Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

CN114891646A - 一种雷公藤专用促生菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种雷公藤专用促生菌剂及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114891646A
CN114891646A CN202210628180.2A CN202210628180A CN114891646A CN 114891646 A CN114891646 A CN 114891646A CN 202210628180 A CN202210628180 A CN 202210628180A CN 114891646 A CN114891646 A CN 114891646A
Authority
CN
China
Prior art keywords
microbial inoculum
tripterygium wilfordii
growth
special
solid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210628180.2A
Other languages
English (en)
Inventor
封磊
宋萍
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fujian Agriculture and Forestry University
Original Assignee
Fujian Agriculture and Forestry University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fujian Agriculture and Forestry University filed Critical Fujian Agriculture and Forestry University
Priority to CN202210628180.2A priority Critical patent/CN114891646A/zh
Publication of CN114891646A publication Critical patent/CN114891646A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14Fungi; Culture media therefor
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01GHORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G7/00Botany in general
    • A01G7/06Treatment of growing trees or plants, e.g. for preventing decay of wood, for tingeing flowers or wood, for prolonging the life of plants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/36Penicillium
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02WCLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
    • Y02W30/00Technologies for solid waste management
    • Y02W30/40Bio-organic fraction processing; Production of fertilisers from the organic fraction of waste or refuse

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Forests & Forestry (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明属于微生物菌剂技术领域,特别涉及一种雷公藤专用促生菌剂及其制备方法和应用。所述菌剂由歧皱青霉NS‑12发酵而成,所述歧皱青霉NS‑12的分类命名为歧皱青霉(Penicillium steckii),该菌株已于2011年6月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.4928。该菌剂对雷公藤有明显的增益作用,可显著提高雷公藤的生物量及甲素含量,具有良好的应用前景。

Description

一种雷公藤专用促生菌剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于微生物菌剂技术领域,特别涉及一种雷公藤专用促生菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)是一种木质藤本植物,分布于我国南方福建、江西、浙江、湖北、湖南、广东、台湾等省,是珍贵的药用植物。现代研究发现雷公藤含有100种以上的成分,主要分为生物碱类、二萜类、三萜类、倍半萜类及糖,而雷公藤甲素是其最主要的活性成分之一,具有抗炎、抗癌、免疫调整、抗生育等功效,广泛用于治疗类风湿性关节炎、肺病、肾病、皮肤病、白血病等疾病,是雷公藤片、雷公多甙片等多种成药制剂的主要成分。长期以来雷公藤药材主要依靠野生及人工种植获取,由于有效成分含量极低,生长周期长,造成蕴藏量急剧下降,加之产地环境污染和为防病虫喷施农药等原因,使得原料药的供应在数量和质量上都不能满足临床应用的需要。
近年来,随着研究的不断深入,一些生长在药用植物体内的内生真菌引起了研究者的广泛关注。迄今为止,国内外学者已从红豆杉,银杏,青蒿等药用植物体内分离得到能够产生与宿主相同或相似的药用活性成分的内生真菌,从而为药用活性物质的非植物源获取提供了可能。但对这类特殊内生菌进行单独发酵生产时发现,大多数菌株所产生的药用活性成分含量极低,且受底物抑制效应明显,并不能满足大规模工业生产的条件。另有一些研究则发现,该类内生菌与宿主间的交互作用会对各自的活性成分生成产生影响,在一些内生菌与宿主植物所形成的菌植共生体中,其活性成分明显高于宿主植物本身的含量,具有良好的应用前景。然而,由于这类内生菌均筛选自植物体内,对外界环境条件相对敏感,如何长期保藏并维持一定的菌体活性是影响其推广应用的重要因素。本研究以一株前期筛选的具有生成雷公藤甲素能力的雷公藤内生真菌为对象,将其制备成微生物菌剂,并对该菌剂的菌体保存活性及实际施用效果进行了评价,相关成果对于促进雷公藤活性成分含量,提升其应用价值具有重意义。目前与此相关的研究则罕见报道。
发明内容
本发明为了弥补现有技术的不足,提供了一种雷公藤专用促生菌剂及其制备方法和应用。将该菌剂施用于雷公藤,可明显促进雷公藤植株的生长,提高雷公藤甲素在雷公藤体内的含量,具有良好的应用前景。
本发明是通过如下技术方案实现的:
一种雷公藤专用促生菌剂,所述菌剂由歧皱青霉NS-12发酵而成,所述歧皱青霉NS-12的分类命名为歧皱青霉(Penicillium steckii),该菌株已于2011年6月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.4928。
进一步的,上述的雷公藤专用促生菌剂为固态菌剂。
进一步的,上述的雷公藤专用促生固态菌剂的制备方法包括如下步骤:
1)菌种活化:将低温保存的歧皱青霉NS-12接种于PDA固体培养基上于28℃培养,待长出菌落后挑取单菌落转接到新的PDA固体培养基上,在28℃继续培养5d;
2)制备孢子悬浮液:将活化后的歧皱青霉NS-12接种到PDA平板上于28℃扩大培养,用无菌水洗脱孢子配制成浓度为1.0×108个/mL的孢子悬浮液;
3)固体发酵:取100mL孢子悬浮液接种到1000g的固体发酵培养基中于28℃培养,每隔2~3天在无菌条件下进行一次搅拌,培养9 d后得到固体发酵菌剂;
4)菌剂干燥:将所得固体菌剂放在35℃的干燥箱内,鼓风烘干40 h,将固体菌剂烘干至含水量在10~15%以下,即得到雷公藤专用促生固态菌剂。
进一步的,上述的固体发酵培养基由如下重量百分数的原料组成:麸皮26%,豆饼粉10%,淀粉10%,椰壳粉10%,海藻糖3%,碳酸钙1%,水40%。
进一步的,上述制得的雷公藤专用促生固态菌剂的活菌数为7×1010cfu/g。
进一步的,上述的雷公藤专用促生固态菌剂的施用方式为:通过灌根施入作物根际。
上述的雷公藤专用促生菌剂在提高雷公藤生物量上的应用。
上述的雷公藤专用促生菌剂在提高雷公藤甲素含量上的应用。
本发明的显著优点在于:
本发明涉及的雷公藤专用促生菌剂制备简单,施用方便,可有效保持菌种活性,在保存12个月后有效活菌数仍达4.7×1010cfu/g。施用效果表明该菌剂对雷公藤有明显的增益作用,可显著提高雷公藤的生物量及甲素含量,具有良好的应用前景。
附图说明
图1为雷公藤专用促生固态菌剂。
图2为雷公藤专用促生固态菌剂对雷公藤植株的影响。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明,各实施例及试验例中所用的设备和试剂如无特殊说明,均可从商业途径得到。此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
根据本申请包含的信息,对于本领域技术人员来说可以轻而易举地对本发明的精确描述进行各种改变,而不会偏离所附权利要求的精神和范围。应该理解,本发明的范围不局限于所限定的过程、性质或组分,因为这些实施方案以及其他的描述仅仅是为了示意性说明本发明的特定方面。实际上,本领域或相关领域的技术人员明显能够对本发明实施方式作出的各种改变都涵盖在所附权利要求的范围内。
本发明所用菌种材料歧皱青霉NS-12,其分类命名为歧皱青霉(Penicillium steckii),已于2011年6月10日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏,保藏编号为:CGMCC No.4928,地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。所述歧皱青霉NS-12是从从雷公藤植物组织中分离、纯化获得的,其在平面培养基上,正面灰绿色,背面黄褐色,单个圆形;菌丝体有隔,分生孢子梗和孢子无色,末端生小梗,小梗直立,单胞,卵圆形,表面光滑,分生孢子梗自菌丝单个地发生,成帚状特征结构。根据上述特征,依据“真菌鉴定手册”,将该菌株鉴定为歧皱青霉(Penicillium steckii)。
实施例1
雷公藤专用促生固态菌剂的制备方法,具体如下:
(1)培养基的制备:
1)PDA 固体培养基:新鲜土豆200 g/L,葡萄糖25g/L,琼脂15g/L,其它为无菌水,pH 7.0-7.2。
2)固体发酵培养基(按重量百分数计):麸皮26%,豆饼粉10%,淀粉10%,椰壳粉10%,海藻糖3%,碳酸钙1%,水40%。
(2)菌种活化:
将低温保存的歧皱青霉NS-12真菌孢子接种到PDA固体培养基上于28℃培养,待长出菌落后挑取单菌落接种到新的PDA固体培养基上继续培养5 d。
(3)孢子悬浮液的制备:
将活化后的歧皱青霉NS-12接种到PDA固体培养基上于28℃扩大培养,用无菌水洗脱培养基表面孢子配制成浓度为1.0×108个/mL的孢子悬浮液。
(4)固体发酵:
取100mL孢子悬浮液接种到1000g固体发酵培养基中于28℃培养,每隔2~3天在无菌条件下进行一次搅拌,培养9 d后得到固体发酵菌剂。
(5)菌剂干燥:
将所得固体菌剂放在35℃的干燥箱内,鼓风烘干40 h,将固体菌剂烘干至含水量在10~15%以下,即得到雷公藤专用促生固态菌剂(图1)。该菌剂活菌数可以达到7×1010 cfu/g。
实施例2
将实施例2得到的雷公藤专用促生固态菌剂置于20~25℃干燥处保存。分别在保存1、2、3、6、12个月后,抽取样品检测活菌数,结果如表2所示。经过12个月的保存,菌剂的孢子数量仍然高达4.7×1010cfu/g,其表现出良好的保存特性。
表1 菌剂活菌数随时间的变化
Figure DEST_PATH_IMAGE001
实施例3
选取生长一致的雷公藤幼苗施用经过12个月的保存的雷公藤专用促生固态菌剂。取20g雷公藤专用促生固态菌剂与1000mL无菌水混合搅拌均匀,灌根施入雷公藤幼苗根际,每个植株的施入量为50mL。以无菌水作为对照。施用3个月后取样测定雷公藤幼苗全株生物量及根部甲素含量。结果如图2和表2所示。对照组雷公藤幼苗生物量是35.86g,菌剂处理组雷公藤幼苗生物量是46.76g,结果表明菌剂处理组较对照组生物量提高了30%。对照组雷公藤幼苗根部甲素含量是1.06µg/g,菌剂处理组雷公藤幼苗根部甲素含量是1.53µg/g,结果表明菌剂处理组较对照组生物量提高了44%。
表2 雷公藤专用促生固态菌剂的施用效果
Figure DEST_PATH_IMAGE002

Claims (8)

1.一种雷公藤专用促生菌剂,其特征在于:所述菌剂由歧皱青霉NS-12发酵而成,所述歧皱青霉NS-12的分类命名为歧皱青霉(Penicillium steckii),该菌株已于2011年6月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.4928。
2.根据权利要求1所述的雷公藤专用促生菌剂,其特征在于:所述菌剂为固态菌剂。
3.根据权利要求2所述的雷公藤专用促生菌剂,其特征在于:所述雷公藤专用促生固态菌剂的制备方法包括如下步骤:
1)菌种活化:将低温保存的歧皱青霉NS-12接种于PDA固体培养基上于28℃培养,待长出菌落后挑取单菌落转接到新的PDA固体培养基上,在28℃继续培养5 d;
2)制备孢子悬浮液:将活化后的歧皱青霉NS-12接种到PDA平板上于28℃扩大培养,用无菌水洗脱孢子配制成浓度为1.0×108个/mL的孢子悬浮液;
3)固体发酵:取100 mL孢子悬浮液接种到1000 g的固体发酵培养基中于28℃培养,每隔2~3天在无菌条件下进行一次搅拌,培养9 d后得到固体发酵菌剂;
4)菌剂干燥:将所得固体菌剂放在35℃的干燥箱内,鼓风烘干40 h,将固体菌剂烘干至含水量在10~15%以下,即得到雷公藤专用促生固态菌剂。
4.根据权利要求3所述的雷公藤专用促生菌剂,其特征在于:所述固体发酵培养基由如下重量百分数的原料组成:麸皮26%,豆饼粉10%,淀粉10%,椰壳粉10%,海藻糖3%,碳酸钙1%,水40%。
5.根据权利要求3所述的雷公藤专用促生菌剂,其特征在于:所得到的雷公藤专用促生固态菌剂中的活菌数为7×1010 cfu/g。
6.根据权利要求3所述的雷公藤专用促生菌剂,其特征在于:所述雷公藤专用促生固态菌剂的施用方式为:通过灌根施入作物根际。
7.权利要求1所述的雷公藤专用促生菌剂在提高雷公藤生物量上的应用。
8.权利要求1所述的雷公藤专用促生菌剂在提高雷公藤甲素含量上的应用。
CN202210628180.2A 2022-06-06 2022-06-06 一种雷公藤专用促生菌剂及其制备方法和应用 Pending CN114891646A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210628180.2A CN114891646A (zh) 2022-06-06 2022-06-06 一种雷公藤专用促生菌剂及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210628180.2A CN114891646A (zh) 2022-06-06 2022-06-06 一种雷公藤专用促生菌剂及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114891646A true CN114891646A (zh) 2022-08-12

Family

ID=82726016

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210628180.2A Pending CN114891646A (zh) 2022-06-06 2022-06-06 一种雷公藤专用促生菌剂及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114891646A (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102321545A (zh) * 2011-10-21 2012-01-18 福建农林大学 一株产雷公藤甲素的内生真菌
CN105899668A (zh) * 2013-11-11 2016-08-24 巴斯夫欧洲公司 抗真菌青霉属菌株,其杀真菌extrolite,及其用途
KR20180007053A (ko) * 2016-07-11 2018-01-22 한국해양과학기술원 해양 유래 진균인 페니실리움 스테키로부터 생산되는 항염증 활성을 가지는 탄자와익산 유도체

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102321545A (zh) * 2011-10-21 2012-01-18 福建农林大学 一株产雷公藤甲素的内生真菌
CN105899668A (zh) * 2013-11-11 2016-08-24 巴斯夫欧洲公司 抗真菌青霉属菌株,其杀真菌extrolite,及其用途
KR20180007053A (ko) * 2016-07-11 2018-01-22 한국해양과학기술원 해양 유래 진균인 페니실리움 스테키로부터 생산되는 항염증 활성을 가지는 탄자와익산 유도체

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
安嘉然: "内生真菌与宿主雷公藤互作对甲素生成的影响", 优秀硕士学位论文数据库 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107858296B (zh) 一株解磷、解钾和降解纤维素的黑曲霉及其菌剂的制备与应用
EP2489725A1 (en) Antagonistic bacteria for preventing and treating bacterial wilt disease of continuously planted tobacco and microorganism organic fertilizer thereof
CN105462872A (zh) 一种复合微生态制剂及其制备方法
CN111500489B (zh) 一株凝结芽孢杆菌及其在茶叶种植上的应用
CN111944716B (zh) 一种烟草育苗专用复合微生物菌剂及其制备方法和应用
CN110616156B (zh) 哈茨木霉固态发酵培养基、哈茨木霉分生孢子以及包括该分生孢子的生物制剂及其应用
CN110157624B (zh) 一种基于自动化种曲机的淡紫拟青霉规模化生产方法
CN103484421A (zh) 一种液体发酵中试生产粉红粘帚霉厚垣孢子的方法
WO2016150152A1 (zh) 一种凝结芽胞杆菌菌悬液的制备方法
CN101558766B (zh) 防治烟草土传真菌病害的木霉固体颗粒剂及其制备方法
CN111235039B (zh) 一种用于培养高毒力金龟子绿僵菌的培养基及其制剂和应用
CN109355197B (zh) 用于促进盐碱地苜蓿生长的促生菌及其微生物有机肥料
CN109749940B (zh) 一种真菌菌剂的制备方法及其产品和应用
CN103555593B (zh) 黑曲霉菌株及其孢子粉的制备方法
CN114480222B (zh) 一株克里本类芽孢杆菌航天突变体及其应用
CN115651846A (zh) 一种木霉菌剂、生物有机肥及其制备方法及应用
CN114107070B (zh) 一种印度梨形孢菌剂及其制备方法
CN1225172C (zh) 一种大批量生产生物除草剂的方法
CN114891646A (zh) 一种雷公藤专用促生菌剂及其制备方法和应用
CN109628345B (zh) 一种防治多肉植物褐腐病复合菌剂及其制备方法和应用
CN111575194A (zh) 一种对秸秆降解的混合菌及其应用
CN114145313B (zh) 一种防治重茬病害的复合微生态制剂及其制备方法和应用
CN110747133B (zh) 一株头孢被孢霉、包括头孢被孢霉的菌剂及其制备方法和应用
CN116491366B (zh) 一种减少重金属离子富集的灵芝栽培方法
CN114907981B (zh) 一种菠萝泛菌固态菌剂的保存方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20220812