CN103127093A - 牛蒡子苷元在制备治疗或预防脑胶质瘤药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药领域，涉及牛蒡子苷元的医药用途，具体涉及牛蒡子苷元在制备治疗或预防脑胶质瘤药物中的用途，优选为其注射制剂，牛蒡子苷元的人用给药量为0.1mg/kg·d～10mg/kg·d。牛蒡子苷元用于脑胶质瘤的治疗或预防时，具有疗效确切，毒副作用低的优点，并可进一步增加医生的临床用药选择，因此具有广阔的应用前景。

Description

牛蒡子苷元在制备治疗或预防脑胶质瘤药物中的用途

技术领域

本发明属于医药领域，涉及牛蒡子苷元的一种医药用途，特别涉及牛蒡子苷元在制备治疗脑胶质瘤中的应用。

背景技术

肿瘤是威胁人类健康的常见疾病之一，仅次于心血管疾病，关于肿瘤的研究已经取得很大进展，目前已经发展了多种治疗肿瘤的放疗、化疗方法，但各种药物及疗法仍存在局限性，很难达到根治的效果，且易出现耐药性和副作用。肿瘤死亡率居于各种疾病之首，数据显示，2006年我国有300万人死于癌症，且肿瘤发病率仍处于上升趋势。因此，研究新的有效的治疗药物仍是目前肿瘤治疗的主要方向。

胶质瘤是发生于神经外胚层的肿瘤，故亦称神经外胚层肿瘤或神经上皮肿瘤。脑胶质瘤是一种高复发的脑部肿瘤疾病，具有发病率、复发率、死亡率高和治愈率低等“三高一低”的特点，其发病病因至今仍不明确。脑胶质瘤(脑胶质细胞瘤)约占颅内肿瘤的46％，发病率为3～10人/10万人，发病年龄高峰在30-40岁，或10-20岁。脑胶质瘤占全身恶性肿瘤的1％～3％，手术加放化疗的平均生存期仅为8～11个月。

胶质细胞瘤的生长特点为浸润性生长，与正常脑组织无明显界限，多数不限于一个脑叶，向脑组织外呈指状深入破坏脑组织，偏良性者生长缓慢，病程较长，自出现症状至就诊时间平均两年，恶性者瘤体生长快，病程短，自出现症状到就诊时多数在3个月之内，70-80％多在半年之内。目前国内外对于胶质瘤的治疗普遍为手术、放疗、化疗、X刀、γ刀等。而作为一种治疗手段之一，有效的中医中药治愈颅内恶良性肿瘤的病例并不少见，治疗产生理想效果的病人很多，有的病例由于脑胶质瘤生长位置不好，手术无法切除，经过有效的中医中药治疗后，肿瘤可以缩小甚至完全消失而治愈。

牛蒡子为菊科二年生草本植物牛蒡的干燥成熟果实，又名大力子、鼠粘子、恶实等。牛蒡子属于常用中药，中医认为它具有疏散风热、宣肺透疹、利咽散结、解毒消肿之功效，用于风热感冒、咳嗽痰多、麻疹、风疹、咽喉肿痛、痄腮丹毒、痈肿疮毒。西医认为它除了具有利尿、消积、祛痰止泄等药理作用外，还用于便秘、高血压、高胆固醇症的食疗。牛蒡主要含有木质素类化合物，以牛蒡苷和牛蒡苷元为主。根据实验研究发现，牛蒡苷元比牛蒡苷具有更强的生理活性，牛蒡苷在体内被分解为牛蒡苷元而产生众多药理作用。目前，已有文献报道牛蒡苷元具有如下药理活性：1)抗炎及免疫调节作用；2)抗病毒作用，包括HIV-1与流感病毒；3)诱导肿瘤细胞凋亡的作用；4)肾病及糖尿病、糖尿病并发症治疗作用；5)热休克反应抑制作用；6)神经保护作用；7)扩张血管作用；8)血小板活化因子拮抗作用；9)抗老年性痴呆的作用；10)抑制K⁺挛缩的作用等。比如，Cho J Y，et al.Immunomodulatory effect of arctigenin，a lignan compound on tumor necrosis factor-αand nitric oxide production，and lymphocyte proliferation[J].Pharm Pharmcol.1999；51(11)：1267-1273.公开了牛蒡苷元具有抗炎及免疫调节作用；Gao Y，et al.Activity of in vitro anti-influenza virus ofarctigenin[J].Chinese Traditional and Herbal Drugs(中草药).2002；33(8)：724-726.公开了牛蒡苷元具有抗病毒的作用；Kim S H，et al.Hepatoprotective dibenzylbutyrolactone lignans of Torreya nuciferaagainst CCl4-induced toxicity in primary cultured rat hepatocytes[J].Biol Pharm Bull.2003；26(8)：1202-1205.公开了牛蒡苷元具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。

牛蒡苷元具有显著的抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗PAF受体的作用，但现有技术并没有公开牛蒡子苷元对脑胶质肿瘤是否有治疗作用。

发明内容

为了克服现有脑胶质瘤治疗过程中临床用药不多，脑胶质瘤手术后复发率高等现有技术的缺陷，本发明提供一种预防或治疗脑胶质瘤的药物。该治疗药物以牛蒡子苷元为药物活性成分，其用于脑胶质瘤患者治疗时，具有疗效确切，毒副作用小的特点，且牛蒡子苷元的安全性和耐受性均较好，具有十分广泛的医疗应用前景。

牛蒡子苷元是从牛蒡中提取获得的有效治疗成分，现已有证据证明牛蒡子苷元具有广泛的药理活性，本发明人通过实验研究，发现牛蒡苷元具有显著抑制脑胶质瘤生长的作用，从而提出牛蒡苷元在治备治疗脑胶质瘤药物中的应用，因此本发明涉及牛蒡子苷元的一种新的医药用途，即牛蒡子苷元用于制备治疗脑胶质瘤药物中的应用。本发明实施例8表明牛蒡子苷元在体外实验中在很低的浓度下即可表现出对大鼠胶质瘤细胞C6体外增殖的抑制作用，当牛蒡子苷元大于30μmol/L时，其对大鼠胶质瘤细胞C6的体外增殖效果显著增强。本发明实施例9牛蒡子苷元对SD大鼠脑胶质瘤的体内抑制实验中，不论是牛蒡子苷元低组还是牛蒡子苷元高组，与模型组相比均极显著(P＜0.01)的降低了大鼠的肿瘤体积，显著降低肿瘤指数；牛蒡子苷元低组和牛蒡子苷元高组与阳性对照药人参皂苷组相比，肿瘤体积和肿瘤指数也显著降低。实施例9的实验结果还表明，牛蒡子苷元治疗组还可以增加用药期间大鼠的体重，这表明牛蒡子苷元可以显著改善大鼠的生存质量。

本发明公开的牛蒡子苷元的上述用途中，牛蒡子苷元可以显著抑制脑胶质瘤的生长，并可以抑制脑胶质瘤的转移。用于脑胶质瘤的治疗时，牛蒡子苷元的人用给药量为0.01mg/kg·d～50mg/kg·d，优选为0.1mg/kg·d～10mg/kg·d。用于其它哺乳动物脑胶质瘤的治疗时，可以根据人与动物的临床剂量换算而成。

本发明中牛蒡子苷元可以制备成合适的药物制剂用于脑胶质瘤的治疗或预防，如牛蒡子苷元可以开发成口服制剂或注射制剂方便患者的使用，剂型如注射液、注射微乳、口服片剂、胶囊剂等，优选为注射液。当牛蒡子苷元制备成注射液时，药物可接受的载体可以为注射用水、氯化钠、柠檬酸钠、柠檬酸、甘油、乙醇、丙二醇等。上述所述牛蒡子苷元注射液还可以根据药物的性质加入适宜的附加剂，如渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、助悬剂等。上述牛蒡子苷元注射液中，每一制剂单位中含有药物有效成分牛蒡子苷元的含量为0.01mg～50mg。

牛蒡子苷元用于治疗或预防脑胶质瘤时，与现有技术相比取得了如下有益的技术效果：

1)牛蒡子苷元治疗或预防脑胶质瘤时，疗效确切，治疗效果十分理想。本发明实施例8表明牛蒡子苷元体外可以显著抑制脑胶质瘤C6细胞的增殖；实施例9表明牛蒡子苷元可以显著抑制脑胶质瘤在动物体内的生长，降低肿瘤体积和肿瘤指数，与阳性对照药人参皂苷相比具有显著的治疗优势。

2)牛蒡子苷元毒性低，不良反应发生率低。牛蒡子苷元是从传统中药牛蒡中提取的单体，其用于脑胶质瘤治疗时毒性低，患者的耐受量大，与其他同类产品相比具有明显的优势。

3)牛蒡子苷元用于脑胶质瘤的治疗或预防时，可以显著改善脑胶质瘤患者的生活质量，从而提高用药依从性。

4)牛蒡子苷元用于脑胶质瘤的治疗或预防时，可以增加医生对脑胶质瘤患者的用药选择，从而进一步改善脑胶质瘤治疗或预防中可选择性药物窄的局面。

具体实施方式

以下通过具体实施例进一步说明本发明的发明内容，但应该理解，本发明实施例并不以任何方式限制本发明。

实施例1牛蒡子苷元注射液

制备工艺：将处方量的丙二醇和乙醇混合均匀，加入牛蒡苷元，搅拌溶解，加入处方量的0.9％氯化钠溶液，搅拌均匀，加入0.5％针用活性炭，搅拌，脱炭，即得。

实施例2牛蒡子苷元注射液

制备工艺：将处方量的PEG-400，加入牛蒡苷元，搅拌溶解，加入0.9％氯化钠溶液至10ml，搅拌均匀，加入0.5％针用活性炭，搅拌，脱炭，即得。

实施例3牛蒡子苷元注射液

制备工艺：将处方量的乙醇和吐温-80混合均匀，加入牛蒡苷元，搅拌溶解，加入注射用水至10ml，搅拌均匀，加入0.5％针用活性炭，搅拌，脱炭，即得。

实施例4牛蒡子苷元注射液

牛蒡苷元                20mg

乙醇                    3.3ml

注射用水                加至10ml

制备工艺：将处方量的乙醇加入牛蒡苷元，搅拌溶解，加入注射用水至10ml，搅拌均匀，加入0.5％针用活性炭，搅拌，脱炭，即得。

实施例5片剂的制备

制备工艺：将牛蒡苷元和辅料微晶纤维素、羧甲基淀粉钠混合均匀，加入适量的淀粉浆制软材，然后过16目筛制粒。湿颗粒在60℃干燥，干颗粒过20目筛整粒，筛出干粒中的细粉，与硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混匀，压片，每片约200mg，即得。

实施例6微乳浓缩物

制备工艺：称取处方量中链脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油EL-40、1，2-丙二醇、无水乙醇，混合后搅拌均匀，然后加入牛蒡苷元溶解，也可以超声波处理以加速溶解，得澄清浓缩液，即为牛蒡苷元微乳浓缩物。上述微乳浓缩物可进一步稀释用于注射或口服。

实施例7微乳浓缩物

制备工艺：称取处方量PEG-2-硬脂酸酯、吐温-20、1-己醇、PEG3350混合后搅拌均匀，然后加入牛蒡苷元溶解，也可以超声波处理以加速溶解，得澄清浓缩液，即为牛蒡苷元微乳浓缩物。上述微乳浓缩物可进一步稀释用于注射或口服。

实施例8牛蒡子苷元对大鼠脑胶质瘤细胞C6体外增殖的抑制作用

8.1细胞培养：

C6细胞使用含有10％胎牛血清的RPMI1640培养液，于37℃，5％的CO₂培养箱中常规培养。当细胞处于对数生长期时，用胰蛋白酶适量消化3～5min后，弃去消化液。用PBS液吹打冲洗1～2次形成细胞悬液，调整细胞浓度为1×10⁵个/ml，用于接种。

8.2细胞接种培养：

于96孔培养板中加入200μL/孔的大鼠脑胶质瘤细胞C6细胞悬液，培养4h。4h后向各孔内加入经DMSO稀释成的不同梯度的牛蒡子苷元溶液，各梯度的牛蒡子苷元的浓度分别为0.1、0.3、3、1.0、10、30、100、300μmol/L，各孔内均加入上述梯度溶液0.4μL，每个浓度设3个平行孔，同时设空白对照组，培养48h。

8.3比色分析：

每孔加M TT(四甲基噻唑蓝)8μL(终浓度为200μg/mL，置于培养箱中继续培育4h后，去上清，吸干残留液。每孔加入100μL的DMSO溶解蓝紫色结晶，振摇10min后置于酶标仪570nm波长处测定光密度(OD)值。抑制率＝(1-实验组平均OD值/对照组平均OD值)×100％。抑制率＜30％为耐药；30％＜抑制率＜50％为低度敏感；50％＜抑制率＜70％为中度敏感；抑制率＞70％为高度敏感。

表1牛蒡子苷元对大鼠脑胶质瘤细胞C6体外增殖的抑制效果

由表1可以看出牛蒡子苷元在很低浓度(0.1μmol/L)即可表现出对大鼠胶质瘤细胞C6体外增殖的抑制作用，且牛蒡子苷元对大鼠胶质瘤细胞C6体外增殖抑制效果呈现剂量依赖性。根据上述实验结果，可以看出牛蒡子苷元体外抑制大鼠胶质瘤细胞C6细胞时，浓度最好大于30μmol/L。

实施例9牛蒡子苷元对SD大鼠脑胶质瘤细胞C6的抑制作用

9.1细胞培养

脑胶质瘤细胞C6使用含有10％小牛血清的RPMI1640培养液，于37℃，5％的CO₂培养箱中常规培养。当细胞处于对数生长期时，用胰蛋白酶适量消化3～5min后，弃去消化液。用PBS液吹打冲洗1～2次形成细胞悬液，调整细胞浓度为1×10⁷个/ml，用于接种。

9.2颅内接种造模

选取体重约250g左右的大鼠40只，用0.4％戊巴比妥钠(10ml/kg)腹腔麻醉大鼠，剪去头顶部毛发，碘伏消毒。选取内眦连线与头部正中矢状面交点向后纵向切开头皮约1cm，确定右尾状核靶点，于冠状缝前1mm，中线右旁开3mm，用微量注射器在颅骨上钻孔6mm深度，后退1mm，深达硬脑膜表面而不伤及脑组织。沿骨孔缓慢匀速注射注入10μL细胞悬液(1×10⁷个/ml)，用时10min，注射完毕后留针5min，缓慢退针。碘伏消毒注射部位。麻醉复苏后单笼常规饲养14天。

9.3实验分组及给药

将造模成功的40只大鼠随机分为4组。术后3天后，各组给药分别给予如下药物：

空白对照组：皮下注射等体积的赋形剂

人参皂苷组：皮下注射10mg/kg的人参皂苷

牛蒡子苷元低剂量组：皮下注射0.5mg/kg的牛蒡子苷元

牛蒡子苷元高剂量组：皮下注射10mg/kg的牛蒡子苷元

各给药组大鼠一天给药一次，连续给药15天。各给药组给药后观察大鼠的活动状态。

9.4实验结果

肿瘤接种后大鼠活动状态：将肿瘤接种成功的大鼠置于恒温台上复苏，各给药组大鼠复苏时间2～4h不等。复苏之后的大鼠饮食活动逐渐恢复正常。各给药组大鼠于肿瘤接种后1周后均可见肿瘤，10天起出现皮毛不洁、饮食变差等异常现象，模型组24日出现死亡。

在接种第3d后，各给药组均采用皮下注射给药法连续给药15d。于接种后的第24d解剖大鼠，经活体左心室灌注4％多聚甲醛，固定肿瘤的全脑标本。按垂直和水平方向测量肿瘤大小。肿瘤最大横径测量：于肿瘤接种24天取大鼠全脑，10％甲醛溶液固定后沿肿瘤中心作冠状切面，水平方向测量每个肿瘤最大横截面面积(包括坏死等病变组织)。组织病理学检查：所有脑标本固定，脱水，常规石蜡切片，HE染色，光镜下观察。肿瘤体积＝πa²b/6(π为圆周率，a为肿瘤的短径，b为肿瘤的长径)。

肿瘤指数的计算公式为：肿瘤指数＝肿瘤平均体积/实验后大鼠体重。

表2牛蒡子苷元对大鼠脑胶质瘤的抑制作用

与模型组相比，^#P＜0.05，^##P＜0.01；与人参皂苷组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

从表2可以看出，在牛蒡子苷元对SD大鼠脑胶质瘤的体内抑制实验中，不论是牛蒡子苷元低组还是牛蒡子苷元高组，与模型组相比均极显著(P＜0.01)的降低了大鼠的肿瘤体积，显著降低肿瘤指数；牛蒡子苷元低组和牛蒡子苷元高组与阳性对照药人参皂苷组相比，肿瘤体积和肿瘤指数也显著降低。实施例9的实验结果还表明，牛蒡子苷元治疗组还可以增加用药期间大鼠的体重，这表明牛蒡子苷元可以显著改善大鼠的生活质量。在临床上改善患者的生活质量可以大大提高患者的用药依从性和药物的有效性，因此牛蒡子苷元在治疗脑胶质瘤方面具有十分广阔的应用前景。

Claims (10)

1.牛蒡子苷元在制备预防或治疗脑胶质瘤药物中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于牛蒡子苷元可以抑制脑胶质瘤的转移和生长。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于牛蒡子苷元的人用给药量为0.01mg/kg·d～50mg/kg·d。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于牛蒡子苷元的人用给药量为0.1mg/kg·d～10mg/kg·d。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于牛蒡子苷元为口服制剂或注射制剂。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于所述牛蒡子苷元口服制剂为其片剂、胶囊剂或口服微乳制剂；所述牛蒡子苷元注射制剂为其注射液或注射微乳制剂。

7.如权利要求5所述的用途，其特征在于所述牛蒡子苷元注射制剂由牛蒡子苷元和药用载体组成。

8.如权利要求7所述的用途，其特征在于牛蒡子苷元注射制剂中牛蒡子苷元的含量为0.1mg～50mg。

9.如权利要求7所述的用途，其特征在于所述药用载体为注射用水、氯化钠、柠檬酸钠、柠檬酸，甘油、乙醇或丙二醇。

10.如权利要求5所述的用途，其特征在于所述牛蒡子苷元注射制剂含有渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂或助悬剂中的一种或多种。