的安全性和效力的研究。

具体实施方式

本发明涉及在有此需要的对象中通过施用免疫原性有效量的称为HTI的HIV免疫原来治疗或预防人免疫缺陷病毒(HIV)感染或与HIV感染相关的疾病的方法。

定义

如本文所用，术语“佐剂”是指修饰免疫原作用而当其独自施用时几乎没有直接作用的免疫药剂。它通常包含在疫苗中以增强接受者针对所提供的抗原的免疫应答，同时将注射的外来物质保持在最低限度。佐剂被添加到疫苗中以刺激免疫系统针对靶抗原的应答，但其本身并不赋予免疫力。可用的佐剂的非限制性实例包括：矿物盐、多核苷酸、聚精氨酸、ISCOM、皂苷、单磷酰基脂质A、咪喹莫特、CCR-5抑制剂、毒素、聚磷腈、细胞因子、免疫调节蛋白、免疫刺激融合蛋白、共刺激分子、及其组合。矿物盐包括但不限于AlK(SO₄)₂、AlNa(SO₄)₂、AlNH(SO₄)2、二氧化硅、明矾、Al(OH)₃、Ca₃(PO₄)₂、高岭土或碳。可用的免疫刺激多核苷酸包括但不限于具有或不具有免疫刺激复合物(ISCOM)的CpG寡核苷酸、具有或不具有聚精氨酸、聚IC或聚AU酸的CpG寡核苷酸。毒素包括霍乱毒素。皂苷包括但不限于QS21、QS17或QS7。可用的免疫刺激融合蛋白的一个实例是IL-2与免疫球蛋白的Fc片段的融合蛋白。可用的免疫调节分子包括但不限于CD40L和CD1a配体。可用作佐剂的细胞因子包括但不限于IL-1、IL-2、IL-4、GMCSF、IL-12、IL-15、IGF-1、IFNα、IFN-β和干扰素γ。另外，示例性的是胞壁酰二肽、N-乙酰基-胞壁酰-L-苏氨酰基-D-异谷氨酰胺(thr-DMP)、N-乙酰基-去胞壁酰-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰胺(CGP11687，也称为nor-MDP)、N-乙酰基胞壁酰-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰胺基-L-丙氨酸-2-(1`2`-二棕榈酰基-sn-甘油-3-羟基磷酰基氧基)-乙胺(CGP19835A，也称为MTP-PE)、在2％角鲨烯/

乳液中的RIBI(MPL+TDM+CWS)、脂多糖及其多种衍生物(包括脂质A)、弗氏完全佐剂(Freund′s Complete Adjuvant，FCA)、弗氏不完全佐剂、默克佐剂65(Merck Adjuvant 65)、多核苷酸(例如，聚IC和聚AU酸)、来自结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的蜡D、存在于短小棒状杆菌(Corynebacteriumparvum)、百日咳杆菌(Bordetella pertussis)和布鲁氏菌(Brucella)属成员中的物质、Titermax、Quil A、ALUN、脂质A衍生物、霍乱毒素衍生物、HSP衍生物、LPS衍生物、合成肽基质或GMDP、Montanide ISA-51和QS-21、CpG寡核苷酸、聚I：C和GMCSF。参见Osol A.，Ed.，Remington′s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.，Easton，PA，US，1980，pp.1324-1341)，Hunter R，US 5,554,372，和Jager E，Knuth A，WO1997028816。也可以使用佐剂的组合。

如本文所用，术语“AIDS”是指HIV感染的症状期，并且包括获得性免疫缺陷综合征(通常称为AIDS)和“ARC”二者，或AIDS相关综合征。Adler et al.，Brit.Med.J.1987；294：1145-1147。AIDS的免疫学和临床表现是本领域公知的并且包括例如由免疫缺陷引起的机会性感染和癌症。

如本文所用，术语“氨基酸接头”是指除了出现在天然蛋白质中特定位置处的氨基酸序列之外的氨基酸序列，并且通常被设计为是柔性的或被设计为在两个蛋白质部分之间插入结构，例如α-螺旋。接头也称为间隔子。接头通常是非抗原性的并且可以具有基本上任何长度(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个氨基酸)。接头也可以是位置或序列，在该位置或序列中细胞抗原加工机制可以在不破坏有效T细胞表位的情况下启动免疫原性多肽的降解。

如本文所用，术语“经密码子优化的”涉及改变核酸分子中的密码子以反映宿主生物体的典型密码子选用而不改变由DNA编码的多肽，用于改善表达的目的。之前已经报道了大量用于密码子优化的方法和软件工具。Narum et al.，Infect.Immun.2001；69(12)：7250-7253，Outchkourov et al.，Protein Expr.Purif.2002；24(1)：18-24，Feng L，etal.，Biochemistry 2000；39(50)：15399-15409，和Humphreys et al.，ProteinExpr.Purif.2000；20(2)：252-2。

本文所用的术语“包括”或“包含”根据普遍接受的专利实践也涵盖了“由......组成”和“基本上由......组成”。

如本文所用，表达“与HIV感染相关的疾病”包括对象已发展为AIDS的状态，但也包括感染了HIV的对象未表现出疾病的任何体征或症状的状态。因此，本发明的疫苗在施用于不具有感染的临床体征的对象时可具有预防活性，因为它们可预防疾病的发作。免疫原性组合物能够预防或减缓这样的对象中健康CD4+T细胞的感染和破坏。它还指预防和减缓获得性免疫缺陷疾病的症状例如极低CD4+T细胞计数和机会性病原体(例如分枝杆菌属、卡氏肺孢菌(Pneumocystis carinii)和隐球菌肺孢菌(Pneumocystis cryptococcus))的重复感染的发作。有益或期望的临床结果包括但不限于：绝对初始CD4+T细胞计数提高(范围为10至3520)、CD4+T细胞相比于总循环免疫细胞的百分比提高(范围为1至50％)和/或CD4+T细胞计数(为在未感染对象中正常CD4+T细胞计数的百分比)提高(范围为1至161％)。

如本文所用，术语“变体”和“片段”是指由SEQ ID NO：1至16中任一个通过在单个SEQ ID NO.的N端或在C端缺失一个或更多个末端氨基酸衍生的多肽。变体或片段优选地长度为至少8个氨基酸或其相应SEQ ID NO的多至10％、多至20％、多至30％、多至40％、多至50％、多至60％、多至70％、多至80％、多至90％或多至99％。

术语“HTI”和“HTI免疫原”是指被鉴定为HTI并在美国专利第9,988,425号(其全部内容通过引用并入本文)中所公开的免疫原性多肽。

如本文所用，术语“人免疫缺陷病毒”或“HIV”一般是指人免疫缺陷病毒并且包括1型HIV(“HIV-1”)、2型HIV(“HIV-2”)或其他HIV病毒，包括例如HIV-1、HIV-2、新兴HIV和其他HIV亚型以及HIV变体，例如广泛分散或地理上孤立的变体和猿免疫缺陷病毒(simianimmunodeficiency virus，“SIV”)。例如，可以确定以下的祖先病毒基因序列：HIV-1的env和gag基因，例如HIV-1亚型A、B、C、D、E、F、G、H、J和K，和亚型间重组体，例如AG、AGI，以及M、N、O组或HIV-2病毒或HIV-2亚型A或B。HIV-1、HIV-2和SIV包括但不限于胞外病毒颗粒以及与其各自所感染细胞缔合的病毒的形式。

如本文所用，术语“诱导免疫应答”旨在意指在有此需要的对象中引起针对感染(例如HIV感染)的期望的免疫应答或作用，优选地出于治疗性目的。该术语涵盖提供用于针对病原体(例如HIV)进行治疗的治疗性免疫。在一个实施方案中，该术语是指引起或改善针对HIV感染的细胞免疫，例如T细胞应答。通常地，施用本发明的初免和加强疫苗组合物将具有在HIV感染或发生HIV感染的特征性症状之后产生针对HIV的免疫应答的治疗性目的。

如本文所用，术语“免疫原性有效量”旨在意指免疫原性组合物(例如，编码免疫原性多肽例如HTI免疫原的载体)的足以在有此需要的对象中诱导期望的免疫作用或免疫应答的量。在一个实施方案中，免疫原性有效量意指足以在有此需要的对象中诱导免疫应答的量。在另一个实施方案中，免疫原性有效量意指足以在有此需要的对象中产生免疫力，例如提供针对例如HIV感染的疾病的治疗性作用的量。免疫原性有效量可根据多种因素而变化，例如对象的身体状况、年龄、体重、健康等。本领域普通技术人员可根据本公开内容容易地确定免疫原性有效量。

如本文所用，术语“可操作地连接”旨在意指目的核苷酸序列以允许核苷酸序列表达的方式与调控序列连接(例如，在体外转录/翻译系统中或当载体被引入到宿主细胞中时在宿主细胞中)。参见Auer H，Nature Biotechnol.2006；24：41-43。

如本文所用，术语“肽标签”或“标签”是指肽或氨基酸序列，其可用于所述免疫原的分离或纯化。因此，所述标签能够以高亲和力与一种或更多种配体，例如亲和基质(例如层析支持物或珠)的一种或更多种配体结合。可用于分离或纯化蛋白质的标签的举例说明性、非限制性实例包括Arg-标签、FLAG-标签、His-标签或Strep-标签；能够被抗体识别的表位，例如c-myc-标签(被抗c-myc抗体识别)、SBP-标签、S-标签、钙调蛋白结合肽、纤维素结合结构域、几丁质结合结构域、谷胱甘肽S-转移酶标签、麦芽糖结合蛋白、NusA、TrxA、DsbA或Avi-标签；氨基酸序列，例如AHGHRP(SEQ ID NO：53)、PIHDHDHPHL VIHS(SEQ ID NO：54)或GMTCXXC(SEQ ID NO：55)；或β-半乳糖苷酶。Terpe et al.，Appl.Microbiol.Biotechnol.2003；60：523-525。

术语“分泌信号肽”是指蛋白质的高度疏水的氨基酸序列(例如，优选为15至60个氨基酸长)，其必须穿过膜以到达其发挥功能的细胞位置。通过与信号识别颗粒结合，这些序列将新生蛋白-核糖体复合物引导至膜，在那里蛋白质在翻译过程中插入。信号肽引导多种膜(例如，内质网、线粒体、叶绿体、过氧化物酶体)对蛋白质的翻译摄取。非膜蛋白上的前导信号序列最终会被特异性肽酶去除。所使用的一些信号肽包括：MCP-3趋化因子，用于促进抗原呈递细胞的分泌和吸引；联蛋白(CATE)来源的肽，用于提高蛋白酶体降解；和溶酶体相关蛋白LAMP1，用于靶向MHC II区室。Rosati et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2009；106：15831-15836。

如本文所用，表达“顺序施用”意指施用不是同时的，而是进行第一次施用，然后是一次或更多次的依次施用。

如本文所用，术语“预防”及其变形是指在动物中抑制疾病的开始或减少疾病的发生。预防可以是完全的(例如，对象中完全没有病理细胞)。预防也可以是部分的，使得例如对象中病理细胞的出现比没有本发明时出现的少。预防还指降低对临床病症的易感性。

如本文所用，术语“治疗”或其变形是指施用本发明的免疫原性组合物或施用含有它的药物以在临床体征出现之前或之后控制疾病的进展。疾病进展的控制被理解为意指有益的或期望的临床结果，包括但不限于症状的减轻、疾病的持续时间的降低、病理状态的稳定(特别是为了避免另外的恶化)、延迟疾病的进展，改善病理状态和缓解(部分和全部)。与不应用治疗的预期存活相比，疾病进展的控制还涉及存活的延长。

如本文所用，术语“疫苗”是指通过诱导包括免疫记忆在内的适应性免疫应答在对象中建立或改善针对特定疾病的免疫的物质或组合物。疫苗通常含有类似于致病微生物的病原体或其部分(例如，多肽)。疫苗可以是预防性的或治疗性的。

如本文所用，术语“载体”是指如本文所用的“包含”、“含有”或“编码”本文所述的免疫原性多肽(例如，HTI免疫原)的核酸分子或病毒载体。例如，载体包括但不限于核酸载体(例如，线性或环状的核酸分子，其可操作地与在目的宿主细胞中或根据目的表达盒提供其自主复制的另外的区段连接)。载体还包括但不限于如本文所用的“包含”、“含有”或“编码”免疫原性多肽或编码免疫原性多肽的核酸分子的病毒载体。

与感染HIV的人相关的术语“病毒学抑制”意指在人中维持可测量的HIV病毒载量，其为少于2000HIV RNA拷贝/mL血液或血浆，例如，少于1000拷贝/mL、少于500拷贝/mL、少于100拷贝/mL、少于50拷贝/mL、少于40拷贝/mL、少于30拷贝/mL或少于20拷贝/mL。

如在本公开内容和权利要求中使用的，除非上下文另有明确规定，否则没有数量词修饰的名词包括一个/种或更多个/更多种。

本文中在例如“A和/或B”的短语中使用的术语“和/或”旨在包括A和B二者；A或B；A(单独)；和B(单独)。同样，在例如“A、B和/或C”的短语中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下实施方案中的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。

治疗或预防HIV感染或与HIV感染相关的疾病的方法

一般而言，本发明涉及在有此需要的对象中治疗或预防HIV感染或与HIV感染相关的疾病的方法，其包括在初免步骤中向对象施用本发明的HTI免疫原，然后在加强步骤中向对象施用本发明的HTI免疫原。

HTI免疫原

本发明的方法涉及施用HIV免疫原。国际公开第WO2013/110818号和美国专利第9,988,425号(其各自通过引用整体并入本文)描述了用于HIV疫苗接种的免疫原(本文称为“HTI免疫原”、“HTI”或“免疫原性多肽”)。HIV-1病毒的Gag、Pol、Vif和Nef蛋白中的16个区域是相对保守的，并且是具有＜5000个HIV-1 RNA拷贝/mL的降低的病毒载量的HIV患者的靶标。Hancock et al.，PLOS Pathogens 2015；11(2)：e1004658；Mothe et al.，J.Translational Med.2015；13：60。HIV蛋白的这些区域形成了用于HIV治疗性疫苗接种的免疫原的基础。下表1总结了免疫原靶向的HIV-1区域：

表1：

HIV-1蛋白	位置(HXB2)	SEQ ID NO
			p17	17-94	1
p24	30-43	2
			p24	61-71	3
p24	91-150	4
			p24	164-177	5
p24	217-231	6
			p2p7p1p6	63-89	7
蛋白酶	45-99	8
			逆转录酶	34-50	9
逆转录酶	210-264	10
			逆转录酶	309-342	11
整合酶	210-243	12
			整合酶	266-282	13
Vif	25-50	14
			Vif	166-184	15
Nef	56-68	16

HIV编号如Korber et al.，Human Retroviruses and AIDS 1998.TheoreticalBiology and Biophysics Group，Los Alamos National Laboratory，Los Alamos，NM，pp.III-102-111中所述(其全部内容通过引用在此并入)。

在一些实施方案中，HTI免疫原可以通过包括不同的组分和载体的异种初免-加强疫苗接种来施用，这些组分和载体可以选自病毒载体(例如，痘病毒、腺病毒、慢病毒、沙粒病毒等)、细菌载体、多肽或抗体。治疗性疫苗顺序施用的目的是实现所谓的“功能性治愈”，其中感染HIV的参与者可以在没有抗逆转录病毒治疗的情况下控制病毒复制。

在一些实施方案中，本发明的方法包括施用编码免疫原性多肽(例如，HTI免疫原)的载体(例如，病毒载体)，其中所述免疫原性多肽包含：

i.与SEQ ID NO：1具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列；

ii.与SEQ ID NO：2具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列；

iii.与SEQ ID NO：3具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列；

iv.与SEQ ID NO：4具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列；

v.与SEQ ID NO：5具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列；

vi.与SEQ ID NO：6具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列；

vii.与SEQ ID NO：7具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列；

viii.与SEQ ID NO：8具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列；

ix.与SEQ ID NO：9具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列；

x.与SEQ ID NO：10具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列；

xi.与SEQ ID NO：11具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列；

xii.与SEQ ID NO：12具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列；

xiii.与SEQ ID NO：13具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列；

xiv.与SEQ ID NO：14具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列；

xv.与SEQ ID NO：15具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列；和

xvi.与SEQ ID NO：16具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。在一些实施方案中，序列(i)至(xvi)中的至少两个通过单、双或三丙氨酸氨基酸接头连接，其中所述接头导致在邻接(adjoining)序列之间的连接区中形成AAA序列，和/或其中(i)至(xvi)中每一个的序列的长度为11至85个氨基酸，例如11至82个、11至80个或11至78个氨基酸。

在一些实施方案中，免疫原性多肽包含具有在SEQ ID NO：1至16中的任一个中具有不超过1、2或3个替换的氨基酸序列的序列。在一些实施方案中，免疫原性多肽包含具有根据SEQ ID NO：1至16的氨基酸序列的序列。

在一些实施方案中，免疫原性多肽包含与SEQ ID NO：17具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，免疫原性多肽包含根据SEQ ID NO：17的氨基酸序列。

在一些实施方案中，免疫原性多肽由任何合适的核酸序列编码。在一些实施方案中，免疫原性多肽由与SEQ ID NO：100或101具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的核酸序列编码。在一些实施方案中，免疫原性多肽由SEQ ID NO：100或101的核酸序列编码。在一些实施方案中，核酸编码包含SEQ ID NO：99的免疫原性多肽。在一些实施方案中，核酸包含在病毒载体(例如，MVA或ChAd载体)或核酸载体中。

在另一些实施方案中，免疫原性多肽包含SEQ ID NO：1至16。在另一些实施方案中，免疫原性多肽包含SEQ ID NO：1至16的序列或其变体或片段。在一些实施方案中，变体具有至少8个氨基酸的长度，并且不包含除根据SEQ ID NO：1至16中任一个的氨基酸序列或其变体之外的8个或更多个氨基酸长度的来源于HIV基因组的任何序列段(stretch)。在另一些实施方案中，变体与其相关序列等同并且来源于不同的HIV毒株或者是人工HIV序列。在这方面，等同意指一个或更多个氨基酸残基不同，但对应于相同的序列(例如，由基因组中的位置或序列相似性确定)。换言之，在一个实施方案中，变体是“天然存在的变体”，其指源自当前或以前的循环病毒的HIV基因组的核酸序列并且可以从现有数据库(例如，GenBank和Los Alamos序列数据库)中鉴定。循环病毒的序列也可以通过分子生物学方法确定。参见Brown T，″Gene Cloning″(Chapman & Hall，London，GB，1995)；Watson et al.，″Recombinant DNA″，2nd Ed.(Scientific American Books，New York，N.Y.，US，1992)；Sambrook et al.，″Molecular Cloning.A Laboratory Manual″(Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，US，1989)。在一些实施方案中，SEQ ID NO：1至16中任一个的变体与其相应序列(即，SEQ ID NO：1至16)具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的氨基酸序列同一性。适用于确定序列同一性和序列相似性百分比的算法的实例是BLAST和BLAST 2.0算法。Altschul et al.，Nuc.AcidsRes.1977；25：3389-3402和Altschul et al.，J.Mol.Biol.1990；215：403-410。BLAST和BLAST 2.0程序可用于确定本发明的核酸和蛋白质的序列同一性百分比。用于进行BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心(National Center for BiotechnologyInformation)公开获得。参见http：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/blast.cgi，January2012。

在一些实施方案中，免疫原性多肽包含至少两个、至少三个或至少四个选自SEQID NO：1至16或其变体的序列，其中当免疫原包含仅两个、三个或四个选自SEQ ID NO：1至16的序列时，则并非所有这些序列都选自SEQ ID NO：3、5、6和16。在另一个实施方案中，所述免疫原具有包含至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或至少十个选自SEQ ID NO：1至16或其变体的序列的氨基酸序列，其中当免疫原包含仅两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个选自SEQ ID NO：1至16的序列时，则并非所有这些序列都选自SEQ ID NO：1至16。

在另一个实施方案中，变体或片段的长度为8至40个氨基酸，例如11至27个氨基酸。在一些实施方案中，变体或片段不包含与SEQ ID NO：1至16中的任一个邻接的氨基酸接头。在一些实施方案中，所述变体或片段的C端氨基酸既不是G、P、E、D、Q、N、T、S也不是C。

在一些实施方案中，变体或片段与热激蛋白(例如Hsp10、Hsp20、Hsp30、Hsp40、Hsp60、Hsp70、Hsp90、gp96或Hsp100)组合或融合。

在一些实施方案中，变体或片段选自SEQ ID NO：17至45。

在一些实施方案中，免疫原性多肽的至少两个序列通过氨基酸接头邻接。在一些实施方案中，接头具有氨基酸序列A、AA或AAA。在一些实施方案中，如果相对于接头位于N端的序列的C端残基或位于C端的序列的N端残基是丙氨酸残基，则接头可以被缩短使得在邻接序列之间的连接区中形成AAA序列。因此，在一些实施方案中，如果相对于接头位于N端的序列的C端残基是丙氨酸，或者如果相对于接头位于C端的序列的N端残基是丙氨酸，则接头具有序列AA。在另一个实施方案中，如果相对于接头位于N端的序列的C端残基和相对于接头位于C端的序列的N端残基都是丙氨酸，则接头具有序列A。

在另一个实施方案中，免疫原性多肽还包含在N端的分泌信号肽。在一些实施方案中，信号肽增强免疫原从表达免疫原的细胞的分泌。在一些实施方案中，信号肽来源于GMCSF(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)，例如，随后是缬氨酸以提高稳定性。GMCSF信号肽的序列是例如MWLQSLLLLGTVACSIS(SEQ ID NO：46)或MWLQSLLLLGTVACSISV(SEQ ID NO：47)。

在另一个实施方案中，免疫原性多肽还包含肽标签。在一些实施方案中，肽标签位于信号肽和免疫原性多肽之间的N端或终止密码子之前的C端。

在一些实施方案中，肽标签是FLAG肽。FLAG系统使用短的、亲水的8氨基酸肽，其与目的重组蛋白融合。FLAG肽包含针对数种高特异性的抗FLAG单克隆抗体(M1、M2、M5；Sigma-AldrichCorp.，SaintLouis，MO，US)的结合位点，其可用于评估目的蛋白在来自经转染细胞的材料上的表达。由于FLAG肽标签的尺寸较小，它通常不会遮挡其他表位、结构域或改变融合蛋白的功能、分泌或转运。在一些实施方案中，FLAG肽具有序列DYKDDDDKL(SEQ ID NO：48)。在一些实施方案中，仅将肽标签用于免疫原的表达分析和/或纯化，并且在使用它引发免疫应答之前将其去除。

在一些实施方案中，免疫原性多肽的序列包含至少一个抗逆转录病毒抗性突变位点。

载体

在本发明方法的一些实施方案中，HTI免疫原通过载体施用。在一些实施方案中，载体是表达载体。在一些实施方案中，载体是病毒载体。可用于本发明的载体的实例包括但不限于：原核载体，例如pUC18，pUC19，和Bluescript质粒及其衍生物，例如mp18、mp19、pBR322、pMB9、ColEl、pCR1和RP4质粒；噬菌体和穿梭载体，例如pSA3和pAT28载体；酵母菌中的表达载体，例如2微米质粒型载体；整合质粒；YEP载体；着丝粒质粒和类似物；昆虫细胞中的表达载体，例如pAC系列和pVL系列的载体；植物中的表达载体，例如pIBI、pEarleyGate、pAVA、pCAMBIA、pGSA、pGWB、pMDC、pMY、pORE系列的载体和类似物；和基于病毒载体(例如，改良安卡拉痘苗(modified vaccinia Ankara，MVA)、腺病毒(例如，黑猩猩腺病毒(ChAd))、与腺病毒、逆转录病毒和慢病毒相关的病毒)以及非病毒载体的高级真核细胞中的表达载体，例如pSilencer 4.1-CMV(

Life Technologies Corp.，Carlsbad，CA，US)、pcDNA3、pcDNA3.1/hyg pHCMV/Zeo、pCR3.1、pEFl/His、pIND/GS、pRc/HCMV2、pSV40/Zeo2、pTRACER-HCMV、pUB6N5-His、pVAXl、pZeoSV2、pCI、pSVL、pKSV-10、pBPV-1、pML2d和pTDT1载体。

在一些实施方案中，载体包含启动子和多腺苷酸化位点。在一些实施方案中，载体包含哺乳动物启动子和多腺苷酸化位点。在一些实施方案中，启动子是人巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)启动子。在一些实施方案中，多腺苷酸化位点是牛生长激素(bovine growth hormone，BGH)多腺苷酸化位点。本发明的载体可以被修饰以优化细菌中的载体复制，并且还可以包含选择基因，例如编码赋予针对抗生素的抗性的蛋白质的基因。在一些实施方案中，载体包含卡那霉素抗性基因。

在一些实施方案中，载体是病毒载体，例如含有编码本发明的HTI免疫原的核酸的病毒。在一些实施方案中，病毒具有低毒性和/或是遗传稳定的。在一些实施方案中，病毒载体是逆转录病毒，例如痘病毒(例如改良安卡拉痘苗(MVA))、慢病毒、腺病毒(例如黑猩猩腺病毒(ChAd))、沙粒病毒或腺相关病毒(AAV)。

通常，可用于本发明的腺病毒载体是使用包含完整的重组腺病毒基因组的核酸产生的。可用于本发明的腺病毒载体通常是复制缺陷型的。在这些实施方案中，通过使对病毒复制至关重要的区域(例如E1区域)缺失或失活来使病毒成为缺陷型的。包装细胞系通常用于产生用于本发明的足够量的腺病毒载体。包装细胞系是包含在复制缺陷型载体中已缺失或失活的那些基因的细胞，从而允许病毒在细胞中复制。在一些实施方案中，腺病毒是猿腺病毒(SAd)或黑猩猩腺病毒(ChAd)(例如，复制缺陷型ChAd)。示例性黑猩猩腺病毒载体已在例如美国专利第9,714,435号(通过引用整体并入本文)中进行了描述。

在一些实施方案中，本发明的方法包括施用在黑猩猩腺病毒载体中的HTI免疫原(例如，ChAdOx1.HTI)作为初免疫苗。ChAdOx1是基于黑猩猩腺病毒分离株Y25的复制缺陷型重组黑猩猩腺病毒(ChAd)载体。ChAdOx1.HTI是编码HTI序列的基于黑猩猩腺病毒分离株Y25的复制缺陷型重组黑猩猩腺病毒(ChAd)载体。ChAdOx1.HTI是通过将HTI抗原序列亚克隆到通用ChAdOx1 BAC中以诱导HIV-1特异性T细胞免疫应答而获得的。将由该亚克隆得到的质粒(pC255；40,483kbp)线性化并转染到商业HEX293A

细胞中以产生载体化的疫苗ChAdOx1.HTI。ChAdOx1.HTI载体的构建描述于A./>

et al.，Vaccines(Aug.2019)7(3)：78和B.Ondondo et al.，Mol.Ther.(2016)24：832-842(其各自的全部内容都通过引用并入本文)中。

用于本发明方法的加强疫苗通常包含编码本文公开的免疫原性多肽的一个或更多个MVA载体。在一些实施方案中，MVA是安全性增强的毒株，因为i)能够在体外在鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast，CEF)中生殖复制，但不能够在人细胞系中生殖复制，如在人角质形成细胞细胞系HaCaT，人胚肾细胞系293、人骨骨肉瘤细胞系143B以及人宫颈腺癌细胞系HeLa中；ii)无法在不能产生成熟B和T细胞并因此免疫严重受损且高度易感于复制病毒的小鼠模型中复制；以及iii)当与DNA初免/牛痘病毒加强方案相比时，在牛痘病毒初免/牛痘病毒加强方案中诱导至少相同水平的特异性免疫应答。在一些实施方案中，MVA毒株是MVA-BN。示例性MVA载体描述于Barouch et al.Cell；2013，155(3)：531-539(通过引用整体并入本文)中。

在一些实施方案中，本发明的方法包括施用在MVA载体中的HTI免疫原(例如，本文所述的MVA.HTI)。MVA.HTI是活的、减毒的重组牛痘(痘)病毒，其通过在培养的含有来自亲本病毒基因组的六个大缺失的鸡胚成纤维细胞(CEF)中连续传代而减毒。已将编码插入物HTI的转基因插入到MVA中，以诱导HIV-1特异性T细胞免疫应答。插入之后MVA.HTI的大小估计为约7,290kbp。MVA.HTI载体的构建公开于美国专利公开第_20190055289号和Létourneau S，Im EJ，Mashishi T，Brereton C，Bridgeman A，et al.(2007)Design andPre-Clinical Evaluation of a Universal HIV-1 Vaccine PLOS ONE 2(10)：e984.Doi：10.1371/journal.pone.0000984_(其各自的全部内容通过引用并入本文)中。

另外的给药和给药方案

在一些实施方案中，本发明的方法包括：(a)向对象施用编码HTI免疫原的第一病毒载体的1至10次(即1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次)施用；以及(b)向对象施用编码HTI免疫原的第二病毒载体的1至10次(即1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次)施用。在一个实施方案中，第一病毒载体施用一次并且第二病毒载体施用一次。在一个实施方案中，没有其他的编码HTI免疫原的载体与第一病毒载体和第二病毒载体联合施用。

在一些实施方案中，该方法包括(a)向对象施用编码HTI免疫原的第一载体(例如，病毒载体)的1至4次施用，以及(b)向对象施用编码HTI免疫原的第二载体(例如，病毒载体)的1至4次施用。在一些实施方案中，该方法包括(a)向对象施用编码HTI免疫原的第一病毒载体的1至4次施用；以及(b)向对象施用编码HTI免疫原的第二病毒载体的1至4次施用。

在一些实施方案中，该方法包括向对象施用编码HTI免疫原的第一病毒载体的2次施用。在一些实施方案中，该方法包括向对象施用编码HTI免疫原的第一病毒载体的3次施用。在一些实施方案中，该方法包括向对象施用编码免疫原性多肽的第二病毒载体的2次施用，随后是编码免疫原性多肽的第一病毒载体的1次施用。在一些实施方案中，该方法包括向对象施用编码HTI免疫原的第一病毒载体的2次施用；以及向对象施用编码HTI免疫原的第二病毒载体的3次施用。在一些实施方案中，该方法包括向对象施用编码免疫原性多肽的MVA载体的2次施用；以及向对象施用编码免疫原性多肽的ChAd载体的2次施用，随后是编码免疫原性多肽的MVA载体的1次施用。在这样的方法的一些实施方案中，第一病毒载体(例如，ChAdOx1.HTI)以约1×10⁸至约1×10¹¹个病毒颗粒(viral particle，vp)的剂量施用。在一个具体的实施方案中，第一病毒载体是ChAdOx1.HTI并且以约5×10¹⁰vp的剂量施用。在一些实施方案中，第二病毒载体(例如，MVA.HTI)以约1×10⁶至约1×10¹⁰噬斑形成单位(plaque forming unit，pfu)的剂量施用。在一个具体的实施方案中，第二病毒载体是MVA.HTI并且以约2×10⁸pfu的剂量施用。在本发明的方法的一个实施方案中，第一病毒载体是ChAdOx1.HTI并且以约5×10¹⁰vp的剂量向有此需要的对象施用，以及第二病毒载体是MVA.HTI并且在施用第一病毒载体之后约8周以约2×10⁸pfu的剂量向对象施用。在一些实施方案中，第一病毒载体是如上所述的MVA载体。在一些实施方案中，第二病毒载体是ChAd载体。

在另一些实施方案中，该方法包括(a)向对象施用编码免疫原性多肽的第一病毒载体的2次施用，每次间隔约12周的时间；以及(b)向对象施用编码免疫原性多肽的第二病毒载体的2次施用，每次间隔约12周的时间；并且其中(b)的施用与(a)的施用间隔约12周的时间。在一些实施方案中，(a)的施用剂量为约5×10¹⁰个病毒颗粒，和/或(b)的施用剂量为约2×10⁸pfu。在一些实施方案中，第一病毒载体是ChAd载体。在一些实施方案中，第二病毒载体是MVA载体。

本发明的免疫原性多肽和编码免疫原性多肽的多核苷酸和载体可以以多种途径施用，例如通过黏膜，例如经口和经鼻、经肺、肌内、皮下或皮内途径。

本发明的免疫原性多肽和编码免疫原性多肽的多核苷酸和载体也可以在包含可药用载体的药物组合物(在本文中也称为疫苗或疫苗制剂)中施用。可药用载体的实例包括但不限于固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包封材料或任何常规类型的制剂助剂。其他合适的可药用载体包括但不限于水、右旋糖、甘油、盐水、乙醇及其组合。在一些实施方案中，可药用载体可含有另外的试剂，例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂或增强制剂有效性的佐剂。

另外，水性组合物(例如用于制备HIV疫苗制剂的那些)可以以无菌形式制备，并且当旨在用于通过除经口施用以外的其他方式递送时通常可以是等张的。所有组合物可任选地含有赋形剂，例如在Rowe et al，Handbook of Pharmaceutical Excipients，6^thedition，American Pharmacists Association，2009中所示的那些。赋形剂可包括抗坏血酸和其他抗氧化剂、螯合剂(例如EDTA)、碳水化合物(例如糊精)、羟烷基纤维素、羟烷基甲基纤维素、硬脂酸等。

在一些实施方案中，药物组合物包含0.5mL Tris缓冲液(10mM Tris HCl，pH 7.7，140mM NaCl)。在一些实施方案中，药物组合物包含在0.5mL Tris缓冲液(10mM Tris HCl，pH 7.7，140mM NaCl)中的2×10⁸噬斑形成单位(PFU)的编码HTI免疫原的病毒载体。在一些实施方案中，药物组合物包含在0.5mL Tris缓冲液(10mM Tris HCl，pH 7.7，140mM NaCl)中的2×10⁸噬斑形成单位(PFU)的编码HTI免疫原的MVA载体。在一些实施方案中，药物组合物包含在0.5mL Tris缓冲液(10mM Tris HCl，pH 7.7，140mM NaCl)中的2×10⁸噬斑形成单位(PFU)的MVA载体，所述MVA载体包含编码具有SEQ ID NO：99的氨基酸序列的免疫原性多肽的核酸。在一些实施方案中，药物组合物包含在0.5mL Tris缓冲液(10mM Tris HCl，pH7.7，140mM NaCl)中的2×10⁸PFU的MVA载体，所述MVA载体包含含有SEQ ID NO：100或101的序列的核酸。

在一些实施方案中，本发明的药物组合物包含病毒载体，例如，ChAdOxl.HTI和L-组氨酸：10mM；NaCl：35mM；蔗糖：7.5％(w/v)；MgCl₂：1mM；EDTA二钠：0.1mM；吐温80(聚山梨酯-80)：0.1％(w/v)；乙醇：0.5％(v/v)；HCl：调节至pH 6.6。在一个具体的实施方案中，药物组合物包含5×10¹⁰vp的ChAdOx1.HTI和L-组氨酸：10mM；NaCl：35mM；蔗糖：7.5％(w/v)；MgCl₂：1mM；EDTA二钠：0.1mM；吐温80(聚山梨酯-80)：0.1％(w/v)；乙醇：0.5％(v/v)；HCl：调节至pH 6.6。

应当理解，本文中涉及免疫原性多肽或编码免疫原性多肽的核酸的施用的描述也适用于含有其的药物组合物或疫苗的施用。

药物组合物中病毒的量可以通过本领域已知的任何方式测量。该量可以通过大量测量(bulk measurement)一定量的水性组合物中病毒颗粒(vp)的数量来确定，例如通过流式细胞术。或者，该量可以通过组合物中病毒的活性来确定，例如通过噬斑测定。基于噬斑的测定可用于确定根据感染剂量的病毒浓度。病毒噬斑测定确定病毒样品中噬斑形成单位(pfu)的数量，其可用作病毒量的测量。Kaufmann et al.2002；Methods in MicrobiologyVol.32：Immunology of Infection.Academic Press.ISBN0-12-521532-0。

在一些实施方案中，编码本发明的免疫原性多肽的病毒载体(例如，MVA或ChAd载体)以以下剂量施用：约1×10⁷噬斑形成单位(pfu)至约1×10⁹pfu，例如约5×10⁷pfu至约1×10⁹pfu，约1×10⁸pfu至约1×10⁹pfu，约5×10⁸pfu至约1×10⁹pfu。在一些实施方案中，以约5×10⁷pfu至约5×10⁸pfu的剂量施用编码本发明的免疫原性多肽的病毒载体。在一些实施方案中，以约2.5×10⁸pfu的剂量施用编码本发明的免疫原性多肽的病毒载体。在一些实施方案中，以约1×10⁷pfu、约1×10⁸pfu、约1×10⁹pfu、约5×10⁷pfu或约5×10⁸pfu的剂量施用编码本发明的免疫原性多肽的病毒载体。

在一些实施方案中，编码本发明的免疫原性多肽的病毒载体(例如，MVA或ChAd载体)以以下剂量施用：约1×10⁹个病毒颗粒(vp)至5×10¹¹个病毒颗粒，例如约5×10⁹vp至约5×10¹¹vp，约1×10¹⁰vp至约5×10¹¹vp，约5×10¹⁰vp至约5×10¹¹vp，或约1×10¹¹vp至约5×10¹¹vp。在一些实施方案中，编码本发明的免疫原性多肽的病毒载体以以下剂量施用：约1×10¹⁰至约1×10¹¹个病毒颗粒，例如约5×10¹⁰vp至约1×10¹¹vp。在一些实施方案中，以约5×10¹⁰个病毒颗粒的剂量施用编码本发明的免疫原性多肽的病毒载体。

所递送的免疫原性化合物(例如，HTI免疫原)的量可以变化，这取决于预期用途(预防性或治疗性疫苗接种)、以及待免疫接种对象的年龄和体重、所采用的疫苗接种方案(即，单次施用与重复给药)、施用途径以及所选佐剂化合物的效力和剂量。量可以通过涉及观察接种疫苗对象的适当免疫应答的标准研究来确定。在一些实施方案中，在由一个或数个剂量自身构成的初始疫苗接种之后，对象可以接受一次或数次充分间隔的加强免疫接种。

在一些实施方案中，免疫原性化合物或组合物在一次性基础上施用，或可重复施用，例如约1至约10次，例如约1至约9次，约1至约8次、约1至约7次、约1至约6次、约1至约5次、约1至约4次、约1至约3次、约1至约2次、约2至约9次、约2至约8次、约2至约7次、约2至约6次、约2至约5次、约2至约4次、约2至约3次、约3至约9次、约3至约8次、约3至约7次、约3至约6次、约3至约5次，约3至约4次、约4至约9次、约4至约8次、约4至约7次、约4至约6次、或约4至约5次。

在一些实施方案中，以在相同组分的剂量或不同组分的剂量之间的不同间隔施用免疫原性化合物或组合物。在一些实施方案中，剂量之间的间隔为约1周至约24个月，例如约2周至约24个月、约3周至约24个月、约4周至约24个月、约2周至约56周、约4周至约12周。

在另一些实施方案中，本发明方法的每次施用间隔约15天至约18个月的时间。在一些实施方案中，本发明方法的每次施用间隔约1周至约24个月的时间。在一些实施方案中，本发明方法的每次施用间隔约2周至约56周的时间。在一些实施方案中，本发明方法的每次施用间隔约4周至约12周的时间。在本发明方法的一些实施方案中，本发明方法的步骤(a)的施用与步骤(b)的施用间隔约2个月至约24个月的时间。在本发明方法的一些实施方案中，步骤(a)的施用与步骤(b)的施用间隔约3个月至约18个月的时间。

在一些实施方案中，本发明的疫苗组分可分组为初免阶段和随后的一个或多个加强阶段。在一些实施方案中，初免阶段和加强阶段可以间隔约2周至约24周，例如约3周至约18周。在一些实施方案中，对象将接受本发明的免疫原化合物或组合物作为初免-加强方案中的不同疫苗组分。在一个实施方案中，需要治疗的对象在初免阶段施用ChAdOx1.HTI，然后在加强阶段施用MVA.HTI。初免施用和加强施用之间的时间段可以是例如8周。在一些实施方案中，在这样的方案之后以约1个月至约12个月的规律间隔给药，持续长至对象的余生。

在一个具体的实施方案中，ChAdOxl.HTI载体(C)作为初免给药施用，并且然后MVA.HTI载体(M)作为加强给药施用。在一个实施方案中，C和M各自以单次施用施用。在另一个实施方案中，C和M中的一者或两者以多次施用施用。在一个具体的实施方案中，C在第0天(D0)以5×10¹⁰Vp的剂量施用，并且M在第56天(D56)以2×10⁸pfu的剂量施用。对于每次施用，剂量可以肌内施用且体积可以是500ul。

在一些实施方案中，本发明的免疫原性化合物或组合物以任何顺序使用，每种组分可以以任何顺序、以剂量之间的任意间隔使用一次或数次。

在一些实施方案中，所述顺序包括在第0周和第12周的CC初免阶段(每次5×10¹⁰个病毒颗粒)，然后是以下加强阶段：在最后一次C之后12周的第一M剂量和在第一M之后12周的第二M剂量(每次M剂量为2×10⁸pfu)。

HIV感染或与HIV感染相关的疾病和其他方法

在一些实施方案中，本发明涉及治疗或预防HIV感染或与HIV感染相关的疾病的方法。在一些实施方案中，HIV是1型HIV(HIV-1)。在一些实施方案中，HIV是2型HIV(HIV-2)。

在一些实施方案中，与HIV感染相关的疾病是获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、AIDS相关综合征(ARC)或HIV机会性疾病。在一些实施方案中，HIV机会性疾病是：伯基特淋巴瘤(Burkitt′s lymphoma)，支气管、气管、肺或食管中的念珠菌病，宫颈癌，球孢子菌病(播散性或肺外)，隐球菌病(肺外)，隐孢子虫病(在肠中持续超过1个月)，巨细胞病毒感染(肝、脾或淋巴结外)，巨细胞病毒视网膜炎(视力丧失)，HIV脑病，持续超过1个月的单纯疱疹病变，支气管、肺或食管中的单纯疱疹，组织胞质菌病(播散性或肺外)，成免疫细胞性淋巴瘤，浸润性宫颈癌(癌症)，持续超过1个月的肠中等孢球虫病，卡波西肉瘤(Kaposi′s sarcoma)，淋巴瘤(主要在脑中)，鸟分枝杆菌复合群(播散性或肺外)，堪萨斯分枝杆菌(Mycobacterium kansasii)(播散性或肺外)，结核分枝杆菌(播散性或肺外)，肺孢子虫病，肺炎(在12个月的时间内复发)，进行性多灶性白质脑病(progressive multifocalleukoencephalopathy，PML)，沙门氏菌败血症(复发性)，弓形虫病(在脑中)，消瘦综合征或由感染HIV的患者中受损的免疫系统促进的感染引起的任何其他疾病。

在本发明方法的一些实施方案中，在未感染HIV的对象中观察到以下临床作用中的一种或更多种：在至少30％的经免疫接种个体中避免HIV感染，或更期望地在超过50％的经免疫接种个体中避免HIV感染。在一些实施方案中，HIV是HIV-1。

在本发明方法的一些实施方案中，在感染HIV的对象中观察到以下临床作用中的一种或更多种：(1)在对象血液和组织中持续相当长时间的HIV-1病毒载量的显著降低(非进展性表型)，其通常低于每毫升血浆2,000个病毒RNA拷贝，或更期望地低于每毫升血浆50个病毒RNA拷贝；(2)AIDS相关临床症状的减少或缓解，和(3)常规抗逆转录病毒治疗的减少，更期望地完全中断cART。AIDS相关临床症状的减少或缓解包括但不限于：延长HIV感染的无症状期；在已通过抗逆转录病毒治疗(ART)降低病毒水平的感染HIV的患者中维持低病毒载量；在未接受药物的患者和用ART治疗的患者中提高HIV-1特异性和非特异性CD4T细胞的水平或减少HIV-1特异性和非特异性CD4T细胞的降低，提高HIV特异性CTL的宽度、幅度、亲和力和功能性，提高患有AIDS的个体的整体健康或生命质量；以及延长患有AIDS的个体的期望寿命。临床医师可以将免疫接种的作用与治疗之前患者的病症或未经治疗的患者的预期病症进行比较，以确定治疗是否有效抑制AIDS。

在一些实施方案中，本发明的方法涉及通过使用本文所述的给药方案施用本文所述的免疫原性多肽在对象中产生T细胞细胞应答。

在一些实施方案中，本发明的方法产生有效的细胞毒性T细胞应答。细胞毒性T细胞或细胞毒性T淋巴细胞(CTL)测定可用于监测在使用针对同源和异源HIV毒株的病毒序列进行亚基因组免疫接种之后的细胞免疫应答。Burke et al.，J.Inf.Dis.1994；170：1110-1119和Tigges et al.，J.Immunol，1996；156：3901-3910。用于检测T细胞应答的常规测定包括，例如增殖测定、淋巴因子分泌测定、直接细胞毒性测定和有限稀释测定。例如，可以测定已与肽一起孵育的抗原呈递细胞在应答细胞群中诱导CTL应答的能力。抗原呈递细胞可以是例如外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)或树突细胞(dendritic cell，DC)的细胞。或者，在用内部经加工的肽负载MHC I类分子的能力方面有缺陷并且已经用适当的人MHC I类基因转染的突变非人哺乳动物细胞系可用于测试目的肽体外诱导初级CTL应答的能力。PBMC可用作CTL前体的应答细胞来源。将适当的抗原呈递细胞与肽一起孵育，然后在经优化的培养条件下将蛋白质负载抗原呈递细胞与应答细胞群一起孵育。阳性CTL活化可以通过测定培养物中是否存在杀伤放射性标记的靶细胞的CTL来确定，所述靶细胞为特异性肽脉冲靶标以及表达肽序列所来源的抗原的内源经加工形式的靶细胞二者。例如，靶细胞可以用51Cr放射性标记，并且细胞毒性活性可以由从靶细胞释放的放射性计算。另一种合适的方法允许通过用荧光素标记的HLA四聚体复合物染色来直接量化抗原特异性T细胞。Altman et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1993；90：10330-10334和Altman et al.，Science 1996；274：94-96。另一些相对较新的技术发展包括胞内淋巴因子染色和干扰素释放测定或ELISpot测定。

在本发明方法的一些实施方案中，对象是人对象。

组合治疗

在一些实施方案中，本发明的方法包括将编码免疫原性多肽的第一病毒载体和第二病毒载体与一种或更多种其他抗HIV治疗(包括但不限于抗逆转录病毒治疗(ART))联合施用。在预防性疫苗接种的情况下，接受本发明治疗的对象通常不会采取ART。然而，在治疗性疫苗接种的情况下，对象在许多情况下会一直采取ART。本发明的方法也可以与暴露前预防(Pre-Exposure Prophylaxis，PrEP)技术联合使用。其他抗HIV治疗可以与本发明的第一病毒载体和第二病毒载体同时地或顺序地施用。在一些实施方案中，抗逆转录病毒治疗包括HIV逆转录酶抑制剂(例如，核苷或非核苷逆转录酶抑制剂)、HIV整合酶抑制剂、HIV非催化部位(或别构)整合酶抑制剂、HIV进入(融合)抑制剂、HIV成熟抑制剂或其组合。示例性抗逆转录病毒药剂包括：HIV整合酶催化部位抑制剂拉替拉韦(raltegravir)(

Merck)、比克替拉韦(bictegravir)(Gilead)、埃替拉韦(elvitegravir)(Gilead)、soltegravir(GSK，ViiV)、卡替拉韦(cabotegravir)(GSK 1265744，GSK744，GSK，ViiV)和多替拉韦(dolutegravir)；HIV核苷逆转录酶抑制剂阿巴卡韦(abacavir)(/>

GSK)、去羟肌苷(/>

BMS)、富马酸替诺福韦二吡呋酯(tenofovir disoproxil fumarate)(

Gilead)、替诺福韦艾拉酚胺(tenofovir alafenamide，TAF)、恩曲他滨(emtricitabine)(/>

Gilead)、拉米夫定(lamivudine)(/>

GSK/Shire)、司他夫定(stavudine)(/>

BMS)、齐多夫定(zidovudine)(/>

GSK)、阿巴卡韦、艾夫他滨(elvucitabine)(Achillion)、替诺福韦exalidex(CMX-157，Chimerix)和festinavir(Oncolys)；HIV非核苷逆转录酶抑制剂奈韦拉平(nevirapine)(/>

BI)、依法韦仑(efavirenz)(/>

BMS)、依曲韦林(etravirine)(/>

J&J)、利匹韦林(rilpivirine)(TMC278，R278474，J&J)、fosdevirine(GSK，ViiV)、多拉韦林(doravirine)(MK-1439，Merck)和来司韦林(lersivirine)(Pfizer/ViiV)；HIV蛋白酶抑制剂阿扎那韦(atazanavir)(/>

BMS)、达芦那韦(darunavir)(/>

J&J)、茚地那韦(indinavir)(/>

Merck)、洛匹那韦(lopinavir)(/>

Abbvie)、奈非那韦(nelfinavir)(/>

Pfizer)、沙奎那韦(saquinavir)(

Hoffmann-LaRoche)、替拉那韦(tipranavir)(/>

BI)、利托那韦(ritonavir)(/>

Abbvie)和福沙那韦(fosamprenavir)(/>

GSK/Vertex)；HIV进入抑制剂马拉韦罗(maraviroc)(/>

Pfizer)、恩夫韦肽(enfuvirtide)(

Trimeris)和福斯特沙韦(fostemsavir)(BMS-663068，BMS)；以及HIV成熟抑制剂贝韦立马(bevirimat)(Myriad Genetics)。

在一些实施方案中，抗逆转录病毒治疗包括选自以下的一种或更多种药剂：拉替拉韦、埃替拉韦、soltegravir、卡替拉韦、多替拉韦、阿巴卡韦、去羟肌苷、富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺、恩曲他滨、拉米夫定、司他夫定、齐多夫定、阿巴卡韦、艾夫他滨、替诺福韦exalidex、festinavir、奈韦拉平、依法韦仑、依曲韦林、利匹韦林、fosdevirine、多拉韦林、来司韦林、阿扎那韦、达芦那韦、茚地那韦、洛匹那韦、奈非那韦、沙奎那韦、替拉那韦、利托那韦、福沙那韦、马拉韦罗、恩夫韦肽、福斯特沙韦、贝韦立马、可比司他(cobicistat)和比克替拉韦；或其可药用盐。在一些实施方案中，抗逆转录病毒治疗包括选自以下的一种或更多种药剂：拉替拉韦、soltegravir、卡替拉韦、多替拉韦、阿巴卡韦、去羟肌苷、富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺、恩曲他滨、拉米夫定、司他夫定、齐多夫定、阿巴卡韦、艾夫他滨、替诺福韦exalidex、festinavir、利匹韦林、fosdevirine、多拉韦林、来司韦林、马拉韦罗、恩夫韦肽、福斯特沙韦、贝韦立马和比克替拉韦；或其可药用盐。在一些实施方案中，抗逆转录病毒治疗包括三种或更多种药剂，例如，两种核苷逆转录酶抑制剂和非核苷逆转录酶抑制剂或整合酶抑制剂。

在一些实施方案中，治疗或预防HIV感染的方法包括施用TLR7调节化合物和本发明的HIV疫苗。

这样的施用可以在施用ART之后。在一些实施方案中，治疗或预防HIV感染的方法包括与ART同时施用TLR7调节化合物和HIV疫苗。在一些实施方案中，ART的治疗性药剂在施用TLR7调节化合物和HIV疫苗之前和期间是相同的。在一些实施方案中，ART的治疗性药剂在施用TLR7调节化合物和HIV疫苗之前和期间是不同的。

药盒

在一些实施方案中，本发明涉及药盒，其包含本发明的免疫原性多肽、或编码免疫原性多肽的一种或更多种病毒载体、或包含免疫原性多肽的药物组合物，以及在本文所述的本发明的方法中使用药盒的说明。在一些实施方案中，药盒包括包装，例如玻璃、塑料(例如聚乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯)、瓶、小瓶、纸或用于组分的小袋。在一些实施方案中，说明书是印刷材料的形式或可以存储说明书的电子支持物的形式，例如电子存储介质(例如磁盘、磁带)或光学介质(例如，CD-ROM、DVD)。介质可以另外地或可替代地含有提供这样的说明的互联网网站。

本申请中提及的所有出版物、专利和专利申请在本文中均通过引用整体并入本说明书中，其程度就如同每个单独的出版物、专利或专利申请被具体地和单独地指示为通过引用并入本文中。另外，本申请中对任何参考文献的引用或标识不应被解释为承认这样的参考可作为本发明的现有技术获得。就使用章节标题而言，它们不应被解释为必然限制。

本公开内容的实施方案还可以通过参考以下非限制性实施例来限定，所述实施例详细描述了本公开内容的一些抗体的制备和使用本公开内容的抗体的方法。对于本领域技术人员来说显而易见的是，可以在不脱离本公开内容的范围的情况下实践对材料和方法二者的许多修改。

实施例

实施例1

ChAdOx1.HTI疫苗的构建

ChAdOx1.HTI是编码HTI序列的基于黑猩猩腺病毒分离株Y2546的复制缺陷型重组黑猩猩腺病毒(ChAd)载体。ChAdOx1.HTI是通过将HTI抗原序列亚克隆到通用ChAdOx1 BAC(Oxford University)中而获得的。将由该亚克隆得到的质粒(pC255；40,483kbp)线性化并转染到商业HEX293A

细胞中以产生载体化的疫苗ChAdOx1.HTI。ChAdOx1.HTI被配制成用于肌内(intramuscular，i.m.)注射的混悬剂。用于注射的缓冲液含有10mM L组氨酸、35mM NaCl、7.5％(w/v)蔗糖、1mM MgCl₂、0.1mM EDTA二钠、0.1％(w/v)聚山梨酯80、和0.5％(v/v)乙醇。用HCl将pH调节到6.6。将小瓶储存在-80℃。

实施例2

MVA.HTI的构建

MVA.HTI如在美国专利公开第2019/0055289号(其全部内容通过引用并入本文)中所述构建。

实施例3

在未感染HIV的志愿者中进行C初免随后是M加强的临床效力

在未感染HIV的志愿者中在如下命名的安全性和免疫原性试验中对C初免随后是M加强进行测试：评估向健康的HIV-1/2阴性成年志愿者顺序给予候选T细胞疫苗ChAdOxl.HTI和MVA.HTI的安全性和免疫原性的1/2a期开放标签试验。

简言之，招募10名18至65岁的HIV-1/2阴性、低风险的男性和女性以评估顺序施用疫苗ChAdOx1.HTI和MVA.HTI的安全性谱和免疫原性。

研究设计包括8个月内的13次访视：筛选，D0(ChadOx1.HTI疫苗接种)，D1，D7，D14，D28，D56(MVA.HTI疫苗接种)，D57，D63，D70，D84，D140，D224(D＝天)。

受试的组合物是：

研究的主要目标是确认在异种初免-加强方案中通过肌内针注射向健康、HIV-1/2阴性的成年志愿者顺序施用ChAdOxl.HTI和MVA.HTI疫苗的安全性。主要结局量度是：(1)安全性和反应原性的具体终点是主动和被动收集的关于不良事件的数据，(2)评估以下参数：疫苗接种之后7天内征求的局部反应原性体征和症状的出现；疫苗接种之后7天内征求的系统性反应原性体征和症状的出现；疫苗接种之后28天内未征求的不良事件的出现；安全性实验室量度相对于基线的变化；在整个研究期间严重不良事件的出现。

研究的次要目标是确认在异种初免-加强方案中通过肌内针注射向健康、低风险、未感染HIV-1的成年志愿者顺序施用ChAdOxl.HTI和MVA.HTI疫苗的免疫原性。次要结局量度是：(1)通过IFN-γELISPOT测定确定的针对HTI编码区产生T细胞应答的患者的比例；(2)在疫苗接受者中IFN-γELISPOT测量的总的疫苗诱导的HIV-1特异性应答的宽度；(3)IFN-γELISPOT测量的总的疫苗诱导的HIV-1特异性应答的幅度。

该研究在符合以下入选和排除标准的健康成年人中进行：

除其他外，入选标准是：

·年龄为18至65岁的健康成年人

·能够并愿意(在研究者看来)遵循所有研究要求

·愿意允许研究者与志愿者的全科医生讨论志愿者的病史

·同意在研究过程期间不献血

·在研究者看来，志愿者已理解所提供的信息。在进行任何与研究相关的程序之前必须给出书面知情同意书

·愿意进行HCV、HBV、梅毒和HIV测试、咨询并接受测试结果。

除其他外，排除标准是：

·确认感染HIV-1或HIV-2

·参与另外的研究，该研究涉及在招募之前30天内接受研究产品，或计划在研究期间使用

·之前接受了重组猿腺病毒疫苗

·在过去6年内接受了任何研究性HIV-1疫苗

·在之前60天内接受了活减毒疫苗或计划在IMP疫苗接种之后60天内接受

·在之前14天内接受了另外的疫苗(包括流感疫苗)或计划在IMP疫苗接种之后14天内接受

·在计划施用候选疫苗之前的三个月内施用了免疫球蛋白和/或任何血液制品

·在过去6个月内存在任何确认的或疑似的免疫抑制或免疫缺陷状态，包括HIV-1感染；无脾；反复、严重感染和慢性(超过14天)免疫抑制剂用药(允许吸入式和表面用类固醇)。

载体的施用表明了它们在在对象中诱导的免疫应答方面是安全且有效的。

实施例4

在HIV-1阳性个体中进行C初免随后是M加强的临床效力

在HIV阳性个体中在如下命名的安全性和免疫原性试验中对C初免顺序随后是M加强进行测试：在经cART治疗的HIV-1阳性个体中候选HIV-1疫苗ChAdOx1.HTI和MVA.HTI的I期随机、双盲、安慰剂对照的安全性、耐受性和免疫原性研究。简而言之，招募30名个体以确定在异种初免-加强方案CM中施用两种疫苗的安全性、免疫原性和效力，随后是ATI时期以监测病毒反弹动力学。将30名年龄为18至60岁的健康的、经良好控制的ART治疗的、HIV-1阳性的男性和女性以2∶1随机分配至CM组和安慰剂组。

研究的设计如下：

第1组.CM：

-在第0周ChAdOx1.HTI(1剂5×10¹⁰vp)

-在第8周MVA.HTI(1剂2×10⁸pfu)

第2组.安慰剂：

-在第0周和第8周生理盐水缓冲液

(ATI＝分析性治疗中断；EOS＝研究终止)

测试的组合物是：

主要目标是评价具有ChAdOxl.HTI和MVA.HTI的异种初免-加强方案在具有免疫能力、经cART治疗的HIV-1阳性个体中的安全性和免疫原性。主要终点是发生3级或4级局部反应的参与者的比例；发生3级或4级全身反应的参与者的比例，以及任何局部和全身事件的描述性总结，包括实验室异常，包括研究产品在疫苗和安慰剂接受者中的严重性、持久性和关系。

次要目标是(1)评价ChAdOx1.HTI和MVA.HTI疫苗作为异种初免-加强方案(CM)的一部分在具有稳健免疫系统的经ART治疗的HIV-1阳性个体中的免疫原性，以及(2)评价ChAdOx1.HTI和MVA.HTI疫苗的异种初免-加强疫苗接种是否能够在具有稳健免疫系统的经ART治疗的HIV-1阳性个体中在抗逆转录病毒治疗的分析性治疗中断(ATI)期间预防或延迟病毒反弹、诱导反弹之后的病毒控制、和/或预防或延迟恢复抗逆转录病毒治疗的需要。次要终点是：(1)T细胞免疫原性：在疫苗和安慰剂接受者中通过IFNγELISPOT测定确定的针对HTI编码区产生从头(de-novo)T细胞应答的参与者的比例；在疫苗和安慰剂接受者中通过IFNγELISPOT测量的总的HTI特异性和总的HIV特异性T细胞应答的宽度和幅度；(2)ATI时期期间的病毒反弹：具有持续的病毒缓解的参与者的百分比，病毒缓解定义为ATI开始(访视第16周)之后12周时血浆病毒载量(plasma viral load，pVL)＜50拷贝/mL；到病毒检出的时间，定义为从ATI开始(访视第16周)到首次出现可检出pVL(＞50拷贝/mL)的时间；到病毒反弹的时间，定义为从ATI开始(访视第16周)到首次出现pVL＞10,000拷贝/mL的时间；在ATI之后12周(访视第28周)时保持不用cART的参与者的百分比；无cART的时间，定义为自ATI开始(访视第16周)至恢复cART的时间；(3)分析性ART中断时期(从第16周到第28周)的安全性：出现与急性逆转录病毒综合征(acute retroviral syndrome，ARS)相适应的症状的参与者的比例；出现新突变的参与者的比例，所述突变不存在于cART前病毒基因型中，赋予针对抗逆转录病毒药物的临床显著抗性(不包括在cART恢复之后12周时未达到病毒再抑制的个体)；在ATI之后的cART恢复期间，存在12周(从第28周到第40周)的安全性随访期：在cART恢复之后12周时抑制pVL至＜50拷贝/mL的参与者的比例。在cART恢复之后12周时未达到病毒再抑制的那些参与者中，从ATI样品中分析ART病毒基因型以解决是否出现了新的耐药性突变。

除其他外，入选标准是：

·年龄为18-60岁的男性和女性

·确认感染HIV-1

·具有组合的抗逆转录病毒治疗(定义为≥3种抗逆转录病毒药物)

·愿意并能够在研究期间遵循其cART方案。

·持续至少3年的最佳病毒学抑制，其被定义为维持pVL低于检测限(基于当前可用的测定，20、40或50拷贝/ml)，允许孤立的光点(isolated blip)(＜200拷贝/ml，非连续，表示＜10％的总测定)。

·在筛选访视时已采用相同的cART方案持续至少4周。

·最低点CD4计数≥500个细胞/mm³。

·年龄为在筛选当天至少18岁且在第一次施用IMP当天不超过60岁。

·愿意遵循方案的要求并可以在计划的研究持续期间进行随访。

·在主要研究者或指定人员看来，参与者已理解所提供的信息并能够给出书面知情同意书。

除其他外，排除标准是：

·妊娠或哺乳。

·表明存在临床上显著耐药性突变(其会阻止在治疗中断之后可行cART方案的构建)的cART前基因型数据(当可获得时)

·所报道的对cART的次优依从性时期

·过去抗逆转录病毒治疗中断超过2周的历史。

·在进入研究(筛选访视时)的12周内参与涉及治疗干预(活性臂)的另外的临床试验。

·任何AIDS定义疾病或HIV相关疾病的进展。

·自身免疫病病史。

·可能损害对象完成研究的能力的任何身体或精神病症的病史或临床表现。

·在进入研究的2周内和试验1持续期间接受经批准的疫苗

·对疫苗有过敏反应或严重不良反应的病史。

·之前用任何实验性免疫原进行过免疫接种。

·在进入研究的6个月内接受血液制品。

·在进入研究的1年内治疗癌症或淋巴细胞增生性疾病。

·具有在研究者看来会使个体不适合于研究或影响研究结果的任何其他当前或先前治疗。

·目前或最近(在过去3个月内)使用了干扰素或全身性皮质类固醇或其他免疫抑制剂(允许使用用于哮喘的吸入式类固醇或用于局部皮肤病症的表面用类固醇)。

在对象中施用ChAdOxl.HTI疫苗和MVA.HTI疫苗诱导了针对人免疫缺陷病毒(HIV)(例如，HIV-1或HIV-2)的免疫应答。在一些对象中，免疫应答足以治疗或预防人免疫缺陷病毒(HIV)感染或与HIV感染相关的疾病。在一些对象中，实现了病毒学抑制。在另一些对象中，维持了病毒学抑制。

Claims

1.用于在有此需要的对象中诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的方法，其包括：

(a)向所述对象施用免疫原性有效量的编码免疫原性多肽的第一病毒载体的1至10次施用；以及

(b)向所述对象施用免疫原性有效量的所述免疫原性多肽的1至10次施用；

其中所述免疫原性多肽包含：

(i)与SEQ ID NO：1的序列具有至少90％同一性的序列，

(ii)与SEQ ID NO：2的序列具有至少90％同一性的序列，

(iii)与SEQ ID NO：3的序列具有至少90％同一性的序列，

(iv)与SEQ ID NO：4的序列具有至少90％同一性的序列，

(v)与SEQ ID NO：5的序列具有至少90％同一性的序列，

(vi)与SEQ ID NO：6的序列具有至少90％同一性的序列，

(vii)与SEQ ID NO：7的序列具有至少90％同一性的序列，

(viii)与SEQ ID NO：8的序列具有至少90％同一性的序列，

(ix)与SEQ ID NO：9的序列具有至少90％同一性的序列，

(x)与SEQ ID NO：10的序列具有至少90％同一性的序列，

(xi)与SEQ ID NO：11的序列具有至少90％同一性的序列，

(xii)与SEQ ID NO：12的序列具有至少90％同一性的序列，

(xiii)与SEQ ID NO：13的序列具有至少90％同一性的序列，

(xiv)与SEQ ID NO：14的序列具有至少90％同一性的序列，

(xv)与SEQ ID NO：15的序列具有至少90％同一性的序列，和

(xvi)与SEQ ID NO：16的序列具有至少90％同一性的序列。

2.在有此需要的对象中治疗或预防人免疫缺陷病毒(HIV)感染或与HIV感染相关的疾病的方法，其包括：

(a)向所述对象施用编码免疫原性多肽的第一病毒载体的1至10次施用；以及

(b)向所述对象施用编码所述免疫原性多肽的第二病毒载体的1至10次施用；

其中所述免疫原性多肽包含：

(i)与SEQ ID NO：1的序列具有至少90％同一性的序列，

(ii)与SEQ ID NO：2的序列具有至少90％同一性的序列，

(iii)与SEQ ID NO：3的序列具有至少90％同一性的序列，

(iv)与SEQ ID NO：4的序列具有至少90％同一性的序列，

(v)与SEQ ID NO：5的序列具有至少90％同一性的序列，

(vi)与SEQ ID NO：6的序列具有至少90％同一性的序列，

(vii)与SEQ ID NO：7的序列具有至少90％同一性的序列，

(viii)与SEQ ID NO：8的序列具有至少90％同一性的序列，

(ix)与SEQ ID NO：9的序列具有至少90％同一性的序列，

(x)与SEQ ID NO：10的序列具有至少90％同一性的序列，

(xi)与SEQ ID NO：11的序列具有至少90％同一性的序列，

(xii)与SEQ ID NO：12的序列具有至少90％同一性的序列，

(xiii)与SEQ ID NO：13的序列具有至少90％同一性的序列，

(xiv)与SEQ ID NO：14的序列具有至少90％同一性的序列，

(xv)与SEQ ID NO：15的序列具有至少90％同一性的序列，和

(xvi)与SEQ ID NO：16的序列具有至少90％同一性的序列。

3.权利要求1或权利要求2所述的方法，其中序列(i)至(xvi)中的至少两个通过单、双或三丙氨酸氨基酸接头连接，其中所述接头导致在邻接序列之间的连接区中形成AAA序列。

4.权利要求1或权利要求2所述的方法，其中(i)至(xvi)中每一个的序列的长度为11至85个氨基酸。

5.权利要求1或权利要求2所述的方法，其中(a)包括向所述对象施用编码所述免疫原性多肽的所述第一病毒载体的1至4次施用，和/或(b)包括向所述对象施用编码所述免疫原性多肽的所述第二病毒载体的1至4次施用。

6.权利要求1或2所述的方法，其中(a)包括向所述对象施用编码所述免疫原性多肽的所述第一病毒载体的一次施用，并且(b)包括向所述对象施用编码所述免疫原性多肽的所述第二病毒载体的一次施用。

7.权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一病毒载体是黑猩猩腺病毒(ChAd)载体以及所述第二病毒载体是改良安卡拉痘苗(MVA)载体。

8.权利要求7所述的方法，其中所述黑猩猩腺病毒载体是ChAdOx1.HTI以及所述改良安卡拉痘苗(MVA)病毒载体是MVA.HTI。

9.用于在有此需要的对象中诱导针对人免疫缺陷病毒(HIV)的免疫应答的方法，所述方法基本上由以下组成：

(a)向所述对象施用编码免疫原性多肽的第一病毒载体的1至5次施用；以及

(b)向所述对象施用编码所述免疫原性多肽的第二病毒载体的1至5次施用；

其中所述免疫原性多肽包含：

(i)与SEQ ID NO：1的序列具有至少90％同一性的序列，

(ii)与SEQ ID NO：2的序列具有至少90％同一性的序列，

(iii)与SEQ ID NO：3的序列具有至少90％同一性的序列，

(iv)与SEQ ID NO：4的序列具有至少90％同一性的序列，

(v)与SEQ ID NO：5的序列具有至少90％同一性的序列，

(vi)与SEQ ID NO：6的序列具有至少90％同一性的序列，

(vii)与SEQ ID NO：7的序列具有至少90％同一性的序列，

(viii)与SEQ ID NO：8的序列具有至少90％同一性的序列，

(ix)与SEQ ID NO：9的序列具有至少90％同一性的序列，

(x)与SEQ ID NO：10的序列具有至少90％同一性的序列，

(xi)与SEQ ID NO：11的序列具有至少90％同一性的序列，

(xii)与SEQ ID NO：12的序列具有至少90％同一性的序列，

(xiii)与SEQ ID NO：13的序列具有至少90％同一性的序列，

(xiv)与SEQ ID NO：14的序列具有至少90％同一性的序列，

(xv)与SEQ ID NO：15的序列具有至少90％同一性的序列，和

(xvi)与SEQ ID NO：16的序列具有至少90％同一性的序列。

10.权利要求9所述的方法，其中(a)包括向所述对象施用编码所述免疫原性多肽的所述第一病毒载体的单次施用。

11.权利要求9或10所述的方法，其中(b)包括向所述对象施用编码所述免疫原性多肽的所述第二病毒载体的单次施用。

12.权利要求9至11中任一项所述的方法，其中所述第一病毒载体是ChAd载体和/或所述第二病毒载体是MVA载体。

13.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第一病毒载体以约1×10⁸至约1×10¹¹个病毒颗粒(vp)的剂量施用。

14.权利要求13所述的方法，其中所述第一载体以约5×10¹⁰vp的剂量施用。

15.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二病毒载体以约1×10⁶至约1×10¹⁰噬斑形成单位(pfu)的剂量施用。

16.权利要求15所述的方法，其中所述第二病毒载体以约2×10⁸pfu的剂量施用。

17.权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述第一病毒载体的施用和所述第二病毒载体的施用间隔约两周至约24周的时间。

18.权利要求17所述的方法，其中在所述第一病毒载体的施用和所述第二病毒载体的施用之间的时间为约8周。

19.权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述免疫原性多肽还包含在所述免疫原性多肽的N端处的信号肽。

20.权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述免疫原性多肽包含SEQ ID NO：99的序列或者其中所述免疫原性多肽由包含SEQ ID NO：100或101的核酸编码。

21.权利要求2至20中任一项所述的方法，其中所述与HIV感染相关的疾病是获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、AIDS相关综合征(ARC)或HIV机会性疾病。

22.权利要求21所述的方法，其中所述HIV是1型HIV(HIV-1)。

23.权利要求21所述的方法，其中所述HIV是2型HIV(HIV-2)。

24.权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述对象是人对象。

25.权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述第一病毒载体在药物组合物中施用，所述药物组合物包含L-组氨酸：10mM；NaCl：35mM；蔗糖：7.5％(w/v)；MgCl₂：1mM；EDTA二钠：0.1mM；吐温80(聚山梨酯-80)：0.1％(w/v)；乙醇：0.5％(v/v)；HCl：调节至pH 6.6。

26.权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述第二病毒载体在包含0.5mL Tris缓冲液(10mM Tris HCl，pH 7.7，140mM NaCl)的药物组合物中施用。

27.权利要求2至26中任一项所述的方法，其中所述治疗或预防HIV感染的方法包括在所述对象中实现病毒学抑制。

28.权利要求2至26中任一项所述的方法，其中所述治疗或预防HIV感染的方法包括在所述对象中维持病毒学抑制。

29.根据权利要求1至28中任一项所述的方法，其中所述方法还包括与编码所述免疫原性多肽的所述第一病毒载体和所述第二病毒载体联合向所述对象施用另外的一种或更多种抗HIV治疗。

30.根据权利要求29所述的方法，其中所述一种或更多种抗HIV治疗与编码所述免疫原性多肽的所述第一病毒载体和所述第二病毒载体顺序或同时施用。