CN103819267B - 用于花生种植的微生物菌肥及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种专用于花生种植的微生物菌肥，由如下重量份的组分组成：复合微生物菌剂5-25、粕类复合粉30-65、淀粉5-20和膨润土10-25，其中，所述复合微生物菌剂由枯草芽孢杆菌菌剂、沼泽红假单胞菌菌剂、哈茨木霉菌剂和淡紫拟青霉菌菌剂组成，四种菌剂的质量比为5:2:1:2，所述复合微生物菌剂的总有效活菌数为100亿cfu/g。本发明的微生物菌肥主要作为基肥施用，该菌肥在促进花生对养分吸收的同时，还能够改变花生根部周围的微环境以防御多种病虫害，提高花生的产量和改善品质。

Description

用于花生种植的微生物菌肥及其制备方法

技术领域

本发明涉及农用肥领域，具体地说，涉及一种用于花生种植的微生物菌肥及其制备方法。

背景技术

花生是我国传统的大宗出口农产品，在国际市场上具有较强的竞争力，据统计，近年我国花生年出口量60多万吨左右，约占世界花生出口量的40%以上，是世界第一花生出口国。同时，花生作为主要油料作物，早在20世纪50年代，花生占油料总种植面积的34.2%，占油料总产量的59.5%。随着人民生活水平的提高，花生的营养保健价值日益受到重视，食品加工的比例也进一步上升，需求不断增加。但随着城市化的发展，耕地面积不断减少，以及花生主产区在花生生产中存在一些问题，再加上花生病虫害呈加重趋势，限制着花生产业的进一步发展。

花生病虫害呈加重趋势，是花生稳产高产的主要限制因子。在花生主产区，由于连作面积大，连作年限长，花生病虫害非常严重，花生根腐病、青枯病、叶斑病、网斑病、蛴螬等病虫害在一些地区造成减产达40%以上，个别田块由于青枯病、蛴螬等的影响造成了绝收，严重影响了花生生产；与此同时，在生产过程中过量使用化肥、农药等，造成花生产品重金属污染和农药残留超标等，严重影响花生的品质。因此，如何充分利用现代生物技术，生产和应用高效生物有机肥、高效生物菌剂和高效生物农药，促进花生产业的发展显得极为重要。

发明内容

本发明旨在防止花生生长中病害的滋生、减少农药和化肥的施用、促进花生的生长和品质的提高，提供一种专门用于花生种植的微生物菌肥。

本发明的另一目的是提供所述微生物菌肥的制备方法及应用。

为了实现本发明目的，本发明的一种用于花生种植的微生物菌肥，由如下重量份的组分组成：复合微生物菌剂5-25、粕类复合粉30-65、淀粉5-20和膨润土10-25。

其中，所述复合微生物菌剂由枯草芽孢杆菌菌剂、沼泽红假单胞菌菌剂、哈茨木霉菌剂和淡紫拟青霉菌菌剂组成，四种菌剂的质量比为5:2:1:2，所述复合微生物菌剂的总有效活菌数约为100亿cfu/g。

所述枯草芽孢杆菌菌剂中枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）ACCC10118的有效活菌数约为100亿cfu/g，所述沼泽红假单胞菌菌剂中沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonaspalustris)ACCC10649的有效活菌数约为40亿cfu/g，所述哈茨木霉菌剂中哈茨木霉（Trichodermaharzianum）ACCC31707的有效活菌数约为20亿cfu/g，所述淡紫拟青霉菌菌剂中淡紫拟青霉菌（Paecilomyceslilacinus）ATCC20079的有效活菌数约为40亿cfu/g。

ACCC代表中国农业微生物菌种保藏管理中心，ATCC代表美国菌种保藏中心。

所述复合微生物菌剂中含有拮抗真菌致病菌菌株、防治土壤病原菌繁殖菌株、刺激作物生长和增强养分吸收菌株以及害虫防治菌。所述拮抗真菌致病菌菌株为哈茨木霉；所述抑制土壤病原菌繁殖和改善土壤环境菌株为枯草芽孢杆菌；刺激作物生长和增强养分吸收菌株为枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌；所述害虫防治菌为淡紫拟青霉菌。

所述粕类复合粉为豆粕、菜籽粕和芝麻粕，按照等质量比混合后经过微生物发酵、腐熟后干燥、粉碎、过筛后所得粉状有机质。其中，发酵制备所述粕类复合粉所使用的微生物为枯草芽孢杆菌、哈茨木霉和米曲霉等。

所述淀粉为过80目筛的玉米淀粉。

所述膨润土是乳白色粉末，过300目筛，具有膨润性、吸附性、悬浮性等特殊性质，其中SiO₂含量为70%。

本发明提供的用于花生种植的微生物菌肥为粉剂。

本发明还提供所述微生物菌肥的制备方法，包括如下步骤：

（1）单一菌剂的制备

枯草芽孢杆菌菌剂的制备：

a.斜面培养：将枯草芽孢杆菌菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在35-37℃条件下培养36-48小时；所述斜面培养基为：葡萄糖10-15g、蛋白胨5-7g、牛肉膏3-5g、氯化钠2g、琼脂粉16g和水1000mL，pH7.0-7.5；

b.摇床培养：将步骤a培养的菌种在无菌条件下接种于摇瓶培养基中，在35-37℃，180-200r/min条件下振荡培养12-18小时；所述摇瓶培养基为：葡萄糖10-15g、蛋白胨5-7g牛肉膏3-5g、酵母膏1-3g、磷酸二氢钾2.5g、硫酸镁5g和水1000mL，pH7.0-7.5；

c.发酵罐培养：将步骤b培养的菌种在无菌条件下接种于发酵培养基中，在罐压0.5kg、温度35-37℃、通气量1:0.8-1.0、转速180-200r/min的条件下，发酵培养36-48小时后，当80%菌体成为芽孢时出罐，得到发酵液；所述发酵培养基为：蔗糖30-45g、豆粕粉20-25g、蛋白胨10-15g、硫酸铵5g、鱼粉5-7g、硫酸镁5g、硫酸锰3g、磷酸二氢钾2.5g、碳酸钙1.5g和水1000mL，pH7.5-8.0；

d.将步骤c中得到的发酵液经浓缩后，按适当比例与载体谷壳粉混合干燥制备成孢子粉，获得有效活菌数约为100亿cfu/g的枯草芽孢杆菌孢子粉，即为枯草芽孢杆菌菌剂。

沼泽红假单胞菌菌剂的制备：

e.斜面培养：将沼泽红假单胞菌菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在30℃、光照强度为5000Lx条件下培养2-3天；所述斜面培养基为：酵母膏0.2-0.5g、硫酸铵0.5-2g、磷酸氢二钾0.5g、氯化钠0.5g、氯化钙0.1g、琼脂粉16g和水1000mL，pH6.0；

f.种子液制备：将步骤e培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在温度为28-30℃，光照强度为5000Lx条件下，静置培养约72小时；所述种子培养基为：酵母膏0.5-1g、硫酸铵0.5-2g、磷酸氢二钾0.5g、磷酸二氢钾0.5g、氯化钠0.5g、硫酸镁0.5g、氯化钙0.1g和水1000mL，pH6.0；

g.扩大培养：将步骤f培养的菌种在无菌条件下接种于发酵培养基中，温度为25-30℃、光照强度为5000-6000Lx条件下，静置发酵培养5-7天后，待发酵液呈棕红色时结束发酵，得到发酵液；所述发酵培养基为：酵母膏1.0-2.0g、丙酸钠1.5-3.0g、硫酸铵2.5-3.0g、磷酸氢二钾0.5g、磷酸二氢钾0.5g、氯化钠0.5g、硫酸镁0.5g、氯化钙0.1g和水1000mL，pH6.0；

h.将步骤g中得到的发酵液低速离心浓缩、按照适当比例与载体谷壳粉混合干燥制备成菌粉，获得有效活菌数约为40亿cfu/g的沼泽红假单胞菌菌粉，即为沼泽红假单胞菌菌剂。

哈茨木霉菌剂的制备：

i.将哈茨木霉菌种在无菌条件下接种于马铃薯葡萄糖斜面培养基上，在26-28℃条件下培养约96小时；

j.摇床培养：将步骤i培养的菌种在无菌条件下接种于装有200mL无菌营养液的500mL三角瓶中，置于摇床中，于26-28℃，120-150r/min条件下振荡培养18-24小时；所述无菌营养液为：硫酸铵2.5g、葡萄糖5g和水1000mL；

k.固体发酵产孢：将步骤j的哈茨木霉菌悬液接种到固体发酵培养基，进行固体发酵培养6-8天，90%产孢时，收获发酵产物；所述固体发酵培养基为：玉米粉、麸皮和营养液按5:15:12的质量比混合；所述营养液为：蔗糖12-20g、硫酸镁1.5g、硫酸锰1.5g，水1000mL，自然pH；

l.将步骤k中发酵产物置于热循环烘箱内30℃烘干后粉碎，按照适当比例与载体谷壳粉混合制备成菌剂，获得有效活菌数约为20亿cfu/g的哈茨木霉孢子粉，即为哈茨木霉菌剂。

淡紫拟青霉菌菌剂的制备：

m.将淡紫拟青霉菌菌种在无菌条件下接种于马铃薯葡萄糖斜面培养基上，在25-28℃条件下培养约96小时；

n.孢子悬浮液：将步骤m培养的菌种，在无菌条件用无菌水配制成孢子悬浮液；

o.液体发酵：将步骤n的淡紫拟青霉菌孢子悬浮液接种到液体发酵培养基中，在25-28℃、通气量1:0.8-1.0、转速120-150r/min的条件下，发酵罐发酵培养2天，即得到淡紫拟青霉菌液体菌种，0.05MPa保压，准备用于固体发酵接种；所述液体发酵培养基为：豆粕粉25-30g、蔗糖15-20g、硫酸铵5g、硫酸铁0.5g、硫酸锰0.2g、硫酸锌0.05g、硫酸铜0.05g、氯化钴0.3g，水1000mL，pH5-6；

p.固体发酵产孢：将步骤o的淡紫拟青霉菌液体种子接种到固体发酵培养基，进行固体发酵培养5-6天，90%产孢时，收获发酵产物；所述固体发酵培养基为：豆粕粉、麸皮和营养液按1:3:2的质量比混合；所述营养液为：淀粉15-25g、葡萄糖10-15g、硫酸铵3g、硫酸铁0.5g、硫酸镁1g，水1000mL，自然pH；

q.将步骤p中发酵产物置于热循环烘箱内30℃烘干后粉碎，按照适当比例与载体谷壳粉混合制备成菌剂，获得有效活菌数约为40亿cfu/g的淡紫拟青霉菌孢子粉，即为淡紫拟青霉菌菌剂。

（2）复合微生物菌剂的制备：将步骤（1）中制备的枯草芽孢杆菌菌剂、沼泽红假单胞菌菌剂、哈茨木霉菌剂和淡紫拟青霉菌菌剂按照5:2:1:2的质量比混匀，水分控制在10%以内，即得复合微生物菌剂；

（3）粕类复合粉的制备：将豆粕、菜籽粕和芝麻粕，按等质量比混合得粕类混合物，向其中添加有机物料腐熟剂混匀堆沤发酵，水分控制在60%；其中有机物料腐熟剂与粕类混合物的质量比为1：50；所述有机物料腐熟剂为枯草芽孢杆菌、哈茨木霉和米曲霉的混合菌剂，混合菌剂中总有效活菌数约为5亿cfu/g。

发酵过程中对温度和时间进行控制，开始发酵时采用塑料膜覆盖堆沤物，当沤堆15cm以下的温度上升至50℃时将塑料膜揭开，该过程约为3天；当沤堆15cm以下的温度上升至60℃时启动翻堆机进行翻堆，如此反复操作，约50天后，豆粕、菜籽粕和芝麻粕彻底腐熟，腐熟后风干、粉碎、过筛，即得粕类复合粉。

（4）微生物菌肥的制备：按比例称取复合微生物菌剂、粕类复合粉、淀粉和膨润土，混匀（例如，置于三维混合机中混合1.5小时）后即得用于花生种植的微生物菌肥。

本发明还提供所述微生物菌肥在花生种植中的应用。

施用方法：

①每亩用量5-10公斤，可穴施、沟施、地面撒施及拌种施肥；

②特别适宜作基肥，也可作叶面肥；

③施用本品最佳时间为早上或傍晚，施用后要及时覆土或耕地，勿使本品暴露于强阳光下；

④严禁与化学杀菌剂及抗生素直接混合使用；

⑤存放于阴凉干燥处。

所述花生微生物肥具有改良土壤，增加土壤肥力，促进农作物吸收营养，提高花生防病抗害虫能力，减少花生根腐病、叶斑病、蛴螬等病虫害发生的功效，从而提高花生产量和品质。

本发明具有以下优点：

（一）本发明的微生物菌肥中，微生物种类搭配合理，哈茨木霉能抑制真菌致病菌，枯草芽孢杆菌能在花生根部繁殖形成优势菌落抑制土壤源病菌的繁殖，能很好地改善连作种植引起的土壤环境恶化的情况，沼泽红假单胞菌能够通过光合作用和固氮作用为作物提供养分，刺激作物生长，淡紫拟青霉菌是一种新型的生物农药，能有效防治花生病原线虫、蛴螬等病虫害。这四种微生物还能分泌多种功能酶，具有固氮、解磷、解钾的作用，促进花生对营养物的吸收，提升花生的品质。另外，本发明采用了发酵腐熟后的豆粕、菜籽粕、芝麻粕为主要载体，是农业废弃物的再利用，在改善环境的同时，也产生了良好的经济效益。通过微生物发酵腐熟后的豆粕、菜籽粕、芝麻粕混合物能释放出可供花生吸收的氮、磷、钾，作为基肥施用在一定程度上能保证花生生长所需营养物质。

（二）本发明的微生物菌肥制备方法简便可行，其中微生物菌剂制备先进科学，孢子数含量高，存活时间长，能在土壤中快速繁殖形成优势菌落，促进花生的健康生长。

（三）本发明的微生物菌肥在田间的应用效果好。通过花生田间种植试验，结果表明：使用本品后花生出芽率高；生长期间病害发生率低；在连作地，花生植株真菌发病率也明显减少，花生饱粒数比对照组有明显提高，产量比对照组提高约19%。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

实施例1用于花生种植的微生物菌肥及其制备方法

本实施例中用于花生种植的微生物菌肥，各原料组分的质量百分比如下：复合微生物菌剂15%、粕类复合粉60%、淀粉15%、膨润土10%。所述的复合微生物菌剂为枯草芽孢杆菌50亿cfu/g、沼泽红假单胞菌20亿cfu/g、哈茨木霉10亿cfu/g和淡紫拟青霉菌20亿cfu/g。

所述复合微生物菌剂中枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）ACCC10118菌剂的有效活菌数约为50亿cfu/g，沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonaspalustris)ACCC10649菌剂的有效活菌数约为20亿cfu/g，哈茨木霉（Trichodermaharzianum）ACCC31707菌剂的有效活菌数约为10亿cfu/g，淡紫拟青霉菌（Paecilomyceslilacinus）ATCC20079菌剂的有效活菌数约为20亿cfu/g。

所述淀粉为过80目筛的玉米淀粉。

所述膨润土是乳白色粉末，过300目筛，具有膨润性、吸附性、悬浮性等特殊性质，其中SiO₂含量为70%。

微生物菌肥的制备方法，包括如下步骤：

（1）单一菌剂的制备

枯草芽孢杆菌菌剂的制备：

a.斜面培养：将枯草芽孢杆菌菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在37℃条件下培养48小时；所述斜面培养基为：葡萄糖15g、蛋白胨7g、牛肉膏5g、氯化钠2g、琼脂粉16g和水1000mL，pH7.5；

b.摇床培养：将步骤a培养的菌种在无菌条件下接种于摇瓶培养基中，在37℃，200r/min条件下振荡培养18小时；所述摇瓶培养基为：葡萄糖15g、蛋白胨7g牛肉膏5g、酵母膏3g、磷酸二氢钾2.5g、硫酸镁5g和水1000mL，pH7.5；

c.发酵罐培养：将步骤b培养的菌种在无菌条件下接种于发酵培养基中，在罐压0.5kg、温度37℃、通气量1:0.8、转速200r/min的条件下，发酵培养48小时后，当80%菌体成为芽孢时出罐，得到发酵液；所述发酵培养基为：蔗糖45g、豆粕粉25g、蛋白胨15g、硫酸铵5g、鱼粉7g、硫酸镁5g、硫酸锰3g、磷酸二氢钾2.5g、碳酸钙1.5g和水1000mL，pH8.0；

d.将步骤c中得到的发酵液经浓缩后，按适当比例与载体谷壳粉混合干燥制备成孢子粉，获得有效活菌数约为100亿cfu/g的枯草芽孢杆菌孢子粉，即为枯草芽孢杆菌菌剂。

沼泽红假单胞菌菌剂的制备：

e.斜面培养：将沼泽红假单胞菌菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在30℃、光照强度为5000Lx条件下培养2-3天；所述斜面培养基为：酵母膏0.5g、硫酸铵2g、磷酸氢二钾0.5g、氯化钠0.5g、氯化钙0.1g、琼脂粉16g和水1000mL，pH6.0；

f.种子液制备：将步骤e培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在温度为30℃，光照强度为5000Lx条件下，静置培养约72小时；所述种子培养基为：酵母膏1g、硫酸铵2g、磷酸氢二钾0.5g、磷酸二氢钾0.5g、氯化钠0.5g、硫酸镁0.5g、氯化钙0.1g和水1000mL，pH6.0；

g.扩大培养：将步骤f培养的菌种在无菌条件下接种于发酵培养基中，温度为30℃、光照强度为6000Lx条件下，静置发酵培养7天后，待发酵液呈棕红色时结束发酵，得到发酵液；所述发酵培养基为：酵母膏2.0g、丙酸钠3.0g、硫酸铵3.0g、磷酸氢二钾0.5g、磷酸二氢钾0.5g、氯化钠0.5g、硫酸镁0.5g、氯化钙0.1g和水1000mL，pH6.0；

h.将步骤g中得到的发酵液低速离心浓缩、按照适当比例与载体谷壳粉混合干燥制备成菌粉，获得有效活菌数约为40亿cfu/g的沼泽红假单胞菌菌粉，即为沼泽红假单胞菌菌剂。

哈茨木霉菌剂的制备：

i.将哈茨木霉菌种在无菌条件下接种于马铃薯葡萄糖斜面培养基上，在28℃条件下培养约96小时；

j.摇床培养：将步骤i培养的菌种在无菌条件下接种于装有200mL无菌营养液的500mL三角瓶中，置于摇床中，于28℃，150r/min条件下振荡培养24小时；所述无菌营养液为：硫酸铵2.5g、葡萄糖5g和水1000mL；

k.固体发酵产孢：将步骤j的哈茨木霉菌悬液接种到固体发酵培养基，进行固体发酵培养8天，90%产孢时，收获发酵产物；所述固体发酵培养基为：玉米粉、麸皮和营养液按5:15:12的质量比混合；所述营养液为：蔗糖20g、硫酸镁1.5g、硫酸锰1.5g，水1000mL，自然pH；

l.将步骤k中发酵产物置于热循环烘箱内30℃烘干后粉碎，按照适当比例与载体谷壳粉混合制备成菌剂，获得有效活菌数约为20亿cfu/g的哈茨木霉孢子粉，即为哈茨木霉菌剂。

淡紫拟青霉菌菌剂的制备：

m.将淡紫拟青霉菌菌种在无菌条件下接种于马铃薯葡萄糖斜面培养基上，在28℃条件下培养约96小时；

n.孢子悬浮液：将步骤m培养的菌种，在无菌条件用无菌水配制成孢子悬浮液；

o.液体发酵：将步骤n的淡紫拟青霉菌孢子悬浮液接种到液体发酵培养基中，在28℃、通气量1:0.8、转速150r/min的条件下，发酵罐发酵培养2天，即得到淡紫拟青霉菌液体菌种，0.05MPa保压，准备用于固体发酵接种；所述液体发酵培养基为：豆粕粉30g、蔗糖20g、硫酸铵5g、硫酸铁0.5g、硫酸锰0.2g、硫酸锌0.05g、硫酸铜0.05g、氯化钴0.3g，水1000mL，pH6；

p.固体发酵产孢：将步骤o的淡紫拟青霉菌液体种子接种到固体发酵培养基，进行固体发酵培养6天，90%产孢时，收获发酵产物；所述固体发酵培养基为：豆粕粉、麸皮和营养液按1:3:2的质量比混合；所述营养液为：淀粉25g、葡萄糖15g、硫酸铵3g、硫酸铁0.5g、硫酸镁1g，水1000mL，自然pH；

q.将步骤p中发酵产物置于热循环烘箱内30℃烘干后粉碎，按照适当比例与载体谷壳粉混合制备成菌剂，获得有效活菌数约为40亿cfu/g的淡紫拟青霉菌孢子粉，即为淡紫拟青霉菌菌剂。

（2）复合微生物菌剂的制备：将步骤（1）中制备的枯草芽孢杆菌菌剂、沼泽红假单胞菌菌剂、哈茨木霉菌剂和淡紫拟青霉菌菌剂按照5:2:1:2的质量比混匀，水分控制在10%以内，即得复合微生物菌剂，所述复合微生物菌剂的总有效活菌数约为100亿cfu/g。

（3）粕类复合粉的制备：将豆粕、菜籽粕和芝麻粕，按等质量比混合得粕类混合物，向其中添加有机物料腐熟剂混匀堆沤发酵，水分控制在60%；其中有机物料腐熟剂与粕类混合物的质量比为1：50；所述有机物料腐熟剂为枯草芽孢杆菌、哈茨木霉和米曲霉的混合菌剂，混合菌剂中总有效活菌数约为5亿cfu/g。

发酵过程中对温度和时间进行控制，开始发酵时采用塑料膜覆盖堆沤物，当沤堆15cm以下的温度上升至50℃时将塑料膜揭开，该过程约为3天；当沤堆15cm以下的温度上升至60℃时启动翻堆机进行翻堆，如此反复操作，约50天后，豆粕、菜籽粕和芝麻粕彻底腐熟，腐熟后风干、粉碎、过筛，即得粕类复合粉。

（4）微生物菌肥的制备：按比例称取复合微生物菌剂、粕类复合粉、淀粉和膨润土，置于三维混合机中混合1.5小时后，即得用于花生种植的微生物菌肥。

实施例2用于花生种植的微生物菌肥及其制备方法

本实施例中用于花生种植的微生物菌肥，各原料组分的质量百分比如下：复合微生物菌剂20%、粕类复合粉50%、淀粉13%、膨润土17%。其余同实施例1。

实施例3用于花生种植的微生物菌肥及其制备方法

本实施例中用于花生种植的微生物菌肥，各原料组分的质量百分比如下：复合微生物菌剂5%、粕类复合粉65%、淀粉20%、膨润土10%。其余同实施例1。

实施例4用于花生种植的微生物菌肥及其制备方法

本实施例中用于花生种植的微生物菌肥，各原料组分的质量百分比如下：复合微生物菌剂25%、粕类复合粉30%、淀粉20%、膨润土25%。其余同实施例1。

实施例5用于花生种植的微生物菌肥在增强土壤养分上的应用

试验于2012年4月在浏阳市普迹镇普泰村的花生种植示范区进行，试验田为黄棕壤，耕作层厚度30cm，土壤母质为冲积土，其土壤农化性状为有机质31.47g/kg、pH6.21、碱解氮98.4mg/kg、速效磷22.76mg/kg、速效137.63mg/kg。试验田面积为666.7m²，在统一翻耕、耙压之后，平均分成6小区，小区间设走道，四周设置保护行。实验区和对照区各3个小区，随机分配，做好标记。试验区：按照每亩施实施例2中制备的微生物菌肥5公斤、氮肥（尿素）6公斤、磷肥（过磷酸钙）5公斤、钾肥（硫酸钾）10公斤的比例混合均匀，作为底肥于播种前整畦时全层施用，种子穴播，每穴2粒，每小区种植规格和播种穴数一致。每666.7m²播约7200丛，每小区约1200丛。对照区：施肥方式同上，只施撒无机肥。

调查方式：①分别在施肥后的第10、20、30天取样调查；②每小区作5点取样即四角和中心，每点平行取样2次，混合成土壤样品供检测各指标。

通过实验发现，该花生微生物菌肥，能够改良土壤环境，提高土壤肥力，结果见表1。施用该花生微生物菌肥后，土壤中的有机质相比对照区提高约18%，碱效氮、速效磷、速效钾分别提高约2%、15%、7%。

表1用于花生种植的微生物菌肥在增强土壤养分上的应用

另外，在两轮连作田的试验结果也显示，该花生微生物菌肥亦能够改良连作田土壤环境，提高土壤肥力。连作田，施用花生微生物菌肥后，土壤中的有机质相比对照区提高约15%，碱效氮、速效磷、速效钾分别提高约2%、11%、5%。

实施例6用于花生种植的微生物菌肥在提高花生出苗率中的应用

该实施例的处理方式同实施例5。

调查方式：分别统计每小区的出苗数，计数出苗率：

出苗率=出苗数/种子数×100%

通过实验发现，该花生微生物菌肥能够提高花生的出苗率，结果见表2。施用该花生微生物菌肥后，花生种子的出苗率相比对照提高了约9%。

表2用于花生种植的微生物菌肥在花生出苗率中的应用

组别	对照组1	对照组2对照组3	实验组1	实验组2	实验组3
						出芽率	77%	82%85%	85%	89%	91%

注：1、2、3是指三次平行重复实验，结果取三组的平均值。

由于连作种植会造成土壤中的病菌和虫卵长期残留，感染能力强，致使花生仁霉烂、幼苗发病率高。试验选择两轮连作田发现，该花生微生物菌肥，能够抑制病虫害对花生的侵染，提高花生出苗率，施用该花生微生物菌肥后，花生种子的出苗率相比提高了约16%。

实施例7用于花生种植的微生物菌肥在防治花生病虫害中的应用

该实施例的处理方式同实施例5。

调查方式：①分别在花生幼苗期、生长期、开花期、结荚期、饱果成熟期，统计花生病害情况；②每个生长阶段，采用五点取样的方法，每5天调查一次，每点查30墩花生，统计病害情况，并做好病株标记。

通过调查发现，花生在不同生长阶段，受病害感染情况不同，结果见表3，花生在幼苗期容易被茎腐病、根腐病的病菌侵染；在生长期、开花期及结荚期病害严重，甚至出现小区域的被病害侵染。通过实验发现，施用该花生微生物菌肥后，病害的发生有所减轻，该花生微生物菌肥能够显著抑制土壤中的真菌病原菌，降低病菌的感染能力，特别是成熟期，蛴螬较对照组明显减少，这可能与淡紫拟青霉菌产生的功能酶能够杀死害虫有关。

表3用于花生种植的微生物菌肥在防治花生病虫害中的应用

另外，还选择了两轮连作田实施本试验发现，连作地病害发生较严重，结果见表4。花生在幼苗期容易被茎腐病、根腐病的病菌侵染；在生长期、开花期及结荚期病害严重，甚至出现小区域的被病害侵染。通过实验发现，轮作地施用该花生微生物菌肥后，病害的发生有所减轻，该花生专用微生物菌肥能够显著抑制土壤中的真菌病原菌，降低病菌的感染能力，特别是成熟期，蛴螬较对照组明显减少，这可能与淡紫拟青霉菌产生的功能酶能够杀死害虫有关。

表4用于花生种植的微生物菌肥在防治花生病虫害中的应用

实施例8用于花生种植的微生物菌肥提高花生品质和产量中的应用

该实施例的处理方式同实施例5。

调查方式：①有关产量：花生成熟后，对照区和实验区花生均按照正常方式采收，晒干，称重，计算产量增加率：

产量增加率=(实验区产量-对照区产量)/对照区产量×100%

②有关品质：分别将两区采收的花生，搅拌混匀，各称取5公斤，通过外观观察法挑选出果大、果型舒展美观，果腰、果嘴明显，果壳质地坚硬、无斑点、颜色新鲜的花生，集中称重，计算品质提高率。

品质提高率=(实验区优质花生重量-对照区优质花生重量)/对照区优质重量×100%

通过实验发现，该微生物菌肥能够提高花生的产量和品质，结果见表5和表6。在施用该花生微生物菌肥后，花生的产量和品质都有提高，分别提高了约14%和25%，这可能与用于花生的微生物菌肥含有改善土壤环境菌株有关。

表5用于花生种植的微生物菌肥在提高花生产量中的应用

组别

对照组1

对照组2

对照组3

实验组1

实验组2

实验组3

产量

41kg

41kg

43kg

45kg

48kg

50kg

注：1、2、3是指三次平行重复实验，称重时采用四舍五入法取整数，计算结果取三组的平均值。

表6用于花生种植的微生物菌肥在提高花生品质中的应用

组别

对照组1

对照组2

对照组3

实验组1

实验组2

实验组3

重量

2.2kg

2.8kg

3.3kg

3.2kg

3.5kg

3.7kg

注：1、2、3是指三次平行重复实验，称重时采用四舍五入法保留一位小数，计算结果取三组的平均值。

通过调查发现，由于连续的种植同种作物-花生，导致土壤养分流失，病虫害残留严重，再加上化肥的连年施用，造成土壤板结和真菌类病菌的大量繁殖，花生产量逐年降低。在两轮连作地施用该花生微生物菌肥，有效抑制了病菌的繁殖和平衡土壤中有益菌的种类，改良了土壤结构，提高了花生的产量和品质，分别提高了相比对照区约19%和29%。

以上仅为进一步说明本发明内容所列举出的实施例，本发明在选择菌种、组分及其配比时做了大量的试验最终选择了合适的菌种、组分和质量配比，在防治花生病害发生和提高产量和品质上也做了大量的试验，为了简要说明，只选取了几个试验，因此一切基于本发明的成分、制备方法上所作出的简单变动都应落在本发明的保护范围内。

Claims (8)

1.一种用于花生种植的微生物菌肥，其特征在于，由如下重量份的组分组成：复合微生物菌剂5-25、粕类复合粉30-65、淀粉5-20和膨润土10-25；

其中，所述复合微生物菌剂由枯草芽孢杆菌菌剂、沼泽红假单胞菌菌剂、哈茨木霉菌剂和淡紫拟青霉菌菌剂组成，四种菌剂的质量比为5:2:1:2，所述复合微生物菌剂的总有效活菌数为100亿cfu/g；

所述粕类复合粉为豆粕、菜籽粕和芝麻粕，按照等质量比混合后经过微生物发酵、腐熟后干燥、粉碎、过筛后所得粉状有机质；

发酵制备所述粕类复合粉所使用的微生物为枯草芽孢杆菌、哈茨木霉和米曲霉。

2.根据权利要求1所述的微生物菌肥，其特征在于，所述淀粉为过80目筛的玉米淀粉。

3.根据权利要求1所述的微生物菌肥，其特征在于，所述膨润土过300目筛，其中SiO₂含量为70％。

4.根据权利要求1-3任一项所述的微生物菌肥，其特征在于，所述微生物菌肥为粉剂。

5.权利要求2-4任一项所述微生物菌肥的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)单一菌剂的制备

枯草芽孢杆菌菌剂的制备：

a.斜面培养：将枯草芽孢杆菌菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在35-37℃条件下培养36-48小时；所述斜面培养基为：葡萄糖10-15g、蛋白胨5-7g、牛肉膏3-5g、氯化钠2g、琼脂粉16g和水1000mL，pH7.0-7.5；

b.摇床培养：将步骤a培养的菌种在无菌条件下接种于摇瓶培养基中，在35-37℃，180-200r/min条件下振荡培养12-18小时；所述摇瓶培养基为：葡萄糖10-15g、蛋白胨5-7g牛肉膏3-5g、酵母膏1-3g、磷酸二氢钾2.5g、硫酸镁5g和水1000mL，pH7.0-7.5；

c.发酵罐培养：将步骤b培养的菌种在无菌条件下接种于发酵培养基中，在罐压0.5kg、温度35-37℃、通气量1:0.8-1.0、转速180-200r/min的条件下，发酵培养36-48小时后，当80％菌体成为芽孢时出罐，得到发酵液；所述发酵培养基为：蔗糖30-45g、豆粕粉20-25g、蛋白胨10-15g、硫酸铵5g、鱼粉5-7g、硫酸镁5g、硫酸锰3g、磷酸二氢钾2.5g、碳酸钙1.5g和水1000mL，pH7.5-8.0；

d.将步骤c中得到的发酵液经浓缩后，按适当比例与载体谷壳粉混合干燥制备成孢子粉，获得有效活菌数为100亿cfu/g的枯草芽孢杆菌孢子粉，即为枯草芽孢杆菌菌剂；

沼泽红假单胞菌菌剂的制备：

e.斜面培养：将沼泽红假单胞菌菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在30℃、光照强度为5000Lx条件下培养2-3天；所述斜面培养基为：酵母膏0.2-0.5g、硫酸铵0.5-2g、磷酸氢二钾0.5g、氯化钠0.5g、氯化钙0.1g、琼脂粉16g和水1000mL，pH6.0；

f.种子液制备：将步骤e培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在温度为28-30℃，光照强度为5000Lx条件下，静置培养72小时；所述种子培养基为：酵母膏0.5-1g、硫酸铵0.5-2g、磷酸氢二钾0.5g、磷酸二氢钾0.5g、氯化钠0.5g、硫酸镁0.5g、氯化钙0.1g和水1000mL，pH6.0；

g.扩大培养：将步骤f培养的菌种在无菌条件下接种于发酵培养基中，温度为25-30℃、光照强度为5000-6000Lx条件下，静置发酵培养5-7天后，待发酵液呈棕红色时结束发酵，得到发酵液；所述发酵培养基为：酵母膏1.0-2.0g、丙酸钠1.5-3.0g、硫酸铵2.5-3.0g、磷酸氢二钾0.5g、磷酸二氢钾0.5g、氯化钠0.5g、硫酸镁0.5g、氯化钙0.1g和水1000mL，pH6.0；

h.将步骤g中得到的发酵液低速离心浓缩、按照适当比例与载体谷壳粉混合干燥制备成菌粉，获得有效活菌数为40亿cfu/g的沼泽红假单胞菌菌粉，即为沼泽红假单胞菌菌剂；

哈茨木霉菌剂的制备：

i.将哈茨木霉菌种在无菌条件下接种于马铃薯葡萄糖斜面培养基上，在26-28℃条件下培养96小时；

j.摇床培养：将步骤i培养的菌种在无菌条件下接种于装有200mL无菌营养液的500mL三角瓶中，置于摇床中，于26-28℃，120-150r/min条件下振荡培养18-24小时；所述无菌营养液为：硫酸铵2.5g、葡萄糖5g和水1000mL；

k.固体发酵产孢：将步骤j的哈茨木霉菌悬液接种到固体发酵培养基，进行固体发酵培养6-8天，90％产孢时，收获发酵产物；所述固体发酵培养基为：玉米粉、麸皮和营养液按5:15:12的质量比混合；所述营养液为：蔗糖12-20g、硫酸镁1.5g、硫酸锰1.5g，水1000mL，自然pH；

l.将步骤k中发酵产物置于热循环烘箱内30℃烘干后粉碎，按照适当比例与载体谷壳粉混合制备成菌剂，获得有效活菌数为20亿cfu/g的哈茨木霉孢子粉，即为哈茨木霉菌剂；

淡紫拟青霉菌菌剂的制备：

m.将淡紫拟青霉菌菌种在无菌条件下接种于马铃薯葡萄糖斜面培养基上，在25-28℃条件下培养96小时；

n.孢子悬浮液：将步骤m培养的菌种，在无菌条件用无菌水配制成孢子悬浮液；

o.液体发酵：将步骤n的淡紫拟青霉菌孢子悬浮液接种到液体发酵培养基中，在25-28℃、通气量1:0.8-1.0、转速120-150r/min的条件下，发酵罐发酵培养2天，即得到淡紫拟青霉菌液体菌种，0.05MPa保压，准备用于固体发酵接种；所述液体发酵培养基为：豆粕粉25-30g、蔗糖15-20g、硫酸铵5g、硫酸铁0.5g、硫酸锰0.2g、硫酸锌0.05g、硫酸铜0.05g、氯化钴0.3g，水1000mL，pH5-6；

p.固体发酵产孢：将步骤o的淡紫拟青霉菌液体种子接种到固体发酵培养基，进行固体发酵培养5-6天，90％产孢时，收获发酵产物；所述固体发酵培养基为：豆粕粉、麸皮和营养液按1:3:2的质量比混合；所述营养液为：淀粉15-25g、葡萄糖10-15g、硫酸铵3g、硫酸铁0.5g、硫酸镁1g，水1000mL，自然pH；

q.将步骤p中发酵产物置于热循环烘箱内30℃烘干后粉碎，按照适当比例与载体谷壳粉混合制备成菌剂，获得有效活菌数为40亿cfu/g的淡紫拟青霉菌孢子粉，即为淡紫拟青霉菌菌剂；

(2)复合微生物菌剂的制备：将步骤(1)中制备的枯草芽孢杆菌菌剂、沼泽红假单胞菌菌剂、哈茨木霉菌剂和淡紫拟青霉菌菌剂按照5:2:1:2的质量比混匀，水分控制在10％以内，即得复合微生物菌剂；

(3)粕类复合粉的制备：将豆粕、菜籽粕和芝麻粕，按等质量比混合得粕类混合物，向其中添加有机物料腐熟剂混匀堆沤发酵，水分控制在60％；其中有机物料腐熟剂与粕类混合物的质量比为1：50；所述有机物料腐熟剂为枯草芽孢杆菌、哈茨木霉和米曲霉的混合菌剂，混合菌剂中总有效活菌数为5亿cfu/g；

发酵过程中对温度和时间进行控制，开始发酵时采用塑料膜覆盖堆沤物，当沤堆15cm以下的温度上升至50℃时将塑料膜揭开，该过程为3天；当沤堆15cm以下的温度上升至60℃时启动翻堆机进行翻堆，如此反复操作，50天后，豆粕、菜籽粕和芝麻粕彻底腐熟，腐熟后风干、粉碎、过筛，即得粕类复合粉；

(4)微生物菌肥的制备：按比例称取复合微生物菌剂、粕类复合粉、淀粉和膨润土，混匀后即得用于花生种植的微生物菌肥。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，将复合微生物菌剂、粕类复合粉、淀粉和膨润土置于三维混合机中混合1.5小时。

7.权利要求1-6任一项中所述微生物菌肥在花生种植中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，作为基肥施用，每亩用量5-10kg。