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CN114685653B - 抗新冠病毒受体结合区域表位中和抗体及其应用 - Google Patents

抗新冠病毒受体结合区域表位中和抗体及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了抗新冠病毒受体结合区域(RBD)不同表位的中和抗体及其应用。具体地本发明公开了多株针对新冠病毒SARS‑CoV‑2的RBD蛋白的全人单克隆抗体、编码抗体和抗体片段的核酸序列及其制备方法。体外实验证实本发明的多株抗体能够识别SARS‑2‑CoV RBD蛋白的不同表位，通过协同作用阻断SARS‑CoV‑2RBD与其受体宿主受体血管紧张素转化酶2(ACE2)的相互作用，从而有效地预防及控制SARS‑CoV‑2感染，并减少耐药的发生。

Description

抗新冠病毒受体结合区域表位中和抗体及其应用
技术领域
本发明涉及医药领域，具体地涉及抗新冠病毒受体结合区域不同表位的中和抗体及其 应用。
背景技术
于2019年底爆发的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情已成为全球性的公共卫生大 事件，给全球的人们生命健康和经济造成了极大的冲击。针对这样一种具有较高的传染性 和致病性的突发病毒，开发有效的防治手段刻不容缓。单克隆抗体临床干预在预防和治疗 病毒感染方面具有较好的疗效，临床上已成功用于预防呼吸道合胞病毒的感染。
在预防措施方面，单克隆抗体有可能单独使用或作为疫苗的补充。半衰期延长的强效 单抗可安全可靠地保护长达12个月，可作为疫苗替代品，用于由于免疫缺陷对疫苗响应 差的个体。与疫苗不同的是，单克隆抗体在暴发和暴露后的预防环境中具有潜在的效用。基于单克隆抗体在预防方面的广泛潜在用途，适用于已知接触或基于职业或住房状况的持 续风险而暴露于SARS-CoV-2的高危人群，以及高风险的COVID-19并发症患者。
在早期感染环境中，最有可能从单克隆抗体治疗中获益的人包括老年人、免疫功能低 下者和其他最易发生COVID-19并发症的人。这种治疗的目的是减少住院、重症监护病房 的入院和死亡，以及缩短疾病的持续时间。晚期疾病的大部分病理学可能是由于宿主的免疫反应加上潜在的共病条件的恶化需要抗病毒单抗和治疗免疫失调的药物组成的联合治 疗。
SARS-CoV-2与2003年流行的非典型性肺炎病毒(SARS-CoV)在病毒复制和侵染 宿主细胞特性有很多相似性。两种病毒表面刺突(Spike，S)蛋白同源性高达76％，均与 血管紧张素转换酶2(ACE2)受体结合，是病毒感染宿主细胞的重要环节。冠状病毒的 S蛋白由S1和S2两个功能域组成，分别介导病毒与宿主细胞ACE2的结合及膜融合过程。 绝大部分冠状病毒的中和抗体都是靶向S1亚基或S1亚基上的受体结合域RBD。已有研 究报道揭示与SARS相比，SARS-CoV-2RBD某些关键的抗原表位已经发生改变，意味着基于SARS的开发的疫苗或者中和抗体极有可能失去了对新冠的保护活性。
因此，寻找靶向人类冠状病毒的有效中和抗体对预防和治疗SARS-CoV-2在内的冠状病毒意义重大。
发明内容
本发明提供了一种能够预防及控制新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染的全人单克隆 抗体。
本发明的第一方面，提供了一种抗体的重链可变区，所述的重链可变区包括以下三个 互补决定区CDR：
(iv)分别如SEQ ID NO.:25-35所示的CDR1，
(v)分别如SEQ ID NO.:36-45所示的CDR2，和
(vi)分别如SEQ ID NO.:46-57所示的CDR3。
在另一优选例中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺 失、修饰和/或取代至少一个(如1-3个，较佳地1-2个，更佳地1个)氨基酸并能够保留SARS-CoV-2的RBD结合亲和力的衍生序列。
在另一优选例中，所述重链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区。
在另一优选例中，所述重链可变区分别具有SEQ ID NO.:1-12所示的氨基酸序列。
本发明的第二方面，提供了一种抗体的重链，所述的重链具有如本发明第一方面所述 的重链可变区。
在另一优选例中，所述的抗体的重链还包括重链恒定区。
在另一优选例中，所述的重链恒定区为人源、鼠源或兔源的。
本发明的第三方面，提供了一种抗体的轻链可变区，所述的轻链可变区包括以下三个 互补决定区CDR：
(iv)分别如SEQ ID NO.:58-68所示的CDR1’，
(v)氨基酸序列为EGT、AAS、DAS、EGS、EVS、或GAS的CDR2’，和
(vi)分别如SEQ ID NO.:69-80所示的CDR3’。
在另一优选例中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺 失、修饰和/或取代至少一个(如1-3个，较佳地1-2个，更佳地1个)氨基酸并能够保留SARS-CoV-2的RBD结合亲和力的衍生序列。
在另一优选例中，所述轻链可变区还包括人源的FR区或鼠源的FR区。
在另一优选例中，所述轻链可变区分别具有SEQ ID NO.:13-24所示的氨基酸序列。
本发明的第四方面，提供了一种抗体的轻链，所述的轻链具有如本发明第三方面所述 的轻链可变区。
在另一优选例中，所述的抗体的轻链还包括轻链恒定区。
在另一优选例中，所述的轻链恒定区为人源、鼠源或兔源的。
本发明的第五方面，提供了一种抗体，所述抗体具有：
(1)如本发明第一方面所述的重链可变区；和/或
(2)如本发明第三方面所述的轻链可变区；
或者，所述抗体具有：如本发明第二方面所述的重链；和/或如本发明第四方面所述 的轻链。
在另一优选例中，所述的抗体为特异性抗SARS-CoV-2的抗体，较佳地为特异性抗SARS-CoV-2RBD蛋白的抗体。
在另一优选例中，所述抗体选自：动物源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、或其组合。
在另一优选例中，所述的抗体为双链抗体、或单链抗体。
在另一优选例中，所述的抗体为单克隆抗体、或多克隆抗体。
在另一优选例中，所述的抗体是部分或全人源化的单克隆抗体。
在另一优选例中，所述的抗体为药物偶联物形式。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO.:1所示；并且所述的抗 体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.:13所示。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO.:2所示；并且所述的抗 体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.:14所示。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO.:3所示；并且所述的抗 体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.:15所示。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO.:4所示；并且所述的抗 体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.:16所示。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO.:5所示；并且所述的抗 体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.:17所示。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO.:6所示；并且所述的抗 体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.:18所示。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO.:7所示；并且所述的抗 体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.:19所示。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO.:8所示；并且所述的抗 体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.:20所示。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO.:9所示；并且所述的抗 体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.:21所示。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO.:10所示；并且所述的抗体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.:22所示。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO.:11所示；并且所述的抗体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.:23所示。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO.:12所示；并且所述的抗体的轻链可变区序列如SEQ ID NO.:24所示。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区包含如SEQ ID NO.:25所示的CDR1，如SEQ ID NO.:36所示的CDR2和如SEQ ID NO.:46；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:58 所示的CDR1’，氨基酸序列为EGT的CDR2’和如SEQ ID NO.:69所示的CDR3’。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区包含如SEQ ID NO.:26所示的CDR1，如SEQ ID NO.:37所示的CDR2和如SEQ ID NO.:47；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:59 所示的CDR1’，氨基酸序列为AAS的CDR2’和如SEQ ID NO.:70所示的CDR3’。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区包含如SEQ ID NO.:27所示的CDR1，如SEQ ID NO.:38所示的CDR2和如SEQ ID NO.:48；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:60 所示的CDR1’，氨基酸序列为DAS的CDR2’和如SEQ ID NO.:71所示的CDR3’。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区包含如SEQ ID NO.:28所示的CDR1，如SEQ ID NO.:39所示的CDR2和如SEQ ID NO.:49；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:61 所示的CDR1’，氨基酸序列为EGS的CDR2’和如SEQ ID NO.:72所示的CDR3’。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区包含如SEQ ID NO.:30所示的CDR1，如SEQ ID NO.:41所示的CDR2和如SEQ ID NO.:51；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:63 所示的CDR1’，氨基酸序列为AAS的CDR2’和如SEQ ID NO.:74所示的CDR3’。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区包含如SEQ ID NO.:31所示的CDR1，如SEQ ID NO.:41所示的CDR2和如SEQ ID NO.:52；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:64 所示的CDR1’，氨基酸序列为GAS的CDR2’和如SEQ ID NO.:75所示的CDR3’。
本发明的第六方面，提供了一种重组蛋白，所述的重组蛋白具有：
(i)如本发明第一方面所述的重链可变区、如本发明第二方面所述的重链、如本发明 第三方面所述的轻链可变区、如本发明第四方面所述的轻链、或本发明第五方面所述的抗 体；以及
(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。
在另一优选例中，所述的标签序列包括6His标签、GGGS序列、FLAG标签。
在另一优选例中，所述的重组蛋白(或多肽)包括融合蛋白。
在另一优选例中，所述的重组蛋白为单体、二聚体、或多聚体。
在另一优选例中，所述的重组蛋白特异性结合SARS-CoV-2RBD蛋白。
本发明的第七方面，提供了一种CAR构建物，所述的CAR构建物的抗原结合区域 的scFv段为特异性结合于SARS-CoV-2受体结合区域，并且所述scFv具有如本发明第 一方面所述的重链可变区和如本发明第三方面所述的轻链可变区。
本发明的第八方面，提供了一种重组的免疫细胞，所述的免疫细胞表达外源的如本发 明第七方面所述的CAR构建物。
在另一优选例中，所述的免疫细胞选自下组：NK细胞、T细胞。
在另一优选例中，所述的免疫细胞来自人或非人哺乳动物(如鼠)。
本发明的第九方面，提供了一种抗体药物偶联物，所述的抗体药物偶联物含有：
(a)抗体部分，所述抗体部分选自下组：如本发明第一方面所述的重链可变区、如本 发明第二方面所述的重链、如本发明第三方面所述的轻链可变区、如本发明第四方面所述 的轻链、或如本发明第五方面所述的抗体、或其组合；和
(b)与所述抗体部分偶联的偶联部分，所述偶联部分选自下组：可检测标记物、药物、 毒素、细胞因子、放射性核素、酶、或其组合。
在另一优选例中，所述偶联物选自：荧光或发光标记物、放射性标记物、MRI(磁共振成像)或CT(电子计算机X射线断层扫描技术)造影剂、或能够产生可检测产物的酶、放 射性核素、生物毒素、细胞因子(如IL-2等)、抗体、抗体Fc片段、抗体scFv片段、金纳 米颗粒/纳米棒、病毒颗粒、脂质体、纳米磁粒、前药激活酶(例如，DT-心肌黄酶(DTD) 或联苯基水解酶-样蛋白质(BPHL))、化疗剂(例如，顺铂)或任何形式的纳米颗粒等。
在另一优选例中，所述的抗体部分与所述的偶联部分通过化学键或接头进行偶联。
本发明的第十方面，提供了一种活性成分的用途，所述活性成分选自下组：如本发明 第一方面所述的重链可变区、如本发明第二方面所述的重链、如本发明第三方面所述的轻 链可变区、如本发明第四方面所述的轻链、或本发明第五方面所述的抗体、如本发明第六方面所述的重组蛋白、或其组合，所述活性成分用于制备药剂、试剂、检测板或试剂盒。
在另一优选例中，所述试剂、检测板或试剂盒用于检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)。
在另一优选例中，所述药剂用于治疗或预防新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染。
在另一优选例中，所述的试剂包括芯片、包被抗体的免疫微粒。
本发明的第十一方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物含有：
(i)活性成分，所述活性成分选自下组：如本发明第一方面所述的重链可变区、如本 发明第二方面所述的重链、如本发明第三方面所述的轻链可变区、如本发明第四方面所述 的轻链、或本发明第五方面所述的抗体、如本发明第六方面所述的重组蛋白、如本发明第八方面所述的免疫细胞、如本发明第九方面所述的抗体药物偶联物、或其组合；以及
(ii)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的药物组合物为液态制剂。
在另一优选例中，所述的药物组合物为注射剂。
在另一优选例中，所述的药物组合物用于预防和/或治疗新型冠状病毒(SARS-CoV-2) 感染。
本发明的第十二方面，提供了一种多核苷酸，所述的多核苷酸编码选自下组的多肽：
(1)如本发明第一方面所述的重链可变区、如本发明第二方面所述的重链、如本发明 第三方面所述的轻链可变区、如本发明第四方面所述的轻链、或本发明第五方面所述的抗 体；或
(2)如本发明第六方面所述的重组蛋白；
(3)如本发明第七方面所述的CAR构建物。
在另一优选例中，所述的多核苷酸具有SEQ ID NO.:81-92和/或SEQ ID NO.:93-104 所示的序列。
本发明的第十三方面，提供了一种载体，所述的载体含有如本发明第十二方面所述的 多核苷酸。
在另一优选例中，所述的载体包括：细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒、或其他载体。
本发明的第十四方面，提供了一种遗传工程化的宿主细胞，所述的宿主细胞含有如本 发明第十三方面所述的载体或基因组中整合有如本发明第十二方面所述的多核苷酸。
本发明的第十五方面，提供了一种检测样品中新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的方法， 所述方法包括步骤：
(1)将样品与本发明的第五方面所述的抗体接触；
(2)检测是否形成抗原-抗体复合物，其中形成复合物就表示样品中存在 SARS-CoV-2。
在另一优选例中，所述检测为非治疗非诊断目的。
本发明还提供了一种检测样品中SARS-CoV-2RBD蛋白的方法，所述方法包括步骤：
(1)将样品与本发明的第五方面所述的抗体接触；
(2)检测是否形成抗原-抗体复合物，其中形成复合物就表示样品中存在SARS-CoV-2 RBD蛋白。
在另一优选例中，所述检测为非治疗非诊断目的。
本发明的第十六方面，提供了一种检测板，所述的检测板包括：基片(支撑板)和测试 条，所述的测试条含有如本发明第五方面所述的抗体或如本发明第九方面所述的免疫偶联 物。
本发明的第十七方面，提供了一种试剂盒，所述试剂盒中包括：
(1)第一容器，所述第一容器中含有如本发明第五方面所述的抗体；和/或
(2)第二容器，所述第二容器中含有抗如本发明第五方面所述的抗体的二抗；
或者，所述试剂盒含有如本发明第十六方面所述的检测板。
本发明的第十八方面，提供了一种重组多肽的制备方法，所述方法包括：
(a)在适合表达的条件下，培养如本发明第十四方面所述的宿主细胞；
(b)从培养物中分离出重组多肽，所述的重组多肽是如本发明第五方面所述的抗体或 如本发明第六方面所述的重组蛋白。
本发明的第十九方面，提供了一种治疗新型冠状病毒感染的方法，所述方法包括：给 需要的对象施用如本发明第五方面所述的抗体、所述抗体的抗体-药物偶联物、或表达所 述抗体的CAR-T细胞、或其组合。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描 述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此 不再一一累述。
附图说明
图1显示了ELISA验证12株抗体与SARS-CoV-2的结合活性。
图2显示了ELISA验证12株抗体阻断RBD与ACE2的能力。
图3显示了假病毒实验验证12株抗体对SARS-CoV-2假病毒的中和活性。
图4显示了RBD特异性抗体对SARS-CoV-2真病毒的微中和活性。
图5显示了OCTET RED 96仪器检测6个抗体对RBD的亲和力。
图6显示了ELISA表位竞争法验证12株抗体的表位识别情况。
具体实施方式
本发明人通过广泛而深入的研究，首次意外地研发了一种针对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的全人源单克隆抗体制备方法和多株编码抗体和抗体片段的核酸及氨基 酸序列。体外假病毒和真病毒中和实验能均能证明这类抗体能有效地中和假病毒和真病毒感染的宿主细胞，而且是通过阻断SARS-CoV-2受体结合区域(RBD)与其受体宿主受体血管紧张素转化酶2(ACE2)的相互作用而发挥中和作用，并且本发明的多株抗体靶 向RBD的不同区域，具有协同作用。在此基础上，完成了本发明。
术语
为了更容易理解本发明，以下具体定义了某些技术和科学术语。除非在本文中另有明 确定义，本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本发明所属领域的一般技术人员通常 理解的含义。在描述本发明之前，应当理解本发明不限于所述的具体方法和实验条件，因为这类方法和条件可以变动。还应当理解本文所用的术语其目的仅在于描述具体实施方 案，并且不意图是限制性的，本发明的范围将仅由所附的权利要求书限制。
除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本发明所属领域的普 通技术人员通常理解的相同含义。如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约” 意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101 和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
本发明所用氨基酸三字母代码和单字母代码如J.biol.chem,243,p3558(1968)中所述。
如本文所用，术语“治疗”指给予患者内用或外用治疗剂，包含本发明的针对冠状病毒 RBD蛋白的单克隆抗体及其组合物，所述患者具有一种或多种疾病症状，而已知所述治 疗剂对这些症状具有治疗作用。通常，以有效缓解一种或多种疾病症状的治疗剂的量(治 疗有效量)给予患者。
如本文所用，术语“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或情况可以发生但不是 必须发生。例如，“任选包含1-3个抗体重链可变区”是指特定序列的抗体重链可变区可以 有但不是必须有，可以是1个、2个或3个。
本发明所述的“序列同一性”表示当具有适当的替换、插入或缺失等突变的情况下最佳 比对和比较时，两个核酸或两个氨基酸序列之间的同一性程度。本发明中所述的序列和其 具有同一性的序列之间的序列同一性可以至少为85％、90％或95％，优选至少为95％。非限制性实施例包括85％,86％,87％,88％,89％,90％,91％,92％,93％,94％,95％,96％, 97％,98％,99％,100％。
新型冠状病毒(SARS-CoV-2)
2019新型冠状病毒，2020年1月12日，世界卫生组织正式将其命名为2019-nCoV。
抗体
如本文所用，术语“抗体”或“免疫球蛋白”是有相同结构特征的约150000道尔顿的异 四聚糖蛋白，其由两个相同的轻链(L)和两个相同的重链(H)组成。每条轻链通过一个共价 二硫键与重链相连，而不同免疫球蛋白同种型的重链间的二硫键数目不同。每条重链和轻 链也有规则间隔的链内二硫键。每条重链的一端有可变区(VH)，其后是多个恒定区。每条轻链的一端有可变区(VL)，另一端有恒定区；轻链的恒定区与重链的第一个恒定区相对，轻链的可变区与重链的可变区相对。特殊的氨基酸残基在轻链和重链的可变区之间形成界面。
如本文所用，术语“可变”表示抗体中可变区的某些部分在序列上有所不同，它形成了 各种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性并不均匀地分布在整个抗体可 变区中。它集中于轻链和重链可变区中称为互补决定区(CDR)或超变区中的三个片段中。 可变区中较保守的部分称为构架区(FR)。天然重链和轻链的可变区中各自包含四个FR区， 它们大致上呈β-折叠构型，由形成连接环的三个CDR相连，在某些情况下可形成部分折叠结构。每条链中的CDR通过FR区紧密地靠在一起并与另一链的CDR一起形成了抗 体的抗原结合部位(参见Kabat等,NIH Publ.No.91-3242,卷I，647-669页(1991))。恒定区不直接参与抗体与抗原的结合，但是它们表现出不同的效应功能，例如参与抗体的依赖 于抗体的细胞毒性。
脊椎动物抗体(免疫球蛋白)的“轻链”可根据其恒定区的氨基酸序列归为明显不同的 两类(称为κ和λ)中的一类。根据其重链恒定区的氨基酸序列，免疫球蛋白可以分为不同的 种类。主要有5类免疫球蛋白：IgA,IgD,IgE,IgG和IgM，其中一些还可进一步分成亚类(同种型)，如IgG1,IgG2,IgG3,IgG4,IgA和IgA2。对应于不同类免疫球蛋白的重链恒定 区分别称为α、δ、ε、γ、和μ。不同类免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是本领域人员 所熟知的。
如本文所用，术语“单克隆抗体(单抗)”指从一类基本均一的群体获得的抗体，即该群 体中包含的单个抗体是相同的，除少数可能存在的天然发生的突变外。单克隆抗体高特异 性地针对单个抗原位点。而且，与常规多克隆抗体制剂(通常是具有针对不同决定簇的不 同抗体)不同，各单克隆抗体是针对抗原上的单个决定簇。除了它们的特异性外，单克隆 抗体的好处还在于它们是通过杂交瘤培养来合成的，不会被其它免疫球蛋白污染。修饰语“单克隆”表示了抗体的特性，是从基本均一的抗体群中获得的，这不应被解释成需要用任 何特殊方法来生产抗体。
本发明还包括具有所述的SARS-CoV-2RBD蛋白单克隆抗体的相应氨基酸序列的单克隆抗体、具有所述的SARS-CoV-2RBD蛋白单克隆抗体可变区链的单克隆抗体，以及 具有这些链的其他蛋白质或蛋白质偶联物及融合表达产物。具体地，本发明包括具有含超变区(互补决定区，CDR)的轻链和重链的任何蛋白质或蛋白质偶联物及融合表达产物(即 免疫偶联物及融合表达产物)，只要该超变区与本发明的轻链和重链的超变区相同或至少 90％同源性，较佳地至少95％同源性。
如本领域技术人员所知，免疫偶联物及融合表达产物包括：药物、毒素、细胞因子(cytokine)、放射性核素、酶和其他诊断或治疗分子与所述的SARS-CoV-2RBD蛋白抗单 克隆抗体或其片段结合的而形成的偶联物。本发明还包括与所述的抗SARS-CoV-2RBD 蛋白单克隆抗体或其片段结合的细胞表面标记物或抗原。
术语“抗体的抗原结合片段”(或简称“抗体片段”)是指抗体的保持特异性结合抗原的能 力的一个或多个片段。己显示可利用全长抗体的片段来进行抗体的抗原结合功能。术语“抗 体的抗原结合片段”中包含的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab’)2片段，包含通过较链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VH和VL 结构域组成的Fv片段。Fv抗体含有抗体重链可变区、轻链可变区，但没有恒定区，并具 有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般的，Fv抗体还包含VH和VL结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。
本发明不仅包括完整的单克隆抗体，还包括具有免疫活性的抗体片段，如Fab或(Fab’)2片段；抗体重链；抗体轻链。
术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗原上免疫球蛋白或抗体特异性结合的部位。表位通 常以独特的空间构象包括至少3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14或15个连续或非连续的氨 基酸。
术语“特异性结合”、“选择性结合”、“选择性地结合”和“特异性地结合”是指抗体对预 先确定的抗原上的表位的结合。通常，抗体以大约小于10-7M，例如大约小于10-8M、10- 9M 或l0-10M或更小的亲和力(KD)结合。
如本文所用，术语“抗原决定簇”指抗原上不连续的，由本发明抗体或抗原结合片段识 别的三维空间位点。
本发明不仅包括完整的抗体，还包括具有免疫活性的抗体的片段或抗体与其他序列形 成的融合蛋白。因此，本发明还包括所述抗体的片段、衍生物和类似物。
在本发明中，抗体包括用本领域技术人员熟知技术所制备的鼠的、嵌合的、人源化的 或者全人的抗体。重组抗体，例如嵌合的和人源化的单克隆抗体，包括人的和非人的部分， 可以采用本领域熟知的DNA重组技术制备。术语“鼠源抗体”在本发明中为根据本领域知识和技能制备的针对SARS-CoV-2RBD蛋白的单克隆抗体。术语“嵌合抗体(chimericantibody)”是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。术语“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-grafted antibody)，是指将鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体构架序列中产生的抗体。人源化抗体可以克服嵌合抗体由于携带大量鼠蛋白成分，从而诱导的异源性反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。为避免免疫原性下降的同时，引起的活性下降，可对所述的人抗体可变区框架序列进行最少反向突变或回复突变，以保持活性。
在本发明中，抗体可以是单特异性、双特异性、三特异性、或者更多的多重特异性。
如本文所用，术语“重链可变区”与“VH”可互换使用。
如本文所用，术语“可变区”与“互补决定区(complementarity determiningregion,CDR)” 可互换使用。
术语“CDR”是指抗体的可变结构域内主要促成抗原结合的6个高变区之一。所述6个CDR的最常用的定义之一由Kabat E.A等人，(1991)Sequences of proteins ofimmunological interest.NIH Publication91-3242)提供。
在本发明的一个优选的实施方式中，所述抗体的重链可变区包括如下表A所示 的三个互补决定区CDR：
表A
VH CDR1 CDR2 CDR3
25-C9 GYSSTSYW(SEQ ID NO.:25) IDPSDSYT(SEQ ID NO.:36) ASSEVGYSSLREFDP(SEQ ID NO.:46)
25-G7 GGSISSSSYY(SEQ ID NO.:26) MFYSGST(SEQ ID NO.:37) ARMLGMIDV(SEQ ID NO.:47)
25-B5 GGSLSSGRYY(SEQ ID NO.:27) MYYSGS(SEQ ID NO.:38) AREPLVVPAALPPYGMDV(SEQ ID NO.:48)
28-8L GYTFSSFG(SEQ ID NO.:28) ISPYNGNT(SEQ ID NO.:39) ARDWELLGRFDY(SEQ ID NO.:49)
25-F8 GYTFTNYY(SEQ ID NO.:29) INPSGAS(SEQ ID NO.:40) ASWGGNIPLYYYYGMDV(SEQ ID NO.:50)
24-11K SGITVSSNY(SEQ ID NO.:30) VIYSGGST(SEQ ID NO.:41) ARDLSELGIDY(SEQ ID NO.:51)
26-40K SEFTVSRNY(SEQ ID NO.:31) VIYSGGST(SEQ ID NO.:41) ARDWGEYYFDY(SEQ ID NO.:52)
25-C4 SGLTVSSNY(SEQ ID NO.:32) VIYAGGST(SEQ ID NO.:42) ARESYGMDV(SEQ ID NO.:53)
25-C5 SGFIVSSNY(SEQ ID NO.:33) LIYSGGST(SEQ ID NO.:43) ARTYGDYYFDY(SEQ ID NO.:54)
25-C8 SGFTVSSNY(SEQ ID NO.:34) IIYSGGST(SEQ ID NO.:44) ARDRGGYCDY(SEQ ID NO.:55)
24-2K SGFTVSSNY(SEQ ID NO.:34) VIYSGGS(SEQ ID NO.:45) ARTFGELYIDY(SEQ ID NO.:56)
26-45K SGLIVSSNY(SEQ ID NO.:35) VIYSGGS(SEQ ID NO.:45) ARDLGPYGMDV(SEQ ID NO.:57)。
在另一优选例中，所述重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.:1-12所示，其中下划线标注的依次为重链可变区CDR1，CDR2，CDR3的氨基酸序列。
在另一优选例中，所述重链可变区的核酸编码序列分别如SEQ ID NO.:81 (25-C9)、82(25-G7)、83(25-B5)、84(28-8L)、85(25-F8)、86(24-11K)、 87(26-40K)、88(25-C4)、89(25-C5)、90(25-C8)、91(24-2K)、92(26-45K) 所示。
在本发明的一个优选的实施方式中，所述抗体的重链包括上述重链可变区和重链恒定区，所述重链恒定区可以为鼠源或人源。
如本文所用，术语“轻链可变区”与“VL”可互换使用。
在本发明的一个优选的实施方式中，根据本发明的抗体的轻链可变区，具有选 自下表B的互补决定区CDR：
表B
VL CDR1’ CDR2’ CDR3’
25-C9 SSNIGSYNL(SEQ ID NO.:58) EGT CSYAGTSTFESYV(SEQ ID NO.:69)
25-G7 QGISNS(SEQ ID NO.:59) AAS QQYYSTPPLT(SEQ ID NO.:70)
25-B5 QSVSSY(SEQ ID NO.:60) DAS QQRSNWPPVT(SEQ ID NO.:71)
28-8L SSDVGNYNL(SEQ ID NO.:61) EGS CSYAGSSTWV(SEQ ID NO.:72)
25-F8 SSDVGGYNY(SEQ ID NO.:62) EVS TSYAGSNIWV(SEQ ID NO.:73)
24-11K SQGISSY(SEQ ID NO.:63) AAS QQLNSYLYT(SEQ ID NO.:74)
26-40K QTVSSSY(SEQ ID NO.:64) GAS QQYGSSPRT(SEQ ID NO.:75)
25-C4 QSISSSY(SEQ ID NO.:65) GAS QQYGSLYT(SEQ ID NO.:76)
25-C5 QGISNY(SEQ ID NO.:66) AAS QKDYSAPPGFT(SEQ ID NO.:77)
25-C8 QGFGSW(SEQ ID NO.:67) AAS QQTNSFPGYT(SEQ ID NO.:78)
24-2K QGISSY(SEQ ID NO.:68) AAS QHLRG(SEQ ID NO.:79)
26-45K QGISSY(SEQ ID NO.:68) AAS QQLNSYPT(SEQ ID NO.:80)。
在另一优选例中，所述轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.:13-24所示，其中双下划线标注的依次为轻链可变区CDR1’，CDR2’，CDR3’的氨基酸序列。
在另一优选例中，所述轻链可变区的核酸编码序列分别如SEQ ID NO.:93 (25-C9)、94(25-G7)、95(25-B5)、96(28-8L)、97(25-F8)、98(24-11K)、 99(26-40K)、100(25-C4)、101(25-C5)、102(25-C8)、103(24-2K)、104 (26-45K)所示。
在本发明的一个优选的实施方式中，所述抗体的轻链包括上述轻链可变区和轻链恒定区，所述轻链恒定区可以为鼠源或人源。
本发明抗体的功能是由此抗体轻链和重链可变区基因特异性基因序列决定，可以特 异性的结合SARS-CoV-2的RBD蛋白，能够阻止SARS-CoV-2侵染易感细胞。利用此 抗体可变区基因或互补决定区(CDR)基因，可在利用原核和真核细胞的任何表达系统中改造和生产不同形式的基因工程抗体。
在本发明中，术语“本发明抗体”、“本发明蛋白”、或“本发明多肽”可互换使用， 都指特异性结合SARS-CoV-2RBD蛋白的抗体，例如具有重链可变区(如SEQ ID NO.: 81-92所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列)和/或轻链可变区(如SEQ ID NO.:93-104所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列)的蛋白或多肽。它们可含有或不含起始甲硫氨 酸。
在另一优选例中，所述的抗体为抗SARS-CoV-2RBD蛋白的鼠或人鼠嵌合单克 隆抗体，它的重链恒定区和/或轻链恒定区可以是人源化的重链恒定区或轻链恒定区。 更优选地，所述的人源化的重链恒定区或轻链恒定区为人IgG1、IgG2等的重链恒定 区或轻链恒定区。
一般，抗体的抗原结合特性可由位于重链和轻链可变区的3个特定的区域来描述，称为可变区域(CDR)，将该段间隔成4个框架区域(FR)，4个FR的氨基酸序列相 对比较保守，不直接参与结合反应。这些CDR形成环状结构，通过其间的FR形成 的β折叠在空间结构上相互靠近，重链上的CDR和相应轻链上的CDR构成了抗体的 抗原结合位点。可以通过比较同类型的抗体的氨基酸序列来确定是哪些氨基酸构成了 FR或CDR区域。
本发明抗体的重链和/或轻链的可变区特别令人感兴趣，因为它们中至少部分涉及结合抗原。因此，本发明包括那些具有带CDR的单克隆抗体轻链和重链可变区的 分子，只要其CDR与此处鉴定的CDR具有90％以上(较佳地95％以上，最佳地98％以上)的同源性。
本发明不仅包括完整的单克隆抗体，还包括具有免疫活性的抗体的片段或抗体与其他序列形成的融合蛋白。因此，本发明还包括所述抗体的片段、衍生物和类似物。
如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明抗体相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或 多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取 代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残 基中具有取代基团的多肽，或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化 合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列 而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列，或与 6His标签形成的融合蛋白)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领 域熟练技术人员公知的范围。
本发明抗体指具有SARS-CoV-2RBD蛋白结合活性的、包括上述CDR区的多肽。 该术语还包括具有与本发明抗体相同功能的、包含上述CDR区的多肽的变异形式。 这些变异形式包括(但并不限于)：一个或多个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末 端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基 酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白 质的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋 白质的功能。该术语还包括本发明抗体的活性片段和活性衍生物。
该多肽的变异形式包括：同源序列、保守性变异体、等位变异体、天然突变体、 诱导突变体、在高或低的严紧度条件下能与本发明抗体的编码DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用抗本发明抗体的抗血清获得的多肽或蛋白。
本发明还提供了其他多肽，如包含人抗体或其片段的融合蛋白。除了几乎全长 的多肽外，本发明还包括了本发明抗体的片段。通常，该片段具有本发明抗体的至少 约50个连续氨基酸，较佳地至少约60个连续氨基酸，更佳地至少约80个连续氨基 酸，最佳地至少约100个连续氨基酸。
在本发明中，“本发明抗体的保守性变异体”指与本发明抗体的氨基酸序列相比，有至多10个，较佳地至多8个，更佳地至多5个，最佳地至多3个氨基酸被性质相 似或相近的氨基酸所替换而形成多肽。这些保守性变异多肽最好根据表C进行氨基酸 替换而产生。
表C
本发明还提供了编码上述抗体或其片段或其融合蛋白的多核苷酸分子。本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。编 码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO.:81-104所示的编码区序列相同或者是 简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有与本发明的多 肽相同的氨基酸序列，但与SEQ IDNO.:81-104所示的编码区序列有差别的核酸序列。
编码本发明的成熟多肽的多核苷酸包括：只编码成熟多肽的编码序列；成熟多 肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。
术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。
本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50％，较佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所 述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中，“严格条件”是指：(1)在较低离子强度 和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC,0.1％SDS,60℃；或(2)杂交时加有变性剂,如 50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在90％以上，更好是95％以上时才发生杂交。并且，可杂交的多核苷酸编码的 多肽与SEQ ID NO.:1-12和/或SEQ ID NO.:13-24所示的成熟多肽有相同的生物学功 能和活性。
本发明的抗体的核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人 工合成的方法获得。一种可行的方法是用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片 段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片 段。此外，还可将重链的编码序列和表达标签(如6His)融合在一起，形成融合蛋白。
一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是 将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有 关序列。本发明所涉及的生物分子(核酸、蛋白等)包括以分离的形式存在的生物分子。
目前，已经可以完全通过化学合成来得到编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中已知的各种现有的DNA分子(或 如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。
本发明还涉及包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体。 这些载体可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。
宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或 是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙 门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS7、293 细胞的动物细胞等。
用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为 原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl2法处理，所用的步骤在本领域众所周知。另一种方法是使用MgCl2。如果需要，转化 也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法：磷酸 钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔,脂质体包装等。
获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所 用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的 条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换 或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。
在上面的方法中的重组多肽可在细胞内、或在细胞膜上表达、或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的 蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规 的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分 子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液 相层析技术及这些方法的结合。
本发明的抗体可以单独使用，也可与可检测标记物(为诊断目的)、治疗剂、PK(蛋白激酶)修饰部分或任何以上这些物质的组合结合或偶联。
用于诊断目的的可检测标记物包括但不限于：荧光或发光标记物、放射性标记物、MRI(磁共振成像)或CT(电子计算机X射线断层扫描技术)造影剂、或能够产生可 检测产物的酶。
可偶联的治疗剂包括但不限于：胰岛素、IL-2、干扰素、降钙素、GHRH肽、肠 肽类似物、白蛋白、抗体片段、细胞因子、和激素。
此外还可与本发明抗体结合或偶联的治疗剂包括但不限于：1.放射性核素；2. 生物毒；3.细胞因子如IL-2等；4.金纳米颗粒/纳米棒；5.病毒颗粒；6.脂质体； 7.纳米磁粒；8.前药激活酶；10.化疗剂(例如，顺铂)或任何形式的纳米颗粒等。
本发明还提供了一种组合物。在优选例中，所述的组合物是药物组合物，它含 有上述的抗体或其活性片段或其融合蛋白，以及药学上可接受的载体。通常，可将这 些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为 5-8，较佳地pH约为6-8，尽管pH值可随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有 所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)： 口服、呼吸道、瘤内、腹膜内、静脉内、或局部给药。
本发明的药物组合物可直接用于结合新型冠状病毒RBD蛋白分子，因而可用于 延长药物的半衰期，此外，还可同时使用其他治疗剂。
本发明的药物组合物含有安全有效量(如0.001-99wt％,较佳地0.01-90wt％，更佳 地0.1-80wt％)的本发明上述的单克隆抗体(或其偶联物)以及药学上可接受的载体或赋 形剂。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其 组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。药物组合物 如针剂、溶液宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1 微克/千克体重-约10毫克/千克体重。此外，本发明的多肽还可与其他治疗剂一起使 用。
使用药物组合物时，是将安全有效量的免疫偶联物施用于哺乳动物，其中该安 全有效量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约8毫克/千克体 重，较佳地该剂量是约10微克/千克体重-约1毫克/千克体重。当然，具体剂量还应 考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
检测用途和试剂盒
本发明的抗体可用于检测应用，例如用于检测样本，从而提供诊断信息。
本发明中，所采用的样本(样品)包括细胞、组织样本和活检标本。本发明使用的术语 “活检”应包括本领域技术人员已知的所有种类的活检。因此本发明中使用的活检可以包括 例如通过内窥镜方法或器官的穿刺或针刺活检制备的组织样本。
本发明中使用的样本包括固定的或保存的细胞或组织样本。
本发明还提供了一种指含有本发明的抗体(或其片段)的试剂盒，在本发明的一个优选 例中，所述的试剂盒还包括容器、使用说明书、缓冲剂等。在优选例中，本发明的抗体可 以固定于检测板。
本发明的主要优点
(1)本发明的全人单克隆抗体能够特异性识别并结合冠状病毒SARS-2-CoV RBD蛋白，有效地阻断RBD与ACE2的结合，对冠状病毒SARS-2-CoV具有很高的中和活性。
(2)本发明的全人单克隆抗体能够识别冠状病毒SARS-2-CoV RBD蛋白的不同表位，靶向两个不同表位的单抗组合具有协同效应，使用靶向不同表位的抗体组合可以 减少耐药的发生。
(4)本发明分离到的不同的抗体可以组成鸡尾酒疗法，增强抗病毒效果并能解决因为 病毒不断突变而形成的耐药问题，同时也可以作为基础科研和临床上的诊断工具。
(4)本发明是全人单克隆抗体，不含鼠源部分，对人体来说具有更低的免疫原性和更 高的安全性，可以避免人抗鼠等其它物种来源的抗体介导免疫排斥反应。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件， 例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和 份数是重量百分比和重量份数。
本发明实施例或测试例中未注明具体条件的实验，通常按常规条件进行，或按照原料 /商品制造商建议的条件；未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
以下说明本发明能够中和冠状病毒RBD蛋白不同表位的全人单克隆抗体制备以及抗体特性分析过程。
实施例1单细胞RT-PCR法获得抗体基因以及抗体表达
1.1外周血单核细胞(PBMC)的获得
从健康的志愿者体内抽取外周血，采用常规Ficoll-Paque(厂家为-H(CEDARLANE)公司)密度梯度离心，得到107以上个外周血单核细胞(PBMC)。
Ficoll分离方法：
(1)收集血液，于50ml离心管(预含4％柠檬酸钠1ml)，收集全血20ml，颠倒混匀 8-10次。(即使柠檬酸钠终浓度为0.4％)；
(2)加等体积RPMI1640(含柠檬酸钠)，混匀；
(3)用15ml透明离心管，铺3ml淋巴细胞分离液，在其上小心加6ml血样。形成分 离界面(或4ml分离液加8ml血样)；
(4)室温离心800g，20min(2000rpm，20min)；
(5)小心吸取界面层细胞，转移至新管；
(6)加RPMI1640(含柠檬酸钠)，稀释减小液体密度。离心，800g/2000rpm，10min。
去上清；
(7)RPMI1640洗细胞2-3次，备用
1.2新冠病毒特异性记忆B细胞的获得
使用FITC-CD19/APC-IgG/BV421和SARA-CoV-2RBD蛋白为标志物，BDHorizonTMFixable Viability Stain 780去掉死细胞，经流式细胞仪获得特异性B细胞至96孔RT-PCR板，每孔一个细胞，获得SARA-CoV-2RBD蛋白特异性记忆B细胞。
(1)RBD蛋白由哺乳动物细胞CHO表达系统表达；参考Invitrogen ExpiCHO-STMExpression System手册；RBD蛋白序列参考nCoV-SH01(GenBank:MT121215.1)，在上海 捷瑞公司进行全基因合成。在上海捷瑞公司进行全基因合成，构建到invitrogen pcDNA3.1的表达载体上；
(2)RBD蛋白进行生物素(Biotin)标记：No-Weigh Sulfo-NHS-LC-Biotin(购自PIERCE， 参考PIERCE公司EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Biotin生物素标记Protocol)10mM试剂；另两 个标志物FITC-CD19和APC-IgG均购自BD Bioscience公司；SA Streptavidin PE和streptavidin BV 421(购自BD公司)用来检测生物素标记的SARA-CoV-2RBD蛋白；
(3)分选细胞的标记：PBMC细胞分组，实验组+对照组，按细胞数加入标志物，避光染色，进行标记，用PBS重悬后，使用40μm BD falcon滤膜过滤；
(4)特异性B细胞的分选：使用BD FACS Influx筛选，根据前向角和侧向角从PBMC中筛选到淋巴细胞，然后通过不同对照组的调节补偿，获得SARA-CoV-2RBD蛋白的特 异性记忆B细胞，将其分选到96孔板中进行RT-PCR(反转录PCR)，每孔一个细胞， 板置于干冰上。
1.3抗体基因获得及载体构建
将获得的单个记忆B细胞通过RT-PCR获得cDNA,然后通过nested-PCR获得抗 体基因可变区，跑琼脂糖核酸凝胶，将重轻链可以配对的胶块回收并测序。通过 IgBLAST网(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/igblast/)检索获得抗体基因序列。 接下来通过AgeI及SalI酶切位点，AgeI及BsiwI酶切位点，AgeI及XhoI酶切位点将抗体基因分别连接到相应的IgH，Igκ和Igλ表达载体上。全人抗体表达载体IgH， Igκ和Igλ(分别表达抗体heavy链、kappa链、lambda链)由Patrick Wilson实验室 馈赠，载体序列见NCBI GenBank:FJ475055、FJ475056和FJ517647。
1.4抗体表达和纯化
瞬时转染CHO细胞，进行全人抗体表达。转染前一天(第-1天)，分种 ExpiCHO-STM细胞，最终密度为3×106–4×106个活细胞/mL，使细胞过夜生长。次 日(第0天)，测定活细胞密度和存活率百分比。细胞密度应达到约7×106–10×106个活细胞/mL。存活率应为95–99％，方可继续转染。将细胞稀释至最终密度为6×106个活细胞/mL。使用预冷的试剂(4℃)配制Expi FectamineTMCHO/质粒DNA复合 物。室温孵育Expi FectamineTMCHO/质粒DNA复合物1–5分钟，然后将溶液慢慢 转移至CHO细胞培养瓶中，在添加过程中轻轻晃动培养瓶。将细胞置于轨道摇床上(37℃培养箱含8％CO2的湿化空气条件下)培养。培养7-11天，待细胞死亡一半 时即可收上清，开始纯化抗体。
使用Protein G Agarose 4FF填料(购自GE)纯化抗体。首先将收集的CHO细胞 悬液4000rpm,4℃离心30min，将收集的上清再用0.45um filter过滤，待纯化。取重 力型离心柱，加入Protein G Agarose 4FF填料，使用3倍柱体积的20％乙醇稳定填料， 之后用5倍柱体积的结合缓冲液平衡柱子，然后上样品，再用10倍柱体积的结合缓 冲液平衡柱子，最后用3倍柱体积的洗脱缓冲液洗脱柱子，向洗脱下来的抗体溶液中加入中和buffer使洗脱下来的样品pH达7.5左右。将抗体溶液在5L 1×PBS中透析 3次，即可将抗体浓缩保存至-80℃。
实验结果：
单细胞RT-PCR和Nested-PCR法获得匹配抗体重轻链可变区基因。琼脂糖割胶 回收并进行测序。将测序结果在http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast及 http://www.imgt.org/进行比对，获得抗体胚系基因信息和抗体重轻链基因高可变区信 息，并进行表达载体构建及后续表达纯化。最后，通过该技术，成功获得多株中和新冠病毒病毒的全人单克隆抗体。
本发明的全人抗体重链可变区氨基酸序列如下，其中使用下划线标注的依次为重链 氨基酸CDR1，CDR2，CDR3序列。
25-C9重链可变区氨基酸序列：
EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYSSTSYWISWVRQMPGKGLEWMGRIDPSDSYTNYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCASSEVGYSSLREFDPWG QGTLVTVSSAS(SEQ ID NO.:1)；
25-G7重链可变区氨基酸序列：
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWVGSMFYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMLGMIDVWGQGTLV TVSSAS(SEQ ID NO.:2)；
25-B5重链可变区氨基酸序列：
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSLSSGRYYWSWIRQPPGKGLEWIGYMYYSGSTNYNPSLKSRVTISLDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREPLVVPAALPPYGMDVWGQGTTVTVSSAS(SEQ ID NO.:3)；
28-8L重链可变区氨基酸序列：
QVQLVQSGPEVKKPGASVKVSCKASGYTFSSFGISWFRQAPGQGLQWMGWISPYNGNTKYAQKLQGRVTMTTHTSTTTAYTELRSLRSDDTAVYYCARDWELLGRFDYWG QGTLVTVSSAS(SEQ ID NO.:4)；
25-F8重链可变区氨基酸序列：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMHWVRQAPGQGLEWMGVINPSGASTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCASWGGNIPLYYYYGMDVWGQGTTVTVSSAS(SEQ ID NO.:5)；
24-11K重链可变区氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGITVSSNYMIWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTFYADSVKGRFTISRHNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDLSELGIDYWGQGTL VTVSSAS(SEQ ID NO.:6)；
26-40K重链可变区氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASEFTVSRNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTFYADSVKGRFTISRDNSKNMLYLQMDSLRAEDTAVYYCARDWGEYYFDYWGQG TLVTVSSAS(SEQ ID NO.:7)；
25-C4重链可变区氨基酸序列：
EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGLTVSSNYMNWVRQAPGKGLEWVSVIYAGGSTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAFYYCARESYGMDVWGQGTTV TVSSAS(SEQ ID NO.:8)；
25-C5重链可变区氨基酸序列：
EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFIVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSLIYSGGSTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTYGDYYFDYWGQGTL VTVSSAS(SEQ ID NO.:9)；
25-C8重链可变区氨基酸序列：
EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSIIYSGGSTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRVEDTAVYYCARDRGGYCDYWGQGTLV TVSSAS(SEQ ID NO.:10)；
24-2K重链可变区氨基酸序列：
EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTFGELYIDYWGQG TLVTVSSAS(SEQ ID NO.:11)；
26-45K重链可变区氨基酸序列：
EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGLIVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLGPYGMDVWGQG TTVTVSSAS(SEQ ID NO.:12)。
本发明的全人抗体轻链可变区氨基酸序列如下，其中使用下划线标注的依次为轻链 氨基酸CDR1’，CDR2’和CDR3’序列。
25-C9轻链可变区氨基酸序列：
QSALTQPPSVSASPGQSITISCTGTSSNIGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYEGTKR PSGVSTRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGTSTFESYVFGTGTKVTVL (SEQ ID NO.:13)；
25-G7轻链可变区氨基酸序列:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNSLAWYQQRPGKAPKLLLYAASTLES GVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQYYSTPPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO.:14)；
25-B5轻链可变区氨基酸序列:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRAT GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPVTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO.:15)；
28-8L轻链可变区氨基酸序列:
QSALTQPPSVSGSPGQSITISCTGTSSDVGNYNLVSWYQHHPGKAPELMIYEGSKR PSGVSNRFSASKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGSSTWVFGGGTKLTVL(SEQ ID NO.:16)；
25-F8轻链可变区氨基酸序列:
QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSK RPSGVPDRFSGSKAGNTASLTVSGLQAEDEADYYCTSYAGSNIWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.:17)；
24-11K轻链可变区氨基酸序列：
DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQS GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYLYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.: 18)；
26-40K轻链可变区氨基酸序列：
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQTVSSSYLAWYQQKHGQAPRLLIYGASSRA TGIPDRFSGSGSGTDFTLTISTLEPEDFAVYYCQQYGSSPRTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.: 19)；
25-C4轻链可变区氨基酸序列：
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSLYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.: 20)；
25-C5轻链可变区氨基酸序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKDYSAPPGFTFGPGTKVDIK(SEQ ID NO.:21)
25-C8轻链可变区氨基酸序列：
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGFGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQ SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQTNSFPGYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:22)；
24-2K轻链可变区氨基酸序列：
DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQS GVPSRFSGSGSGTEFTLTVSSLQPEDFATYYCQHLRGFGPGTKVDIK(SEQ ID NO.:23)；
26-45K轻链可变区氨基酸序列：
DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQS GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.: 24)。
实施例2抗体特性分析
实验方法：
(1)ELISA检测抗体结合抗原的活性
使用ELISA检测表达的抗体是否识别RBD蛋白。包被RBD蛋白ELISA板， 0.5μg/mL，每孔100μL，4℃过夜。次日PBST洗板3次。2％BSA封闭,每孔200 μL，37℃,2h。再次PBST洗板3次。RBD特异性抗体测试6个浓度，3倍梯度 稀释，2复孔，起始测试浓度为30μg/ml。上样，每孔100μL，37℃，2h。PBST洗 板3次。Goat Anti-Human IgG(Fc specific)-Peroxidaseantibody(sigma)，1:5000稀 释，每孔100μL，37℃，1h。PBST洗板3次。加底物TMB 100μL/孔显色， 若颜色较浅可37℃避光反应15min。加入2M H2SO4终止反应，每孔50μL。测定 OD450，并进行数据处理。
(2)受体阻断实验
包被5ug/ml的hACE2蛋白过夜；PBST洗板3次，2％BSA buffer封闭2h；不 同梯度稀释的抗体与150ng/ml的生物素化的SARS-CoV-2RBD蛋白孵育2h，不加 抗体作为对照；加入预包被hACE2的微孔板中，孵育2h,PBST洗版三次，SA-HRP 40稀释孵育30min；TMB底物显色，检测OD450读值。阳性对照组是不加block抗 体，但是加第二个检测抗体。
(3)ELISA表位竞争实验
96孔板包被0.5μg/ml重组SARS-CoV-2RBD蛋白，4℃冰箱过夜，50μg/ml的 阻断抗体加入微孔板中，37℃孵育2h，随后加入biotin标记的检测抗体，37℃孵育2h，PBST洗涤3次。二抗加入HRP标记的SA(1:200)，37℃孵育1h，洗涤3次， TMB显色，室温避光反应2min，1MHCl终止反应后，酶标仪测定样品在A450的吸 光值。
(4)BLI亲和力检测
本实验在生化细胞研究所的分子平台使用OCTET RED 96仪器完成。首先将 AHCsensor放到有PBS的96孔黑板中浸泡至少10min，加样不同RBD抗体，浓 度为20ug/ml；抗原设置浓度梯度，2倍梯度稀释，200nM-100nM-50nM-25nM-12.5 nM-6.25nM；将抗体抗原及再生buffer及PBS buffer加到另一块黑板中，置于仪器 上；设定程序，开始运行，程序为：baseline 120s→loading Ab→300s-baseline→ 240s-association→900s-disassociation→900s-regenaration→5s-baseline→ 5s-regenaration→5s-baseline→5s-regenaration→5s-baseline→5s；软件分析数据，计算 抗原抗体亲和力KD值。
(5)假病毒中和实验
全长SARS-2-CoV S蛋白质粒和pNL4-3的质粒共转染HEK293T细胞于10cm培 养皿中，6小时换液，48小时后收集上清液，使用完全培养基稀释。将抗体梯度稀释， 并与等体积的病毒混合，37℃下培养1h。将抗体和病毒混合物转移到稳定表达的 人ACE2的HEK293T细胞中。37℃下培养48小时。去掉上清，向细胞中加入裂解缓冲液，充分裂解。检测荧光素酶活性(Promega)。通过比较实验组的荧光素酶值 与仅病毒对照组的荧光素酶值来计算中和效率。计算公式如下：
抑制活性百分比(％)＝(病毒对照平均值-测试孔读值)/(病毒对照平均值- 细胞对照平均值)×100；
IC50值通过Prism软件计算。
(6)真病毒微中和实验
接种细胞：取处于对数生长期的Vero-E6细胞，接种到96孔板中，每孔100μl， 每孔细胞4×104个。
中和实验：供试品稀释：如表1所示，第1列(B-G行)加入10μg/ml预稀释 样品60μl，加入病毒稀释液60μl后抗体终浓度为5μg/ml)，其余孔加入依次3倍 稀释的样品60μl。第1行为细胞对照(Cell Control,CC)加入无血清培养基120μl， 第8行为病毒对照(VirusControl,VC)加入无血清培养基60μl。
表1.96孔板加样方法
病毒稀释：病毒储存液滴度为2.5×105TCID50/ml，取病毒储存液200μl，加 入25ml无血清培养基，充分混匀，将病毒稀释至100TCID50/50μl。
滴加病毒：垂直悬滴病毒(细胞对照除外)至96孔板内，加样体积60μl/孔， 最终病毒-抗体混合液120μl。
中和：将加好样的细胞培养板在震荡器上混匀，置于37℃培养箱，中和1小 时。中和结束后，吸去接种有细胞的培养板上清液，随后将病毒-血清混合液吸取100 μl/孔加入其中，放入37℃CO2培养箱中培养1小时，进行感染。病毒感染结束后， 吸去培养板上清液，空斑形成实验样品加入含有1％的甲基纤维素的维持培养基 (DMEM培养基含有2％FBS)，放入37℃CO2培养箱中培72-96小时。用倒置 显微镜于4天时观察并记录结果，弃去上清，空斑形成实验样品经甲醛固定后，结晶 紫染色空斑计数分析。对于测试100&抑制率，用倒置显微镜于2天时观察CPE并记 录结果。
实验结果：
2.1 ELISA验证分离抗体对新冠病毒RBD的结合活性
为了研究RBD特异性的抗体是否能结合SARS-2-CoV S蛋白的RBD区域，用ELISA 的方法验证重组表达抗体对SARS-CoV-2蛋白RBD的结合活性。结果如图1所示,有12 株抗体对SARS-CoV-2RBD蛋白有较高的结合活性。
2.2 RBD特异性的抗体有效阻断RBD与受体ACE2的结合
为了进一步确认RBD特异性的抗体是否有效阻断RBD与受体ACE2的结合， 在96微孔板上包被ACE2-FC重组蛋白，将不同梯度稀释的抗体与生物素化的RBD 蛋白孵育后加入到预包被的ACE2-FC的微孔板上。用HRP偶联的链霉亲和素进行检 测。结果如图2所示，12株RBD特异性的抗体均能有效地抑制RBD与ACE2的结 合，并呈现剂量依赖效应。
2.3假病毒实验确认RBD特异性抗体中和活性
为了进一步确认12株RBD特异性抗体的功能，包装了SARS-CoV-2的假病毒， 在稳转人ACE2的293T细胞上进行SARS-CoV-2假病毒中和实验，实验表明，12株 抗体以不同能力中和假病毒，半数有效抑制浓度IC50在1-50ng/ml之间(图3)。
2.4真病毒实验验证RBD特异性抗体的中和活性
为了进一步确认25-C9，26-40K等抗体对SARS-CoV-2真病毒中和活性，在BSL-3 实验室进行SARS-CoV-2真病毒中和活性检测。结果表明，检测的6株抗体可以有效 抑制SARS-CoV-2真病毒，IC50在26-150ng/ml之间(图4)。
2.5 OCTET RED 96仪器检测RBD特异性抗体对RBD蛋白的亲和力
为了研究25-C9，24-11K等抗体对RBD的亲和力，使用OCTET RED 96仪器检测6 个抗体对RBD的亲和力。结果显示6株抗体对SARS-CoV-2RBD呈现较高的亲和力， 在10-8-10-10M之间(图5)。
2.6表位竞争实验
通过ELISA表位竞争实验，将12株中和抗体分成两个独立的表位。其中26-40K，24-11K，25-C4，25-C8，26-45K，24-2K，25-G7，28-8L及25-B5相互之间存在竞争，提 示这些抗体识别的表位有重叠或者存在空间上的位阻，此外，25-C9与以上的抗体不存在 表位竞争，说明25-C9与第一类表位空间距离较远，属于独立的表位。25-F8抗体与26-40K， 24-11K，25-C4，25-C8，26-45K，24-2K，28-8L之间不存在表位竞争关系，但是与25-C9， 25-B5，25-G7存在竞争关系，提示25-F8与这三株抗体存在部分表位重叠(如图6所示)。 使用靶向不同表位的抗体组合可以减少耐药的发生。同时，靶向两个不同表位的单抗组合的另一优势是它们往往有协同效应。本发明分离到的不同的抗体可以组成鸡尾酒疗法，增 强抗病毒效果并能解决因为病毒不断突变而形成的耐药问题。
发明人利用单细胞RT-PCR技术从新冠感染的康复志愿者的外周血PBMC中分离到多株中和抗体，这些抗体经过了体细胞高频突变的过程，对于新冠的RBD蛋白具有较高 的亲和力，均能有效地阻断RBD与ACE2的结合。体外实验证实验证实多株抗体均能有效的抑制SARS-CoV-2假病毒和真病毒感染宿主细胞，表现最佳的抗体IC50在纳克级别。 此外。这些抗体的表位具有多样性，不同抗体可以组合，应对因为SARS-CoV-2突变较 快形成的耐药问题，本发明的靶向新冠的全人中和抗体对预防和治疗SARS-CoV-2具有 潜在的应用价值。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用 作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以 对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范 围。
序列表
<110> 中国科学院分子细胞科学卓越创新中心
<120> 抗新冠病毒受体结合区域表位中和抗体及其应用
<130> P2020-2619
<160> 104
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 124
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Ser Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe
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65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
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Ala Ser Ser Glu Val Gly Tyr Ser Ser Leu Arg Glu Phe Asp Pro Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
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<210> 2
<211> 119
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 2
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Val Gly Ser Met Phe Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Met Leu Gly Met Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115
<210> 3
<211> 128
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 3
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Leu Ser Ser Gly
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Arg Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Met Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Glu Pro Leu Val Val Pro Ala Ala Leu Pro Pro Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 4
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 4
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Gln Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu
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Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr His Thr Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Thr Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Trp Glu Leu Leu Gly Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120
<210> 5
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 5
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Ser Gly Ala Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
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Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Trp Gly Gly Asn Ile Pro Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 6
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg His Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Leu Ser Glu Leu Gly Ile Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Phe Thr Val Ser Arg Asn
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Met Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Trp Gly Glu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115
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<211> 117
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Tyr Ala Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
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100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser
115
<210> 9
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 9
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Ser Asn
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Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Leu Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
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Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ile Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
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Arg Asp Arg Gly Gly Tyr Cys Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn
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Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
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Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
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<210> 12
<211> 119
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 12
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Leu Gly Pro Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115
<210> 13
<211> 113
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 13
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln
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Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser Tyr
20 25 30
Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Gly Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Thr Arg Phe
50 55 60
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Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Thr
85 90 95
Ser Thr Phe Glu Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val
100 105 110
Leu
<210> 14
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 14
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<210> 15
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 15
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
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<210> 16
<211> 110
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 16
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
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Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Asn Tyr
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<210> 17
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 17
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
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Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
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Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Thr Ser Tyr Ala Gly Ser
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<210> 18
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 18
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Leu Tyr
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 19
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 19
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys His Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Thr Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 20
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 20
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 21
<211> 109
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 21
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Asp Tyr Ser Ala Pro Pro
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Gly Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
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<210> 22
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Phe Gly Ser Trp
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Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<210> 23
<211> 103
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 23
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
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Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Val Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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<210> 24
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 24
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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65 70 75 80
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Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 25
Gly Tyr Ser Ser Thr Ser Tyr Trp
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<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 26
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<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 27
Gly Gly Ser Leu Ser Ser Gly Arg Tyr Tyr
1 5 10
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<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 28
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Phe Gly
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 29
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Tyr
1 5
<210> 30
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 30
Ser Gly Ile Thr Val Ser Ser Asn Tyr
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<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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1 5
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<213> 智人（Homo sapiens）
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1 5
<210> 34
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 34
Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn Tyr
1 5
<210> 35
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 35
Ser Gly Leu Ile Val Ser Ser Asn Tyr
1 5
<210> 36
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 36
Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr
1 5
<210> 37
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 37
Met Phe Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 38
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 38
Met Tyr Tyr Ser Gly Ser
1 5
<210> 39
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 39
Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Asn Thr
1 5
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 40
Ile Asn Pro Ser Gly Ala Ser
1 5
<210> 41
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 41
Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 42
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 42
Val Ile Tyr Ala Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 43
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 43
Leu Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 44
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 44
Ile Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 45
Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 46
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 46
Ala Ser Ser Glu Val Gly Tyr Ser Ser Leu Arg Glu Phe Asp Pro
1 5 10 15
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 47
Ala Arg Met Leu Gly Met Ile Asp Val
1 5
<210> 48
<211> 18
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 48
Ala Arg Glu Pro Leu Val Val Pro Ala Ala Leu Pro Pro Tyr Gly Met
1 5 10 15
Asp Val
<210> 49
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 49
Ala Arg Asp Trp Glu Leu Leu Gly Arg Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 50
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 50
Ala Ser Trp Gly Gly Asn Ile Pro Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
1 5 10 15
Val
<210> 51
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 51
Ala Arg Asp Leu Ser Glu Leu Gly Ile Asp Tyr
1 5 10
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 52
Ala Arg Asp Trp Gly Glu Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 53
Ala Arg Glu Ser Tyr Gly Met Asp Val
1 5
<210> 54
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 54
Ala Arg Thr Tyr Gly Asp Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 55
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 55
Ala Arg Asp Arg Gly Gly Tyr Cys Asp Tyr
1 5 10
<210> 56
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 56
Ala Arg Thr Phe Gly Glu Leu Tyr Ile Asp Tyr
1 5 10
<210> 57
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 57
Ala Arg Asp Leu Gly Pro Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 58
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 58
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Tyr Asn Leu
1 5
<210> 59
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 59
Gln Gly Ile Ser Asn Ser
1 5
<210> 60
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 60
Gln Ser Val Ser Ser Tyr
1 5
<210> 61
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 61
Ser Ser Asp Val Gly Asn Tyr Asn Leu
1 5
<210> 62
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 62
Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr
1 5
<210> 63
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 63
Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 64
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 64
Gln Thr Val Ser Ser Ser Tyr
1 5
<210> 65
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 65
Gln Ser Ile Ser Ser Ser Tyr
1 5
<210> 66
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 66
Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 67
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 67
Gln Gly Phe Gly Ser Trp
1 5
<210> 68
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 68
Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 69
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 69
Cys Ser Tyr Ala Gly Thr Ser Thr Phe Glu Ser Tyr Val
1 5 10
<210> 70
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 70
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Leu Thr
1 5 10
<210> 71
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 71
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Val Thr
1 5 10
<210> 72
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 72
Cys Ser Tyr Ala Gly Ser Ser Thr Trp Val
1 5 10
<210> 73
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 73
Thr Ser Tyr Ala Gly Ser Asn Ile Trp Val
1 5 10
<210> 74
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 74
Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Leu Tyr Thr
1 5
<210> 75
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 75
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Arg Thr
1 5
<210> 76
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 76
Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Tyr Thr
1 5
<210> 77
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 77
Gln Lys Asp Tyr Ser Ala Pro Pro Gly Phe Thr
1 5 10
<210> 78
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 78
Gln Gln Thr Asn Ser Phe Pro Gly Tyr Thr
1 5 10
<210> 79
<211> 5
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 79
Gln His Leu Arg Gly
1 5
<210> 80
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 80
Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Thr
1 5
<210> 81
<211> 366
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 81
gaggtgcagc tggtgcagtc tggggcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaggatc 60
tcctgtaagg gttcaggata cagctctacc agctactgga tcagctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggagg attgatccta gtgactctta taccaactac 180
agtccgtcct tccaaggcca cgtcaccatc tcagctgaca agtccatcag tactgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gagttcggag 300
gtcgggtata gtagtttgcg cgagttcgac ccctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360
tcctca 366
<210> 82
<211> 351
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 82
cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt actactgggg ctggatccgc 120
cagcccccag ggaaggggct ggagtgggtt gggagtatgt tttacagtgg gagcacttac 180
tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atctccgtag acacgtcgaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgagctccgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg tgcgagaatg 300
ttgggtatga tagatgtttg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351
<210> 83
<211> 378
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 83
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccctcagc agtggtcgtt actactggag ctggatccgg 120
cagcccccag ggaagggact ggaatggatt gggtatatgt attacagtgg gagcaccaac 180
tacaacccct ccctcaagag tcgagtcacc atatcactag acacgtccaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgagctctgt gaccgctgcg gacacggccg tgtattactg tgcgagagag 300
cccctcgtag taccagctgc acttcctccc tacggtatgg acgtctgggg ccaagggacc 360
acggtcaccg tctcctca 378
<210> 84
<211> 357
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 84
caggttcagc tggtgcagtc tggacctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggtta cacctttagc agctttggta tcagttggtt tcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttcagtg gatgggatgg atcagccctt acaatggtaa cacaaagtat 180
gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacacaca catccacgac cacagcctac 240
acggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagattgg 300
gagctgttgg ggagatttga ctactggggc caggggaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 85
<211> 372
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 85
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata caccttcacc aactactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggagta atcaacccta gtggagctag cacaagctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagttggggg 300
gggaatatcc ctctctacta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 86
<211> 351
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 86
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctgggat caccgtcagt agcaattaca tgatctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggtagcac attttacgca 180
gactccgtga agggccgatt caccatctcc agacacaatt ccaagaacac gctgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagaga tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agatctaagc 300
gagctaggga ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351
<210> 87
<211> 351
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 87
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctgaatt caccgtcagt agaaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggtagcac attctacgca 180
gactccgtga agggcagatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacat gctgtatctt 240
caaatggaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agattggggg 300
gagtactact ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351
<210> 88
<211> 345
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 88
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttgatccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctgggct caccgtcagt agcaactaca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatgccg gtggtagcac attttacgca 180
gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccttttatt actgtgcgag agaaagttac 300
ggtatggacg tctggggcca agggaccacg gtcaccgtct cctca 345
<210> 89
<211> 351
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 89
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttgatccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctgggtt catcgtcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcactt atttatagcg gtggtagcac attttacgca 180
gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac cctgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aacgtacggt 300
gactactact ttgactattg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351
<210> 90
<211> 348
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 90
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttgatccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaatt atttatagcg gtggtagcac attctacgca 180
gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac cctgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagt cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agatcgaggt 300
ggttactgtg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca 348
<210> 91
<211> 351
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 91
gaggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggtagcac attctacgca 180
gactccgtga agggcagatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag gacgttcggg 300
gagttgtaca ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351
<210> 92
<211> 351
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 92
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttgatccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctgggtt aatcgtcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggtagcac attctacgca 180
gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agatctagga 300
ccatacggta tggacgtctg gggccaaggg accacggtca ccgtctcctc a 351
<210> 93
<211> 339
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 93
cagtctgccc tgactcagcc tccctcagtg tctgcgtctc ctggacagtc gatcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag taatattggg agttataacc ttgtctcctg gtaccaacag 120
cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgagggca ctaagcggcc ctcaggggtt 180
tctactcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgacaat ctctgggctc 240
caggctgagg acgaggctga ttattactgc tgctcatatg caggtactag cactttcgag 300
tcttatgtct tcggaactgg gaccaaggtc accgtccta 339
<210> 94
<211> 324
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 94
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcgagtca gggcattagc aattctttag cctggtatca gcagagacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gctctatgct gcatccacat tggaaagtgg ggtcccgtcc 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacggat tacactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tattatagta cccctccgct cactttcggc 300
ggagggacca aggtggaaat caaa 324
<210> 95
<211> 322
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 95
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcctccggt cactttcggc 300
ggagggacca aggtggaaat ca 322
<210> 96
<211> 330
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 96
cagtctgccc tgactcagcc tccctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgatgttggg aattataacc ttgtctcctg gtaccaacat 120
cacccaggca aagcccccga actcatgatt tatgagggca gtaagcggcc ctcaggggtt 180
tctaatcgct tctctgcctc caagtctggc aacacggcct ccctgacaat ctctgggctc 240
caggctgagg acgaggctga ttattactgc tgctcatatg caggtagtag cacttgggtg 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330
<210> 97
<211> 330
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 97
cagtctgccc tgactcagcc tccctccgcg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 120
cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgaggtca gtaagcggcc ctcaggggtc 180
cctgatcgct tctctggctc caaggctggc aacacggcct ccctgaccgt ctctgggctc 240
caggctgagg atgaggctga ctattactgc acctcatatg caggcagcaa catctgggtt 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330
<210> 98
<211> 321
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 98
gacatccaga tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag cttaatagtt acctttacac ttttggccag 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 99
<211> 324
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 99
gaaattgtgt tgacgcagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gactgttagc agcagctact tagcctggta tcagcagaaa 120
catggccagg ctcccaggct cctcatctat ggcgcatcca gcagggctac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cacactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag caatatggta gctcacctcg gacgttcggc 300
caagggacca aggtggaaat caaa 324
<210> 100
<211> 321
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 100
gaaattgtgt tgacgcagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtattagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
ccggaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gcttgtacac ttttggccag 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 101
<211> 327
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 101
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcgagtca gggcattagt aattatttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagctc ccaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct 180
cggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaag gattacagtg cccctcctgg gttcactttc 300
ggccctggga ccaaagtgga tatcaaa 327
<210> 102
<211> 324
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 102
gacatccaga tgacccagtc tccatcttct gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtttcggc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ctatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag actaacagtt tcccggggta cacttttggc 300
caggggacca aggtggaaat caaa 324
<210> 103
<211> 309
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 103
gacatccaga tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120
gggaaagccc ctaagttcct gatctatgct gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca cagtcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ctgagaggct tcggccctgg gaccaaagtg 300
gatatcaaa 309
<210> 104
<211> 318
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 104
gacatccaga tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaaccc 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag cttaatagtt accctacctt tggccagggg 300
accaaggtgg agatcaaa 318

Claims (11)

1.一种特异性抗SARS-CoV-2的抗体，其特征在于，所述抗体具有选自下组的重链可变区和轻链可变区：
重链可变区包含如SEQ ID NO.:25所示的CDR1，如SEQ ID NO.:36所示的CDR2和如SEQID NO.:46所示的CDR3；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:58所示的CDR1’，氨基酸序列为EGT的CDR2’和如SEQ ID NO.:69所示的CDR3’；
重链可变区包含如SEQ ID NO.:26所示的CDR1，如SEQ ID NO.:37所示的CDR2和如SEQID NO.:47所示的CDR3；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:59所示的CDR1’，氨基酸序列为AAS的CDR2’和如SEQ ID NO.:70所示的CDR3’；
重链可变区包含如SEQ ID NO.:27所示的CDR1，如SEQ ID NO.:38所示的CDR2和如SEQID NO.:48所示的CDR3；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:60所示的CDR1’，氨基酸序列为DAS的CDR2’和如SEQ ID NO.:71所示的CDR3’；
重链可变区包含如SEQ ID NO.:28所示的CDR1，如SEQ ID NO.:39所示的CDR2和如SEQID NO.:49所示的CDR3；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:61所示的CDR1’，氨基酸序列为EGS的CDR2’和如SEQ ID NO.:72所示的CDR3’；
重链可变区包含如SEQ ID NO.:30所示的CDR1，如SEQ ID NO.:41所示的CDR2和如SEQID NO.:51所示的CDR3；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:63所示的CDR1’，氨基酸序列为AAS的CDR2’和如SEQ ID NO.:74所示的CDR3’；
重链可变区包含如SEQ ID NO.:31所示的CDR1，如SEQ ID NO.:41所示的CDR2和如SEQID NO.:52所示的CDR3；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:64所示的CDR1’，氨基酸序列为GAS的CDR2’和如SEQ ID NO.:75所示的CDR3’；
重链可变区包含如SEQ ID NO.:29所示的CDR1，如SEQ ID NO.:40所示的CDR2和如SEQID NO.:50所示的CDR3；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:62所示的CDR1’，氨基酸序列为EVS的CDR2’和如SEQ ID NO.:73所示的CDR3’；
重链可变区包含如SEQ ID NO.:32所示的CDR1，如SEQ ID NO.:42所示的CDR2和如SEQID NO.:53所示的CDR3；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:65所示的CDR1’，氨基酸序列为GAS的CDR2’和如SEQ ID NO.:76所示的CDR3’；
重链可变区包含如SEQ ID NO.:33所示的CDR1，如SEQ ID NO.:43所示的CDR2和如SEQID NO.:54所示的CDR3；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:66所示的CDR1’，氨基酸序列为AAS的CDR2’和如SEQ ID NO.:77所示的CDR3’；
重链可变区包含如SEQ ID NO.:34所示的CDR1，如SEQ ID NO.:44所示的CDR2和如SEQID NO.:55所示的CDR3；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:67所示的CDR1’，氨基酸序列为AAS的CDR2’和如SEQ ID NO.:78所示的CDR3’；
重链可变区包含如SEQ ID NO.:34所示的CDR1，如SEQ ID NO.:45所示的CDR2和如SEQID NO.:56所示的CDR3；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:68所示的CDR1’，氨基酸序列为AAS的CDR2’和如SEQ ID NO.:79所示的CDR3’；或
重链可变区包含如SEQ ID NO.:35所示的CDR1，如SEQ ID NO.:45所示的CDR2和如SEQID NO.:57所示的CDR3；以及轻链可变区包含如SEQ ID NO.:68所示的CDR1’，氨基酸序列为AAS的CDR2’和如SEQ ID NO.:80所示的CDR3’。
2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区和轻链可变区选自下组：
重链可变区的序列如SEQ ID NO.:1所示，轻链可变区的序列如SEQ ID NO.:13所示；
重链可变区的序列如SEQ ID NO.:2所示，轻链可变区的序列如SEQ ID NO.:14所示；
重链可变区的序列如SEQ ID NO.:3所示，轻链可变区的序列如SEQ ID NO.:15所示；
重链可变区的序列如SEQ ID NO.:4所示，轻链可变区的序列如SEQ ID NO.:16所示；
重链可变区的序列如SEQ ID NO.:6所示，轻链可变区的序列如SEQ ID NO.:18所示；
重链可变区的序列如SEQ ID NO.:7所示，轻链可变区的序列如SEQ ID NO.:19所示；
重链可变区的序列如SEQ ID NO.:5所示，轻链可变区的序列如SEQ ID NO.:17所示；
重链可变区的序列如SEQ ID NO.:8所示，轻链可变区的序列如SEQ ID NO.:20所示；
重链可变区的序列如SEQ ID NO.:9所示，轻链可变区的序列如SEQ ID NO.:21所示；
重链可变区的序列如SEQ ID NO.:10所示，轻链可变区的序列如SEQ ID NO.:22所示；
重链可变区的序列如SEQ ID NO.:11所示，轻链可变区的序列如SEQ ID NO.:23所示；或
重链可变区的序列如SEQ ID NO.:12所示，轻链可变区的序列如SEQ ID NO.:24所示。
3. 如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述的抗体为特异性抗SARS-CoV-2 RBD蛋白的抗体。
4.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体为全人源单克隆抗体。
5. 一种重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白具有：
(i) 如权利要求1-4任一项所述的抗体；以及
(ii) 任选的协助表达和/或纯化的标签序列。
6.一种CAR构建物，其特征在于，所述的CAR构建物的抗原结合区域的scFv段为特异性结合于SARS-CoV-2的RBD蛋白，并且所述scFv具有如权利要求1所述抗体的重链可变区和轻链可变区。
7.一种抗体药物偶联物，其特征在于，所述的抗体药物偶联物含有：
(a) 抗体部分，所述抗体部分包括如权利要求1-4任一项所述的抗体、或其组合；和
(b) 与所述抗体部分偶联的偶联部分，所述偶联部分选自下组：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、酶、或其组合。
8.一种活性成分的用途，所述活性成分选自下组：如权利要求1-4任一项所述的抗体、如权利要求5所述的重组蛋白、或其组合，其特征在于，所述活性成分用于制备药剂、试剂、检测板或试剂盒。
9. 一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物含有：
(i) 活性成分，所述活性成分选自下组：如权利要求1-4任一项所述的抗体、如权利要求5所述的重组蛋白、如权利要求7所述的抗体药物偶联物、或其组合；以及
(ii) 药学上可接受的载体。
10. 一种多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸编码选自下组的多肽：
(1) 权利要求1-4任一项所述的抗体；或
(2) 如权利要求5所述的重组蛋白；
(3) 如权利要求6所述的CAR构建物。
11.一种体外非治疗非诊断目的检测样品中新型冠状病毒（SARS-CoV-2)的方法，所述方法包括步骤：
(1) 将样品与如权利要求1-4任一项所述的抗体接触；
(2) 检测是否形成抗原-抗体复合物，其中形成复合物就表示样品中存在SARS-CoV-2。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2193802A2 (en) * 2005-02-08 2010-06-09 The New York Blood Center, Inc. Neutralizing monoclonal antibodies against severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus
CN111732655A (zh) * 2020-07-01 2020-10-02 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体及应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111303279B (zh) * 2020-03-17 2022-02-15 北京凯因科技股份有限公司 一种针对新型冠状病毒的单域抗体及其应用
CN112010966B (zh) * 2020-05-15 2021-03-19 潍坊医学院 一种针对新冠病毒棘突蛋白非rbd区的单克隆抗体及其应用
CN111690059B (zh) * 2020-06-19 2022-03-08 武汉生物制品研究所有限责任公司 一种抗SARS-CoV-2的单克隆抗体1D7

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2193802A2 (en) * 2005-02-08 2010-06-09 The New York Blood Center, Inc. Neutralizing monoclonal antibodies against severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus
CN111732655A (zh) * 2020-07-01 2020-10-02 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体及应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
徐铮昊 ; 王诚 ; 余润芷 ; 丁翠玲 ; 何燕华 ; 江亮亮 ; 彭浩然 ; 吴俊杰 ; 赵平 ; 戚中田 ; .严重急性呼吸综合征冠状病毒2 DNA疫苗与重组亚单位疫苗在小鼠中诱导中和抗体的效力分析.第二军医大学学报.2020,(05),474-480. *

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