Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

CN116041595A - 溶栓性涂层剂及其制备方法和应用 - Google Patents

溶栓性涂层剂及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116041595A
CN116041595A CN202211614414.4A CN202211614414A CN116041595A CN 116041595 A CN116041595 A CN 116041595A CN 202211614414 A CN202211614414 A CN 202211614414A CN 116041595 A CN116041595 A CN 116041595A
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
group
thrombolytic
protein
substituted
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211614414.4A
Other languages
English (en)
Inventor
黄佳磊
唐增超
李丹
陈红
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou University
Original Assignee
Suzhou University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou University filed Critical Suzhou University
Priority to CN202211614414.4A priority Critical patent/CN116041595A/zh
Publication of CN116041595A publication Critical patent/CN116041595A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L33/00—Antithrombogenic treatment of surgical articles, e.g. sutures, catheters, prostheses, or of articles for the manipulation or conditioning of blood; Materials for such treatment
    • A61L33/0005—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L33/0011—Anticoagulant, e.g. heparin, platelet aggregation inhibitor, fibrinolytic agent, other than enzymes, attached to the substrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L33/00—Antithrombogenic treatment of surgical articles, e.g. sutures, catheters, prostheses, or of articles for the manipulation or conditioning of blood; Materials for such treatment
    • A61L33/0076—Chemical modification of the substrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L33/00—Antithrombogenic treatment of surgical articles, e.g. sutures, catheters, prostheses, or of articles for the manipulation or conditioning of blood; Materials for such treatment
    • A61L33/0076—Chemical modification of the substrate
    • A61L33/0088—Chemical modification of the substrate by grafting of a monomer onto the substrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L33/00—Antithrombogenic treatment of surgical articles, e.g. sutures, catheters, prostheses, or of articles for the manipulation or conditioning of blood; Materials for such treatment
    • A61L33/06—Use of macromolecular materials
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F122/00—Homopolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a carboxyl radical and containing at least one other carboxyl radical in the molecule; Salts, anhydrides, esters, amides, imides or nitriles thereof
    • C08F122/36—Amides or imides
    • C08F122/38—Amides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F222/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a carboxyl radical and containing at least one other carboxyl radical in the molecule; Salts, anhydrides, esters, amides, imides, or nitriles thereof
    • C08F222/36—Amides or imides
    • C08F222/38—Amides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J7/00—Chemical treatment or coating of shaped articles made of macromolecular substances
    • C08J7/04—Coating
    • C08J7/0427—Coating with only one layer of a composition containing a polymer binder
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09D—COATING COMPOSITIONS, e.g. PAINTS, VARNISHES OR LACQUERS; FILLING PASTES; CHEMICAL PAINT OR INK REMOVERS; INKS; CORRECTING FLUIDS; WOODSTAINS; PASTES OR SOLIDS FOR COLOURING OR PRINTING; USE OF MATERIALS THEREFOR
    • C09D135/00—Coating compositions based on homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a carboxyl radical, and containing at least another carboxyl radical in the molecule, or of salts, anhydrides, esters, amides, imides or nitriles thereof; Coating compositions based on derivatives of such polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2300/00—Characterised by the use of unspecified polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2327/00—Characterised by the use of homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a halogen; Derivatives of such polymers
    • C08J2327/02—Characterised by the use of homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a halogen; Derivatives of such polymers not modified by chemical after-treatment
    • C08J2327/04—Characterised by the use of homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a halogen; Derivatives of such polymers not modified by chemical after-treatment containing chlorine atoms
    • C08J2327/06—Homopolymers or copolymers of vinyl chloride
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2375/00—Characterised by the use of polyureas or polyurethanes; Derivatives of such polymers
    • C08J2375/04—Polyurethanes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2383/00—Characterised by the use of macromolecular compounds obtained by reactions forming in the main chain of the macromolecule a linkage containing silicon with or without sulfur, nitrogen, oxygen, or carbon only; Derivatives of such polymers
    • C08J2383/04—Polysiloxanes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2435/00—Characterised by the use of homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a carboxyl radical, and containing at least one other carboxyl radical in the molecule, or of salts, anhydrides, esters, amides, imides or nitriles thereof; Derivatives of such polymers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及一种溶栓性涂层剂及其制备方法和应用。溶栓性涂层剂具有通式(I)所示结构，其中，P为蛋白质，G为聚合物基团，且聚合物基团中的至少一个重复单元包括纤溶功能结构单元。本发明上述技术方案的溶栓性涂层剂具有普适性、且可高效结合并富集溶栓药物。
Figure DDA0004000022880000011

Description

溶栓性涂层剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物医用功能高分子材料技术领域，特别是涉及一种溶栓性涂层剂及其制备方法和应用。
背景技术
机体凝血系统包括凝血和抗凝两个方面，两者间的动态平衡是正常机体维持体内血液流动状态和防止血液流失的关键。当体内的凝血系统和纤溶系统出现异常时，血栓形成后，不能完全进行溶解，就会导致这些血栓堵塞血管，导致血液流通不畅，从而导致心血管疾病的发生。由血栓引起的血管阻塞是极其严重的医学疾病，会导致局部堵塞，从而引起器官缺血，缺氧甚至衰竭。若没有得到及时治疗，可能会导致截肢或生命危险。
纤维蛋白溶解是一个复杂过程。凝血反应激活后，纤维蛋白原(Fg)在凝血酶作用下形成纤维蛋白单体，并在凝血因子XIIIa的作用下转化为网络状的纤维蛋白多聚体，对血栓形成过程起到物理支撑的作用。但同时纤维蛋白也是一种自杀型辅助因子，它能通过Fg裂解和聚合过程中暴露出的赖氨酸残基，特异性结合纤溶酶原(Plg)和纤溶酶原激活剂(t-PA)，来实现自身的降解。这种依赖于表面的Plg激活是体内纤溶系统的主要机制。
溶栓药物的作用机制为：溶栓药物属于纤维蛋白溶解酶原(纤溶酶原)激活剂，激活血液中纤溶酶原(Plg)，使其转变为纤溶酶，然后再降解纤维蛋白成为纤维蛋白裂解产物(FDP)，从而溶解血栓。但同时非定向的药物输送也会导致“全身溶解状态”而引起出血倾向。
目前已经建立一系列用于预防和消除血管内血凝块形成的方法或者装置。现有技术中，为了预防植介入医疗器械表面相关性血栓栓塞，通常是采用肝素或者枸橼酸钠封管的方式。但是反复的肝素封管不但增加了患者的医疗费用，而且大量肝素被不断释放到血液中也增加了全身性出血的风险，同时会出现血小板减少症、骨质疏松等一系列严重并发症。此外，抗凝类的药物也只能在一定程度上预防血栓的形成。
急性血栓产生时，必须在血栓形成的短时间内进行溶栓操作，比如6小时以内。时间越长，一方面血块网络越致密牢固，溶解越困难；另一方面植介入器械原位产生的血栓会发生脱落并随血液流向身体各个部位，极易引起肺栓塞等致命问题。为了解决置管后的血栓问题，临床上常采用将溶栓剂或纤维蛋白溶解剂递送到血凝块并使之溶解的输注导管或者静脉直接给药的方式。溶栓剂中比较常用的是阿替普酶(r-TPA)、尿激酶、替奈普酶及蛇毒纤溶酶这类纤维蛋白溶解药。但是无论是溶栓药物经输注导管注射，还是直接静脉给药，都不可避免的药物全身性流通导致大量出血等问题。
因此，对于溶栓类导管及其他输注装置的设计仍然存在可提升的空间。
发明内容
基于此，有必要提供一种具有普适性的可高效结合并富集溶栓药物的溶栓性涂层剂及其制备方法和应用。
一种溶栓性涂层剂，其特征在于，具有通式(I)所示结构：
Figure BDA0004000022860000021
其中，P为蛋白质，R具有通式(II)或者通式(III)所示结构：
Figure BDA0004000022860000022
其中，A1与A2独立选自：单键、烯基、炔基、酰基、酰胺基、羰基、砜基、胺基、酯基、取代或未取代的碳原子数为1～60的烷基、或取代或未取代的碳原子数为1～60的烷氧基、或取代或未取代的碳原子数为1～60的硫代烷氧基、取代或未取代的具有5～40个环原子的芳香基团、与取代或未取代的具有5～40个环原子的杂芳香基团中的至少一种；
其中，G为聚合物基团，且所述聚合物基团中的至少一个重复单元包括纤溶功能结构单元，所述纤溶功能结构单元包括如下基团：
Figure BDA0004000022860000023
本发明上述技术方案的溶栓性涂层剂，一方面，蛋白质具有从α螺旋结构向β折叠结构转变的特性，赋予了上述溶栓性涂层剂与基材的粘附特性，有利于提升溶栓性涂层的牢固性，从而对基材具有普适性；另一方面，聚合物基团中含有ε-赖氨酸结构。这种ε-赖氨酸结构中ε-氨基和羧基均以自由的形式存在，因此能够特异性结合t-PA，实现溶栓药物的高度富集。当该溶栓性涂层剂与体内血栓接触时，一方面t-PA可以原位激活血栓环境中的Plg，将其转化成激活形式纤溶酶，来实现纤维蛋白网络的降解；另一方面，由于Plg与ε-赖氨酸的结合能力比t-PA更强，因此可以实现部分t-PA药物的释放，更精准的作用到血栓形成部位，完成血栓的溶解。
在其中一个实施例中，所述A1或者所述A2具有通式(IV)所示结构：
Figure BDA0004000022860000031
其中，n取自1～4中的整数。
在其中一个实施例中，所述纤溶功能结构单元基于纤溶功能单体得到，所述纤溶功能单体具有通式(V)所示结构：
Figure BDA0004000022860000032
其中，R1独立选自氢原子、取代或未取代的碳原子数为1～10的烷基、取代或未取代的碳原子数为1～10的烷氧基、与取代或未取代的碳原子数为1～10的硫代烷氧基中的至少一种；和/或
所述C具有通式(VI)所示结构：
Figure BDA0004000022860000033
其中，
n为不等于0的整数；
其中，R1独立选自氢原子、取代或未取代的碳原子数为1～10的烷基、取代或未取代的碳原子数为1～10的烷氧基、与取代或未取代的碳原子数为1～10的硫代烷氧基中的至少一种。
在其中一个实施例中，所述聚合物结构由纤溶功能单体与其他功能单体共聚得到，所述其他功能单体选自亲水性单体、抗凝单体、温度敏感性单体和两性离子单体中的至少一种。
在其中一个实施例中，所述亲水性单体选自不饱和羧酸或羧酸盐、不饱和羧酸酯、不饱和酸羟烷基酯、不饱和酸酐、不饱和酰胺和不饱和内酰胺中的至少一种。
在其中一个实施例中，所述亲水性单体选自(甲基)丙烯酸酯类、(甲基)丙烯酰胺、(甲基)丙烯酸(盐)、苯乙烯磺酸盐、乙烯基吡咯烷酮和二甲基丙烯酰胺中的至少一种；
所述温度敏感性单体至少包括N-异丙基丙烯酰胺；
所述两性离子单体选自磷酰胆碱型单体、磷酸甜菜碱型单体、磺酸甜菜碱型单体和羧酸甜菜碱型单体的至少一种；
所述抗凝单体选自双键功能化的肝素、类肝素、水蛭素、血小板抑制剂和多肽中的至少一种。
一种上述任一的溶栓性涂层剂的制备方法，包括如下步骤：
将分子中含有二硫键的蛋白质与还原剂溶于缓冲溶液中，得到第一溶液；将含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物溶于有机溶剂中，得到第二溶液；将所述第一溶液与所述第二溶液混合均匀，充分反应之后得到蛋白质引发剂；
将所述蛋白质引发剂和至少包括纤溶功能单体的单体溶于水中，混合均匀之后通入保护气体除氧，得到混合溶液；
向配体水溶液中通入保护气体除氧，之后加入催化剂发生络合反应，得到含有络合产物的溶液；以及
将所述混合溶液与所述含有络合产物的溶液混合均匀，充分反应之后分离并干燥，得到溶栓性涂层剂。
上述溶栓性涂层剂的制备方法工艺简单，制备得到的溶栓性涂层剂，一方面，蛋白质具有从α螺旋结构向β折叠结构转变的特性，赋予了上述溶栓性涂层剂与基材的粘附特性，有利于提升溶栓性涂层的牢固性，从而对基材具有普适性；另一方面，聚合物基团中含有ε-赖氨酸结构。这种ε-赖氨酸结构中ε-氨基和羧基均以自由的形式存在，因此能够特异性结合t-PA，实现溶栓药物的高度富集。当该溶栓性涂层剂与体内血栓接触时，一方面t-PA可以原位激活血栓环境中的Plg，将其转化成激活形式纤溶酶，来实现纤维蛋白网络的降解；另一方面，由于Plg与ε-赖氨酸的结合能力比t-PA更强，因此可以实现部分t-PA药物的释放，更精准的作用到血栓形成部位，完成血栓的溶解。
在其中一个实施例中，所述分子中含有二硫键的蛋白质选自溶菌酶、白蛋白、大豆蛋白与乳清蛋白中的至少一种；和/或
所述还原剂选自三(2-羧乙基)膦、巯基乙醇、二硫苏糖醇和还原性谷胱甘肽中的至少一种；和/或
所述含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物具有通式(VII)或者通式(VIII)所示结构：
Figure BDA0004000022860000051
其中，R3与R4独立选自：Br或者Cl；n取自1～4中的整数；和/或
所述第一溶液中，所述分子中含有二硫键的蛋白质的浓度为0.1mg/mL～100mg/mL；所述还原剂的浓度为0.1mg/mL～30mg/mL；和/或
所述第二溶液中，所述含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物的浓度为0.5mg/mL～100mg/ml；和/或
所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、二甲基甲酰胺与二甲亚砜中的至少一种；和/或
所述缓冲溶液选自纯水、磷酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磺酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液中的至少一种；和/或
将所述第一溶液与所述第二溶液混合均匀，充分反应之后得到蛋白质引发剂的操作中，充分反应的条件为：维持反应温度为0℃～30℃，维持反应时间为0.5h～6h；和/或
所述配体水溶液选自三(2-二甲氨基乙基)胺溶液、联二吡啶溶液、五甲基二亚乙基三胺溶液与六甲基三乙烯四胺溶液中的一种；和/或
所述催化剂选自溴化亚铜与氯化亚铜中的至少一种；和/或
所述配体水溶液中的配体与所述催化剂的摩尔比为(1～2)：1；和/或
将所述混合溶液与所述含有络合产物的溶液混合均匀，充分反应之后分离并干燥，得到溶栓性涂层剂的操作中，充分反应的条件为：维持反应温度为0℃～70℃，维持反应时间为2h～8h。
一种溶栓性涂层的制备方法，包括如下步骤：
将上述任一的溶栓性涂层剂与二硫键还原剂溶于缓冲溶液中，得到混合溶液；以及
将所述混合溶液涂覆于基材的表面，充分反应后在所述基材的表面形成溶栓性涂层。
采用上述制备方法能够制备得到具有普适性，且可高效结合并富集溶栓药物的溶栓性涂层。
在其中一个实施例中，将上述任一的溶栓性涂层剂与二硫键还原剂溶于缓冲溶液中，得到混合溶液的操作为：
将上述任一的溶栓性涂层剂与二硫键还原剂分别溶于缓冲溶液中，分别得到第一溶液和第二溶液；之后将所述第一溶液与所述第二溶液混合均匀，得到混合溶液；和/或
所述第一溶液中，所述溶栓性涂层剂的浓度为2mg/mL～20mg/mL；和/或
所述第二溶液中，所述二硫键还原剂的浓度为1mg/mL～20mg/mL；和/或
所述二硫键还原剂选自三(2-羧乙基)膦、巯基乙醇、二硫苏糖醇和还原性谷胱甘肽中的至少一种；和/或
所述缓冲溶液选自纯水、磷酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磺酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液中的至少一种；和/或
所述第一溶液与所述第二溶液的体积比为1：1。
一种溶栓性涂层，采用上述的制备方法制备得到。
采用上述制备方法得到的溶栓性涂层具有普适性，且可高效结合并富集溶栓药物。
一种具有溶栓性涂层的制品，包括基材和上述的溶栓性涂层，所述溶栓性涂层设于所述基材上。
上述具有溶栓性涂层的制品具有普适性，且可高效结合并富集溶栓药物，具有广阔的应用前景。
在其中一个实施例中，所述基材为医疗器械。
一种聚合物刷的制备方法，包括如下步骤：
将分子中含有二硫键的蛋白质与还原剂溶于缓冲溶液中，得到第一溶液；将含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物溶于有机溶剂中，得到第二溶液；将所述第一溶液与所述第二溶液混合均匀，充分反应之后得到蛋白质引发剂；
将所述蛋白质引发剂与二硫键还原剂分别溶于缓冲溶液中，分别得到第三溶液和第四溶液；将所述第三溶液与所述第四溶液混合均匀之后涂覆于基材的表面，得到具有蛋白质引发剂的基材；以及
将配体、催化剂、至少包括纤溶功能单体的单体与水混合均匀，之后通入保护气体除氧，得到混合溶液；将所述混合溶液涂敷于所述具有蛋白质引发剂的基材的表面，充分反应后在基材的表面形成聚合物刷。
采用上述聚合物刷的制备方法，能够制备得到具有普适性、且可高效结合并富集溶栓药物的聚合物刷。
一种具有聚合物刷的制品，包括基材和采用上述的聚合物刷的制备方法制备得到的聚合物刷，所述聚合物刷设于所述基材上。
上述具有聚合物刷的制品具有普适性，且可高效结合并富集溶栓药物，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例1中二溴马来酰亚胺衍生物的核磁氢谱图；
图2为本发明实施例1中纤溶功能单体的核磁氢谱图；
图3为本发明实施例4和5的溶栓性涂层以及对比例1的涂层的血栓溶解测试结果图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明中术语“取代或未取代”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“取代或未取代烷基”意味着烷基上可进一步被取代，也可不被取代。
进一步地，当本发明的取代基可进一步被取代时，可以被以下基团取代：烷基、环烷基、烷氧基、杂环基、芳基、杂芳基、硅烷基、酮基、羰基、羧基、酯基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、氨基、氰基、氨基甲酰基、卤甲酰基、异氰基、异氰酸酯基、硫氰酸酯基、异硫氰酸酯基、羟基、硝基或卤素。
更进一步，可以被以下基团取代：C1-6烷基、3-8元环烷基、C1-6烷氧基、3-8元杂环基、5-10元芳基、5-10元杂芳基、硅烷基、酮基、羰基、羧基、酯基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、氨基、氰基、氨基甲酰基、卤甲酰基、异氰基、异氰酸酯基、硫氰酸酯基、异硫氰酸酯基、羟基、硝基或卤素。
“烷基”是指饱和脂肪族烃基，包括直链和支链基团。C1-C6烷基是指含有1至6个碳原子的烷基。非限定性实施例包括：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基。C1-C4烷基是指含有1至4个碳原子的烷基。在一实施例中，C1-C4烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基。烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代。
“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃基取代基。3 -8元环烷基是指包括3至8个碳原子。在一实施例中，3 -8元单环环烷基为环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等。多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。环烷基可以是任选被一个或一个以上的取代基取代。
“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，优选氮或氧杂原子；但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。4-10元杂环基是指环包含4至10个环原子，其中1～3个是杂原子；优选杂环基环包含5至6个环原子，其中1～2个是杂原子。
“芳香基团”指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，更优选苯基和萘基，最优选苯基。芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，芳基可以是取代的或未取代的。
5-10元“杂芳香基团”指包含1至4个杂原子，5至10个环原子的杂芳族体系，其中杂原子包括氧、硫和氮。杂芳基优选为是5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其与母体结构连接在一起的环为杂芳基环。杂芳基可以任选取代或未取代。
本发明中取代基“氨基”包括伯仲叔氨基，具体地，氨基包括-NR10R20，其中，R10和R20为氢原子或任意可选基团，例如：H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的支链烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳香基团、或取代或未取代的杂芳香基团等。
烷氧基包括-O-(烷基)和-O-(环烷基)。其中烷基、环烷基的定义如上所述。在一实施例中，C1-C4烷氧基为甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基或环丁氧基。烷氧基可以是任选取代的或未取代。
“羰基”是指“-CO-”；“羧基”指-COOH；“酯基”指“-COOR30”，氨基甲酰基指“-CONR30R40”其中R30和R40为任意可选基团，例如：H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的支链烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳香基团、或取代或未取代的杂芳香基团等。
“硅烷基”指-Si(烷基)3，且与硅相连的三个烷基彼此相同或不相同；“卤素”指氟、氯、溴或碘。
一实施方式的溶栓性涂层剂，具有通式(I)所示结构：
Figure BDA0004000022860000091
其中，P为蛋白质，R具有通式(II)或者通式(III)所示结构：
Figure BDA0004000022860000092
其中，A1与A2独立选自：单键、烯基、炔基、酰基、酰胺基、羰基、砜基、胺基、酯基、取代或未取代的碳原子数为1～60的烷基、或取代或未取代的碳原子数为1～60的烷氧基、或取代或未取代的碳原子数为1～60的硫代烷氧基、取代或未取代的具有5～40个环原子的芳香基团、与取代或未取代的具有5～40个环原子的杂芳香基团中的至少一种；
其中，当A1或者A2选自上述若干基团中的两种或者两种以上时，A1或者A2为这些基团的组合；
其中，G为聚合物基团，且所述聚合物基团中的至少一个重复单元包括纤溶功能结构单元，所述纤溶功能结构单元包括如下基团：
Figure BDA0004000022860000101
上述实施方式的溶栓性涂层剂中，蛋白质P上还可以接枝有其他功能基团，聚合物结构基于纤溶功能单体均聚得到或者基于纤溶功能单体与其他功能单体共聚得到。
上述实施方式的溶栓性涂层剂具有普适性，且可高效结合并富集溶栓药物。
在其中一个实施例中，A1或者A2具有通式(V)所示结构：
Figure BDA0004000022860000102
其中，n取自1～4中的整数。
具体的，通式(V)所示结构中的左侧端基与二溴取代马来酰亚胺基团连接，通式(V)所示结构中的右侧端基与通式(II)或者通式(III)所示结构中的C原子连接。
在其中一个实施例中，纤溶功能结构单元基于纤溶功能单体得到，纤溶功能单体具有通式(V)所示结构：
Figure BDA0004000022860000103
其中，R1独立选自氢原子、取代或未取代的碳原子数为1～10的烷基、取代或未取代的碳原子数为1～10的烷氧基、与取代或未取代的碳原子数为1～10的硫代烷氧基中的至少一种。
在其中一个实施例中，G具有通式(VI)所示结构：
Figure BDA0004000022860000104
其中，n为不等于0的整数；n取值范围优选为1～200；
其中，R1独立选自氢原子、取代或未取代的碳原子数为1～10的烷基、取代或未取代的碳原子数为1～10的烷氧基、与取代或未取代的碳原子数为1～10的硫代烷氧基中的至少一种。
上述实施方式中，聚合物结构G由纤溶功能单体均聚得到，此时聚合物结构G中含有较多的ε-赖氨酸结构，能够特异性结合t-PA，实现溶栓药物的高度富集。
在其中一个实施例中，聚合物结构由纤溶功能单体与其他功能单体共聚得到，其他功能单体选自亲水性单体、抗凝单体、温度敏感性单体和两性离子单体中的至少一种。当其他功能单体选自这些种类的功能单体时，能够赋予本发明的溶栓性涂层剂相应的功能，更有利于应用。其中，其他功能单体指的是除纤溶功能单体之外的其他功能单体，且其他功能单体不限于上述种类的单体。
在其中一个实施例中，亲水性单体选自不饱和羧酸或羧酸盐、不饱和羧酸酯、不饱和酸羟烷基酯、不饱和酸酐、不饱和酰胺和不饱和内酰胺中的至少一种。
在其中一个实施例中，亲水性单体选自(甲基)丙烯酸酯类、(甲基)丙烯酰胺、(甲基)丙烯酸(盐)、苯乙烯磺酸盐、乙烯基吡咯烷酮和二甲基丙烯酰胺中的至少一种；温度敏感性单体至少包括N-异丙基丙烯酰胺；两性离子单体选自磷酰胆碱型单体、磷酸甜菜碱型单体、磺酸甜菜碱型单体和羧酸甜菜碱型单体的至少一种；抗凝单体选自双键功能化的肝素、类肝素、水蛭素、血小板抑制剂和多肽中的至少一种。
本发明上述技术方案的溶栓性涂层剂，一方面，蛋白质具有从α螺旋结构向β折叠结构转变的特性，赋予了上述溶栓性涂层剂与基材的粘附特性，有利于提升溶栓性涂层的牢固性，从而对基材具有普适性；另一方面，聚合物基团中含有ε-赖氨酸结构。这种ε-赖氨酸结构中ε-氨基和羧基均以自由的形式存在，因此能够特异性结合t-PA，实现溶栓药物的高度富集。当该溶栓性涂层剂与体内血栓接触时，一方面t-PA可以原位激活血栓环境中的Plg，将其转化成激活形式纤溶酶，来实现纤维蛋白网络的降解；另一方面，由于Plg与ε-赖氨酸的结合能力比t-PA更强，因此可以实现部分t-PA药物的释放，更精准的作用到血栓形成部位，完成血栓的溶解。
一实施方式的溶栓性涂层剂的制备方法，包括如下步骤：
S11、将分子中含有二硫键的蛋白质与还原剂溶于缓冲溶液中，得到第一溶液；将含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物溶于有机溶剂中，得到第二溶液；将第一溶液与第二溶液混合均匀，充分反应之后得到蛋白质引发剂。
首先，将分子中含有二硫键的蛋白质与还原剂混合之后，还原剂能够打开蛋白质结构中的二硫键，形成自由巯基，使蛋白质由α螺旋结构向β折叠结构转变，β折叠结构蛋白质具有“一步”自组装的性能，有利于后续对材料表面进行改性。
其次，含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物可作为原子转移自由基(ATRP)聚合或者可逆-加成断裂链转移(RAFT)自由基聚合的引发剂使用。含有引发剂基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物可以采用二溴取代马来酰亚胺与具有引发剂作用的化合物反应得到，其中，二溴取代马来酰亚胺的前体可以为2,3-二溴马来酰亚胺或者2,3-二溴马来酸酐。
进一步地，第一溶液与第二溶液混合的过程中，自由巯基和含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物发生桥接反应，从而将含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物接到蛋白质分子中。
在其中一个实施例中，分子中含有二硫键的蛋白质选自溶菌酶、白蛋白、大豆蛋白与乳清蛋白中的至少一种。在这些蛋白质中，尤其优选白蛋白。白蛋白具有优异的抗非特异性蛋白质吸附特性，而特异性蛋白质的吸附正是血栓形成的初始必要条件。因此，本发明的溶栓性涂层剂及涂层在一定程度上兼具了抗非特异性蛋白质吸附以及溶栓功能。
在其中一个实施例中，还原剂选自三(2-羧乙基)膦、巯基乙醇、二硫苏糖醇和还原性谷胱甘肽中的至少一种。在第一溶液中，还原剂均能够打开蛋白质结构中的二硫键，形成巯基，以有利于后续二溴马来酰胺衍生物引发剂的接枝反应。
在其中一个实施例中，含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物具有通式(VII)或者通式(VIII)所示结构：
Figure BDA0004000022860000121
其中，R3与R4独立选自：Br或者Cl；n取自1～4中的整数。
在其中一个实施例中，第一溶液中，分子中含有二硫键的蛋白质的浓度为0.1mg/mL～100mg/mL，优选为0.2mg/mL～30mg/mL，更优选为0.4mg/mL～20mg/mL。
在其中一个实施例中，第一溶液中，还原剂的浓度为0.1mg/mL～30mg/mL，优选为0.2mg/mL～20mg/mL。上述浓度范围的还原剂与上述浓度范围的蛋白质配合使用，既能使蛋白质充分反应，又能避免用量过多导致蛋白质变性。
在其中一个实施例中，第二溶液中，含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物的浓度为0.5mg/mL～100mg/ml。
在其中一个实施例中，有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、二甲基甲酰胺与二甲亚砜中的至少一种。
在其中一个实施例中，缓冲溶液选自纯水、磷酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磺酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液中的至少一种。
在其中一个实施例中，缓冲溶液的pH值范围优选为4.0～10.0。
在其中一个实施例中，将第一溶液与第二溶液混合均匀，充分反应之后得到蛋白质引发剂的操作中，充分反应的条件为：维持反应温度为0℃～30℃，维持反应时间为0.5h～6h。
S12、将步骤S11得到的蛋白质引发剂和至少包括纤溶功能单体的单体溶于水中，混合均匀之后通入保护气体除氧，得到混合溶液。
其中，保护气体用于除去混合溶液中的氧气，保护气体例如可以为氮气等气体。
S13、向配体水溶液中通入保护气体除氧，之后加入催化剂发生络合反应，得到含有络合产物的溶液。
其中，保护气体用于除去配体水溶液中的氧气，保护气体例如可以为氮气等气体。
在其中一个实施例中，配体水溶液选自三(2-二甲氨基乙基)胺溶液、联二吡啶溶液、五甲基二亚乙基三胺溶液与六甲基三乙烯四胺溶液中的一种。
在其中一个实施例中，催化剂选自溴化亚铜与氯化亚铜中的至少一种。
在其中一个实施例中，配体水溶液中的配体与催化剂的摩尔比为(1～2)：1。
S14、将步骤S12得到的混合溶液与步骤S13得到的含有络合产物的溶液混合均匀，充分反应之后分离并干燥，得到溶栓性涂层剂。
在其中一个实施例中，将混合溶液与含有络合产物的溶液混合均匀，充分反应之后分离并干燥，得到溶栓性涂层剂的操作中，充分反应的条件为：维持反应温度为0℃～70℃，维持反应时间为2h～8h。
上述溶栓性涂层剂的制备方法工艺简单，制备得到的溶栓性涂层剂，一方面，蛋白质具有从α螺旋结构向β折叠结构转变的特性，赋予了上述溶栓性涂层剂与基材的粘附特性，有利于提升溶栓性涂层的牢固性，从而对基材具有普适性；另一方面，聚合物基团中含有ε-赖氨酸结构。这种ε-赖氨酸结构中ε-氨基和羧基均以自由的形式存在，因此能够特异性结合t-PA，实现溶栓药物的高度富集。当该溶栓性涂层剂与体内血栓接触时，一方面t-PA可以原位激活血栓环境中的Plg，将其转化成激活形式纤溶酶，来实现纤维蛋白网络的降解；另一方面，由于Plg与ε-赖氨酸的结合能力比t-PA更强，因此可以实现部分t-PA药物的释放，更精准的作用到血栓形成部位，完成血栓的溶解。
一实施方式的溶栓性涂层的制备方法，包括如下步骤：
S21、将上述任一的溶栓性涂层剂与二硫键还原剂溶于缓冲溶液中，得到混合溶液。
在其中一个实施例中，将上述任一的溶栓性涂层剂与二硫键还原剂溶于缓冲溶液中，得到混合溶液的操作为：将上述任一的溶栓性涂层剂与二硫键还原剂分别溶于缓冲溶液中，分别得到第一溶液和第二溶液；之后将第一溶液与第二溶液混合均匀，得到混合溶液。
在其中一个实施例中，第一溶液中，溶栓性涂层剂的浓度为2mg/mL～20mg/mL。
在其中一个实施例中，第二溶液中，二硫键还原剂的浓度为1mg/mL～20mg/mL。
在其中一个实施例中，第一溶液与第二溶液的体积比为1：1。
在其中一个实施例中，二硫键还原剂选自三(2-羧乙基)膦、巯基乙醇、二硫苏糖醇和还原性谷胱甘肽中的至少一种。
在其中一个实施例中，缓冲溶液选自纯水、磷酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磺酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液中的至少一种。
S22、将步骤S21得到的混合溶液涂覆于基材的表面，充分反应后在基材的表面形成溶栓性涂层。
步骤S22中，可以通过浸涂、旋涂、喷涂、滴加等方式将混合溶液涂覆在基材的表面，在基材的气液界面形成一层纳米薄膜。其中，二硫键还原剂能够还原蛋白质-聚合物偶联物中未被还原的二硫键，生成自由巯基，使蛋白质由α螺旋结构向β折叠结构转变，β折叠结构蛋白质具有“一步”自组装的性能，从而可以一步实现在表面修饰上至少具有溶栓功能的聚合物。对于基材的材质和造型都不具有选择性，可以在任何材质、任何造型的基材表面实现牢固的涂层，且无需对材料表面进行复杂的预处理。同时，步骤简单，反应条件温和，不涉及复杂的有机溶剂环境，不会对基材造成破坏。
采用上述制备方法能够制备得到具有普适性，且可高效结合并富集溶栓药物的溶栓性涂层。
一实施方式的溶栓性涂层，采用上述的制备方法制备得到。
采用上述制备方法得到的溶栓性涂层具有普适性，且可高效结合并富集溶栓药物。
一实施方式的具有溶栓性涂层的制品，包括基材和上述的溶栓性涂层，溶栓性涂层设于基材上。
其中，基材的材料和形状均不限，材料可以为有机材料或者无机材料，形状可以为薄膜、片材、棒、管、模制部件、纤维、织物或者颗粒。
在其中一个实施例中，基材为医疗器械。本发明中“医疗器械”应该解释为广义。医疗器械可以为可植入器械或体外器械。该器械可以短期暂时使用或者长期永久性植入。适合的医疗器械的例子为导管、导丝、内窥镜、喉镜、饲管、引流管、医用导线、避孕套、屏障层结构如用于手套、支架、支架移植物、吻合连接器、体外血导管、薄膜如用于透析、血液过滤器、循环辅助器材、伤口敷料、集尿袋、耳管、眼内晶状体和在微创手术中使用的任何管等。典型的，该医疗器材选自导管、导丝、内窥镜、喉镜、饲管、引流管、医用导线。特别适于用在本发明中的制品包括导管(例如间歇性导管、球囊导管、PTCP导管、支架输送导管)、导丝、导线、注射器、接触镜、医用管和支架及其他其它金属或聚合物基体的植入体。特别地，本发明适用于多种材质导管/导丝，包括聚氯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、硅橡胶、乳胶、聚四氟乙烯、聚全氟乙丙烯、Pebax、聚氨酯、尼龙、各类金属等。
上述具有溶栓性涂层的制品具有普适性，且可高效结合并富集溶栓药物，具有广阔的应用前景。
一实施方式的聚合物刷的制备方法，包括如下步骤：
S31、将分子中含有二硫键的蛋白质与还原剂溶于缓冲溶液中，得到第一溶液；将含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物溶于有机溶剂中，得到第二溶液；将第一溶液与第二溶液混合均匀，充分反应之后得到蛋白质引发剂。
在其中一个实施例中，制备蛋白质引发剂的操作中，分子中含有二硫键的蛋白质选自溶菌酶、白蛋白、大豆蛋白与乳清蛋白中的至少一种。在这些蛋白质中，尤其优选白蛋白。白蛋白具有优异的抵抗非特异性蛋白质吸附特性，而特异性蛋白质的吸附正是血栓形成的初始必要条件。因此，本发明的溶栓性涂层剂及涂层在一定程度上兼具了抗非特异性蛋白质吸附以及溶栓功能。
在其中一个实施例中，还原剂选自三(2-羧乙基)膦、巯基乙醇、二硫苏糖醇和还原性谷胱甘肽中的至少一种。在第一溶液中，还原剂均能够打开蛋白质结构中的二硫键，形成巯基，以有利于后续二溴马来酰胺衍生物引发剂的接枝反应。
在其中一个实施例中，含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物具有通式(VII)或者通式(VIII)所示结构：
Figure BDA0004000022860000151
Figure BDA0004000022860000161
其中，R3与R4独立选自：Br或者Cl；n取自1～4中的整数。
在其中一个实施例中，第一溶液中，分子中含有二硫键的蛋白质的浓度为0.1mg/mL～100mg/mL，优选为0.2mg/mL～30mg/mL，更优选为0.4mg/mL～20mg/mL。
在其中一个实施例中，第一溶液中，还原剂的浓度为0.1mg/mL～30mg/mL，优选为0.2mg/mL～20mg/mL。上述浓度范围的还原剂与上述浓度范围的蛋白质配合使用，既能使蛋白质充分反应，又能避免用量过多导致蛋白质变性。
在其中一个实施例中，第二溶液中，含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物的浓度为0.5mg/mL～100mg/ml。
在其中一个实施例中，有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、二甲基甲酰胺与二甲亚砜中的至少一种。
在其中一个实施例中，缓冲溶液选自磷酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磺酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液中的至少一种。
在其中一个实施例中，缓冲溶液的pH值范围优选为4.0～10.0。
在其中一个实施例中，将第一溶液与第二溶液混合均匀，充分反应之后得到蛋白质引发剂的操作中，充分反应的条件为：维持反应温度为0℃～30℃，维持反应时间为0.5h～6h。
S32、将蛋白质引发剂与二硫键还原剂分别溶于缓冲溶液中，分别得到第三溶液和第四溶液；将第三溶液与第四溶液混合均匀之后涂覆于基材的表面，得到具有蛋白质引发剂的基材。
在其中一个实施例中，制备具有蛋白质引发剂的表面的操作中，第三溶液中，蛋白质引发剂的浓度为2mg/mL～20mg/mL。
在其中一个实施例中，第四溶液中，二硫键还原剂的浓度为1mg/mL～20mg/mL。
在其中一个实施例中，二硫键还原剂选自三(2-羧乙基)膦、巯基乙醇、二硫苏糖醇和还原性谷胱甘肽中的至少一种。
在其中一个实施例中，缓冲溶液选自磷酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磺酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液中的至少一种。
在其中一个实施例中，第三溶液与第四溶液的体积比为1：1。
S33、将配体、催化剂、至少包括纤溶功能单体的单体与水混合均匀，之后通入保护气体除氧，得到混合溶液；将混合溶液涂敷于具有蛋白质引发剂的基材的表面，充分反应后在基材的表面形成聚合物刷。
在其中一个实施例中，配体水溶液选自三(2-二甲氨基乙基)胺溶液、联二吡啶溶液、五甲基二亚乙基三胺溶液与六甲基三乙烯四胺溶液中的一种。
在其中一个实施例中，催化剂选自溴化亚铜与氯化亚铜中的至少一种。
在其中一个实施例中，配体水溶液中的配体与所述催化剂的摩尔比为(1～2)：1。
在其中一个实施例中，充分反应后在基材的表面形成聚合物刷的操作中，充分反应的条件为：维持反应温度为0℃～70℃，维持反应时间为2h～8h。
采用上述聚合物刷的制备方法，能够制备得到具有普适性、且可高效结合并富集溶栓药物的聚合物刷。
一实施方式的聚合物刷，采用上述的聚合物刷的制备方法制备得到。
采用上述聚合物刷的制备方法制备得到的聚合物刷具有普适性、且可高效结合并富集溶栓药物。
一实施方式的具有聚合物刷的制品，包括基材和上述的聚合物刷，聚合物刷设于基材上。
在其中一个实施例中，基材为医疗器械。
上述具有聚合物刷的制品具有普适性，且可高效结合并富集溶栓药物，具有广阔的应用前景。
参照上述实施内容，为了使得本申请的技术方案更加具体清楚、易于理解，现对本申请技术方案进行举例，但是需要说明的是，本申请所要保护的内容不限于以下实施例。
实施例1
本实施例提供一种溶栓性涂层剂及其制备方法，步骤如下：
(1)制备二溴马来酰亚胺衍生物，步骤如下：
Figure BDA0004000022860000171
称取2.98g(10mmol)羟乙基二溴马来酰亚胺溶于20mL二氯甲烷中，向其中滴加2.51g(11mmol)溴异丁酰溴和1.21g(11mmol)三乙胺，室温反应20小时。反应液依次用饱和NaHCO3和去离子水洗涤，有机相用无水硫酸镁干燥；以乙酸乙酯和正己烷为淋洗剂，通过柱层析纯化后得到3.8g淡黄色固体产物，产率84％。对步骤(1)得到的产物进行核磁共振波谱的测定，得到图1的核磁氢谱：4.31ppm(2H,-CH2)，3.92ppm(2H,-CH2),1.87ppm(6H,-CH3)。
(2)制备蛋白质引发剂(牛血清白蛋白(BSA)大分子引发剂)，步骤如下：
将20mg BSA溶于10ml缓冲液(pH＝8.0)，并加入30mg还原剂三(2-羧乙基)膦，得到浓度为2mg/ml的蛋白溶液，向其中滴加二溴马来酰亚胺衍生物的DMSO溶液(5mg/ml)，在20℃条件下反应2小时；之后将混合溶液转移到透析袋中(截留分子量：50000)透析，冷冻干燥后得到蛋白质引发剂。
(3)制备纤溶功能单体，步骤如下：
Figure BDA0004000022860000181
向100ml烧瓶中加入赖氨酸原料(H-Lys-(Boc)-Ot Bu·HCl)(2.71g，8.0mmol)以及35mL干燥的二氯甲烷，待其完全溶解后，向溶液中加入纯化的三乙胺(2.25mL，16.2mmol)。将烧瓶置于冰水浴中，在氮气保护下用注射器将甲基丙烯酰氯(0.8mL，8.1mmol)缓慢滴加到反应溶液中。在冰浴条件下反应1小时后，将烧瓶置于室温条件下继续反应18个小时。反应结束后，将反应液依次用饱和食盐水、0.1M盐酸以及0.1M碳酸氢钠溶液洗涤3次。收集产物并干燥，得到白色固体。
然后对得到的产物进行脱保护处理：取上述双键赖氨酸370mg，加入二氯甲烷2ml，缓慢滴加1ml三氟乙酸，反应3小时后收集产物并干燥。对步骤(3)得到的产物进行核磁共振波谱的测定，得到图2的核磁氢谱：5.45-5.68ppm(2H,-CH2C(CH3)-)，1.89ppm(3H,CH3C(＝CH2)-)。
(4)制备溶栓性涂层剂，步骤如下：
a、称取20mgBSA大分子引发剂和115mg单体赖氨酸(ε-赖氨酸)放入反应瓶中，加入5mL超纯水使其完全溶解，通入氮气15min置换反应瓶中的氧气，得到混合溶液。
b、在圆底烧瓶中加入三(2-二甲氨基乙基)胺(5μL，0.019mmol)和1mL水，通入氮气5min除去瓶中的氧气；在氮气保护下加入CuBr(2.7mg，0.019mmol)并将烧瓶置于冰水浴中，搅拌反应30min，得到含有络合产物的溶液。
c、将步骤a得到的混合溶液通过注射器转移到步骤b的烧瓶中，冰浴条件下继续反应3小时；反应结束后，将反应溶液透析(MWCO 50000)2天，冻干后得到固体物质，即为实施例1的溶栓性涂层剂(即BSA-Lys偶联物)。
实施例2
本实施例提供一种溶栓性涂层剂及其制备方法，与实施例1的区别仅在于步骤(4)不同，实施例2的步骤(4)如下：
a、称取20mg BSA大分子引发剂和50mg纤溶功能单体赖氨酸(ε-赖氨酸)以及30mg亲水单体聚甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)放入反应瓶中，加入5mL超纯水使其完全溶解，通入氮气15min置换反应瓶中的氧气，得到混合溶液。
b、在圆底烧瓶中加入三(2-二甲氨基乙基)胺(5μL，0.019mmol)和1mL水，通入氮气5min除去瓶中的氧气；在氮气保护下加入CuBr(2.7mg，0.019mmol)并将烧瓶置于冰水浴中，搅拌反应30min，得到含有络合产物的溶液。
c、将步骤a得到的混合溶液通过注射器转移到步骤b的烧瓶中，冰浴条件下继续反应3小时；反应结束后，将反应溶液透析(MWCO 50000)2天，冻干后得到固体物质，即为实施例2的溶栓性涂层剂(即BSA-HEMA-Lys偶联物)。
实施例3
本实施例提供一种溶栓性涂层剂及其制备方法，与实施例1的区别仅在于步骤(4)不同，实施例3的步骤(4)如下：
a、称取20mg BSA大分子引发剂和50mg纤溶功能单体赖氨酸(ε-赖氨酸)以及30mg单体N-异丙基丙烯酰胺(NIPAm)放入反应瓶中，加入5mL超纯水使其完全溶解，通入氮气15min置换反应瓶中的氧气，得到混合溶液。
b、在圆底烧瓶中加入三(2-二甲氨基乙基)胺(5μL，0.019mmol)和1mL水，通入氮气5min除去瓶中的氧气；在氮气保护下加入CuBr(2.7mg，0.019mmol)并将烧瓶置于冰水浴中，搅拌反应30min，得到含有络合产物的溶液。
c、将步骤a得到的混合溶液通过注射器转移到步骤b的烧瓶中，冰浴条件下继续反应3小时；反应结束后，将反应溶液透析(MWCO 50000)2天，冻干后得到固体物质，即为实施例3的溶栓性涂层剂(即BSA-NIPAm-Lys偶联物)。
实施例4
本实施例提供一种溶栓性涂层及其制备方法和具有溶栓性涂层的制品，步骤如下：
将30mg实施例1的BSA-Lys偶联物溶解在6mL超纯水中，加入20mg还原剂TCEP，混合均匀；将PVC导管浸入混合液中，在25℃温度条件下浸泡40min。之后将PVC导管取出，用去离子水冲洗表面，晾干，得到改性BSA-Lys偶联物涂层及制品，制品记为PVC-BSA-Lys。
实施例5
本实施例提供一种溶栓性涂层及其制备方法和具有溶栓性涂层的制品，步骤如下：
将30mg实施例2的BSA-HEMA-Lys偶联物溶解在6mL超纯水中，加入20mg还原剂TCEP，混合均匀；将PVC导管浸入混合液中，在25℃温度条件下浸泡40min。之后将PVC导管取出，用去离子水冲洗表面，晾干，得到改性BSA-HEMA-Lys偶联物涂层及制品，制品记为PVC-BSA-HEMA-Lys。
实施例6
本实施例提供一种溶栓性涂层及其制备方法和具有溶栓性涂层的制品，步骤如下：
将30mg实施例3的BSA-NIPAm-Lys偶联物溶解在6mL超纯水中，加入20mg还原剂TCEP，混合均匀；将PVC导管浸入混合液中，在25℃温度条件下浸泡40min。之后将PVC导管取出，用去离子水冲洗表面，晾干，得到改性BSA-NIPAm-Lys偶联物涂层及制品，制品记为PVC-BSA-NIPAm-Lys。
实施例7
本实施例提供一种溶栓性涂层及其制备方法和具有溶栓性涂层的制品，步骤如下：
与实施例5的区别在于：将PVC导管更换为聚氨酯(PU)导管，制品记为PU-BSA-HEMA-Lys。
实施例8
本实施例提供一种溶栓性涂层及其制备方法和具有溶栓性涂层的制品，步骤如下：
与实施例5的区别在于：将PVC导管更换为乳胶导管，制品记为乳胶-BSA-HEMA-Lys。
实施例9
本实施例提供一种溶栓性涂层及其制备方法和具有溶栓性涂层的制品，步骤如下：
与实施例5的区别在于：将PVC导管更换为硅胶导管，制品记为硅胶-BSA-HEMA-Lys。
实施例10
本实施例提供一种溶栓性涂层及其制备方法和具有溶栓性涂层的制品，步骤如下：
与实施例5的区别在于：将PVC导管更换为不锈钢导管，制品记为不锈钢-BSA-HEMA-Lys。
实施例11
本实施例提供一种溶栓性涂层及其制备方法和具有溶栓性涂层的制品，步骤如下：
与实施例5的区别在于：将PVC导管更换为玻璃导管，制品记为玻璃-BSA-HEMA-Lys。
实施例12
本实施例提供一种基于SET-LRP表面引发制备聚合物刷及其制备方法和涂覆制品：
(1)将实施例1步骤(2)中获得的蛋白质引发剂20mg溶解在10mL超纯水中，并加入30mg还原剂TCEP，混合均匀，并将聚氯乙烯导管浸入上述混合溶液中，在25℃温度条件下浸泡40min。之后将PVC导管取出，用去离子水冲洗表面，晾干，在PVC导管的表面形成蛋白质引发剂涂层，得到具有蛋白质引发剂涂层的涂覆制品。
(2)称取50mg纤溶功能单体赖氨酸(ε-赖氨酸)以及30mg亲水单体聚甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)放入反应瓶中，加入5mL超纯水使其完全溶解，通入氮气15min置换反应瓶中的氧气。
(3)在圆底烧瓶中加入三(2-二甲氨基乙基)胺(5μL，0.019mmol)和1mL水，通入氮气5min除去瓶中的氧气；在氮气保护下加入CuBr(2.7mg，0.019mmol)并将烧瓶置于冰水浴中，搅拌反应30min。
(4)将步骤(2)中所得溶液通过注射器转移到步骤(3)的烧瓶中，得到混合溶液，之后将步骤(1)的具有蛋白质引发剂涂层的涂覆制品浸入上述混合溶液中，冰浴条件下继续反应4小时。
(5)反应结束后，将PVC导管取出，用去离子水冲洗表面，真空干燥后在PVC的表面形成聚合物刷，得到实施例12的具有HEMA-Lys聚合物刷的涂覆制品。
实施例13～实施例15
实施例13～实施例15分别提供一种具有聚合物刷的涂覆制品，制备步骤与实施例12相同，区别仅在于，基材不同，实施例13～实施例15的基材依次为聚氨酯导管、硅胶导管、乳胶导管。
对比例1～6
依次为未经任何改性的PVC导管、聚氨酯(PU)导管、乳胶导管、硅胶导管、不锈钢导管和玻璃导管。
对比例7
本对比例提供一种涂层剂及其制备方法，与实施例1的区别仅在于步骤(4)不同，对比例7的步骤(4)如下：
a、称取20mg BSA大分子引发剂和130mg单体HEMA(甲基丙烯酸羟乙酯)放入反应瓶中，加入3mL超纯水使其完全溶解，通入氮气15min置换反应瓶中的氧气，得到混合溶液。
b、在圆底烧瓶中加入三(2-二甲氨基乙基)胺(5μL，0.019mmol)和1mL水，通入氮气5min除去瓶中的氧气；在氮气保护下加入CuBr(2.7mg，0.019mmol)并将烧瓶置于冰水浴中，搅拌反应30min，得到含有络合产物的溶液。
c、将步骤a得到的混合溶液通过注射器转移到步骤b的烧瓶中，冰浴条件下继续反应3小时；反应结束后，将反应溶液透析(MWCO 50000)2天，冻干后得到对比例7的涂层剂(即BSA-PHEMA偶联物)。
对比例8
本对比例提供一种涂层及其制备方法和具有涂层的制品，步骤如下：
将30mg对比例7的BSA-PHEMA偶联物溶解在6mL超纯水中，加入20mg还原剂TCEP，混合均匀；将PVC导管浸入混合液中，在25℃温度条件下浸泡40min。之后将PVC导管取出，用去离子水冲洗表面，晾干，得到改性BSA-PHEMA偶联物涂层及制品，制品记为PVC-BSA-PHEMA。
性能测试：
抗蛋白吸附测试：
1、纤维蛋白原(Fg)标记
通过氯化碘(ICl)的方法标记Fg，即利用ICl将125I阴离子氧化成为125I分子，而将125I标记于蛋白中酪氨酸残基的羟基上面。将标记后的Fg蛋白溶液通过阴离子交换树脂以除未反应的125I离子。通过紫外/可见分光光度计(UV-Vis)测定标记的蛋白质溶液的浓度。
2、Fg在涂覆制品的吸附
将实施例4～13与对比例1～6以及对比例8的待测试的样品(长度约为1cm)预先在PBS(pH＝7.4)中浸泡使材料表面充分浸润以达到水合平衡。其中，用于吸附的蛋白溶液的浓度为1mg/mL。之后将实施例4～13与对比例1～6以及对比例8的待测试的样品分别置于96孔板内，每孔加入250μL蛋白吸附液，室温下静态吸附3个小时后，用PBS润洗膜片并用滤纸蘸干(重复3次)，然后将膜片置入检测管，通过γ-计数器测定相应的放射量。每个样品取三个平行结果的平均值。与此同时，通过测定10μL Fg吸附液的放射量作为参考。最后将表面的放射量换算成单位面积所吸附Fg的质量(μg/cm2)。在TCEP介导下，不同蛋白偶联物在不同基材表面发生类淀粉样组装后，测试其对凝血反应中的主要蛋白Fg的吸附程度，结果如表1所示。
表1实施例4～13与对比例1～6、8的样品的蛋白质吸附测试结果
涂层 <![CDATA[Fg吸附量(μg/cm<sup>2</sup>)]]> <![CDATA[Plg吸附量(μg/cm<sup>2</sup>)]]>
实施例4 PVC-BSA-Lys 0.14 0.20
实施例5 PVC-BSA-HEMA-Lys 0.09 0.24
实施例6 PVC-BSA-NIPAm-Lys 0.12 0.22
实施例7 PU-BSA-HEMA-Lys 0.07 0.23
实施例8 乳胶-BSA-HEMA-Lys 0.08 0.22
实施例9 硅胶-BSA-HEMA-Lys 0.12 0.24
实施例10 不锈钢-BSA-HEMA-Lys 0.09 0.21
实施例11 玻璃-BSA-HEMA-Lys 0.09 0.18
实施例12 PVC-HEMA-Lys聚合物刷 0.14 0.12
实施例13 PU-HEMA-Lys聚合物刷 0.15 0.10
对比例1 PVC 0.94 0.01
对比例2 PU 0.96 0.02
对比例3 乳胶 1.01 0.02
对比例4 硅胶 1.21 0.02
对比例5 不锈钢 0.86 0.01
对比例6 玻璃 0.85 0.01
对比例8 PVC-BSA-PHEMA 0.07 0.01
从表1可以看出，与对比例1～6和8相比，即表面未做任何改性的导管相比，本发明实施例4～11的具有溶栓性涂层的制品以及实施例12和13的具有聚合物刷的涂覆制品的表面均具有良好的排斥Fg蛋白吸附特性。同时也证明该涂层可以普适于任何基材上，对于基材没有选择性。而对比例8由于偶联物上含有亲水性单体，也具有较好的排斥Fg蛋白吸附特性。
3、纤溶酶原(Plg)标记
以氯化碘(ICl)方法用125I标记纤维蛋白溶酶原，将纤维蛋白溶酶原通过AG1-X4阴离子交换树脂柱以除去游离碘。
4、Plg在涂覆制品的吸附
将标记的蛋白质加入无血小板的血浆中，浓度约为正常血浆中纤维蛋白溶酶原浓度的10％。将实施例4～13与对比例1～6以及对比例8的待测试的样品(长度约为1cm)放入上述蛋白质溶液中培养3h，用磷酸缓冲溶液淋洗三次，每次10min，用滤纸吸干后将其转移到干净的管中利用自动伽玛粒子计数器测试其放射量。蛋白质吸附量以单位面积上的质量来计算，结果如表1所示。
从表1可以看出，对比例1～6以及对比例8的各基材表面的纤溶酶原吸附量均较低，这是由于未改性的材料表面不具备从血浆中特异性吸附纤溶酶的能力。而本发明实施例4～13，由于涂层剂偶联物或者聚合物刷中含有纤溶功能的赖氨酸结构，所以均可从血浆中特异性吸附大量纤溶酶原。
血栓溶解性能测试：
将实施例4和5与对比例1的待测试的样品(长度约为0.5cm)浸泡于三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH＝7.4)1h，取出后再浸泡于普通人体血浆中3h，取出测试样，用三羟甲基氨基甲烷缓冲液淋洗三次。将样品浸泡于t-PA溶液中10min。用三羟甲基氨基甲烷缓冲液淋洗测试样3次，取出测试样，用滤纸吸干，加入100μL血浆后，再加入100μL 0.025M的氯化钙溶液。上述所有浸泡都在37℃恒温培养箱中进行，加入的血浆和t-PA需先在37℃培养箱中预热。用酶标仪测量405nm处吸收，时间间隔定为30s，测试总时长不得少于1h。
当血液中产生初级血栓(即纤维蛋白凝块)时，其表面暴露出的羧基端赖氨酸残基会从血浆中选择性地结合Plg及其生理激活剂t-PA，形成三元复合物。该复合物会加速t-PA对Plg的激活，从而产生大量纤维蛋白溶酶，降解所形成的纤维蛋白。通过模拟这一过程设计了一种血浆复钙化的实验来评价材料表面的溶栓能力。该实验方法以405nm处的吸光值来表示血浆的浑浊度，进而判断血栓的形成和溶解。各样品对应的吸光值随时间的变化曲线如图3所示。
从图3可以看出，对比例1表面由于不含自由的ε-赖氨酸，从而表现出典型的血栓形成曲线：随着时间延长，吸光值逐渐上升，达到最高值之后形成平台，表明稳定纤维蛋白凝块的形成。相比之下，本发明中两种带有蛋白质-纤溶功能偶联物涂层的样品所对应的吸光值在上升至一定程度后，迅速下降至基线，表明纤维蛋白生成后又被全部溶解。表明只有含ε-赖氨酸表面才能结合Plg并在t-PA激活下转变为纤维蛋白溶酶，从而将纤维蛋白溶解。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (15)

1.一种溶栓性涂层剂，其特征在于，具有通式(I)所示结构：
Figure FDA0004000022850000011
其中，P为蛋白质，R具有通式(II)或者通式(III)所示结构：
Figure FDA0004000022850000012
其中，A1与A2独立选自：单键、烯基、炔基、酰基、酰胺基、羰基、砜基、胺基、酯基、取代或未取代的碳原子数为1～60的烷基、取代或未取代的碳原子数为1～60的烷氧基、取代或未取代的碳原子数为1～60的硫代烷氧基、取代或未取代的具有5～40个环原子的芳香基团、与取代或未取代的具有5～40个环原子的杂芳香基团中的至少一种；
其中，G为聚合物基团，且所述聚合物基团中的至少一个重复单元包括纤溶功能结构单元，所述纤溶功能结构单元包括如下基团：
Figure FDA0004000022850000013
2.根据权利要求1所述的溶栓性涂层剂，其特征在于，所述A1或者所述A2具有通式(IV)所示结构：
Figure FDA0004000022850000014
其中，n取自1～4中的整数。
3.根据权利要求1所述的溶栓性涂层剂，其特征在于，所述纤溶功能结构单元基于纤溶功能单体得到，所述纤溶功能单体具有通式(V)所示结构：
Figure FDA0004000022850000021
其中，R1独立选自氢原子、取代或未取代的碳原子数为1～10的烷基、取代或未取代的碳原子数为1～10的烷氧基、与取代或未取代的碳原子数为1～10的硫代烷氧基中的至少一种；和/或
所述G具有通式(VI)所示结构：
Figure FDA0004000022850000022
其中，n为不等于0的整数；
其中，R1独立选自氢原子、取代或未取代的碳原子数为1～10的烷基、取代或未取代的碳原子数为1～10的烷氧基、与取代或未取代的碳原子数为1～10的硫代烷氧基中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的溶栓性涂层剂，其特征在于，所述聚合物结构由纤溶功能单体与其他功能单体共聚得到，所述其他功能单体选自亲水性单体、抗凝单体、温度敏感性单体和两性离子单体中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的溶栓性涂层剂，其特征在于，所述亲水性单体选自不饱和羧酸或羧酸盐、不饱和羧酸酯、不饱和酸羟烷基酯、不饱和酸酐、不饱和酰胺和不饱和内酰胺中的至少一种。
6.根据权利要求4所述的溶栓性涂层剂，其特征在于，所述亲水性单体选自(甲基)丙烯酸酯类、(甲基)丙烯酰胺、(甲基)丙烯酸(盐)、苯乙烯磺酸盐、乙烯基吡咯烷酮和二甲基丙烯酰胺中的至少一种；
所述温度敏感性单体至少包括N-异丙基丙烯酰胺；
所述两性离子单体选自磷酰胆碱型单体、磷酸甜菜碱型单体、磺酸甜菜碱型单体和羧酸甜菜碱型单体的至少一种；
所述抗凝单体选自双键功能化的肝素、类肝素、水蛭素、血小板抑制剂和多肽中的至少一种。
7.一种权利要求1～6中任一项所述的溶栓性涂层剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将分子中含有二硫键的蛋白质与还原剂溶于缓冲溶液中，得到第一溶液；将含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物溶于有机溶剂中，得到第二溶液；将所述第一溶液与所述第二溶液混合均匀，充分反应之后得到蛋白质引发剂；
将所述蛋白质引发剂和至少包括纤溶功能单体的单体溶于水中，混合均匀之后通入保护气体除氧，得到混合溶液；
向配体水溶液中通入保护气体除氧，之后加入催化剂发生络合反应，得到含有络合产物的溶液；以及
将所述混合溶液与所述含有络合产物的溶液混合均匀，充分反应之后分离并干燥，得到溶栓性涂层剂。
8.根据权利要求7所述的溶栓性涂层剂的制备方法，其特征在于，所述分子中含有二硫键的蛋白质选自溶菌酶、白蛋白、大豆蛋白与乳清蛋白中的至少一种；和/或
所述还原剂选自三(2-羧乙基)膦、巯基乙醇、二硫苏糖醇和还原性谷胱甘肽中的至少一种；和/或
所述含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物具有通式(VII)或者通式(VIII)所示结构：
Figure FDA0004000022850000031
其中，R3与R4独立选自：Br或者Cl；n取自1～4中的整数；和/或
所述第一溶液中，所述分子中含有二硫键的蛋白质的浓度为0.1mg/mL～100mg/mL；所述还原剂的浓度为0.1mg/mL～30mg/mL；和/或
所述第二溶液中，所述含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物的浓度为0.5mg/mL～100mg/ml；和/或
所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、二甲基甲酰胺与二甲亚砜中的至少一种；和/或
所述缓冲溶液选自纯水、磷酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磺酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液中的至少一种；和/或
将所述第一溶液与所述第二溶液混合均匀，充分反应之后得到蛋白质引发剂的操作中，充分反应的条件为：维持反应温度为0℃～30℃，维持反应时间为0.5h～6h；和/或
所述配体水溶液选自三(2-二甲氨基乙基)胺溶液、联二吡啶溶液、五甲基二亚乙基三胺溶液与六甲基三乙烯四胺溶液中的一种；和/或
所述催化剂选自溴化亚铜与氯化亚铜中的至少一种；和/或
所述配体水溶液中的配体与所述催化剂的摩尔比为(1～2)：1；和/或
将所述混合溶液与所述含有络合产物的溶液混合均匀，充分反应之后分离并干燥，得到溶栓性涂层剂的操作中，充分反应的条件为：维持反应温度为0℃～70℃，维持反应时间为2h～8h。
9.一种溶栓性涂层的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将权利要求1～6中任一项所述的溶栓性涂层剂与二硫键还原剂溶于缓冲溶液中，得到混合溶液；以及
将所述混合溶液涂覆于基材的表面，充分反应后在所述基材的表面形成溶栓性涂层。
10.根据权利要求9所述的溶栓性涂层的制备方法，其特征在于，将权利要求1～6中任一项所述的溶栓性涂层剂与二硫键还原剂溶于缓冲溶液中，得到混合溶液的操作为：
将权利要求1～6中任一项所述的溶栓性涂层剂与二硫键还原剂分别溶于缓冲溶液中，分别得到第一溶液和第二溶液；之后将所述第一溶液与所述第二溶液混合均匀，得到混合溶液；和/或
所述第一溶液中，所述溶栓性涂层剂的浓度为2mg/mL～20mg/mL；和/或
所述第二溶液中，所述二硫键还原剂的浓度为1mg/mL～20mg/mL；和/或
所述二硫键还原剂选自三(2-羧乙基)膦、巯基乙醇、二硫苏糖醇和还原性谷胱甘肽中的至少一种；和/或
所述缓冲溶液选自纯水、磷酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磺酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液中的至少一种；和/或
所述第一溶液与所述第二溶液的体积比为1：1。
11.一种溶栓性涂层，其特征在于，采用权利要求9或者10所述的制备方法制备得到。
12.一种具有溶栓性涂层的制品，其特征在于，包括基材和权利要求11所述的溶栓性涂层，所述溶栓性涂层设于所述基材上。
13.根据权利要求12所述的具有溶栓性涂层的制品，其特征在于，所述基材为医疗器械。
14.一种聚合物刷的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将分子中含有二硫键的蛋白质与还原剂溶于缓冲溶液中，得到第一溶液；将含有R基团的二溴取代马来酰亚胺衍生物溶于有机溶剂中，得到第二溶液；将所述第一溶液与所述第二溶液混合均匀，充分反应之后得到蛋白质引发剂；
将所述蛋白质引发剂与二硫键还原剂分别溶于缓冲溶液中，分别得到第三溶液和第四溶液；将所述第三溶液与所述第四溶液混合均匀之后涂覆于基材的表面，得到具有蛋白质引发剂的基材；以及
将配体、催化剂、至少包括纤溶功能单体的单体与水混合均匀，之后通入保护气体除氧，得到混合溶液；将所述混合溶液涂敷于所述具有蛋白质引发剂的基材的表面，充分反应后在基材的表面形成聚合物刷。
15.一种具有聚合物刷的制品，其特征在于，包括基材和采用权利要求14所述的聚合物刷的制备方法制备得到的聚合物刷，所述聚合物刷设于所述基材上。
CN202211614414.4A 2022-12-15 2022-12-15 溶栓性涂层剂及其制备方法和应用 Pending CN116041595A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211614414.4A CN116041595A (zh) 2022-12-15 2022-12-15 溶栓性涂层剂及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211614414.4A CN116041595A (zh) 2022-12-15 2022-12-15 溶栓性涂层剂及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116041595A true CN116041595A (zh) 2023-05-02

Family

ID=86128518

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211614414.4A Pending CN116041595A (zh) 2022-12-15 2022-12-15 溶栓性涂层剂及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116041595A (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101810888A (zh) * 2010-03-16 2010-08-25 武汉理工大学 一种高密度固定生物功能分子的材料的制备方法
CN101942105A (zh) * 2010-09-03 2011-01-12 苏州大学 一种高效溶解初生血栓的聚氨酯材料及其制备
CN104262668A (zh) * 2014-04-28 2015-01-07 华东理工大学 具有抗蛋白吸附和抗细胞黏附的聚氨酯材料及其制备方法
CN108603136A (zh) * 2015-11-24 2018-09-28 生物相互作用有限公司 涂布溶液、由其形成的涂层和涂布的医疗设备
US20210002493A1 (en) * 2017-05-17 2021-01-07 Abf Technologies, Llc Zwitterionic monomers, polyzwitterionic polymers formed therefrom, surface functionalization and surface modification
CN113304333A (zh) * 2021-06-10 2021-08-27 深圳清华大学研究院 一种溶栓涂层的制备方法及溶栓涂层
CN114601970A (zh) * 2022-03-28 2022-06-10 东莞市人民医院 一种具有修饰蛋白涂层材料、其制备方法及应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101810888A (zh) * 2010-03-16 2010-08-25 武汉理工大学 一种高密度固定生物功能分子的材料的制备方法
CN101942105A (zh) * 2010-09-03 2011-01-12 苏州大学 一种高效溶解初生血栓的聚氨酯材料及其制备
CN104262668A (zh) * 2014-04-28 2015-01-07 华东理工大学 具有抗蛋白吸附和抗细胞黏附的聚氨酯材料及其制备方法
CN108603136A (zh) * 2015-11-24 2018-09-28 生物相互作用有限公司 涂布溶液、由其形成的涂层和涂布的医疗设备
US20210002493A1 (en) * 2017-05-17 2021-01-07 Abf Technologies, Llc Zwitterionic monomers, polyzwitterionic polymers formed therefrom, surface functionalization and surface modification
CN113304333A (zh) * 2021-06-10 2021-08-27 深圳清华大学研究院 一种溶栓涂层的制备方法及溶栓涂层
CN114601970A (zh) * 2022-03-28 2022-06-10 东莞市人民医院 一种具有修饰蛋白涂层材料、其制备方法及应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ZENGCHAO TANG, ET AL.: "Regulation of fibrinolytic protein adsorption on polyurethane surfaces by modification with lysine-containing copolymers", 《POLYMER CHEMISTRY》, vol. 4, no. 22, 28 June 2013 (2013-06-28), pages 5597 - 5602 *
黄佳磊: "纤溶功能涂层制备方法的优化及性能研究", 硕士毕业论文, 1 June 2022 (2022-06-01), pages 3 - 2 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5492952B2 (ja) 抗血栓コーティング剤及び医療用具
JP4961133B2 (ja) 医療用材料
CN105263536B (zh) 活性剂在衬底上的固定
JPH06510322A (ja) ポリマー処理剤
US7662898B2 (en) Biocompatible material
Tang et al. Vinyl-monomer with lysine side chains for preparing copolymer surfaces with fibrinolytic activity
JP4712924B2 (ja) 医療用材料および製造方法
CN115624657B (zh) 涂层剂及其制备方法和应用
CN116041595A (zh) 溶栓性涂层剂及其制备方法和应用
JPH06313009A (ja) 末端官能性ホスホリルコリン基含有ポリマー
JP3834824B2 (ja) フマル酸誘導体およびその重合体
CN114685699B (zh) 蛋白质引发剂及其制备方法和应用
JP3540457B2 (ja) 抗血栓性を賦与した医療用基材
JP2000514115A (ja) アズラクトン誘導体ポリアミド
JP5059340B2 (ja) 生体適合性材料
JPH06504989A (ja) 新規の抗凝固作用を有するペプチド
JP4694114B2 (ja) 抗血栓性に優れたｌ−リジン残基を有する両性高分子物質、該高分子物質からなる抗血栓剤、及び該抗血栓剤を固定した医療用器具
US6979465B1 (en) Biocompatible polymer systems carrying triflusal or HTB
KR100431245B1 (ko) 항혈전성 삼성분계 공중합체
JPH09302039A (ja) 徐放性抗血栓性共重合体
JP5146945B2 (ja) 抗血栓性コーティング剤及び医療用具
Ma Study of a Novel Zwitterionic Material and Its Biological Applications
CN116410423A (zh) 嵌段共聚物及其制备方法、涂料组合物、抗吸附涂层
JPH02138342A (ja) Ａｂａ型ブロック共重合体、その製法、およびその用途
JP2003275296A (ja) 血液適合性材料

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination