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CN103404432B - 圣诞红的组织培养与快速繁殖方法 - Google Patents

圣诞红的组织培养与快速繁殖方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种圣诞红的组织培养与快速繁殖方法，属于植物组织培养技术领域。其特征是，利用盆栽圣诞红小植株的顶芽或侧芽，在无菌培养基上快速地形成大量增殖小苗，小苗诱导生根后移栽到室外小花盆中，成活率达89%以上，生长8～9个月，可作为商品出售。圣诞红生产上主要靠扦插进行繁殖，但因枝条含有丰富的乳汁，扦插成活率低；组培快繁在苗的生根上难较、生根率低。本发明与传统扦插繁殖相比，效率高，盆栽植株形状好、长势一致、商品价值高；组培苗的增殖倍数为8～10倍，增殖小苗生根时间为18～23天，生根率为80～85%，基本克服了小苗难以生根的问题。小苗培养基激素组合简单，成本低，便于推广。

Description

圣诞红的组织培养与快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及一种观赏花卉圣诞红的组织培养及快速繁殖方法，属于生物技术领域，具体地说是属于植物组织培养范畴。
背景技术
圣诞红（Euphorbiapulcherrima）,也称一品红，为大戟科大戟属植物，常绿或半常绿灌木，开花时叶呈朱红色，甚美丽，主要供观赏。其原产于中美洲墨西哥一带，现我国各地均有栽培。其观赏价值和经济价值均较高。
在元旦、春节期间，大多数花木还处于休眠阶段，圣诞红则身披绿叶，株顶托以赤红艳丽的花瓣状苞片，形大色鲜，十分引人注目，是冬季节日的优良花卉，所以又称它为“圣诞花”。
圣诞红少有结籽或基本无结籽能力，生产上靠扦插进行繁殖，但由于枝条含有丰富的乳汁，扦插成活率低，加之一些优良品种枝条少，引种初期繁殖数量有限，难以满足消费者需求。
目前，国内圣诞红的组培快繁研究不多，尚未形成成熟的培养体系，尤其在苗的生根上还有一定难度。本发明以盆栽圣诞红小植株为材料，通过不断摸索及改良，得到了一套成熟的组培快繁体系，为圣诞红种苗规模化生产提供了技术贮备。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种周期短，效率高，生产成本低，能规模化快速繁殖商品圣诞红盆花的方法。
本发明的技术方案，其步骤为：
（1）外植体灭菌处理：选取无病虫害、生长健壮、干净的盆栽圣诞红小植株；用灭菌剪刀，剪取植株上部幼嫩的顶芽及2～5个侧芽，加入少量洗洁精，用自来水冲洗3～5min；放入无菌烧杯中，在超净台上，先用无菌水浸洗4～5次，每次30～60S；再用75%酒精浸泡50～60S，倾弃酒精；然后用0.1%HgCl2溶液灭菌8～10min，倾弃废液；最后用无菌水冲洗5～7次，将材料转移至放有吸水纸的无菌培养皿中，吸干水分；
（2）无菌小苗的诱导及初代培养：将上述灭菌处理的、带顶芽或侧芽的茎段外植体接种在初代培养基（MS+6-BA1.0～1.5mg/L+NAA0.1～0.15mg/L+0.6%琼脂+3%蔗糖，PH值为5.8～6.0）上，培养温度为22～24℃，光照度为2000～2200Lx，光照时间为12h/d；24～27天，茎切段长成高2.5～4.3cm的小苗，小苗叶片浓绿、生长健壮；
（3）小苗的增殖及继代培养：将上述初代培养的小苗，剪成2～4个带芽的切段，接种在继代培养基（MS+6-BA1.0～1.5mg/L+KT0.5～1.0mg/L+IAA0.4～0.6mg/L+0.6%琼脂+3%蔗糖，PH值为5.8～6.0）上，培养温度为22～24℃，光照度为2000～2200Lx，光照时间为12h/d；20～25天，切段又长成高3.3～5.0cm、叶色浓绿的丛生小苗，增殖倍数为8～10倍；
（4）小苗的生根培养：选取经继代培养、长势健壮的小苗，从基部靠近节部位截取，接入到生根培养基（1/2MS+IAA0.5～0.8mg/L+IBA0.5～0.8mg/L+0.5%琼脂+2%蔗糖，PH值为5.8～6.0）中，培养温度为22～24℃，光照度为2000～2200Lx，光照时间为12h/d；18～23天，小苗基部已有4～6条1.0～2.5cm的根生成，生根率为80～85%；
（5）小苗的移栽：生根小苗在瓶中长至茎杆粗壮、叶色浓绿、高4.5～6.0cm时，进行花盆移栽，先将瓶子去盖，在培养室放置2～3天，其间根据苗的生长情况随时补充水分；在经KMnO4消毒的直径为16cm的小花盆中，放入经高温灭菌的腐质土，将瓶苗移至花盆中，浇足水，在培养室内放置3～4天，移入温室；2～3个月转盆一次。
本发明的有益效果是：利用3-4株盆栽的圣诞红植株，通过组织培养技术，快速生产出成千上万盆商品化的圣诞红植株，其特点如下：
（1）效率高，周期较短，且盆栽植株形状好、长势强、商品价值高，见表1；
表1本发明方法与传统方法比较
方法 数量 特点
传统扦插或分株繁殖 一盆可分株3-6盆 从母株上剪切的枝条，基部导管易被乳汁堵塞，水分运输受阻，成活率低、生根难、植株长势差，从分株到商品出售需要10～12个月。
本发明涉及的组培快繁 一盆可得到几千甚至几万盆 已生根的组培苗由于根系多、根粗壮、吸收水分及营养的能力比较强，生长快、植株成型好、商品价值高，从移栽入花盆到商品出售需要8～9个月。
（2）组培苗的周期短生根率高本发明从采摘外植体芽，到获得生根的小苗，整个过程大约需要80天左右，周期较短，而且克服了小苗难以生根的问题，生根率较高；
（3）生产成本较低本发明的培养基配方中，使用了几种常规生长激素（6-BA、KT、NAA、IAA、IBA），激素组合简单，且成本不高。
具体实施方式
以下的实施例子是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实例一：
选取无病虫害、生长健壮、干净的盆栽圣诞红小植株；用灭菌剪刀，剪取植株上部幼嫩的顶芽及2个侧芽，加入少量洗洁精，用自来水冲洗5min；放入无菌烧杯中，在超净台上，先用无菌水浸洗4次，每次30S；再用75%酒精浸泡60S，倾弃酒精；然后用0.1%HgCl2溶液灭菌10min，倾弃废液；最后用无菌水冲洗7次，将材料转移至放有吸水纸的无菌培养皿中，吸干水分；
将上述灭菌处理的、带顶芽或侧芽的茎段外植体接种在初代培养基（MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+0.6%琼脂+3%蔗糖，PH值为5.8）上，培养温度为22℃，光照度为2000Lx，光照时间为12h/d；25天，茎切段长成高3.0cm的小苗,小苗叶片浓绿、生长健壮；
将上述初代培养的小苗，剪成3个带芽的切段，接种在继代培养基（MS+6-BA1.0mg/L+KT0.5mg/L+IAA0.5mg/L+0.6%琼脂+3%蔗糖，PH值为5.8）上，培养温度为22℃，光照度为2000Lx，光照时间为12h/d；22天，切段又长成高4.0cm、叶色浓绿的丛生小苗，增殖倍数为9倍；
选取经继代培养、长势健壮的小苗，从基部靠近节部位截取，接入到生根培养基（1/2MS+IAA0.5mg/L+IBA0.5mg/L+0.5%琼脂+2%蔗糖，PH值为5.8）中，培养温度为22℃，光照度为2000Lx，光照时间为12h/d；20天，小苗基部已有6条1.0～2.5cm的根生成，生根率为80%；
生根小苗在瓶中长至茎杆粗壮、叶色浓绿、高4.5cm时，进行花盆移栽，先将瓶子去盖，在培养室放置2天，其间根据苗的生长情况随时补充水分；在经KMnO4消毒的直径为16cm的小花盆中，放入经高温灭菌的腐质土，将瓶苗移至花盆中，浇足水，在培养室内放置3天，移入温室；2个月转盆一次。
实例二：
选取无病虫害、生长健壮、干净的盆栽圣诞红小植株；用灭菌剪刀，剪取植株上部幼嫩的顶芽及3个侧芽，加入少量洗洁精，用自来水冲洗3min；放入无菌烧杯中，在超净台上，先用无菌水浸泡5次，每次60S；再用75%酒精浸泡50S，倾弃酒精；然后用0.1%HgCl2溶液灭菌9min，倾弃废液；最后用无菌水冲洗5次，将材料转移至放有吸水纸的无菌培养皿中，吸干水分；
将上述灭菌处理的、带顶芽或侧芽的茎段外植体接种在初代培养基（MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.15mg/L+0.6%琼脂+3%蔗糖，PH值为6.0）上，培养温度为24℃，光照度为2200Lx，光照时间为12h/d；27天，茎切段长成高4.3cm的小苗,小苗叶片浓绿、生长健壮；
将上述初代培养的小苗，剪成4个带芽的切段，接种在继代培养基（MS+6-BA1.5mg/L+KT1.0mg/L+IAA0.4mg/L+0.6%琼脂+3%蔗糖，PH值为6.0）上，培养温度为24℃，光照度为2200Lx，光照时间为12h/d；25天，切段又长成高5.0cm、叶色浓绿的丛生小苗，增殖倍数为8倍；
选取经继代培养、长势健壮的小苗，从基部靠近节部位截取，接入到生根培养基（1/2MS+IAA0.8mg/L+IBA0.6mg/L+0.5%琼脂+2%蔗糖，PH值为6.0）中，培养温度为24℃，光照度为2200Lx，光照时间为12h/d；23天，小苗基部已有5条1.0～2.5cm的根生成，生根率为85%；
生根小苗在瓶中长至茎杆粗壮、叶色浓绿、高6.0cm时，进行花盆移栽，先将瓶子去盖，在培养室放置3天，其间根据苗的生长情况随时补充水分；在经KMnO4消毒的直径为16cm的小花盆中，放入经高温灭菌的腐质土，将瓶苗移至花盆中，浇足水，在培养室内放置4天，移入温室；3个月转盆一次。
实例三：
选取无病虫害、生长健壮、干净的盆栽圣诞红小植株；用灭菌剪刀，剪取植株上部幼嫩的顶芽及5个侧芽，加入少量洗洁精，用自来水冲洗4min；放入无菌烧杯中，在超净台上，先用无菌水浸泡4次，每次45S；再用75%酒精浸泡55S，倾弃酒精；然后用0.1%HgCl2溶液灭菌8min，倾弃废液；最后用无菌水冲洗6次，将材料转移至放有吸水纸的无菌培养皿中，吸干水分；
将上述灭菌处理的、带顶芽或侧芽的茎段外植体接种在初代培养基（MS+6-BA1.2mg/L+NAA0.13mg/L+0.6%琼脂+3%蔗糖，PH值为5.8）上，培养温度为23℃，光照度为2000Lx，光照时间为12h/d；24天，茎切段长成高2.5cm的小苗,小苗叶片浓绿、生长健壮；
将上述初代培养的小苗，剪成2个带芽的切段，接种在继代培养基（MS+6-BA1.2mg/L+KT0.8mg/L+IAA0.6mg/L+0.6%琼脂+3%蔗糖，PH值为5.8）上，培养温度为23℃，光照度为2000Lx，光照时间为12h/d；20天，切段又长成高3.3cm、叶色浓绿的丛生小苗,增殖倍数为10倍；
选取经继代培养、长势健壮的小苗，从基部靠近节部位截取，接入到生根培养基（1/2MS+IAA0.6mg/L+IBA0.8mg/L+0.5%琼脂+2%蔗糖，PH值为5.8）中，培养温度为23℃，光照度为2000Lx，光照时间为12h/d；18天，小苗基部已有4条1.0～2.5cm的根生成，生根率为83%；
小苗的移栽：生根小苗在瓶中长至茎杆粗壮、叶色浓绿、高5.5cm时，进行花盆移栽，先将瓶子去盖，在培养室放置3天，其间根据苗的生长情况随时补充水分；在经KMnO4消毒的直径为16cm的小花盆中，放入经高温灭菌的腐质土，将瓶苗移至花盆中，浇足水，在培养室内放置3天，移入温室；2个半月转盆一次。
实例四：
选取无病虫害、生长健壮、干净的盆栽圣诞红小植株；用灭菌剪刀，剪取植株上部幼嫩的顶芽及3个侧芽，加入少量洗洁精，用自来水冲洗5min；放入无菌烧杯中，在超净台上，先用无菌水浸泡5次，每次60S；再用75%酒精浸泡60S，倾弃酒精；然后用0.1%HgCl2溶液灭菌10min，倾弃废液；最后用无菌水冲洗6次，将材料转移至放有吸水纸的无菌培养皿中，吸干水分；
将上述灭菌处理的、带顶芽或侧芽的茎段外植体接种在初代培养基（MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.15mg/L+0.6%琼脂+3%蔗糖，PH值为5.8）上，培养温度为23℃，光照度为2200Lx，光照时间为12h/d；26天，茎切段长成高3.8cm的小苗,小苗叶片浓绿、生长健壮；
将上述初代培养的小苗，剪成3个带芽的切段，接种在继代培养基（MS+6-BA1.5mg/L+KT0.5mg/L+IAA0.5mg/L+0.6%琼脂+3%蔗糖，PH值为5.8）上，培养温度为23℃，光照度为2200Lx，光照时间为12h/d；23天，切段又长成高4.5cm、叶色浓绿的丛生小苗，增殖倍数为9倍；
选取经继代培养、长势健壮的小苗，从基部靠近节部位截取，接入到生根培养基（1/2MS+IAA0.7mg/L+IBA0.7mg/L+0.5%琼脂+2%蔗糖，PH值为5.8）中，培养温度为23℃，光照度为2200Lx，光照时间为12h/d；22天，小苗基部已有6条1.0～2.5cm的根生成，生根率为85%；
小苗的移栽：生根小苗在瓶中长至茎杆粗壮、叶色浓绿、高5.0cm时，进行花盆移栽，先将瓶子去盖，在培养室放置3天，其间根据苗的生长情况随时补充水分；在经KMnO4消毒的直径为16cm的小花盆中，放入经高温灭菌的腐质土，将瓶苗移至花盆中，浇足水，在培养室内放置3天，移入温室；3个月转盆一次。

Claims (1)

1.一种圣诞红的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于，包括下列步骤：
（1）外植体灭菌处理：选取无病虫害、生长健壮、干净的盆栽圣诞红小植株；用灭菌剪刀，剪取植株上部幼嫩的顶芽及2～5个侧芽，加入少量洗洁精，用自来水冲洗3～5min；放入无菌烧杯中，在超净台上，先用无菌水浸洗4～5次，每次30～60S；再用75%酒精浸泡50～60S，倾弃酒精；然后用0.1%HgCl2溶液灭菌8～10min，倾弃废液；最后用无菌水冲洗5～7次，将材料转移至放有吸水纸的无菌培养皿中，吸干水分；
（2）无菌小苗的诱导及初代培养：将上述灭菌处理的、带顶芽或侧芽的茎段外植体接种在初代培养基上，所述培养基为：MS+6-苄基氨基嘌呤（6-BA）1.0～1.5mg/L+萘乙酸(NAA)0.1～0.15mg/L+0.6%琼脂+3%蔗糖，调整培养基PH值为5.8～6.0，培养温度为22～24℃，光照度为2000～2200Lx，光照时间为12h/d；24～27天，茎切段长成高2.5～4.3cm的小苗，小苗叶片浓绿、生长健壮；
（3）小苗的增殖及继代培养：将上述初代培养的小苗，剪成2～4个带芽的切段，接种在继代培养基上，所述培养基为：MS+6-BA1.0～1.5mg/L+激动素(KT)0.5～1.0mg/L+吲哚乙酸(IAA)0.4～0.6mg/L+0.6%琼脂+3%蔗糖，调整培养基PH值为5.8～6.0，培养温度为22～24℃，光照度为2000～2200Lx，光照时间为12h/d；20～25天，切段长成高3.3～5.0cm、叶色浓绿的丛生小苗,增殖倍数为8～10倍；
（4）小苗的生根培养：选取经继代培养、长势健壮的小苗，从基部靠近节部位截取，接入到生根培养基中，所述培养基为：1/2MS+IAA0.5～0.8mg/L+IBA0.5～0.8mg/L+0.5%琼脂+2%蔗糖，调整培养基PH值为5.8～6.0，培养温度为22～24℃，光照度为2000～2200Lx，光照时间为12h/d；18～23天，小苗基部已有4～6条1.0～2.5cm的根生成，生根率为80～85%；
（5）小苗的移栽：生根小苗在瓶中长至茎杆粗壮、叶色浓绿、高4.5～6.0cm时，进行如下花盆移栽：先将瓶子去盖，在培养室放置2～3天，其间根据苗的生长情况随时补充水分；在经KMnO4消毒的直径为16cm的小花盆中，放入经高温灭菌的腐质土，将瓶苗移至花盆中，浇足水，在培养室内放置3～4天，移入温室；2～3个月转盆一次，生长8～9个月；经过此法移栽的小苗成活率为89%以上。
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