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CN102947281B - 作为感觉器官和有丝分裂后组织的再生促进物质的新颖的氨基烷基噁唑甲酰胺和氨基烷基噻唑甲酰胺 - Google Patents

作为感觉器官和有丝分裂后组织的再生促进物质的新颖的氨基烷基噁唑甲酰胺和氨基烷基噻唑甲酰胺 Download PDF

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Abstract

本发明涉及新颖的氨基烷基噁唑甲酰胺和氨基烷基噻唑甲酰胺，它们会在哺乳动物中在原位刺激高度特化的器官、组织和感觉上皮的终末分化细胞的内源性再生。要求保护的低分子量化合物能够诱导对应的细胞生物学变化，诸如正常地有丝分裂后组织的细胞的去分化、增殖和随后的终末再分化。本发明具体地涉及这样的化合物：通过用其诱导内耳的支持细胞的细胞分离，可以实现柯蒂氏器中的感觉毛细胞的重新形成，并可以在毛细胞损失以后恢复听力。根据本发明的化合物首次能够基于再生生物学来实现例如由于噪音、耳毒性物质、老年征状或遗传原因造成的内耳听力困难的病因疗法。本发明另外涉及用于生产根据本发明的化合物的方法、它们的作为药物制剂的制剂(1)(2)以及它们用于生产再生医学所用药物的用途。

Description

作为感觉器官和有丝分裂后组织的再生促进物质的新颖的氨基烷基噁唑甲酰胺和氨基烷基噻唑甲酰胺
本发明涉及新颖的氨基烷基噁唑甲酰胺和氨基烷基噻唑甲酰胺，它们在原位刺激哺乳动物的高度特化的器官、组织和感觉上皮中的终末分化细胞的内源性再生。
要求保护的低分子量化合物能够诱导对应的细胞生物学变化，诸如正常地有丝分裂后组织的细胞的去分化、增殖和随后的终末再分化。
本发明具体地涉及这样的化合物：使用所述化合物，可以通过诱导内耳的支持细胞的细胞分离来实现柯蒂氏器(Corti’schenOrgan)中的感觉毛细胞的重新形成，并可以在毛细胞损失以后恢复听力。
本发明另外涉及用于制备根据本发明的化合物的方法、它们的作为药物制剂的配制剂以及它们用于生产再生医学所用药物的用途。
背景技术
在基本上所有专业领域和社会领域内，受损的听力和因而受限的沟通能力对生活质量具有重要影响。感觉障碍“听力困难”在依赖于沟通的社会中是最迫切的健康问题之一。
平均而言，听力困难影响着工业化国家的约10%人群。在德国，据估计有1600万人是听力困难的，几乎占总人口的1/5（ifo-Institut,1986）。因而，听力困难不仅是感觉器官的最常见障碍，而且是最常见的一般慢性障碍之一。
查找听力困难的原因，在约80%的病例中，受累的人遭受感音神经性听觉丧失。它的最常见原因之一是，柯蒂氏器中的感觉毛细胞的丧失，即由于向噪音的暴露、耳毒性药物的副作用、年龄相关的变性或遗传原因，听觉感觉上皮通过细胞死亡不可逆地丧失（Nadol,1993）。
迄今为止，关于听力损失的这种最常见形式，仅可以提供助听器的修复性供给。但是，对于受累及的人而言，由于缺乏语音识别，该供给的结果经常是令人不满意的。因此，实际上，仅相对小比例的听力困难者使用助听器。
迄今为止，就感音神经性听觉丧失的主要原因而言，没有治愈性的药物治疗选择。只有通过替代或再生柯蒂氏器的丧失的感觉毛细胞，这样的病因疗法才有可能。
在大多数哺乳动物器官和组织中，在损伤以后的再生能力是有限的，或根本不存在。仅非常少的器官和组织（例如，肝、骨或皮肤）在生物体的整个寿命中具有通过形成新细胞来实现自发再生的能力。在许多情况下，在高度特化的器官和组织（例如心脏、脑、骨骼肌或眼和内耳的感觉上皮）中的对应细胞不可逆地脱离细胞周期，以保持在终末分化状态。结果，这些组织也已经丧失它们的在发生损害事件的情况下的自发再生能力。因此，这会导致不可逆的功能缺陷。因而，例如，心肌梗塞（在心脏的情况下）或中风（在脑的情况下）经常意味着受累的组织区域的不可逆损伤和相应的永久性功能丧失。
但是，例如在两栖动物中，存在这样的组织和器官（以视网膜和骨端为例）：在其中存在终末分化，但是其仍然能够在体内自发再生（Tsonis,2000;Tsonis,2002）。在这些实例中的中枢性的细胞生物学事件是细胞去分化，这允许产生多能前体细胞，通过增殖和再分化，可以从所述多能前体细胞形成再生的细胞。
因而，去分化在两栖动物的终末分化组织的再生中起决定性作用。相比而言，其它脊椎动物具有低再生能力。
在约20年前，就哺乳动物和禽类的听觉器官而言，假定内耳的感觉毛细胞仅可以在胚胎发育的较短关键时期中形成（Ruben,1967）。在该时期以后，认为感觉上皮是有丝分裂后的，因此不能再生它们的感觉细胞。但是，令人惊讶地发现，在声创伤和耳毒性损伤以后，禽类耳蜗能够自发地再生感觉毛细胞（Cotanche1987;Cruz等人,1987）。
直接地邻近受损的感觉毛细胞的支持细胞的细胞分裂，已经被描述为禽类耳蜗中的感觉毛细胞再生的基本生物学机理（Corwin和Cotanche,1988;RyalsandRubel,1988），其中形成未分化的细胞群体，它们能够再分化以新形成感觉毛细胞和支持细胞。结果是，禽类的感觉上皮的基本上完全的形态和功能恢复（Cotanche,1999;Smolders,1999）。
尽管这最初是明显的，由于基础的细胞生物学差异，迄今尚不可能将来自其它模型的发现应用于哺乳动物。
就柯蒂氏器中的支持细胞的自发细胞分裂能力而言，关于哺乳动物中的感觉毛细胞再生的对应实验没有提供（Roberson和Rubel,1994;Vago等人,1998;Daudet等人,1998;Daudet等人,2002;Yamasoba等人,2003）或提供了非常少的（Yamasoba和Kondo,2006）提示。具体地，甚至在施用生长因子以后，没有提示柯蒂氏器中的支持细胞的可诱导性增殖（Staecker等人,1995;Daudet等人,2002）。使用胚胎小鼠的柯蒂氏器的发育阶段早期的培养物的不同实验同样地证实，在确定的激光损伤以后，仅单独的增生性事件（Kelley等人,1995）。
细胞分裂的这种完全缺失提示，在正常的成体柯蒂氏器中的高度特化的支持细胞群体已经达到终末分化状态，且不能重新进入细胞周期。因而，在内耳的情况下，甚至单纯的声创伤可能导致感觉毛细胞的破坏，继之以不可避免的且不可逆的听力损失。
最近已经发现，从发生再生的两栖动物组织（例如骨端）得到的提取物能够诱导去分化，甚至在哺乳动物细胞中（McGann等人,2001）。使用该提取物，在适当的刺激下，可以将终末分化细胞的基于去分化的再生机理从两栖动物转移至哺乳动物（Odelberg,2002）。但是，提及的再生提取物是“蛋白混合物”，不知道关于它们的组成的细节。
但是，与此同时，使用确定的低分子量化合物，还已经可能在哺乳动物肌细胞中实现对应的效应（Chen等人,2004）。通过筛选，此外可能鉴别出几种低分子量化合物，所述化合物会在多种细胞类型（包括神经胶质细胞）中产生再生生物学相关的效应（综述见：Xu等人,2008;Schugar等人,2008;Feng等人,2009;Li和Ding,2009）。这些效应提示，使用合适的低分子量化合物，也可能在其它细胞类型中诱导基于去分化的再生（Tsonis,2004;Kim等人,2004;Odelberg,2002）。
迄今为止，该概念向内耳的再生生物学研究的转移已经是独一无二的。能够实现内耳中的感觉毛细胞再生的低分子量化合物，既不是已知的，也没有获得专利。
迄今，在关于再生柯蒂氏器中的感觉毛细胞的当前技术中遵循的其它概念同样表现出在临床应用方面的微弱希望。
在通过关闭细胞周期抑制剂p27 Kip1 来调控支持细胞的细胞周期调节中，可能在体内实现细胞分裂（WO99/42088）。但是，迄今仅在体外条件下在组织体外观察到向感觉毛细胞的分化（White等人,2006）。
在具有诱导的感觉毛细胞损失的体内模型中，基因治疗诱导的支持细胞的转分化（使用感觉毛细胞分化必需的转录因子Math1），会导致支持细胞转化成感觉毛细胞，甚至部分地在功能上恢复器官功能（Izumikawa等人,2005;Kawamoto等人,2003）。但是，支持细胞的数目的减少会导致柯蒂氏器的功能限制，因为在没有支持细胞的情况下，复杂的微机械（Mikromechanik）不可能在转导过程中正常起作用。
在活化位于器官中的内源祖先干细胞或将异源干细胞外源性地施用给内耳以后，得到了有希望的结果（Tateya等人,2003;Naito等人,2004;Martinez-Monedero等人,2007a,b;Li等人,2003）。但是，迄今没有实现干细胞向内耳中的靶向移植或功能上有关的移植。
发明内容
因此，本发明的一个目的是，鉴别低分子量化合物，所述化合物在原位刺激哺乳动物的高度特化的器官、组织和感觉上皮中的终末分化细胞的内源性再生。具体地，这些化合物应当允许通过成体（人）柯蒂氏器中的感觉毛细胞的重新形成来恢复哺乳动物的听力。基于这些化合物，将首次能够基于具有再生生物活性的药物来进行内耳听力困难的病因疗法。
通过提供如权利要求1所示的具有再生促进性质的新颖的低分子量氨基烷基噁唑甲酰胺和氨基烷基噻唑甲酰胺，实现该目的。根据权利要求2中，公开了这些化合物的优选实施方案。权利要求3-5涉及根据本发明的化合物在医疗中的用途。权利要求6涉及用于制备根据本发明的化合物的方法，权利要求7-8涉及包含根据本发明的化合物的药物制剂和它们的制备。权利要求10和11公开了根据本发明的化合物和药物制剂用于治疗哺乳动物的某种疾病的用途，权利要求12和13公开了对应的治疗方法。
通过引用，所有权利要求的措辞一起并入本说明书中。
本发明的基本特征在于下述事实，即根据本发明的化合物首次提供了可以实现哺乳动物中的终末分化细胞（尤其是哺乳动物内耳中的感觉毛细胞）的再生的结构上确定的化学活性成分。为此原因，通过鉴别新颖的迄今未知的低分子量化合物，所述化合物能够刺激在再生生物学上有关的过程（诸如来自正常地有丝分裂后组织的细胞的去分化、增殖和由此产生的再生），本发明具有独特特征。
本发明此外包含利用根据本发明的化合物的再生促进性质，用于柯蒂氏器中的感觉毛细胞损伤和丧失以后的内耳听力困难的病因疗法，直到完全恢复人和动物的听力。
发明详述
由于内耳的复杂的组织结构，在再生医学的各种方法中，仅内源性再生作为原位再生似乎是可行的。诱导感觉毛细胞的这种再生的先决条件是，对正常地高度分化的有丝分裂后的听觉感觉上皮进行合适刺激。靶细胞是支持细胞，其直接地邻近受损的细胞，且可以充当感觉毛细胞的再形成的潜在前体。
尽管基于当前的技术水平可以假定，某些活性成分可以触发细胞去分化的再生生物学机理，鉴别用于内耳再生的对应化合物的尝试迄今尚未取得成功。
有机化合物在内耳中触发在再生生物学上有关的效应的能力，是靶物结构依赖性的，且不可能准确地预测。除了潜在活性的结构特征以外，在生物学实验中的成功希望的一个决定因素是，根据且参照靶系统，选择具有活性成分潜力的合适支架。
通过从不同化合物类别中广泛地筛选具有潜在再生促进性质的化合物，令人惊讶地可能鉴别出这样的低分子量化合物：其能够在体外和在体内诱导对应的细胞生物学变化，诸如耳支持细胞的去分化和随后的增殖，直到感觉毛细胞的再生。使用先导结构优化，可能开发在哺乳动物中具有优良再生促进活性的这些化合物的结构类似物。
因此，本发明涉及式(1)和(2)的氨基烷基噁唑甲酰胺和氨基烷基噻唑甲酰胺
并涉及它们作为活性成分的用途，所述活性成分用于刺激高度特化的器官和组织（优选脑、心脏、骨骼肌，特别优选地感觉上皮）中的终末分化细胞的内源性原位再生。
在这里，
X代表O或S，
Y代表C或N，其中所述2个原子必须是彼此不同的，
R2代表氢或酰基，且
R1和R3能够是相同的或不同的，代表选自下述的取代基：支链的或非支链的、取代的或未取代的任选地含有杂原子的烷基、烷基环烷基、烷基芳基、环烷基、环烷基芳基、芳基和芳基环烷基，其中R1优选地代表(1H-吲哚-3-基)乙基，且R3优选地代表环己基。
一个优选的实施方案涉及根据本发明的氨基烷基噁唑甲酰胺和氨基烷基噻唑甲酰胺，它们与下面的式(3)至(8)相对应。
这些定义包括根据本发明的式(1)至(8)化合物的药学上可接受的盐（优选地无毒的和生理上耐受的盐）、立体异构体、立体异构体混合物、所有互变异构体、前药化合物，优选地前药酯或前药肽，和混合物。
在细胞培养试验中，证实了根据本发明的低分子量氨基烷基噁唑甲酰胺和氨基烷基噻唑甲酰胺用于使已经分化的细胞去分化的潜力，所述细胞培养试验使用分离自小鼠内耳的干细胞，所述干细胞具有耳发育潜力，且在细胞培养中分化成与原始的感觉上皮相对类似的上皮岛。与对照相比，根据本发明的化合物的施用可以使表达Sox2的细胞的比例不止倍增，所述Sox2是一种干细胞标志物，其也在柯蒂氏器的个体发生过程中表达且被公认为细胞去分化的指示剂。使用高达7.4%的BrdU(溴脱氧尿苷)-阳性细胞比例作为细胞增殖的指标，根据本发明的化合物的活性显著不同于分化和DMSO对照的活性，在后者中没有掺入BrdU。
因而在体外模型中可能证实，根据本发明的化合物在刺激分化的耳细胞的去分化和随后增殖的意义上的令人惊奇的生物活性。
在去分化的上皮上的干细胞标志物的免疫细胞化学分析证实了下述假定：根据本发明的化合物在细胞核中积累以后，首先在重新程序化的意义上诱导分化的细胞的去分化，然后促进它们的增殖。
在细胞培养模型中，通过根据本发明的化合物的剂量/活性分析，将关于增殖的有效活性的浓度范围定义为在下述范围内：在细胞培养基中的0.1μM-100μM、优选1μM-3μM所述物质。
在小鼠的天然器官的体外器官培养物中，即在柯蒂氏器的复杂细胞结构中，也实现了与在细胞培养试验中相当的效应。在用氨基糖苷抗生素新霉素造成感觉毛细胞的耳毒性损伤以后，根据本发明的化合物的施用导致柯蒂氏器中的各种支持细胞（诸如在外毛细胞区域中的朝向侧面的代特氏细胞（外指细胞）和外边缘细胞，在内毛细胞区域中的内指细胞和内边缘细胞，以及被认为是内感觉毛细胞再生的潜在前体细胞的其它支持细胞）的原位增殖。详细地讲，可能证实在有丝分裂的不同阶段直至存在2个细胞核的完全细胞分裂中的单个标记的细胞核。
在成年豚鼠的体内模型中，免疫组织化学发现另外指示，根据本发明的化合物诱导的感觉毛细胞的再生，这基于支持细胞的细胞分裂，优选地在声创伤损伤的柯蒂氏器区域中。在没有施用所述化合物的对应的对照动物和对照器官中，没有发现自发地再生的毛细胞。
在迄今为止进行的体外和体内实验中，尚未在有关的浓度范围内观察到根据本发明的化合物的毒性效应或配伍禁忌。
本发明此外提供了制备根据本发明的氨基烷基噁唑甲酰胺和氨基烷基噻唑甲酰胺，根据本发明，它们可以用作用于刺激高度特化的器官和组织（优选地脑、心脏、骨骼肌，特别优选地感觉上皮）中的终末分化细胞的内源性原位再生的活性成分。
根据本发明的化合物的合成通过多个步骤来实现。详细的合成规程可以参见工作实施例A。用于制备根据本发明的化合物的原料是已知的，且可以从专业商店得到，或通过已知的规程来制备。
一种可能的途径是，从氨基酸酰胺开始，在固相上合成根据本发明的化合物。为此，将氨基酸（其侧链代表取代基R1）固定在具有活化的碳酸酯基团的聚合物载体上，然后将它的酸基酰胺化。使用溴代丙酮酸和N,N-二甲基苯胺，实现将氨基酸酰胺环化成噁唑类化合物或将氨基酸硫代酰胺环化成噻唑类化合物。如果使用溴代丙酮酸乙酯，形成的酯基团以后必须水解。为了合成噻唑类化合物，在环化之前，使用Lawesson试剂将氨基酸酰胺转化成对应的硫代酰胺。然后使得到的氨基酸噁唑/噻唑羧酸与代表取代基R3的胺反应。最后，从合成树脂酸性脱去(Abspaltung)氨基酸噁唑/噻唑甲酰胺，随后进行色谱纯化。
在另一个制备变体中，在溶液中进行根据本发明的化合物的合成。所述合成使用保护基化学法来进行，从具有侧链R1的Boc-保护的氨基酸开始。一般而言，合成步骤与关于固相所述的那些步骤相对应。在合成结束时，酸性去除Boc保护基，然后进行色谱纯化。
两种制备方法都允许合成外消旋的和对映异构纯的化合物。所述化合物以游离形式或作为盐（假如存在成盐基团的话）得到。根据本发明的化合物的盐优选是药学上可接受的盐。这样的盐的实例是，无机酸或有机酸的盐、无机碱或有机碱的盐以及碱性或酸性氨基酸的盐。
根据本发明的化合物也可以修饰成前药化合物，优选前药酯或前药肽等等。在某些情况下，通过任选地经由合适的间隔物分子将细胞穿透增强分子（例如，生物素或马来酰亚胺基丙酸）与伯氨基偶联，或通过酰化与取代基R2相对应的该氨基，可能提高根据本发明的化合物的生物利用度，并从而提高效力。
本发明此外提供了根据本发明的氨基烷基噁唑甲酰胺和氨基烷基噻唑甲酰胺用于制备药物制剂的用途，所述药物制剂用于治疗哺乳动物中与受损的有丝分裂后组织有关的疾病，尤其是用于治疗由柯蒂氏器中的感觉毛细胞的损伤和损失造成的哺乳动物的内耳听力困难。这些制剂（其包含单独的或组合的至少一种根据本发明的活性成分）任选地另外包含药学上合适的辅剂和添加剂，例如，载体物质、防腐剂、稳定剂、乳化剂、去污剂、溶剂、增溶剂、用于调节渗透压的盐和缓冲盐。另外，它们可以另外包含治疗上有关的活性成分、佐剂以及再生促进物质，例如，生长因子或抗炎剂。
药学上合适的材料是，已知适合用于药学和食品技术领域和有关领域中的化合物，尤其是在有关的药典中列出的那些，它们的性质不排斥它们的生理施用。
根据本发明的化合物所造成的效应也依赖于它们的制剂。适当的药物制剂应当允许将药物直接施用进哺乳动物的耳蜗中。包含至少一种式(1)或(2)活性成分的根据本发明的药物制剂的合适给药形式能够是，例如，溶液、混悬液、喷雾剂、凝胶、水凝胶、洗剂、乳剂、糊剂、软膏剂或乳膏剂。
通过本领域技术人员已知的方法，如在有关的药典中所述，以常规方式制备根据本发明的药物制剂，例如通过混合、造粒或分层方法。另外，可以将根据本发明的药物制剂灭菌。
本发明也涉及根据本发明的氨基烷基噁唑甲酰胺和氨基烷基噻唑甲酰胺作为促进再生的活性成分的用途，所述活性成分用于治疗人和动物的与受损的有丝分裂后组织有关的疾病，优选地用于在内耳中的感觉毛细胞丧失或损伤以后恢复听力。为此，给需要这种治疗的人或动物施用治疗有效量的根据本发明的再生促进制剂，所述制剂包含至少一种根据本发明的式(1)或(2)化合物。在这里，将根据本发明的活性成分或药物制剂直接地或间接地（包括全身地）、优选地局部地、直接地施用于受损的组织结构中/表面上。如下施用在内耳表面上或内耳中：例如，通过注射进中耳中经鼓膜地，通过施用于内耳的圆形或卵形窗上，或通过注射进内耳中。可以采用活性成分给药（凝胶制剂、泵）的各种系统。
根据本发明的化合物和药物制剂可以单独使用，或与根据本发明的其它化合物组合地使用，或与根据本发明的化合物的所述各种治疗适应症有关的一种或多种活性成分组合地使用。关于给药次序，没有限制。根据本发明的化合物可以在其它活性成分之前、之后或同时地施用，作为分开的药物，或作为联合制剂，并且通过相同的或不同的给药途径。
用于治疗受试者的内耳听力困难的确切治疗有效量取决于多种因素，除了别的以外，取决于组织损伤的程度、取决于患者的身高、身材、年龄和健康状况，取决于给药途径和给药形式、实际采用的化合物以及在适当时使用的其它药物。因而，在当前的时间点，不方便指出确切的量。但是，一般而言，可以假定以1-7天的间隔在最多8周的时段内重复施用根据本发明的药物制剂，至使用“持续释放”系统（其具有活性成分的按计量持续释放机构）的连续给药。采用的活性成分的量应当是在每只内耳和每次给药0.5μg-1.0mg的范围内。
商业实用性
在再生生物学上有关的化合物能够诱导对应的细胞生物学变化（诸如去分化、增殖或终末再分化），且它们的制剂代表活性成分的新颖形式，因为所述治疗概念是全新的。
使用根据本发明的氨基烷基噁唑甲酰胺和氨基烷基噻唑甲酰胺，首次可能证实低分子量化合物诱导的耳支持细胞的细胞分裂，和实现的哺乳动物中的柯蒂氏器的高度分化的有丝分裂后组织中的感觉毛细胞的再生。迄今尚未描述基于药学活性成分来在体内再生感觉毛细胞的相当方法。
因为观察到的根据本发明的化合物的活性特性，这些化合物适合用作药学活性成分，用于在再生生物学基础上对感音神经性听觉丧失进行病因治疗性处理。一般而言，该治疗方案优于迄今讨论的所有其它方法，诸如基因治疗或干细胞移植。在迄今为止检查的体外和体内模型中，没有观察到不利效应。
从下面结合从属权利要求描述的工作实施例，显而易见关于特别优选的实施方案的更多细节和本发明的其它特征和优点，在所述从属权利要求中，上述的和在下面仍然将解释的各个特征在每种情况下都单独地和以彼此的任意组合要求保护。
所述工作实施例纯粹地用于例证，不限制本发明的范围。
工作实施例
实施例A-2-[1-氨基烷基]噁唑-4-甲酰胺和对应的2-[1-氨基烷基]噻唑-4-甲酰胺的合成
利用制备类似化合物的有关出版物，从氨基酸酰胺开始，合成根据本发明的化合物(Videnov等人,1996;Stanchev等人,1999;Stankova等人,1999;Kaiser等人;2000)。
通过HPLC和质谱法，检查中间体和终产物的纯度和身份。另外，通过NMR光谱法，表征终产物。所有原料和试剂都是可商业得到的。
在下文中描述了在固体聚合物相上从氨基酸酰胺开始的合成途径。由于大部分合成操作是相同的，噁唑类化合物和噻唑类化合物没有使用单独的合成工艺。在开始时，以示例性的方式显示了色氨酸酰胺(11)的合成，所述色氨酸酰胺(11)用作特别优选的化合物(3)和(4)的原料。
然后，仅仅对于噻唑类化合物，描述了一种在溶液中的替代性合成途径。但是，对于有经验的本领域技术人员而言，不难使合成条件适用于噁唑类化合物。
在实验的描述中，关于可变的取代基，使用缩写X、R1和R3，它们具有与在专利权利要求书中相同的含义。
描述的合成允许制备立体化学纯的形式的化合物。它们以游离形式或作为盐（假如存在成盐基团的话）得到。
D-色氨酸酰胺(11)的制备
将N-Boc-D-色氨酸(9)(1当量;2.75mmol;1.00g)、羟基苯并三唑铵盐(2当量;5.50mmol;924mg)和二异丙基碳二亚胺(DIC)(1.1当量;3.03mmol;382mg;454μl)溶解于已经经过分子筛干燥的二甲基甲酰胺(DMF)中，并将该溶液在室温搅拌18h。然后在减压下在旋转蒸发器上去除溶剂，将残余物溶解于乙酸乙酯中。滤出不溶性的残余物，然后洗涤（1x1MKHSO4溶液，2x饱和碳酸钠水溶液，1x饱和氯化钠水溶液）有机相，经硫酸钠干燥，并蒸发。
为了去除Boc保护基，将粗产物(10)溶解于50%三氟醋酸(TFA)在二氯甲烷(DCM)中的溶液中，并在室温搅拌3h。蒸发溶剂以后，将产物(11)重结晶。
给氯-(2’-氯)三苯甲基聚苯乙烯树脂(12)加载氨基酸酰胺(13)
用DMF(经分子筛)洗涤氯-(2’-氯)三苯甲基聚苯乙烯树脂(12)(RappPolymereH10033；加载1.31mmol/g)(1当量;655μmol;500mg)2次，加入氨基酸酰胺盐酸盐(13)(2当量;1.31mmol)和二异丙基乙胺(DIPEA)(5当量;3.28mmol;424mg)在DMF中的溶液，将该混合物在室温摇动18h。为了给树脂加帽，然后将甲醇(MeOH)加入悬浮液中，并将该混合物在室温摇动另外15min。在抽吸下滤出反应溶液，洗涤(5xDMF，3xMeOH、四氢呋喃(THF)、二乙醚)加载的树脂(14)，并在油泵真空下干燥。
固定化的氨基酸酰胺(14)环化成噁唑(15)
将溴代丙酮酸乙酯(5当量;3.28mmol;640mg;412μl)和N,N-二甲基苯胺(10当量;6.55mmol;794mg;832μl)溶解于二噁烷(5ml)中，并加入到氨基酸酰胺树脂(14)(1当量;655μmol;500mg)中。将所述悬浮液在室温摇动16h，然后在60℃温热2h。在抽吸下滤出反应溶液，并用无水溶剂(5xDMF,5xDCM)洗涤树脂。
将冷却至-20℃的吡啶(10当量;6.55mmol;520mg;530μl)在无水DCM(5ml)中的溶液与三氟乙酸酐(5当量;3.28mmol;688mg;456μl)混合，并加入到洗过的树脂中。在-20℃30min以后，将悬浮液温热至室温，并在室温摇动另外2h。在抽吸下滤出反应溶液，并洗涤(3x每种DMF、MeOH、THF、DCM、二乙醚)树脂(15)，并在减压下在干燥器中干燥。
用Lawesson氏试剂制备固定化的硫代酰胺(16)
将Lawesson氏试剂(3当量;1.97mmol;797mg)在二甲氧基乙烷(DME)(10ml)中的溶液加入到氨基酸酰胺树脂(14)(1当量;655μmol;500mg)中，并将该混合物在室温摇动18h。在抽吸下滤出反应溶液，并洗涤(6xDMF，3x每种MeOH、THF、DCM、二乙醚)树脂(16)，并在减压下在干燥器中干燥。
固定化的硫代酰胺(16)环化成噻唑(17)
将溴代丙酮酸乙酯(5当量;3.28mmol;640mg;412μl)和N,N-二甲基苯胺(5当量;3.28mmol;397mg;416μl)溶解于DMF(4ml)中，并加入到氨基酸硫代酰胺树脂(16)(1当量;655μmol;500mg)中。将所述悬浮液在室温摇动16h。在抽吸下滤出反应溶液，洗涤(3x每种DMF、MeOH、THF、DCM、二乙醚)树脂(17)，并在减压下在干燥器中干燥。
在使用在DCM中的5%TFA在室温实验去除1h以后，通过色谱法和质谱法，检查反应产物(17)的身份和纯度。
固定化的乙酯(15)和(17)的水解
在THF(2.5ml)中预溶胀氨基酸噁唑羧酸乙酯树脂(15)或氨基酸噻唑羧酸乙酯树脂(17)(1当量;655μmol;500mg)，并加入一水合氢氧化锂(5当量;3.28mmol;137mg)在水(1.25ml)和MeOH(1.25ml)中的溶液。在室温3h以后，在抽吸下滤出反应溶液，洗涤(3x每种水、水/DMF1:1、DMF、二噁烷、THF、DCM、二乙醚)树脂(18)或(19)，并在减压下在干燥器中干燥。
羧酸(18)和(19)的酰胺化和从树脂去除
将1-羟基苯并三唑(HOBt)(5当量;3.28mmol;443mg)和DIC(5当量;3.28mmol;413mg)在无水DMF(5ml)中的溶液加入到氨基酸噁唑羧酸树脂(18)或氨基酸噻唑羧酸树脂(19)(1当量;655μmol;500mg)中。在室温摇动30min以后，加入R3-胺(10当量;6.55mmol)，并将该悬浮液在室温摇动另外16h。在抽吸下滤出反应溶液，然后洗涤(3x每种DMF、MeOH、THF、DCM、二乙醚)树脂，并在空气流中吸干。
然后使用5%TFA在DCM中的溶液，在室温从树脂去除产物(20)或(21)1h。
在蒸发去除溶液以后，从tBuOH/水4:1中低压冻干粗产物，并使用DCM/MeOH梯度在硅胶上色谱分离。
使用Lawesson氏试剂在溶液中制备硫代酰胺(23)
在搅拌下，将Lawesson氏试剂(0.75当量;750μmol;305mg)加入Boc-氨基酸酰胺(22)(1当量;1.00mmol)在无水DME(7.5ml)中的溶液中。将所述反应溶液在室温搅拌16h，然后通过在减压下在旋转蒸发器上蒸馏去除溶剂。将残余物溶解于乙酸乙酯(30ml)中，并与10%浓度碳酸氢钠溶液(15ml)一起剧烈搅拌30min。在相分离以后，用乙酸乙酯萃取水相2次。用10%浓度碳酸氢钠溶液洗涤合并的有机相3次，然后经硫酸钠干燥。过滤以后，蒸馏出溶剂，在油泵真空下干燥产物(23)。
可以从乙酸乙酯或乙酸乙酯/石油醚中重结晶粗产物，或通过在硅胶上的快速色谱法进行纯化。
在溶液中使硫代酰胺(23)环化成噻唑类化合物(24)
将碳酸钙(2当量;1.60mmol;161mg)加入Boc-氨基酸硫代酰胺(23)(1当量;0.80mmol)在无水乙醇(6ml)中的溶液中，将该悬浮液在室温搅拌10min。然后加入溴代丙酮酸(1.5当量;1.20mmol;201mg)。在室温搅拌4h以后，过滤反应混合物，用乙醇洗涤残余物。在减压下在旋转蒸发器上浓缩合并的滤液，将残余物溶解于乙酸乙酯(10ml)中，并用10ml5%浓度硫酸氢钾溶液萃取3次，用饱和氯化钠溶液萃取1次。有机相然后经硫酸钠干燥。过滤以后，蒸馏出溶剂，在油泵真空下干燥产物(24)。
通过在硅胶上的快速色谱法，纯化粗产物。
在溶液中的噻唑类化合物(24)酰胺化和Boc保护基的去除
将在THF中的(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐(PyBOP)(1.05当量;0.84mmol;437mg)和三乙胺(TEA)(3当量;2.40mmol;242mg;330μl)加入Boc-氨基酸噻唑羧酸(24)(1当量;0.80mmol)中，将该混合物在室温搅拌30min。然后加入R3-胺(1.3当量;1.04mmol)，将该混合物在室温搅拌18h。
蒸发反应溶液，使用DCM/MeOH梯度，在硅胶上色谱分析粗产物。
为了去除Boc保护基，在室温在25%TFA（在DCM中）中搅拌酰胺1h，然后蒸发。重复地，将庚烷加入粗产物中，并再在减压下在旋转蒸发器上通过蒸馏去除。然后从tBuOH/水4:1中低压冻干产物(25)。
N-环己基-2-[1-氨基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]噁唑-4-甲酰胺(3)的N-乙酰化
将在DCM(0.5ml)中的乙酸酐(5当量;140μmol;14mg;13μl)和TEA(2当量;56μmol;6mg;8μl)加入氨基烷基噁唑甲酰胺(3)(1当量;28μmol;10mg)中，并将该混合物在室温搅拌18h。然后蒸发反应溶液，并从tBuOH/水4:1中低压冻干粗产物(4)。
实施例B-在体外细胞培养试验中证实再生性质
首先，从分离自出生后小鼠的柯蒂氏器的、具有耳发育潜力的干细胞开始，在悬浮培养物中生长典型的细胞簇“球”。在与已知方法(Oshima等人,2007;Senn等人,2007)相比优化的培养条件下，在补充了B27和N2的DMEM/F12培养基(Dulbecco氏改良的Eagle培养基)中，在加入FGF(成纤维细胞生长因子)和IGF(胰岛素-样生长因子)的情况下，可以从干细胞培养物产生约1600个实体球/柯蒂氏器(图1C)。
通过在蛋白水平上标记(图1A)和在mRNA水平上证实多种干细胞标志物(图1B)，证实了在这些条件下形成的耳球（otosphere）处于去分化状态，该状态与柯蒂氏器在个体发生中的早期状态相对应。另外，可能证实耳球中的细胞分裂。
在原位，支持细胞是感觉毛细胞再生的潜在前体，因此是诱导感觉毛细胞再生的实际靶细胞。为此目的，必须在体外建立毛细胞样细胞和支持细胞样细胞的共同培养物，所述培养物就其细胞组成来说相对较好地代表柯蒂氏器。
为此，在第二步中，在鸟氨酸/纤连蛋白表面上的附着培养条件下，分化培养的耳球，得到与原始的感觉上皮相对类似的单层上皮岛。
通过免疫细胞化学检测，可能在蛋白水平鉴别出各自3种合适的支持细胞和感觉毛细胞标志物。图2显示了使用这些标志物对在天然器官中（体内）和在细胞培养物的分化的上皮岛中（体外）的情况的对比。
通过现有技术方法且在没有加入根据本发明的化合物的情况下进行的这些初步研究证实，培养的耳上皮岛适合用作证实根据本发明的化合物对内耳的支持细胞样细胞的再生潜力的细胞基础。支持细胞、毛细胞和干细胞的标志物的蛋白表达的变化，可以用于证实由施用的物质介导的效应。
关于筛选，首先测定了Sox2-阳性细胞在体外培养中的比例。Sox2是一种干细胞标志物，其也在柯蒂氏器的个体发生过程中表达。认为它在胚胎干细胞的多能性中和从分化细胞诱导多能干细胞的过程中具有重要作用(Takahashi和Yamanaka,2006)。因此，Sox2是一种重要的标志物，特别是在诱导的细胞的去分化/重新程序化的背景下。
通过将根据本发明的化合物N-环己基-2-[1-氨基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]噁唑-4-甲酰胺(3)加入细胞培养物中。表达Sox2的细胞的比例与分化对照相比不止倍增(图3)。
通过BrdU-阳性细胞的定量，检查由所述化合物诱导的干细胞标志物的表达是否最终也与培养物中细胞的增殖增加有关。在这里，在物质施用过程中，将培养物与胸苷类似物BrdU一起温育5h。在细胞周期的S期中，细胞分裂导致BrdU的掺入。如果所述物质之一会刺激细胞分裂，这用针对BrdU的抗体可以检测到并显影。
通过将根据本发明的化合物N-环己基-2-[1-氨基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]噁唑-4-甲酰胺(3)加入细胞培养物中，在4.8%的预先分化的细胞时可能诱导增殖(图4)。
关于Sox2表达和BrdU掺入，根据本发明的化合物2-[1-氨基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]噁唑-4-羧酸N-环己基酰胺(3)实现了显著的阳性结果。以此方式，证实了所述化合物能够诱导耳支持细胞的去分化和随后的增殖。
在剂量/活性分析中，测定了最佳浓度范围，在该范围中的该化合物在细胞培养物中展现出它的最大再生生物学效应。
为此，在基于干细胞的体外细胞培养试验中，在0.3μM至10μM之间的4个培养基浓度测定了BrdU的掺入。经发现，在0.3μM的浓度，没有实现显著的效果。但是，在1μM的浓度，平均值已经升高。从3μM的浓度，已经达到约9%BrdU-阳性细胞的饱和水平(图5)。
实施例C-在体外器官培养模型中证实再生性质
为了在天然器官中（即在原位在柯蒂氏器的复杂细胞结构中）证实在细胞培养试验中观察到的效果，使用一种形式的器官培养，其中将要培养的组织（在本发明的情况下，小鼠的整个内耳）放置在装有培养基的旋转圆柱(Zylinder)中(Hahn等人,2008)。在实验开始之前，从基底且从尖端在鼓阶区中打开耳蜗。以此方式，可能使重力的影响最小化，与此同时实现柯蒂氏器的组织和培养基之间的最佳气体和营养物交换。在这些条件下，可以比静止培养更久地培养所述外植块（Explantat）。
为了证实，通过施用根据本发明的化合物，在感觉毛细胞损失以后保留在柯蒂氏器中的支持细胞会去分化成前体细胞并随后增殖，建立了与听力困难耳朵类似的情形。在施用耳毒性的氨基糖苷抗生素新霉素(1mM)以后，所有感觉毛细胞中的2/3在24小时内发生细胞死亡。仅在耳蜗的尖端区中，一些感觉毛细胞存活，其数目在实验过程中进一步减少，作为初始损伤的结果。在从培养基中去除新霉素以后，可以进一步培养剩余的支持细胞。
然后与根据本发明的化合物(5μM)同时将BrdU加入培养基中，在4天以后，通过BrdU掺入来定量增殖。
在将根据本发明的化合物N-环己基-2-[1-氨基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]噁唑-4-甲酰胺(3)加给器官培养物以后，可以在最远的朝向侧面的代特氏细胞中证实BrdU掺入(图6B)。与内部感觉毛细胞相关的各个内指细胞和边缘细胞也是如此(图6C)，且可以视作它们的再生的潜在前体细胞。在没有施用物质的对照实验中，在代特氏细胞、内指细胞和内边缘细胞中没有BrdU的自发掺入(图6A)。
BrdU-阳性的细胞核的不同形态学指示有丝分裂的不同阶段直到完全的细胞分裂。在不同的细胞核中可以观察到染色质凝聚(图6D、E)。与此同时，发现BrdU-阳性的细胞核彼此紧密地相互靠近(图6E、F)。
这意味着，由于根据本发明的化合物N-环己基-2-[1-氨基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]噁唑-4-甲酰胺(3)的作用，已经通过支持细胞的细胞分裂，在柯蒂氏器的感觉上皮中形成了再生的意义上的新细胞。
实施例D–在体内施用以后的再生性质的证实
同样在成年豚鼠的体内模型中证实了根据本发明的化合物的再生生物学效应。通过脉冲噪声，产生造成柯蒂氏器的感觉毛细胞损失（尤其是在外感觉毛细胞区域中）的急性噪音损伤。然后从植入皮下的微型渗透泵(Alzet?)，经由内耳开窗术将根据本发明的化合物N-环己基-2-[1-氨基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]噁唑-4-甲酰胺(3)在局部连续地直接施用进耳蜗的鼓阶中。在泵中的物质的剂量相应地更高，为200μM，这考虑到在外淋巴中的预期稀释效应。
给药持续6周的时段，随后是2周的等待间隔。平行地，经由饮用水或微型渗透泵施用BrdU，以标记柯蒂氏器中的增殖细胞。
在取出柯蒂氏器以后，进行使用BrdU(细胞分裂)、肌球蛋白VI(感觉毛细胞)和DAPI(细胞核染色)的免疫组织化学三重标记(图7)以及使用Sox2(多能支持细胞)的标记。
BrdU-标记的支持细胞和感觉毛细胞优选地表现在由声创伤损伤的柯蒂氏器区域中。在有/没有噪音损伤且没有施用物质的对侧对照器官中，没有发现BrdU-标记的感觉毛细胞，并且，总而言之，根据关于自发增殖的已知发现，仅发现很少的BrdU-标记的细胞。
体内发现明确地证实，通过施用根据本发明的化合物N-环己基-2-[1-氨基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]噁唑-4-甲酰胺(3)，甚至可以在成年动物中诱导基于细胞分裂的感觉毛细胞再生。这突出了根据本发明的化合物作为用于内耳听力困难的病因疗法（通过感觉毛细胞再生）的活性成分的令人惊讶的巨大潜力。
实施例E-毒性
在细胞培养、器官培养和体内研究中，在从0.3μM至200μM的实验浓度范围内，没有发现根据本发明的氨基烷基噁唑甲酰胺和氨基烷基噻唑甲酰胺的毒性效应的指征。
附图说明
图1.从小鼠的柯蒂氏器分离和培养干细胞。
(A)可以如下从内耳得到干细胞：使出生后柯蒂氏器的细胞个体化，分离仍然存在的干细胞，并在选择性条件下以悬浮培养方式培养它们。在这些条件下，形成表达干细胞标志物Sox2的球(A′)，所述Sox2被认为在胚胎干细胞的多能性中和在从分化的细胞诱导多能干细胞中具有决定性作用(Takahashi和Yamanaka,2006)。此外，所述球的核掺入了BrdU(A′′)，这指示细胞的增殖。
(B)在所述球中表达几种干细胞标志物，所述标志物也可以在柯蒂氏器的个体发生过程中检测到。作为阳性对照(pos)，应用来自胚胎发育第14.5天的柯蒂氏器的mRNA。相对于持家基因GAPDH进行标准化，可能证实，Jag1、巢蛋白、Sox2和Nanog既在形成的内耳中表达，也在从其分离的干细胞中表达。
(C)使用优化过的方法，可能使从原代培养物形成的球的比例相对于当前公开的文献倍增(Oshima等人,2007;Senn等人,2007)。
图2.毛细胞和支持细胞标志物的体内和体外蛋白表达谱。
(A)p27 Kip1 在柯蒂氏器的所有支持细胞中表达。内感觉毛细胞和外感觉毛细胞都不是p27 Kip1 -阳性的。可能证实在上皮岛内的p27 Kip1 表达(A′)。
(B)在代特氏细胞的细胞核下面紧邻的柯蒂氏器中和在内指细胞区域中，支持细胞的GFAP标记。还在体外发现了丝的图案(B′)。
(C)E-钙粘着蛋白会标记在侧面朝向柱细胞的所有支持细胞。E-钙粘着蛋白也定位于上皮岛的膜中(C′)。
在体内，感觉毛细胞标志物诸如肌球蛋白VIIA(D)、肌球蛋白VI(E)和钙网膜蛋白(F)会可靠地标记内感觉毛细胞和外感觉毛细胞。在体外培养的单个细胞中，也可以检测到所有标志物(D′、E′、F′)。
在天然器官中，星号在每种情况下标记3个外感觉毛细胞和1个内感觉毛细胞(总是在右手侧)。
比例尺：20μm，在原初柯蒂氏器的照片中(A-F)，
10μm，在细胞培养物中(A’-F’)。
图3.在筛选实验中，具有Sox2表达的细胞的相对数目。
检查了哪种低分子量化合物能够诱导Sox2-阳性细胞的比例的增加(作为细胞去分化的标志物，相对于分化对照的水平进行标准化)。
7种化合物显著不同于对照(p<0.05,n=10)。
图4.在筛选实验中，BrdU-阳性细胞的相对数目。
通过检测BrdU，可能定量多少细胞在特定时段内已经进入细胞周期的S期。
在筛选过程中，与BrdU一起温育细胞5小时。
显示了在通过物质施用来刺激增殖的总群体中的细胞的比例。
8种化合物能够诱导显著的增殖(p<0.05,n=10)。
图5.N-环己基-2-[1-氨基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]噁唑-4-甲酰胺(3)(物质33)的剂量/活性分析。
在附着培养中，检查了诱导的BrdU效应的剂量依赖性。当培养基中的物质浓度从0.3μM增加至3μM时，BrdU掺入增加至显著更高的水平(p<0.05,n=10)。在更高的浓度，BrdU掺入不再进一步增加。对照（来自体外培养的细胞群体，所述体外培养含有可比较量的DMSO，没有施加物质）没有介导任何效应。
图6.N-环己基-2-[1-氨基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]噁唑-4-甲酰胺(3)(物质33)在器官培养模型中诱导的BrdU掺入。
通过BrdU掺入，证实了诱导的支持细胞增殖的程度。
在没有物质施用的对照中，在代特氏细胞、内指细胞和边缘细胞中没有观察到BrdU掺入(A)。在施用根据本发明的化合物(3)(物质33,5μM)以后，BrdU掺入朝向侧面的代特氏细胞(B)中，且也掺入单个内指细胞和内边缘细胞中(C)。
BrdU-阳性的细胞核是处于有丝分裂的不同阶段，或已经完成细胞分裂(D、E、F)。
比例尺：20μm。
图7.N-环己基-2-[1-氨基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]噁唑-4-甲酰胺(3)在体内在耳蜗内施用以后的三重标记。
在使用成年豚鼠的体内实验中，在类似于真实的条件下(与BrdU(100mg/ml)平行地用Alzet?泵(200μM)施用6周的时段，在8.5周以后，取出器官并染色)，证实了根据本发明的化合物的再生效应。
显示了用肌球蛋白VI(感觉毛细胞的标志物)和BrdU(细胞分裂的标志物)标记的内感觉毛细胞。用DAPI标记细胞核(细胞核染色)。
BrdU标记证实了基于细胞分裂的再生。
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Claims (24)

1.下式(1)的氨基烷基噁唑甲酰胺在制备用于治疗疾病的药物中的用途，
其中
X代表O，
R2代表氢，且
R1和R3代表选自下面组的取代基：
R1代表支链的或非支链的、取代的或未取代的任选地含有杂原子的芳基或烷基芳基，
R3代表支链的或非支链的、取代的或未取代的烷基、环烷基或烷基环烷基，
或
它们的药学上可接受的盐，
其中，所述疾病与受损的有丝分裂后组织有关。
2.根据权利要求1的用途，其中R1代表(1H-吲哚-3-基)乙基。
3.根据权利要求1的用途，其中R3代表取代的或未取代的环烷基。
4.根据权利要求3的用途，其中所述环烷基是环己基。
5.根据权利要求1的用途，其中
R1代表(1H-吲哚-3-基)乙基，和
R3代表取代的或未取代的环烷基。
6.根据权利要求5的用途，其中所述环烷基是环己基。
7.根据权利要求1的用途，所述式(1)具有下式：
8.根据权利要求1的用途，其中所述药物制剂是用于人医学的药物制剂。
9.下式(1)的氨基烷基噁唑甲酰胺在制备用于治疗哺乳动物的疾病的药物中的用途，
其中
X代表O，
R2代表氢，且
R1和R3代表选自下面组的取代基：
R1代表支链的或非支链的、取代的或未取代的任选地含有杂原子的芳基或烷基芳基，
R3代表支链的或非支链的、取代的或未取代的烷基、环烷基或烷基环烷基，
或
它们的药学上可接受的盐，
其中，所述疾病与受损的有丝分裂后组织有关。
10.根据权利要求9的用途，其中所述疾病与哺乳动物内耳的所述组织有关。
11.根据权利要求9或10的用途，其中R1代表(1H-吲哚-3-基)乙基。
12.根据权利要求9或10的用途，其中R3代表取代的或未取代的环烷基。
13.根据权利要求12的用途，其中所述环烷基是环己基。
14.根据权利要求9或10的用途，其中
R1代表(1H-吲哚-3-基)乙基，和
R3代表取代的或未取代的环烷基。
15.根据权利要求14的用途，其中所述环烷基是环己基。
16.根据权利要求9或10的用途，所述式(1)具有下式：
17.根据权利要求9或10的用途，其中所述药物用于治疗在柯蒂氏器中的感觉毛细胞的损伤和损失以后内耳听力困难。
18.根据权利要求9或10的用途，其中所述化合物在原位刺激受损的有丝分裂后组织的内源性再生，所述再生通过再生生物学效应诸如终末分化细胞的去分化、增殖和随后的再分化而进行。
19.根据权利要求18的用途，其中所述受损的有丝分裂后组织是在柯蒂氏器中受到损伤和损失的感觉毛细胞。
20.根据权利要求18的用途，其中所述终末分化细胞是内耳的支持细胞。
21.药物制剂，其包含：至少一种根据权利要求1-8中任一项定义的化合物。
22.根据权利要求21的药物制剂，其包含：至少一种根据权利要求1-8中任一项定义的治疗有效量的化合物。
23.根据权利要求21或22的药物制剂，其特征在于，它作为溶液、悬浮液、喷雾剂、凝胶、洗剂、乳剂、糊剂、软膏剂或乳膏剂。
24.根据权利要求23的药物制剂，其特征在于，所述凝胶是水凝胶。
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