CN103585113B - 一种芹菜素聚乳酸缓释微球及其制备方法 - Google Patents

Abstract

一种芹菜素聚乳酸缓释微球及其制备方法，所述方法是将端羟基外消旋聚乳酸和大豆卵磷脂溶于有机溶剂中，在搅拌下将超声后的芹菜素混合液缓慢加入乳化剂水溶液中进行乳化，后减压蒸除溶剂，浓缩体积，再将所得的混合液高速离心、洗涤、干燥，制得由聚乳酸包载芹菜素的酸缓释微球，其微球粒径为1-5μm，载药率＞25％，包封率＞79％，缓释时间＞550h。本发明利用生物相容性和生物降解性好的聚乳酸作为包覆材料制得芹菜素聚乳酸缓释微球，球形规整、颗粒表面光滑无粘连、粒径分布均匀、且缓释效果好，体外持续释放时间550h以上，可克服药物水溶性、脂溶性差的缺点，达到了提高口服利用度、延长药物作用时间及提高药物疗效的目的。

Description

一种芹菜素聚乳酸缓释微球及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种药物缓释制剂及其制备方法，具体是一种由聚乳酸包载芹菜素构成的芹菜素聚乳酸缓释微球及其制备方法。

背景技术

芹菜素是广泛存在于多种水果蔬菜、豆类和茶叶中的黄酮类化合物，具有清除自由基、抗炎和抗癌生物活性。它主要通过控制癌细胞基因表达，影响其蛋白质活性从而诱导细胞凋亡，进而对多种癌细胞起到抑制其生长和促进凋亡的作用。同时又可以作为治疗HIV和其它病毒感染的抗病毒药物、MAP激酶的抑制剂、抗氧化剂、镇静剂、降压药物等。与其他黄酮类物质，如槲皮素、山奈黄酮，相比具有低毒、无诱变性等特点。经研究，芹菜素还有保护心脏的作用以及治疗帕金森氏症的功效。但是由于芹菜素不溶于水，亲水性和亲脂性均很差，口服吸收差，大大限制了其临床应用。 因此可通过应用生物可降解材料将其制成缓释制剂，以提高其口服利用度具有一定的可行性。

目前，在医药产品的开发上，关于其药物缓释制剂的报道比较少。张志国（芹菜素壳聚糖微球的制备及体外释药研究，实用药物与临床，第33卷第12期）等脱乙酰壳聚糖为药物载体，采用复乳-乳化化学交联法制备了芹菜素壳聚糖微球，一定程度上改善了芹菜素的口服吸收、延长药物释放时间，但由于壳聚糖粘度大，制备过程存在微球易粘连问题。

公开号为CN 102274192 A公开了 “一种羧甲基壳聚糖载药微球及其制备方法”，它以羧甲基壳聚糖为基体材料，在溶液中采用先离子交联，后二次交联的方法包覆芹菜素等小分子药物，但其存在载药量和包封率较低的问题。

聚乳酸(PLA) 由于具有良好的生物相容性和生物降解性，在人体内最终代谢为水和二氧化碳，不会在重要器官聚集而被广泛用作药物载体，因此采用聚乳酸包载芹菜素制成芹菜素聚乳酸缓释微球制剂，可以缓慢释放药物，大大减少给药频率，提高生物利用率，克服固有的口服吸收差的缺点。

发明内容

本发明针对芹菜素水溶性差、脂溶性差、口服吸收差和包封率低的缺点，基于聚乳酸生物相容性和生物降解性良好的特点，将其作为基质材料来制备芹菜素聚乳酸缓释微球，并将水溶性、脂溶性良好的大豆卵磷脂加入到聚乳酸中，使得制备微球能克服其固有的溶解性差、口服吸收差的缺点，大大减少给药频率、提高其生物利用率，以此实现本发明要提供的一种芹菜素聚乳酸缓释微球及其制备方法。

本发明的目的正是提供一种以聚乳酸为基质材料来制备具有较高载药量、包封率的芹菜素聚乳酸缓释微球及其制备方法。该制备方法为乳化分散-溶剂挥发法，将聚乳酸和大豆卵磷脂溶于有机溶媒中，并将芹菜素超声分散于其中，并且高剪切搅拌下将超声后的混合液缓慢加入到乳化剂中，乳化搅拌后将乳液转至旋转蒸发仪上减压蒸除溶剂浓缩体积，再将所得的混合液高速离心、洗涤、干燥，制得芹菜素聚乳酸缓释微球。采用该方法制备出的微球具有球形规整、颗粒表面光滑无粘连、粒径分布均匀、包埋良好、载药量和包封率高、缓释长效的特点。

本发明的技术方案为：一种芹菜素聚乳酸缓释微球及其制备方法，其中，一种芹菜素聚乳酸缓释微球，其所述缓释微球是由聚乳酸包载芹菜素构成，其粒径为1-5μm，载药率＞25％，包封率＞79％，缓释时间＞550h。

一种用于上述的芹菜素聚乳酸缓释微球的制备方法，其特征是：所述制备方法按下列步骤进行：

（1）将0.2~1 g分子量20000~100000的医用级端羟基外消旋聚乳酸（OH-PDLLA-OH）和0.3~1.5g大豆卵磷脂溶解于10mL的有机溶剂中，配成浓度为0.02~0.1g/mLPDLLA和0.03~0.15g/mL大豆卵磷脂的混合溶液；

（2）将一定质量的芹菜素超声分散于上述聚乳酸混合溶液中，混合后在常温下超声分散2~5min，芹菜素与聚乳酸的质量比为1：2~8；

（3）在高剪切搅拌速度为600~2000rpm下，将步骤（2）超声乳化所得的混合溶液缓慢滴加入一定体积的乳化剂中，混合后制成O/W型乳液；混合溶液与乳化剂水溶液的油水体积比为1：2~5；

（4）在搅拌速度为400rpm下搅拌10min后，将乳液转至旋转蒸发仪上减压蒸除溶剂，乳液浓缩至体积为10~20mL；

（5）将步骤（4）所得分散有微球的乳液离心20~40min，离心速度为12000rpm，离心后混合物上层为液体，下层为固体微球，收集下层固体微球并用蒸馏水洗涤、干燥后，即得平均粒径为1~5μm 的芹菜素缓释微球。

在上述技术方案中，所述有机溶剂为乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷和四氢呋喃中的一种；所述乳化剂为浓度0.25~0.35g/mL的普朗尼克F-68水溶液；所述微球颗粒于4°C干燥状态下保存。

实现上述所提供的一种芹菜素聚乳酸缓释微球及其制备方法，与现有技术相比，其直接带来的和不必然产生的有益效果在于：本发明以PDLLA为载体，采用乳化分散-溶剂挥发法，通过加入水溶性和脂溶性较好的大豆卵磷脂，控制PDLLA与芹菜素的用量比、超声乳化和混合搅拌的时间、乳化剂的浓度以及油水相体积比，制备的芹菜素缓释微球，球形规整，颗粒表面光滑无粘连、粒径分散均匀，大小在1-5μm之间；载药量较高(25％以上)，包封率高(79％以上) ；释药时间长，达到550h以上，具有显著的长效和缓释作用。该制备方法克服了芹菜素水溶性、脂溶性均较差、口服吸收率低的问题，且工艺简单，周期短，能充分保证所载药物量的实现和长效缓释性能，大大减少给药频率、提高其生物利用率。

附图说明

图1是实施例1中芹菜素聚乳酸缓释微球5000倍的的扫描电子显微镜图。

图2是实施例1中芹菜素的标准工作曲线。

图3是实施例1中芹菜素聚乳酸缓释微球的体外释放曲线。

具体实施方式

本发明以下将结合实施例作进一步详述。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

实施一种芹菜素聚乳酸缓释微球的制备方法，该制备方法是按下列步骤进行的：

（1）芹菜素聚乳酸缓释微球的制备

将0.2 g分子量20000的OH-PDLLA-OH和0.3g大豆卵磷脂溶解于10mL二氯甲烷中，配成浓度为0.02g/mL OH-PDLLA-OH和0.03g/mL大豆卵磷脂的混合溶液；将0.07g芹菜素加入上述聚乳酸二氯甲烷混合溶液中，混合后在常温下超声分散5min，芹菜素与聚乳酸质量比为1：3。高剪切搅拌速度为800rpm下，将上述混悬液缓慢滴加入30mL浓度0.25g/mL的普朗尼克F-68水溶液中，混合后制成O/W型乳液。然后在搅拌速度400rpm下，将该乳液搅拌10 min后，转至旋转蒸发仪上减压蒸除溶剂浓缩至体积为10 mL，得到分散有微球的乳液。将该溶液在高速离心机中12000rpm下离心20min，离心后混合物上层为液体，下层为固体微球，收集下层固体微球并用蒸馏水洗涤，干燥后，即得芹菜素聚乳酸缓释微球。

（2）微球的形态和粒径尺寸

通过扫描电镜拍摄的微球照片(附图1)，可以看到，研究所得的微球球形规整，颗粒表面光滑无粘连、粒径分散均匀，大小在1~5μm。

（3）药物含量及包封率测定

A、芹菜素最大吸收波长的测定

为确定芹菜素含量用紫外分光光度法测定波长，研究中用上海菁华756MC紫外可见分光光度计对芹菜素的最大吸收波长进行了测定，测定步骤为：精密称取20mg芹菜素，用95％的乙醇溶液溶解，以95％的乙醇溶液为空白，在200~400nm间作紫外扫描，便可得到最大吸收波长为340nm。

B、标准曲线制备

精密称取8mg芹菜素，用95％的乙醇溶液溶解，转移至100mL容量瓶中定容，得0.08mg/mL 的芹菜素对照液。精密吸取对照液0.05，0.1，0.15，0.2，0.25，0.3mL，在试管中分别用95％的乙醇定容至5mL。按照分光光度法在芹菜素的最大吸收波长处测定吸光度。并以芹菜素浓度为纵坐标、吸光度为横坐标作图得到芹菜素乙醇溶液的标准曲线如图2所示。通过线性回归得到芹菜素浓度A对吸光度C的回归方程为：A＝0.076 C-0.011[R²＝0.9996，RSD＝0.0035％，n＝6，P＜0.0001]。

C、载药量及包封率的计算

精密称取5 mg 芹菜素聚乳酸缓释微球，并加10 mL 95％乙醇于试管中，超声加热破坏1h 后，用微孔滤膜抽滤，精密吸取滤液1 mL，以95％乙醇为空白，在340 nm处测得，代入回归方程并计算，便可得到芹菜素含量为26％。然后根据下列公式便可以计算得到微球制备过程中芹菜素的包封率是79％。

载药量=（微球中的药物质量÷称取的微球质量）×100%

包封率=（微球中芹菜素的实际含量÷微球中芹菜素的理论含量）×100%

（4）体外释放实验

称取20mg芹菜素聚乳酸缓释微球置于透析袋（截留分子质量8000）中，加入pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液3 mL，夹紧透析袋两端，置100mL磷酸盐缓冲溶液中，于恒温（37.0±1.0）℃水浴中，磁力搅拌器低速搅拌。分别在1、3、7、21、35、61、107、145、168、264、323、470、550h等时间点，各取3 mL样品，测定其吸收度A，由回归方程计算各时间点芹菜素的浓度。测定后的溶液倒回原释放体系中，每个时间点测3次，取平均值得该时间点的药物浓度，并做微球体外累计释放曲线，见附图3。在最初的21h 内药物释放度为38.2％，在以后的550 h芹菜素从微球中缓慢持续释放，550 h 累计释放度达到73.5％，并且可以进一步释放，可见所得的微球满足缓释长效的要求。

实施例2

将0.6 g分子量70000的OH-PDLLA-OH和0.9g大豆卵磷脂溶解于10mL乙酸乙酯中，配成0.06g/mL OH-PDLLA-OH和0.09g/mL大豆卵磷脂的混合溶液；将0.1g芹菜素加入上述聚乳酸乙酸乙酯混合溶液中，混合后在常温下超声分散3min，芹菜素与聚乳酸质量比为1：6。高剪切搅拌速度为1500rpm下，将上述混悬液缓慢滴加入50mL 0.30g/mL的普朗尼克F-68水溶液中，混合后制成O/W型乳液。然后在搅拌速度400rpm下搅拌10 min后，转至旋转蒸发仪上减压蒸除溶剂，浓缩至体积为15 mL，得到分散有微球的乳液。将该溶液在高速离心机中12000rpm下离心30min，离心后混合物上层为液体，下层为固体微球，收集下层固体微球并用蒸馏水洗涤，干燥后，即得芹菜素缓释微球。微球球形规整，表面光滑无粘连，粒径为1-5μm，载药率27%，包封率82%，缓释时间＞550h。

实施例3

将0.8 g分子量100000的OH-PDLLA-OH和1.3g大豆卵磷脂溶解于10mL丙酮中，配成0.08g/mL OH-PDLLA-OH和1.3g/mL大豆卵磷脂的混合溶液；将0.1g芹菜素加入上述聚乳酸丙酮混合溶液中，混合后在常温下超声分散2min，芹菜素与聚乳酸质量比为1：8。高剪切搅拌速度为2000rpm下，将上述混悬液缓慢滴加入20mL 0.35g/mL的普朗尼克F-68水溶液中，混合后制成O/W型乳液。然后在搅拌速度400rpm下搅拌10 min后，将该乳液转至旋转蒸发仪上减压蒸除溶剂，浓缩至体积为20 mL，得到分散有微球的乳液。将该溶液在高速离心机中12000rpm下离心40min，离心后混合物上层为液体，下层为固体微球，收集下层固体微球并用蒸馏水洗涤，干燥后，即得芹菜素缓释微球。微球球形规整，表面光滑无粘连，粒径为1-5μm，载药率29%，包封率83%，缓释时间＞550h。

Claims (3)

1.一种芹菜素聚乳酸缓释微球的制备方法，其特征是：所述制备方法按下列步骤进行：

（1）将0.2~1 g分子量20000~100000的医用级端羟基外消旋聚乳酸（OH-PDLLA-OH）和0.3~1.5g大豆卵磷脂溶解于10mL的有机溶剂中，配成浓度为0.02~0.1g/mLPDLLA和0.03~0.15g/mL大豆卵磷脂的混合溶液；

（2）将一定质量的芹菜素超声分散于上述聚乳酸混合溶液中，混合后在常温下超声分散2~5min，芹菜素与聚乳酸的质量比为1：2~8；

（3）在高剪切搅拌速度为600~2000rpm下，将步骤（2）超声乳化所得的混合溶液缓慢滴加入一定体积的乳化剂中，混合后制成O/W型乳液；混合溶液与乳化剂水溶液的油水体积比为1：2~5；其中所述乳化剂为浓度0.25~0.35g/mL的普朗尼克F-68水溶液；

（4）在搅拌速度为400rpm下搅拌10min后，将乳液转至旋转蒸发仪上减压蒸除溶剂，乳液浓缩至体积为10~20mL；

（5）将步骤（4）所得分散有微球的乳液离心20~40min，离心速度为12000rpm，离心后混合物上层为液体，下层为固体微球，收集下层固体微球并用蒸馏水洗涤、干燥后，即得平均粒径为1~5μm，载药率＞25％，包封率＞79％，缓释时间＞550h 的聚乳酸包载芹菜素的芹菜素缓释微球。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述有机溶剂为乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷和四氢呋喃中的一种。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述微球颗粒于4°C干燥状态下保存。