CN103284940A - 酵母菌发酵中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种酵母菌发酵中药组合物及其制备方法和应用，涉及酵母菌与中药或中药提取物共同发酵制备的发酵组合物及其在化妆品领域中的应用。本发明选用具有美容护肤功效的部分中药：白芍、白及、白术、白蔹、茯苓、甘草、人参、黄芪，选择其中任意一种中药或几种中药按适当重量份组成复方，经粉碎、浸泡、提取，经郎必可假丝酵母和/或深红酵母发酵，发酵液经酶解制得酵母菌发酵中药组合物。该发酵组合物可作为添加成分，按照化妆品工业中已知的方法将其添加入化妆品中制成外用制剂，如膏霜类、乳液类、水类、凝胶类、美容类或护肤类化妆品，达到护肤、养肤、美肤、健肤的效果。

Description

酵母菌发酵中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及酵母菌与中药或中药提取物共同发酵制备的发酵组合物及其在化妆品领域中的应用，特别是涉及中药或中药提取物经郎必可假丝酵母和/或深红酵母发酵，发酵液经酶解制得的发酵组合物，以及该发酵组合物在制备用于美白、保湿、抗皱化妆品中的应用。

背景技术

近年来，化妆品市场发展十分迅速。天然原料制备的化妆品由于功效明显、副作用小，受到广大消费者的欢迎，成为国内外化妆品研发的主要趋势。

在我国，利用中草药美容的历史悠久。文献上积累了许多有关这方面的资料。经过人们长期的日常保健与美容临床实践验证作用显著。例如：七白膏是《太平圣惠方》里记载的经典美容古方，该方由白芷、白蔹、白术、白附子、白茯苓、白及、细辛等七味药组成，具有美白皮肤，使皮肤光滑、润泽之功效。

单味中药的美容作用也有很多记载。例如：《本草品汇精要》曰：“白茯苓为末，合蜜和，敷面上疗面疮及产妇黑疱如雀卵。”白茯苓既能去黑白面，又牢牙乌发，延年益寿。《药性论》云“白及，治面上疮，令人肌滑”。《本草纲目》云“白及，洗面黑，祛斑”。 用白术蘸酒（或醋）如研墨之状，均匀涂抹脸上，可治雀斑和黑斑，圣医李时珍曾说此方治雀斑“极致”。

现代研究证实，中药某些成分的确具有美肤、健肤等功效。

白芍：有清除自由基、抗氧化的作用；具有抗炎、扩张血管等的作用。

白蔹：白蔹水提物有较高的酪氨酸酶抑制作用。

白术：能祛除皮肤黑斑黑晕，粉刺瘢痕。

人参：自古以来就被视为名贵的中医药材，具有促进血液循环作用，可以防止皮肤干燥老化，促进新陈代谢，修复及保持皮肤的健康基础状态，使皮肤正常化。

黄芪：祛斑增白，减少色素沉着，营养肌肤，提升皮肤抗病能力，延缓衰老，嫩肤美白，去黄气，使皮肤健康有光泽，同时对去除黑头白头均有很好的效果。

甘草：甘草提取物是一种很好的美白成分，如甘草黄酮、甘草酸(一种五环三萜酸)，其美白机理主要来自对酪氨酸酶、多巴色素互变异构酶活性的抑制和对5，6--二羟基吲哚(DHI)的聚合的阻碍。

为发掘祖国医学的精华，有关学者提出了中药的发酵技术。从生物学的观点看，不仅微生物由于其本身的一些固有特点，具有护肤、健肤的作用；而且，中药中大量的次生代谢产物可参与微生物的代谢，促进微生物的生长，中药中的活性成分也有可能被微生物转化或修饰，产生新的物质，为化妆品的研发指明了一条方向。

中药本身包含了复杂的化学成分，是一个天然的化合物库，将中药加入酵母菌发酵，一方面，酵母菌所产生的酶（转化酶、α-半乳糖苷酶、酸性磷酸质酶、L-天门冬酰胺酶、氨基酸肽酶Ⅱ、丙酰基-β-葡萄糖苷酶、葡萄糖淀粉酶等），可能将中药中的活性成分进行转化，产生活性更强的代谢产物；另一方面，中药中的有效物质(如多糖、黄酮、萜类等)可能调节酵母菌的代谢，刺激(诱导)酵母菌产生新的代谢产物或过量合成某种化合物；此外，中药中的毒性物质可被酵母菌降解利用，以消除中药的毒副作用。

酵母提取物作为天然安全的活性物在化妆品中可以发挥其独特的功效。“纯天然酵母提取物的皮肤美白功效”（日用化学工业，2011,41,(4)）描述了Gaspar等通过人体实验证实了酵母提取物具有可以媲美维生素的安全性，具有显著改善皮肤状况的功效，包括改善皮肤粗糙度等，同时受试者自我评分结果显示酵母提取物有良好的亮白皮肤的功效。西浦英树等（Fissione-Y的美容效果，2006年中国化妆品学术研讨会，会议论文）开发一种新的酵母提取物Fissione-Y，通过在白melanoma细胞B16中添加3％活性物证实该酵母提取物能显著降低黑色素，人体实验表明Fissione—Y可以明显改善遗传皮肤过敏症状，同时能减少皮肤的经皮水分散失。

酵母提取物含有丰富的氨基酸、寡肽和微量元素包括各种维生素和矿物质。氨基酸作为皮肤本身所含的成分，在皮肤护理中起着不可或缺的作用；各种寡肽类成分可以作为信号分子，参与各种生物反应，比如可以和酪氨酸酶竞争，从而抑制黑色素的生成；维生素和矿物质是很好的营养素，同时维生素A和维生素C本身具有良好的美白功效。

酵母菌发酵中药组合物可能会起到某种协同增效作用，比单一的中药或单一的酵母菌内溶物效果更为明显，为化妆品市场提供了一种新的发展方向。本发明的主题是利用郎比可假丝酵母和/或深红酵母与本发明使用的中药一起发酵，以实现酵母菌与中药的协同作用，通过细胞壁自溶与酶解处理，提取酵母菌内容物及中药成分，用于化妆品。结果令人惊奇地发现，中药经酵母菌共同发酵处理制备的发酵组合物，添加到化妆品中，可显著提高化妆品护肤、养肤、美肤、健肤的功效。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种酵母菌发酵中药组合物，使用的中药选自具有美容护肤功效的部分中药：白芍、白及、白术、白蔹、茯苓、甘草、人参、黄芪，选择其中任意一种中药或几种中药按适当重量份组成复方，按以下方法制得， 将所选中药粉碎，加适量水，浸泡0.5～2小时，100℃提取5～30分钟，添加葡萄糖，调整pH值至6.0左右，灭菌，得到继后用于酵母菌发酵的底物；当底物温度降至30℃左右时，接种预培养的酵母菌的菌液，于25℃～35℃摇床培养或者发酵罐好氧培养约2～6天，静止放置1～4天，测PH值至5.5以下，结束发酵，然后向发酵液中加入酶，酶解，稳定化处理后，离心，取上清液，灭菌或添加防腐剂，即得到酵母菌发酵中药组合物。

所述中药的重量份含量为：白芍0-30份、白及0-20份、白术0-30份、白蔹0-20份、茯苓0-40份、甘草0-50份、人参0-50份、黄芪0-50份，上述各中药组分的含量不能同时为0份。

该酵母菌发酵中药组合物的一个优选方案是，由酵母菌对以下按照重量份组成的中药复方共同发酵制成：白芍15份、白及10份、白术10份、白蔹10份、茯苓15份、甘草15份、人参10份、黄芪15份。

该酵母菌发酵中药组合物的另一个优选方案是，由酵母菌对以下按照重量份组成的中药复方共同发酵制成：白芍15份、白及15份、白术15份、白蔹15份、茯苓15份、甘草15份、人参10份。

该酵母菌发酵中药组合物的再一个优选方案是，由酵母菌对以下按照重量份组成的中药复方共同发酵制成：黄芪40份、茯苓25份、甘草25份、人参10份。

本发明的另一个目的是提供上述酵母菌发酵中药组合物的制备方法，步骤为：

 1)取所选中药粉碎，加适量水，水体积ml:药材质量g=40:1～10:1，浸泡0.5～2小时，100℃提取5～30分钟，添加葡萄糖，其质量g/体积ml为0～0.5%，调整PH值至6.0左右，并于115℃下灭菌30～60分钟后，得到继后用于酵母菌发酵的底物；

2)当步骤1)得到的用于酵母菌发酵的底物的温度降至30℃左右时，接种预培养的酵母菌的菌液，于25℃～35℃摇床培养或者发酵罐好氧培养2～6天，静止放置1～4天，测PH值至5.5以下，结束发酵，得到酵母菌发酵液；

 3)取步骤2)得到的酵母菌发酵液，加入酶，于50～60℃，酶解2～10小时，100℃稳定化处理10分钟，离心，取上清液，灭菌或添加防腐剂，即得到本发明所述的酵母菌发酵中药组合物。

上述酵母菌发酵中药组合物的制备方法中所述的酵母菌选自郎必可假丝酵母（Candida lambica）CGMCC AS 2.1763和深红酵母（Rhodotorula rubra）CGMCC AS 2.1817中的一种或者两种。

酵母菌细胞壁较为坚韧，必须经过破壁处理才能提取内容物。从酵母中提取内容物的工艺方法很多：如自溶法、酶解法、盐热法、碱法、高压均质破壁法等。根据用途特点，本发明选择自溶法与酶解法相结合工艺。

上述酵母菌发酵中药组合物的制备方法中所述的酶解所选用的酶选自果胶酶和酵母抽提酶中的一种或两种。

本发明的再一个目的是提供本发明的酵母菌发酵中药组合物在制备化妆品中的应用。按上述方法得到的含有护肤功效中药成分的酵母菌发酵中药组合物可以作为添加成分，应用于化妆品的生产。可按照化妆品工业中已知的方法将本发明的酵母菌发酵中药组合物添加入化妆品中制成外用制剂，如膏霜类、乳液类、水类、凝胶类、美容类或护肤类化妆品，达到护肤、养肤、美肤、健肤的效果。

一般说来，本发明的酵母菌发酵中药组合物的添加量可根据产品状态、性质、用途等因素，按照状态稳定、产品安全、作用可靠的原则确定。

本发明的有益效果：

本发明中使用郎必可假丝酵母（Candida lambica） CGMCC AS 2.1763和深红酵母（Rhodotorula rubra）CGMCC AS 2.1817中的一种或两种发酵中药，一方面，酵母菌在代谢过程中，所产生的丰富的酶对中药成分进行修饰和转化，使大分子物质转化为易于吸收的小分子物质；另一方面，酵母菌含有的丰富蛋白质、氨基酸、B族维生素和微量元素，能有效地维护皮肤的微生态环境。利用该方法制备的化妆品，能促进人体皮肤的新陈代谢，方法简便，所得产品绿色安全，易吸收，达到了护肤、养肤、健肤的效果。本发明所得的酵母菌发酵中药组合物可作为化妆品添加剂，在制备化妆品中具有广泛的用途。

附图说明

图1为含本发明提供的酵母菌发酵中药组合物化妆品的人体美白效果试验图。

具体实施方式

在本发明中，由所选中药经酵母菌发酵后处理所得到的酵母菌发酵中药组合物，该组合物含酵母抽提物和中药提取物,常常被简称为发酵组合物。

以下将参照实施例对本发明进行进一步的描述，但不应看作对本发明的限制。

实施例1：酵母菌发酵中药组合物A的制备

按下列重量称取各中药成分：白芍15g、茯苓15g、甘草15g、黄芪15g、人参10g、白术10g、白及10g、白蔹10g。粉碎，加22倍水浸泡60分钟，于100℃提取10分钟，调整PH值至6.0左右，并于115℃下灭菌50分钟。当温度降至30℃左右时，接种预培养的郎必可假丝酵母（Candida lambica） CGMCC AS2.1763 约1.0%（体积/体积）的菌液，30℃发酵罐培养（每升发酵液通气量3～6L/min）约3天后，静止放置3天，检测PH值降至5.5以下，结束发酵，加入0.6g果胶酶和0.6g酵母抽提酶，于50-55℃，酶解4小时。100℃稳定化处理10分钟，离心，收集上清液。灭菌或添加适量防腐剂，即得到用于化妆品的酵母菌发酵组合物A。

所述郎必可假丝酵母（Candida lambica） CGMCC AS 2.1763菌株可由中国普通微生物菌种保藏管理中心购得。

实施例2：酵母菌发酵中药组合物B的制备

按下列重量称取各中药成分：白术15g、白芍15g、白及15g、白蔹15g、茯苓15g、甘草15g、人参10g。粉碎，加22倍水浸泡50分钟，并于100℃提取10分钟，添加葡萄糖4g，调整PH值至6.0左右，并于115℃下灭菌40分钟。当温度降至30℃左右时，接种预培养的郎必可假丝酵母（Candida lambica） CGMCC No.2.1763 约1.0%（体积/体积）的菌液，30℃摇床培养约3天后，静止放置3天，检测PH值降至5.5以下，结束发酵，加入0.6g果胶酶和0.6g酵母抽提酶，于50-55℃，酶解4小时。100℃稳定化处理10分钟，离心，收集上清液。灭菌或添加适量防腐剂，即得到用于化妆品的酵母菌发酵组合物B。

所述郎必可假丝酵母（Candida lambica） CGMCC AS 2.1763菌株可由中国普通微生物菌种保藏管理中心购得。

实施例3：酵母菌发酵中药组合物C的制备

按下列重量称取各中药成分：黄芪40g、茯苓25g、甘草25g、人参10g。粉碎，加22倍水浸泡50分钟，并于100℃提取10分钟，添加葡萄糖6g，调整PH值至6.0左右，并于115℃下灭菌40分钟。当温度降至30℃左右时，接种预培养的深红酵母（Rhodotorula rubra）CGMCC AS 2.1817 约1.0%（体积/体积）的菌液，30℃摇床培养约3天后，静止放置2天，检测PH值降至5.5以下，结束发酵，加入0.6g酵母抽提酶，于55℃，酶解4小时。100℃稳定化处理10分钟，离心，收集上清液。灭菌或添加适量防腐剂，即得到用于化妆品的酵母菌发酵组合物C。

所述深红酵母（Rhodotorula rubra）CGMCC AS 2.1817菌株可由中国普通微生物菌种保藏管理中心购得。

实施例4：酵母菌发酵单味中药的发酵组合物D的制备

选取单味中药进行发酵，以甘草为例：取甘草100g粉碎，加20倍水浸泡50分钟，并于100℃提取10分钟，添加葡萄糖8g，调整PH值至6.0左右，并于115℃下灭菌40分钟。当温度降至30℃左右时，接种预培养的郎必可假丝酵母（Candida lambica） CGMCC  AS 2.1763和深红酵母（Rhodotorula rubra）CGMCC AS 2.1817各约1.0%（体积/体积）的菌液，30℃摇床培养约3天后，静止放置2天，检测PH值降至5.5以下，结束发酵，加入0.6g酵母抽提酶，于55℃，酶解10小时。100℃稳定化处理10分钟，离心，收集上清液。灭菌或添加适量防腐剂，即得到用于化妆品的酵母菌发酵组合物D。

所述郎必可假丝酵母（Candida lambica） CGMCC AS 2.1763菌株和深红酵母（Rhodotorula rubra）CGMCC AS 2.1817菌株可由中国普通微生物菌种保藏管理中心购得。

实施例5：含本发明发酵组合物的洗面奶的制备

洗面奶原料配方（参见表1）

表1：含本发明发酵组合物C洗面奶配方

制备方法：   

制造锅中加入去离子水，开动加热，搅拌，加入月桂醇聚醚硫酸酯钠、月桂醇硫酸酯钠，加热到85℃，搅拌至完全溶解，保温10分钟，开始降温；降温到75℃加入椰油酰胺 MEA、乙二醇二硬脂酸酯，搅拌到全部溶解，继续降温；降温到60℃加入甘油、椰油酰胺丙基甜菜碱、发酵组合物C、丙烯酸（酯）类共聚物、柠檬酸，充分搅拌均匀；最后加入双（羟甲基）咪唑烷基脲、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、香精、氯化钠，搅拌均匀，即得。

实施例6：含本发明发酵组合物的水类化妆品的制备

水类化妆品原料配方（参见表2）

表2：含本发明发酵组合物A平衡水配方

制备方法

乳化锅中加入去离子水，开动搅拌，加入卡波姆.充分搅拌分散均匀，加入尿囊素、甘油、丙二醇，加热到85℃，保温10分钟，加入霍霍巴蜡 PEG-120 酯类、β-葡聚糖、甘草酸二钾、生育酚乙酸酯、发酵组合物A，搅拌均匀。降温到45℃；称取香精，PEG-40 氢化蓖麻油，搅拌均匀后，加入乳化锅，加入双（羟甲基）咪唑烷基脲、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯，三乙醇胺，搅拌均匀，即得。

实施例7：含本发明发酵组合物的膏霜类化妆品的制备

膏霜类化妆品原料配方（参见表3）

表3：含本发明发酵组合物B日霜配方

制备方法：

去离子水加入水锅，开动搅拌，加入卡波姆分散均匀，再加入甘油、发酵组合物、羟苯甲酯加热到85℃，保温10分钟；将甘油硬脂酸酯、矿油、C10-16 烷基葡糖苷、异棕榈酸乙基己酯、凡士林、辛酸/癸酸甘油三酯、聚二甲基硅氧烷、鲸蜡硬脂醇、PEG-25鲸蜡硬脂醇、羟苯丙酯依次加入油锅，搅拌加热到85℃，保温10分种；乳化锅预热到40℃，抽真空，先抽水，再抽油，开搅拌，原料抽完，均质3分钟，保温5分钟；加入发酵组合物B，搅拌降温；降温到50℃，加入三乙醇胺；搅拌降温到45℃，加入香精、双（羟甲基）咪唑烷基脲、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯，搅拌降温到36℃，即得。

实施例8：含本发明发酵组合物的凝胶类化妆品的制备

凝胶类化妆品原料配方（参见表4）

表4：含本发明发酵组合物D凝胶类化妆品配方

制备方法：

乳化锅中加入去离子水，开动搅拌，加入卡波姆.充分分散均匀，加入甘油、丙二醇，加热到85℃，依次加入霍霍巴蜡 PEG-120 酯类、尿囊素、发酵组合物D、β-葡聚糖，保温10分钟，降温到45℃；称取香精，PEG-40 氢化蓖麻油，搅拌均匀后，加入乳化锅，加入双（羟甲基）咪唑烷基脲、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、生育酚乙酸酯，搅拌均匀；再加入三乙醇胺，搅拌均匀，即得。

进一步地，根据本发明的酵母菌发酵中药组合物，当其作为功能性美容/化妆品添加剂使用时，其中还可含有选自紫外吸收剂、抗炎剂、抗氧化剂、苯并呋喃衍生物，金属离子络合剂和皮肤通透剂的一种或多种辅助成分。

实施例9：含本发明发酵组合物的化妆品人体美白试验

选用实施例7样品，并以去离子水代替配方中发酵组合物B同样方法制备样品作为对照样品。挑选16名志愿者进行实验，平均年龄25岁，男女比例6:10。所有志愿者的受试部位皮肤均无异常，也不涂抹任何外用制剂。取志愿者左右手前臂内侧标记3cm×3cm试验区域，同一手臂可同时标记多个区域，区域间隔为2 cm。测试样品和对照样品均随机分布在左右手臂上。使用德国CK公司生产的皮肤黑色素测试仪进行受试区域和对照区域的测量，每个区域依次平行测定3次。先测量各测试区域的空白值，然后按(50±2)mg样品／cm²的用量，使用乳胶指套将样品均匀涂布于试验区内。每天涂抹已配好的样品一次，涂抹后分别测量第7、第14、第21、第28、第35、第42天受试区域和对照区域的皮肤黑色素含量。同一个志愿者的测试由同一个测量人员完成。得出6周内各个样品的黑色素变化值（参见表5），并画出黑色素变化曲线图（参见附图1）。可以看出，含本发明发酵组合物的样品具有明显降低黑色素的作用，显示出较好的美白效果。

表5：6周内黑色素值与0周空白值比较减少百分率

本发明化妆品的用法和用量，可按照同类化妆品的普通用法和用量使用。对于色素沉积较重的部位，可适度增加次数和用量。

Claims (9)

1.一种酵母菌发酵中药组合物，其特征在于：将包括白芍、白及、白术、白蔹、茯苓、甘草、人参和黄芪的中药，选择其中任意一种中药或几种中药按适当重量份组成复方，按以下方法制得， 将上述所选中药粉碎，加适量水，浸泡0.5～2小时，100℃提取5～30分钟，添加葡萄糖，调整PH值至6.0左右，灭菌，得到继后用于酵母菌发酵的底物；当底物温度降至30℃左右时，接种预培养的酵母菌的菌液，于25℃～35℃摇床培养或者发酵罐好氧培养约2～6天，静止放置1～4天，测PH值至5.5以下，结束发酵，然后向发酵液中加入酶，酶解，稳定化处理后，离心，取上清液，灭菌或添加防腐剂，即得到酵母菌发酵中药组合物。

2.根据权利要求1所述的酵母菌发酵中药组合物，其特征在于：所述中药组分含量为：白芍0-30份、白及0-20份、白术0-30份、白蔹0-20份、茯苓0-40份、甘草0-50份、人参0-50份、黄芪0-50份，上述各中药组分的含量不能同时为0份。

3.根据权利要求2所述的酵母菌发酵中药组合物，其特征在于：由酵母菌对以下按照重量份组成的中药复方共同发酵制成：白芍15份、白及10份、白术10份、白蔹10份、茯苓15份、甘草15份、人参10份、黄芪15份。

4.根据权利要求2所述的酵母菌发酵中药组合物，其特征在于：由酵母菌对以下按照重量份组成的中药复方共同发酵制成：白芍15份、白及15份、白术15份、白蔹15份、茯苓15份、甘草15份、人参10份。

5.根据权利要求2所述的酵母菌发酵中药组合物，其特征在于：由酵母菌对以下按照重量份组成的中药复方共同发酵制成：黄芪40份、茯苓25份、甘草25份、人参10份。

6.权利要求1-5任一所述的酵母菌发酵中药组合物的制备方法，其特征在于：步骤为：

 1)取所选中药粉碎，加适量水，水体积ml:药材质量g=40:1～10:1，浸泡0.5～2小时，100℃提取5～30分钟，添加葡萄糖，其质量g/体积ml为0～0.5%，调整PH值至6.0左右，并于115℃下灭菌30～60分钟后，得到继后用于酵母菌发酵的底物；

2)当步骤1)得到的用于酵母菌发酵的底物的温度降至30℃左右时，接种预培养的酵母菌的菌液，于25℃～35℃摇床培养或者发酵罐好氧培养2～6天，静止放置1～4天，测PH值，至5.5以下，结束发酵，得到酵母菌发酵液；

 3)取步骤2)得到的酵母菌发酵液，加入酶，于50～60℃，酶解2～10小时，100℃稳定化处理10分钟，离心，取上清液，灭菌或添加防腐剂。

7.根据权利要求6所述的酵母菌发酵中药组合物的制备方法，其特征在于：所述的酵母菌选自郎必可假丝酵母（Candida lambica）CGMCC AS 2.1763和深红酵母（Rhodotorula rubra）CGMCC AS 2.1817中的一种或者两种。

8.根据权利要求6或7所述的酵母菌发酵中药组合物的制备方法，其特征在于酶解所述的酶选自果胶酶和酵母抽提酶中的一种或两种。

9.权利要求1-5任一所述的酵母菌发酵中药组合物在制备化妆品中的应用。

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