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CN115724857A - 一种芳杂环类化合物、含其的药物组合物及其应用 - Google Patents

一种芳杂环类化合物、含其的药物组合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种式I所示化合物及其组合物和应用，其中A，X，Y，L，M和W如本文所定义。本发明公开的化合物可以用于治疗与JAK3激酶过度激活或者过度表达相关的疾病如自身免疫性疾病、肺损伤、器官移植排斥疾病。体外实验表明，该系列化合物具有良好的JAK3激酶抑制活性作用，在医药领域具有良好的应用前景。

Description

一种芳杂环类化合物、含其的药物组合物及其应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及具有一种或多种Janus激酶(JAK)抑制活性的芳杂环化合物，本发明还涉及所述化合物作为活性成分的药物组合物以及其应用。
背景技术
Janus激酶(JAK)是负责转导许多炎症相关细胞因子信号从细胞因子膜受体到STAT转录因子的细胞质酪氨酸蛋白激酶。JAK/STAT信号转导异常与许多疾病有关，参与免疫炎症相关的疾病如器官移植排斥反应、多发性硬化、类风湿性关节炎、I型糖尿病、狼疮、银屑病、哮喘、食物过敏、特应性皮炎和鼻炎、皮疹等；也有报道和实体和血液恶性肿瘤以及骨髓增生障碍(包括肺癌、乳腺癌、慢性自发性骨髓纤维变性、红细胞增多症、特发性血小板增多症等)的发生发展密切相关。
第一代JAK抑制剂对JAK激酶家族亚型展现出广泛的抑制活性，在炎症性疾病、肿瘤、血液疾病中具有良好疗效。然而由于JAK激酶家族广泛介导多种细胞因子的信号传导，其中很多功能与机体正常生理功能密切相关，Pan-JAK抑制剂在临床应用中显现出的副作用包括贫血、中性粒细胞减少症、感染、淋巴细胞减少症、高脂血症等，其中Tofacitinib存在感染和血栓风险，被FDA发出黑框警告，Ruxolitinib也有血小板异常黑框警告。
第二代选择性JAK抑制剂通常主要作用于JAK家族特定亚型，在控制疾病发展的同时，能够降低不良反应事件的发生。目前已经上市的JAK选择性抑制剂包括新基的JAK2抑制剂Fedratinib，艾伯维的JAK1选择性抑制剂upadacitinib和Gilead的JAK1抑制剂Filgotinib。JAK1抑制剂治疗免疫疾病的疗效突出，但仍属于广谱免疫抑制剂，选择性有限，安全性风险较高，已上市的JAK1抑制剂Upadacitinib和Baricitinib均有黑框警告，已上市的JAK2抑制剂Fedratinib也有韦尼克脑病、眼眶炎症反应等严重不良反应。
JAK3主要表达于各造血组织细胞中，包括骨髓细胞、胸腺细胞、NK细胞及活化的B淋巴细胞、T淋巴细胞等，其生理效应仅源于常见的γ细胞因子受体家族的信号转导过程，因此高选择性作用于JAK3激酶可以避免不必要的副作用。因此提高JAK3激酶抑制剂的活性和选择性，能够进一步提高JAK3激酶抑制剂的临床使用效果，相较于目前临床应用的Pan-JAK抑制剂和选择性JAK1、JAK2抑制剂具有显著的临床优势。目前高选择性JAK3抑制剂除了PF-06651600已经进入临床后期开发阶段并获得FDA突破性疗法的认定用于治疗斑秃，其他的JAK3激酶抑制剂仍处于学术研究和临床早期开发阶段。PF-06651600还不可逆地抑制TEC激酶家族(BTK，BMX，ITK，RLK，TEC)，PF-06651600对于自身免疫性疾病的治疗效果很大程度上还来源于其对TEC激酶家族的抑制。临床2a期数据表明PF-06651600的治疗期间出现的不良事件是感染、皮肤及皮下组织疾病。同时不少病人出现了血小板减少的症状，这可能与PF-06651600对于TEC激酶家族的抑制作用相关。(Robinson M.F.,Damjanov N.,Stamenkovic B.et al.Efficacy and Safety of PF-06651600(Ritlecitinib),a NovelJAK3/TEC Inhibitor,in Patients With Moderate-to-Severe Rheumatoid Arthritisand an Inadequate Response to Methotrexate.Arthritis Rheumatol.2020,72(10),1621-1631.)
综上所述，提高JAK抑制剂对于JAK3激酶的活性和选择性，减少脱靶标效应，对于解决目前JAK抑制剂使用过程中出现的疗效不佳和安全性问题具有非常重要的意义。
发明内容
本发明提供了一种JAK3激酶的活性和选择性均较好的Janus激酶(JAK)抑制活性的芳杂环化合物。
本发明提供了一种包含上述芳杂环化合物的组合物和制剂。
本发明同时提供了一种利用上述化合物、组合物或者制剂制备用于预防或治疗JAK-STAT信号通路异常导致的疾病的药物中的应用。本发明的化合物可作为JAK激酶抑制剂，用于治疗、预防与这些激酶活性异常相关的临床应用，包括自身免疫性疾病、炎症疾病及其他疾病。
本发明采用如下的技术方案：
本发明提供了一种具有通式I结构的化合物、其光学异构体、其氘代化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003813605370000021
其中：
环A为含1-3个杂原子的五元芳杂环，所述杂原子选自O、N、S；
M为环A的取代基，M选自缺失、氢、C1-C4烷酰基、C1-C4烷基、氘代C1-C4烷基、C1-C4烷磺酰基或C4-C6杂环烷基，其中C4-C6杂环烷基含1个杂原子，所述杂原子选自O、N、S；
L选自
Figure BDA0003813605370000022
其中Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh各自独立地选自氢、氰基、羟基、卤素、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基、单取代的C1-C4烷基、C1-C4烷酰基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷磺酰基，所述“单取代的C1-C4烷基”中的取代基选自C1-C3烷硫基、C1-C3烷磺酰基、C1-C3烷酰基、卤素、氰基；k为1-5的整数，q为0-4的整数，r为0-3的整数，p、m各自独立地选自1-4的整数；k大于1时，即L为包含两个或两个以上C的烷基链段时，不同碳原子上的Ra或Rb相同或者不相同(即不同碳原子上Ra可以不同也可以相同，不同碳原子上Rb可以相同或者可以不相同，即不同碳原子上Ra相互独立，Rb相互独立)；p大于1时，不同碳原子上的Re或Rf相同或者不相同(解释同上)；m大于1时，不同碳原子上的Rg或Rh相同或者不相同解释同上)；
W为共价靶头，所述共价靶头指的是能与亲核试剂形成共价键的化学基团，W选自
Figure BDA0003813605370000031
或腈基；其中R1、R2各自独立地选自氢、氘、卤素、氰基、C1-C4烷基、卤代甲基，R3选自氢、氘、卤素、氰基、C1-C4烷基、卤代甲基、
Figure BDA0003813605370000032
n、t各自独立地选自1-3的整数；R4、Rj、Rk、Rm各自独立地选自氢或C1-C4烷基；R5为卤代甲基；R6为乙烯基或卤代甲基；
X选自N或CH；Y选自氢、C1-C4烷基或C1-C4烷酰基；
根据通式(I)化合物，本发明优选下列任一结构的化合物：
环A为1-3个杂原子的五元芳杂环，所述杂原子选自N原子；
M为环A的取代基，M选自氢、氘代甲基、C1-C4烷酰基、C1-C4烷基或C4-C6杂环烷基，其中C4-C6杂环烷基含1个杂原子，且杂原子为氧原子；
L选自
Figure BDA0003813605370000033
其中Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh各自独立地选自氢、C1-C4烷基、单取代的C1-C4烷基，所述“单取代的C1-C4烷基”中的取代基选自C1-C3烷硫基、C1-C3烷磺酰基、氰基；k为1-4的整数，q为0-3的整数，r为0-2的整数，p为1或2，m为3或4；
W选自
Figure BDA0003813605370000034
或腈基；其中R1、R2各自独立地选自氢、氘、卤素、氰基、C1-C4烷基，R3选自氢、氘、卤素、氰基、C1-C4烷基、卤代甲基、
Figure BDA0003813605370000035
n、t各自独立地选自1-3的整数；Rj、Rk、Rm各自独立的选自氢、甲基或乙基；R4选自氢或甲基；R5为卤代甲基；R6表示乙烯基；
X选自N或者CH；Y选自氢或C1-C4烷酰基；
本发明更优选具有通式Ⅱ所示的结构，或其光学异构体、其氘代化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003813605370000041
其中：
环A为含2个双键的五元杂环；Z为N或C，Q为N或NR7，T为CH或N或NR8，且当Z、T同时为N时，Q为N；其中R7、R8分别独立的为氢、氘代甲基、C1-C4烷酰基、C1-C4烷基或C4-C6杂环烷基，其中C4-C6杂环烷基含1个杂原子，且杂原子为氧原子。
L选自
Figure BDA0003813605370000042
其中Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh各自独立地选自氢、C1-C4烷基、单取代的C1-C4烷基，所述“单取代的C1-C4烷基”中的取代基选自C1-C3烷硫基、C1-C3烷磺酰基、氰基；k为1-4的整数，q为0-3的整数，r为0-2的整数，p为1或2，m为3或4；
W选自
Figure BDA0003813605370000043
或腈基；其中R1、R2各自独立地选自氢、氘、卤素、氰基、C1-C4烷基，R3选自氢、氘、卤素、氰基、C1-C4烷基、卤代甲基、
Figure BDA0003813605370000044
n、t各自独立地选自1-3的整数；Rj,Rk,Rm各自独立的选自氢、甲基或乙基；R4选自氢或甲基；R5为卤代甲基；R6表示乙烯基；
X选自N或者CH；Y选自氢或C1-C4烷酰基；
本发明更优选具有通式III-1、III-2、III-3或III-4所示的结构，或其光学异构体、其氘代化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003813605370000045
L选自
Figure BDA0003813605370000046
其中Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh各自独立地选自氢、C1-C4烷基、单取代的C1-C4烷基，所述“单取代的C1-C4烷基”中的取代基选自甲硫基、甲磺酰基、氰基；k为1-4的整数，q为0-3的整数，r为0-2的整数，p为1，m为3或4；
W选自
Figure BDA0003813605370000051
或腈基；其中R11为氢、氘、卤素、氰基、甲基，R2为氢、氘、氰基或甲基，R3为氢、氘、卤素、氰基、甲基、三氟甲基、
Figure BDA0003813605370000052
n、t为2，Rj、Rk、Rm为甲基；R4选自氢或甲基；R5为卤代甲基；R6表示乙烯基；
X选自N或者CH；Y选自氢或乙酰基。
作为优选：
L选自
Figure BDA0003813605370000053
其中：Ra、Rb各自独立地选自H、甲基、异丙基、甲硫基取代乙基、甲磺酰基乙基；Rc、Rd、Re、Rf各自独立地选自H、甲基；Rg、Rh各自独立地选自H、甲基；k为1、2、3、4，q为1，r为0，p为1，m为3或4；
R7、R8分别独立的为氢、甲基、异丙基、乙酰基、氘代甲基、C4-C6杂环烷基，其中C4-C6杂环烷基含1个杂原子，且杂原子为氧原子。
作为具体的优选：
所述A环选自具有两个双键的五元杂环，杂原子为两个相邻的N原子；作为优选所述A选自吡唑环。
所述通式I中，
Figure BDA0003813605370000054
选自如下结构：
Figure BDA0003813605370000055
作为优化，所述Ra优选为甲基、H、乙基、异丙基、甲硫基乙基、甲磺酰基乙基。所述R7优选为甲基、H、乙酰基、异丙基。
作为优选，所述W优选为：
Figure BDA0003813605370000061
Figure BDA0003813605370000062
(X为氟、氯、溴、碘)，
Figure BDA0003813605370000063
作为优选，通式I中与W相邻的N我们定义为N-1，L中与N-1相邻的碳原子上存在非H取代(比如取代基为甲基、异丙基)时，该碳原子具有手性结构。
本发明进一步更优选下列任一结构的化合物：
Figure BDA0003813605370000064
Figure BDA0003813605370000071
Figure BDA0003813605370000081
其光学异构体、其氘代化合物或其药学上可接受的盐；
本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含上述通式I、通式II或者通式III-1～III-4、或者上述具体化合物中的一种或多种。
一种药物制剂，该药物制剂包含至少一种活性组分以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，所述的活性组分选自通式I、通式II或者通式III-1～III-4、或者上述具体化合物中的一种或多种、或其光学异构体、或其氘代化合物或其药学上可接受的盐。本发明提供了通式I所述的化合物、其光学异构体、其氘代化合物或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗JAK-STAT信号通路异常导致的疾病药物中的应用。更优选为JAK3激酶过度激活或者过度表达导致的疾病中的应用。所述疾病包括但不限于自身免疫性疾病、肺损伤；所述自身免疫性疾病是指斑秃、狼疮、多发性硬化、肌肉缩性侧索硬化、风湿性关节炎、1型糖尿病、自身免疫性溶血性贫血、类风湿性关节炎、银屑病、因器官移植导致的并发症、特应性皮炎、自身免疫性甲状腺病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、干燥综合征、全身性硬皮病、混合结缔组织病、白癜风、自身免疫性肾损伤、自身免疫性肝损伤、慢性阻塞性肺病的一种或多种。
作为优选，所述JAK-STAT信号通路异常导致的疾病为肺损伤，所述肺损伤是指放射性肺损伤和急性肺损伤。
定义和说明：除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
术语“药学上可接受的”是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸－氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡萄糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
术语“异构体”是指本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。除非另有说明，术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。除非另有说明，“(D)”或者“(+)”表示右旋，“(L)”或者“(-)”表示左旋，“(DL)”或者“(士)”表示外消旋。除非另有说明，用楔形实线键
Figure BDA0003813605370000091
和楔形虚线键
Figure BDA0003813605370000092
表示一个立体中心的绝对构型。
“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝0))时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的多个R都有相互独立，可以相同，可以不同。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当其中一个变量选自键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表键时表示该结构实际上是A-Z。
当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，苯基作为取代基可以通过苯环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。
术语“共价靶头”是指是能与亲核试剂形成共价键的化学基团，如包括但不限于：
Figure BDA0003813605370000101
(X为氟、氯、溴、碘)，
Figure BDA0003813605370000102
等。
除非另有规定，术语“烷基”用于表示直链或支链的饱和烃基，可以是单取代(如－CH2F)或多取代的(如-CF3)，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。烷基的例子包括甲基(Me)，乙基(Et)，丙基(如，n－丙基和异丙基)，丁基(如，n－丁基，异丁基，s－丁基，t－丁基)，戊基(如，n_戊基，异戊基，新戊基)等。
除非另有规定，环烷基包括任何稳定的环状或多环烃基，任何碳原子都是饱和的，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。这些环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、降冰片烷基、[2.2.2]二环辛烷、[4.4.0]二环癸烷等。
除非另有规定，术语“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)原子。
除非另有规定，术语“烷氧基”表示烷基基团通过氧原子与分子其余部分相连，其中烷基基团具有如本发明所述的含义。除非另有规定，C1-5烷氧基包括C1、C2、C3、C4和C5的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S-戊氧基。所述烷氧基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。
除非另有规定，术语“芳环”表示多不饱和的芳香族烷烃单环，可以是单取代或多取代的。
除非另有规定，术语“芳杂环”表示含有一至四个杂原子的芳环，杂原子选自N、O和S。
体外实验表明，本发明提供的化合物具有良好的JAK3激酶抑制活性作用和选择性，在医药领域具有良好的应用前景。
附图说明
图1化合物对SRBC小鼠模型的免疫抑制活性；
图2化合物对胶原诱导型小鼠关节炎模型的免疫抑制作用；
图3化合物对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠炎症性肠病模型的免疫抑制作用；
图4化合物对急性放射性肺损伤小鼠TNF-α水平的抑制作用；
图5化合物降低急性放射性肺损伤小鼠肺部炎性细胞浸润数目。
具体实施方式
下面通过实施例来说明本发明的可实施性，本领域的技术人员应当理解，根据现有技术的教导，对相应的技术特征进行修改或替换，仍然属于本发明要求保护的范围。
实施例1中间体(R)-1e的合成
Figure BDA0003813605370000111
步骤一：在氮气保护下，将吡唑-3-甲醛1a(20g,208.1mmol)、(R)-2-氨基丙醇(18.7g,249.7mmol)依次加入装有150mL甲醇的100ml三颈瓶中，室温下反应3小时后。分批缓慢加入硼氢化钠(19.7g,520.4mmol)，室温下继续反应2小时后反应完毕加入水20ml，在冰浴下缓慢滴加二碳酸二叔丁酯(59.1g,270.6mmol)，室温继续反应24小时，反应完毕后将反应液倒入200mL水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得无色油状物40.3g中间体(R)-1b，收率75％。ESI(M+H)+＝256。
步骤二：冰浴下将中间体(R)-1b(40g，156.7mmol)溶于200ml四氢呋喃中，依次加入三苯基磷(61.6g，235mmol)、偶氮二甲酸二乙酯(40.9g，235mmol)，室温反应6小时，反应完毕后将反应液倒入200mL水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得无色油状物19g中间体(R)-1c，收率51％。ESI(M+H)+＝238。
步骤三：冰浴下将中间体(R)-1c(19g，80.1mmol)溶于200ml二氯甲烷中，加入N-溴代丁二酰亚胺(15.7g，88.1mmol)，室温反应1小时，反应完毕后加入100mL饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得无色油状物23g中间体(R)-1d，收率92％。ESI(M+H)+＝316。
步骤四：在氮气保护下，将中间体(R)-1d(23g,72.7mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(5.3g,7.3mmol)、联硼酸频那醇酯((Bpin)2，27.7g,109.1mmol)和乙酸钾(28.6g,290.9mmol)依次加入装有150mL DMSO的1L三颈瓶中，反应体系置于95℃充分搅拌反应过夜。反应完毕冷却至室温，将反应液倒入100mL水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得无色油状物13g中间体(R)-1e，收率50％。ESI(M+H)+＝364。
实施例2中间体(S)-1e的合成
Figure BDA0003813605370000121
将实施例1中(R)-2-氨基丙醇替换为(S)-2-氨基丙醇，参考实施例1的合成方法，得到中间体(S)-1e。收率40％(四步)，ESI(M+H)+＝364。
实施例3中间体2d的合成
Figure BDA0003813605370000122
将实施例1中(R)-2-氨基丙醇替换为氨基乙醇，参考实施例1中(R)-1d的合成方法，得到中间体2d。收率34％(三步)，ESI(M+H)+＝302。
实施例4中间体(S)-3e的合成
Figure BDA0003813605370000123
将实施例1中(R)-2-氨基丙醇替换为(R)-1-氨基-2-丙醇，参考实施例1的合成方法，得到中间体(S)-3e。收率45％(四步)，ESI(M+H)+＝364。
实施例5中间体(R)-3e的合成
Figure BDA0003813605370000124
将实施例1中(R)-2-氨基丙醇替换为(S)-1-氨基-2-丙醇，参考实施例1的合成方法，得到中间体(R)-3e。收率39％(四步)，ESI(M+H)+＝364。
实施例6中间体(R)-4e的合成
Figure BDA0003813605370000125
将实施例1中(R)-2-氨基丙醇替换为(R)-3-氨基丁醇，参考实施例1的合成方法，得到中间体(R)-4e。收率49％(四步)，ESI(M+H)+＝378。
实施例7中间体(R)-5e的合成
Figure BDA0003813605370000131
将实施例1中(R)-2-氨基丙醇替换为(R)-(-)-2-氨基-3-甲基-1-丁醇，参考实施例1的合成方法，得到中间体(R)-5e。收率49％(四步)，ESI(M+H)+＝392。
实施例8中间体(S)-5e的合成
Figure BDA0003813605370000132
将实施例1中(R)-2-氨基丙醇替换为(S)-(-)-2-氨基-3-甲基-1-丁醇，参考实施例1的合成方法，得到中间体(S)-5e。收率50％(四步)，ESI(M+H)+＝392。
实施例9中间体(S,S)-6d的合成
Figure BDA0003813605370000133
步骤一：在氮气保护下，将吡唑-3-甲醛1a(10g，104.1mmol)、(1S,2S)-2-氨基环戊醇盐酸盐(17.2g,124.8mmol)依次加入装有100mL甲醇的100ml三颈瓶中，室温下反应3小时后。分批缓慢加入硼氢化钠(9.8g,260.2mmol)，室温下继续反应2小时后反应完毕加入水20ml，在冰浴下缓慢滴加二碳酸二叔丁酯(31.8g,145.7mmol)，室温继续反应24小时，反应完毕后将反应液倒入200mL水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得无色油状物20g中间体(S,S)-6b，收率68％。ESI(M+H)+＝282。
步骤二：冰浴下将中间体(S,S)-6b(20g，71.8mmol)溶于200ml四氢呋喃中，依次加入三苯基磷(27.9g，106.6mmol)、偶氮二甲酸二乙酯(18.6g，106.6mmol)，室温反应6小时，反应完毕后将反应液倒入100mL水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得无色油状物12g中间体(S,S)-6c，收率66％。ESI(M+H)+＝264。
步骤三：冰浴下将中间体(S,S)-6c(12g，45.5mmol)溶于100ml二氯甲烷中，加入N-溴代丁二酰亚胺(8.9g，50.1mmol)，室温反应1小时，反应完毕后加入500mL饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得无色油状物10g中间体(S,S)-6d，收率92％。ESI(M+H)+＝342。
实施例10中间体7e的合成
Figure BDA0003813605370000141
将实施例1中(R)-2-氨基丙醇替换为1-氨基环丙甲醇，参考实施例1的合成方法，得到中间体7e。收率54％(四步)，ESI(M+H)+＝376。
实施例11中间体8f的合成
Figure BDA0003813605370000142
步骤一：将化合物8a(20g,100mmol)溶于200ml DCM中，加入三乙胺(14ml，100mmol)，反应液室温搅拌30min，再加入乙酸(5.7ml，100mmol)、对甲氧基苯甲醛(14.3g，105mmol)，外浴40℃搅拌1h，加入Na(OAc)3BH(29.7g，140mmol)，外浴40℃搅拌反应过夜。反应完毕后旋干溶剂，加水(150ml)，3N NaOH溶液调pH为8-9，水相用EA(50ml)萃取3次，合并有机相，饱和NaCl溶液、无水Na2SO4干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得8b22.6g，收率80％。ESI(M+H)+＝284。
步骤二：将化合物1a(9.67g，101mmol)溶于200ml DCM中，加入乙酸(3.8ml，67mmol)、化合物8b(19.1g，67mmol)，外浴40℃搅拌1h，加入Na(OAc)3BH(19.9g，94mmol)，外浴40℃搅拌反应过夜。反应完毕后旋干溶剂，加水(150ml)，3N NaOH溶液调pH为8-9，水相用EA(50ml)萃取3次，合并有机相，饱和NaCl溶液、无水Na2SO4干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得8c 17.5g，收率72％。ESI(M+H)+＝364。
步骤三：将氢化铝锂(1.4g，38mmol)加入500ml三口瓶中，化合物8c(8.8g，25mmol)溶于150ml无水THF并加入到恒压滴液漏斗中，N2气氛下往三口瓶中注入100ml无水THF，冰浴搅拌下滴加化合物8c的THF溶液，滴毕逐渐升温至室温，搅拌反应3h。反应完毕，向反应体系中分批加入十水合硫酸钠至无固体生成，过滤，滤渣用DCM润洗多次，合并滤液，旋干、冻干，得粗品不再进行进一步纯化直接投下一步。
步骤四：将上一步反应粗品溶于200ml THF中，加入三苯基膦(9.8g，37.5mmol)，搅拌溶解，-10℃下缓慢滴加DEAD(6.5g，37.5mmol)，滴毕，缓慢升至室温搅拌反应过夜。反应完毕后减压浓缩出去溶剂，加水，EA萃取多次，合并有机相，饱和NaCl溶液、无水Na2SO4干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得8d 4g，收率51％。ESI(M+H)+＝318。
步骤五：将化合物8d(4g，12.8mmol)溶于6ml三氟乙酸中，缓慢滴加浓硫酸2ml，回流状态下搅拌反应1h，反应结束后将反应混合物缓慢倒入冰水中，3N NaOH调pH为8-9，水相用EA萃取多次，合并有机相，饱和NaCl溶液、无水Na2SO4干燥，减压浓缩，所得粗产品不再进行进一步纯化直接投下一步。
步骤六：将上一步反应粗品溶于THF和水1：1的混合溶剂中，加入Boc酸酐(2.8g，32mmol)、NaOH(1.5g，38mmol)、DMAP(159mg，1.3mmol)，室温搅拌反应过夜。反应完毕后减压浓缩出去溶剂，加水，EA萃取多次，合并有机相，饱和NaCl溶液、无水Na2SO4干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得8e 3.0g，收率78％。ESI(M+H)+＝298。
步骤七：将化合物8e(946mg，3mmol)溶于8ml DCM中，冰浴状态下缓慢加入NBS(737mg，4mmol)，加毕缓慢升至室温，搅拌反应。反应完毕后淬灭反应，加水，DCM萃取多次，合并有机相，饱和NaCl溶液、无水Na2SO4干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得化合物8f 1.0g，收率90％。ESI(M+H)+＝376。
实施例12中间体SM1的合成
Figure BDA0003813605370000151
步骤一：将中间体SM1-1(50g，253.7mmol)溶于300ml丙酮中，再加入氢氧化钠(20.3g，507.5mmol)，分批缓慢加入对甲苯磺酰氯(58.1g,304.5mmol)室温下反应3小时后，减压除掉有机溶剂，向剩余反应混合物中加入200mL水，用二氯甲烷洗萃取3次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用乙腈/水重结晶，抽滤得75g白色固体SM1-2，收率84％，ESI(M+H)+＝351。
步骤二：在氮气保护下，将中间体SM1-2(75g,213.5mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(15.5g,21.3mmol)、联硼酸频那醇酯(81.3g,320.3mmol)和乙酸钾(83.8g,854.2.9mmol)依次加入装有1L DMSO的3L三颈瓶中，反应体系置于95℃充分搅拌反应过夜。反应完毕冷却至室温，将反应液倒入1L水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得白色固体70g中间体SM1，收率93％。ESI(M+H)+＝399。
实施例13中间体SM2的合成
Figure BDA0003813605370000152
步骤：将中间体SM2-1(30g，195.2mmol)溶于200ml丙酮中，再加入氢氧化钠(15.6g，390.7mmol)，分批缓慢加入对甲苯磺酰氯(40.9g,214.8mmol)室温下反应3小时后，减压除掉有机溶剂，向剩余反应混合物中加入100mL水，用二氯甲烷洗萃取3次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用乙腈/水重结晶，抽滤得48g白色固体中间体SM2，收率90％，ESI(M+H)+＝308。
实施例14中间体SM3的合成
Figure BDA0003813605370000161
步骤：在氮气保护下，将中间体SM1-1(25g,126.8mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(9.3g,12.6mmol)、联硼酸频那醇酯(64.4g,253.7mmol)和乙酸钾(37.3g,380.6mmol)依次加入装有300mL DMSO的3L三颈瓶中，反应体系置于95℃充分搅拌反应过夜。反应完毕冷却至室温，将反应液倒入1L水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得白色固体20g中间体SM1，收率64％。ESI(M+H)+＝245。
实施例15中间体(R)-1e-IM3的合成
Figure BDA0003813605370000162
步骤一：在氮气保护下，将中间体(R)-1d(10g,25.1mmol)、四(三苯基磷)钯(2.9g,2.5mmol)、中间体SM1(10g,25.1mmol)和碳酸钾(13.8g,100.4mmol)依次加入装有100mL 1,4-二氧六环的200ml三颈瓶中，反应体系置于95℃充分搅拌反应过夜。反应完毕冷却至室温，将反应液倒入50mL水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得浅黄色固体10g中间体(R)-1e-IM1，收率83％，ESI(M+H)+＝508。
步骤二：将中间体(R)-1e-IM1(10g,19.7mmol)、氢氧化钠(1.58g,39.4mmol)依次加入装有200mL甲醇的500mL三颈瓶中，反应体系置于50℃充分搅拌反应3小时。反应完毕冷却至室温，将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得白色固体5.5g中间体(R)-1e-IM2，收率78％。ESI(M+H)+＝354。
步骤三：将中间体(R)-1e-IM2(5g,14.1mmol)溶于二氯甲烷中，加入等体积三氟乙酸，室温反应过夜、反应完毕后，调节pH至8-9，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得白色固体3g中间体(R)-1e-IM3，收率83％。ESI(M+H)+＝254。
Figure BDA0003813605370000171
实施例16中间体(S)-1e-IM3的合成
将实施例15中中间体(R)-1d替换为中间体(S)-1d，参考实施例15的合成方法，得到中间体(S)-1e-IM3,收率49％(三步)，ESI(M+H)+＝254。
实施例17中间体2e-IM3的合成
将实施例15中中间体(R)-1d替换为中间体2d，参考实施例15的合成方法，得到中间体2e-IM3,收率50％(三步)，ESI(M+H)+＝240。
实施例18中间体(S)-3e-IM3的合成
将实施例15中中间体(R)-1d替换为中间体(S)-1d、中间体SM1替换为中间体SM2，参考实施例15的合成方法，得到中间体(S)-3e-IM3,收率53％(三步)，ESI(M+H)+＝255。
实施例19中间体(R)-3e-IM3的合成
将实施例15中中间体(R)-1d替换为中间体(R)-1e、中间体SM1替换为中间体SM2，参考实施例15的合成方法，得到中间体(R)-3e-IM3,收率57％(三步)，ESI(M+H)+＝255。
实施例20中间体(S)-4e-IM3的合成
将实施例15中中间体(R)-1d替换为中间体(S)-3e、中间体SM1替换为中间体SM2，参考实施例15的合成方法，得到中间体(S)-4e-IM3,收率65％(三步)，ESI(M+H)+＝255。
实施例21中间体(R)-4e-IM3的合成
将实施例15中中间体(R)-1d替换为中间体(R)-3e、中间体SM1替换为中间体SM2，参考实施例15的合成方法，得到中间体(R)-4e-IM3,收率45％(三步)，ESI(M+H)+＝255。
实施例22中间体(R)-5e-IM3的合成
将实施例15中中间体(R)-1d替换为中间体(R)-4e、中间体SM1替换为中间体SM2，参考实施例15的合成方法，得到中间体(R)-5e-IM3，收率42％(三步)，ESI(M+H)+＝269。
实施例23中间体(S)-6e-IM3的合成
将实施例15中(R)-1d替换为(S)-5e、SM1替换为SM2，参考实施例15的合成方法，得到中间体(S)-6e-IM3，收率48％(三步)，ESI(M+H)+＝283。
实施例24中间体(R)-6e-IM3的合成
将实施例15中(R)-1d替换为(R)-5e、中间体SM1替换为中间体SM2，参考实施例15的合成方法，得到中间体(R)-6e-IM3,收率42％(三步)，ESI(M+H)+＝283。
实施例25中间体(S,S)-7d-IM3的合成
将实施例15中(R)-1d替换为(S,S)-6d、中间体SM1替换为中间体SM2，参考实施例15的合成方法，得到中间体(S,S)-7d-IM3，收率43％(三步)，ESI(M+H)+＝280。
实施例26中间体8d-IM5的合成
Figure BDA0003813605370000181
步骤一：将中间体8d-IM1(20g,89.1mmol)、肼(4.2g,133.7mmol)依次加入装有200mL甲醇的500mL三颈瓶中，反应体系置于70℃充分搅拌反应4小时。反应完毕冷却至室温，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得白色固体18g中间体8d-IM2，收率85％。ESI(M+H)+＝239。
步骤二：将中间体8d-IM2(15g,62.9mmol)、溴化铜(14.1g,62.9mmol)、亚硝酸异戊酯(8.8g,75.5mmol)依次加入装有200mL乙腈的500mL三颈瓶中，反应体系置于60℃充分搅拌反应4小时。反应完毕冷却至室温，将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得黄色固体10g中间体8d-IM3，收率52％。ESI(M+H)+＝302。
步骤三：在氮气保护下，将中间体8d-IM3(10g,33.1mmol)、四(三苯基磷)钯(3.8g,3.3mmol)、中间体SM3(12.1g,49.1mmol)和碳酸钾(13.8g,100.4mmol)依次加入装有100mL1,4-二氧六环的200ml三颈瓶中，反应体系置于95℃充分搅拌反应过夜。反应完毕冷却至室温，将反应液倒入100mL水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得浅黄色固体7g中间体8d-IM4，收率63％，ESI(M+H)+＝340。
步骤四：将中间体8d-IM4(7g,20.6mmol)溶于二氯甲烷中，加入等体积三氟乙酸，室温反应过夜、反应完毕后，调节pH为8-9，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得白色固体5g中间体8d-IM5，收率71％。ESI(M+H)+＝240。
实施例27中间体9f-IM3合成
Figure BDA0003813605370000182
步骤一：将中间体8d-IM3(20g,66.1mmol)、钠氢(3.2g,132.3mmol)、碘甲烷(11.2g,79.4mmol)依次加入装有100mL DMF的500mL三颈瓶中，反应体系置于0℃充分搅拌反应2小时。反应完毕，将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得黄色固体15g中间体9f-IM1，收率71％。ESI(M+H)+＝316。
步骤二：在氮气保护下，将中间体9f-IM1(15g,47.4mmol)、四(三苯基磷)钯(5.4g,4.7mmol)、中间体SM3(17.3g,71.1mmol)和碳酸钾(19.6g,142.3mmol)依次加入装有100mL1,4-二氧六环的200ml三颈瓶中，反应体系置于95℃充分搅拌反应过夜。反应完毕冷却至室温，将反应液倒入100mL水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得浅黄色固体12g中间体9f-IM2，收率75％，ESI(M+H)+＝354。
步骤三：将中间体9f-IM2(12g,20.6mmol)溶于二氯甲烷中，加入等体积三氟乙酸，室温反应过夜、反应完毕后，调节pH为8-9，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得白色固体5g中间体9f-IM3，收率58％。ESI(M+H)+＝254。
实施例28中间体10g-IM3的合成
Figure BDA0003813605370000191
步骤一：将中间体8d-IM3(20g,66.1mmol)、R-3-羟基四氢呋喃(7g,79.4mmol)、三苯基磷(26g,99.2mmol)、偶氮二甲酸二乙酯(17.2g,99.2mmol)依次加入装有100mL THF的500mL三颈瓶中，反应体系置于室温充分搅拌反应2小时。反应完毕，将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得黄色固体18g中间体10g-IM1，收率75％。ESI(M+H)+＝372。
步骤二：在氮气保护下，将中间体10g-IM1(18g,48.4mmol)、四(三苯基磷)钯(5.6g,4.8mmol)、中间体SM3(17.7g,72.5mmol)和碳酸钾(20g,145mmol)依次加入装有300mL 1,4-二氧六环的500ml三颈瓶中，反应体系置于95℃充分搅拌反应过夜。反应完毕冷却至室温，将反应液倒入200mL水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得浅黄色固体14g中间体10g-IM2，收率73％，ESI(M+H)+＝410。
步骤三：将中间体10g-IM2(12g,20.6mmol)溶于二氯甲烷中，加入等体积三氟乙酸，室温反应过夜、反应完毕后，调节pH为8-9，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得白色固体6g中间体10g-IM3，收率57％。ESI(M+H)+＝310。
实施例29中间体11h-IM1的合成
Figure BDA0003813605370000201
参照实施例9中间体(S,S)-6d的合成方法，将(1S,2S)-2-氨基环戊醇盐酸盐替换成(1R,2R)-2-氨基环戊醇得中间体1-1,之后参照实施例25中间体(S,S)-7d-IM3的合成方法，将中间体(S,S)-6d替换为中间体1-1，得11h-IM1,收率34％，ESI(M+H)+＝280。
实施例30中间体12I-IM1的合成
Figure BDA0003813605370000202
参照实施例9中间体(S,S)-6d的合成方法，将(1S,2S)-2-氨基环戊醇盐酸盐替换成(1R,2R)-2-氨基环己醇得中间体1-2,之后参照实施例25中间体(S,S)-7d-IM3的合成方法，将中间体(S,S)-6d替换为中间体1-2，得12I-IM1,收率25％，ESI(M+H)+＝294。
实施例31中间体13J-IM1的合成
Figure BDA0003813605370000203
参照实施例1中间体(R)-1d的合成方法，将(R)-2-氨基丙醇替换成(S)-3-氨基丁醇得中间体1-4，之后参照实施例15中间体(R)-1e-IM3的合成方法，将中间体R-1d替换为中间体1-3，得13J-IM1,收率28％，ESI(M+H)+＝268
实施例32中间体14K-IM3的合成
Figure BDA0003813605370000204
步骤一：在氮气保护下，将中间体(S)-1e(22.7g,62.7mmol)、四(三苯基磷)钯(4.8g,4.1mmol)、中间体14K-IM1(10g,41.8mmol)和碳酸钾(17.3g,125.4mmol)依次加入装有200mL 1,4-二氧六环的500ml三颈瓶中，反应体系置于95℃充分搅拌反应过夜。反应完毕冷却至室温，将反应液倒入100mL水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得浅黄色固体11g中间体14K-IM2，收率66％，ESI(M+H)+＝396。
步骤二：将中间体14K-IM2(11g,20.6mmol)溶于二氯甲烷中，加入等体积三氟乙酸，室温反应过夜、反应完毕后，调节pH为8-9，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得黄色固体6g中间体14K-IM3，收率73％。ESI(M+H)+＝296。
实施例33中间体15L-IM4的合成
Figure BDA0003813605370000211
步骤一：将中间体15L-IM1(20g,95.5mmol)溶于二氯甲烷中，再加入NBS，室温反应1小时、反应完毕后，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得黄色固体21g中间体15L-IM2，收率77％。ESI(M+H)+＝288。
步骤二：在氮气保护下，将中间体15L-IM2(21g,72.8mmol)、四(三苯基磷)钯(8.4g,7.2mmol)、中间体SM3(26.6g,109.3mmol)和碳酸钾(30g,218.1mmol)依次加入装有300mL 1,4-二氧六环的500ml三颈瓶中，反应体系置于95℃充分搅拌反应过夜。反应完毕冷却至室温，将反应液倒入100mL水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得浅黄色固体15g中间体15L-IM3，收率65％，ESI(M+H)+＝326。
步骤三：将中间体15L-IM3(11g,20.6mmol)溶于二氯甲烷中，加入等体积三氟乙酸，室温反应过夜、反应完毕后，调节pH为8-9，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得黄色固体5g中间体15L-IM3，收率50％。ESI(M+H)+＝226。
实施例34中间体16M-IM1的合成
Figure BDA0003813605370000212
参照实施例33中间体15L-IM4的合成方法，将15L-IM1替换成(S)-6-甲基-4,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1H)-羧酸叔丁酯，三步反应得中间体16M-IM1 3g,收率54％。ESI(M+H)+＝240。
实施例35中间体17N-IM3的合成
Figure BDA0003813605370000213
步骤一：将中间体15L-IM2(15g,52mmol)、钠氢(2.5g,104mmol)、碘甲烷(7.3g,52mmol)依次加入装有100mL DMF的500mL三颈瓶中，反应体系置于0℃充分搅拌反应2小时。反应完毕，将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得黄色固体10g中间体17N-IM1，收率66％。ESI(M+H)+＝302。
步骤二：在氮气保护下，将中间体17N-IM1(10g,33mmol)、四(三苯基磷)钯(3.8g,3.3mmol)、中间体SM3(12.1g,49.6mmol)和碳酸钾(13.7g,99.3mmol)依次加入装有100mL1,4-二氧六环的200ml三颈瓶中，反应体系置于95℃充分搅拌反应过夜。反应完毕冷却至室温，将反应液倒入100mL水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得浅黄色固体5g中间体17N-IM2，收率45％，ESI(M+H)+＝340。
步骤三：将中间体17N-IM2(5g,20.6mmol)溶于二氯甲烷中，加入等体积三氟乙酸，室温反应过夜、反应完毕后，调节pH为8-9，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得白色固体2g中间体17N-IM3，收率57％。ESI(M+H)+＝240。
实施例36中间体18O-IM4的合成
Figure BDA0003813605370000221
步骤一：将中间体18O-IM1(20g,63.2mmol)、钠氢(3.0g,126mmol)、碘甲烷(10.7g,75.9mmol)依次加入装有100mL DMF的500mL三颈瓶中，反应体系置于0℃充分搅拌反应2小时。反应完毕，将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得黄色固体15g中间体18O-IM2，收率75％。ESI(M+H)+＝330。
步骤二：在氮气保护下，将中间体18O-IM2(15g,45.4mmol)、四(三苯基磷)钯(5.2g,4.5mmol)、中间体SM3(16.6g,68.1mmol)和碳酸钾(18.8g,136.2mmol)依次加入装有100mL 1,4-二氧六环的200ml三颈瓶中，反应体系置于95℃充分搅拌反应过夜。反应完毕冷却至室温，将反应液倒入100mL水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得浅黄色固体10g中间体18O-IM3，收率60％。ESI(M+H)+＝368。
步骤三：将中间体18O-IM3(7g,20.6mmol)溶于二氯甲烷中，加入等体积三氟乙酸，室温反应过夜、反应完毕后，调节pH为8-9，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得白色固体5.5g中间体18O-IM4，收率76％。ESI(M+H)+＝268。
实施例37中间体19P-IM1的合成
Figure BDA0003813605370000231
参照实施例36中间体18O-IM4的合成方法，将步骤一的碘甲烷替换2-碘丙烷，三步反应得中间体19P-IM1 4g,收率64％。ESI(M+H)+＝296。
实施例38中间体20Q-IM1的合成
Figure BDA0003813605370000232
参照实施例1中间体(R)-1d的合成方法，将(R)-2-氨基丙醇替换成氨基丙醇得中间体1-4,之后参照实施例15中间体(R)-1e-IM3的合成方法，将(R)-1d替换为中间体1-4得20Q-IM1，收率30％，ESI(M+H)+＝254。
实施例39中间体21R-IM1的合成
Figure BDA0003813605370000233
参照实施例1中间体(R)-1d的合成方法，将(R)-2-氨基丙醇替换成氨基丁醇得中间体1-5,之后参照实施例15中间体(R)-1e-IM3的合成方法，将中间体(R)-1d替换为中间体1-5得21R-IM1,收率34％，ESI(M+H)+＝268。
Figure BDA0003813605370000234
实施例40中间体22S-IM1的合成
参照实施例1中间体(R)-1d的合成方法，将(R)-2-氨基丙醇替换成氨基丁醇得中间体,之后参照实施例15中间体(R)-1e-IM3的合成方法，将中间体(R)-1d替换为中间体(S)-3d得21R-IM1,收率34％，ESI(M+H)+＝254
实施例41中间体23T-IM1的合成
参照实施例15中间体(R)-1e-IM3的合成方法将中间体(R)-1d替换成7d得23T-IM1,收率24％，ESI(M+H)+＝266。
实施例42中间体24U-IM1的合成
参照实施例15中间体(R)-1e-IM3的合成方法将中间体(R)-1d替换成8f得中间体24U-IM1,收率24％，ESI(M+H)+＝314。
实施例43中间体25V-IM4的合成
Figure BDA0003813605370000241
步骤一：参照实施例15步骤一，将中间体(R)-1d替换成中间体8f得中间体25V-IM1，收率54％，ESI(M+H)+＝568。
步骤二：将中间体25V-IM1(186mg，0.33mmol)溶于DCM中，冰浴下缓慢加入m-CPBA(170mg，0.98mmol)，加毕缓慢升至室温，搅拌反应3h。反应完毕后饱和硫代硫酸钠、碳酸氢钠溶液淬灭反应，加水，DCM萃取多次，合并有机相，饱和NaCl溶液、Na2SO4干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得中间体25V-IM2 158mg，收率82％。ESI(M+H)+＝600。
步骤三：参照实施例15步骤二，将中间体(R)-1e-IM1替换成中间体25V-IM2得中间体25V-IM3，收率69％，ESI(M+H)+＝446。
步骤四：参照实施例15步骤三，将中间体(R)-1e-IM2替换成中间体25V-IM3得中间体25V-IM4，收率73％，ESI(M+H)+＝346。
Figure BDA0003813605370000242
实施例44中间体26W-IM1的合成
参照实施例27中间体9f-IM3的合成方法，将碘甲烷替换成氘代碘甲烷得26W-IM1,收率43％，ESI(M+H)+＝257。
实施例45中间体27X-IM1的合成
参照实施例27中间体9f-IM3的合成方法，将碘甲烷替换成乙酰氯得中间体27X-IM1,收率38％，ESI(M+H)+＝282。
实施例46中间体28Y-IM3的合成
Figure BDA0003813605370000243
参照实施例36中间体18O-IM4的合成方法，将步骤一的碘甲烷替换2-碘丙烷，将步骤一的中间体18O-IM1替换为15L-IM2,经过3步反应得到1.8g中间体28Y-IM3，收率24％。ESI(M+H)+＝268。
实施例47中间体29Z-IM3的合成
Figure BDA0003813605370000251
参照实施例36中间体18O-IM4的合成方法，将步骤一的中间体18O-IM1替换为8d-IM3，经过3步反应得到1.3g中间体29Z-IM3，收率27％。ESI(M+H)+＝282。
实施例48中间体30A-IM3的合成
Figure BDA0003813605370000252
步骤一：将中间体8d-IM3(10g,33.1mmol)、钠氢(1.59g,66.2mmol)、碘甲烷(9.4g,66.2mmol)依次加入装有100mL DMF的500mL三颈瓶中，反应体系置于0℃充分搅拌反应2小时。反应完毕，将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得黄色固体2g中间体30A-IM1，收率20％。ESI(M+H)+＝316。
步骤二：在氮气保护下，将中间体30A-IM1(2g,6.3mmol)、四(三苯基磷)钯(0.7g,0.6mmol)、中间体SM3(2.3g,9.5mmol)和碳酸钾(2.6g,18.9mmol)依次加入装有100mL 1,4-二氧六环的200ml三颈瓶中，反应体系置于95℃充分搅拌反应过夜。反应完毕冷却至室温，将反应液倒入100mL水中，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得浅黄色固体1.5g中间体30A-IM2，收率68％，ESI(M+H)+＝354。
步骤三：将中间体30A-IM2(1.5g,20.6mmol)溶于二氯甲烷中，加入等体积三氟乙酸，室温反应过夜、反应完毕后，调节pH为8-9，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用饱和氯化钠洗两次后，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得白色固体0.7g中间体30A-IM3，收率70％。ESI(M+H)+＝254。
实施例49化合物YZ001001的合成
Figure BDA0003813605370000253
步骤：将中间体(R)-1e-IM3(100mg，0.39mmol)溶于20ml二氯甲烷中，再加入三乙胺(119.8mg，1.2mmol)，冰浴下缓慢加入丙烯酰氯(42.9mg,0.47mmol)，室温下反应3小时后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷洗萃取3次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得白色固体60mg化合物YZ001001，收率50％。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.22(d,J＝5.1Hz,1H),8.02(s,1H),7.45(d,J＝3.5Hz,1H),7.10(d,J＝5.1Hz,1H),6.87(s,1H),6.64(d,J＝3.5Hz,1H),6.28(d,J＝16.8Hz,1H),5.82(d,J＝10.6Hz,1H),5.40(s,1H),4.87–4.85(m,3H),4.39(s,1H),4.30(d,J＝12.9Hz,1H),1.29(d,J＝6.3Hz,3H),ESI(M+H)+＝308。
Figure BDA0003813605370000261
Figure BDA0003813605370000271
Figure BDA0003813605370000281
实施例50化合物YZ001002的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体2e-IM3，得到化合物YZ001002，收率47％。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.25(d,J＝5.1Hz,1H),8.02(s,1H),7.48(d,J＝3.5Hz,1H),7.09(d,J＝5.0Hz,1H),7.02–6.73(m,1H),6.68(d,J＝2.9Hz,1H),6.39–6.24(m,1H),5.95–5.74(m,1H),5.17–5.06(m,2H),4.43–4.32(m,2H),4.30–4.21(m,2H)，ESI(M+H)+＝294。
实施例51化合物YZ001003的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中丙烯酰氯替换为乙酰氯，得到化合物YZ001003收率50％。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.24(d,J＝4.5Hz,1H),8.05(s,1H),7.52–7.44(m,1H),7.16–7.07(m,1H),6.67(d,J＝3.5Hz,1H),5.56–4.89(m,2H),4.82–4.73(m,1H),4.55–4.27(m,2H),2.25(d,J＝38.1Hz,3H),1.39–1.26(m,3H).，ESI(M+H)+＝296。
实施例52化合物YZ001004的合成
步骤：将中间体(R)-1e-IM3(100mg，0.39mmol)溶于20ml二氯甲烷中，再加入N,N-二异丙基乙胺(204.1mg，1.6mmol)、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(195.1mg,0.51mmol)、2-氟丙烯酸(46.2mg，0.51mmol)，室温下反应3小时后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷洗萃取3次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗产品用硅胶柱层析纯化得白色固体80mg化合物YZ001004，收率66％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.77(s,1H),8.27(d,J＝4.9Hz,1H),8.07(s,1H),7.55–7.47(m,1H),7.05(d,J＝5.0Hz,1H),6.65(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),5.42(s,1H),5.34(dd,J＝32.2,4.2Hz,1H),4.91(s,1H),4.35(dt,J＝38.6,8.6Hz,2H),2.72(s,2H),1.30(s,3H),ESI(M+H)+＝326。
实施例53化合物YZ001005的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中2-氟丙烯酸替换为反式-4-二甲基胺基巴豆酸盐酸盐，得到化合物YZ001005收率52％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.76(s,1H),8.26(d,J＝4.9Hz,1H),8.05(s,1H),7.57–7.49(m,1H),7.07(s,1H),6.64(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),5.31(d,J＝17.0Hz,1H),4.92(s,1H),4.60(s,2H),4.28(s,2H),3.19(d,J＝9.6Hz,1H),3.08(s,2H),2.18(d,J＝1.4Hz,6H),1.23(s,3H),ESI(M+H)+＝365。
实施例54化合物YZ001006的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中2-氟丙烯酸替换为(2E)-4-(1-哌啶基)-2-丁烯酸，得到化合物YZ001006收率80％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.75(s,1H),8.26(d,J＝4.9Hz,1H),8.05(s,1H),7.58–7.44(m,1H),7.07(d,J＝4.2Hz,1H),6.74–6.60(m,2H),5.30(d,J＝17.1Hz,1H),4.91(s,1H),4.60(s,1H),4.27(d,J＝12.3Hz,2H),3.14(s,2H),2.36(d,J＝1.9Hz,4H),1.52(s,4H),1.41(s,3H),1.23(d,J＝6.2Hz,2H),ESI(M+H)+＝405。
实施例55化合物YZ001007的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中2-氟丙烯酸替换为(E)-丁-2-烯酸，得到化合物YZ001007收率70％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.75(s,1H),8.26(dd,J＝4.9,2.5Hz,1H),8.06(d,J＝4.7Hz,1H),7.55–7.50(m,1H),7.08(s,1H),6.79(dd,J＝14.8,6.7Hz,1H),6.65(dd,J＝3.4,1.8Hz,2H),5.41–5.06(m,2H),4.71(dd,J＝12.8,5.2Hz,1H),4.26(d,J＝12.3Hz,2H),1.89(d,J＝6.2Hz,3H),1.22(s,3H),ESI(M+H)+＝322。
实施例56化合物YZ001008的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中2-氟丙烯酸替换为2-甲基丙烯酸，得到化合物YZ001008收率68％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.75(s,1H),8.25(d,J＝4.9Hz,1H),8.06(s,1H),7.52(t,J＝2.9Hz,1H),7.04(d,J＝4.9Hz,1H),6.64(dd,J＝3.2,1.7Hz,1H),5.28(s,1H),5.16(s,1H),4.93–4.56(m,2H),4.48–4.36(m,1H),4.28(dd,J＝40.4,8.4Hz,2H),1.93(s,3H),1.30(d,J＝6.9Hz,3H),ESI(M+H)+＝322。
实施例57化合物YZ001009的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中2-氟丙烯酸替换为4,4,4-三氟丁烯酸，得到化合物YZ001009收率78％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.76(s,1H),8.27(d,J＝4.6Hz,1H),8.06(s,1H),7.52(s,2H),7.06(d,J＝4.6Hz,1H),6.85(dd,J＝15.4,7.1Hz,1H),6.64(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),5.36(d,J＝17.9Hz,1H),4.90(s,1H),4.45(dt,J＝70.9,15.2Hz,2H),1.27(d,J＝6.4Hz,3H),ESI(M+H)+＝376。
实施例58化合物YZ001010的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中2-氟丙烯酸替换为2-丁炔酸，得到化合物YZ001010收率58％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.76(s,1H),8.27(dd,J＝7.4,5.0Hz,1H),8.07(s,1H),7.53(dd,J＝7.3,4.4Hz,1H),7.05(t,J＝5.1Hz,1H),6.65(dd,J＝3.2,1.8Hz,1H),5.34(dd,J＝50.6,17.3Hz,1H),5.16–5.08(m,1H),4.58(d,J＝17.8Hz,1H),4.46–4.20(m,2H),2.12(s,3H),1.28(d,J＝6.2Hz,3H),ESI(M+H)+＝320。
实施例59化合物YZ001011的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中丙烯酰氯替换为甲磺酰氯，得到化合物YZ001011收率40％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.76(s,1H),8.26(d,J＝4.9Hz,1H),8.08(s,1H),7.59–7.43(m,1H),7.05(d,J＝5.0Hz,1H),6.66(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),4.81(dd,J＝39.0,16.6Hz,2H),4.57(s,1H),4.42–4.17(m,2H),3.11(s,3H),1.33(d,J＝6.9Hz,3H),ESI(M+H)+＝332。
实施例60化合物YZ001012的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中丙烯酰氯替换为环丙磺酰氯，得到化合物YZ001012收率46％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.77(s,1H),8.26(d,J＝4.9Hz,1H),8.08(s,1H),7.57–7.50(m,1H),7.04(d,J＝5.0Hz,1H),6.66(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),4.83(s,2H),4.57(dd,J＝8.7,3.4Hz,1H),4.40(dd,J＝13.0,5.0Hz,2H),2.86–2.77(m,1H),1.39(d,J＝6.9Hz,3H),1.06–0.98(m,2H),0.96–0.86(m,2H),ESI(M+H)+＝358。
实施例61化合物YZ001013的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中丙烯酰氯替换为氯乙酰氯，得到化合物YZ001013收率53％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.76(s,1H),8.26(d,J＝4.6Hz,1H),8.07(s,1H),7.53(s,1H),7.07(s,1H),6.66(s,1H),5.79(s,1H),5.34(s,1H),5.16(s,1H),4.63(d,J＝6.7Hz,1H),4.53(s,1H),4.28(s,2H),1.29(d,J＝24.6Hz,3H),ESI(M+H)+＝330。
实施例62化合物YZ001014的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中2-氟丙烯酸替换为1-三氟甲基环丙烷-1-羧酸，得到化合物YZ001014收率52％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.77(s,1H),8.26(d,J＝4.9Hz,1H),8.08(s,1H),7.56–7.51(m,1H),7.05(d,J＝5.0Hz,1H),6.65(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),5.38(d,J＝17.5Hz,1H),5.20–5.06(m,1H),4.68(s,1H),4.36(d,J＝9.1Hz,1H),4.26(d,J＝12.7Hz,1H),1.39(s,4H),1.36(s,3H),ESI(M+H)+＝390。
实施例63化合物YZ001015的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中2-氟丙烯酸替换为三氟乙酸，得到化合物YZ001015收率65％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.71(d,J＝62.5Hz,1H),8.27(d,J＝4.9Hz,1H),8.08(d,J＝8.3Hz,1H),7.54(d,J＝2.5Hz,1H),7.04(dd,J＝19.1,4.9Hz,1H),6.64(d,J＝11.8Hz,1H),5.32(d,J＝17.7Hz,1H),5.11(dd,J＝52.8,16.5Hz,1H),4.77(d,J＝10.0Hz,1H),4.44(dd,J＝13.1,4.1Hz,1H),4.33(dd,J＝13.1,6.9Hz,1H),1.32(t,J＝9.4Hz,3H),ESI(M+H)+＝350。
实施例64化合物YZ001016的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中2-氟丙烯酸替换为溴化腈，得到化合物YZ001016收率75％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.77(s,1H),8.26(t,J＝11.7Hz,1H),8.08(s,1H),7.56–7.46(m,1H),7.00(t,J＝5.9Hz,1H),6.66(dd,J＝3.3,1.7Hz,1H),4.91(dd,J＝38.5,16.2Hz,2H),4.47(dt,J＝9.6,4.8Hz,1H),4.11–4.00(m,1H),3.94(ddd,J＝15.5,7.8,4.6Hz,1H),1.46(t,J＝5.4Hz,3H)，ESI(M+H)+＝279。
实施例65化合物YZ001017的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中丙烯酰氯替换为丙烯磺酰氯，得到化合物YZ001017收率43％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.70(d,J＝59.9Hz,1H),8.25(t,J＝5.3Hz,1H),8.07(s,1H),7.66(t,J＝6.0Hz,1H),7.63(s,1H),7.61–7.57(m,1H),7.01(dd,J＝12.4,6.9Hz,1H),6.21–6.16(m,1H),6.11(d,J＝9.9Hz,1H),4.80–4.72(m,2H),4.56–4.47(m,1H),4.35(dd,J＝13.0,4.9Hz,1H),4.26–4.15(m,1H),1.31(t,J＝8.3Hz,3H),ESI(M+H)+＝344。
实施例66化合物YZ001018的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(R)-3e-IM3，得到化合物YZ001018收率59％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.13(s,1H),8.76(s,1H),8.48(s,1H),7.60–7.56(m,1H),7.03(dd,J＝3.4,1.6Hz,1H),6.22(dd,J＝16.7,2.1Hz,1H),5.81(d,J＝10.5Hz,2H),4.95(s,1H),4.73(d,J＝7.5Hz,1H),4.38(s,1H),4.26(d,J＝12.7Hz,1H),1.20(d,J＝5.6Hz,3H),ESI(M+H)+＝309。
实施例64化合物YZ001019的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中2-氟丙烯酸替换为反式-4-二甲基胺基巴豆酸盐酸盐，(R)-1e-IM3替换为(R)-3e-IM3，得到化合物YZ001019收率76％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.13(s,1H),8.75(s,1H),8.47(s,1H),7.60–7.50(m,1H),7.03(d,J＝2.2Hz,1H),6.71(d,J＝5.2Hz,2H),5.70(s,1H),4.92(s,1H),4.79–4.63(m,1H),4.38(s,1H),4.28(s,1H),3.10(d,J＝4.0Hz,2H),2.21(s,6H),1.20(d,J＝6.1Hz,3H),ESI(M+H)+＝366。
实施例68化合物YZ001020的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中2-氟丙烯酸替换为丙炔酸，得到化合物YZ001020收率80％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.74(s,1H),8.23(d,J＝3.3Hz,1H),8.04(s,1H),7.56(dd,J＝9.5,5.3Hz,1H),7.51(d,J＝2.6Hz,1H),7.02(d,J＝4.9Hz,1H),6.62(s,1H),5.24(d,J＝17.8Hz,1H),4.60(dd,J＝38.5,20.8Hz,1H),4.48–4.20(m,2H),3.14(s,1H),1.30(s,3H),ESI(M+H)+＝306。
实施例69化合物YZ001021的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(S)-1e-IM3，得到化合物YZ001021收率78％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.72(d,J＝34.0Hz,1H),8.27(d,J＝4.9Hz,1H),8.06(s,2H),7.54–7.51(m,1H),7.08(s,1H),6.66(dd,J＝3.2,1.7Hz,1H),6.19(dt,J＝24.2,12.1Hz,1H),5.77(dd,J＝17.3,13.3Hz,1H),5.33(d,J＝17.2Hz,1H),4.98(dd,J＝13.6,7.1Hz,2H),4.28(d,J＝12.2Hz,2H),1.16(d,J＝6.6Hz,3H),ESI(M+H)+＝308。
实施例70化合物YZ001022的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(S)-1e-IM3，丙烯酰氯替换为反式-4-二甲基胺基巴豆酸盐酸盐，得到化合物YZ001022收率82％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.85–11.49(m,1H),8.26(m,1H),8.06(d,J＝6.6Hz,1H),7.56–7.49(m,1H),7.08(s,1H),6.70(d,J＝5.3Hz,2H),6.65(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),5.32(d,J＝16.8Hz,1H),4.92(s,1H),4.38(d,J＝7.2Hz,1H),4.27(d,J＝12.5Hz,1H),3.07(s,2H),2.24–2.13(m,6H),1.28–1.18(m,3H),ESI(M+H)+＝365。
实施例71化合物YZ001023的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(S)-1e-IM3，丙烯酰氯替换为(2E)-4-(1-哌啶基)-2-丁烯酸，得到化合物YZ001023收率86％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.80–11.64(m,1H),8.26(d,J＝4.9Hz,1H),8.01(d,J＝35.2Hz,1H),7.58–7.48(m,1H),7.06(d,J＝4.2Hz,1H),6.70(s,2H),6.64(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H),5.30(d,J＝17.0Hz,1H),4.90(s,1H),4.52(d,J＝53.5Hz,1H),4.36(s,1H),4.28(s,1H),3.11(s,2H),2.36(s,4H),1.50(s,4H),1.40(s,2H),1.26–1.18(m,3H),ESI(M+H)+＝405。
实施例72化合物YZ001024的合成
参考实施例49的步骤,将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(S)-3e-IM3，得到化合物YZ001024收率48％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.07(d,J＝53.5Hz,1H),8.76(s,1H),8.53(d,J＝36.6Hz,1H),7.63(d,J＝30.5Hz,1H),6.99(d,J＝35.4Hz,1H),6.18(t,J＝30.5Hz,1H),5.80(d,J＝19.6Hz,2H),4.94(s,1H),4.74(s,1H),4.34(d,J＝28.4Hz,1H),4.27(d,J＝11.7Hz,1H),1.22(d,J＝14.8Hz,3H),ESI(M+H)+＝309。
实施例73化合物YZ001025的合成
参考实施例52的步骤,将实施例52中2-氟丙烯酸替换为反式-4-二甲基胺基巴豆酸盐酸盐，(R)-1e-IM3替换为(S)-3e-IM3，得到化合物YZ001025收率66％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.13(s,1H),8.85(s,1H),8.57(s,1H),7.60–7.40(m,1H),7.13(d,J＝2.2Hz,1H),6.61(d,J＝5.2Hz,2H),5.60(s,1H),4.92(s,1H),4.79–4.63(m,1H),4.38(s,1H),4.38(s,1H),3.20(d,J＝4.0Hz,2H),2.31(s,6H),1.40(d,J＝6.3Hz,3H),ESI(M+H)+＝366。
实施例74化合物YZ001026的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(R)-4e-IM3，得到化合物YZ001026收率58％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.21(s,1H),8.76(s,1H),8.45(s,1H),7.63–7.50(m,1H),7.01(dd,J＝3.4,1.5Hz,1H),6.26(d,J＝16.8Hz,1H),5.82(dd,J＝10.5,2.1Hz,1H),5.28(d,J＝11.8Hz,1H),4.52(s,1H),4.24(d,J＝10.8Hz,1H),4.11(d,J＝16.0Hz,1H),3.99(d,J＝5.9Hz,1H),1.49(d,J＝6.1Hz,3H),ESI(M+H)+＝309。
实施例75化合物YZ001027的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中2-氟丙烯酸替换为反式-4-二甲基胺基巴豆酸盐酸盐，(R)-1e-IM3替换为(R)-4e-IM3，得到化合物YZ001027收率76％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),8.76(s,1H),8.45(s,1H),7.59(s,1H),7.02(d,J＝2.7Hz,1H),6.89–6.64(m,2H),5.41–5.21(m,2H),4.52(s,1H),4.23(d,J＝12.4Hz,1H),3.95(dd,J＝14.0,5.9Hz,1H),3.18(d,J＝4.8Hz,2H),2.25(s,6H),1.50(d,J＝6.0Hz,3H),ESI(M+H)+＝366。
实施例76化合物YZ001028的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体S)-4e-IM3，得到化合物YZ001026收率58％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.21(s,1H),8.76(s,1H),8.45(s,1H),7.64–7.51(m,1H),7.01(d,J＝1.9Hz,1H),6.26(d,J＝16.6Hz,1H),5.82(dd,J＝10.4,2.1Hz,1H),5.28(d,J＝11.8Hz,1H),4.52(s,1H),4.24(d,J＝11.7Hz,1H),4.11(d,J＝11.4Hz,1H),3.97(dd,J＝14.1,5.8Hz,1H),3.61(d,J＝4.1Hz,1H),1.49(d,J＝6.2Hz,3H),ESI(M+H)+＝309。
实施例77化合物YZ001029的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中2-氟丙烯酸替换为反式-4-二甲基胺基巴豆酸盐酸盐，(R)-1e-IM3替换为(R)-5e-IM3，得到化合物YZ001027收率36％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.20(s,1H),8.78(s,1H),8.26(s,1H),7.63–7.58(m,1H),6.94(d,J＝2.6Hz,1H),6.52(s,2H),4.82(d,J＝6.1Hz,1H),4.71(d,J＝17.8Hz,1H),4.59(dd,J＝14.5,6.7Hz,1H),4.39(d,J＝16.8Hz,1H),4.18–4.05(m,2H),3.15(d,J＝5.5Hz,1H),2.23(s,2H),1.84(s,6H),1.25(s,3H),ESI(M+H)+＝380。
实施例78化合物YZ001030的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(R)-6e-IM3，得到化合物YZ001030收率59％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.15(s,1H),8.85(s,1H),8.25(s,1H),7.41(s,1H),6.83(s,1H),6.80–6.73(m,1H),6.43(d,J＝16.2Hz,1H),5.85(d,J＝10.5Hz,1H),4.97(dd,J＝12.6,4.7Hz,2H),4.74–4.50(m,2H),4.23(dd,J＝13.5,4.2Hz,1H),1.89–1.78(m,1H),1.07(s,3H),0.97(s,3H),ESI(M+H)+＝337。
实施例79化合物YZ001031的合成
参考实施例52的步骤,将实施例52中2-氟丙烯酸替换为反式-4-二甲基胺基巴豆酸盐酸盐，(R)-1e-IM3替换为(R)-6e-IM3，得到化合物YZ001031收率78％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.14(s,1H),8.85(s,1H),8.25(s,1H),7.41(s,1H),6.83(s,1H),6.81–6.74(m,1H),6.45(d,J＝16.2Hz,1H),4.98(dd,J＝12.6,4.7Hz,2H),4.74–4.50(m,2H),4.23(dd,J＝13.5,4.2Hz,1H),2.86(d,J＝4.0Hz,2H),1.99(s,6H),1.89–1.78(m,1H),0.97(s,6H),ESI(M+H)+＝394。
实施例80化合物YZ001032的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(R)-6e-IM3，2-氟丙烯酸替换为(2E)-4-(1-哌啶基)-2-丁烯酸，得到化合物YZ001032收率87％。ESI(M+H)+＝434。
实施例81化合物YZ001033的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(S)-6e-IM3，得到化合物YZ001033收率60％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.13(s,1H),8.84(s,1H),8.25(s,1H),7.40(s,1H),6.83(s,1H),6.80–6.73(m,1H),6.43(d,J＝16.2Hz,1H),5.85(d,J＝10.5Hz,1H),4.97(dd,J＝12.6,4.7Hz,2H),4.74–4.50(m,2H),4.23(dd,J＝13.5,4.2Hz,1H),1.89–1.78(m,1H),1.05(s,3H),0.93(s,3H),ESI(M+H)+＝337。
实施例82化合物YZ001034的合成
参考实施例52的步骤,将实施例52中2-氟丙烯酸替换为反式-4-二甲基胺基巴豆酸盐酸盐，(R)-1e-IM3替换为(S)-6e-IM3，得到化合物YZ001034收率80％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.13(s,1H),8.85(s,1H),8.23(s,1H),7.41(s,1H),6.83(s,1H),6.82–6.74(m,1H),6.45(d,J＝16.2Hz,1H),4.98(dd,J＝12.6,4.7Hz,2H),4.74–4.50(m,2H),4.23(dd,J＝13.5,4.2Hz,1H),2.86(d,J＝4.0Hz,2H),1.99(s,6H),1.89–1.78(m,1H),0.97(s,6H),ESI(M+H)+＝394。
实施例83化合物YZ001035的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(S)-6e-IM3，2-氟丙烯酸替换为(2E)-4-(1-哌啶基)-2-丁烯酸，得到化合物YZ001035收率83％。ESI(M+H)+＝434。
实施例84化合物YZ001039的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体23T-IM1得到化合物YZ001039收率41％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.19(s,1H),8.35(d,J＝2.8Hz,1H),8.09–7.92(m,1H),7.45(d,J＝0.4Hz,1H),7.06(d,J＝2.9Hz,1H),6.96–6.81(m,1H),6.73(d,J＝0.6Hz,1H),6.49(d,J＝16.9Hz,1H),5.86(d,J＝7.2Hz,1H),4.53–3.98(m,2H),3.07–2.61(m,2H),1.26–1.06(m,2H),1.02–0.48(m,2H).ESI(M+H)+＝320。
实施例85化合物YZ001045的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(S,S)-7d-IM3，得到化合物YZ001045收率48％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.75(s,1H),8.27(d,J＝4.9Hz,1H),8.06(s,1H),7.74–7.67(m,1H),7.61–7.57(m,1H),7.53(d,J＝2.6Hz,1H),7.05(d,J＝4.7Hz,1H),6.65(s,1H),6.18(d,J＝16.8Hz,1H),5.44(s,1H),5.08(s,1H),4.66(s,2H),2.27–2.16(m,2H),2.02(s,1H),1.96–1.89(m,1H),1.71(dd,J＝13.6,5.8Hz,2H),ESI(M+H)+＝334。
实施例86化合物YZ001047的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中2-氟丙烯酸替换为反式-4-二甲基胺基巴豆酸盐酸盐，(R)-1e-IM3替换为(S,S)-7d-IM3，得到化合物YZ001047收率86％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.75(s,1H),8.26(d,J＝4.9Hz,1H),8.05(s,1H),7.73–7.62(m,1H),7.58(d,J＝7.5Hz,1H),7.54–7.49(m,1H),7.04(d,J＝4.9Hz,1H),6.64(d,J＝1.6Hz,1H),5.45(d,J＝17.2Hz,1H),5.06(s,1H),4.70(s,1H),4.56(d,J＝18.0Hz,1H),3.16(s,2H),2.35(s,2H),2.24(s,6H),2.01(s,2H),1.81–1.68(m,2H),ESI(M+H)+＝391。
实施例87化合物YZ001048的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(R)-6e-IM3，得到化合物YZ0010048,收率70％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.15(s,1H),8.84(s,1H),8.23(s,1H),7.41(s,1H),6.83(s,1H),5.32(t,J＝4Hz,0.5H),5.20(d,J＝4Hz,0.5H),5.13(d,J＝16Hz,1H),4.97(dd,J＝12.6,4.7Hz,2H),4.74–4.50(m,2H),4.23(dd,J＝13.5,4.2Hz,1H),1.89–1.78(m,1H),1.07(s,3H),0.97(s,3H),ESI(M+H)+＝355。
实施例88化合物YZ001049的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(S)-6e-IM3，得到化合物YZ0010049,收率68％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.13(s,1H),8.81(s,1H),8.25(s,1H),7.40(s,1H),6.83(s,1H),5.30(t,J＝4Hz,0.5H),5.24(d,J＝4Hz,0.5H),5.16(d,J＝16Hz,1H),4.97(dd,J＝12.6,4.7Hz,2H),4.71–4.45(m,2H),4.23(dd,J＝13.5,4.2Hz,1H),1.84–1.73(m,1H),1.05(s,3H),0.93(s,3H),ESI(M+H)+＝355。
实施例89化合物YZ001050的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(S)-6e-IM3，2-氟丙烯酸替换为2-丁炔酸,得到化合物YZ0010050,收率67％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.12(s,1H),8.84(s,1H),8.25(s,1H),7.40(s,1H),6.83(s,1H),4.97(dd,J＝12.6,4.7Hz,2H),4.74–4.50(m,2H),4.23(dd,J＝13.5,4.2Hz,1H),2.03(d,J＝48Hz,3H),1.89–1.78(m,1H),1.05(s,3H),0.93(s,3H),ESI(M+H)+＝349。
实施例90化合物YZ001051的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(S,S)-7d-IM3，得到化合物YZ001051收率86％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.77(s,1H),8.26(d,J＝4.9Hz,1H),8.07(s,1H),7.75–7.67(m,1H),7.57(dd,J＝9.6,4.7Hz,1H),7.52(s,1H),7.02(d,J＝4.9Hz,1H),6.64(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),5.39(d,J＝6.3Hz,2H),5.25(d,J＝4.2Hz,1H),4.73(s,1H),2.30(s,1H),2.04(d,J＝6.5Hz,2H),1.76–1.57(m,2H),ESI(M+H)+＝352。
实施例91化合物YZ001052的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体9f-IM5，得到化合物YZ001052收率76％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.69(s,1H),8.30(d,J＝4.9Hz,1H),7.49(s,1H),7.13–7.07(m,1H),7.02(d,J＝4.8Hz,1H),6.98–6.89(m,1H),6.16(d,J＝15.2Hz,1H),5.76(d,J＝12.0Hz,1H),4.83(d,J＝13.9Hz,2H),3.93(d,J＝5.6Hz,2H),3.86(s,3H),2.86(s,2H),ESI(M+H)+＝308。
实施例92化合物YZ001053的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体2-氟丙烯酸替换为中间体2-丁炔酸，(R)-1e-IM3替换为(S)-3e-IM3，得到化合物YZ001053收率76％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.16(s,1H),8.76(s,1H),8.51(s,1H),7.60(d,J＝2.4Hz,1H),7.05(s,1H),5.15(d,J＝5.2Hz,1H),4.68(d,J＝19.5Hz,1H),4.32(d,J＝13.1Hz,1H),2.92(s,1H),2.76(s,1H),2.13(s,3H),1.27(s,3H),ESI(M+H)+＝321。
实施例93化合物YZ001054的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体9f-IM5，得到化合物YZ001054收率45％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.71(s,1H),8.30(d,J＝4.9Hz,1H),7.98(s,1H),7.52–7.44(m,1H),7.00(s,1H),5.36(s,2H),4.80(s,2H),3.87(s,2H),2.92(s,2H),2.72(s,3H),ESI(M+H)+＝326。
实施例94化合物YZ001055的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体12I-IM1，得到化合物YZ001055收率32％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.77(s,1H),8.26(d,J＝4.7Hz,1H),8.10(s,1H),7.54–7.49(m,1H),7.07(s,2H),6.65(s,1H),6.22(d,J＝16.7Hz,1H),5.31(d,J＝17.9Hz,1H),4.71–4.38(m,2H),3.71–3.58(m,1H),3.20–3.09(m,1H),1.65(d,J＝24.2Hz,2H),1.52(d,J＝12.4Hz,2H),1.32(d,J＝6.6Hz,4H).ESI(M+H)+＝348。
实施例95化合物YZ001056的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体12I-IM1，得到化合物YZ001054收率65％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.77(s,1H),8.26(d,J＝4.9Hz,1H),8.12(s,1H),7.56–7.49(m,1H),7.07(d,J＝4.7Hz,1H),6.65(dd,J＝3.3,1.7Hz,1H),5.42(s,1H),5.34(dd,J＝30.3,4.1Hz,1H),4.69–4.32(m,2H),3.01–2.86(m,1H),2.71(s,1H),1.86(s,2H),1.62(dd,J＝79.8,11.7Hz,6H),ESI(M+H)+＝366。
实施例96化合物YZ001057的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体11h-IM1，得到化合物YZ001057收率45％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.75(s,1H),8.27(d,J＝4.9Hz,1H),8.06(s,1H),7.73–7.63(m,1H),7.60–7.55(m,1H),7.54–7.49(m,1H),7.05(d,J＝4.8Hz,1H),6.68–6.57(m,1H),6.18(d,J＝16.6Hz,1H),5.45(d,J＝16.6Hz,1H),5.08(s,1H),4.60(dd,J＝42.7,24.3Hz,2H),2.25(dd,J＝34.5,28.5Hz,2H),2.01(s,2H),1.78–1.55(m,2H),ESI(M+H)+＝334。
实施例97化合物YZ001058的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体11h-IM1，得到化合物YZ001058收率55％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.77(s,1H),8.27(d,J＝4.9Hz,1H),8.07(s,1H),7.63–7.40(m,1H),7.03(d,J＝4.9Hz,1H),6.65(dd,J＝3.2,1.7Hz,1H),5.39(s,1H),5.26(d,J＝4.2Hz,1H),3.65(d,J＝3.9Hz,1H),3.17(dd,J＝7.4,4.3Hz,1H),2.72(s,2H),2.39–2.18(m,2H),2.05(d,J＝5.9Hz,2H),1.76–1.54(m,2H).ESI(M+H)+＝352。
实施例98化合物YZ001059的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体13J-IM1，得到化合物YZ001059收率60％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.89–11.55(m,1H),8.24(t,J＝10.8Hz,1H),7.78(d,J＝9.6Hz,1H),7.50(s,1H),7.23(d,J＝4.4Hz,1H),7.05–6.76(m,1H),6.61(s,1H),6.10(d,J＝16.0Hz,1H),5.26(dd,J＝33.6,16.6Hz,1H),4.51(dd,J＝37.0,13.5Hz,2H),4.13(d,J＝11.3Hz,1H),2.33(s,2H),1.32(d,J＝5.9Hz,2H),1.26(s,3H),ESI(M+H)+＝322。
实施例99化合物YZ001060的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体13J-IM1，得到化合物YZ001058收率53％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.73(s,1H),8.24(d,J＝4.9Hz,1H),7.78(s,1H),7.54–7.42(m,1H),7.17(s,1H),6.62(s,1H),5.31(d,J＝22.4Hz,1H),5.05(d,J＝14.7Hz,1H),4.61–4.47(m,2H),3.64(dd,J＝6.6,2.6Hz,1H),2.71(s,2H),2.33(s,2H),1.38(s,3H).ESI(M+H)+＝340。
实施例100化合物YZ001063的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体14K-IM3，得到化合物YZ001063收率45％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),8.53(s,1H),8.34(d,J＝4.9Hz,1H),7.56(s,1H),7.13(d,J＝4.9Hz,1H),6.15(d,J＝16.7Hz,1H),5.74(s,1H),4.97(d,J＝6.2Hz,1H),4.77(d,J＝17.1Hz,2H),4.26–4.17(m,2H),2.41(d,J＝2.4Hz,3H),1.26(s,3H).ESI(M+H)+＝350。
实施例101化合物YZ001064的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体14K-IM3，得到化合物YZ001064收率34％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),8.56(d,J＝2.5Hz,1H),8.34(d,J＝4.9Hz,1H),7.57(s,1H),7.13(d,J＝4.9Hz,1H),5.39–5.30(m,2H),5.23(d,J＝4.1Hz,1H),4.72(d,J＝17.1Hz,2H),4.26(t,J＝14.9Hz,2H),2.42(s,3H),1.32(d,J＝6.7Hz,3H).ESI(M+H)+＝368。
实施例102化合物YZ001065的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体8d-IM5，得到化合物YZ001065收率55％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.03(s,1H),11.68(s,1H),8.31(s,1H),7.50(s,1H),7.18–7.07(m,1H),6.96(dd,J＝16.7,10.6Hz,1H),6.16(d,J＝16.3Hz,1H),5.87–5.70(m,1H),4.85(d,J＝17.4Hz,1H),3.92(s,2H),2.86(s,2H),2.80(s,2H).ESI(M+H)+＝294。
实施例103化合物YZ001066的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体8d-IM5，得到化合物YZ001066收率43％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.77(s,1H),8.32(d,J＝4.7Hz,1H),7.53(s,1H),7.09(s,1H),6.95(d,J＝7.8Hz,1H),5.36(s,1H),4.79(s,1H),3.88(d,J＝5.4Hz,2H),3.44(s,2H),2.90(s,2H).ESI(M+H)+＝312。
实施例104化合物YZ001067的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体8d-IM5，2-氟丙烯酸替换为反式-4-二甲基胺基巴豆酸盐酸盐得到化合物YZ001067收率38％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.74(s,1H),8.48(d,J＝3.1Hz,1H),8.31(d,J＝1.2Hz,1H),8.29(d,J＝1.2Hz,1H),7.52(s,1H),7.31(dd,J＝8.4,4.3Hz,1H),7.10(d,J＝4.8Hz,1H),4.80(s,2H),3.91(s,2H),3.28(dd,J＝11.2,5.7Hz,2H),3.06(s,2H),2.34(s,6H).ESI(M+H)+＝351。
实施例105化合物YZ001068的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体11h-IM1，2-氟丙烯酸替换为反式-4-二甲基胺基巴豆酸盐酸盐得到化合物YZ001068收率48％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.76(s,1H),8.26(d,J＝4.9Hz,1H),8.06(s,1H),7.77–7.59(m,1H),7.53–7.49(m,1H),7.04(d,J＝4.9Hz,1H),6.81(d,J＝14.6Hz,1H),6.67–6.61(m,1H),5.46(d,J＝17.6Hz,1H),5.07(s,1H),4.76–4.48(m,2H),3.07(dd,J＝8.8,4.2Hz,2H),2.35(d,J＝1.8Hz,2H),2.19(s,6H),2.04–1.91(m,2H),1.71(m,2H).ESI(M+H)+＝391。
实施例106化合物YZ001069的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体13J-IM1，2-氟丙烯酸替换为反式-4-二甲基胺基巴豆酸盐酸盐得到化合物YZ001069收率38％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.76(d,J＝26.3Hz,1H),8.27(dd,J＝13.4,4.9Hz,1H),7.78(d,J＝9.5Hz,1H),7.56–7.47(m,1H),7.23(d,J＝4.9Hz,1H),6.98(d,J＝4.9Hz,1H),6.62(d,J＝10.9Hz,2H),5.53–5.21(m,1H),4.83(s,1H),4.65(d,J＝17.4Hz,2H),4.12(d,J＝12.7Hz,1H),3.11(d,J＝5.3Hz,2H),2.33(d,J＝5.9Hz,2H),2.21(d,J＝5.9Hz,6H),1.69(s,3H).ESI(M+H)+＝379。
实施例107化合物YZ001070的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体9f-IM5，2-氟丙烯酸替换为反式-4-二甲基胺基巴豆酸盐酸盐得到化合物YZ001070收率48％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.69(s,1H),8.30(d,J＝4.7Hz,1H),7.66–7.42(m,1H),7.08(d,J＝4.9Hz,1H),7.01(dd,J＝3.3,2.0Hz,1H),6.83(d,J＝15.1Hz,1H),6.71–6.58(m,1H),4.81(s,2H),3.93(s,2H),3.86(s,3H),3.26(d,J＝6.3Hz,2H),2.87(s,2H),2.32(s,6H).ESI(M+H)+＝365。
实施例108化合物YZ001071的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中(R)-1e-IM3替换为23T-IM1得到化合物YZ001071收率57％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.39(s,1H),8.29(d,J＝2.8Hz,1H),8.08–7.94(m,1H),7.46(d,J＝0.4Hz,1H),7.09(d,J＝2.6Hz,1H),6.96–6.81(m,1H),6.78(d,J＝0.6Hz,1H),6.52(t,J＝4Hz,0.5H),5.78(d,J＝16Hz,1H),4.56–3.99(m,2H),3.08–2.63(m,2H),1.27–1.05(m,2H),1.01–0.49(m,2H),ESI(M+H)+＝338。
实施例109化合物YZ001072的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体24U-IM1得到化合物YZ001072，收率32％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.47(d,J＝3.8Hz,1H),7.88(d,J＝7.6Hz,1H),7.77(d,J＝4.0Hz,1H),7.32(s,1H),6.71(d,J＝0.6Hz,1H),6.63(d,J＝4.0Hz,1H),6.45(d,J＝16.8Hz,1H),5.84(d,J＝7.2Hz,1H),1.70(s,3H),1.51–1.43(m,1H),1.37(d,J＝6.4Hz,2H),1.33(s,2H),1.26–1.23(m,1H),0.92(t,J＝6.6Hz,2H),0.90–0.85(m,1H),ESI(M+H)+＝368。
实施例110化合物YZ001073的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体24U-IM1得到化合物YZ001073收率56％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.26(s,1H),7.91(d,J＝8.0Hz,1H),7.54(d,J＝3.9Hz,1H),7.37(s,1H),6.71(d,J＝0.6Hz,1H),6.49(t,J＝3.8Hz,0.5H),5.89(d,J＝4Hz,0.5H),5.78(d,J＝16Hz,1H),1.70(s,3H),1.51–1.43(m,1H),1.37(d,J＝6.6Hz,2H),1.33(s,2H),1.26–1.23(m,1H),0.92(t,J＝6.8Hz,2H),0.90–0.85(m,1H),ESI(M+H)+＝386。
实施例111化合物YZ001074的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体25V-IM4得到化合物YZ001074收率39％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.50(d,J＝3.8Hz,1H),7.85(d,J＝7.6Hz,1H),7.79(d,J＝4.0Hz,1H),7.31(s,1H),6.69(d,J＝0.6Hz,1H),6.60(d,J＝4.0Hz,1H),6.47(d,J＝16.4Hz,1H),5.83(d,J＝7.0Hz,1H),2.53(s,3H),2.31(d,J＝6.4Hz,2H),1.51–1.43(m,1H),1.31(s,2H),1.21–1.19(m,1H),1.15(t,J＝6.6Hz,2H),0.92–0.86(m,1H),ESI(M+H)+＝400。
实施例112化合物YZ001075的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体25V-IM4得到化合物YZ001075，收率61％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.26(d,J＝4.0Hz,1H),7.78(d,J＝8.0Hz,1H),7.68(d,J＝3.8Hz,1H),7.28(s,1H),6.57(s,1H),6.36(t,J＝3.8Hz,0.5H),5.85(d,J＝4Hz,0.5H),5.76(d,J＝14Hz,1H),2.56(s,3H),2.34(d,J＝6.4Hz,2H),1.53–1.44(m,1H),1.32(s,2H),1.23–1.19(m,1H),1.15(t,J＝6.6Hz,2H),0.90–0.84(m,1H),ESI(M+H)+＝418。
实施例113化合物YZ001076的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体15L-IM4，得到化合物YZ001076收率45％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.31(d,J＝43.4Hz,1H),11.85(d,J＝85.5Hz,1H),8.31(s,1H),7.65(s,1H),7.25(s,1H),6.81(d,J＝21.5Hz,2H),6.39–6.23(m,1H),5.81(dd,J＝10.3,2.3Hz,1H),5.05(s,1H),4.87(s,1H),4.78(s,1H),4.61(s,1H),ESI(M+H)+＝280。
实施例114化合物YZ001077的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体15L-IM4，得到化合物YZ001077收率52％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.43(s,1H),12.00(s,1H),9.10–8.63(m,1H),8.31(s,1H),7.64(s,1H),7.28(s,1H),5.43(dd,J＝17.4,3.6Hz,1H),5.09(s,1H),2.92(s,2H),2.75(s,2H),ESI(M+H)+＝298。
实施例115化合物YZ001083的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体18O-IM4，得到化合物YZ001083收率44％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.71(s,1H),8.30(s,1H),7.53–7.37(m,1H),7.15(s,1H),7.05(s,1H),6.94(d,J＝10.7Hz,1H),6.13(dd,J＝16.7,2.1Hz,1H),5.72(s,1H),5.39(d,J＝16.4Hz,1H),4.85(s,1H),4.22(d,J＝16.3Hz,1H),3.87(s,3H),2.96(dd,J＝37.6,16.3Hz,1H),2.79(d,J＝15.1Hz,1H),1.26(d,J＝2.5Hz,3H),ESI(M+H)+＝322。
实施例116化合物YZ001084的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体18O-IM4，得到化合物YZ001084收率46％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.73(s,1H),8.30(d,J＝4.9Hz,1H),7.59–7.40(m,1H),7.11(s,1H),7.02(s,1H),5.39–5.10(m,2H),3.87(s,3H),3.01(t,J＝23.0Hz,1H),2.92(s,1H),2.82(d,J＝16.0Hz,1H),2.72(s,2H),1.30(d,J＝6.6Hz,3H),ESI(M+H)+＝340。
实施例117化合物YZ001085的合成
参考实施例49的步骤,将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体19P-IM1，得到化合物YZ001083收率44％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.69(s,1H),8.31(s,1H),7.50(d,J＝2.5Hz,1H),7.13(s,1H),7.07(s,1H),6.96(dd,J＝16.7,10.6Hz,1H),6.13(dd,J＝16.7,2.1Hz,1H),5.73(d,J＝10.5Hz,1H),5.38(d,J＝16.4Hz,1H),4.83(s,1H),4.58–4.51(m,1H),3.01(s,1H),2.81(d,J＝14.8Hz,1H),1.49(t,J＝6.9Hz,6H),1.25(s,3H),ESI(M+H)+＝350。
实施例118化合物YZ001086的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体19P-IM1，得到化合物YZ001086收率56％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.89(s,1H),8.37(s,1H),7.57(d,J＝2.3Hz,1H),7.19(s,1H),7.11(s,1H),5.41–5.30(m,2H),5.22(d,J＝4.1Hz,1H),4.61–4.51(m,1H),4.41(s,1H),3.06(s,1H),2.87(d,J＝16.1Hz,1H),1.51(d,J＝6.5Hz,6H),1.31(d,J＝6.7Hz,3H),ESI(M+H)+＝368。
实施例119化合物YZ001087的合成
参考实施例49的步骤,将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体10g-IM3，得到化合物YZ001087收率32％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.03(s,1H),8.39(d,J＝4.1Hz,1H),7.65(s,1H),7.10(d,J＝15.5Hz,1H),6.94(dd,J＝16.6,10.5Hz,1H),6.34(d,J＝16.3Hz,1H),6.13(dd,J＝16.7,1.9Hz,1H),5.76–5.69(m,1H),4.88(s,1H),4.44(d,J＝32.8Hz,2H),3.91(d,J＝6.5Hz,4H),3.78(d,J＝5.2Hz,2H),2.83(s,2H),2.27–2.12(m,2H),ESI(M+H)+＝364。
实施例120化合物YZ001088的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体10g-IM3，得到化合物YZ001088收率45％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.05(s,1H),8.39(d,J＝3.9Hz,1H),7.65(s,1H),7.11(dd,J＝19.4,4.7Hz,1H),6.32(d,J＝16.9Hz,1H),5.32(s,2H),4.87(s,1H),4.42(d,J＝19.5Hz,2H),3.90(s,4H),3.78(d,J＝5.2Hz,2H),2.88(s,2H),2.22(d,J＝4.7Hz,2H),ESI(M+H)+＝382。
实施例121化合物YZ001091的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体16M-IM1，得到化合物YZ001091收率65％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.26(s,1H),11.80(s,1H),9.11(s,1H),8.46–8.06(m,1H),7.56(s,1H),7.17(s,1H),6.79(td,J＝15.9,10.3Hz,1H),6.36–6.21(m,1H),5.78(s,1H),5.00(s,1H),3.63(s,2H),1.59–1.48(m,3H).ESI(M+H)+＝294。
实施例122化合物YZ001093的合成
参考实施例49的步骤,将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体20Q-IM1，得到化合物YZ001093收率44％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.71(s,1H),8.26(d,J＝4.9Hz,1H),7.70(d,J＝6.9Hz,1H),7.57–7.47(m,2H),6.99–6.79(m,1H),6.53–6.45(m,1H),6.10(dd,J＝16.6,2.2Hz,1H),5.76–5.67(m,1H),4.92(s,2H),4.56(s,2H),3.96(d,J＝4.8Hz,2H),1.99(s,2H).ESI(M+H)+＝308。
实施例123化合物YZ001094的合成
参考实施例52的步骤,将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体20Q-IM1，得到化合物YZ001094收率35％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.73(s,1H),8.25(d,J＝4.9Hz,1H),7.73(s,1H),7.60–7.43(m,1H),7.38(s,1H),6.50(s,1H),5.36–5.21(m,1H),4.95(s,2H),4.64–4.46(m,2H),3.90(s,2H),2.06(s,2H).ESI(M+H)+＝326。
实施例124化合物YZ001095的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体21R-IM1，得到化合物YZ001095收率64％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.75(s,1H),8.89(s,1H),8.22(t,J＝5.1Hz,1H),7.87(d,J＝11.0Hz,1H),7.51(dd,J＝5.5,2.7Hz,1H),6.96(t,J＝5.6Hz,1H),6.54–6.47(m,1H),6.18(dd,J＝16.7,2.3Hz,1H),5.74(dd,J＝10.4,2.3Hz,1H),4.86(s,2H),3.68–3.56(m,4H),3.15(dd,J＝7.4,4.2Hz,4H).
ESI(M+H)+＝322。
实施例125化合物YZ001096的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体21R-IM1，得到化合物YZ001096收率55％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.74(s,1H),8.20(d,J＝4.9Hz,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,1H),7.53–7.40(m,1H),6.87(d,J＝4.9Hz,1H),6.55–6.34(m,1H),5.29(s,1H),4.96(s,1H),4.89(s,2H),4.46(s,2H),3.42(d,J＝4.8Hz,2H),1.86(d,J＝3.5Hz,2H),1.76(s,2H).ESI(M+H)+＝340。
实施例126化合物YZ001099的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体22S-IM1，得到化合物YZ001099收率54％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.77(s,1H),8.27(d,J＝4.8Hz,1H),8.04(s,1H),7.63–7.43(m,1H),7.00(dd,J＝11.2,5.2Hz,2H),6.65(dd,J＝3.3,1.6Hz,1H),6.23(d,J＝16.9Hz,1H),5.82(d,J＝10.6Hz,1H),5.01(d,J＝4.6Hz,2H),4.49(d,J＝4.4Hz,2H),3.94(dd,J＝14.1,6.5Hz,1H),1.51(d,J＝6.3Hz,3H).ESI(M+H)+＝308。
实施例127化合物YZ001100的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体22S-IM1，得到化合物YZ001100收率35％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.78(s,1H),8.27(d,J＝4.9Hz,1H),8.02(d,J＝31.4Hz,1H),7.69–7.45(m,1H),6.97(d,J＝4.8Hz,1H),6.69–6.49(m,1H),5.02(s,2H),4.62–4.43(m,1H),4.36–4.15(m,1H),3.88(dd,J＝13.9,6.6Hz,1H),2.91(s,1H),2.76(s,1H),1.53(d,J＝6.5Hz,3H).ESI(M+H)+＝326。
实施例128化合物YZ001103的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体26W-IM1，得到化合物YZ001103收率80％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.67(s,1H),8.27(d,J＝5.1Hz,1H),7.46(d,J＝2.9Hz,1H),7.05(d,J＝5.0Hz,1H),7.00–6.96(m,1H),6.14(dd,J＝16.5,2.3Hz,1H),5.76(s,1H),5.75–5.64(m,1H),4.79(s,2H),3.90(d,J＝6.1Hz,2H),2.83(s,2H).ESI(M+H)+＝311。
实施例129化合物YZ001104的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体26W-IM1，得到化合物YZ001104收率53％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.69(s,1H),8.27(d,J＝5.0Hz,1H),7.48(dd,J＝3.4,2.5Hz,1H),7.06–6.95(m,2H),5.26(dd,J＝49.9,4.1Hz,2H),4.76(s,2H),3.87(t,J＝6.0Hz,2H),2.89(s,2H).ESI(M+H)+＝329。
实施例130化合物YZ001107的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体(S)-1e-IM3，得到化合物YZ001107收率45％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.75(s,1H),8.23(s,1H),8.05(s,1H),7.51(dd,J＝3.5,2.5Hz,1H),7.03(s,1H),6.62(s,1H),5.39(s,1H),5.31(dd,J＝32.1,4.1Hz,1H),5.22(d,J＝17.4Hz,1H),4.84(d,J＝35.8Hz,2H),4.39–4.23(m,2H),1.28(d,J＝6.9Hz,3H).ESI(M+H)+＝326
实施例131化合物YZ001108的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体27X-IM1，得到化合物YZ001108收率45％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.84(s,1H),8.34(s,1H),7.55(s,1H),7.19(s,1H),6.98(s,1H),6.94–6.86(m,1H),6.13–6.06(m,1H),5.74–5.65(m,1H),4.79(s,2H),3.84(s,2H),3.12(s,2H),2.71(s,3H).ESI(M+H)+＝336
实施例132化合物YZ001109的合成
参考实施例52的步骤，将实施例52中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体27X-IM1，得到化合物YZ001109收率53％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.89(s,1H),8.37(d,J＝4.9Hz,1H),7.60(t,J＝3.0Hz,1H),7.24–7.14(m,1H),7.00(dd,J＝3.4,1.9Hz,1H),5.42–5.20(m,2H),4.81(s,2H),3.86(s,2H),3.19(s,2H),2.69(s,3H).ESI(M+H)+＝354
实施例133化合物YZ001115的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体28Y-IM3，得到化合物YZ001115，收率58％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.99(s,1H),8.34(dd,J＝4.8,1.1Hz,1H),7.61(d,J＝1.2Hz,1H),7.13(dd,J＝4.8,1.0Hz,1H),6.65(ddd,J＝36.7,16.7,10.3Hz,1H),6.36(ddd,J＝14.6,3.4,1.8Hz,1H),6.21(ddd,J＝16.7,8.8,2.4Hz,1H),5.84–5.57(m,1H),4.76(d,J＝52.0Hz,2H),4.51(d,J＝48.8Hz,3H),1.37(d,J＝6.5Hz,6H).ESI(M+H)+＝322。
实施例134化合物YZ001117的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体29Z-IM3，得到化合物YZ001117，收率60％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.96(s,1H),8.31(d,J＝4.8Hz,1H),7.57(s,1H),7.01(d,J＝4.8Hz,1H),6.86(dd,J＝16.6,10.5Hz,1H),6.41–6.18(m,1H),6.06(dd,J＝16.7,2.4Hz,1H),5.66(dd,J＝10.5,2.4Hz,1H),4.66–4.18(m,3H),3.84(d,J＝6.8Hz,2H),2.76(s,2H),1.28(d,J＝6.6Hz,5H).ESI(M+H)+＝336。
实施例135化合物YZ001118的合成
参考实施例49的步骤，将实施例49中中间体(R)-1e-IM3替换为中间体30A-IM3，得到化合物YZ001118，收率41％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.95(s,1H),8.31(d,J＝4.9Hz,1H),7.58(s,1H),7.07(d,J＝4.9Hz,1H),6.87(dd,J＝16.7,10.5Hz,1H),6.31(dd,J＝3.5,1.8Hz,1H),6.07(dd,J＝16.7,2.3Hz,1H),5.66(dd,J＝10.5,2.3Hz,1H),4.43(d,J＝17.3Hz,2H),3.85(s,2H),3.68(s,3H),2.73(s,2H).ESI(M+H)+＝336。
实施例136本发明公开的化合物的JAK3激酶抑制活性(实验委托桑迪亚医药技术(上海)有限责任公司开展)
实验目的：
采用Mobility shift assay方法，检测受试化合物(列表见下)对JAK3激酶酶活的体外抑制活性。以Cerdulatinib(供应商：selleckchem；货号：S7634)作为阳性对照化合物。
实验方法：
1.化合物配制
化合物溶解在100％DMSO中，配制成10mM储存液，-20℃冰箱避光保存。
2.激酶反应过程
(1)配制1×Kinase buffer。
(2)化合物浓度梯度的配制：受试化合物(包括实施例化合物及PF-06651600)测试浓度为10000n M，10倍稀释，10个浓度，单孔检测。在384孔板中梯度稀释成100倍终浓度的溶液。然后用Echo550转移250nL到384反应板中备用。阴性对照孔和阳性对照孔中分别加250nL的100％DMSO。
(3)用1×Kinase buffer配制2.5倍终浓度的激酶溶液。
(4)在化合物孔和阳性对照孔分别加10μL的2.5倍终浓度的激酶溶液；在阴性对照孔中加10μL的1×Kinase buffer。
(5)1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育10分钟。
(6)用1×Kinase buffer配制25/15倍终浓度的ATP和Kinase substrate 22的混合溶液。
(7)向384反应板化合物孔、阳性对照孔和阴性对照孔分别加入15μL的25/15倍终浓度的ATP和底物的混合溶液，起始反应。
(8)将384孔板1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育30分钟。
(9)加入30μL终止检测液停止激酶反应，1000rpm离心30秒，振荡混匀。
(10)用Caliper EZ Reader读取转化率。
3.数据分析
(1)计算公式
％Inhibition＝(Conversion％_max-Conversion％_sample)/(Conversion％_max-Conversion％_min)×100
其中：Conversion％_sample是样品的转化率读数；Conversion％_min：阴性对照孔均值，代表没有酶活孔的转化率读数；Conversion％_max：阳性对照孔均值，代表没有化合物抑制孔的转化率读数；％Inhibition表示百分比抑制率。
(2)拟合量效曲线
以浓度的log值作为X轴，百分比抑制率为Y轴，采用分析软件GraphPad Prism 5的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的IC50值。计算公式是Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))。
实验结果：
Figure BDA0003813605370000431
Figure BDA0003813605370000441
与阳性对照PF-06651600相比，本发明申请的化合物母核结构不同，结构上的区别特征十分显著。上表数据表明，本发明申请的大部分化合物相对于PF-06651600具有更优的JAK3体外激酶抑制活性，部分化合物对于JAK3激酶的抑制活性是PF-06651600的10倍以上，在激酶抑制活性上具有显著的技术效果。通过对比实施例YZ001003与YZ001001对比发现，两者具有相同的分子骨架，只是YZ001001的NH基团上连接共价靶头，而YZ001003的NH基团上连接非共价靶头，前者具有良好的JAK3激酶抑制活性，后者基本没有抑制活性；通过对比实施例YZ001011、YZ001012与YZ001017对比发现，两者具有相同的分子骨架，只是YZ001017的NH基团上连接共价靶头，而YZ001011、YZ001012的NH基团上连接非共价靶头，YZ001017的JAK3抑制活性显著优于YZ001011、YZ001012。上述对比说明，本发明申请的化合物的共价靶头对于JAK3激酶的抑制活性十分关键，申请人推测共价靶头能与JAK3激酶Cys909氨基酸形成共价作用力。
实施例137激酶选择性实验
实验目的：
采用Mobility shift assay方法，检测受试化合物(列表见下)对JAK激酶家族其他亚型(JAK1、JAK2、TYK2)酶活的体外抑制活性，考察化合物的激酶选择性。。以PF-06651600作为阳性对照化合物。
实验方法：
与上述JAK3激酶抑制活性实验方法相同。
实验结果：
Figure BDA0003813605370000442
上表数据表明，我们的化合物具有良好的JAK同家族其他亚型的选择性。
实施例138细胞活性实验
实验目的：
基于JAK-STAT通路的机制，采用细胞因子IL-15刺激hPBMC细胞，以下游STAT5磷酸化水平作为检测指标，评估化合物对JAK-STAT通路的作用。
实验方法：
1.PBMC细胞计数种板：90μL PBMC种于96孔板(PBMC细胞密度8万/孔)。
2.受试化合物处理：细胞种板后，随即进行给药处理。待测药物5μL/孔(终浓度1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.005μM)，37℃孵箱孵育45min。
3.细胞因子IL-15刺激：5μL IL-15刺激，37℃孵育30min。
4.蛋白样本收集：收集细胞于离心管中，离心5min。离心弃上清，用1×CellExtraction Buffer PTR裂解细胞。
5.p-STAT5检测：按照ELISA试剂盒要求进行检测。
实验结果：化合物在PBMC中对IL-15刺激下p-STAT5的IC50值
化合物编号 IC50(nM)
YZ001052 10.74
YZ001065 26.27
YZ001075 31.73
PF-06651600 85.02
上表数据表明，我们的化合物在细胞水平上具有良好的抑制JAK3-STATs信号通路的作用，部分化合物表现出比阳性药相当或者更低的IC50。
实施例139动物体内暴露量检测
实验目的：
IG：20mg/kg给药剂量下测试YZ001054在SD Rat血浆中的暴露量水平。
实验方法：
标准曲线和质控样本配制处理：取化合物储备液用50％甲醇水水稀释成含各化合物浓度分别为20、40、100、200、400、1000、2000、4000、10000ng/mL的标准工作液，60、600、8000ng/mL的质控工作液。分别取47.5μL空白大鼠血浆中加入2.50μL的标准曲线工作液和质控工作液，配置成含各化合物浓度为1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、50.00、100.00、200.00、500.00ng/mL的标曲和浓度为3.00、30.00和400.00ng/mL的质控样本，分别加入200μL的乙腈(含内标维拉帕米2ng/mL)，涡旋振荡3min后，20000rcf，4℃离心10min，取上清液进行LC-MS/MS分析。
待测血浆样本配制处理：取血浆样品50μL，加入200μL的乙腈(含内标维拉帕米2ng/mL)，涡旋振荡3min后，20000rcf，4℃离心10min，取上清液进行LC-MS/MS分析。
药代动力学参数 单位 平均值
HL_Lambda_z hr 1.4162
Tmax hr 4.5
Cmax ng/mL 1357.78
AUClast hr*ng/mL 1877.52
AUClast_D hr*kg*ng/mL/mg 93.88
AUCINF_obs hr*ng/mL 1897.55
Vz_F_obs mL/kg 34359.46
Cl_F_obs mL/hr/kg 14108.42
MRTINF_obs hr 1.9469
实验结果：
由上表数据可知，我们的化合物在体内具有一定水平的暴露量，可开发口服给药。
实施例140化合物对小鼠迟发性变态反应(DTH)的免疫抑制作用
实验目的：
测试YZ001052、YZ001054、YZ001065、YZ001085在SRBC小鼠模型的免疫抑制活性。以PF-06651600作为阳性对照化合物。
实验方法：
药物配制：称取化合物，加入0.5％的CMC-Na溶液制成药物混悬液(给药剂量为10mg/mL)。
迟发性变态反应(DTH)的诱导及给药：Balb/c小鼠雄性30只，称重，按体重随机分为6组，每组5只。实验周期共计7天。第0天皮下注射绵羊红细胞(SRBC)致敏。从第0天开始灌胃给药100mg/kg(一天一次)至第6天。第6天在小鼠右后脚垫注射SRBC进行激发。实验第7天测量拍照，结束实验。
疾病模型药效学检测指标：检测及观察指标为SRBC诱导小鼠造模爪部脚垫的红肿程度及厚度检测。在第6天SRBC注射激发前测量右爪的厚度作为基线。在实验结束时0再次测量右爪的厚度，计算二次注射前后爪厚度差。
统计学处理：实验数据采用均数±标准差(Mean±SD)表示，所有数据均采用T-test进行统计，以P＜0.05为具有统计学差异，结果见图1。
实验结果：
由图1可知，SRBC诱导后(造模组)小鼠右爪厚度显著增加，药物处理后(包括化合物YZ001052、YZ001054、YZ001065、YZ001085)小鼠右爪厚度均出现不同程度的改善，表明化合物YZ001052、YZ001054、YZ001065、YZ001085对SRBC诱导的小鼠迟发性变态反应具有显著的免疫抑制作用，其作用效果非劣于PF-06651600。
实施例142：化合物对胶原诱导型小鼠关节炎模型的免疫抑制作用
1、胶原诱导型小鼠关节炎模型(mCIA)的构建
实验目的：测试YZ001052在mCIA模型的免疫抑制活性。以PF-06651600作为阳性对照化合物。
实验方法：将32只雌性DBA/1J小鼠随机分为4组，设置为空白对照组、模型组、模型+YZ001052给药组、模型+PF-06651600给药组。关节炎造模成功后，给予YZ001052或PF-06651600药物干预，50mg/kg，一天一次。分别将完全和不完全弗氏佐剂与鸡II型胶原液等比例混合形成乳化剂。除空白对照组外，Day 0时将完全弗氏佐剂和鸡II型胶原液的混合物皮下注射到小鼠尾根部和大腿根部，每只小鼠尾根部皮下注射100μL；两大腿根部皮下各注射50μL(初次免疫)。第21天时小鼠皮下注射200μL不完全弗氏佐剂和鸡II型胶原液的混合物作为加强注射(第二次免疫)。以至少有1只肢体临床积分≥2分以上，判断为关节炎发生。足爪厚度测量：采用游标卡尺测量小鼠左右后足的厚度即为足爪肿胀度并记录，检测频率为每3天一次。
实验结果：从图2可以看出，二次免疫后，模型组小鼠足爪部位炎症不断加重，肿胀逐渐蔓延至整个足爪，关节炎分数于第16天显著升高。而经YZ001052或PF-06651600治疗后，CIA小鼠的足爪肿胀程度得到了不同程度的改善，关节炎分数出现显著下降(与模型组相比)。
与关节炎评分一致，模型组小鼠足爪出现明显肿胀，而经YZ001052或PF-06651600治疗后，小鼠的足爪肿胀程度得到了不同程度的改善。以上结果说明，YZ001052或PF-06651600能够改善类风湿关节炎的症状。
实施例143：化合物对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠炎症性肠病模型的免疫抑制作用
实验目的：测试YZ001052在DSS诱导的小鼠炎症性肠病模型的免疫抑制活性。以PF-06651600作为阳性对照化合物。
实验方法：32只雌性C57BL/6小鼠，随机分为4组，分别为空白对照组、模型组、模型+YZ001052给药组、模型+PF-06651600给药组。在造模开始时同时给药，YZ001052和PF-06651600的给药剂量为50mg/kg，一天一次。称量50g DSS，加入1000mL无菌水，配制成5％DSS溶液，用0.22μm滤膜过滤。于第0天起，空白组给予不含DSS的饮用水，其余实验组给予含5％DSS的饮用水。在第8天处死所有小鼠。在实验结束后，收集结直肠，进行拍照并测量其长度，进行统计学分析。
实验结果：如图3所示，与正常对照组相比，模型组小鼠的结直肠长度显著缩短，提示炎症性肠病小鼠的结直肠受到严重损伤。与模型组小鼠相比，YZ001052治疗组小鼠的结直肠长度明显增加，表明YZ001052治疗可以缓解炎症性肠病小鼠的结直肠损伤，结果优于PF-06651600。
实施例144化合物对放射性肺损伤小鼠模型的免疫抑制作用
1、急性放射性肺损伤小鼠模型的构建
(1)动物的分组及给药
18只雌性C57BL/6小鼠，随机分成3组，分别为空白对照组、单纯辐照组、辐照+药物YZ001052(30mg/kg q.d)干预组，每组6只。
(2)造模方法
用1％戊巴比妥钠以腹腔注射的方式麻醉小鼠，利用小动物精准放疗研究平台(SARRP)，采用220KV X射线，单次全肺照射22.5Gy。照射完毕后小鼠常规饲养。
2、指标检测
造模3周后，麻醉小鼠，解剖并暴露肺组织，结扎左肺，进行开放性气管切开术，冷PBS灌洗肺部，收集肺泡灌洗液(BALF)，4℃冷冻离心。
收集上清后，ELISA检测炎症因子TNF-α的含量。如图4所示，辐照诱导以后，模型组小鼠肺泡灌洗液中TNF-α水平明显升高。药物YZ001052对TNF-α的水平有较好的抑制作用。
用200μL PBS重悬肺泡灌洗液细胞沉淀，用于白细胞(WBC)计数。如图5所示，辐照诱导以后，模型组小鼠肺泡灌洗液中白细胞数目明显增多。药物YZ001052可显著降低辐照引起的小鼠肺部炎症细胞浸润数目。

Claims (15)

1.一种芳杂环类化合物，其特征在于，为通式I所示结构的化合物、其光学异构体、其氘代化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003813605360000011
其中：
环A为含1-3个杂原子的五元芳杂环，所述杂原子选自O、N、S；
M为环A上的取代基，M选自缺失、氢、C1-C4烷酰基、C1-C4烷基、氘代C1-C4烷基、C1-C4烷磺酰基或C4-C6杂环烷基，其中C4-C6杂环烷基含1个杂原子，所述杂原子选自O、N、S；
L选自
Figure FDA0003813605360000012
其中Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh各自独立地选自氢、氰基、羟基、卤素、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基、单取代的C1-C4烷基、C1-C4烷酰基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷磺酰基；所述单取代的C1-C4烷基中的取代基选自C1-C3烷硫基、C1-C3烷磺酰基、C1-C3烷酰基、卤素、氰基；k为1-5的整数，q为0-4的整数，r为0-3的整数，p、m各自独立地选自1-4的整数；k、p或m大于1时，不同碳原子上的Ra、Rb、Re、Rf、Rg、Rh相互独立；
W为共价靶头，所述共价靶头指的是能与亲核试剂形成共价键的化学基团，W选自
Figure FDA0003813605360000013
或腈基；其中R1、R2各自独立地选自氢、氘、卤素、氰基、C1-C4烷基、卤代甲基，R3选自氢、氘、卤素、氰基、C1-C4烷基、卤代甲基、
Figure FDA0003813605360000014
n、t各自独立地选自1-3的整数；R4、Rj、Rk、Rm各自独立地选自氢或C1-C4烷基；R5为卤代甲基；R6为乙烯基或卤代甲基；
X选自N或CH；Y选自氢、C1-C4烷基或C1-C4烷酰基。
2.根据权利要求1所述的芳杂环类化合物，其特征在于：
环A为含1-3个杂原子的五元芳杂环，所述杂原子选自N原子；
M为环A的取代基，M选自缺失、氢、氘代甲基、C1-C4烷酰基、C1-C4烷基或C4-C6杂环烷基，其中C4-C6杂环烷基含1个杂原子，且杂原子为氧原子；
L选自
Figure FDA0003813605360000021
其中Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh各自独立地选自氢、C1-C4烷基、单取代的C1-C4烷基，所述单取代的C1-C4烷基中的取代基选自C1-C3烷硫基、C1-C3烷磺酰基、氰基；k为1-4的整数，q为0-3的整数，r为0-2的整数，p为1或2，m为3或4；
W选自
Figure FDA0003813605360000022
或腈基；其中R1、R2各自独立地选自氢、氘、卤素、氰基、C1-C4烷基，R3选自氢、氘、卤素、氰基、C1-C4烷基、卤代甲基、
Figure FDA0003813605360000023
n、t各自独立地选自1-3的整数；Rj、Rk、Rm各自独立的选自氢、甲基或乙基；R4选自氢或甲基；R5为卤代甲基；R6表示乙烯基；
X选自N或者CH；Y选自氢或C1-C4烷酰基。
3.根据权利要求1或2所述的芳杂环化合物，其特征在于，所述化合物具有通式Ⅱ所示的结构，或其光学异构体、其氘代化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003813605360000024
其中：
环A为含2个双键的五元杂环；Z为N或C，Q为N或NR7，T为CH或N或NR8，且当Z、T同时为N时，Q为N；其中R7、R8分别独立的为氢、氘代甲基、C1-C4烷酰基、C1-C4烷基或C4-C6杂环烷基，其中C4-C6杂环烷基含1个杂原子，且杂原子为氧原子；
L选自
Figure FDA0003813605360000025
其中Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh各自独立地选自氢、C1-C4烷基、单取代的C1-C4烷基，所述“单取代的C1-C4烷基”中的取代基选自C1-C3烷硫基、C1-C3烷磺酰基、氰基；k为1-4的整数，q为0-3的整数，r为0-2的整数，p为1或2，m为3或4；
W选自
Figure FDA0003813605360000031
或腈基；其中R1、R2各自独立地选自氢、氘、卤素、氰基、C1-C4烷基，R3选自氢、氘、卤素、氰基、C1-C4烷基、卤代甲基、
Figure FDA0003813605360000032
n、t各自独立地选自1-3的整数；Rj,Rk,Rm各自独立的选自氢、甲基或乙基；R4选自氢或甲基；R5为卤代甲基；R6表示乙烯基；
X选自N或者CH；Y选自氢或C1-C4烷酰基。
4.根据权利要求3所述的芳杂环类化合物，其特征在于，所述化合物具有通式III-1、III-2、III-3或III-4所示的结构，或其光学异构体、其氘代化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003813605360000033
L选自
Figure FDA0003813605360000034
其中Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh各自独立地选自氢、C1-C4烷基、单取代的C1-C4烷基，所述单取代的C1-C4烷基中的取代基选自甲硫基、甲磺酰基、氰基；k为1-4的整数，q为0-3的整数，r为0-2的整数，p为1，m为3或4；
W选自
Figure FDA0003813605360000035
或腈基；其中R1为氢、氘、卤素、氰基、甲基，R2为氢、氘、氰基或甲基，R3为氢、氘、卤素、氰基、甲基、三氟甲基、
Figure FDA0003813605360000036
n、t为2，Rj,Rk,Rm为甲基；R4选自氢或甲基；R5为卤代甲基；R6表示乙烯基；
X选自N或者CH；Y选自氢或乙酰基。
5.根据权利要求4所述的芳杂环类化合物，其特征在于：所述通式中，
L选自
Figure FDA0003813605360000041
其中：Ra、Rb各自独立地选自H、甲基、异丙基、甲硫基取代乙基、甲磺酰基乙基；Rc、Rd、Re、Rf各自独立地选自H、甲基；Rg、Rh各自独立地选自H、甲基；k为1、2、3、4，q为1，r为0，p为1，m为3或4；
R7、R8分别独立的为氢、甲基、异丙基、乙酰基、氘代甲基、C4-C6杂环烷基，其中C4-C6杂环烷基含1个杂原子，且杂原子为氧原子。
6.根据权利要求1所述的芳杂环类化合物，其特征在于：
Figure FDA0003813605360000042
选自如下结构：
Figure FDA0003813605360000043
其中R7为氢、氘代甲基、C1-C4烷酰基、C1-C4烷基或C4-C6杂环烷基，其中C4-C6杂环烷基含1个杂原子，且杂原子为氧原子；
所述W优选为：
Figure FDA0003813605360000044
7.根据权利要求1所述的芳杂环类化合物，其特征在于，通式I中与W相邻的N定义为N-1，L中与N-1相邻的碳原子上存在非H取代时，该碳原子具有手性结构。
8.根据权利要求1所述的芳杂环类化合物，其特征在于，所述化合物选自以下化合物：
Figure FDA0003813605360000051
Figure FDA0003813605360000061
其光学异构体、其氘代化合物或其药学上可接受的盐。
9.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1～8任一项所述的化合物。
10.一种药物制剂，其特征在于，所述药物组合物包含至少一种活性组分以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，所述的活性组分选自权利要求1-8中任一项所述的化合物、其光学异构体、其氘代化合物或其药学上可接受的盐。
11.一种权利要求1-8中任一项所述的化合物在制备预防或治疗JAK-STAT信号通路异常导致的疾病的药物中的应用。
12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述JAK-STAT信号通路异常是指JAK3异常表达或其异常表达所致的JAK-STAT信号通路改变。
13.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述疾病选自自身免疫性疾病中的一种或多种。
14.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述疾病选自斑秃、狼疮、多发性硬化、肌肉缩性侧索硬化、风湿性关节炎、类风湿性关节炎、银屑病、因器官移植导致的并发症、特应性皮炎、自身免疫性甲状腺病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、干燥综合征、白癜风、自身免疫性肾损伤、自身免疫性肝损伤、慢性阻塞性肺病中的一种或多种。
15.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述JAK-STAT信号通路异常导致的疾病为肺损伤，所述肺损伤是指放射性肺损伤和急性肺损伤。
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