CN114641311A

CN114641311A - 抗-tnfr2抗体及其使用方法

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Publication number: CN114641311A
Application number: CN202080074333.2A
Authority: CN
Inventors: E·L·菲尔伯特; S·克里希南; C·谭; R·巴贾特; X·杨; R·阿尔瓦拉多
Original assignee: Apexigen Inc
Current assignee: Apexigen Inc
Priority date: 2019-09-17
Filing date: 2020-09-11
Publication date: 2022-06-17
Also published as: IL291299A; JP2022548159A; CA3154643A1; WO2021055253A2; AU2020348224A1; EP4031177A4; MX2022003249A; US20220372154A1; TW202124415A; BR112022004986A2; WO2021055253A3; EP4031177A2; KR20220071214A

Abstract

提供了抗肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)抗体和有关的组合物，它们可以用在多种治疗或诊断方法中的任一种中，包括肿瘤学疾病、炎症性和/或自身免疫性疾病以及其它疾病的治疗或诊断。

Description

抗-TNFR2抗体及其使用方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年9月17日提交的美国临时申请号62/901,364、2020年3月5日提交的美国临时申请号62/985,509、2020年7月2日提交的美国临时申请号63/047,824和2020年7月29日提交的美国临时申请号63/058,016在美国法典第35篇第119(e)条下的权益，它们中的每一篇通过引用整体并入。

关于序列表的声明

与本申请相关的序列表以文本格式代替纸质副本提供，且特此通过引用并入说明书中。包含序列表的文本文件的名称是APEX-025/04WO_ST25.txt。文本文件是约265KB，创建于2020年9月11日，并正在通过EFS-Web以电子方式提交。

背景

技术领域

本公开内容涉及抗肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)抗体和有关的组合物，其可以用于多种治疗或诊断方法中的任一种中，包括肿瘤学疾病、炎症性和/或自身免疫性疾病的治疗或诊断，以及其它。

背景技术

TNF-α是一种在生理学和病理学状况中都起关键作用的重要炎症介质。TNF-α主要由巨噬细胞和单核细胞产生，并且可以作为26kDa的膜结合三聚体(mTNF-α)和17kDa的可溶性三聚体(sTNF-α)存在。TNF-α通过两种受体TNFR1(TNFRSF1A；55kDa)和TNFR2(TNFRSF1B；75kDa)发挥其作用，所述受体具有相似的细胞外结构域，含有4个重复的富含半胱氨酸的基序，但其也具有激活不同信号传递途径的不同细胞内结构域。

TNFR1是一种普遍表达的蛋白，并且可以被mTNF-α和sTNF-α接合，以根据环境发出细胞存活/炎症或细胞凋亡的信号。相反，TNFR2表达受激活状态调节，并且主要限于T细胞和免疫抑制性髓样细胞，也被称作骨髓衍生的抑制细胞(MDSC)，其包括单核和粒细胞髓样细胞。单核髓样细胞包括终末分化的巨噬细胞和树突细胞(DC)，以及在炎症条件下在组织中分化为巨噬细胞和DC的单核细胞。粒细胞髓样细胞包括终末分化的多形核嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和肥大细胞的群体。TNFR2只能通过mTNF-α完全接合。与TNFR1不同，TNFR2在其细胞质中不含有死亡结构域；相反，它可以通过TRAF和NFkB途径发出信号来调节细胞存活和免疫抑制。mTNF也在受体接合后在表达它的细胞中表现出反向信号传递。两种TNFR都可以被TACE酶切割并转化为可溶形式，其通过从细胞中除去受体或充当sTNF-α的诱饵可以起作用使细胞对TNF-α脱敏。

TNFR2在免疫系统的调节中起着至关重要的作用，很可能通过它对表达高水平TNFR2的调节性T细胞(Treg)的影响。在小鼠中，TNFR2的缺失通过降低Treg的功能而加重自身免疫性疾病和结肠炎。在人类中，已知的TNFRSF1B的多态性导致降低的TNFR2表达或降低的与TNFα结合，并阻碍调节性T细胞中TNFR2介导的信号传递。这些多态性与自身免疫性疾病(包括系统性红斑狼疮(SLE)、克罗恩氏病和溃疡性结肠炎)强烈相关。在小鼠和人类中，TNFR2在高度抑制性Treg上表达，包括在肿瘤中发现的那些，但在效应T细胞上不强烈表达。TNFR2表达与多种肿瘤类型中的抑制性肿瘤微环境强烈相关。此外，在卵巢癌中证明了TNFR2+Treg可以削弱TME内的T效应物应答(Govindaraj C)。小鼠模型为TNFR2在阻碍对癌症的免疫应答中的作用提供了进一步的证据。此外，已在超过25种肿瘤类型(包括肾癌、结肠癌和卵巢癌)中鉴定出TNFR2。功能获得性TNFR2突变发生在塞扎里综合征患者中，所述患者患有难以治疗的CTCL的罕见形式。

因而，本领域中仍然需要有效地抑制或以其它方式拮抗TNFR2的治疗性抗体，以及治疗癌症和炎性疾病的相关方法。

发明内容

本公开内容涉及特异性地结合肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)的抗体及其抗原结合片段和它们的使用方法。一个方面提供了结合TNFR2(包括人TNFR2)的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：

包含分别在SEQ ID NO:1-3中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的重链可变(VH)区域；和包含分别在SEQ ID NO:4-6中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的轻链可变(VL)区域；

包含分别在SEQ ID NO:7-9中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:10-12中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；

包含分别在SEQ ID NO:13-15中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:16-18中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；

包含分别在SEQ ID NO:19-21中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:22-24中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；

包含分别在SEQ ID NO:25-27中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:28-30中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；

包含分别在SEQ ID NO:31-33中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:34-36中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；

包含分别在SEQ ID NO:37-39中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:40-42中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；

包含分别在SEQ ID NO:43-45中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:46-48中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；

包含分别在SEQ ID NO:49-51中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:52-54中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；

包含分别在SEQ ID NO:55-57中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:58-60中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；

包含分别在SEQ ID NO:61-63中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:64-66中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；

包含分别在SEQ ID NO:67-69中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:70-72中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；

包含分别在SEQ ID NO:73-75中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:76-78中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；

包含分别在SEQ ID NO:79-81中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:82-84中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；

包含分别在SEQ ID NO:85-87中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:88-90中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；

包含分别在SEQ ID NO:91-93中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:94-96中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；或者

包含分别在SEQ ID NO:97-99中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:100-102中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域；

或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包含除了跨所述CDR区域的至多共1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸置换以外与(i)和(ii)的重链和轻链可变区域相同的重链和轻链可变区域。

在某些实施方案中，所述VH区域包含与选自SEQ ID NO:103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133和135的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述VL区域包含与选自SEQ ID NO:104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、134和136的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。

某些抗体或其抗原结合片段包含：

在SEQ ID NO:103中所示的VH区域和在SEQ ID NO:104中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:105中所示的VH区域和在SEQ ID NO:106中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:107中所示的VH区域和在SEQ ID NO:108中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:109中所示的VH区域和在SEQ ID NO:110中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:111中所示的VH区域和在SEQ ID NO:112中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:113中所示的VH区域和在SEQ ID NO:114中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:115中所示的VH区域和在SEQ ID NO:116中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:117中所示的VH区域和在SEQ ID NO:118中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:119中所示的VH区域和在SEQ ID NO:120中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:121中所示的VH区域和在SEQ ID NO:122中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:123中所示的VH区域和在SEQ ID NO:124中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:125中所示的VH区域和在SEQ ID NO:126中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:127中所示的VH区域和在SEQ ID NO:128中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:129中所示的VH区域和在SEQ ID NO:130中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:131中所示的VH区域和在SEQ ID NO:132中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:133中所示的VH区域和在SEQ ID NO:134中所示的VL区域；或者

在SEQ ID NO:135中所示的VH区域和在SEQ ID NO:136中所示的VL区域。

一些实施方案包括结合肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)的分离的抗体或其抗原结合片段，包含重链可变(VH)区域和各自的轻链可变(VL)区域，所述重链可变(VH)区域包含与选自SEQ ID NO:103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133和135的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变(VL)区域包含与选自SEQID NO:104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、134和136的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。

一些实施方案包括结合肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)的分离的抗体或其抗原结合片段，包含重链可变(VH)区域和各自的轻链可变(VL)区域，所述重链可变(VH)区域包含选自表R1中标有下划线的序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域，所述轻链可变(VL)区域包含选自表R2中标有下划线的序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域。

一些实施方案包括权利要求6的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含VH区域和各自的VL区域，所述VH区域包含选自表R1的氨基酸序列，所述VL区域包含选自表R2的氨基酸序列。

一些实施方案包括在表位处结合人肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)的分离的抗体或其抗原结合片段，所述表位包含一个或多个选自R21、Y23、T27、S33、K34、T51和S55的残基、由其组成或基本上由其组成，如由成熟的人TNFR2序列(FL人TNFR2的残基23-461)所定义，包括，例如，其中所述表位包含一个或多个选自REY、TAQMCCSK(SEQ ID NO:328)和TVCDS(SEQ ID NO:329)的残基、由其组成或基本上由其组成。在某些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：包含分别在SEQ ID NO:37-39中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的重链可变(VH)区域；和包含分别在SEQ ID NO:40-42中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的轻链可变(VL)区域。在某些实施方案中，所述VH区域包含与SEQ ID NO:115具有至少90％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述VL区域包含与SEQ ID NO:116具有至少90％同一性的氨基酸序列。在具体实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含在SEQ ID NO:115中所示的VH区域和在SEQ ID NO:116中所示的VL区域。

在某些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段结合人TNFR2，例如，可溶性的和/或细胞表达的人TNFR2。

在某些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段结合选自表T1的至少一、二、三、四或五种人TNFR2肽表位。

在某些实施方案中，所述抗体是人源化的。在某些实施方案中，所述抗体选自单链抗体、scFv、缺乏铰链区域的单价抗体、微抗体(minibody)和前抗体(probody)。在某些实施方案中，所述抗体是Fab或Fab’片段。在某些实施方案中，所述抗体是F(ab’)₂片段。在某些实施方案中，所述抗体是完整抗体。

在某些实施方案中，所述抗体包含人IgG恒定结构域。在某些实施方案中，所述IgG恒定结构域包含IgG1 CH1结构域。在某些实施方案中，所述IgG恒定结构域包含IgG1 Fc区域，任选的经修饰的Fc区域，任选地被一个或多个氨基酸置换修饰。

在某些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段以约2nM或更低的K_D结合人TNFR2，例如，来自表T1的至少一种肽表位。在某些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段以约0.7nM或更低的K_D结合人TNFR2，或以约50pm或更低的K_D结合在原代T细胞(任选地T_reg)上的人TNFR2。

在某些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段具有下述特征中的一种或多种：

(a)抑制TNF-α与TNFR2的结合；

(b)抑制TNFR2信号传递；

(c)激活TNFR2信号传递；

(d)抑制TNFR2三聚化；

(e)交叉反应性地结合人TNFR2和食蟹猴TNFR2；

(f)通过抗体依赖性的细胞的细胞毒性(ADCC)增加/诱导肿瘤细胞、T_reg和/或抑制性髓样细胞(任选的巨噬细胞、嗜中性粒细胞和骨髓衍生的抑制细胞(MDSC))的细胞杀死/消除；

(g)通过巨噬细胞介导的抗体依赖性的细胞的吞噬作用(ADCP)增加/诱导肿瘤细胞、T_reg和/或抑制性髓样细胞(任选的巨噬细胞、嗜中性粒细胞和MDSC)的细胞杀死/消除；

(h)减少髓样细胞(任选的巨噬细胞、嗜中性粒细胞和MDSC)的免疫抑制；

(i)将MDSC和/或M2巨噬细胞转化成促炎性M1巨噬细胞；

(j)将T_reg转化成效应T细胞；

(k)将冷肿瘤转化成热肿瘤；

(l)减少T_reg介导的免疫抑制；或者

(m)(a)-(k)中的任意一种或多种的组合。

在某些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段基本上不结合TNFR1、疱疹病毒进入介质(HVEM)、CD40、死亡受体6(DR6)和/或骨保护素(OPG)。在某些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段是TNFR2拮抗剂。在某些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段是TNFR2激动剂。在某些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段是双特异性或多特异性抗体。

某些实施方案包括编码如本文中所述的分离的抗体或其抗原结合片段的分离的多核苷酸、包含所述分离的多核苷酸的表达载体或包含所述载体的分离的宿主细胞。

还包括组合物，其包含生理上可接受的载体和治疗有效量的本文描述的分离抗体或其抗原结合片段。

还包括用于治疗具有癌症(例如，与异常TNFR2表达有关的癌症)的患者的方法，所述方法包括给所述患者施用本文描述的组合物，由此治疗所述癌症。

还包括用于治疗具有癌症(例如，与TNFR2拮抗剂介导的免疫抑制有关的癌症)的患者的方法，所述方法包括给所述患者施用本文描述的组合物，由此治疗所述癌症。在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是TNFR2拮抗剂。

还包括用于治疗具有炎症性和/或自身免疫性疾病的患者的方法，所述方法包括给所述患者施用本文描述的组合物，由此治疗所述炎症。在某些实施方案中，所述炎症性和/或自身免疫性疾病与异常TNFR2表达有关，例如，其中所述抗体或其抗原结合片段是TNFR2激动剂。在某些实施方案中，所述炎症性和/或自身免疫性疾病与TNFR2激动剂介导的免疫激活有关。

附图说明

图1解释了抗-TNFR2抗体在癌症免疫疗法中的活性的提议机制。

图2解释了本文描述的抗体免疫接种和筛选方案。

图3A-3D显示了第一组人嵌合抗体表征的结果。在图3A-3B中，将人(3A)或食蟹猴(3B)TNFR2-His标记的蛋白以1μg/mL包被在96-孔ELISA平板上并在4℃温育过夜。将平板洗涤并使用1％BSA封闭。加入抗体在室温(RT)保持1小时，洗涤，并使用抗-人HRP检测。使用TMB底物使测定显影3-5分钟。在图3C中，在被工程改造成表达人TNFR2的CHO细胞上进行FACS结合。简而言之，将抗体与200,000个细胞一起在MACS缓冲液中温育1小时，随后洗涤并使用抗-人IgG BV421检测20分钟。使用Cytoflex或MACSQuant流式细胞计分析样品。在图3D中，通过在4℃用1ug/mL TNFR-Fc包被平板过夜，进行配体封闭ELISA。将平板洗涤，封闭，并将抗体在室温温育1小时。将抗体洗涤，并加入100ng/mL TNF-α，并在室温温育1小时。在用小鼠抗-人TNF-α和抗-小鼠IgG HRP洗涤后检测TNF-α。使用TMB底物使测定显影5-7分钟。

图4A-4D显示了第二组人嵌合抗体表征的结果，包括结合可溶性的(4A)和基于细胞的人TNFR2(4C)、食蟹猴TNFR2(4B)和基于ELISA的TNF-α封闭(4D)的抗体。如在上面图3A-3D中所述进行。

图5显示了人嵌合抗体在NFkB HEK报告系上的TNFR信号传递。将来自Promega的HEK TNFR报告细胞以50,000个细胞/孔铺板在平底板中。加入10μg/mL的指定抗体或0.2ng/mL TNF-α，并与细胞一起在37℃温育20小时。使用QuantiBlue试剂以4:1比例与上清液一起检测报告物活性10分钟。在655nm用SpectroMax读出平板。数据表明，虽然信号水平较低，但55F6具有一些激动剂活性，而其它抗体没有显著活性。

图6A-6D显示了与可溶性的(6A)和基于细胞的人TNFR2(6C)、食蟹猴TNFR2(6B)和基于ELISA的TNF-α封闭(6D)结合的人源化抗体。

图7显示了使用人源化候选物的基于细胞的TNFα封闭测定。将过表达TNFR2的CHO细胞以100,000个细胞/孔铺板。将细胞与指定抗体一起在冰上温育30分钟。将细胞洗涤，并加入14ng/mL的生物素化的TNFα保持30分钟。将TNFα洗掉，并用SA-PE检测15分钟。使用Cytoflex或MACSQuant流式细胞计分析细胞。将测定重复两次。

图8显示了可溶性的TNFR1结合测定。将TNFR1-His标记的蛋白在4℃以1μg/mL包被在ELISA平板上过夜。将平板洗涤，封闭，并将抗体以指定的浓度加入在室温保持1小时。将抗体洗涤并用抗-人IgG HRP检测1小时。使用TMB底物使测定显影10分钟。

图9A-9B显示了通过报告物测定确定的TNFR2-CHO细胞的ADCC。按照生产商的方案使用来自Promega的ADCC Reporter Bioassay Core试剂盒。简而言之，将25,000个TNFR2-CHO细胞在测定缓冲液中加入扁平孔平板中。在指定浓度加入抗体。每孔加入75,000个效应细胞(E:T＝3:1)。将平板在37℃温育6小时。6小时以后，使平板平衡至室温，并使用Bio-Glo萤光素酶底物检测报告物活性，在5分钟以后在SpectroMAX平板读数器上测量。图9A显示了相对于同种型的倍数变化，将其计算为RLU(诱导-背景)/RLU(同种型对照-背景)。图9B显示了RLU而不是倍数变化。

图10A-10F显示了通过Octet确定的试验抗体[人源化克隆25-71(A；Kon＝3.58E+05 1/Ms；Koff＝5.53E-04 1/s)和25-108(B；Kon＝3.76E+05 1/Ms；Koff＝2.33E-04 1/s)]与TNFR2的高亲和力单价结合，以及与人TNFR2蛋白(通过ELISA)(10C)、食蟹猴TNFR2蛋白(通过ELISA)(10D)、细胞表达的人TNFR2(10E)、激活的人T_reg(10F)的结合。

图11A-11E表明，25-71和25-108对TNFR2具有特异性，如与TNFR1(11A)、疱疹病毒进入介质(HVEM；11B)、CD40(11C)、死亡受体6(DR6；11D)和骨保护素(OPG；11E)的结合的缺乏所证实。

图12A-12B显示了25-71和25-108通过抗体依赖性的细胞的细胞毒性(ADCC)对表达TNFR2的细胞(12A,转染子)和表达TNFR2的肿瘤细胞(12B,K562,人AML细胞系)的细胞杀死/消除。

图13A-13B证实了试验抗体通过ADCC对表达TNFR2的人T_reg的细胞杀死/消除。

图14A-14B显示了5-71和25-108通过巨噬细胞介导的抗体依赖性的细胞的吞噬作用(ADCP)对表达TNFR2的肿瘤细胞的细胞杀死。

图15A-15C表明，25-71和25-108可以逆转来自两种不同供体的骨髓衍生的抑制细胞(MDSC)介导的免疫抑制(15B和15C)。抑制百分比＝单独的T-[(T+MDSC)/单独的T]X 100。

图16显示了在抗体克隆25-71和全长人TNFR2的一个区域(SEQ ID NO:327)之间的表位位点，所述表位包括全长TNFR2的残基43、45、49、55、56、73和77。

图17A-17J显示了抗体克隆25-71和人TNFR2之间的相互作用。在表位位点上的TNFR2 PDB结构3ALQ为灰色，对应于全长人TNFR2序列的残基43-45(REY)、残基49-56(TAQMCCSK；SEQ ID NO:328)和残基73-77(TVCDS；SEQ ID NO:329)。显示了前视图(A)、后视图(B)、侧视图1(C)、侧视图2(D)和顶视图(E)的条带/表面图示；以及前视图(F)、后视图(G)、侧视图1(H)、侧视图2(I)和顶视图(J)的条带图示。

图18A-18E表明，克隆25-71逆转效应T细胞的T_reg抑制。在18A中，纯化的T_reg当加入抑制测定中时表达TNFR2。在18B-18C中，将数据绘制为T应答细胞的增殖百分比(B)或Treg抑制百分比(C)。图18D-18E显示了来自1:2Tresp:Treg比率条件(D)和IgG1对照(E)的示例性增殖直方图。

图19A-19C显示了克隆25-71在注射了Colo205细胞的雌性裸鼠中的抗肿瘤作用(48％TGI)。19A概述了治疗方案，19B显示了试验药剂对肿瘤体积的影响，且19C显示了对体重的影响。

具体实施方式

本公开内容涉及特异性地结合肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)的抗体及其抗原结合片段，尤其是具有特定表位特异性和功能性质的抗体。一些实施方案涵盖能够结合TNFR2、阻断TNFR2与其配体肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的结合和抑制诱导的下游细胞信号传递和生物学效应的特定人源化抗体及其片段。在某些实施方案中，抗-TNFR2抗体或其抗原结合片段是TNFR2拮抗剂或抑制剂。在某些情况下，通过阻断TNFR2的免疫抑制作用(例如，在肿瘤微环境中)，TNFR2的拮抗剂增强免疫应答。本文描述的TNFR2拮抗剂抗体可用于治疗和预防，例如，癌症，包括表达TNFR2的癌症。

某些实施方案涉及抗-TNFR2抗体或其抗原结合片段用于诊断、评估和治疗与TNFR2活性或其异常表达相关的疾病和障碍的用途。主题抗体用于治疗或预防癌症以及其它疾病。

除非相反特别指示，否则本公开内容的实践将采用在本领域技术范围内的病毒学、免疫学、微生物学、分子生物学和重组DNA技术的常规方法，为了举例说明的目的，在下面描述了其中的许多。这样的技术在文献中进行了充分解释。参见，例如，CurrentProtocols in Molecular Biology or Current Protocols in Immunology,John Wiley&Sons,New York,N.Y.(2009)；Ausubel等人,Short Protocols in Molecular Biology,第3版,Wiley&Sons,1995；Sambrook和Russell,Molecular Cloning:A Laboratory Manual(2001年第3版)；Maniatis等人.Molecular Cloning:A Laboratory Manual(1982)；DNACloning:A Practical Approach,第I和II卷(D.Glover编)；Oligonucleotide Synthesis(N.Gait编,1984)；Nucleic Acid Hybridization(B.Hames和S.Higgins编,1985)；Transcription and Translation(B.Hames和S.Higgins编,1984)；Animal Cell Culture(R.Freshney编,1986)；Perbal,A Practical Guide to Molecular Cloning(1984)和其它类似的参考文献。

在本说明书和所附权利要求中使用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数所指，除非上下文另外清楚地指示。

“约”是指这样的数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度：其相对于参考数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度变化多达20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％。

“拮抗剂”表示干扰或以其它方式降低另一种试剂或分子的生理作用的试剂(例如，抗体)。在某些情况下，拮抗剂特异性地结合其它试剂或分子。包括完全和部分拮抗剂。

“激动剂”表示增加或增强另一种试剂或分子的生理作用的试剂(例如，抗体)。在某些情况下，激动剂特异性地结合其它试剂或分子。包括完全和部分激动剂。

贯穿本说明书，除非上下文另外要求，否则词语“包含”或变体诸如“包括”或“含有”应理解为暗示包括所陈述的要素或整数、或者多个要素或整数的集合，但不排除任何其它要素或整数、或者多个要素或整数的集合。

“由……组成”是指包括且限于在短语“由(……组成)”后面的对象。因而，短语“由……组成”指示，列出的要素是必需的或强制性的，并且不可存在其它要素。“基本上由……组成”是指，包括在该短语后面列出的任意要素，且限于不干扰或有助于在本公开内容中关于列出的要素详细说明的活性或作用的其它要素。因而，短语“基本上由……组成”指示，列出的要素是必需的或强制性的，但是其它要素是任选的，且可能存在或不存在，取决于它们是否实质上影响列出的要素的活性或作用。

除非明确地另外说明，否则本说明书中的每个实施方案在细节上做必要的修正后适用于每个其它实施方案。

术语“调节”和“改变”包括“增加”、“增强”或“刺激”、以及“降低”、“减少”或“抑制”，通常相对于对照以统计上显著的或生理上显著的量或程度。“增加的”、“刺激的”或“增强的”量通常是“统计上显著的”量，并且可以包括为无组合物(例如，试剂不存在)或对照组合物所产生的量的1.1、1.2、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100或更多倍(例如，500、1000倍)(包括所有整数和介于之间的范围，例如，1.5、1.6、1.7、1.8等)的增加。“降低的”或“减少的”或“抑制的”量通常是“统计上显著的”量，且可以包括无组合物(例如，试剂不存在)或对照组合物所产生的量的1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％减少(包括所有整数和介于之间的范围)。本文描述了对比和“统计上显著的”量的例子。

“实质上”或“基本上”是指几乎全部地或完全地，例如，某个给定量的95％、96％、97％、98％、99％或更大。

“统计上显著的”是指，结果不太可能偶然发生。通过本领域已知的任意方法可以确定统计显著性。常用的显著性度量包括p-值，它是在零假设为真的情况下发生观察到的事件的频率或概率。如果获得的p-值小于显著性水平，则拒绝零假设。在简单的情况下，显著性水平定义为0.05或更小的p-值。

标准技术可以用于重组DNA、寡核苷酸合成和组织培养和转化(例如，电穿孔、脂转染)。根据生产商的说明书，或如本领域常用的或如本文中所述的，可以进行酶反应和纯化技术。这些和有关的技术和程序通常可以根据本领域众所周知的常规方法和如在贯穿本说明书引用和讨论的各种一般和更具体的参考文献中所述进行。除非提供了具体的定义，否则结合本文描述的分子生物学、分析化学、合成的有机化学和医学和药物化学使用的命名以及其中的实验室程序和技术是本领域众所周知和常用的那些。可以使用标准技术进行重组技术、分子生物学、微生物学、化学合成、化学分析、药物制剂、配制和递送和患者的治疗。

在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是特征在于或包含：包含互补决定区V_HCDR1、V_HCDR2和V_HCDR3序列的重链可变区域(V_H)序列，和包含互补决定区V_LCDR1、V_LCDR2和V_LCDR3序列的轻链可变区域(V_L)序列。示例性的V_HCDR1、V_HCDR2、V_HCDR3、V_LCDR1、V_LCDR2和V_LCDR3序列提供在下表H1中。

因而，在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合TNFR2且包含：

重链可变区域(V_H)序列，其包含选自表H1的互补决定区V_HCDR1、V_HCDR2和V_HCDR3序列；和

轻链可变区域(V_L)序列，其包含选自表H1的互补决定区V_LCDR1、V_LCDR2和V_LCDR3序列，

包括特异性地结合至少一种TNFR2多肽或表位(选自例如表T1)的其变体。

在某些实施方案中，所述CDR序列如下：

包含分别在SEQ ID NO:97-99中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的VH区域；和包含分别在SEQ ID NO:100-102中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的VL区域。

还包括结合TNFR2的其变体，包括亲和力成熟的变体，例如，在CDR区域中具有共1、2、3、4、5、6、7或8个改变的变体，例如，一个或多个本文描述的V_HCDR1、V_HCDR2、V_HCDR3、V_LCDR1、V_LCDR2和/或V_LCDR3序列。示例性的“改变”包括氨基酸置换、添加和删除。

在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是特征在于或包含重链可变区域(V_H)序列和轻链可变区域(V_L)序列。示例性的人源化的V_H和V_L序列提供在下表H2中，示例性的兔V_H序列提供在下表R1中(V_HCDR1、V_HCDR2和V_HCDR3区域标有下划线)，且示例性的兔V_L序列提供在下表R2中(V_LCDR1、V_LCDR2和V_LCDR3区域标有下划线)。

因而，在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合TNFR2且包含选自表H2的VH和对应的VL区域。在特定实施方案中，所述VH区域包含与选自SEQ ID NO:103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133和135的序列具有至少90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述VL区域包含与选自SEQ ID NO:104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、134和136的序列具有至少90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在具体实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含：

在SEQ ID NO:103中所示的VH区域和在SEQ ID NO:104中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:105中所示的VH区域和在SEQ ID NO:106中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:107中所示的VH区域和在SEQ ID NO:108中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:109中所示的VH区域和在SEQ ID NO:110中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:111中所示的VH区域和在SEQ ID NO:112中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:113中所示的VH区域和在SEQ ID NO:114中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:115中所示的VH区域和在SEQ ID NO:116中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:117中所示的VH区域和在SEQ ID NO:118中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:119中所示的VH区域和在SEQ ID NO:120中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:121中所示的VH区域和在SEQ ID NO:122中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:123中所示的VH区域和在SEQ ID NO:124中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:125中所示的VH区域和在SEQ ID NO:126中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:127中所示的VH区域和在SEQ ID NO:128中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:129中所示的VH区域和在SEQ ID NO:130中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:131中所示的VH区域和在SEQ ID NO:132中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:135中所示的VH区域和在SEQ ID NO:136中所示的VL区域。

在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)，且包含：重链可变(VH)区域，其包含选自表R1中标有下划线的序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域；和对应的(通过克隆名称)轻链可变(VL)区域，其包含选自表R2中标有下划线的序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域。在某些实施方案中，所述VH区域包含选自表R1的氨基酸序列，且所述VL区域包含选自表R2的对应的(通过克隆名称)氨基酸序列。

在某些实施方案中，如上面所指出的，抗体或其抗原结合片段结合肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)，例如，可溶性的或细胞表达的TNFR2。在特定实施方案中，所述TNFR2是人TNFR2或其肽表位。人TNFR2的示例性肽表位提供在下表T1中。

在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段特异性地结合人TNFR2，例如，至少一种选自表T1的人TNFR2肽表位，例如，至少一、二、三、四或五种选自表T1的肽表位。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段在肽表位处特异性地结合人TNFR2，所述肽表位包含一个或多个选自R21、Y23、T27、S33、K34、T51和S55的残基、由其组成或基本上由其组成，如由成熟的人TNFR2序列(FL人TNFR2的残基23-461)所定义。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段在肽表位处特异性地结合人TNFR2，所述肽表位包含一个或多个选自REY、TAQMCCSK(SEQ ID NO:328)和TVCDS(SEQ ID NO:329)的残基、由其组成或基本上由其组成。在具体实施方案中，抗体或其抗原结合片段以约2nM或更低的K_D或以约0.7nM或更低的K_D结合人TNFR2。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合食蟹猴TNFR2，例如，它交叉反应性地结合人TNFR2和食蟹猴TNFR2。

在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是TNFR2拮抗剂。例如，在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段抑制或以其它方式减少TNF-α与TNFR2的结合。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段抑制或以其它方式减少TNFR2多聚化或三聚化。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段抑制或以其它方式减少TNFR2介导的T调节性细胞(Treg)的激活，例如，全身性地或在肿瘤微环境中。在特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合TNFR2，是TNFR2拮抗剂，且基本上不结合肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)，例如，人TNFR1。在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段基本上不结合疱疹病毒进入介质(HVEM,CD40,死亡受体6(DR6),和/或骨保护素(OPG)。

在某些实施方案中，例如，在体外或在体内，抗TNFR2抗体或其抗原结合片段通过抗体依赖性的细胞的细胞毒性(ADCC)增加肿瘤细胞(例如，表达TNFR2的肿瘤细胞)、T_reg和/或骨髓衍生的抑制细胞(MDSC)的细胞杀死/消除，例如，与对照或参考相比，增加约或至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％、1000％、2000％或更多。在某些实施方案中，抗TNFR2抗体或其抗原结合片段通过巨噬细胞介导的抗体依赖性的细胞的吞噬作用(ADCP)增加肿瘤细胞(例如，表达TNFR2的肿瘤细胞)、T_reg和/或MDSC的细胞杀死/消除，例如，与对照或参考相比，增加约或至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％、1000％、2000％或更多。在某些实施方案中，抗TNFR2抗体或其抗原结合片段减少MDSC介导的免疫抑制，例如，与对照或参考相比，减少约或至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％、1000％、2000％或更多。在某些实施方案中，抗TNFR2抗体或其抗原结合片段将MDSC和/或M2巨噬细胞转化成促炎性M1巨噬细胞，和/或将T_reg转化成效应T细胞，例如，通过使所述转化与对照或参考相比增加约或至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％、1000％、2000％或更多。在某些实施方案中，抗TNFR2抗体或其抗原结合片段将“冷”肿瘤转化成“热”肿瘤。“冷”肿瘤是尚未被免疫系统识别或尚未引起强烈应答的肿瘤。例如，冷肿瘤的微环境通常具有低或不显著水平的CD4+或CD8+T细胞；相反，它经常具有相对高水平的骨髓衍生的抑制细胞和/或Treg，它们分泌免疫抑制性的细胞因子以阻止CD4+或CD8+T细胞向肿瘤微环境中的移动。相反，“热”肿瘤是具有高水平的CD4+或CD8+T细胞的肿瘤，从而导致发炎的肿瘤微环境。在特定实施方案中，抗TNFR2抗体或其抗原结合片段具有前述特征中的任何一种或多种的组合。

仅仅为了例证目的，使用多种常规方法，包括biacore测定(例如，使用适当标记的可溶性试剂，结合至传感器芯片)、用在细胞表面上表达TNFR2多肽(天然的或重组的)的细胞进行FACS分析、免疫测定、荧光染色测定、ELISA测定和微量量热法方案诸如ITC(等温滴定量热法)，可以检测和定量抗体或其抗原结合片段与TNFR2多肽之间的结合相互作用。

如本领域众所周知的，抗体是一种免疫球蛋白分子，其能够通过至少一个位于免疫球蛋白分子的可变区域中的表位识别位点特异性地结合靶标，诸如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等。如本文中使用的，该术语不仅涵盖完整的多克隆或单克隆抗体，还涵盖其片段(诸如dAb、Fab、Fab’、F(ab’)₂、Fv)、单链(scFv)、其合成变体、天然存在的变体、包含抗体部分与具有所要求的特异性的抗原结合片段的融合蛋白、人源化抗体、嵌合抗体、以及包含具有所要求的特异性的抗原结合位点或片段(表位识别位点)的免疫球蛋白分子的任何其它经修饰构型。“双抗体”，即通过基因融合构建的多价的或多特异性的片段(WO94/13804；P.Holliger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90 6444-6448,1993)，也是本文涵盖的抗体的一种特定形式。本文也包括包含连接至CH3结构域的scFv的微体(S.Hu等人,CancerRes.,56,3055-3061,1996)。参见例如，Ward,E.S.等人,Nature 341,544-546(1989)；Bird等人,Science,242,423-426,1988；Huston等人,PNAS USA,85,5879-5883,1988)；PCT/US92/09965；WO94/13804；P.Holliger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90 6444-6448,1993；Y.Reiter等人,Nature Biotech,14,1239-1245,1996；S.Hu等人,Cancer Res.,56,3055-3061,1996。

本文中使用的术语“抗原结合片段”表示含有免疫球蛋白重链和/或轻链的至少一个CDR的多肽片段，其结合感兴趣的抗原，特别是TNFR2。在这点上，本文所描述的抗体的抗原结合片段可以包含来自结合TNFR2的抗体的本文所述VH和VL序列的1、2、3、4、5或所有6个CDR。

术语“抗原”表示分子或分子的一部分，其能够被选择性结合剂(诸如抗体)结合，并且另外能够在动物中使用以产生能够结合该抗原的表位的抗体。抗原可以具有一个或多个表位。

术语“表位”包括能够特异性地结合免疫球蛋白或T-细胞受体的任何决定簇，优选多肽决定簇。表位是被抗体结合的抗原区域。在某些实施方案中，表位决定簇包括诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基等分子的化学活性表面基团，并且在某些实施方案中可以具有特定的三维结构特征和/或特定的电荷特征。在某些实施方案中，当抗体在蛋白和/或大分子的复杂混合物中优选识别其靶抗原时，将该抗体称为特异性地结合抗原。当平衡解离常数≤10^-7或10^-8M时，抗体被称为特异性地结合抗原。在某些实施方案中，平衡解离常数可以≤10^-9M或≤10^-10M。

在某些实施方案中，如本文中所述的抗体及其抗原结合片段包括重链和轻链CDR集合，分别插入在重链和轻链框架区(FR)集合之间，所述框架区(FR)集合为CDR提供支持并限定CDR相对于彼此的空间关系。本文中使用的术语“CDR集合”表示重链或轻链V区域的三个高变区。从重链或轻链的N-端开始，这些区域分别表示为“CDR1”、“CDR2”和“CDR3”。因此，抗原结合位点包括六个CDR，包含来自各个重链和轻链V区域的CDR集合。包含单个CDR(例如，CDR1、CDR2或CDR3)的多肽在本文中被称作“分子识别单元”。”许多抗原-抗体复合物的晶体学分析已经证实，CDR的氨基酸残基与所结合的抗原形成广泛接触，其中最广泛的抗原接触是与重链CDR3。因此，分子识别单元主要负责抗原结合位点的特异性。

本文中使用的术语“FR集合”表示构成重链或轻链V区域的CDR集合的CDR的四个侧接氨基酸序列。一些FR残基可能接触所结合的抗原；但是，FR主要负责将V区域折叠成抗原结合位点，特别是与CDR直接相邻的FR残基。在FR内，某些氨基残基和某些结构特征是非常高度保守的。在这点上，所有的V区域序列都含有约90个氨基酸残基的内部二硫化物环。当V区域折叠成结合位点时，CDR展示为形成抗原结合表面的突出环基序。普遍认为，无论精确的CDR氨基酸序列如何，FR的保守结构区域都会影响CDR环的折叠形状成为某些“规范”结构。此外，已知某些FR残基参与稳定抗体重链和轻链的相互作用的非共价结构域间接触。

通过参考Kabat,E.A.等人,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest.第4版.US Department of Health and Human Services.1987及其更新，其现在可在因特网(immuno.bme.nwu.edu)上获得，可以确定免疫球蛋白可变结构域的结构和位置。

“单克隆抗体”表示同质抗体群体，其中单克隆抗体包含参与表位的选择性结合的氨基酸(天然存在的和非天然存在的)。单克隆抗体具有高度特异性，针对单一表位。术语“单克隆抗体”不仅涵盖完整的单克隆抗体和全长单克隆抗体，还涵盖其片段(诸如Fab、Fab’、F(ab’)₂、Fv)、单链(scFv)、其变体、包含抗原结合部分的融合蛋白、人源化的单克隆抗体、嵌合的单克隆抗体和免疫球蛋白分子的任何其它经修饰构型，所述经修饰构型包含具有所要求的特异性和结合表位的能力的抗原结合片段(表位识别位点)。不意图限制抗体的来源或其制备方式(例如，通过杂交瘤、噬菌体选择、重组表达、转基因动物等)。该术语包括本文在“抗体”的定义下描述的完整免疫球蛋白以及片段等。

蛋白水解酶木瓜蛋白酶优先切割IgG分子以产生几个片段，其中两个(F(ab)片段)各自包含包括完整抗原结合位点的共价异源二聚体。酶胃蛋白酶能够切割IgG分子以提供几个片段，包括包含两个抗原结合位点的F(ab’)₂片段。根据本公开内容的某些实施方案使用的Fv片段可以通过IgM的优先蛋白水解性切割产生，并且在极少数情况下通过IgG或IgA免疫球蛋白分子产生。但是，更常使用本领域已知的重组技术衍生出Fv片段。Fv片段包括非共价V_H::V_L异源二聚体，其包括保留天然抗体分子的大部分抗原识别和结合能力的抗原结合位点。Inbar等人(1972)Proc.Nat.Acad.Sci.USA 69:2659-2662；Hochman等人(1976)Biochem 15:2706-2710；和Ehrlich等人(1980)Biochem 19:4091-4096。

在某些实施方案中，涵盖单链Fv或scFv抗体。例如，按照本申请关于选择具有期望特异性的抗体的教导，使用标准分子生物学技术可以制备κ体(Ill等人,Prot.Eng.10:949-57(1997)；微体(Martin等人,EMBO J 13:5305-9(1994)；双抗体(Holliger等人,PNAS 90:6444-8(1993)；或Janusins(Traunecker等人,EMBO J 10:3655-59(1991)和Traunecker等人,Int.J.Cancer Suppl.7:51-52(1992)。在某些实施方案中，可以制备双特异性或嵌合抗体，其包含本公开内容的配体。例如，嵌合抗体可以包含来自不同抗体的CDR和框架区，同时可以产生双特异性抗体，其通过一个结合结构域特异性地结合TNFR2并通过第二结合结构域特异性地结合第二分子。这些抗体可以通过重组分子生物学技术产生或者可以物理缀合在一起。

单链Fv(scFv)多肽是共价连接的V_H::V_L异源二聚体，其从基因融合体表达，所述基因融合体包括通过肽编码接头连接的V_H和V_L编码基因。Huston等人(1988)Proc.Nat.Acad.Sci.USA 85(16):5879-5883。已经描述了许多方法来辨别化学结构，以将天然聚集的、但化学分离的轻和重多肽链从抗体V区域转化为scFv分子，该分子将折叠成与抗原结合位点的结构基本相似的三维结构。参见，例如，Huston等人的美国专利号5,091,513和5,132,405；和Ladner等人的美国专利号4,946,778。

某些实施方案包括“前抗体(probodies)”或这样的抗体，其中结合位点被掩蔽或以其它方式惰性化，直到在靶或疾病组织中通过蛋白水解性切割而激活。这些和相关的实施方案中的某些包含一个或多个掩蔽部分，其在空间上阻碍抗体的抗原结合位点，并且其通过一个或多个蛋白水解可切割的接头与抗体融合(参见，例如，Polu和Lowman,ExpertOpin.Biol.Ther.14:1049-1053,2014)。

在某些实施方案中，如本文所述的TNFR2结合抗体是双抗体形式。双抗体是多肽的多聚体，每个多肽包含第一结构域和第二结构域，所述第一结构域包含免疫球蛋白轻链的结合区，所述第二结构域包含免疫球蛋白重链的结合区，所述两个结构域被连接(例如，通过肽接头)但不能彼此缔合以形成抗原结合位点：抗原结合位点通过在多聚体内的一个多肽的第一结构域与在多聚体内的另一个多肽的第二结构域的缔合而形成(WO94/13804)。

抗体的dAb片段由VH结构域组成(Ward,E.S.等人,Nature 341,544-546(1989))。

在要使用双特异性或多特异性抗体的情况下，这些可以是常规双特异性抗体，其可以以多种方式制备(Holliger,P.和Winter G.Current Opinion Biotechnol.4,446-449(1993))，例如，化学制备或从杂合的杂交瘤制备，或者可以是上述双特异性抗体片段中的任一种。仅使用可变结构域，可以在没有Fc区域的情况下构建双抗体和scFv，这可能降低抗独特型反应的作用。

与双特异性的完整抗体相反，双特异性的双抗体也可能是特别有用的，因为它们可以容易地在大肠杆菌中构建和表达。使用噬菌体展示(WO94/13804)可以从文库中容易地选择具有适当结合特异性的双抗体(和许多其它多肽诸如抗体片段)。如果双抗体的一个臂要保持恒定，例如，具有针对抗原X的特异性，则可以建立一个文库，其中另一臂发生变化并选择具有适当特异性的抗体。通过凸起-进入-孔洞工程可以制备双特异性的完整抗体(J.B.B.Ridgeway等人,Protein Eng.,9,616-621,1996)。

在某些实施方案中，本文所述的抗体可以以

的形式提供。

是除去了铰链区域的IgG4抗体(参见GenMab Utrecht,荷兰；也参见，例如，US20090226421)。这种专有抗体技术创造了一种稳定的、更小的抗体形式，与目前的小抗体形式相比，预期的治疗窗口更长。IgG4抗体被认为是惰性的，因此不会与免疫系统相互作用。通过消除抗体的铰链区域,可以修饰全人IgG4抗体以获得相对于相应的完整IgG4具有不同稳定性特性的半分子片段(GenMab,Utrecht)。将IgG4分子减半会在

上仅留下一个可以与同源抗原(例如，疾病靶标)结合的区域，因此

仅与靶细胞上的一个位点单价结合。对于某些癌细胞表面抗原，这种单价结合可能不会刺激癌细胞生长，正如使用具有相同抗原特异性的二价抗体可看到的那样，因此

技术可以为某些类型的癌症提供治疗选择，所述癌症可能是用常规抗体治疗所难治的。

的小尺寸在治疗某些形式的癌症时可以具有一个巨大好处，允许分子更好地分布在更大的实体肿瘤上，并可能增加效力。

在某些实施方案中，本公开内容的抗体可以呈

的形式。

由单个基因编码，并在几乎所有原核和真核宿主中高效地产生，例如大肠杆菌(参见例如美国专利号6,765,087)、霉菌(例如曲霉菌属或木霉属)和酵母(例如酵母属、克鲁维酵母属、汉逊酵母属或毕赤酵母属(参见例如美国专利号6,838,254)。生产过程是可缩放的，并且已经生产了数千克量的

Nanobodies可以配制成具有长贮存期限的即用型溶液。

方法(参见，例如，WO 06/079372)是一种用于生成针对期望靶标的Nanobodies的专有方法，其基于B细胞的自动化高通量选择。

在某些实施方案中，本文中公开的抗-TNFR2抗体或其抗原结合片段是人源化的。这是指通常使用重组技术制备的嵌合分子，其具有源自非人类物种的免疫球蛋白的抗原结合位点和基于人免疫球蛋白的结构和/或序列的该分子的剩余免疫球蛋白结构。抗原结合位点可以包含融合到恒定结构域上的完整可变结构域或仅包含移植到可变结构域中的适当框架区上的CDR。表位结合位点可以是野生型或被一个或多个氨基酸置换修饰。这消除了在人类个体中作为免疫原的恒定区，但仍然存在对外来可变区域的免疫应答的可能性(LoBuglio,A.F.等人,(1989)Proc Natl Acad Sci USA 86:4220-4224；Queen等人,PNAS(1988)86:10029-10033；Riechmann等人,Nature(1988)332:323-327)。本文中公开的抗-TNFR2抗体的示例性人源化方法包括在美国专利号7,462,697中描述的方法。根据某些实施方案的示例性人源化抗体包含在表H1和表H2中提供的人源化序列。

另一种方案不仅聚焦于提供人衍生的恒定区，而且还对可变区域进行修饰，以使它们重新成形尽可能接近人类形式。已知重链和轻链的可变区域含有三个互补性决定区(CDR)，它们响应于所讨论的表位而变化并决定结合能力，它们侧接四个框架区(FR)，它们在给定的物种中是相对保守的并且被推定为CDR提供支架。当针对特定表位制备非人抗体时，通过将源自非人抗体的CDR移植到在待修饰的人抗体中存在的FR上，可以使可变区域“重新成形”或“人源化”。Sato,K.,等人,(1993)Cancer Res 53:851-856.Riechmann,L.,等人,(1988)Nature 332:323-327；Verhoeyen,M.,等人,(1988)Science 239:1534-1536；Kettleborough,C.A.,等人,(1991)Protein Engineering 4:773-3783；Maeda,H.,等人,(1991)Human Antibodies Hybridoma 2:124-134；Gorman,S.D.,等人,(1991)Proc NatlAcad Sci USA 88:4181-4185；Tempest,P.R.,等人,(1991)Bio/Technology 9:266-271；Co,M.S.,等人,(1991)Proc Natl Acad Sci USA 88:2869-2873；Carter,P.,等人,(1992)Proc Natl Acad Sci USA 89:4285-4289；和Co,M.S.等人,(1992)J Immunol 148:1149-1154已经报道了该方案向各种抗体的应用。在某些实施方案中，人源化抗体保留所有CDR序列(例如，含有来自兔抗体的所有六个CDR的人源化兔抗体)。在某些实施方案中，人源化抗体具有相对于原始抗体改变的一个或多个CDR(一、二、三、四、五、六个)，其也被称为“衍生自”原始抗体的一个或多个CDR的一个或多个CDR。

在某些实施方案中，本公开内容的抗体可以是嵌合抗体。在这点上，嵌合抗体包含抗-TNFR2抗体的抗原结合片段，所述片段可操作地连接或以其它方式融合到不同抗体的异源Fc部分。在某些实施方案中，异源Fc结构域是人源的。在某些实施方案中，异源Fc结构域可以来自与亲本抗体不同的Ig类别，包括IgA(包括亚类IgA1和IgA2)、IgD、IgE、IgG(包括亚类IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)和IgM。在其它实施方案中，异源Fc结构域可以包含来自一种或多种不同Ig类别的CH2和CH3结构域。如上文关于人源化抗体所述，人源化抗体的抗-TNFR2抗原结合片段可以仅包含本文所述抗体的一个或多个CDR(例如，本文所述抗体的1、2、3、4、5或6个CDR)，或可以包含完整的可变结构域(VL、VH或两者)。

在某些实施方案中，TNFR2结合抗体包含本文所述抗体的一个或多个CDR。在这点上，已经证实在一些情况下可以仅转移抗体的VHCDR3，同时仍保留期望的特异性结合(Barbas等人,PNAS(1995)92:2529-2533)。也参见,McLane等人,PNAS(1995)92:5214-5218,Barbas等人,J.Am.Chem.Soc.(1994)116:2161-2162。

Marks等人(Bio/Technology,1992,10:779-783)描述了产生抗体可变结构域的库的方法，其中将指向或邻近可变结构域区域的5'端的共有引物与人VH基因的第三框架区的共有引物结合使用以提供缺乏CDR3的VH可变结构域的库。Marks等人进一步描述了该库可以如何与特定抗体的CDR3组合。使用类似的技术，可以用缺乏CDR3的VH或VL结构域的库改组本文描述的抗体的CDR3衍生序列，并且改组的完整VH或VL结构域与同源VL或VH结构域组合以提供结合TNFR2的抗体或其抗原结合片段。然后可以在合适的宿主系统(诸如WO 92/01047的噬菌体展示系统)中展示所述库，从而可以选择合适的抗体或其抗原结合片段。一个库可以由至少约10⁴个个体成员组成，并且向上几个数目级，例如，至约10⁶-10⁸或10¹⁰个或更多成员。Stemmer(Nature,1994,370:389-391)也公开了类似的改组或组合技术，他描述了与β-内酰胺酶基因相关的技术，但观察到该方案可以用于产生抗体。

另一个替代方案是使用一个或多个选定的VH和/或VL基因的随机诱变在整个可变结构域内产生突变来产生新颖的VH或VL区域，其携带本文所述的一个或多个CDR衍生的序列。这样的技术由Gram等人(1992,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,89:3576-3580)描述，其使用易出错的PCR。可以使用的另一种方法是将诱变引导至VH或VL基因的CDR区域。这样的技术被Barbas等人(1994,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,91:3809-3813)和Schier等人(1996,J.Mol.Biol.263:551-567)公开。

在某些实施方案中，本文所述抗体的特定VH和/或VL可以用于筛选互补可变结构域的文库以鉴定具有所需特性的抗体，诸如增加的对TNFR2的亲和力。这样的方法描述在，例如，Portolano等人,J.Immunol.(1993)150:880-887；Clarkson等人,Nature(1991)352:624-628。

其它方法也可以用于混合和匹配CDR以鉴定具有期望结合活性的抗体，诸如与TNFR2的结合。例如：Klimka等人,British Journal of Cancer(2000)83:252-260描述了使用小鼠VL和人VH文库的筛选过程，其中CDR3和FR4保留来自小鼠VH。获得抗体后，针对人VL文库筛选VH以获得结合抗原的抗体。Beiboer等人,J.Mol.Biol.(2000)296:833-849描述了使用整个小鼠重链和人轻链文库的筛选过程。获得抗体后，将一个VL与保留小鼠CDR3的人VH文库组合。获得了能够结合抗原的抗体。Rader等人,PNAS(1998)95:8910-8915描述了与上述Beiboer等人类似的过程。

这些刚刚描述的技术本身在本领域中是已知的。但是，使用本领域中的常规方法，技术人员将能够使用这样的技术来获得根据本文描述的几个实施方案的抗体或其抗原结合片段。

本文还公开了一种获得对TNFR2抗原特异的抗体抗原结合结构域的方法，所述方法包括：通过在本文所述的VH结构域的氨基酸序列中添加、缺失、置换或插入一个或多个氨基酸，提供为所述VH结构域的氨基酸序列变体的VH结构域，任选地将由此提供的VH结构域与一个或多个VL结构域组合，并试验VH结构域或一种或多种VH/VL组合以鉴定特异性结合成员或抗体抗原结合结构域，其对TNFR2具有特异性并且任选地具有一种或多种所需特性。VL结构域可以具有基本上如本文所述的氨基酸序列。可以采用一种类似的方法，其中将本文公开的VL结构域的一种或多种序列变体与一种或多种VH结构域组合。

“特异性地结合”或“优先结合”(在本文中互换使用)抗体或多肽的表位是本领域中充分理解的术语，且确定这样的特异性或优先结合的方法也是本领域众所周知的。如果与替代细胞或物质相比分子更经常地、更快速地、以更大的持续时间和/或以更大的亲和力与特定细胞或物质反应或结合，那么就说所述分子表现出“特异性结合”或“优先结合”。如果抗体比它结合其它物质以更大的亲和力、亲合力、更容易地和/或以更大的持续时间结合，那么抗体“特异性地结合”或“优先结合”靶标。例如，特异性地或优先地结合TNFR2表位的抗体是与它结合其它TNFR2表位或非-TNFR2表位相比以更大亲和力、亲合力、更容易和/或以更久的持续时间结合一种TNFR2表位的抗体。通过阅读该定义还理解，例如，特异性地或优先地结合第一靶标的抗体(或部分或表位)可以或可以不特异性地或优先地结合第二靶标。这样，“特异性结合”或“优先结合”不一定需要(尽管它可以包括)排它结合。通常，但不一定，提及的结合是指优先结合。

免疫学结合通常表示在免疫球蛋白分子和所述免疫球蛋白的特异性抗原之间发生的类型的非共价相互作用，例如作为说明而非限制，由于静电、离子、亲水和/或疏水吸引或排斥、空间力、氢键合、范德华力和其它相互作用。可以以相互作用的解离常数(K_d)的方式表示免疫学结合相互作用的强度或亲和力，其中较小的K_d代表较大的亲和力。使用本领域众所周知的方法，可以定量选定的多肽的免疫学结合性质。一种这样的方法需要测量抗原结合位点/抗原复合物形成和解离的速率，其中那些速率取决于复合物配偶体的浓度、相互作用的亲和力以及在两个方向上同样影响所述速率的几何参数。因而，通过计算浓度以及结合和解离的实际速率，可以确定“结合速率常数”(K_on)和“解离速率常数”(K_off)。K_off/K_on的比率能够消除所有与亲和力无关的参数，且因此等于解离常数K_d。通常，参见，Davies等人(1990)Annual Rev.Biochem.59:439-473。

关于表位是或“保持免疫学上有活性”的术语“免疫学上有活性”表示抗-TNFR2抗体在不同条件下结合表位的能力，例如，在表位已经经受还原和变性条件以后。

根据某些实施方案的抗体或其抗原结合片段可以是与本文所述的任何抗体竞争结合TNFR2的抗体，所述任何抗体(i)特异性地结合抗原和(ii)包含本文公开的VH和/或VL结构域，或包含本文公开的VH CDR3，或这些中的任一种的变体。抗体之间的竞争可以容易地在体外测定，例如使用ELISA和/或通过将特定报告分子标记到一种抗体上，所述抗体可以在其它未标记的抗体存在下检测到，从而能够鉴定结合相同表位或重叠表位的特异性抗体。因此，本文提供了特异性抗体或其抗原结合片段，其包含与本文所述的结合TNFR2的抗体竞争的人抗体抗原结合位点。

在这点上，本文中使用的术语“竞争”、“抑制结合”和“阻断结合”(例如，指抑制/阻断配体(例如，TNF-α)和/或反受体与TNFR2的结合，或指抑制/阻断抗-TNFR2抗体与TNFR2的结合)互换使用，并涵盖部分和完全抑制/阻断。抑制/阻断配体和/或反受体与TNFR2的结合优选地降低或改变当在没有抑制或阻断的情况下配体和/或反受体结合TNFR2时发生的细胞信号传递的正常水平或类型。抑制和阻断也意在包括，与没有接触抗-TNFR2抗体的配体相比，当与本文中公开的抗-TNFR2抗体接触时配体和/或反受体与TNFR2的结合的任何可测量的降低，例如，配体(例如，TNF-α)和/或反受体与TNFR2的结合降低了至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。

免疫球蛋白的恒定区显示出比可变区域更少的序列多样性，并且负责结合许多天然蛋白以引发重要的生化事件。在人类中存在五种不同类型的抗体，包括IgA(其包括亚类IgA1和IgA2)、IgD、IgE、IgG(其包括亚类IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)和IgM。这些抗体类别之间的区别特征是它们的恒定区，尽管在V区中可能存在细微的差异。

抗体的Fc区域与许多Fc受体和配体相互作用，从而赋予一系列重要的功能能力，被称作效应子功能。在一个实施方案中，抗-TNFR2抗体包含Fc区域。对于IgG，Fc区域包含Ig结构域CH2和CH3以及通向CH2的N-端铰链。IgG类别的一个重要的Fc受体家族是Fcγ受体(FcγR)。这些受体介导抗体和免疫系统的细胞臂之间的通讯(Raghavan等人,1996,AnnuRev Cell Dev Biol 12:181-220；Ravetch等人,2001,Annu Rev Immunol 19:275-290)。在人类中，该蛋白家族包括FcγRI(CD64)，包括异形体FcγRIa、FcγRIb和FcγRIc；FcγRII(CD32)，包括异形体FcγRIIa(包括同种异型H131和R131)、FcγRIIb(包括FcγRIIb-1和FcγRIIb-2)和FcγRIIc；和FcγRIII(CD16)，包括异形体FcγRIIIa(包括同种异型V158和F158)和FcγRIIIb(包括同种异型FcγRIIIb-NA1和FcγRIIIb-NA2)(Jefferis等人,2002,Immunol Lett 82:57-65)。这些受体通常具有介导与Fc结合的细胞外结构域、跨膜区和可以介导细胞内的某些信号传递事件的细胞内结构域。这些受体在多种免疫细胞中表达，包括单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、血小板、B细胞、大颗粒淋巴细胞、朗格汉斯细胞、天然杀伤(NK)细胞和T细胞。Fc/FcγR复合物的形成将这些效应细胞募集到结合的抗原的位点，通常导致细胞内的信号传递事件和重要的后续免疫应答，诸如炎症介质的释放、B细胞激活、胞吞作用、吞噬作用和细胞毒性攻击。

介导细胞毒性和吞噬效应功能的能力是抗体破坏靶细胞的潜在机制。其中表达FcγR的非特异性细胞毒性细胞识别在靶细胞上的结合的抗体并随后引起靶细胞裂解的细胞介导的反应被称作抗体依赖性的细胞介导的细胞毒性(ADCC)(Raghavan等人,1996,AnnuRev Cell Dev Biol 12:181-220；Ghetie等人,2000,Annu Rev Immunol 18:739-766；Ravetch等人,2001,Annu Rev Immunol 19:275-290)。其中表达FcγR的非特异性细胞毒性细胞识别在靶细胞上的结合的抗体并随后引起靶细胞的吞噬作用的细胞介导的反应被称作抗体依赖性的细胞介导的吞噬作用(ADCP)。所有FcγR结合Fc上的相同区域，在Cg2(CH2)结构域和上述铰链的N-端末端。这种相互作用在结构上得到了确定表征(Sondermann等人,2001,J Mol Biol 309:737-749)，并且已经解决了与人FcγRIIIb的细胞外结构域结合的人Fc的几种结构(pdb登录代码1E4K)(Sondermann等人,2000,Nature 406:267-273.)(pdb登录代码1IIS和1IIX)(Radaev等人,2001,J Biol Chem 276:16469-16477)。

不同的IgG亚类对FcγR具有不同的亲和力，IgG1和IgG3通常比IgG2和IgG4实质上更好地结合受体(Jefferis等人,2002,Immunol Lett 82:57-65)。所有FcγR结合IgG Fc上的相同区域，但具有不同的亲和力：高亲和力结合剂FcγRI对IgG1具有10^-8M^-1的K_d，而低亲和力受体FcγRII和FcγRIII通常分别以10^-6和10^-5结合。FcγRIIIa和FcγRIIIb的细胞外结构域具有96％同一性；但是，FcγRIIIb没有细胞内信号传递结构域。此外，尽管FcγRI、FcγRIIa/c和FcγRIIIa是免疫复合物触发的激活的正调节剂，其特征在于具有包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)的细胞内结构域，但是FcγRIIb具有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)且因此是抑制性的。因此，前者被称作激活受体，而FcγRIIb被称作抑制受体。所述受体在不同免疫细胞上的表达谱和水平也不同。另一个复杂性水平是许多FcγR多态性在人蛋白质组中的存在。具有临床意义的一个特别相关的多态性是V158/F158FcγRIIIa。人IgG1与V158同种异型的结合亲和力大于与F158同种异型的结合。这种亲和力差异，以及推测的其对ADCC和/或ADCP的影响，已被证明是抗-CD20抗体利妥昔单抗(

IDEC Pharmaceuticals Corporation的注册商标)的效力的一个重要决定因素。具有V158同种异型的患者对利妥昔单抗治疗应答良好；但是，具有较低亲和力F158同种异型的患者应答较差(Cartron等人,2002,Blood 99:754-758)。大约10-20％的人类是V158/V158纯合的，45％是V158/F158杂合的，且35-45％的人类是F158/F158纯合的(Lehrnbecher等人,1999,Blood 94:4220-4232；Cartron等人,2002,Blood 99:754-758)。因而，80-90％的人类是差应答者，也就是说，他们具有F158 FcγRIIIa的至少一个等位基因。

Fc区域也参与补体级联的激活。在经典补体途径中，C1及其C1q亚基结合IgG或IgM的Fc片段，后者与抗原形成复合物。在某些实施方案中，对Fc区域的修饰包括改变(增强或降低)如本文所述的TNFR2-特异性抗体激活补体系统的能力的修饰(参见例如，美国专利7,740,847)。为了评估补体激活，可以进行补体依赖性的细胞毒性(CDC)测定(参见，例如，Gazzano-Santoro等人,J.Immunol.Methods,202:163(1996))。

因此，在某些实施方案中，本公开内容提供了具有修饰的Fc区域的抗-TNFR2抗体，所述Fc区域具有改变的功能性质，诸如减少的或增强的CDC、ADCC或ADCP活性，或增强的对特定FcγR的结合亲和力或增加的血清半衰期。本文涵盖的其它修饰的Fc区域描述于，例如，授权的美国专利7,317,091、7,657,380、7,662,925、6,538,124、6,528,624、7,297,775、7,364,731、公布的美国申请US2009092599、US20080131435、US20080138344和公布的国际申请WO2006/105338、WO2004/063351、WO2006/088494、WO2007/024249。

因而，在某些实施方案中，具有期望的结合特异性的抗体可变结构域融合至免疫球蛋白恒定结构域序列。在某些实施方案中，所述融合是与Ig重链恒定结构域，其包含铰链、C_H2和C_H3区域的至少一部分。在某些情况下，优选的是，包含轻链键合所需位点的第一重链恒定区(C_H1)存在于至少一个融合体中。将编码免疫球蛋白重链融合体和(如果需要的话)免疫球蛋白轻链的DNA插入单独的表达载体中，并共转染到合适的宿主细胞中。当在构建中使用的三种多肽链的不相等比率提供期望的双特异性抗体的最佳产量时，这为在实施方案中调整三种多肽片段的相互比例提供了更大的灵活性。但是，当至少两条多肽链以相等比率表达导致高产量时或当比率对期望的链组合的产量没有显著影响时，可能将两条或全部三条多肽链的编码序列插入单个表达载体中。

也可以修饰本公开内容的抗体(及其抗原结合片段和变体)以包括表位标签或标记，例如用于纯化或诊断应用。本领域已知许多用于制备抗体缀合物的连接基团，包括，例如，在美国专利号5,208,020或欧洲专利0 425 235 B1和Chari等人,Cancer Research 52:127-131(1992)中公开的那些。连接基团包括二硫基、硫醚基、酸不稳定基团、光不稳定基团、肽酶不稳定基团或酯酶不稳定基团，如上述专利中所公开的，二硫基和硫醚基是优选的。

在某些实施方案中，如本文中所述的TNFR2-特异性抗体可以缀合至或可操作地连接至另一种试剂或治疗性化合物，在本文中被称作缀合物。所述试剂或治疗性化合物可以是多肽试剂、多核苷酸试剂、细胞毒性剂、化学治疗剂、细胞因子、抗血管生成剂、酪氨酸激酶抑制剂、毒素、放射性同位素或其它治疗活性剂。本文已经描述了化学治疗剂、细胞因子、抗血管生成剂、酪氨酸激酶抑制剂和其它治疗剂，且所有这些前述的治疗剂可以用作抗体缀合物。这样的缀合物可以用于，例如，将所述试剂或化合物靶向作用部位，例如，以TNFR2的表达为特征的肿瘤或肿瘤微环境。

在某些实施方案中，所述抗体缀合至或可操作地连接至毒素，包括、但不限于细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素、多肽、核酸和酶活性毒素，包括其片段和/或变体。小分子毒素包括、但不限于皂草素(Kuroda K,等人,The Prostate 70:1286-1294(2010)；Lip,WL.等人,2007 Molecular Pharmaceutics 4:241-251；Quadros EV.,等人,2010 MolCancer Ther；9(11)；3033-40；Polito L.,等人.2009 British Journal of Haematology,147,710-718)、卡利奇霉素、美坦辛(maytansine)(美国专利号5,208,020)、trichothene和CC1065。毒素包括、但不限于RNA酶、白树毒素、烯二炔、蓖麻蛋白、相思豆毒蛋白、白喉毒素、霍乱毒素、白树毒素、假单胞菌属(Pseudomonas)外毒素(PE40)、志贺氏菌属(Shigella)毒素、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)毒素和美洲商陆抗病毒蛋白。

在某些实施方案中，抗体或其抗原结合片段缀合至一个或多个拟美坦辛(maytansinoid)分子。拟美坦辛是通过抑制微管蛋白聚合起作用的有丝分裂抑制剂。美坦辛最初从东非灌木Maytenus serrata中分离出来(美国专利号3,896,111)。随后，发现某些微生物也产生拟美坦辛，诸如美登醇和C-3美登醇酯(美国专利号4,151,042)。合成的美登醇及其衍生物和类似物公开于例如美国专利号4,137,230、4,248,870、4,256,746、4,260,608、4,265,814、4,294,757、4,307,016、4,308,268、4,308,269、4,309,428、4,313,946、4,315,929、4,317,821、4,322,348、4,331,598、4,361,650、4,364,866、4,424,219、4,450,254、4,362,663和4,371,533中。含有拟美坦辛的免疫缀合物及其治疗用途公开于例如美国专利号5,208,020、5,416,064和欧洲专利EP 0 425 235 B1中。Liu等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:8618-8623(1996)描述了免疫缀合物，其包含连接至针对人结肠直肠癌的单克隆抗体C242的命名为DM1的拟美坦辛。发现所述缀合物对培养的结肠癌细胞是高细胞毒性的，并在体内肿瘤生长测定中表现出抗肿瘤活性。

通过将抗体化学连接至拟美坦辛分子来制备抗体-拟美坦辛缀合物，而不会显著降低抗体或拟美坦辛分子的生物活性。每个抗体分子平均缀合3-4个拟美坦辛分子已经被证实在增强靶细胞的细胞毒性方面的效力，而不会对抗体的功能或溶解度产生负面影响，尽管预期甚至一个毒素/抗体分子也会增强细胞毒性胜过用裸抗体。拟美坦辛是本领域众所周知的，并且可以通过已知技术合成或从天然来源中分离。合适的拟美坦辛公开于例如美国专利号5,208,020以及上文提及的其它专利和非专利出版物中。优选的拟美坦辛是美登醇和在美登醇分子的芳族环中或在其它位置修饰的美登醇类似物，诸如各种美登醇酯。

另一种感兴趣的缀合物包含缀合至一个或多个卡利奇霉素分子的抗体。卡利奇霉素家族的抗生素能够在亚皮摩尔浓度产生双链DNA断裂。也可以使用的卡利奇霉素的结构类似物(Hinman等人,1993,Cancer Research 53:3336-3342；Lode等人,1998,CancerResearch 58:2925-2928)(美国专利号5,714,586；美国专利号5,712,374；美国专利号5,264,586；美国专利号5,773,001)。多拉司他汀10类似物诸如耳他汀E(AE)和单甲基耳他汀E(MMAE)可以用作本文公开的抗体或其变体的缀合物(Doronina等人,2003,Nat Biotechnol21(7):778-84；Francisco等人,2003 Blood 102(4):1458-65)。有用的酶活性毒素包括、但不限于白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa))、蓖麻蛋白A链、相思豆毒蛋白A链、蒴莲根毒蛋白A链、α-帚曲毒蛋白、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制剂、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制剂、白树毒素、丝林霉素、局限曲菌素、酚霉素、依诺霉素和单端孢菌毒素。参见，例如，PCT WO 93/21232。本公开内容进一步涵盖实施方案，其中在如本文中所述的TNFR2-特异性抗体与具有溶核活性的化合物(例如核糖核酸酶或DNA内切核酸酶诸如脱氧核糖核酸酶(DNA酶))之间形成缀合物或融合体。

在某些实施方案中，本文公开的抗体可以缀合至或可操作地连接至放射性同位素以形成放射性缀合物。多种放射性同位素可用于生产放射性缀合物抗体。例子包括、但不限于⁹⁰Y、¹²³I、¹²⁵I、¹³¹I、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、²¹¹At和²¹²Bi。

在某些实施方案中，本文描述的抗体可以缀合至治疗部分诸如细胞毒素(例如，细胞生长抑制性的或杀细胞的试剂)、治疗剂或放射性元素(例如，α-发射体、γ-发射体等)。细胞毒素或细胞毒性剂包括对细胞有害的任何试剂。例子包括紫杉醇(paclitaxel)/紫杉醇(paclitaxol)、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、依米丁、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷(tenoposide)、长春新碱、长春碱、秋水仙碱、多柔比星、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、普卡霉素、放线菌素D、1-脱氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔和嘌呤霉素及其类似物或同系物。一种示例性的细胞毒素是皂草素(可得自Advanced Targeting Systems,San Diego,CA)。治疗剂包括、但不限于抗代谢药(例如，甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氨烯咪胺)、烷化剂(例如，二氯甲基二乙胺、thioepa chlorambucil、美法仑、卡莫司汀(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)、cyclothosphamide、白消安、二溴甘露醇、链脲霉素、丝裂霉素C和顺二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂)、蒽环类抗生素(例如，柔红霉素(以前的道诺霉素)和多柔比星)、抗生素(例如，更生霉素(以前的放线菌素)、博来霉素、普卡霉素和安曲霉素(AMC)和抗有丝分裂剂(例如，长春新碱和长春碱)。

此外，在某些实施方案中，TNFR2-特异性抗体(包括如本文提供的其功能片段，诸如抗原结合片段)可以缀合至治疗部分诸如放射性物质或可用于缀合放射性金属离子的大环螯合剂。在某些实施方案中，所述大环螯合剂是1,4,7,10-四氮杂环十二烷-N,N’,N”,N”’-四乙酸(DOTA)，其可以通过接头分子附着于抗体。这样的接头分子是本领域中公知的并且描述于Denardo等人,1998,Clin Cancer Res.4:2483-90；Peterson等人,1999,Bioconjug.Chem.10:553；和Zimmerman等人,1999,Nucl.Med.Biol.26:943-50。

在某些实施方案中，抗体可以缀合至“受体”(诸如抗生蛋白链菌素)以用于肿瘤预靶向，其中将抗体-受体缀合物施用给患者，随后使用清除剂从循环中除去未结合的缀合物，并且然后施用缀合至细胞毒性剂(例如放射性核苷酸)的“配体”(例如抗生物素蛋白)。在某些实施方案中，所述抗体缀合至或可操作地连接至酶以便采用抗体依赖性的酶介导的前药疗法(ADEPT)。可以通过将抗体缀合或可操作地连接至前药激活酶来使用ADEPT，所述酶将前药(例如肽基化学治疗剂，参见PCT WO 81/01145)转化为活性抗癌药物。参见，例如，PCT WO 88/07378和美国专利号4,975,278。可用于ADEPT的免疫缀合物的酶组分包括任何能够以将前药转化为其更具活性的细胞毒性形式的方式作用于前药的酶。可用于这些和相关实施方案的方法中的酶包括、但不限于：碱性磷酸酶，其可用于将含磷酸盐的前药转化为游离药物；芳基硫酸酯酶，其可用于将含硫酸盐的前药转化为游离药物；胞嘧啶脱氨酶，其可用于将无毒的5-氟胞嘧啶转化为抗癌药物5-氟尿嘧啶；蛋白酶，诸如沙雷氏菌属蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、羧肽酶和组织蛋白酶(诸如组织蛋白酶B和L)，其可用于将含肽的前药转化为游离药物；D-丙氨酰基羧肽酶，其可用于转化含有D-氨基酸取代基的前药；碳水化合物切割酶诸如β-半乳糖苷酶和神经酰胺酶(neuramimidase)，其可用于将糖基化的前药转化为游离药物；β-内酰胺酶，其可用于将β-内酰胺衍生化的药物转化为游离药物；和青霉素酰胺酶，诸如青霉素V酰胺酶或青霉素G酰胺酶，其可用于将在其胺氮上分别用苯氧基乙酰基或苯基乙酰基基团衍生化的药物转化为游离药物。可替换地，具有酶活性的抗体，在本领域中也称为“抗体酶”，可以用于将前药转化为游离的活性药物(参见，例如，Massey,1987,Nature 328:457-458)。可以制备抗体-抗体酶缀合物用于将抗体酶递送至肿瘤细胞群体。

使用多种双功能的蛋白偶联剂诸如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯、亚氨基硫杂环戊烷(IT)、亚氨酸酯的双功能衍生物(诸如己二亚氨酸二甲酯HCL)、活性酯(诸如辛二酸二琥珀酰亚胺基酯)、醛(诸如戊二醛)、双叠氮基化合物(诸如双(对-叠氮基苯甲酰基)己烷二胺)、双重氮鎓衍生物(诸如双-(对-重氮鎓苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)，可以制备免疫缀合物。特定的偶联剂包括N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)(Carlsson等人,Biochem.J.173:723-737[1978])和N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶基硫基)戊酸酯(SPP)以提供二硫键。接头可以是促进一个或多个可切割组分的释放的“可切割接头”。例如，可以使用酸不稳定接头(Cancer Research 52:127-131(1992)；美国专利号5,208,020)。

本文还涵盖本公开内容的抗体(和多肽)的其它修饰。例如，抗体可以连接至多种非蛋白性聚合物之一，例如聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧乙烯、或聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物。还可以将抗体包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊(例如，分别为羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚甲基丙烯酸甲酯微胶囊)中，胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米囊)中，或大乳剂中。这样的技术公开在Remington’s Pharmaceutical Sciences,第16版,Oslo,A.,编,(1980)。

本文中使用的“载体”包括药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂，它们在所采用的剂量和浓度对暴露于其中的细胞或哺乳动物是无毒的。生理上可接受的载体经常是水性pH缓冲溶液。生理上可接受的载体的例子包括：缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖类、二糖类和其它碳水化合物类，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂诸如EDTA；糖醇诸如甘露醇或山梨醇；成盐的抗衡离子诸如钠；和/或非离子型表面活性剂诸如聚山梨酯20(TWEEN^TM)、聚乙二醇(PEG)和泊洛沙姆(PLURONICS^TM)等。

使用本领域技术人员已知的多种方法，如亲和力/结合测定(例如，表面等离子体共振、竞争性抑制测定)；使用体外或体内模型的细胞毒性测定、细胞生存力测定、细胞增殖或分化测定、癌细胞和/或肿瘤生长抑制，可以评估抗-TNFR2抗体的期望功能性质。其它测定可以试验本文描述的抗体阻断正常TNFR2介导的应答的能力。还可以试验本文所述的抗体的体外和体内效力。可以使用技术人员已知的非常确定的方案(参见例如，CurrentProtocols in Molecular Biology(Greene Publ.Assoc.Inc.&John Wiley&Sons,Inc.,NY,NY)；Current Protocols in Immunology(编著:John E.Coligan,Ada M.Kruisbeek,David H.Margulies,Ethan M.Shevach,Warren Strober 2001 John Wiley&Sons,NY,NY)或商购可得的试剂盒来进行这样的测定。

在某些实施方案中，本公开内容进一步提供了对本文所述的抗体或其抗原结合片段进行编码的分离的核酸，例如对本文所述的CDR或VH或VL结构域进行编码的核酸。核酸包括DNA和RNA。这些和相关的实施方案可以包括对本文所述的结合TNFR2的抗体进行编码的多核苷酸。本文中使用的术语“分离的多核苷酸”应当指基因组、cDNA或合成起源或它们的某种组合的多核苷酸，凭借其来源，所述分离的多核苷酸：(1)与在自然界中在其中发现所述分离的多核苷酸的多核苷酸的全部或部分无关，(2)连接至它在自然界中不会连接的多核苷酸；或(3)在自然界中不作为较大序列的部分存在。

术语“可操作地连接”是指所述术语所应用的组分处于允许其在合适条件下执行其固有功能的关系中。例如，与蛋白编码序列“可操作地连接”的转录控制序列与其连接，使得在与控制序列的转录活性相容的条件下实现蛋白编码序列的表达。

本文中使用的术语“控制序列”表示可以影响与其连接或可操作地连接的编码序列的表达、加工或细胞内定位的多核苷酸序列。这样的控制序列的性质可能取决于宿主生物体。在特定实施方案中，原核生物的转录控制序列可以包括启动子、核糖体结合位点和转录终止序列。在其它特定实施方案中，真核生物的转录控制序列可以包括启动子，所述启动子包含转录因子、转录增强子序列、转录终止序列和多腺苷酸化序列的一个或多个识别位点。某些实施方案中，“控制序列”可以包括前导序列和/或融合配偶体序列。

本文提及的术语“多核苷酸”是指单链或双链核酸聚合物。在某些实施方案中，包含多核苷酸的核苷酸可以是核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸或任一种类型的核苷酸的修饰形式。所述修饰包括碱基修饰诸如溴代尿苷，核糖修饰诸如阿糖胞苷和2’,3’-二脱氧核糖，和核苷酸间键修饰诸如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺基硫代磷酸酯(phosphoroanilothioate)、苯胺基磷酸酯(phoshoraniladate)和氨基磷酸酯。术语“多核苷酸”具体地包括DNA的单链和双链形式。

术语“天然存在的核苷酸”包括脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。术语“修饰的核苷酸”包括具有修饰的或取代的糖基的核苷酸等。术语“寡核苷酸键”包括寡核苷酸键诸如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺基硫代磷酸酯(phosphoroanilothioate)、苯胺基磷酸酯(phoshoraniladate)、氨基磷酸酯等。参见，例如，LaPlanche等人,1986,Nucl.Acids Res.,14:9081；Stec等人,1984,J.Am.Chem.Soc.,106:6077；Stein等人,1988,Nucl.Acids Res.,16:3209；Zon等人,1991,Anti-Cancer DrugDesign,6:539；Zon等人,1991,OLIGONUCLEOTIDES AND ANALOGUES:A PRACTICALAPPROACH,第87-108页(F.Eckstein编),Oxford University Press,Oxford England；Stec等人,美国专利号5,151,510；Uhlmann和Peyman,1990,Chemical Reviews,90:543，它们的公开内容特此通过引用并入用于任意目的。寡核苷酸可以包括可检测标记，以使得能够检测寡核苷酸或其杂交。

术语“载体”用于表示用于将编码信息转移到宿主细胞的任何分子(例如，核酸、质粒或病毒)。术语“表达载体”表示适于转化宿主细胞并含有指导和/或控制插入的异源核酸序列的表达的核酸序列的载体。如果存在内含子，则表达包括、但不限于诸如转录、翻译和RNA剪接等过程。

如本领域技术人员所理解的,多核苷酸可以包括基因组序列、基因组外和质粒编码的序列以及较小的工程化基因区段，其表达或可以适于表达蛋白、多肽、肽等。这样的区段可以是天然分离的或由技术人员合成地修饰。

还如熟练的技术人员所认识到的，多核苷酸可以是单链的(编码或反义)或双链的，并且可以是DNA(基因组、cDNA或合成的)或RNA分子。RNA分子可以包括：HnRNA分子，其含有内含子并以一对一方式对应于DNA分子；以及不含有内含子的mRNA分子。另外的编码或非编码序列可以但不必存在于根据本公开内容的多核苷酸内，并且多核苷酸可以但不必连接至其它分子和/或支持材料。多核苷酸可以包含天然序列或可以包含编码这样的序列的变体或衍生物的序列。

因此，根据这些和有关的实施方案，本公开内容也提供了编码本文描述的抗-TNFR2抗体的多核苷酸。在某些实施方案中，提供了多核苷酸，其包含一些或全部编码本文描述的抗体的多核苷酸序列以及这样的多核苷酸的互补体。

在其它相关的实施方案中，多核苷酸变体可以与编码本文所述的抗-TNFR2抗体的多核苷酸序列具有实质同一性。例如，使用本文所述的方法(例如，如下所述使用标准参数的BLAST分析)，多核苷酸可以是包含与参考多核苷酸序列(诸如编码本文描述的抗体的序列)相比具有至少70％序列同一性、优选地至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％或更高序列同一性的多核苷酸。本领域技术人员会认识到，通过考虑密码子简并性、氨基酸相似性、阅读框架定位等，可恰当地调整这些值以确定由两个核苷酸序列编码的蛋白的对应的同一性。

通常，多核苷酸变体将含有一个或多个置换、添加、缺失和/或插入，优选地使得相对于由本文具体阐述的多核苷酸序列编码的抗体，由变体多核苷酸编码的抗体的结合亲和力没有实质减小。

在某些实施方案中，多核苷酸片段可以包含与编码本文所述抗体的序列相同或互补的序列的各种长度的连续段或基本上由其组成。例如，提供了多核苷酸，其包含以下或基本上由以下组成：编码本文中公开的抗体或其抗原结合片段的序列的至少约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、200、300、400、500或1000个或更多个邻接核苷酸，以及介于之间的所有中间长度。将容易理解，在该背景下，“中间长度”是指所引用值之间的任何长度，诸如50、51、52、53等；100、101、102、103等；150、151、152、153等；包括200-500、500-1,000等中的所有整数。如本文描述的多核苷酸序列可以在一端或两端处延伸未在天然序列中发现的另外的核苷酸。该另外的序列可以由以下组成：在编码本文描述的抗体的多核苷酸的任一端处或编码本文描述的抗体的多核苷酸的两端处的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个核苷酸。

在某些实施方案中，提供了多核苷酸，其能够在中等到高严谨性条件下与对本文提供的抗体或其抗原结合片段进行编码的多核苷酸序列或其片段或其互补序列杂交。杂交技术是分子生物学领域众所周知的。出于例证的目的，用于试验本文提供的多核苷酸与其它多核苷酸的杂交的适当中等严谨条件包括：在5X SSC、0.5％SDS、1.0mM EDTA的溶液(pH8.0)中预洗涤；在50℃-60℃、5X SSC中杂交过夜；随后在65℃用含有0.1％SDS的2X、0.5X和0.2X SSC中的每一种洗涤两次各20分钟。本领域技术人员将理解，可以容易地操纵杂交的严谨性，诸如通过改变杂交溶液的盐含量和/或进行杂交的温度。例如，在某些实施方案中，合适的高严谨杂交条件包括上述的那些，除了将杂交温度升高到例如60℃-65℃或65℃-70℃之外。

在某些实施方案中，上述多核苷酸(例如，多核苷酸变体、片段和杂交序列)编码结合TNFR2的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，这样的多核苷酸编码抗体或其抗原结合片段或CDR，它们结合至少约50％、至少约70％和在某些实施方案中至少约90％的TNFR2，以及本文具体阐述的抗体序列。在其它实施方案中，这样的多核苷酸编码抗体或其抗原结合片段或CDR，它们结合TNFR2的亲和力大于本文所述的抗体的亲和力，例如定量结合至少约105％、106％、107％、108％、109％或110％，以及本文具体阐述的抗体序列。

如本文别处所述，通过常规方法可以确定代表性多肽(例如，本文提供的变体TNFR2-特异性抗体，例如，具有本文提供的抗原结合片段的抗体蛋白)的三维结构，使得用所选天然的或非天然的氨基酸对一个或多个氨基酸的置换、添加、缺失或插入可以被虚拟建模，以便确定如此衍生的结构变体是否保留本发明公开的物种的空间填充性能。熟练的技术人员已知多种计算机程序用于确定抗体内的适当氨基酸置换(或编码氨基酸序列的适当多核苷酸)，使得例如维持亲和力或实现更好的亲和力。

无论编码序列本身的长度如何，本文描述的多核苷酸或其片段可以与其它DNA序列(诸如启动子、多腺苷酸化信号、另外的限制性酶位点、多克隆位点、其它编码区段等)组合，使得它们的总长度可以显著变化。因此，考虑可以采用几乎任何长度的核酸片段，总长度优选地受限于在预期的重组DNA方案中制备和使用的容易程度。例如，考虑具有约10,000、约5000、约3000、约2,000、约1,000、约500、约200、约100、约50个碱基对长度等(包括所有中间长度)的总长度的示例性多核苷酸区段是有用的。

当对比多核苷酸序列时，如果两个序列中的核苷酸序列在对齐以获得最大对应性时是相同的，则所述两个序列被称为“同一的”，如下所述。通常通过在对比窗上对比序列来进行两个序列之间的对比，以鉴定和对比序列相似性的局部区域。本文中使用的“对比窗”表示至少约20个、通常约30至约75个、40至约50个连续位置的区段，在两个序列最佳比对后，可以将在该区段中的序列与相同数目的连续位置的参照序列进行对比。

使用生物信息学软件的

套件(DNASTAR,Inc.,Madison,WI)中的Megalign^TM程序，使用默认参数，可以进行序列的最佳比对以进行对比。这个程序体现了以下参考文献中描述的几个比对方案：Dayhoff,M.O.(1978)A model of evolutionarychange in proteins-Matrices for detecting distant relationships.In Dayhoff,M.O.(编)Atlas of Protein Sequence and Structure,National Biomedical ResearchFoundation,Washington DC第5卷,增刊3,第345-358页；Hein J.,Unified Approach toAlignment and Phylogenes,第626-645页(1990)；Methods in Enzymology第183卷,Academic Press,Inc.,San Diego,CA；Higgins,D.G.和Sharp,P.M.,CABIOS 5:151-153(1989)；Myers,E.W.和Muller W.,CABIOS 4:11-17(1988)；Robinson,E.D.,Comb.Theor11:105(1971)；Santou,N.Nes,M.,Mol.Biol.Evol.4:406-425(1987)；Sneath,P.H.A.和Sokal,R.R.,Numerical Taxonomy-the Principles and Practice of NumericalTaxonomy,Freeman Press,San Francisco,CA(1973)；Wilbur,W.J.和Lipman,D.J.,Proc.Natl.Acad.,Sci.USA 80:726-730(1983)。

可替换地，用于对比的序列的最佳比对可以通过Smith和Waterman,Add.APL.Math2:482(1981)的局部同一性算法、通过Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.48:443(1970)的同一性比对算法、通过Pearson和Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:2444(1988)的检索相似性方法、通过这些算法的计算机化实现(威斯康辛州遗传学软件包中的GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA和TFASTA，Genetics Computer Group(GCG),575Science Dr.,Madison,WI)或通过检查进行。

适用于确定序列同一性百分比和序列相似性的算法的一个例子是BLAST和BLAST2.0算法，它们分别描述于Altschul等人,Nucl.Acids Res.25:3389-3402(1977),和Altschul等人,J.Mol.Biol.215:403-410(1990)。BLAST和BLAST 2.0可以与例如本文描述的参数一起使用，以确定两个或更多个多核苷酸之间的序列同一性百分比。用于执行BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心公开获得。在一个示例性例子中，对于核苷酸序列，可以使用参数M(一对匹配残基的奖励得分；总是>0)和N(错配残基的罚分；总是<0)来计算累积得分。在以下情况下字采样在每个方向的延伸被停止：累计比对评分较其最大获得值偏离数量X；由于一个或多个负评分残基比对的累积，累计评分降至零或以下；或者到达任一序列的末端。BLAST算法参数W、T和X决定了比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(用于核苷酸序列)使用以下作为默认值：11的字长(W)和10的期望值(E)和BLOSUM62评分矩阵(参见Henikoff和Henikoff,Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:10915(1989))比对、50的(B)、10的期望值(E)、M＝5、N＝-4以及对两条链的对比。

在某些实施方案中，通过在至少20个位置的对比窗上对比两个最佳比对的序列来确定“序列同一性的百分比”，其中为了两个序列的最佳比对，在对比窗中的多核苷酸序列的部分可以包含与参考序列(其不包含添加或缺失)相比20％或更少、通常5至15％或10至12％的添加或缺失(即缺口)。如下计算百分比：确定在两个序列中出现相同核酸碱基的位置的数目以得到匹配位置的数目，将匹配的位置的数目除以参考序列(即窗口大小)中的位置的总数，并将结果乘以100以得出序列同一性的百分比。

本领域普通技术人员将认识到，由于遗传密码的简并性，存在许多编码本文所述抗体的核苷酸序列。这些多核苷酸中的一些与对结合TNFR2的抗体进行编码的天然或原始多核苷酸序列的核苷酸序列具有最小的序列同一性。尽管如此，本公开内容明确地涵盖由于密码子选择的差异而变化的多核苷酸。在某些实施方案中，特别涵盖已针对哺乳动物表达进行密码子优化的序列。

在某些实施方案中，诱变方案(诸如位点特异性诱变)可以用于制备本文所述的抗体的变体和/或衍生物。通过该方案，通过对其进行编码的潜在多核苷酸的诱变，可以在多肽序列中做出特异性修饰。这些技术提供了用于制备和试验序列变体的率直方案，例如通过将一个或多个核苷酸序列变化引入到多核苷酸中来结合上述考虑中的一个或多个。

位点特异性诱变允许通过使用对所期望的突变的DNA序列进行编码的特定寡核苷酸序列以及足够数目的相邻核苷酸来产生突变体，以提供具有足够大小和序列复杂性的引物序列，从而在被跨过的缺失连接部的两侧形成稳定双链体。突变可以用在所选多核苷酸序列中，以改善、改变、减少、修饰或以其它方式改变多核苷酸本身的特性和/或改变编码的多肽的特性、活性、组成、稳定性或基本序列。

在某些实施方案中，发明人考虑了对本文所公开的抗体或其抗原结合片段进行编码的多核苷酸序列的诱变，以改变编码的多肽的一种或多种特性，诸如抗体或其抗原结合片段的结合亲和力、或特定Fc区域的功能、或Fc区域对特定FcγR的亲和力。位点特异性诱变的技术是本领域众所周知的，并且广泛用于产生多肽和多核苷酸的变体。例如，位点特异性诱变经常用于改变DNA分子的特定部分。在这样的实施方案中，使用通常包含约14至约25个核苷酸或类似长度的引物，其中在序列的连接部的两侧上的约5至约10个残基被改变。

本领域技术人员会明白，位点特异性诱变技术经常采用以单链和双链形式存在的噬菌体载体。用于定位诱变的典型载体包括载体诸如M13噬菌体。这些噬菌体易于商购获得，并且其用途通常是本领域技术人员众所周知的。在消除将感兴趣的基因从质粒转移到噬菌体的步骤的定位诱变中也常规采用双链质粒。

一般而言，根据本文的定位诱变如下进行：首先获得单链载体或融化分开双链载体的两条链，所述双链载体在其序列内包括对所期望的肽进行编码的DNA序列。通常以合成的方式制备携带所期望的突变序列的寡核苷酸引物。然后，使该引物与单链载体退火，并且经受DNA聚合酶(诸如大肠杆菌聚合酶I克列诺片段)，以便完成携带突变的链的合成。因此，形成了异源双链体，其中一条链编码原始的非突变序列，并且第二条链携带期望的突变。然后，使用该异源双链体载体转化适当的细胞(诸如大肠杆菌细胞)，并且选择包括携带突变序列布置的重组载体的克隆。

使用定位诱变来制备对所选肽进行编码的DNA区段的序列变体，会提供产生潜在有用物种的方式，并且不意在是限制性的，因为存在可以获得肽的序列变体和对其进行编码的DNA序列的其它方式。例如，可以用诱变剂(诸如羟胺)处理对所期望的肽序列进行编码的重组载体，以获得序列变体。关于这些方法和方案的具体细节发现于以下文献的教导中：Maloy等人,1994；Segal,1976；Prokop and Bajpai,1991；Kuby,1994；和Maniatis等人,1982，出于所述目的，每篇通过引用并入本文。

本文中使用的术语“寡核苷酸定向诱变程序”表示这样的模板依赖性过程和载体介导的扩增：其导致特定核酸分子的浓度相对于其初始浓度的增加，或导致可检测信号的浓度的增加(诸如扩增)。本文中使用的术语“寡核苷酸定向诱变程序”意图表示涉及引物分子的模板依赖性延伸的过程。术语模板依赖性过程表示RNA或DNA分子的核酸合成，其中新合成的核酸链的序列由众所周知的互补碱基配对规则指示(参见，例如，Watson,1987)。通常，载体介导的方法涉及将核酸片段引入到DNA或RNA载体中、对载体进行克隆扩增以及回收扩增的核酸片段。这样的方法的例子由美国专利号4,237,224(特别通过引用整体并入本文)提供。

在产生多肽变体的另一个方案中，可以采用如美国专利号5,837,458中所描述的递归序列重组。在该方案中，进行了重组和筛选或选择的迭代循环以“进化”具有例如增加的结合亲和力的单独多核苷酸变体。某些实施方案还提供了呈质粒、载体、转录或表达盒的形式的构建体，所述构建体包含至少一种本文所述的多核苷酸。

在许多实施方案中，将编码主题单克隆抗体的核酸直接引入到宿主细胞中，并且在足以诱导编码的抗体的表达的条件下温育细胞。与本文提供的多肽和核酸序列联合使用本领域技术人员众所周知的标准技术，制备本公开内容的抗体。多肽序列可以用于确定对由此公开的特定抗体进行编码的适当核酸序列。根据本领域技术人员众所周知的标准方法，可以对核酸序列进行优化以反映各种表达系统的特定密码子“偏好”。

根据某些相关的实施方案，提供了包含一种或多种如本文所述的构建体的重组宿主细胞；对任何抗体、CDR、VH或VL结构域或其抗原结合片段进行编码的核酸；以及生产编码的产物的方法，所述方法包括从其编码核酸进行表达。通过在适当的条件下培养含有核酸的重组宿主细胞，可以方便地实现表达。在通过表达生产以后，可以使用任何合适的技术分离和/或纯化抗体或其抗原结合片段，并且然后根据需要使用。

本文提供的抗体或其抗原结合片段以及编码核酸分子和载体可以以基本上纯的或均质的形式分离和/或纯化(例如，从其天然环境中)，或在核酸的情况下，除了对具有所期望的功能的多肽进行编码的序列之外，不含或基本上不含来源的核酸或基因。核酸可以包含DNA和/或RNA，并且可以是完全或部分合成的。除非上下文另有要求，否则对本文所述的核苷酸序列的提及涵盖具有规定序列的DNA分子，并且涵盖具有规定序列(其中U置换T)的RNA分子。

用于在多种不同的宿主细胞中克隆和表达多肽的系统是众所周知的。合适的宿主细胞包括细菌、哺乳动物细胞、酵母和杆状病毒系统。本领域中可用于表达异源多肽的哺乳动物细胞系包括中国仓鼠卵巢细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾细胞、NSO小鼠黑素瘤细胞和许多其它细胞。一种常见的、优选的细菌宿主是大肠杆菌。

在本领域中已经确定地建立抗体和抗原结合片段在原核细胞(诸如大肠杆菌)中的表达。参见，例如，Pluckthun(Bio/Technology 9:545-551,1991)。在培养的真核细胞中的表达对于本领域技术人员而言也可用作生产抗体或其抗原结合片段的选择，参见最近的综述，例如Ref,M.E.(1993)Curr.Opinion Biotech.4:573-576；Trill J.J.等人(1995)Curr.Opinion Biotech 6:553-560。

可以选择或构建合适的载体，其含有适当的调节序列，包括启动子序列、终止子序列、多腺苷酸化序列、增强子序列、标记基因和适当的其它序列。载体可以是适当的质粒、病毒(例如，噬菌体)或噬菌粒。关于其它细节，参见，例如，Molecular Cloning:a LaboratoryManual:第2版,Sambrook等人,1989,Cold Spring Harbor Laboratory Press。许多已知的用于操纵核酸的技术和方案(例如，制备核酸构建体、诱变、测序、将DNA引入到细胞中和基因表达以及分析蛋白)详细描述在Current Protocols in Molecular Biology,第二版,Ausubel等人编,John Wiley&Sons,1992或者其后续更新。

术语“宿主细胞”用于表示这样的细胞：其中已经引入或能够向其中引入对本文所述抗体中的一种或多种抗体进行编码的核酸序列，并且其进一步表达或能够表达所选感兴趣的基因，诸如对任何本文所述的抗体进行编码的基因。该术语包括亲本细胞的后代，无论所述后代是否在形态上或遗传构成上与原始亲本相同，只要所选基因存在即可。因此，还涵盖包含将这样的核酸引入到宿主细胞中的方法。所述引入可以采用任何可利用的技术。对于真核细胞，合适的技术可以包括磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖、电穿孔、脂质体介导的转染以及使用逆转录病毒或其它病毒(例如，牛痘，或对于昆虫细胞，杆状病毒)的转导。对于细菌细胞，合适的技术可以包括氯化钙转化、电穿孔和使用细菌噬菌体的转染。在引入后可以引起或允许来自核酸的表达，例如，通过在基因表达的条件下培养宿主细胞。在某些实施方案中，核酸整合到宿主细胞的基因组(例如，染色体)中。根据标准技术，通过包括促进与基因组重组的序列可以促进整合。

在某些实施方案中，本公开内容还提供了一种方法，其包含在表达系统中使用如上所述的构建体以便表达特定多肽，诸如本文中所述的TNFR2-特异性抗体。术语“转导”用于表示基因从一个细菌向另一个细菌的转移，通常通过噬菌体。“转导”也表示通过逆转录病毒获取和转移真核细胞序列。术语“转染”用于表示细胞对外来或外源DNA的摄取，并且当外源DNA已经被引入细胞膜内时，细胞已经被“转染”。许多转染技术是本领域众所周知的并在本文中公开。参见，例如，Graham等人,1973,Virology 52:456；Sambrook等人,2001,MOLECULAR CLONING,A LABORATORY MANUAL,Cold Spring Harbor Laboratories；Davis等人,1986,BASIC METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY,Elsevier；和Chu等人,1981,Gene 13:197。这样的技术可以用于将一个或多个外源DNA部分引入到合适的宿主细胞中。

本文中使用的术语“转化”表示细胞的遗传特征的变化，并且当细胞已经被修饰为含有新的DNA时，细胞已经被转化。例如，在细胞从其天然状态被遗传修饰时，所述细胞被转化。在转染或转导后，转化DNA可以通过物理整合到细胞的染色体中而与细胞的DNA重组，或者可以作附加型元件短暂维持而不被复制，或者可以作为质粒独立地复制。在DNA随细胞分裂而被复制时，认为细胞已经被稳定转化。当与生物材料(诸如核酸分子、多肽、宿主细胞等)结合使用时，术语“天然存在的”或“天然的”表示在自然界中发现且不被人操纵的材料。类似地，本文中使用的非天然存在的”或“非天然的”表示未在自然界中发现或已经被人类在结构上修饰或合成的材料。

术语“多肽”“蛋白”和“肽”和“糖蛋白”互换使用，并且是指不限于任何特定长度的氨基酸的聚合物。该术语不排除修饰诸如肉豆蔻酰化、硫酸化、糖基化、磷酸化以及信号序列的添加或缺失。术语“多肽”或“蛋白”是指一个或多个氨基酸链，其中每个链包含通过肽键共价连接的氨基酸，并且其中所述多肽或蛋白可以包含多个通过肽键非共价地和/或共价地连接的链，具有天然蛋白的序列，也就是说，由天然存在的以及特别是非重组的细胞、或遗传工程改造的或重组的细胞产生的蛋白，并且包含具有天然蛋白的氨基酸序列的分子，或具有天然序列的一个或多个氨基酸的缺失、添加和/或置换的分子。术语“多肽”和“蛋白”具体涵盖本公开内容的结合TNFR2的抗体，或具有抗-TNFR2抗体的一个或多个氨基酸的缺失、添加和/或置换的序列。因此，“多肽”或“蛋白”可以包含一个(称为“单体”)或多个(称为“多聚体”)氨基酸链。

本文提及的术语“分离的蛋白”是指，主题蛋白(1)不含至少一些通常在自然界中与它一起发现的其它蛋白，(2)基本上不含来自相同来源的其它蛋白，例如来自相同物种，(3)由来自不同物种的细胞表达，(4)已经与至少约50％的在自然界中与它相关的多核苷酸、脂质、碳水化合物或其它物质分离，(5)不和与“分离的蛋白”天然缔合的蛋白部分缔合(通过共价或非共价相互作用)，(6)与在自然界中与它无关的多肽可操作地相关(通过共价或非共价相互作用)，或(7)在自然界中不存在。这样的分离的蛋白可以由基因组DNA、cDNA、mRNA或其它RNA编码，可以具有合成起源，或它们的任意组合。在某些实施方案中，所述分离的蛋白基本上不含有在其天然环境中发现的会干扰其使用(治疗、诊断、预防、研究或其它方式)的蛋白或多肽或其它污染物。

术语“多肽片段”表示多肽，其可以是单体的或多聚体的，其具有天然存在的或重组产生的多肽的氨基端缺失、羧基端缺失和/或内部缺失或置换。在某些实施方案中，多肽片段可以包含至少5至约500个氨基酸长度的氨基酸链。应当理解，在某些实施方案中，片段是至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、150、200、250、300、350、400或450个氨基酸长度。特别有用的多肽片段包括功能性结构域，所述功能性结构域包括抗体的抗原结合结构域或片段。在抗-TNFR2抗体的情况下，有用的片段包括、但不限于：CDR区，特别是重链或轻链的CDR3区；重链或轻链的可变区域；抗体链的一部分或仅仅包括两个CDR的其可变区域；等。

多肽可以包含在蛋白的N端处的信号(或前导)序列，其共翻译地或在翻译后指导蛋白的转移。本文所提供的包括信号肽的任何多肽氨基酸序列也被考虑用于在没有这样的信号或前导肽的情况下的本文所述的任何用途。如技术人员所认识到的，信号肽通常在加工过程中被切割并且不被包括在活性抗体蛋白中。多肽也可以在框架内融合或缀合至接头或其它序列，以便合成、纯化或鉴定多肽(例如，聚-His)或增强多肽与固体支持物的结合。

如果需要的话，也可以采用肽接头/间隔物序列将多个多肽组分分开足够的距离，以确保每个多肽折叠成其二级结构和/或三级结构。可以使用本领域众所周知的标准技术将这样的肽接头序列掺入到融合多肽中。

可以选择某些肽间隔物序列，例如基于：(1)其采用柔性伸展构象的能力；(2)其不能采用可以与第一多肽和第二多肽上的功能性表位相互作用的二级结构；和/或(3)可能与多肽功能性表位反应的疏水残基或带电残基的缺乏。

在一个示例性实施方案中，肽间隔物序列含有例如Gly、Asn和Ser残基。其它近中性氨基酸(诸如Thr和Ala)也可以被包括在间隔物序列中。

可以有用地用作间隔物的其它氨基酸序列包括在以下文献中公开的那些：Maratea等人,Gene 40:39 46(1985)；Murphy等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83:82588262(1986)；美国专利号4,935,233和美国专利号4,751,180。

其它示例性间隔物可以包括，例如，Glu-Gly-Lys-Ser-Ser-Gly-Ser-Gly-Ser-Glu-Ser-Lys-Val-Asp(SEQ ID NO:324)(Chaudhary等人,1990,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87:1066-1070)和Lys-Glu-Ser-Gly-Ser-Val-Ser-Ser-Glu-Gln-Leu-Ala-Gln-Phe-Arg-Ser-Leu-Asp(SEQ ID NO:325)(Bird等人,1988,Science 242:423-426)。

在某些实施方案中，当第一多肽和第二多肽具有可以用于将功能性结构域分开并防止空间干扰的非必需N-端氨基酸区域时，不需要间隔物序列。两个编码序列可以直接融合而不需要任何间隔物，或者通过使用柔性聚接头，其例如由重复1到3次的五聚体Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO:326)构成。这样的间隔物已经用于通过插入在VH与VL之间来构建单链抗体(scFv)(Bird等人,1988,Science 242:423-426；Huston等人,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:5979-5883)。

在某些实施方案中，肽间隔物被设计成使两个β-折叠之间的正确相互作用能够实现，从而形成单链抗体的可变区域。

在某些实施方案中，肽间隔物是在1至5个氨基酸之间、在5至10个氨基酸之间、在5至25个氨基酸之间、在5至50个氨基酸之间、在10至25个氨基酸之间、在10至50个氨基酸之间、在10至100个氨基酸之间或任何插入氨基酸范围。在某些实施方案中，肽间隔物包含约1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50或更多个氨基酸长度。

涵盖本文所述抗体的氨基酸序列修饰。例如，可能合乎需要的是，改善抗体的结合亲和力和/或其它生物学特性。例如，通过将适当的核苷酸变化引入到对抗体或其链进行编码的多核苷酸中，或通过肽合成，可以制备抗体的氨基酸序列变体。这样的修饰包括，例如，在抗体的氨基酸序列内的残基的缺失和/或插入和/或置换。可以进行缺失、插入和置换的任何组合以得到最终的抗体，前提条件是，最终的构建体具有期望的特征(例如，与TNFR2的高亲和力结合)。氨基酸变化还可以改变抗体的翻译后过程，诸如改变糖基化位点的数目或位置。上面关于本公开内容的多肽描述的变化和修饰中的任一种可以被包括在本公开内容的抗体中。

本公开内容提供了本文公开的抗体的变体。在某些实施方案中，这样的变体抗体或抗原结合片段或其CDR结合至少约50％、至少约70％和在某些实施方案中至少约90％的TNFR2，以及本文具体阐述的抗体序列。在其它实施方案中，这样的变体抗体或抗原结合片段或其CDR结合TNFR2的亲和力大于本文所述的抗体的亲和力，例如定量结合至少约105％、106％、107％、108％、109％或110％，以及本文具体阐述的抗体序列。

通过常规方法可以确定代表性多肽(例如，本文提供的变体TNFR2-特异性抗体，例如，具有本文提供的抗原结合片段的抗体蛋白)的三维结构，使得用所选天然的或非天然的氨基酸对一个或多个氨基酸的置换、添加、缺失或插入可以被虚拟建模，以便确定如此衍生的结构变体是否保留本发明公开的物种的空间填充性能。参见，例如，Donate等人,1994Prot.Sci.3:2378；Bradley等人,Science 309:1868-1871(2005)；Schueler-Furman等人,Science 310:638(2005)；Dietz等人,Proc.Nat.Acad.Sci.USA 103:1244(2006)；Dodson等人,Nature 450:176(2007)；Qian等人,Nature 450:259(2007)；Raman等人.Science 327:1014-1018(2010)。可以用于这些和相关实施方案(诸如用于本文提供的TNFR2-特异性抗体或其抗原结合结构域的合理设计)的计算机算法的一些另外的非限制性例子包括VMD，所述VMD是用于使用3-D图形和内置脚本显示、动画和分析大型生物分子系统的分子可视化程序(参见Theoretical and Computational Biophysics Group,University of Illinois at Urbana-Champagne,在ks.uiuc.edu/Research/vmd/的网站)。许多其它计算机程序是本领域已知的并可被技术人员得到，并且其允许从能量最小化构象的空间填充模型(范德华半径)确定原子尺度；试图确定对不同化学基团的高亲和力区域从而增强结合的GRID，计算数学比对的蒙地卡罗(Monte Carlo)搜索，以及评估力场计算的CHARMM(Brooks等人(1983)J.Comput.Chem.4:187-217)和AMBER(Weiner等人(1981)J.Comput.Chem.106:765)，和分析(也参见,Eisenfield等人(1991)Am.J.Physiol.261:C376-386；Lybrand(1991)J.Pharm.Belg.46:49-54；Froimowitz(1990)Biotechniques 8:640-644；Burbam等人(1990)Proteins 7:99-111；Pedersen(1985)Environ.HealthPerspect.61:185-190；和Kini等人(1991)J.Biomol.Struct.Dyn.9:475-488)。多种适当的计算计算机程序也是商购可得的，诸如从

(慕尼黑,德国)。

在某些实施方案中，抗-TNFR2抗体以及其人源化版本衍生自兔单克隆抗体，并且具体地使用APXiMAB^TM技术产生。这些抗体是有利的，因为其需要最小序列修饰，从而促进在使用突变谱系指导的(MLG)人源化技术进行人源化后保留功能性质(参见，例如，美国专利号7,462,697)。因此，用于制备本公开内容的抗-TNFR2抗体的示例性方法包括APXiMAB^TM兔单克隆抗体技术，其描述在例如美国专利5,675,063和7,429,487中。在这点上，在某些实施方案中，在兔中产生本公开内容的抗-TNFR2抗体。在特定实施方案中，能够与兔脾细胞或周围B淋巴细胞融合的兔衍生的永生B-淋巴细胞用于生产产生抗体的杂交细胞。永生B-淋巴细胞不会可检测地表达内源性免疫球蛋白重链，并且在某些实施方案中，可以含有改变的免疫球蛋白重链编码基因。

组合物和使用方法

本公开内容提供了包含TNFR2-特异性抗体或其抗原结合片段的组合物以及这样的组合物在多种治疗场合(包括癌症、炎症性疾病和自身免疫性疾病以及其它疾病的治疗)中的施用。

通过用于服务类似用途的任何被接受的药剂施用模式，可以实现以纯形式或在适当的药物组合物中施用本文所述的TNFR2-特异性抗体。通过将抗体或含有抗体的组合物与适当的生理上可接受的载体、稀释剂或赋形剂组合，可以制备药物组合物，并且可以配制成固体、半固体、液体或气态形式的制剂，诸如片剂、胶囊剂、散剂、颗粒、软膏剂、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶、微球和气雾剂。此外，其它药学活性成分(包括如本文别处所述的其它抗癌剂)和/或合适的赋形剂(诸如盐、缓冲液和稳定剂)可以但不必存在于组合物中。通过多种不同的途径，包括口服、胃肠外、鼻、静脉内、真皮内、皮下或局部，可以实现施用。优选的施用模式取决于待治疗或预防的病症的性质。在施用后减少、抑制、预防或延迟癌症的进展和/或转移的量被认为有效。

在某些实施方案中，施用的量足以导致肿瘤消退，如活肿瘤量的统计学显著降低(例如，肿瘤质量的至少50％降低)或改变的(例如，具有统计显著性的降低)扫描尺寸所指示。

精确的剂量和治疗持续时间是所治疗疾病的函数，并且可以使用已知的试验方案凭经验确定，或者通过在本领域已知的模型系统中试验组合物并从中推断来确定。也可以进行受控的临床试验。剂量也可以随着待缓解的病症的严重程度而变化。通常配制和施用药物组合物以发挥治疗上有用的效果，同时使不希望的副作用最小化。所述组合物可以一次性施用，或者可以分成许多较小的剂量以每隔一段时间施用。对于任何特定受试者，可以根据个体需要随时间调整特定剂量方案。

含有TNFR2-特异性抗体的组合物可以单独施用或与其它已知的癌症治疗(诸如辐射疗法、化学疗法、移植、免疫疗法、激素疗法、光动力学疗法等)联合施用。组合物还可以与抗生素联合施用。

因此，施用这些和相关药物组合物的典型途径包括、但不限于口服、局部、透皮、吸入、胃肠外、舌下、含服、直肠、阴道、玻璃体内和鼻内。本文中使用的术语胃肠外包括皮下注射、静脉内、肌肉内、胸骨内注射或输注技术。配制根据某些实施方案的药物组合物，从而在将组合物施用给患者后允许其中所含的活性成分是可生物利用的。将施用给受试者或患者的组合物可以采取一个或多个剂量单位的形式，其中例如，片剂可以是单次剂量单位，并且呈气雾剂形式的本文所述的TNFR2-特异性抗体的容器可以容纳多个剂量单位。制备这样的剂型的实际方法对于本领域技术人员来说是已知的或者是显而易见的；例如，参见Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第20版(Philadelphia College ofPharmacy and Science,2000)。在任何情况下，为了根据本文的教导治疗感兴趣的疾病或病症，待施用的组合物将含有治疗有效量的本公开内容的抗体。

药物组合物可以呈固体或液体的形式。在一个实施方案中，载体是微粒，使得组合物呈例如片剂或粉末形式。载体可以是液体，而组合物是例如口服油、可注射液体或气雾剂，其可用于例如吸入施用。当意图用于口服施用时，药物组合物优选地呈固体或液体形式，其中将半固体、半液体、混悬液和凝胶形式包括于在本文中视作固体或液体的形式中。

作为用于口服施用的固体组合物，可以将药物组合物配制成粉末、颗粒、压缩片剂、丸剂、胶囊、口香糖、糯米纸囊剂等。这样的固体组合物通常将含有一种或多种惰性稀释剂或可食用的载体。此外，以下一种或多种可能存在：粘合剂诸如羧甲纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素、黄蓍树胶或明胶；赋形剂诸如淀粉、乳糖或糊精，崩解剂诸如海藻酸、海藻酸钠、羧甲基淀粉钠(Primogel)、玉米淀粉等；润滑剂诸如硬脂酸镁或氢化植物油(Sterotex)；助流剂诸如胶体二氧化硅；甜味剂诸如蔗糖或糖精；矫味剂诸如薄荷、水杨酸甲酯或橙味剂；和着色剂。当药物组合物呈胶囊形式(例如，明胶胶囊剂)时，除了上述类型的材料外，它还可以含有液体载体诸如聚乙二醇或油。

药物组合物可以呈液体形式，例如，酏剂、糖浆剂、溶液、乳剂或混悬液。作为两个实例，液体可以用于口服施用或用于通过注射递送。当意图用于口服施用时，除了本发明化合物外，某些组合物还含有甜味剂、防腐剂、染料/着色剂和增味剂中的一种或多种。在意图通过注射施用的组合物中，可以包括表面活性剂、防腐剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、缓冲剂、稳定剂和等渗剂中的一种或多种。

液体药物组合物(无论它们是溶液、悬浮液还是其它类似形式)可以包括以下佐剂中的一种或多种：无菌稀释剂，诸如注射用水，盐水溶液，优选生理盐水、林格氏溶液、等渗氯化钠，不挥发性油诸如合成的甘油单酯或甘油二酯(其可以充当溶剂或悬浮介质)、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它溶剂；抗细菌剂，诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂诸如乙二胺四乙酸；缓冲剂诸如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张度的试剂，诸如氯化钠或葡萄糖。可以将胃肠外制剂包封在由玻璃或塑料制成的安瓿瓶、一次性注射器或多次剂量瓶中。生理盐水是一种示例性佐剂。可注射的药物组合物优选地是无菌的。

意图用于胃肠外或口服施用的液体药物组合物应含有一定量的如本文公开的TNFR2-特异性抗体，使得将获得合适的剂量。通常，这个量为组合物中至少0.01％的抗体。当意图用于口服施用时，这个量可以在组合物重量的0.1％至约70％之间变化。某些口服药物组合物含有约4％至约75％之间的抗体。在某些实施方案中，药物组合物和制剂被制备成使得胃肠外剂量单位在稀释前含有0.01至10重量％的抗体。

药物组合物可以意图用于局部施用，在这种情况下，载体可以适当地包含溶液、乳剂、软膏剂或凝胶基质。例如，基质可以包含以下一种或多种：矿脂、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蜡、矿物油、稀释剂诸如水和醇、以及乳化剂和稳定剂。增稠剂可以存在于用于局部施用的药物组合物中。如果意图用于透皮施用，则所述组合物可以包括透皮贴剂或离子透入装置。药物组合物可以意图用于直肠施用，例如以栓剂形式，其将在直肠中融化并释放药物。用于直肠施用的组合物可以含有油性基质作为合适的无刺激性赋形剂。这样的基质包括、但不限于羊毛脂、可可脂和聚乙二醇。

药物组合物可以包括各种改变固体或液体剂量单位的物理形式的材料。例如，所述组合物可以包括在活性成分周围形成包衣壳的材料。形成包衣壳的材料通常是惰性的，并且可以选自例如糖、紫胶和其它肠溶包衣试剂。可替换地，可以将活性成分包裹在明胶胶囊剂中。呈固体或液体形式的药物组合物可以包括与抗体结合并且由此辅助化合物的递送的药剂。可以以这种能力起作用的合适药剂包括其它单克隆或多克隆抗体、一种或多种蛋白或脂质体。药物组合物可以基本上由可以作为气雾剂施用的剂量单位组成。术语气雾剂用于表示从胶体性质的系统到由加压包装组成的系统的各种系统。递送可以是通过液化或压缩气体或通过分配活性成分的合适泵系统。气雾剂可以以单相、双相或三相系统递送，以便递送活性成分。气雾剂的递送包括必要的容器、激活剂、阀门、子容器等，它们一起可以形成试剂盒。本领域普通技术人员无需过多实验可以确定优选的气雾剂。

可以通过制药领域熟知的方法制备药物组合物。例如，可以如下制备意图通过注射施用的药物组合物：将包含本文所述的TNFR2-特异性抗体的组合物以及任选的盐、缓冲液和/或稳定剂中的一种或多种与无菌蒸馏水组合从而形成溶液。可以加入表面活性剂以促进均匀溶液或悬浮液的形成。表面活性剂是与抗体组合物非共价相互作用从而促进抗体在水性递送系统中的溶解或均匀悬浮的化合物。

所述组合物可以以治疗有效量施用，所述治疗有效量将根据多种因素而变化，所述因素包括所采用的特定化合物(例如，TNFR2-特异性抗体)的活性；化合物的代谢稳定性和作用长度；患者的年龄、体重、一般健康、性别和饮食；施用模式和时间；排泄速率；药物组合；特定障碍或病症的严重程度；以及正在接受治疗的受试者。通常，治疗上有效的每日剂量是(对于70kg哺乳动物)从约0.001mg/kg(即，0.07mg)至约100mg/kg(即，7.0g)；优选地治疗有效剂量是(对于70kg哺乳动物)从约0.01mg/kg(即，0.7mg)至约50mg/kg(即，3.5g)；更优选地治疗有效剂量是(对于70kg哺乳动物)从约1mg/kg(即，70mg)至约25mg/kg(即，1.75g)。

也可以在施用一种或多种其它治疗剂的同时、之前或之后施用包含本公开内容的TNFR2-特异性抗体的组合物。这样的联合疗法可以包括施用含有抗体和一种或多种另外活性剂的单一药物剂量制剂，以及施用包含在其自己的单独药物剂量制剂中的本公开内容的抗体和每种活性剂的组合物。例如，如本文所述的抗体和其它活性剂可以在单一口服剂量组合物(诸如片剂或胶囊剂)一起施用给患者，或者在单独口服剂量制剂中施用每种药剂。类似地，如本文所述的抗体和其它活性剂可以在单一胃肠外剂量组合物中(诸如在盐水溶液或其它生理上可接受的溶液中)一起施用给患者，或者在单独胃肠外剂量制剂施用每种药剂。在使用单独剂量制剂的情况下，包含抗体和一种或多种另外活性剂的组合物可以基本上同时(即，并行地)或在分开交错的时间(即，依次)和以任何顺序施用；联合疗法应被理解为包括所有这些方案。

因此，在某些实施方案中，也涵盖与一种或多种其它治疗剂联合施用本公开内容的抗-TNFR2抗体组合物。本领域可接受这样的治疗剂作为针对如本文所述的特定疾病状态(诸如类风湿性关节炎、炎症或癌症)的标准治疗。被涵盖的示例性治疗剂包括细胞因子、生长因子、类固醇、NSAID、DMARD、抗炎剂、化学治疗剂、放射治疗剂或其它活性剂和辅助剂。

在某些实施方案中，与一种或多种癌症免疫治疗剂联合施用本文中公开的抗-TNFR2抗体。在某些情况下，免疫治疗剂调节受试者的免疫应答，例如以增加或维持癌症相关的或癌症特异性的免疫应答，并且由此导致增加的免疫细胞抑制或癌细胞的减少。示例性的免疫治疗剂包括多肽(例如，抗体及其抗原结合片段)、配体和小肽及其混合物。免疫治疗剂还包括小分子、细胞(例如，免疫细胞诸如T-细胞)、各种癌症疫苗、基因治疗剂或其它基于多核苷酸的药剂，包括病毒药剂诸如溶瘤病毒，以及本领域已知的其它药剂。因此，在某些实施方案中，癌症免疫治疗剂选自免疫检验点调节剂、癌症疫苗、溶瘤病毒、细胞因子和基于细胞的免疫疗法中的一种或多种。

在某些实施方案中，癌症免疫治疗剂是免疫检验点调节剂。具体例子包括一种或多种抑制性免疫检验点分子的“拮抗剂”，以及一种或多种刺激性免疫检验点分子的“激动剂”。通常，免疫检验点分子是免疫系统的增强信号(共刺激分子)或减弱信号的组分，所述组分的靶向具有对癌症的治疗潜力，因为癌细胞可以扰乱免疫检验点分子的天然功能(参见，例如，Sharma和Allison,Science.348:56-61,2015；Topalian等人,Cancer Cell.27:450-461,2015；Pardoll,Nature Reviews Cancer.12:252-264,2012)。在某些实施方案中，免疫检验点调节剂(例如，拮抗剂、激动剂)“结合”或“特异性地结合”一种或多种免疫检验点分子，如本文中所述。

在某些实施方案中，免疫检验点调节剂是一种或多种抑制性免疫检验点分子的拮抗剂或抑制剂。示例性的抑制性免疫检验点分子包括程序性死亡-配体1(PD-L1)、程序性死亡-配体2(PD-L2)、程序性死亡1(PD-1)、T细胞激活的V-结构域Ig抑制物(VISTA)、细胞毒性的T-淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)、吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)、色氨酸2,3-双加氧酶(TDO)、T-细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3(TIM-3)、淋巴细胞激活基因-3(LAG-3)、B和T淋巴细胞减弱剂(BTLA)、CD160、具有Ig和ITIM结构域的T-细胞免疫受体(TIGIT)和信号调节蛋白α(SIRPα)。

在某些实施方案中，所述药剂是PD-1(受体)拮抗剂或抑制剂，其靶向已经被证实会恢复在肿瘤环境下的免疫功能(参见，例如，Phillips等人,Int Immunol.27:39-46,2015)。PD-1是属于免疫球蛋白超家族并且在T细胞和前-B细胞上表达的细胞表面受体。PD-1与两种配体PD-L1和PD-L2相互作用。PD-1作为抑制性免疫检验点分子起作用，例如通过减少或防止T细胞的激活，这进而降低自身免疫并促进自身耐受性。PD-1的抑制作用至少部分地通过促进淋巴结中的抗原特异性T细胞的细胞凋亡以及减少调节性T细胞(抑制性T细胞)的细胞凋亡的双重机制完成。PD-1拮抗剂或抑制剂的一些例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子：其特异性地结合PD-1并减少其免疫抑制活性中的一种或多种，例如，其下游信号传递或其与PD-L1的相互作用。PD-1拮抗剂或抑制剂的具体例子包括抗体纳武单抗、派姆单抗、PDR001、MK-3475、AMP-224、AMP-514和皮地利珠单抗、及其抗原结合片段(参见，例如，美国专利号8,008,449、8,993,731、9,073,994、9,084,776、9,102,727、9,102,728、9,181,342、9,217,034、9,387,247、9,492,539、9,492,540和美国申请号2012/0039906、2015/0203579)。

在某些实施方案中，所述药剂是PD-L1拮抗剂或抑制剂。如上面所指出的，PD-L1是PD-1受体的天然配体之一。PD-L1拮抗剂或抑制剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子：其特异性地结合PD-L1并减少其免疫抑制活性中的一种或多种，例如，其与PD-1受体的结合。PD-L1拮抗剂的具体例子包括抗体阿特朱单抗(MPDL3280A)、阿维鲁单抗(MSB0010718C)和度伐单抗(MEDI4736)、及其抗原结合片段(参见，例如，美国专利号9,102,725、9,393,301、9,402,899、9,439,962)。

在某些实施方案中，所述药剂是PD-L2拮抗剂或抑制剂。如上面所指出的，PD-L2是PD-1受体的天然配体之一。PD-L2拮抗剂或抑制剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子：其特异性地结合PD-L2并减少其免疫抑制活性中的一种或多种，例如，其与PD-1受体的结合。

在某些实施方案中，所述药剂是VISTA拮抗剂或抑制剂。VISTA是大约50kDa大小，并属于免疫球蛋白超家族(它有一个IgV结构域)和B7家族。它主要在白细胞中表达，且它的转录部分地受p53控制。有证据表明，VISTA可以作为T细胞上的配体和受体起作用来抑制T细胞效应子功能并维持周围耐受性。VISTA在肿瘤浸润淋巴细胞(诸如骨髓衍生的抑制细胞和调节性T细胞)中以高水平产生，并且抗体对它的阻断会导致在黑素瘤和鳞状细胞癌的小鼠模型中延迟的肿瘤生长。示例性的抗-VISTA拮抗剂抗体包括例如在WO 2018/237287(它通过通过引用整体并入)中描述的抗体。

在某些实施方案中，所述药剂是CTLA-4拮抗剂或抑制剂。CTLA4或CTLA-4(细胞毒性的T-淋巴细胞相关蛋白4)也被称作CD152(分化簇152)，是作为抑制性免疫检验点分子起作用的蛋白受体，例如，当它结合在抗原呈递细胞的表面上的CD80或CD86时，通过向T-细胞传递抑制性信号。CTLA-4拮抗剂或抑制剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子：其特异性地结合CTLA-4。特定例子包括抗体伊匹木单抗和曲美木单抗、及其抗原结合片段。据信伊匹木单抗的活性中的至少一些由表达CTLA-4的抑制物Treg的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)杀伤介导。

在某些实施方案中，所述药剂是IDO拮抗剂或抑制剂、或TDO拮抗剂或抑制剂。IDO和TDO是具有免疫抑制特性的色氨酸分解代谢酶。例如，已知IDO抑制T细胞和NK细胞，产生并激活Treg和骨髓衍生的抑制细胞，并且促进肿瘤血管生成。IDO和TDO拮抗剂或抑制剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子：其特异性地结合IDO或TDO(参见，例如，Platten等人,Front Immunol.5:673,2014)并且减少或抑制一种或多种免疫抑制活性。IDO拮抗剂或抑制剂的具体例子包括多西莫特(NLG-8189)、1-甲基-色氨酸(1MT)、β-咔啉(去甲哈尔满；9H-吡啶并[3,4-b]吲哚)、迷迭香酸和艾卡哚司他(参见，例如，Sheridan,Nature Biotechnology.33:321-322,2015)。TDO拮抗剂或抑制剂的具体例子包括680C91和LM10(参见，例如，Pilotte等人,PNAS USA.109:2497-2502,2012)。

在某些实施方案中，所述药剂是TIM-3拮抗剂或抑制剂。T-细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3(TIM-3)在激活的人CD4+T-细胞上表达并且调节Th1和Th17细胞因子。TIM-3还通过在与其配体半乳糖凝集素-9相互作用后触发细胞死亡来充当Th1/Tc1功能的负调节剂。TIM-3有助于抑制性肿瘤微环境，并且它的过表达与多种癌症的预后不良相关(参见，例如，Li等人,Acta Oncol.54:1706-13,2015)。TIM-3拮抗剂或抑制剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子：其特异性地结合TIM-3并减少或抑制其免疫抑制活性中的一种或多种。

在某些实施方案中，所述药剂是LAG-3拮抗剂或抑制剂。淋巴细胞激活基因-3(LAG-3)在激活的T-细胞、天然杀伤细胞、B-细胞和浆细胞样树突细胞上表达。它以与CTLA-4和PD-1类似的方式负调节T细胞的细胞增殖、激活和稳态(参见，例如，Workman和Vignali.European Journal of Immun.33:970-9,2003；和Workman等人,Journal ofImmun.172:5450-5,2004)，并且已经报告在Treg抑制功能中发挥作用(参见，例如，Huang等人,Immunity.21:503-13,2004)。LAG3还使CD8+T细胞保持在致耐受性状态并且与PD-1组合以保持CD8 T细胞消除。LAG-3拮抗剂或抑制剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子：其特异性地结合LAG-3并抑制其免疫抑制活性中的一种或多种。具体例子包括抗体BMS-986016、及其抗原结合片段。

在某些实施方案中，所述药剂是BTLA拮抗剂或抑制剂。B-和T-淋巴细胞减弱剂(BTLA；CD272)表达在T细胞激活期间诱导，并且它通过与肿瘤坏死家族受体(TNF-R)和B7细胞表面受体家族相互作用来抑制T细胞。BTLA是肿瘤坏死因子(受体)超家族成员14(TNFRSF14)的配体，也被称作疱疹病毒进入介质(HVEM)。BTLA-HVEM复合物负调节T细胞免疫应答，例如通过抑制人CD8+癌症特异性T细胞的功能(参见，例如，Derré等人,JClinInvest 120:157-67,2009)。BTLA拮抗剂或抑制剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子：其特异性地结合BTLA-4并减少其免疫抑制活性中的一种或多种。

在某些实施方案中，所述药剂是HVEM拮抗剂或抑制剂，例如，特异性地结合HVEM并且干扰其与BTLA或CD160的相互作用的拮抗剂或抑制剂。HVEM拮抗剂或抑制剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子：其特异性地结合HVEM，任选地减少HVEM/BTLA和/或HVEM/CD160相互作用，并且由此减少HVEM的免疫抑制活性中的一种或多种。

在某些实施方案中，所述药剂是CD160拮抗剂或抑制剂，例如，特异性地结合CD160并且干扰其与HVEM的相互作用的拮抗剂或抑制剂。CD160拮抗剂或抑制剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子：其特异性地结合CD160，任选地减少CD160/HVEM相互作用，并且由此减少或抑制其免疫抑制活性中的一种或多种。

在某些实施方案中，所述药剂是TIGIT拮抗剂或抑制剂。T细胞Ig和ITIM结构域(TIGIT)是在多种淋巴样细胞的表面上发现并且抑制抗肿瘤免疫(例如，通过Treg)的共抑制性受体(Kurtulus等人,J Clin Invest.125:4053-4062,2015)。TIGIT拮抗剂或抑制剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子：其特异性地结合TIGIT并减少其免疫抑制活性中的一种或多种(参见，例如，Johnston等人,Cancer Cell.26:923-37,2014)。

在某些实施方案中，所述药剂是SIRPα拮抗剂或抑制剂。SIRPα是主要由髓样细胞表达的调节性膜糖蛋白，它与广泛表达的跨膜蛋白CD47相互作用以负控制先天性免疫细胞的效应功能，诸如宿主细胞吞噬作用。某些癌细胞激活抑制性SIRPα-CD47信号传递途径，例如，通过过度表达CD47，并从而抑制巨噬细胞介导的吞噬作用。SIRPα抑制剂已被证明会减少癌症生长和转移，单独地或与其它癌症治疗协同作用(参见，例如，Yanagita,JCIInsight.2017年1月12日；2(1):e89140)。SIRPα拮抗剂或抑制剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子：其特异性地结合SIRPα并与SIRPα-CD47信号传递相互作用(参见上文出处)。

在某些实施方案中，所述免疫检验点调节剂是一种或多种刺激性免疫检验点分子的激动剂。示例性的刺激性免疫检验点分子包括CD40、OX40、糖皮质激素诱导的TNFR家族相关基因(GITR)、CD137(4-1BB)、CD27、CD28、CD226和疱疹病毒进入介质(HVEM)。

在某些实施方案中，所述药剂是CD40激动剂。CD40在抗原呈递细胞(APC)和一些恶性肿瘤上表达。其配体是CD40L(CD154)。在APC上，连接导致共刺激分子的上调，从而潜在地绕过在抗肿瘤免疫应答中对T细胞辅助的需要。CD40激动剂疗法在APC成熟和它们从肿瘤向淋巴结的迁移中起重要作用，从而导致提高的抗原呈递和T细胞激活。抗-CD40激动剂抗体在动物模型中产生实质性应答和持久性抗癌免疫，这是至少部分地由细胞毒性T细胞介导的效应(参见，例如，Johnson等人.Clin Cancer Res.21:1321-1328,2015；和Vonderheide和Glennie,Clin Cancer Res.19:1035-43,2013)。CD40激动剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子或配体：其特异性地结合CD40并增加其免疫刺激活性中的一种或多种。具体例子包括CP-870,893、达西珠单抗、Chi Lob 7/4、ADC-1013、CD40L、rhCD40L、及其抗原结合片段。CD40激动剂的具体例子包括、但不限于APX005(参见，例如，US 2012/0301488)和APX005M(参见，例如，US2014/0120103)。

在某些实施方案中，所述药剂是OX40激动剂。OX40(CD134)促进效应T细胞和记忆T细胞的增殖，并且抑制T调节细胞的分化和活性(参见，例如，Croft等人,Immunol Rev.229:173-91,2009)。其配体是OX40L(CD252)。由于OX40信号传递影响T-细胞激活和存活，因此它在淋巴结中的抗肿瘤免疫应答的启动中以及在肿瘤微环境中抗肿瘤免疫应答的维持中起重要作用。OX40激动剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子或配体：其特异性地结合OX40并增加其免疫刺激活性中的一种或多种。具体例子包括OX86、OX-40L、Fc-OX40L、GSK3174998、MEDI0562(人源化的OX40激动剂)、MEDI6469(鼠OX40激动剂)和MEDI6383(OX40激动剂)、及其抗原结合片段。

在某些实施方案中，所述药剂是GITR激动剂。糖皮质激素诱导的TNFR家族相关基因(GITR)增加T细胞繁殖，抑制Treg的抑制活性，并且延长T效应细胞的存活。GITR激动剂已经被证实通过Treg谱系稳定性的缺失来促进抗肿瘤应答(参见，例如，Schaer等人,CancerImmunol Res.1:320-31,2013)。这些不同机制表明，GITR在启动淋巴结中的免疫应答中以及在维持肿瘤组织中的免疫应答中起重要作用。它的配体是GITRL。GITR激动剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子或配体：其特异性地结合GITR并增加其免疫刺激活性中的一种或多种。具体例子包括GITRL、INCAGN01876、DTA-1、MEDI1873、及其抗原结合片段。

在某些实施方案中，所述药剂是CD137激动剂。CD137(4-1BB)是肿瘤坏死因子(TNF)受体家族的成员，并且CD137的交联增强T-细胞增殖、IL-2分泌、存活和细胞裂解活性。CD137介导的信号传递还保护T-细胞(诸如CD8+T-细胞)免于激活诱导的细胞死亡。CD137激动剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子或配体：其特异性地结合CD137并增加其免疫刺激活性中的一种或多种。具体例子包括CD137(或4-1BB)配体(参见，例如，Shao和Schwarz,J Leukoc Biol.89:21-9,2011)和抗体乌托鲁单抗，包括其抗原结合片段。

在某些实施方案中，所述药剂是CD27激动剂。CD27的刺激会增加原初T细胞的抗原特异性增殖并且有助于T细胞记忆和T细胞免疫的长期维持。它的配体是CD70。激动剂抗体对人CD27的靶向会刺激T细胞激活和抗肿瘤免疫(参见，例如，Thomas等人,Oncoimmunology.2014；3:e27255.doi:10.4161/onci.27255；和He等人.,J Immunol.191:4174-83,2013)。CD27激动剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子或配体：其特异性地结合CD27并增加其免疫刺激活性中的一种或多种。具体例子包括CD70和抗体伐立鲁单抗和CDX-1127(1F5)，包括其抗原结合片段。

在某些实施方案中，所述药剂是CD28激动剂。CD28在CD4+T细胞、一些CD8+T细胞上组成性地表达。其配体包括CD80和CD86，并且其刺激会增加T细胞增殖。CD28激动剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子或配体：其特异性地结合CD28并增加其免疫刺激活性中的一种或多种。具体例子包括CD80、CD86、抗体TAB08、及其抗原结合片段。

在某些实施方案中，所述药剂是CD226激动剂。CD226是与TIGIT共享配体的刺激性受体，并且与TIGIT相反，CD226的接合会增强T-细胞激活(参见，例如，Kurtulus等人,JClin Invest.125:4053-4062,2015；Bottino等人,J Exp Med.1984:557-567,2003；和Tahara-Hanaoka等人,Int Immunol.16:533-538,2004)。CD226激动剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子或配体(例如，CD112、CD155)：其特异性地结合CD226并增加其免疫刺激活性中的一种或多种。

在某些实施方案中，所述药剂是HVEM激动剂。疱疹病毒进入介质(HVEM)也被称作肿瘤坏死因子受体超家族成员14(TNFRSF14)，是TNF-受体超家族的人细胞表面受体。HVEM在多种细胞(包括T-细胞、APC和其它免疫细胞)上发现。不像其它受体，HVEM以高水平在静息T细胞上表达，并且在激活后被下调。已经证实，HVEM信号传递在T细胞激活的早期阶段以及在淋巴结中的肿瘤特异性淋巴细胞群的增殖期间起重要作用。HVEM激动剂的一般例子包括这样的抗体或抗原结合片段或小分子或配体：其特异性地结合HVEM并增加其免疫刺激活性中的一种或多种。

在某些实施方案中，与一种或多种双特异性或多特异性抗体联合施用本文中公开的抗-TNFR2抗体。例如，某些双特异性或多特异性抗体能够(i)结合并抑制一种或多种抑制性免疫检验点分子，并且还(ii)结合并激动一种或多种刺激性免疫检验点分子。在某些实施方案中，双特异性或多特异性抗体(i)结合并抑制PD-L1、PD-L2、PD-1、CTLA-4、IDO、TDO、TIM-3、LAG-3、BTLA、CD160和/或TIGIT中的一种或多种，并且还(ii)结合并激动CD40、OX40糖皮质激素诱导的TNFR家族相关基因(GITR)、CD137(4-1BB)、CD27、CD28、CD226和/或疱疹病毒进入介质(HVEM)中的一种或多种。

在某些实施方案中，与一种或多种癌症疫苗联合施用本文中公开的抗-TNFR2抗体。在某些实施方案中，所述癌症疫苗选自以下一种或多种：Oncophage；人乳头瘤病毒HPV疫苗任选地Gardasil或Cervarix；乙型肝炎疫苗，任选地Engerix-B、Recombivax HB或Twinrix；以及sipuleucel-T(Provenge)，或者包含选自以下一种或多种的癌抗原：人Her2/neu、Her1/EGF受体(EGFR)、Her3、A33抗原、B7H3、CD5、CD19、CD20、CD22、CD23(IgE受体)、MAGE-3、C242抗原、5T4、IL-6、IL-13、血管内皮生长因子VEGF(例如，VEGF-A)VEGFR-1、VEGFR-2、CD30、CD33、CD37、CD40、CD44、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CD152、CD200、CD221、CCR4、HLA-DR、CTLA-4、NPC-1C、腱糖蛋白、波形蛋白、胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)、甲胎蛋白、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、碳酸酐酶9(CA-IX)、癌胚抗原(CEA)、鸟苷酸环化酶C、NY-ESO-1、p53、存活素、整联蛋白αvβ3、整联蛋白α5β1、叶酸受体1、跨膜糖蛋白NMB、成纤维细胞激活蛋白α(FAP)、糖蛋白75、TAG-72、MUC1、MUC16(或CA-125)、磷脂酰丝氨酸、前列腺特异性的膜抗原(PMSA)、NR-LU-13抗原、TRAIL-R1、肿瘤坏死因子受体超家族成员10b(TNFRSF10B或TRAIL-R2)、SLAM家族成员7(SLAMF7)、EGP40泛癌抗原、B-细胞激活因子(BAFF)、血小板衍生的生长因子受体、糖蛋白EpCAM(17-1A)、程序性死亡-1、蛋白二硫键异构酶(PDI)、肝再生磷酸酶3(PRL-3)、前列腺酸性磷酸酶、Lewis-Y抗原、GD2(在神经外胚层起源的肿瘤上表达的二唾液酸神经节苷脂)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)和间皮素。

在某些实施方案中，与一种或多种溶瘤病毒联合施用本文中公开的抗-TNFR2抗体。在某些实施方案中，所述溶瘤病毒选自以下一种或多种：talimogene laherparepvec(T-VEC)、柯萨奇病毒A21(CAVATAK^TM)、Oncorine(H101)、pelareorep

Seneca Valley病毒(NTX-010)、Senecavirus SVV-001、ColoAd1、SEPREHVIR(HSV-1716)、CGTG-102(Ad5/3-D24-GMCSF)、GL-ONC1、MV-NIS和DNX-2401。

在某些实施方案中，所述癌症免疫治疗剂是细胞因子。示例性的细胞因子包括干扰素(IFN)-α、IL-2、IL-12、IL-7、IL-21和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。

在某些实施方案中，所述癌症免疫治疗剂是基于细胞的免疫疗法，例如，基于T-细胞的过继免疫疗法。在某些实施方案中，所述基于细胞的免疫疗法包含癌症抗原特异性的T-细胞，任选地离体衍生的T-细胞。在某些实施方案中，所述癌症抗原特异性的T-细胞选自以下一种或多种：嵌合抗原受体(CAR)修饰的T-细胞和T-细胞受体(TCR)修饰的T-细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)和肽诱导的T-细胞。在具体实施方案中，所述CAR修饰的T-细胞靶向CD-19(参见，例如，Maude等人,Blood.125:4017-4023,2015)。

在某些实施方案中，本文中公开的抗-TNFR2抗体用作过继免疫疗法(例如，自体免疫疗法)的一部分。因此，某些实施方案包括在有此需要的患者中治疗癌症的方法，所述方法包含：

(a)将离体衍生的免疫细胞与本文所描述的抗-TNFR2抗体或其抗原结合片段一起温育；和

(b)给所述患者施用所述自体免疫细胞。

在某些情况下，离体衍生的免疫细胞是从待治疗的患者获得的自体细胞。在某些实施方案中，所述自体免疫细胞包含淋巴细胞、天然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞和/或树突细胞(DC)。在某些实施方案中，所述淋巴细胞包含T细胞，任选地细胞毒性的T-淋巴细胞(CTL)。关于过继性T-细胞和NK细胞免疫疗法的描述，参见，例如，June,J ClinInvest.117:1466-1476,2007；Rosenberg和Restifo,Science.348:62-68,2015；Cooley等人,Biol.of Blood and Marrow Transplant.13:33-42,2007；以及Li和Sun,Chin JCancer Res.30:173-196,2018。在某些实施方案中，所述T-细胞包含如本文所述的针对至少一种“癌症抗原”的癌症抗原特异性T-细胞。在某些实施方案中，所述抗-TNFR2抗体或其抗原结合片段增强了过继转移的免疫细胞的效力。

在某些实施方案中，本文中公开的抗-TNFR2抗体可以与任何数目的化学治疗剂结合施用。化学治疗剂的例子包括：烷化剂诸如塞替派和环磷酰胺(CYTOXAN^TM)；磺酸烷基酯诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类诸如苯佐替派、卡波醌、美妥替派和乌瑞替派；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺、曲他胺、替派、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲密胺(trimethylolomelamine)；氮芥类诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、二氯甲基二乙胺、二氯甲基二乙胺氧化物盐酸盐、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；硝基脲类诸如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素诸如阿克拉霉素、放线菌素、氨茴霉素、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡利奇霉素、carabicin、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、更生霉素、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢药诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物诸如氟达拉滨、6-巯嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、5-FU；雄激素类诸如卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺类诸如氨鲁米特，米托坦，曲洛司坦；叶酸补充剂诸如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基酮戊酸；安吖啶；bestrabucil；比生群；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺；地吖醌；elformithine；依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；尼曲吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；

雷佐生；西佐喃；锗螺胺；替奴佐酸；三亚胺醌；2,2’,2”-三氯三乙胺；尿烷(urethan)；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖胞苷(“阿糖胞苷”)；环磷酰胺；塞替派；紫杉烷类，例如紫杉醇(

Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)和多西紫杉醇(

Rhne-Poulenc Rorer,Antony,法国)；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物诸如顺铂和卡铂；长春碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺维本；诺肖林；替尼泊苷；道诺霉素；氨基蝶呤；希罗达；伊班膦酸盐；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸衍生物诸如Targretin^TM(贝沙罗汀),Panretin^TM(阿利维A酸)；ONTAK^TM(地尼白介素2)；埃斯波霉素；卡培他滨；以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。在该定义中还包括抗激素剂(其起作用以调节或抑制激素对肿瘤的作用)诸如抗雌激素剂包括例如他莫昔芬、雷洛昔芬、抑制芳香酶的4(5)-咪唑、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬(法乐通)；和抗雄激素类诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

多种其它治疗剂可以与本文描述的抗-TNFR2抗体结合使用。在某些实施方案中，所述抗体与抗炎剂一起施用。抗炎剂或药物包括、但不限于类固醇和糖皮质激素(包括倍他米松、布地奈德、地塞米松、醋酸氢化可的松、氢化可的松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、泼尼松、曲安西龙)、非甾体类抗炎药(NSAIDS)包括阿司匹林、布洛芬、萘普生、甲氨蝶呤、柳氮磺吡啶、来氟米特、抗-TNF药物、环磷酰胺和麦考酚酯。

示例性的NSAID选自布洛芬、萘普生、萘普生钠、Cox-2抑制剂诸如

(罗非昔布)和

(塞来考昔)以及唾液酸盐。示例性的镇痛药选自对乙酰氨基酚、羟考酮、盐酸丙氧芬的曲马多。示例性的糖皮质激素选自可的松、地塞米松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙或泼尼松。示例性的生物应答调节剂包括针对细胞表面标志物(例如，CD4、CD5等)的分子、细胞因子抑制剂诸如TNF拮抗剂(例如，依那西普

阿达木单抗

和英夫利昔单抗

)、趋化因子抑制剂和粘附分子抑制剂。生物应答调节剂包括单克隆抗体以及重组形式的分子。示例性的DMARD包括硫唑嘌呤、环磷酰胺、环孢菌素、甲氨蝶呤、青霉胺、来氟米特、柳氮磺吡啶、羟氯喹、金(口服(金诺芬)和肌肉内)和米诺环素。

在某些实施方案中，本文所述的抗体与细胞因子结合施用。本文中使用的“细胞因子”是指由一个细胞群体释放的蛋白的通用词，所述细胞群体作用于另一种作为细胞间介质的细胞。这样的细胞因子的例子是淋巴因子、单核因子和传统的多肽激素。在细胞因子中包括生长激素诸如人生长激素、N-甲硫氨酰基人生长激素和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；松弛素原；糖蛋白激素诸如促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)和黄体生成素(LH)；肝生长因子；成纤维细胞生长因子；催乳素；胎盘催乳激素；肿瘤坏死因子-α和-β；副中肾管抑制物质；小鼠促性腺素相关的肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子；整联蛋白；血小板生成素(TPO)；神经生长因子诸如NGF-β；血小板-生长因子；转化生长因子(TGF)诸如TGF-α和TGF-β；胰岛素样生长因子-I和-II；促红细胞生成素(EPO)；骨诱导因子；干扰素诸如干扰素-α、β和-γ；集落刺激因子(CSF)诸如巨噬细胞-CSF(M-CSF)；粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)；和粒细胞-CSF(G-CSF)；白介素(IL)诸如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12；IL-15、肿瘤坏死因子诸如TNF-α或TNF-β；以及其它多肽因子，包括LIF和kit配体(KL)。本文中使用的术语细胞因子包括来自天然来源的蛋白或来自重组细胞培养物的蛋白，以及天然序列细胞因子的生物活性等同物。

在某些实施方案中，将包含本文所述的TNFR2-特异性抗体的组合物施用给罹患如本文所述的疾病的个体，所述疾病包括、但不限于癌症、炎性疾病和自身免疫性疾病。癌症包括、但不限于非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、急性髓样白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、胰腺癌、结肠癌、胃肠癌、前列腺癌、膀胱癌、肾癌、卵巢癌、子宫颈癌、乳腺癌、肺癌、鼻咽癌和恶性黑素瘤，以及其它癌症。因而，某些实施方案包括用于治疗具有癌症的患者的方法，所述方法包括给所述患者施用本文描述的组合物，由此治疗所述癌症。在某些实施方案中，所述癌症与异常的TNFR2表达和/或TNFR2拮抗剂介导的免疫抑制有关。在某些实施方案中，用于治疗癌症的抗体是TNFR2拮抗剂。

在某些实施方案中，所述炎症性或自身免疫性疾病与异常TNFR2表达有关。在某些实施方案中，所述炎症性或自身免疫性疾病与TNFR2激动剂介导的免疫激活有关。示例性的自身免疫性疾病包括、但不限于关节炎(包括类风湿性关节炎、反应性关节炎)、系统性红斑狼疮(SLE)、银屑病和炎性肠病(IBD)、脑脊髓炎、葡萄膜炎、重症肌无力、多发性硬化、胰岛素依赖型糖尿病、阿狄森氏病、乳糜泻、慢性疲劳综合症、自身免疫性肝炎、自身免疫性脱发、强直性脊柱炎、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、纤维肌痛、寻常型天疱疮、舍格伦综合征、川崎病、甲状腺机能亢进/格雷夫斯病、甲状腺功能减退/桥本氏病、子宫内膜异位症、硬皮病、恶性贫血、古德帕斯丘综合征、格-巴二氏综合征、韦格纳氏病、肾小球肾炎、再生障碍性贫血(包括多次输血的再生障碍性贫血患者)、阵发性夜间血红蛋白尿、骨髓增生异常综合征、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、埃文斯综合征、因子VIII抑制剂综合征、系统性脉管炎、皮肌炎、多发性肌炎和风湿热、自身免疫性淋巴组织增生综合征(ALPS)、自身免疫性大疱性类天疱疮、帕金森病、结节病、白癫风、原发性胆汁性肝硬化和自身免疫性心肌炎。

示例性的炎性疾病包括、但不限于克罗恩氏病、结肠炎、皮炎、银屑病、憩室炎、肝炎、肠易激综合征(IBS)、狼疮红斑状的、肾炎、帕金森病、溃疡性结肠炎、多发性硬化(MS)、阿尔茨海默氏病、关节炎、类风湿性关节炎、哮喘以及各种心血管疾病诸如动脉粥样硬化和血管炎。在某些实施方案中，所述炎性疾病选自类风湿性关节炎、糖尿病、痛风、冷吡啉相关的周期性综合征和慢性阻塞性肺障碍。在某些实施方案中，用于治疗炎症性或自身免疫性疾病的抗体是TNFR2激动剂。

例如，某些实施方案提供了治疗或减轻炎性疾病的严重程度的方法，所述方法包括给有此需要的患者施用治疗有效量的本文公开的包含激动性抗-TNFR2抗体的组合物。一些实施方案提供了治疗、预防移植物抗宿主病、或降低移植物抗宿主病的严重程度的方法，所述方法包括给有此需要的移植患者施用治疗有效量的本文公开的包含激动性抗-TNFR2抗体的组合物。一些实施方案提供了治疗、预防移植物排斥、或降低移植物排斥的严重程度的方法，所述方法包括给有此需要的移植患者施用治疗有效量的本文公开的包含激动性抗-TNFR2抗体的组合物。

某些实施方案提供了治疗、预防传染性疾病、或降低传染性疾病的严重程度的方法，所述方法包括给有此需要的患者施用治疗有效量的本文公开的包含激动性抗-TNFR2抗体的组合物。传染性疾病包括、但不限于病毒、细菌、真菌(任选地，酵母)和原生动物感染。

对于用于治疗人疾病的体内用途，本文所述的抗体通常在施用前掺入到药物组合物中。药物组合物包含与本文别处所述的生理上可接受的载体或赋形剂组合的本文所述的抗体中的一种或多种抗体。为了制备药物组合物，将有效量的一种或多种化合物与本领域技术人员已知适合于特定施用模式的任何药物载体或赋形剂混合。药物载体可以是液体、半液体或固体。用于胃肠外、真皮内、皮下或局部应用的溶液或悬浮液可以包括例如无菌的稀释剂(诸如水)、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成的溶剂；抗微生物剂(诸如苯甲醇和对羟基苯甲酸甲酯)；抗氧化剂(诸如抗坏血酸和亚硫酸氢钠)和螯合剂(诸如乙二胺四乙酸(EDTA))；缓冲剂(诸如乙酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐)。如果静脉内施用，则合适的载体包括生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)以及含有增稠剂和增溶剂(诸如葡萄糖、聚乙二醇、聚丙二醇及其混合物)的溶液。

可以用保护抗体免于从身体中快速消除的载体制备本文所述的包含TNFR2-特异性抗体的组合物，诸如限时释放制剂或包衣剂。这样的载体包括控释制剂，诸如，但不限于植入物和微囊化的递送系统以及可生物降解的、生物相容的聚合物，诸如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、聚原酸酯、聚乳酸以及本领域普通技术人员已知的其它物质。

本文提供了使用结合TNFR2的抗体的治疗方法。在一个实施方案中，给具有疾病的患者施用本公开内容的抗体，所述疾病涉及TNFR2的不适当表达，这在本公开内容的上下文中意在包括以异常的TNFR2表达或活性为特征的疾病和障碍，例如由于存在的蛋白的量的改变(例如，统计上显著的增加或减少)或突变蛋白的存在或两者。过量可能归因于任何原因，包括、但不限于在分子水平的过表达、在作用部位处的长期或累积外观、或TNFR2的活性相对于正常可检测到的活性的增加(例如，以统计上显著的方式)。相对于TNFR2信号传递事件的正常表达、出现或活性，可以测量这样的TNFR2过量，并且所述测量可以在本文所述的抗体的开发和/或临床试验中发挥重要作用。

具体地，本发明的抗体可用于治疗多种癌症，包括与TNFR2的表达或过表达相关的癌症。例如，某些实施方案提供了用于治疗癌症的方法，所述癌症包括、但不限于非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、胰腺癌、结肠癌、胃肠癌、前列腺癌、膀胱癌、肾癌、卵巢癌、子宫颈癌、乳腺癌、肺癌、鼻咽癌和恶性黑素瘤，所述方法包括给癌症患者施用治疗有效量的本文公开的TNFR2-特异性抗体。在施用后以统计上显著的方式(即，相对于适当对照，如本领域技术人员将知道的)抑制癌症、预防癌症或延迟癌症的进展和/或转移的量被认为有效。

一些实施方案提供了用于减少或预防癌症的转移的方法，所述癌症包括、但不限于非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、胰腺癌、结肠癌、胃肠癌、前列腺癌、膀胱癌、肾癌、卵巢癌、子宫颈癌、乳腺癌、肺癌、鼻咽癌和恶性黑素瘤，所述方法包括给癌症患者施用治疗有效量的本文公开的TNFR2-特异性抗体(例如，在施用后以统计上显著的方式(即，相对于适当对照，如本领域技术人员将知道的)抑制癌症、预防癌症或延迟癌症转移的量)。

一些实施方案提供了用于预防癌症的方法，所述癌症包括、但不限于非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、胰腺癌、结肠癌、胃肠癌、前列腺癌、膀胱癌、肾癌、卵巢癌、子宫颈癌、乳腺癌、肺癌、鼻咽癌和恶性黑素瘤，所述方法包括给癌症患者施用治疗有效量的本文公开的TNFR2-特异性抗体。

一些实施方案提供了用于治疗、预防非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、胰腺癌、结肠癌、胃肠癌、前列腺癌、膀胱癌、肾癌、卵巢癌、子宫颈癌、乳腺癌、肺癌、鼻咽癌和恶性黑素瘤、或者抑制它们的进展的方法，所述方法包括给罹患这些疾病中的一种或多种的患者施用治疗有效量的本文公开的TNFR2-特异性抗体。

在某些实施方案中，将抗-TNFR2抗体用于确定结合的抗原的结构，例如构象表位，所述结构然后可以用于开发具有或模拟该结构的化合物，例如通过化学建模和SAR方法。

一些实施方案部分地涉及用于检测表达TNFR2的细胞或组织的存在的诊断应用。因此，本公开内容提供了在样品中检测TNFR2的方法，诸如检测表达TNFR2的细胞或组织。这样的方法可以以多种已知的检测形式应用，包括、但不限于免疫组织化学(IHC)、免疫细胞化学(ICC)、原位杂交(ISH)、全标本包埋原位杂交(WISH)、荧光DNA原位杂交(FISH)、流式细胞计量术、酶免疫测定(EIA)和酶联免疫测定(ELISA)。

ISH是一种类型的杂交，其使用标记的互补DNA或RNA链(即一级结合剂)将特定DNA或RNA序列定位在细胞或组织的一部分或切片中(原位)，或者如果组织足够小，则定位在整个组织中(全标本包埋ISH)。本领域普通技术人员将理解，这与免疫组织化学不同，所述免疫组织化学使用抗体作为一级结合剂将蛋白定位在组织切片中。DNA ISH可以用在基因组DNA上以确定染色体的结构。荧光DNA ISH(FISH)可以例如用于医学诊断中以评估染色体完整性。RNA ISH(杂交组织化学)用于测量和定位在组织切片或全标本包埋内的mRNA和其它转录物。

在不同的实施方案中，本文所述的抗体缀合至可以直接地或间接地检测的可检测标记。在这点上，抗体“缀合物”表示共价连接至可检测标记的抗-TNFR2抗体。在本公开内容中，DNA探针、RNA探针、单克隆抗体、其抗原结合片段以及其抗体衍生物(诸如单链可变片段抗体或表位标记的抗体)都可以共价连接至可检测标记。在“直接检测”中，使用仅一种可检测抗体，即一级可检测抗体。因此，直接检测意味着缀合至可检测标记的抗体本身可以被检测，无需添加第二抗体(二级抗体)。

“可检测标记”是这样的分子或材料：其可以产生指示样品中的标记的存在和/或浓度的可检测的(诸如在视觉上、电子地或以其它方式)信号。当缀合至抗体时，可检测标记可以用于定位和/或定量特异性抗体所针对的靶标。由此，通过检测由可检测标记产生的信号，可以检测样品中靶标的存在和/或浓度。可以直接地或间接地检测可检测标记，并且可以组合使用与不同特异性抗体缀合的几种不同可检测标记，以检测一种或多种靶标。

可以直接检测的可检测标记的例子包括荧光染料和放射性物质和金属颗粒。相比之下，间接检测需要在施加一级抗体之后施加一种或多种另外的抗体，即二级抗体。因此，通过检测二级抗体或结合剂与一级可检测抗体的结合来进行检测。需要添加二级结合剂或抗体的一级可检测结合剂或抗体的例子包括酶可检测结合剂和半抗原可检测结合剂或抗体。

在某些实施方案中，可检测标记缀合至包含第一结合剂的核酸聚合物(例如，在ISH、WISH或FISH过程中)。在其它实施方案中，可检测标记缀合至包含第一结合剂的抗体(例如，在IHC过程中)。

可以缀合至在本公开内容的方法中使用的抗体的可检测标记的例子包括荧光标记、酶标记、放射性同位素、化学发光标记、电化学发光标记、生物发光标记、聚合物、聚合物颗粒、金属颗粒、半抗原和染料。

荧光标记的例子包括5-(和6)-羧基荧光素、5-或6-羧基荧光素、6-(荧光素)-5-(和6)-甲酰氨基己酸、异硫氰酸荧光素、罗丹明、四甲基罗丹明和染料诸如Cy2、Cy3和Cy5、任选地被取代的香豆素包括AMCA、PerCP、藻胆蛋白包括R-藻红蛋白(RPE)和别藻红蛋白(APC),德克萨斯红、普林斯顿红、绿色荧光蛋白(GFP)及其类似物、以及R-藻红蛋白或别藻红蛋白的缀合物、无机荧光标记诸如基于半导体材料的颗粒如包被的CdSe纳米微晶。

聚合物颗粒标记的例子包括聚苯乙烯、PMMA或硅胶的微颗粒或胶乳颗粒，其可以嵌入荧光染料或含有染料、酶或底物的聚合物胶束或胶囊。

金属颗粒标记的例子包括可以通过银染色剂转换的金颗粒和包被的金颗粒。半抗原的例子包括DNP、异硫氰酸荧光素(FITC)、生物素和地高辛配基。酶标记的例子包括辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(ALP或AP)、β-半乳糖苷酶(GAL)、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、β-N-乙酰基氨基葡萄糖苷酶、β-葡糖醛酸糖苷酶、转化酶、黄嘌呤氧化酶、荧火虫萤光素酶和葡萄糖氧化酶(GO)。辣根过氧化物酶的常用底物的例子包括3,3’-二氨基联苯胺(DAB)、增镍二氨基联苯胺、3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)、联苯胺二盐酸盐(BDHC)、Hanker-Yates试剂(HYR),Indophane蓝(IB)、四甲基联苯胺(TMB)、4-氯-1-萘酚(CN)、α-萘酚派洛宁(α-NP)、邻二茴香胺(OD)、5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯(BCIP)、硝基蓝四唑(NBT)、2-(对碘苯基)-3-对硝基苯基-5-苯基四氮唑氯化物(INT)、四硝基蓝四唑(TNBT)、5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-半乳糖苷/亚铁-铁氰化物(BCIG/FF)。

碱性磷酸酶的常用底物的例子包括萘酚-AS-B1-磷酸/坚牢红TR(NABP/FR)、萘酚-AS-MX-磷酸/坚牢红TR(NAMP/FR)、萘酚-AS-B1-磷酸/-坚牢红TR(NABP/FR)、萘酚-AS-MX-磷酸/坚牢红TR(NAMP/FR)、萘酚-AS-B1-磷酸/新品红(NABP/NF)、溴氯吲哚基磷酸酯/硝基蓝四唑(BCIP/NBT)、5-溴-4-氯-3-吲哚基-b--d-吡喃半乳糖苷(BCIG)。

发光标记的例子包括鲁米诺、异鲁米诺、吖啶酯、1,2-二氧杂环丁烷和吡啶并哒嗪。电化学发光标记的例子包括钌衍生物。放射性标记的例子包括碘、钴、硒、氚、碳、硫和磷的放射性同位素。

可检测标记可以连接至本文所述的抗体或任意其它分子，所述分子特异性地结合感兴趣的生物标志物(例如，抗体、核酸探针或聚合物)。此外，本领域普通技术人员将理解，可检测标记还可以缀合至第二、和/或第三、和/或第四、和/或第五结合剂或抗体等。此外，熟练的技术人员将理解，用于表征感兴趣的生物标志物的每一种另外的结合剂或抗体可以充当信号放大步骤。可以在视觉上检测生物标志物，例如使用光学显微术、荧光显微术、电子显微术，其中可检测物质是例如染料、胶体金颗粒、发光试剂。使用分光光度计也可以检测结合生物标志物的在视觉上可检测的物质。在可检测物质是放射性同位素的情况下，可以通过放射自显影术在视觉上或使用闪烁计数器非视觉地进行检测。参见，例如，Larsson,1988,Immunocytochemistry:Theory and Practice,(CRC Press,Boca Raton,Fla.)；Methods in Molecular Biology,第80卷1998,John D.Pound(编)(Humana Press,Totowa,N.J.)。

本公开内容进一步提供了用于检测样品中的TNFR2或表达TNFR2的细胞或组织的试剂盒，其中所述试剂盒含有至少一种如本文所述的抗体、多肽、多核苷酸、载体或宿主细胞。在某些实施方案中，试剂盒可以包含缓冲液、酶、标记、底物、珠子或向其附着本公开内容的抗体的其它表面等，以及使用说明书。

实施例

实施例1

免疫接种和初步筛选

为了制备用于筛选的抗体，对四只新西兰白兔进行免疫，并随后用人293-TNFR2过表达细胞或人TNFR2-Fc融合蛋白强化。所有兔子都具有对人TNFR2特异性的血清滴度，并用于使用APXiMAB^TM技术产生杂交瘤和通过B细胞培养方法(RevMAb)产生抗体。初步筛选后，鉴定出460种抗体，其与CHO-TNFR2过表达细胞结合。鉴定潜在先导候选物的筛选过程如图2所示。

然后使用来自杂交瘤和B细胞培养物的上清液在基于ELISA的受体配体结合测定中筛选可以阻断TNF-α与可溶性TNFR2-His(Sino Biological；10417-H08H)的结合的抗体。在鉴定的460种抗体中，173种显示TNF-α与TNFR2的结合的抑制，其大于最大结合的75％。

选择110种抗体进入人IgG嵌合阶段。在从B细胞克隆发展而来的110种抗体中，28个克隆未能扩增。82个剩余克隆的重链和轻链被扩增并直接克隆到人IgG1主链上。表达了82种嵌合抗体，并且上清液关于结合基于细胞的TNFR2检测为阳性，并进行了测序。从通过初始筛选漏斗的杂交瘤鉴定出的所有10种抗体都是嵌合的，进行测序并向前推进。

采用序列分析(独特性和有限的潜在开发倾向，诸如糖基化、脱氨等和CDR3长度)从B细胞培养物中选择25种抗体进行进一步研究。所有10个杂交瘤克隆均独立于序列分析进行推进。来自杂交瘤的两组克隆具有相同序列，如在总结表(表E1)中用星号或井号所示(8G11.5＝37D1.4和28B7.3＝37H4.1)。为了表达重组嵌合抗体，将重(H)和轻(L)链质粒共转染到293细胞中，并在7-10天后收获上清液。将抗体通过蛋白A柱纯化并在PBS中透析。

人嵌合抗体的体外表征.关于与可溶性的和细胞表达的人TNFR2、可溶性的食蟹猴和小鼠TNFR2、以及基于ELISA的TNF-α阻断的结合，筛选了嵌合抗体。图3A-3D中的数据集显示了第一组抗体，且图4A-4D中的数据集显示了第二组抗体。还使用来自PLAD或CRD1(氨基酸17-54；TCRLREYYDQTAQMCCSKCSPGQHAKVFCTKTSDTVCD)、CRD2(氨基酸58-93；DSTYTQLWNWVPECLSCGSRCSSDQVETQACTREQN)、CRD3(氨基酸106-133；LSKQEGCRLCAPLRKCRPGFGVARPGTE和氨基酸114-133；LCAPLRKCRPGFGVARPGTE)和CRD4(肽5；氨基酸146-174；和TFSNTTSSTDICRPHQICNVVAIPGNAS)结构域的肽，在肽结合ELISA中筛选抗体的初步表位鉴定(epitope binning)(参见下面表E1中的数据总结)。

基于结合亲和力、食蟹猴交叉反应性、阻断能力和捕获一系列表位框的能力(在表E1中以粗体突出显示)，选择35种抗体中的十五种用于人源化。在人源化的15个克隆中，三个克隆没有通过ELISA阻断TNF-α结合，但与肽五结合，并假设通过阻断TNFR2三聚化来阻断细胞表面上的TNF-α。取消选择具有相同序列且没有有效结合食蟹猴或人TNFR2或阻断TNF-α结合的克隆。

在人IgG₁框架上使用专有的突变谱系引导(MLG)技术对抗体进行人源化。15种抗体中的一种在ELISA上失去与抗原的结合，且无法回收。关于可溶性的人TNFR1和TNFR2结合、基于细胞的TNFR2结合、食蟹猴TNFR2结合和TNF-α阻断，通过ELISA和FACS筛选其它14种抗体(参见图5-8)。基于细胞的ELISA，在嵌合阶段结合肽5并且不阻断TNF-α的抗体不会阻断TNF-α结合，因此被取消选择。关于过表达TNFR2的CHO细胞系的ADCC，使用Promega ADCCJurkat NFAT报告试剂盒试验了保持强烈的基于细胞的TNFR2结合的抗体(图9A-9B)。人源化候选物的特征如下表E2所示。五种先导候选物(以粗体突出显示)符合期望的标准。

先导候选物的选择和备份.完成了对过表达细胞系的ADCC测定，以及TNFR家族成员特异性、细胞因子释放测定和可开发性分析，以帮助选择2种进入CLD的先导候选物。下面表E3显示了人源化百分比分析。

实施例2

克隆h600-25-71和h600-25-108的结合和活性特征

试验了人源化克隆h600-25-71和h600-25-108的结合和活性特征。为了试验与TNFR家族成员的结合，将靶蛋白在4℃以1μg/mL在ELISA平板上包被过夜。将平板洗涤，封闭，并将抗体以指定的浓度加入在室温保持1小时。以约1ug/mL使用每种蛋白的阳性对照抗体。将抗体洗涤并用抗-人IgG HRP检测1小时。使用TMB底物使测定显影10分钟。对于细胞结合，将从血沉棕黄层纯化的人CD4+T细胞在平底平板中与抗-CD3/CD28一起培养24小时。将细胞收获并关于生存力、CD4、CD25和FOXP3进行染色。使用抗-人IgG APC检测试验抗体染色。在CD4+CD25hiFOXP3+调节性T细胞上评价试验抗体的结合滴定，并绘制为结合百分比。

图10A-10F中的结果表明，25-71和25-108以高亲和力结合TNFR2(包括人TNFR2)蛋白(10C)、食蟹猴TNFR2蛋白(10D)、细胞表达的人TNFR2(10E)和激活的人T_reg(10F)。图11A-11E中的结果表明，25-71和25-108对TNFR2具有特异性，且不结合TNFR1、HVEM、CD40、DR6或OPG。IgG同种型对照以三角形显示，且阳性对照显示为星号。

为了通过抗体依赖性的细胞的细胞毒性(ADCC)试验抗体对表达TNFR2的细胞的作用，如上所述进行ADCC测定。如在图12A-12B中所示，25-71和25-108诱导了针对表达TNFR2的细胞(包括肿瘤细胞)的ADCC(12B)。

为了试验抗体对T_reg的影响，从白细胞减少室中分离出PBMC。将2x10⁵个PBMC用0.1μg/mL抗-CD3(克隆:OKT3)刺激，并在96孔平底板中在37℃在控湿的5％CO2培养箱中用抗-TNFR2抗体处理16-24小时。将细胞在完全RPMI(10％热灭活的FBS、1X青霉素-链霉素、1mM丙酮酸钠、1X MEM非必需氨基酸、50mMβ-巯基乙醇)中培养。收获细胞，并通过流式细胞计量术将CD4 Treg鉴定为CD4+CD25hi FoxP3+。如在图13A-13B中所示，25-71和25-108消除了来自人PBMC的T_reg。两幅图显示了5个供体的平均值，其中每种条件均一式两份地执行。％消除＝100*(无消除*-实验)/(无消除)，其中无消除表示仅用抗-CD3刺激的PBMC。

为了试验抗体对表达TNFR2的肿瘤细胞的巨噬细胞介导的抗体依赖性的细胞的吞噬作用(ADCP)的影响(参见图14A)，通过将人CD14+单核细胞与10μg/mL M-CSF一起在37℃培养箱和5％CO2中培养6天，产生巨噬细胞。将得到的巨噬细胞以及过表达TNFR2的CHO细胞(靶标)分别用CellTrace CFSE和Violet标记。将靶细胞与抗-TNFR2抗体或同种型对照一起在冰上温育30分钟。将标记的细胞在含有低人IgG血清的RPMI中以100,000个巨噬细胞:50,000个靶细胞的比例共培养3小时。使用Cytoflex LX流式细胞计分析细胞。如在图14B中所示，25-71和25-108诱导了巨噬细胞介导的TNFR2+细胞的ADCP。如下计算吞噬百分比：((％双阳性细胞)/(总％靶细胞)*100)。

为了试验抗体对CD8 T细胞的骨髓衍生的抑制细胞(MDSC)抑制的影响，通过将人PBMC与786-O肿瘤细胞系共培养7天，产生MDSC。通过使用微珠(Miltenyi)进行阳性选择，分离CD33+MDSC。将自体CD8 T细胞用细胞痕量紫标记，并以4:1比例与MDSC一起在CD3/CD28刺激下共培养3天。3天后，将细胞用生存力染料标记，并使用紫染料稀释液测量CD8 T细胞增殖。参见图15A中的实验概要。

如在图15B-15C中所示，25-71和25-108显著减轻了CD8 T细胞的MDSC抑制。如下计算抑制百分比：[单独的T细胞-(T+MDSC)]/单独的TX 100。将数据绘制为平均值±SEM。使用黑色条绘制IgG1同种型，25-71为灰色条，且25-108为空心条。使用ANOVA和*＝P<0.01和**＝P<0.001，产生统计数据。

为了进一步试验抗体对调节性T细胞的影响，使用磁珠(Miltenyi)通过阴性选择从衍生自健康人血沉棕黄层的PBMC分离出CD4 T细胞。根据生产商的方案(Miltenyi)使用CD25磁珠消除CD25+T_reg，并将得到的CD4细胞(T应答细胞)冷冻保存直到测定方案(setup)。将来自自体供体的T_reg按照生产商的方案进行分离，并使用Treg扩增珠子(DynaBeads)和100nM雷帕霉素扩增15天。在测定方案前一天，将T应答细胞融化并静置过夜。次日，将T应答细胞用细胞痕量紫标记，并以指定的比例加给在含有10ug/mL 25-71或同种型对照的圆底平板中的T_reg。加入T_reg检查珠子(Miltenyi)，并将测定温育5天。在第5天收获细胞，用生存力染料染色，并在MACSQuant分析仪上分析。将T细胞抑制百分比计算为(仅受刺激的T应答者的增殖-试验值的增殖)/(仅受刺激的T应答者)。在至少四个供体上进行实验。如在图18A-18E中所示，克隆25-71逆转效应T细胞的T_reg抑制。

来自前述实验的结合亲和力(KD)和EC₅₀值总结在下面表E4中。

为了试验抗体在小鼠中的影响，给雌性裸鼠皮下(SQ)注射Colo205肿瘤细胞。在肿瘤体积为100mm3时，如图19A所示处理小鼠。相对于对照，用抗体25-71观察到显著的抗肿瘤作用(48％TGI)(参见图19B)。相对于对照，在治疗组中没有观察到体重变化(参见图19C)。

实施例3

克隆25-71的表位位点的鉴定

进行实验以高分辨率确定TNFR2/25-71复合物的表位。

首先，对单独的TNFR2样品和单独的克隆25-71样品进行高质量MALDI分析以验证完整性和聚集水平。使用配备HM4相互作用模块(CovalX)的Autoflex II MALDI ToF质谱仪(Bruker)进行测量，该模块含有一个检测系统，其旨在优化高达2Mda的检测，具有纳摩尔灵敏度。将TNFR2样品粉末用蒸馏水溶解以达到1mg/ml的浓度，并移取20μl的TNFR2和克隆25-71的每种蛋白样品以制备8个最终体积为10μl的稀释液。然后，将1μl的每种稀释液与1μl的基质混合，所述基质由在乙腈/水(1:1，v/v)、TFA 0.1％(K200 MALDI Kit)中的重结晶的芥子酸基质(10mg/ml)组成。混合后，将1μl的每个样品点在MALDI平板(SCOUT 384)上。在室温结晶后，将平板引入MALDI质谱仪并立即在高质量MALDI模式下进行分析。

交联实验.交联实验允许通过高质量MALDI质谱法直接分析非共价相互作用。通过将含有非共价相互作用的蛋白样品与交联混合物混合(Bich等人,Anal.Chem.82(1),第172-179页,2010)，可能以高灵敏度特异性地检测非共价复合物。所产生的共价结合使相互作用的物质能够在样品制备过程和MALDI电离中存活下来。高质量检测系统允许表征在高质量范围内的相互作用。

使用K200 MALDI MS分析试剂盒(CovalX)对为对照实验制备的每种混合物(剩余9μl)进行交联。将九μl的混合物(来自1至1/128)与1μl的K200稳定剂试剂(2mg/ml)混合并在室温温育。温育时间(180分钟)后，与对照实验相同，制备样品用于MALDI分析。结晶后立即通过高质量MALDI分析对样品进行分析，其中使用带有标准氮激光的HM4相互作用模块(CovalX)并聚焦于0至1500kDa的不同质量范围。

结果.高质量MALDI质谱法和化学交联分析没有检测到克隆25-71的任何非共价聚集体或TNFR2的多聚体。

然后使用配备有HM4相互作用模块(CovalX)的Autoflex II MALDI ToF质谱仪(Bruker)表征TNFR2/25-71的复合物。制备具有1.25μM/0.5μM的各自浓度的TNFR2/25-71的10μl混合物。将一μl的混合物与1μl的基质混合，所述基质由在乙腈/水(1:1,v/v)、TFA0.1％(K200 MALDI Kit)中的重结晶的芥子酸基质(10mg/ml)组成。混合后，将1μl的每个样品点在MALDI平板(SCOUT 384)上。在室温结晶后，将平板引入MALDI质谱仪并立即分析。

交联实验.使用K200 MALDI MS分析试剂盒(CovalX)对为对照实验制备的混合物(剩余9μl)进行交联。将九μl的混合物与1μl的K200稳定剂试剂(2mg/ml)混合并在室温温育。温育时间(180分钟)后，与对照实验相同，制备样品用于MALDI分析。结晶后立即通过高质量MALDI分析对样品进行分析。

使用带有标准氮激光的HM4相互作用模块(CovalX)并聚焦于0至1500kDa的不同质量范围，已经进行了MALDI ToF MS分析。

结果.关于对照实验，检测到TNFR2和克隆25-71，MH+＝37.179kDa和MH+＝147.708kDa。在交联后，检测到另外两个峰，MH+＝189.401kDa和MH+＝228.341kDa。使用Complex Tracker软件叠加对照和交联光谱，其检测到两种非共价蛋白复合物，MH+＝186.113kDa和MH+＝224.384kDa。

关于表位测定，首先对TNFR2进行胰蛋白酶、糜蛋白酶、Asp-N、弹性蛋白酶和嗜热菌蛋白酶蛋白水解，随后进行nLC-LTQ-Orbitrap MS/MS分析。肽的组合作图证实覆盖了约94.57％的TNFR2序列(数据未显示)。

为了以高分辨率确定TNFR2/25-71复合物的表位，将复合物与氘代交联剂一起温育，并通过胰蛋白酶、糜蛋白酶、Asp-N、弹性蛋白酶和嗜热菌蛋白酶进行多酶切割。在交联肽的富集后，通过高分辨率质谱法(nLC-LTQ-Orbitrap MS)分析样品，并使用XQuest和Stavrox软件分析生成的数据。

还原烷基化.将二十μl的TNFR2/克隆25-71混合物与2μl的DSS d0/d12(2mg/mL；DMF)在室温混合180分钟温育时间。温育后，通过添加1μl的碳酸氢铵(20mM终浓度)终止反应，然后在室温温育1小时。然后，在8M尿素H₂O悬浮液(20μL)之前使用speedvac干燥溶液。混合后，将2μl的DTT(500mM)添加到溶液中。然后将混合物在37℃温育1小时。温育后，加入2μl的碘乙酰胺(1M)，然后在室温在暗室中温育1小时。温育后，加入80μl的蛋白水解缓冲液。胰蛋白酶缓冲液含有50mM Ambic pH 8.5、5％乙腈，糜蛋白酶缓冲液含有Tris HCl 100mM、CaCl2 10mM pH 7.8，ASP-N缓冲液含有磷酸盐缓冲液50MM pH 7.8，弹性蛋白酶缓冲液含有Tris HCl50mM pH 8.0，且嗜热菌蛋白酶缓冲液含有Tris HCl 50mM、CaCl2 0.5mM pH 9.0。

对于胰蛋白酶蛋白水解，将100μl的还原的/烷基化的TNFR2/25-71混合物与0.5μl的胰蛋白酶(Promega)以1/100的比例混合，并将蛋白水解混合物在37℃温育过夜。对于糜蛋白酶蛋白水解，将100μl的还原的/烷基化的TNFR2/25-71混合物与0.25μl的糜蛋白酶(Promega)以1/200的比例混合，并将蛋白水解混合物在25℃温育过夜。对于ASP-N蛋白水解，将100μl的还原的/烷基化的TNFR2/25-71混合物与0.25μl的ASP-N(Promega)以1/200的比例混合，并将蛋白水解混合物在37℃温育过夜。对于弹性蛋白酶蛋白水解，将100μl的还原的/烷基化的TNFR2/25-71混合物与0.5μl的弹性蛋白酶(Promega)以1/100的比例混合，并将蛋白水解混合物在37℃温育过夜。对于嗜热菌蛋白酶蛋白水解，将100μl的还原的/烷基化的TNFR2/25-71混合物与1μl的嗜热菌蛋白酶(Promega)以1/50的比例混合，并将蛋白水解混合物在70℃温育过夜。消化后，将最终1％的甲酸添加到溶液中。使用Xquest 2.0版和Stavrox 3.6软件分析交联肽。

结果.在含有氘代d0d12的TNFR2/25-71复合物的胰蛋白酶、糜蛋白酶、ASP-N、弹性蛋白酶和嗜热菌蛋白酶蛋白水解后，nLC-orbitrap MS/MS分析检测到TNFR2和克隆25-71之间的12种交联肽。使用化学交联、高质量MALDI质谱法和nLC-Orbitrap质谱法，对TNFR2和抗体25-71之间的分子界面进行了表征。该分析的结果如图16和图17A-17J所示，其表明TNFR2/25-71相互作用包括全长人TNFR2的下述残基：R43、Y45、T49、S55、K56、T73和S77；或成熟人TNFR2的下述残基：R21、Y23、T27、S33、K34、T51和S55。

序列表

<110> 埃派斯进有限公司（Apexigen, Inc.）

E·L·菲尔伯特（Filbert, Erin L.）

S·克里希南（Krishnan, Sushma）

C·谭（Tan, Christine）

R·巴贾特（Bahjat, Rena）

X·杨（Yang, Xiaodong）

R·阿尔瓦拉多（Alvarado, Ryan）

<120> 抗-TNFR2抗体及其使用方法

<130> 037050-8021CN01

<150> US 62/901,364

<151> 2019-09-17

<150> US 62/985,509

<151> 2020-03-05

<150> US 63/047,824

<151> 2020-07-02

<150> US 63/058,016

<151> 2020-07-29

<160> 329

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 1

Ser Tyr Thr Met Gly

1 5

<210> 2

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 2

Phe Ile Ser Ser Ser Gly His Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 3

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 3

Glu Gly Gly Tyr Gly Gly Tyr Asp Tyr Thr Gly Ile Phe Asn Leu

1 5 10 15

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

<400> 4

Gln Ala Thr Glu Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 5

Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser

1 5

<210> 6

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 6

Gln Gln Gly Tyr Ile Tyr Thr Asn Val Asp Asn Thr

1 5 10

<210> 7

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 7

Ser Tyr Thr Met Gly

1 5

<210> 8

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 8

Phe Ile Ser Ser Ser Gly His Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 9

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 9

Asp Gly Gly Tyr Gly Gly Tyr Asp Tyr Thr Gly Ile Phe Asn Leu

1 5 10 15

<210> 10

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

<400> 10

Gln Ala Thr Glu Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 11

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 11

Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser

1 5

<210> 12

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 12

Gln Gln Gly Tyr Ile Tyr Thr Asn Val Asp Asn Thr

1 5 10

<210> 13

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 13

Ser Tyr Gly Val Asn

1 5

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<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 14

Gly Ile Asn Thr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 15

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 15

Thr Ser Gly Asn Asn Val Tyr Asn Tyr Phe Thr Leu

1 5 10

<210> 16

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

<400> 16

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Pro Ser Leu Leu Ala

1 5 10

<210> 17

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 17

Ala Pro Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 18

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 18

Gln Ser Tyr Tyr Tyr Gly Asp Asn Thr Tyr Asn Asn Ile

1 5 10

<210> 19

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 19

Thr Tyr Asp Ile Asn

1 5

<210> 20

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 20

Ile Ile Tyr Thr Gly Gly Ile Thr Asn Phe Ala Asn Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 21

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 21

Gly Gly Tyr Asp Ser Glu Gly Tyr Val Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Pro

1 5 10 15

<210> 22

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

<400> 22

Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Leu Leu Ala

1 5 10

<210> 23

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 23

Arg Ala Ser Ile Leu Thr Ser

1 5

<210> 24

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 24

Gln His Gly Tyr Thr Gly Thr Asn Val Gln Asn Val

1 5 10

<210> 25

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 25

Asn Tyr Ala Met Gly

1 5

<210> 26

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 26

Ser Arg Arg Thr Asp Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Glu Gly

1 5 10 15

<210> 27

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<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 27

Asp Val Gly Gly Glu Gly Gly Trp Tyr Phe Asn Leu

1 5 10

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<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

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Gln Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ile Tyr Leu Ala

1 5 10

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

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Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

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<213> 人工序列

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<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

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Gln Gln Gly Ile Asn Asn Ile Gly

1 5

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<211> 5

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<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

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<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 32

Ser Arg Arg Thr Asp Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Glu Gly

1 5 10 15

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

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Asp Val Gly Gly Asp Gly Gly Trp Tyr Phe Asn Leu

1 5 10

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<213> 人工序列

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<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

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Gln Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ile Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 35

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 35

Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

<210> 36

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 36

Gln Gln Gly Ile Asn Asn Ile Gly

1 5

<210> 37

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 37

Ser Tyr Ala Met Gly

1 5

<210> 38

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 38

Asp Ile Ser Thr Ser Gly Asn Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 39

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 39

Ala Asp Tyr Gly Gly Glu Thr Tyr Ala Phe Asp Pro

1 5 10

<210> 40

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

<400> 40

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 41

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 41

Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 42

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 42

Gln Gln Gly Tyr Ser Asp Ser Asn Ile Asp Asn Val

1 5 10

<210> 43

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 43

Ser His His Met Ile

1 5

<210> 44

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 44

Ile Ile Asp Ala Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 45

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 45

Gly Gly Leu Thr Glu Ser Leu Gly Thr Tyr Phe Asp Leu

1 5 10

<210> 46

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

<400> 46

Gln Ala Ser Glu Ser Ile Asp Ser Gly Leu Ala

1 5 10

<210> 47

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 47

Asp Ser Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 48

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 48

Gln Ser Asn Tyr Asp Thr Gly Ser Ser Val Tyr Asp Trp Gly Ser

1 5 10 15

<210> 49

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 49

Asp Tyr Phe Met Thr

1 5

<210> 50

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 50

Ile Ile Asn Thr Gly Gly Asp Ser Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 51

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 51

Asp Thr Gly Tyr Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gly Ser Phe Asp Pro

1 5 10 15

<210> 52

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

<400> 52

Gln Ala Ser Glu Asn Ile Asn Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 53

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 53

Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

<210> 54

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 54

Gln Gln Gly Tyr Ile Tyr Ile Asp Val Gly Asn Ile

1 5 10

<210> 55

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 55

Val Ser Tyr Trp Ile Cys

1 5

<210> 56

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 56

Cys Thr Asp Gly Gly Asp Gly Ser Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Val Asn

1 5 10 15

Gly

<210> 57

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 57

Asp Arg Ser Asp Val Phe Asn Leu

1 5

<210> 58

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

<400> 58

Gln Ala Gly Gln Ser Ile Asp Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 59

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 59

Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 60

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 60

Gln Ser Phe Tyr Val Thr Ile Ser Ala Met Val Asp Tyr Pro

1 5 10

<210> 61

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 61

Arg Tyr Ala Met Ala

1 5

<210> 62

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 62

Tyr Ile Asp Thr Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 63

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 63

Val Gly Val Arg Met Tyr Leu

1 5

<210> 64

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

<400> 64

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ser

1 5 10

<210> 65

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 65

Arg Ala Ser Thr Leu Glu Ser

1 5

<210> 66

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 66

Gln Cys Gly Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ile Gly Ala

1 5 10

<210> 67

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 67

Ser Tyr Gly Ile Ser

1 5

<210> 68

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 68

Tyr Ile Tyr Pro Asp Tyr Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Thr Trp Val Asn

1 5 10 15

Gly

<210> 69

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 69

Gly Tyr Ala Ser Ser Ser Gly Tyr Tyr Asp Pro Lys Tyr Phe Gly Leu

1 5 10 15

<210> 70

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

<400> 70

Arg Ala Ser Glu Asp Ile Glu Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 71

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 71

Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser

1 5

<210> 72

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 72

Gln His Gly Phe Tyr Thr Ser Arg Ser Asp Ser Val

1 5 10

<210> 73

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 73

Ser Tyr Asp Met Ser

1 5

<210> 74

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 74

Tyr Ile Trp Ser Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Glu Gly

1 5 10 15

<210> 75

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 75

Arg Tyr Val Gly Ser Ser Tyr Asp Thr

1 5

<210> 76

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

<400> 76

Gln Ser Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Asn Tyr Leu Ser

1 5 10

<210> 77

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 77

Ala Ala Ser Tyr Leu Ala Ser

1 5

<210> 78

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 78

Leu Gly Asp Tyr Asp Asn Asp Ile Asp His Ala

1 5 10

<210> 79

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 79

Ser Tyr Ala Met Gly

1 5

<210> 80

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 80

Phe Ile Asp Thr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 81

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 81

Val Gly Ala Arg Met Tyr Leu

1 5

<210> 82

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

<400> 82

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Leu Leu Ala

1 5 10

<210> 83

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 83

Arg Ala Ser Thr Leu Glu Ser

1 5

<210> 84

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 84

Gln Cys Ser Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ile Gly Ala

1 5 10

<210> 85

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 85

Arg Tyr Tyr Met Ser

1 5

<210> 86

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 86

Tyr Ile Asp Pro Ile Phe Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Val Asn

1 5 10 15

Gly

<210> 87

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 87

Asp Gly Asp Ala Gly Tyr Asp Gly Tyr Gly Tyr Gly Thr Asp Leu

1 5 10 15

<210> 88

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

<400> 88

Gln Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Gly Leu Ala

1 5 10

<210> 89

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 89

Ser Ala Phe Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 90

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 90

Gln Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Val Thr Tyr Phe Asn Ala

1 5 10

<210> 91

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 91

Ser His Tyr Met Ile

1 5

<210> 92

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 92

Ile Ile Thr Ser Ser Asp Tyr Ile Tyr Tyr Ala Arg Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

Arg

<210> 93

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 93

Tyr Asn Tyr Asp Asp Asp Gly Glu Leu Phe Asn Leu

1 5 10

<210> 94

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

<400> 94

Gln Ser Ser Gln Ser Ile Asp Ala Asn Asn Asp Leu Ala

1 5 10

<210> 95

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 95

Leu Ala Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

<210> 96

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 96

Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Asp Ala Asp Asn Thr

1 5 10

<210> 97

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR1

<400> 97

Asn Asn Tyr Tyr Met Cys

1 5

<210> 98

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR2

<400> 98

Cys Ile Tyr Pro Ser Ile Val Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 99

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 重链 CDR3

<400> 99

Asp Arg Tyr Asp Asp Tyr Gly Asp Tyr Phe Asn Leu

1 5 10

<210> 100

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR1

<400> 100

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Asn Tyr Leu Ser

1 5 10

<210> 101

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR2

<400> 101

Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 102

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 轻链CDR3

<400> 102

Gln Ser Asn Ser Gly Val Asn Gly Asn Arg Tyr Gly Asn Ala

1 5 10

<210> 103

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 103

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Phe Ile Ser Ser Ser Gly His Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Glu Gly Gly Tyr Gly Gly Tyr Asp Tyr Thr Gly Ile Phe Asn Leu

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 104

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 104

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Thr Glu Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ile Tyr Thr Asn

85 90 95

Val Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 105

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 105

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Phe Ile Ser Ser Ser Gly His Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Gly Gly Tyr Gly Gly Tyr Asp Tyr Thr Gly Ile Phe Asn Leu

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 106

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 106

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Thr Glu Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ile Tyr Thr Asn

85 90 95

Val Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 107

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 107

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Asn Ser Tyr

20 25 30

Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Thr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Thr Ser Gly Asn Asn Val Tyr Asn Tyr Phe Thr Leu Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 108

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 108

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Pro Ser Leu

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Pro Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Tyr Gly Asp Asn

85 90 95

Thr Tyr Asn Asn Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 109

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 109

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr

20 25 30

Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Ile Ile Tyr Thr Gly Gly Ile Thr Asn Phe Ala Asn Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Gly Tyr Asp Ser Glu Gly Tyr Val Tyr Pro Asp Ala Phe Asp

100 105 110

Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 110

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 110

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Leu

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Arg Ala Ser Ile Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Gly Tyr Thr Gly Thr Asn

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Val Gln Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 111

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 111

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Ser Arg Arg Thr Asp Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Glu

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

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100 105 110

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115 120

<210> 112

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 112

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ile Tyr

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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

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Tyr Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

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65 70 75 80

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<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 113

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn Tyr

20 25 30

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Gly Ser Arg Arg Thr Asp Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Glu

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65 70 75 80

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115 120

<210> 114

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 114

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65 70 75 80

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100 105

<210> 115

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 115

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

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115 120

<210> 116

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 116

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65 70 75 80

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<210> 117

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 117

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser His

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<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 118

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100 105 110

Lys

<210> 119

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 119

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr

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<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 120

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<210> 121

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 121

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Val Ser

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100 105 110

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115

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<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 122

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Gly Gln Ser Ile Asp Ser Asn

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100 105 110

<210> 123

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 123

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Leu Ser Arg Tyr

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100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 124

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 124

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

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85 90 95

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100 105 110

<210> 125

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 125

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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65 70 75 80

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85 90 95

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Gly Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 126

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 126

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asp Ile Glu Ser Tyr

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<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 127

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr

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Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Val Thr Val Ser Ser

115

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<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 128

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

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<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 129

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr

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Val Ser Ser

115

<210> 130

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 130

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Leu

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100 105 110

<210> 131

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 131

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr

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<210> 132

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 132

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Gly

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100 105 110

<210> 133

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 133

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Asn Ser His

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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 134

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 134

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Ile Asp Ala Asn

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<210> 135

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化重链序列

<400> 135

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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115 120

<210> 136

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 人源化轻链序列

<400> 136

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Asn Tyr

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Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile

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100 105 110

<210> 137

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 137

Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly

1 5 10 15

Ser Leu Ala Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Val Ser

20 25 30

Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Ala Cys Thr Asp Gly Gly Asp Gly Ser Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp

50 55 60

Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Ile Ser Ser Thr Thr Val Thr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Arg Ser Asp Val Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 138

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 138

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Glu Gly Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Phe Asp Leu Asn Ser Tyr Tyr

20 25 30

Trp Ile Cys Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Cys Ile Asp Gly Gly Ser Thr Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp

50 55 60

Ala Lys Gly Arg Leu Ser Ile Ser Lys Ala Ser Ser Thr Thr Val Thr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Val Gln Ser Tyr Val Gly Tyr Ala Asn Tyr Gly Tyr Pro Asn

100 105 110

Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 139

<211> 129

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 139

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Val Pro Gly Thr Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asp Leu Ser Ser Phe Tyr

20 25 30

Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Cys Ile Tyr Ala Val Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp

50 55 60

Ala Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Thr Ser Ser Thr Thr Ala Thr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg His Gln Ser Tyr Glu Thr Tyr Gly Tyr Val Gly Val Val Tyr

100 105 110

Ala Thr Tyr Phe Ser Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 140

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 140

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Gly His

20 25 30

Asp Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Cys Ile Tyr Pro Asp Tyr Asp Ile Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Val

50 55 60

Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Leu Asp Asn Ala Gln Asn Thr Val Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Tyr Gly Gly Phe Arg Tyr Gly Phe Asn Leu Trp Gly

100 105 110

Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 141

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 141

Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Thr Leu Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Tyr Ile Tyr Pro Asp Tyr Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Thr Trp Val

50 55 60

Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Leu Asp Asn Ala Gln Asn Thr Val Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Ser Gly Tyr Ala Ser Ser Ser Gly Tyr Tyr Asp Pro Lys Tyr Phe

100 105 110

Gly Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 142

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 142

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Ala Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Arg Tyr Ala

20 25 30

Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly

35 40 45

Tyr Ile Asp Thr Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val His Leu Lys Ile Ala

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Thr Asn Val Gly

85 90 95

Val Arg Met Tyr Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

100 105 110

<210> 143

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 143

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Ile Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Arg Tyr Ala

20 25 30

Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly

35 40 45

Phe Ile Asp Thr Ala Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Ala

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Asn Val Gly

85 90 95

Ala Arg Met Tyr Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

100 105 110

<210> 144

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 144

Gln Glu Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Thr Pro Gly Thr

1 5 10 15

Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Trp Ser Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Glu

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Gly Leu Lys Ile

65 70 75 80

Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Arg

85 90 95

Tyr Val Gly Ser Ser Tyr Asp Thr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 145

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 145

Gln Glu Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Thr Pro Gly Thr

1 5 10 15

Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile

35 40 45

Gly Phe Ile Asp Thr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ala Ser Pro Thr Thr Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Asn Val

85 90 95

Gly Ala Arg Met Tyr Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser

<210> 146

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 146

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr Tyr

20 25 30

Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Thr Asp Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Val Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr

65 70 75 80

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85 90 95

Asp Tyr Asp Gly Tyr Ala Gly Tyr Gly Tyr Gly Asp Leu Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 147

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 147

Gln Gln Leu Glu Gln Ser Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Leu Val Lys

1 5 10 15

Pro Gly Gly Ser Leu Glu Leu Cys Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Leu

20 25 30

Ile Asn Ser His Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Trp Ile Gly Cys Ile Phe Ala Gly Ser Ala Gly Ser Thr Tyr

50 55 60

Tyr Ala Thr Trp Val Ser Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Ile Asp

65 70 75 80

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Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gln Thr Asn Thr Ala Tyr Asp Pro

100 105 110

Phe Tyr Leu Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 148

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 148

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Ser Asn Gly

20 25 30

Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Gly Ile Asn Ala Gly Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Met Val Asp Leu Lys Ile Thr

65 70 75 80

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85 90 95

Gly Ile Asn Val Tyr Asn Tyr Leu Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 149

<211> 131

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 149

Gln Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Thr

20 25 30

Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Ala Cys Ile Glu Ala Gly Asp Ser Glu Ser Asn Tyr Tyr Ala Ser

50 55 60

Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Ala Ser Ser Thr Thr Val

65 70 75 80

Thr Leu Gln Met Thr Thr Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe

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Cys Ala Arg Ala Thr Tyr Asp Thr Phe Gly Tyr Gly Asp Tyr Val Tyr

100 105 110

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115 120 125

Val Ser Ser

130

<210> 150

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 150

Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

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Gly Tyr Ile Asp Pro Ile Phe Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Val

50 55 60

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65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

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100 105 110

Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 151

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 151

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Val Asn Val Asn Ser

20 25 30

Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Ile

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Ala Cys Ile Asp Thr Gly Ser Gly Gly Ser Thr Trp Tyr Gly Ser Trp

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Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Ser Thr Asn Leu Asn Thr Val

65 70 75 80

Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe

85 90 95

Cys Ala Arg Ala Arg Asn Thr Tyr Gly Tyr Gly Asp Tyr Val Tyr Gly

100 105 110

Gly Ala Phe Asp Pro Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 152

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 152

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Ser His Tyr

20 25 30

Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Thr Ser Ser Asp Tyr Ile Tyr Tyr Ala Arg Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile

65 70 75 80

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Asn Tyr Asp Asp Asp Gly Glu Leu Phe Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 153

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 153

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Ser Asn Gly

20 25 30

Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Gly Ile Asn Ala Gly Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Met Val Asp Leu Lys Ile Thr

65 70 75 80

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Gly Ile Asn Val Tyr Asn Tyr Leu Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 154

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 154

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Ser His Tyr

20 25 30

Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly

35 40 45

Val Ile Thr Ser Ser Asp Tyr Ile Tyr Tyr Ala Arg Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile

65 70 75 80

Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Tyr

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Asn Tyr Asp Asp Asp Gly Glu Leu Phe Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 155

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 155

Gln Gln Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Leu Thr Val Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Thr Asn Asn

20 25 30

Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

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50 55 60

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65 70 75 80

Thr Leu Glu Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe

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Cys Val Arg Asp Arg Tyr Asp Asp Tyr Gly Asp Tyr Phe Asn Leu Trp

100 105 110

Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 156

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 156

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr Thr

20 25 30

Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly

35 40 45

Phe Ile Ser Ser Ser Gly His Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met

65 70 75 80

Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp

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Gly Gly Tyr Gly Gly Tyr Asp Tyr Thr Gly Ile Phe Asn Leu Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 157

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 157

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Gly

20 25 30

Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Ile Gly

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Ile Ile Asp Ser Ser Gly Ser Thr Trp Tyr Thr Ser Trp Val Lys Gly

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65 70 75 80

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Tyr Tyr His Ser Asn Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser

<210> 158

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 158

Gln Glu Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr

1 5 10 15

Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr

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65 70 75 80

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100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 159

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 159

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Glu Gly Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

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Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 160

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 160

Gln Glu Gln Leu Lys Glu Ser Arg Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Glu Leu Cys Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Ser

20 25 30

His Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

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65 70 75 80

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85 90 95

Tyr Cys Ala Arg Asp Gln Thr Ala Thr Thr Tyr Asp Pro Tyr Tyr Leu

100 105 110

Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 161

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 161

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Asn Ser Tyr Gly

20 25 30

Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

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65 70 75 80

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Gly Asn Asn Val Tyr Asn Tyr Phe Thr Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 162

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 162

Gln Ser Val Glu Val Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr Tyr

20 25 30

Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Thr Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Ser Val Asp Leu Lys Val Thr

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Tyr Thr

85 90 95

Tyr Asp Asp Asp Gly Glu Leu Phe Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 163

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 163

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Glu Gly Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Leu Ser Ser Tyr Tyr

20 25 30

Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Ile Ala

35 40 45

Cys Ile Tyr Asp Gly Ser Ser Val Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu

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Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 164

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Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

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Gly Cys Ile Tyr Thr Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Glu Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu

65 70 75 80

Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Tyr Asp Ala Ala Tyr Ala Gly Asp Gly Tyr Thr Ile Gly Asn Ala

100 105 110

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 165

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1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asn Asn Tyr

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35 40 45

Ala Cys Ile Ala Ala Gly Ser Ser Gly Thr Pro Tyr Tyr Ala Ser Trp

50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

Ala Arg Ile Tyr Tyr Ser Tyr Gly Tyr Gly Asp Val Ala Tyr Gly Ala

100 105 110

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115 120 125

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 166

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Tyr

20 25 30

Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

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65 70 75 80

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100 105 110

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<211> 117

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<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 167

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20 25 30

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35 40 45

Ile Ile Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly

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Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Arg Ile Thr

65 70 75 80

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115

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 168

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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Ser His

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<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

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65 70 75 80

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<211> 120

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<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 170

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Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr Ala

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Gln Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

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65 70 75 80

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<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 171

Gln Glu Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser His Tyr

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<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 172

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Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Ser Tyr Tyr

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

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Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Tyr Tyr

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 174

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

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Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr Tyr

20 25 30

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 175

Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr

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65 70 75 80

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115 120 125

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<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 176

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Thr Tyr Trp

20 25 30

Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Ile Ala

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Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu

65 70 75 80

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<210> 177

<211> 129

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 177

Gln Glu Gln Leu Glu Gln Ser Gly Gly Gly Ala Gly Arg Gly Leu Val

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Lys Pro Gly Gly Ser Leu Glu Leu Cys Cys Asn Ala Ser Gly Phe Thr

20 25 30

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100 105 110

Pro Phe Tyr Phe Asn Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 178

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 178

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Asp

20 25 30

Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Tyr Ile Trp Ser Asp Gly Ile Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

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65 70 75 80

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100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 179

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 179

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

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<210> 180

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 180

Gln Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Gly

20 25 30

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Asp Pro Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 181

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 181

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asn Ala

20 25 30

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100 105 110

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115

<210> 182

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 182

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Gly Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

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115 120 125

<210> 183

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 183

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

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Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Arg Ser Tyr Asn

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100 105 110

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<210> 184

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 184

Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Gly His

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Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 185

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 185

Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser

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Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

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Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 186

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 186

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Gly Tyr

20 25 30

Asp Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

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65 70 75 80

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85 90 95

Arg Asp Ile Gly Ser Asp Tyr Tyr Ala Phe Phe Asn Leu Trp Gly Pro

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 187

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 187

Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Val Asn

20 25 30

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115 120

<210> 188

<211> 130

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 188

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Thr Tyr

20 25 30

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65 70 75 80

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100 105 110

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115 120 125

Ser Ser

130

<210> 189

<211> 129

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 189

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Phe Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Gly Ile Asp

20 25 30

Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

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Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Ala Ser Ser Thr Thr Val Thr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Val Gly Ser Arg Tyr Thr Gly Tyr Pro Asn Tyr Asp Asp Val

100 105 110

Pro Glu His Phe Lys Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 190

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 190

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Cys Ile Tyr Gly Gly Ser Gly Tyr Asn Ile Tyr Tyr Ala Ser Trp

50 55 60

Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Pro Thr Thr Val Thr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Gly Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ile Gly Val Gly Tyr Gly Gly Asn Gly Tyr Ala Asp Leu

100 105 110

Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 191

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 191

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly Thr

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr Tyr

20 25 30

Asp Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Ile

35 40 45

Ala Cys Ile Tyr Thr Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu

65 70 75 80

Lys Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Ser Gly Tyr Ala Gly Tyr Gly Tyr Tyr Phe Ser Leu Trp Gly

100 105 110

Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 192

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 192

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Gly Tyr

20 25 30

Asp Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Cys Ile

35 40 45

Ala Cys Ile Tyr Thr Gly Asp Ser Thr Thr Trp Tyr Ala Ser Trp Ala

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Pro Ser Ser Thr Ala Val Thr Leu

65 70 75 80

Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Arg Asp Ala Gly Tyr Tyr Gly Tyr Thr Tyr Phe Asn Leu Trp

100 105 110

Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 193

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 193

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Gly Tyr

20 25 30

Val Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Cys Ile Asp Thr Ser Ser Gly Thr Thr Trp Tyr Ala Thr Trp Val

50 55 60

Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ser Thr Ser Leu Asn Thr Val Thr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

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115 120

<210> 194

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 194

Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Thr Leu Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Thr Ile Asp Pro Asp Tyr Gly Asn Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Val

50 55 60

Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Leu Asp Asn Ala Gln Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

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85 90 95

Thr Arg Ile Ser Phe Ala Ser Ser Ser Gly Tyr Tyr Ser Pro Tyr Phe

100 105 110

Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 195

<211> 126

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 195

Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Thr Leu Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Pro Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Ser Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Tyr Ile Tyr Pro Asp Tyr Gly Ile Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Val

50 55 60

Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Leu Asp Lys Ala Gln Asn Thr Val Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Ser Asp Val Gly Tyr Ala Gly Tyr Ala Tyr Asp Arg Gly Tyr Tyr

100 105 110

Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 196

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 196

Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Thr Leu Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Gly Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Tyr Ile Asp Pro Asp Tyr Gly Tyr Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Val

50 55 60

Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Leu Asp Asn Ala Gln Asn Thr Val Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Thr Arg Asp His Tyr Thr Tyr Gly Asp Ala Gly Tyr Ala Asp Ala Thr

100 105 110

Ser Ala Phe Asp Pro Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 197

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 197

Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Glu Gly

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

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65 70 75 80

Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe

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Cys Ala Arg Ala Ser Gly Gly Ser Ser Val Tyr Met Asn Phe Phe Thr

100 105 110

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115 120

<210> 198

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 198

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Glu Gly Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Asn Tyr

20 25 30

Asp Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Ile

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65 70 75 80

Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

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100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 199

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 199

Leu Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Tyr Ser Gly Ser Tyr

20 25 30

Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

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65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

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100 105 110

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115 120 125

<210> 200

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 200

Gln Gln Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Thr Leu Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Phe

20 25 30

Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

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50 55 60

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65 70 75 80

Leu Gln Leu Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Leu Tyr Thr Ser Gly Ala Ala Gly Tyr Ala Asp Ala Thr

100 105 110

Gly Ala Phe Asp Pro Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 201

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 201

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Gly Tyr

20 25 30

Asp Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Cys Ile Tyr Thr Gly Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu

65 70 75 80

Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

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100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 202

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 202

Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ala Gly Phe Thr Ile Ser Thr Thr

20 25 30

Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Ala Cys Ile Tyr Gly Asn Gly Gly Gly Thr Trp Tyr Ala Ser Trp

50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

Ala Arg Leu Leu Asn Ser Tyr Val Asp Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 203

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 203

Gln Ser Leu Glu Asp Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Gly Tyr Tyr

20 25 30

Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ala

35 40 45

Cys Ile Gly Ile Gly Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Glu Ala Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu Gln

65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 204

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 204

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Asp

20 25 30

Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Tyr Thr Gly Gly Ile Thr Asn Phe Ala Asn Trp Ala Lys Gly

50 55 60

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65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly

85 90 95

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100 105 110

Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 205

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 205

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp

20 25 30

Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ser Ala Ala Tyr Asp Gly Gly Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

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65 70 75 80

Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly

85 90 95

Gly Tyr Asn Asp Ala Leu Ser Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 206

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 206

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Tyr Ala

20 25 30

Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ser Met Arg Thr Asp Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Glu Gly

50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 207

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 207

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Ile Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn Tyr Ala

20 25 30

Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ser Arg Arg Thr Asp Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Glu Gly

50 55 60

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65 70 75 80

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100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 208

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 208

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asn

20 25 30

Met Gln Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Met Thr Ile Asp Ala Gly Pro Tyr Tyr Ala Ala Trp Ala Lys Gly

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65 70 75 80

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100 105 110

<210> 209

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 209

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Thr Tyr Ala

20 25 30

Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly

35 40 45

Phe Ile Arg Pro Gly Gly Ser Ala Trp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Arg Glu Ile Thr

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Thr Tyr Asp

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100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 210

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 210

Gln Glu Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Thr Pro Gly Thr

1 5 10 15

Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Trp Ser Ser Gly Ser Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Gly Leu Lys

65 70 75 80

Ile Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg

85 90 95

Arg Tyr Val Gly Ser Ser Tyr Val Thr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 211

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 211

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr Pro

20 25 30

Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Met Ile Tyr Gly Ser Gly Gly Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Asn

65 70 75 80

Ser Leu Thr Ala Ser Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Gly Arg Gly Ser

85 90 95

Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

100 105

<210> 212

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 212

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr Ala

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Tyr Ile Tyr Asn Asp Ser Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Thr Trp Ala Arg

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gly Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met

65 70 75 80

Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Trp

85 90 95

Asp Ser Tyr Gly Tyr Gly Asp Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 213

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 213

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr Ala

20 25 30

Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Val Lys Gly Leu Lys Trp Ile Gly

35 40 45

Phe Ile Asp Val Asp Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Phe Trp Thr Arg Tyr Asp

85 90 95

Asn Tyr Gly Tyr Gly Asp Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 214

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 214

Gln Glu Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Thr Pro Gly Thr

1 5 10 15

Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr

20 25 30

Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Trp Ser Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Gln

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Gly Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ala Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Arg

85 90 95

Phe Val Gly Ser Ser Tyr Asp Thr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 215

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 215

Gln Glu Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Thr Pro Gly Thr

1 5 10 15

Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Trp Ser Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Glu

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Gly Leu Lys Ile

65 70 75 80

Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Arg

85 90 95

Phe Val Gly Ser Ser Tyr Asp Thr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 216

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 216

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser His Tyr

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Thr Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Pro Thr Val Asp Leu Glu Ile Thr

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Trp

85 90 95

Tyr Asp Asp Tyr Gly Asp Tyr Arg Ser Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 217

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 217

Gln Ser Val Glu Glu Ser Glu Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr Ala

20 25 30

Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Met Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Asp Ile Ser Thr Ser Gly Asn Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Val Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Ala

65 70 75 80

Ser Leu Thr Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ala Asp

85 90 95

Tyr Gly Gly Glu Thr Tyr Ala Phe Asp Pro Trp Gly Pro Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 218

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 218

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Gly Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr Pro

20 25 30

Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Met Ile Tyr Gly Ser Gly Gly Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Asn

65 70 75 80

Ser Leu Thr Ala Ser Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Gly Arg Gly Ser

85 90 95

Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

100 105

<210> 219

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 219

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Tyr Ala Gly Ser Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Thr Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly

85 90 95

Gly Tyr Asp Ser Asp Ala Tyr Val Tyr Pro Asp Val Phe Asp Pro Trp

100 105 110

Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 220

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 220

Gln Glu Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Thr Pro Gly Thr

1 5 10 15

Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Trp Ser Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Gly Leu Lys Ile

65 70 75 80

Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Arg

85 90 95

Phe Val Gly Ser Ser Tyr Asp Thr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 221

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 221

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Lys Pro Asp Glu Thr

1 5 10 15

Leu Thr Leu Ile Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser His His

20 25 30

Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Gly Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Asp Ala Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ala Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly

85 90 95

Gly Leu Thr Glu Ser Leu Gly Thr Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Pro Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 222

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 222

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Phe Leu Ser Ser Tyr Glu

20 25 30

Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Val Ile Tyr Thr Asp Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Ala Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Val Thr

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly His

85 90 95

Pro Asp Tyr Ser Ser Gly Met Val Phe Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 223

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 223

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Lys Pro Asp Glu Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr Tyr

20 25 30

Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Arg Ile Asp Ala Asn Ser Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile

65 70 75 80

Thr Ser Pro Thr Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Gly Asp

85 90 95

Phe Glu Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

100 105 110

<210> 224

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 224

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala

20 25 30

Leu Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ser Met Arg Thr Asp Gly Val Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Glu Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Gly Arg Asp Val

85 90 95

Gly Gly Asp Gly Gly Trp Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 225

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 225

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr Phe

20 25 30

Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Asn Thr Gly Gly Asp Ser Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Ser

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Thr

85 90 95

Gly Tyr Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gly Ser Phe Asp Pro Trp Gly Pro

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 226

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 226

Gln Ser Val Lys Glu Ser Gly Gly Gly Leu Phe Lys Pro Thr Asp Thr

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asp Tyr Tyr

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Asn Thr Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Ser

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Thr

85 90 95

Gly Tyr Gly Gly Tyr Asp Tyr Ala Gly Ser Phe Asp Pro Trp Gly Pro

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 227

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 227

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Ser His Val

20 25 30

Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Leu Thr Ser Ser Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Glu Gly

85 90 95

Tyr Asp Tyr Asp Asp Ser Gly Asp Tyr Pro Tyr Tyr Phe Asn Ile Trp

100 105 110

Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 228

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的重链序列

<400> 228

Gln Ser Val Ala Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Tyr Tyr Ala

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Gly Ser Arg Asp Asn Thr His Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Ala

65 70 75 80

Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Ile

85 90 95

Tyr Gly Gly Tyr Gly Asp Tyr Thr Tyr Asp Trp Leu Asp Leu Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 229

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 229

Asp Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val

1 5 10 15

Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Gly Gln Ser Ile Asp Ser

20 25 30

Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ala Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu

65 70 75 80

Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Ser Phe Tyr Val Thr Ile

85 90 95

Ser Ala Met Val Asp Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val

100 105 110

Lys

<210> 230

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 230

Ile Glu Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Glu Asp Ile Asp Ser Tyr Leu

20 25 30

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

His Ala Ser Tyr Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Arg Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys Asp

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Tyr Tyr Ser Ser Ser Ala

85 90 95

Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105

<210> 231

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 231

Ala Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Asp Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Tyr Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys

65 70 75 80

Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Phe Tyr Ser Asn Asn

85 90 95

Thr Glu Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 232

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 232

Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val

1 5 10 15

Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Glu Asn

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu

65 70 75 80

Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Val Tyr Tyr Thr Ser

85 90 95

Ser Asp Asn Tyr Asn Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val

100 105 110

Lys

<210> 233

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 233

Ile Lys Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Asp Ile Glu Ser Tyr Leu

20 25 30

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Val Lys Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Arg Cys Asp

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Gly Phe Tyr Thr Ser Arg Ser

85 90 95

Asp Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105

<210> 234

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 234

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

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Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Gly Tyr Tyr Gly Gly Ser

85 90 95

Tyr Ile Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 235

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 235

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Gly Val

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Glu Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Asn Tyr Tyr Gly Gly Ser

85 90 95

Tyr Ile Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 236

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 236

Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Ser Asn Asn Asn

20 25 30

Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

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Ile Tyr Ala Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Asp Tyr Asp Asn Asp

85 90 95

Ile Asp His Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 237

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 237

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Leu

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

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Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Ser Tyr Tyr Gly Gly Ser

85 90 95

Tyr Ile Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 238

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (97)..(97)

<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid

<400> 238

Leu Asp Ile Lys Val Thr Gln Thr Pro Ala Val Ser Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Ser Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Lys Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Gly Tyr Tyr Thr Ser Gly

85 90 95

Xaa Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 239

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 239

Ile Glu Met Thr Gln Thr Pro Phe Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Ser Leu

20 25 30

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Ala Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys Ala

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Tyr Ser Ser Gly Ser Asp

85 90 95

Asp Asn Gly Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105

<210> 240

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 240

Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val

1 5 10 15

Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Thr

20 25 30

Ala Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu

65 70 75 80

Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Tyr Tyr Tyr Gly Asp

85 90 95

Asn Thr Tyr Asn Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 241

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (71)..(71)

<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid

<400> 241

Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val

1 5 10 15

Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asn

20 25 30

Leu Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Ser Arg Ala Ser Ile Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys

50 55 60

Gly Ser Glu Ser Gly Thr Xaa Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asp Leu Glu

65 70 75 80

Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Asn Tyr Tyr Ser Ser

85 90 95

Ser Ser Ser Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val

100 105 110

Lys

<210> 242

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 242

Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Glu Pro Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Gly Leu

20 25 30

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Val

35 40 45

Ser Ala Phe Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser

50 55 60

Gly Thr Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys Asp

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Val Thr

85 90 95

Tyr Phe Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 243

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 243

Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val

1 5 10 15

Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser

20 25 30

Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu

65 70 75 80

Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Phe Ser

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Asp Asn Gly Cys Tyr Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val

100 105 110

Lys

<210> 244

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 244

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Thr Val Thr Leu Asn Cys Gln Ser Ser Gln Ser Ile Asp Ala Asn Asn

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35 40 45

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50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Asp

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<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 245

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1 5 10 15

Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Thr

20 25 30

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65 70 75 80

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<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 246

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<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 247

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<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 248

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<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 249

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<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 250

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<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 251

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<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 252

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Gly Gly Thr Val Thr Ile Tyr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Pro Ser

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<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 254

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 255

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<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 256

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<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 257

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<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 258

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<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 259

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 260

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Thr Gly Ser Ile Ser Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Gly Asn Tyr Val

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<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 261

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<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 262

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<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 263

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly

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Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Ser Asn

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 264

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 265

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<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 266

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<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 267

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 268

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 269

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 270

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<210> 271

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 271

Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Thr Val Glu Val Ala Val Gly

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Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Leu

20 25 30

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65 70 75 80

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100 105 110

<210> 272

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 272

Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Phe Ser Val Ser Ala Ala Val

1 5 10 15

Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Ser

20 25 30

Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu

65 70 75 80

Cys Ala Asp Ala Thr Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Tyr Ser Ser

85 90 95

Ser Ser Ser Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val

100 105 110

Lys

<210> 273

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 273

Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Val Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Thr Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn

20 25 30

Ala Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Gln Phe Lys

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Leu Gly Ser Tyr Ser Gly Gly

85 90 95

Ile Arg Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105

<210> 274

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 274

Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Glu Pro Val Gly Ala

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys His Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ala Ser Leu

20 25 30

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Ser Ala Phe Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys Asp

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Tyr Ser Ser Val Thr

85 90 95

Tyr Phe Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 275

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 275

Ala Phe Glu Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Glu Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Asn Ala

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Phe Ala Ala Thr Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

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85 90 95

Gly Phe Trp Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 276

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 276

Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Lys Ser Val Pro Val Gly Asp

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Val Tyr Gly Asn Asn

20 25 30

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Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Val

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Gly Trp Lys Asp Glu Ile

85 90 95

Asp Gly Ile Gly Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 277

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 277

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Gly Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Asp Ser Asp

20 25 30

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65 70 75 80

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100 105 110

<210> 278

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 278

Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val

1 5 10 15

Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ser Ser Asn

20 25 30

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Gly Ser Gly Ser Gly Ile Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu

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100 105 110

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<210> 279

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 279

Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Leu

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

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<210> 280

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 280

Ala Phe Glu Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Glu Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Ala

20 25 30

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100 105 110

<210> 281

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 281

Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Glu Pro Val Gly Gly

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Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Asn Asn

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Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Asp Tyr Asp Ile Thr

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Thr Asp Ile Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 282

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 282

Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val

1 5 10 15

Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Glu Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

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Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu

65 70 75 80

Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Ser Tyr Tyr Tyr Thr Asp

85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Gly Ala Asn Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val

100 105 110

Val Val Lys

115

<210> 283

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 283

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Ile Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Glu Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly

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65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Tyr Ala Thr Ile

85 90 95

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100 105 110

<210> 284

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 284

Gln Gly Pro Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Thr Ser Glu Ser Val Asn Ser Asn Asn

20 25 30

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Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Ser Tyr Ala Ser Ser

85 90 95

Gly Trp Tyr Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 285

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 285

Gln Gly Pro Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Thr Ser Glu Ser Phe Gly Gly Gly Asn

20 25 30

Ile Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

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Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Ser Asp His Ser Gly

85 90 95

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100 105 110

<210> 286

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 286

Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Val Val Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ser Ser Gln Thr Ile Tyr Ser Asn Tyr

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Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

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65 70 75 80

Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Asp Ala

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Asp Pro Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 287

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 287

Ala Gln Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Val Ser Ala Ala Val Gly

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Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn

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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

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Ser Ala Asp Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

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<210> 288

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 288

Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Lys Ser Val Pro Val Gly Asp

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Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Val Tyr Gly Asn Asn

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Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Val

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Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Gly Phe Lys Asp Glu Ile

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Ala Gly Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 289

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 289

Ala Asn Ile Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Gly Ala Val

1 5 10 15

Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser

20 25 30

Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Asn Leu Leu

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Gly Ser Gly Ser Gly Ala Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln

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Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Tyr Tyr Ser Gly

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Ser Gly Asn Cys Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 290

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 290

Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Thr Ser Glu Pro Val Gly Gly

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Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu

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Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Trp Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly Ser

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Asp Ala Phe Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 291

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 291

Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Lys Ser Val Pro Val Gly Asp

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Val Tyr Gly Asn Asn

20 25 30

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Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Val

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Gly Trp Lys Asp Glu Ile

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Asp Gly Ile Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 292

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 292

Ala Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly

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Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Ser

20 25 30

Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu

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Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val

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Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Leu Tyr Gly Asp

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100 105 110

<210> 293

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 293

Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val Gly

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Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Asn Phe

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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

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Val Asp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 294

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 294

Ala Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Asp Val Gly

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Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Leu

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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile

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Val Gln Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 295

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 295

Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Thr Ser Ala Ala Val Gly Gly

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Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Lys Ser Asp

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Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu

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Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Ser Pro Ala

85 90 95

Ser Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105

<210> 296

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 296

Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Pro Val Gly

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Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ile Tyr

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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

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65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Leu Asn Ser Ile Gly

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105

<210> 297

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 297

Ala Gly Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ile Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

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Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Asn Asn Ile Gly

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105

<210> 298

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 298

Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Ser Ile Ser Cys Gln Ser Ser Glu Asn Val Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

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65 70 75 80

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85 90 95

Ile Tyr Ile Val Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105

<210> 299

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 299

Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Phe Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Asp Phe Ser Ala

85 90 95

Val Asp Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 300

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 300

Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Ser Asn Asn Asn

20 25 30

Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ala Ala Ser Tyr Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Asp Tyr Asp Asn Asp

85 90 95

Val Asp His Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 301

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 301

Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Arg Ser Val Tyr Asn Asn Asn

20 25 30

Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Pro Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Asn Tyr Asp Cys Gly

85 90 95

Ser Ala Asp Cys Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 302

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 302

Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Val Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Leu

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Ser Gly Asn

85 90 95

Leu Asp Asn Gly Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 303

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 303

Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Lys Thr Asp

85 90 95

Leu Asp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 304

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 304

Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp Asn

20 25 30

Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Glu Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ala Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Asp Tyr Asp Asn Asp

85 90 95

Val Asp His Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 305

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 305

Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Ser Asn Asn Asn

20 25 30

Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ala Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Asp Tyr Asp Asn Asp

85 90 95

Val Asp His Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 306

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 306

Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Asp Ser Asn Asn

20 25 30

Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Asp

85 90 95

Ala Asp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 307

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 307

Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val

1 5 10 15

Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu

65 70 75 80

Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Asp Ser

85 90 95

Asn Ile Asp Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 308

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 308

Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Asn

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn

20 25 30

Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Pro Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Arg Asp Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Asn Tyr Asp Cys Gly

85 90 95

Ser Ala Asp Cys Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 309

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 309

Ala Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Leu

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ala Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys

65 70 75 80

Asp Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln His Gly Tyr Thr Gly Ser Asn

85 90 95

Val His Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 310

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 310

Ala Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Ser Asn Asn Asn

20 25 30

Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ala Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Ile Ile Ser Gly Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Asp Tyr Asp Asn Asp

85 90 95

Val Asp His Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 311

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 311

Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val

1 5 10 15

Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Asp Ser

20 25 30

Gly Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Ser Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu

65 70 75 80

Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Asn Tyr Asp Thr Gly

85 90 95

Ser Ser Val Tyr Asp Trp Gly Ser Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val

100 105 110

Val Lys

<210> 312

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 312

Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ala Ser Gln Ser Leu Tyr Asn Lys Asp

20 25 30

Ala Cys Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Tyr Ala Phe Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Asp Phe Ile Ser Ser

85 90 95

Ser Asp Asn Gly Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 313

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 313

Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn

20 25 30

Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Arg Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Pro Gly Gly

85 90 95

Ser Asp Val His Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 314

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 314

Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Val Thr Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Asn Asn Ile Ala

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105

<210> 315

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 315

Ala Ile Lys Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Asn Ile Asn Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ile Tyr Ile Asp

85 90 95

Val Gly Asn Ile Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 316

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 316

Ala Ile Lys Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ile Tyr Ile Asp

85 90 95

Val Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 317

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 317

Ala Ala Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Asp Asn Asn Asn

20 25 30

Glu Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Pro Pro Met Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Asp Asp Asp

85 90 95

Ala Glu Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 318

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 来自兔杂交瘤的轻链序列

<400> 318

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Gly Asn Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser

85 90 95

Tyr Val Glu Ser Ser Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 319

<211> 38

<212> PRT

<213> 智人

<400> 319

Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys

1 5 10 15

Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr

20 25 30

Ser Asp Thr Val Cys Asp

35

<210> 320

<211> 36

<212> PRT

<213> 智人

<400> 320

Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser

1 5 10 15

Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr

20 25 30

Arg Glu Gln Asn

35

<210> 321

<211> 28

<212> PRT

<213> 智人

<400> 321

Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys

1 5 10 15

Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala Arg Pro Gly Thr Glu

20 25

<210> 322

<211> 20

<212> PRT

<213> 智人

<400> 322

Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala Arg

1 5 10 15

Pro Gly Thr Glu

20

<210> 323

<211> 28

<212> PRT

<213> 智人

<400> 323

Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His Gln

1 5 10 15

Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser

20 25

<210> 324

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 间隔物序列

<400> 324

Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Val Asp

1 5 10

<210> 325

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 间隔物序列

<400> 325

Lys Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Gln Leu Ala Gln Phe Arg Ser

1 5 10 15

Leu Asp

<210> 326

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 实验室制备 - 接头序列

<400> 326

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 327

<211> 41

<212> PRT

<213> 智人

<400> 327

Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys Ser

1 5 10 15

Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr Ser

20 25 30

Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp

35 40

<210> 328

<211> 8

<212> PRT

<213> 智人

<400> 328

Thr Ala Gln Met Cys Cys Ser Lys

1 5

<210> 329

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人

<400> 329

Thr Val Cys Asp Ser

1 5

Claims

1.结合肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：

2.根据权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH区域包含与选自SEQ ID NO:103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133和135的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL区域包含与选自SEQ ID NO:104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、134和136的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。

4.根据权利要求2或3所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：

在SEQ ID NO:103中所示的VH区域和在SEQ ID NO:104中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:105中所示的VH区域和在SEQ ID NO:106中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:107中所示的VH区域和在SEQ ID NO:108中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:109中所示的VH区域和在SEQ ID NO:110中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:111中所示的VH区域和在SEQ ID NO:112中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:113中所示的VH区域和在SEQ ID NO:114中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:115中所示的VH区域和在SEQ ID NO:116中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:117中所示的VH区域和在SEQ ID NO:118中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:119中所示的VH区域和在SEQ ID NO:120中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:121中所示的VH区域和在SEQ ID NO:122中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:123中所示的VH区域和在SEQ ID NO:124中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:125中所示的VH区域和在SEQ ID NO:126中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:127中所示的VH区域和在SEQ ID NO:128中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:129中所示的VH区域和在SEQ ID NO:130中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:131中所示的VH区域和在SEQ ID NO:132中所示的VL区域；

在SEQ ID NO:135中所示的VH区域和在SEQ ID NO:136中所示的VL区域。

5.结合肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变(VH)区域和各自的轻链可变(VL)区域，所述重链可变(VH)区域包含与选自SEQ ID NO:103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133和135的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变(VL)区域包含与选自SEQ ID NO:104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、134和136的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。

6.结合肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变(VH)区域和各自的轻链可变(VL)区域，所述重链可变(VH)区域包含选自表R1中标有下划线的序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域，所述轻链可变(VL)区域包含选自表R2中标有下划线的序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域。

7.根据权利要求6所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含VH区域和各自的VL区域，所述VH区域包含选自表R1的氨基酸序列，所述VL区域包含选自表R2的氨基酸序列。

8.在表位处结合人肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)的分离的抗体或其抗原结合片段，所述表位包含一个或多个选自R21、Y23、T27、S33、K34、T51和S55的残基、由其组成或基本上由其组成，如由成熟的人TNFR2序列(FL人TNFR2的残基23-461)所定义，任选地其中所述表位包含一个或多个选自REY、TAQMCCSK(SEQ ID NO:328)和TVCDS(SEQ ID NO:329)的残基、由其组成或基本上由其组成。

9.根据权利要求8所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其含有：包含分别在SEQ IDNO:37-39中所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3区域的重链可变(VH)区域；和包含分别在SEQID NO:40-42中所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3区域的轻链可变(VL)区域。

10.根据权利要求8或9所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH区域包含与SEQ ID NO:115具有至少90％同一性的氨基酸序列。

11.根据权利要求8-10中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL区域包含与SEQ ID NO:116具有至少90％同一性的氨基酸序列。

12.根据权利要求10或11所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含在SEQ ID NO:115中所示的VH区域和在SEQ ID NO:116中所示的VL区域。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其结合人TNFR2，任选地可溶性的和细胞表达的人TNFR2。

14.根据权利要求13所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其结合选自表T1的至少一、二、三、四或五种人TNFR2肽表位。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是人源化的。

16.根据权利要求1-15中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体选自单链抗体、scFv、缺乏铰链区域的单价抗体、微抗体和前抗体。

17.根据权利要求1-15中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是Fab或Fab’片段。

18.根据权利要求1-15中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是F(ab’)₂片段。

19.根据权利要求1-15中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是完整抗体。

20.根据权利要求1-19中任一项所述的分离的抗体，其包含人IgG恒定结构域。

21.根据权利要求20所述的分离的抗体，其中所述IgG恒定结构域包含IgG1 CH1结构域。

22.根据权利要求20所述的分离的抗体，其中所述IgG恒定结构域包含IgG1 Fc区域，任选的经修饰的Fc区域，任选地被一个或多个氨基酸置换修饰。

23.根据权利要求1-22中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其以约2nM或更低的K_D结合人TNFR2，任选的至少一种来自表T1的肽表位。

24.根据权利要求1-23中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其以约0.7nM或更低的K_D结合人TNFR2，或以约50pm或更低的K_D结合在原代T细胞、任选的T_reg上的人TNFR2。

25.根据权利要求1-24中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段：

(a)抑制TNF-α与TNFR2的结合；

(b)抑制TNFR2信号传递；

(c)激活TNFR2信号传递；

(d)抑制TNFR2二聚化/三聚化；

(e)交叉反应性地结合人TNFR2和食蟹猴TNFR2；

(i)将MDSC和/或M2巨噬细胞转化成促炎性M1巨噬细胞；

(j)将T_reg转化成效应T细胞；

(k)将冷肿瘤转化成热肿瘤；

(l)减少T_reg介导的免疫抑制；或者

(m)(a)-(k)中的任意一种或多种的组合。

26.根据权利要求1-25中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其基本上不结合TNFR1、疱疹病毒进入介质(HVEM、CD40、死亡受体6(DR6)和/或骨保护素(OPG)。

27.根据权利要求1-26中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其为TNFR2拮抗剂。

28.根据权利要求1-26中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其为TNFR2激动剂。

29.根据权利要求1-28中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其为双特异性或多特异性抗体。

30.分离的多核苷酸，其编码根据权利要求1-29中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，包含所述分离的多核苷酸的表达载体，或包含所述载体的分离的宿主细胞。

31.一种组合物，其包含生理上可接受的载体和治疗有效量的根据权利要求1-29中任一项所述的分离抗体或其抗原结合片段。

32.一种用于治疗具有癌症、任选与异常的TNFR2表达有关的癌症的患者的方法，所述方法包括给所述患者施用根据权利要求31所述的组合物，由此治疗所述癌症。

33.一种用于治疗具有癌症、任选与TNFR2拮抗剂介导的免疫抑制有关的癌症的患者的方法，所述方法包括给所述患者施用根据权利要求31所述的组合物，由此治疗所述癌症。

34.根据权利要求32或33所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段是TNFR2拮抗剂。

35.一种用于治疗具有炎症性和/或自身免疫性疾病的患者的方法，所述方法包括给所述患者施用根据权利要求231所述的组合物，由此治疗所述炎症。

36.根据权利要求35所述的方法，其中所述疾病与异常TNFR2表达有关,任选地其中所述抗体或其抗原结合片段是TNFR2激动剂。

37.根据权利要求35所述的方法，其中所述疾病与TNFR2激动剂介导的免疫激活有关。