CN102058632B - 一种药物组合物在制备防治酒精性肝损伤、脂肪肝及降血脂的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种预防和治疗酒精性肝损伤、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝及高血脂症的救必应药物组合物，该组合物是从天然中药救必应(Ilicis routundae cortex)中经提取精制而获得，未经任何化学修饰，该组合物特征在于是由具栖冬青苷、紫丁香苷和救必应酸等物质所组成。本发明还包括救必应组合物的制备方法和在制备酒精性肝损伤、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝及降血脂的药物中的应用。

Description

一种药物组合物在制备防治酒精性肝损伤、脂肪肝及降血脂的药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种从救必应(Ilicis routundae cortex)中提取的药物组合物的新方法及医药用途，具体的说是一种具有预防和治疗酒精性肝损伤、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝及高血脂症的药物组合物。也涉及该药物的药物制剂，本发明属于医药技术领域。

背景技术

脂肪肝不是一种独立的疾病，是由多种疾病和病因引起的肝脏脂肪变性。最常见的病因有肥胖、酒精中毒，其次为营养失调、糖尿病、药物中毒、妊娠、遗传等。肝脏脂肪变性可影响肝功能，部分患者还可能进一步发展成为肝炎、肝纤维化和肝硬化。我国脂肪肝的发病率有逐渐增加的趋势。中医学虽无脂肪肝的病名，但根据其临床表现大多属于“症积”“胁痛”“黄疸”等范畴。中医认为，脂肪肝起因多为过食肥甘厚味，过度肥胖，或饮酒过度，或感受湿热疫毒，或情志失调，或久病体虚以及食积、气滞、疫气等都可引起本病，其病变部位在肝，与肝、胆、脾、胃、肾等脏腑密切相关，对其发病机理的认识，众多学者均认为是肝失疏泄，脾失健运、湿热内蕴、痰浊郁结、瘀血阻滞而最终形成湿痰瘀阻互结，痹阻肝脏脉络而形成脂肪肝。

酒精肝是由于长期大量饮酒(嗜酒)所致的肝脏损伤性疾病。近十年来，随着人们生活水平的提高和社交圈的扩大，全球酒的消费量猛增。同时，酒精肝的发生亦显著增加。在我国由于饮酒导致酒精肝的发生率也呈明显上升趋势，已成为不容忽视的隐型杀手。在欧美国家，酒精性肝硬化占全部肝硬化的50-90％。长期酗酒者还影响脂肪代谢，可引起脂肪肝，酒精可使肝细胞变性、坏死、纤维组织增生而致肝硬化。

目前治疗脂肪肝和酒精性肝损伤的药物多为中药复方制剂，因此，开发一个安全有效、毒副作用小的具有预防和治疗酒精性肝损伤、脂肪肝及高血脂的具有明确化学成分药物，正是患者所需要的。我们发明的专利属于一种天然药物组合物，化学成分清楚，其用途涉及对酒精性肝损伤、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝及降血脂方面的应用。

救必应(Ilicis routundae cortex)来源于冬青科植物铁冬青(Ilex rotunda Thunb.)的干燥树皮。铁冬青生长于荒山疏林、丘陵或溪边，主要分布于广东、广西、福建等省区。味苦、性寒，有清热解毒、消肿止痛、利湿、祛风解暑等功效，收载于《岭南采药录》，称“味苦、清热毒”为我国南方地区民间草药(黄闻键，救必应的民间应用，江西中医药，1996，2：147)。救必应树皮含黄酮甙、酚类，鞣质、三萜苷。临床上常用于感冒、扁桃体炎，咽喉炎、急性肠胃炎、痢疾、骨痛等。目前利用救必应药材为原料生产的药物，主要都是粗提物，制备工艺主要以水提醇沉，提取物干燥、粉碎直接入药的方法。文献报道了紫丁香苷具有对半乳糖胺致肝毒性的防护作用(国外医学中医中药分册2000年，第22卷，第6期，346-347)；文献检索中发现刘国樵发明的专利(CN101342205)，是用救必应药材，加乙醇提取，滤过，浓缩，加水搅匀后，滤取沉淀物，干燥得提取物，1g提取物干品中含有具栖冬青苷和救必应酸总量为0.50～0.80g，其中具栖冬青苷和救必应酸质量比为12～1.5∶1，此提取物中二者含量只占到总提取物的50～80％，其中主要的成分为具栖冬青苷，有降血脂的作用，但是此提取物中不含有紫丁香苷，与我们发明的专利有本质的区别。

我们实验研究证明，由具栖冬青苷(Pedunculoside)30-70％、紫丁香苷(Syringin)6-25％、救必应酸(rotundic acid)1-5％组成的药物组合物，是从自然界天然存在的中药材救必应中提取而得，未经过任何化学修饰，具有预防和治疗酒精性肝损伤、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝及高血脂症的作用，本发明相对其他文献报道具有很大的进步及本质的区别。

在本发明完成之前，还没有文献报道由具栖冬青苷、紫丁香苷、救必应酸组成的药物组合物，具有预防和治疗酒精性肝损伤、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝及高血脂疾病的报道，也未发现此组合物用于预防和治疗酒精性肝损伤、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝及高血脂症的临床方面应用。同时也未发现从其他天然中药材中提取的由具栖冬青苷、紫丁香苷、救必应酸组成的组合物。

发明内容

发明目的是提供一种救必应组合物，用于预防和治疗酒精性肝损伤、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝及高血脂症等疾病的药物的研究与开发，本发明对中药材救必应的有效成分进行研究，寻找新的有效部位，通过进一步的研究表明，由具栖冬青苷、紫丁香苷、救必应酸组成的药物组合物对酒精性肝损伤、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝及高血脂等具有很强的药理作用。这种天然的药物组合物还未在其他药材中发现，具有突出的贡献。

本发明所述的药物组合物，是由救必应药材提取精制而成，其特征在于，将救必应药材粉碎成粗粉，用乙醇回流提取，滤过，滤液回收乙醇，滤过，得提取物I；滤液挥至无醇味，通过已处理好的大孔树脂柱，先用水至无色，再用乙醇洗脱，浓缩乙醇液，得提取物II；将提取物I及提取物II合并，干燥得救必应药物组合物。本发明提取的救必应组合物与以往报道的救必应提取物、救必应制剂有本质的区别和明显的技术进步。同时这种天然的药物组合物未经过任何化学修饰，体现了中医理论化学成分的复合作用，具有明显的创新性。

本发明的有益效果是：填补了制备救必应的有效部位并包括由皂苷类、苯丙素类、五环三萜酸类成分作为组合物的空白，同时也扩展了其在医药领域中对酒精性肝损伤、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝及高血脂疾病的预防和治疗的应用范围，具有很高的应用价值。组合物其特征在于，按重量份计：具栖冬青苷30-70％、紫丁香苷6-25％、救必应酸1-5％，这种天然的配方制剂，具有明确的药理作用，在其他中药材中还未发现，具有很高开发利用价值。

本发明的另一个目的是，提供救必应药物组合物的药物制剂。主要的药物形态为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸剂，注射剂中的任何一种。

本发明的所述的救必应药物组合物制备方法如下：

将救必应药材粉碎成粗粉，用5-10倍量药材重量的50-95％的乙醇回流提取1-3次，每次1-3小时，滤过，滤液回收乙醇，滤过，得提取物I；滤液挥至无醇味，通过已处理好的大孔树脂柱，先用水至无色，再用30-80％乙醇洗脱，浓缩乙醇液，得提取物II；将提取物I及提取物II合并，干燥得救必应药物组合物。

本发明提取方法具有生产周期短、可操作性强，没有使用易燃易爆化学试剂、安全，成本低，可以满足大工业化生产的需要。鉴于本发明具有明确的药理活性，本发明工艺所得的救必应组合物可以产业化制备，具有广阔的应用前景。

具栖冬青苷、紫丁香苷、救必应酸高效液相色谱法测定方法：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05％磷酸水溶液为流动相；具体比例见下表，检测波长为210nm。理论板数按紫丁香苷计算不低于3000。

对照品溶液的制备精密称取紫丁香苷、具栖冬青苷、救必应酸对照品，置容量瓶中，用甲醇溶解制成每ml含紫丁香苷0.05mg，具栖冬青苷0.15mg，救必应酸0.008mg混合溶液。

供试品溶液的制备取组合物20mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超声30min，放置至室温，甲醇定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

救必应药物组合物(紫丁香苷占21.8％、具栖冬青苷占57.6％、救必应酸占3.6％)具有预防和治疗酒精性肝损伤、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝及高血脂症的作用，这些药理作用，通过以下药效学试验例得到证实。

1、救必应组合物对酒精性肝损伤的保护作用

小鼠50只，随机分为5组，即救必应组合物低、中、高三个剂量组，酒精模型组和空白对照组。救必应组合物组分别按救必应组合物50、100及200mg/kg灌胃小鼠，1次/d，共14d，酒精模型组和空白组对照组分别灌胃等体积蒸馏水，1次/d，共14d。末次给药后禁食12小时，除空白对照组仍然灌胃等量蒸馏水外，其他4组动物(救必应组合物低、中、高三个剂量组，酒精模型组)分别灌胃50％乙醇12mL/kg，6h后眼静脉取血，测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量，取小鼠肝脏称重，测定肝器指数，取右叶测定超氧化物歧化酶的(SOD)，谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)活性，丙二醛(MDA)含量。

表1救必应组合物对酒精损伤小鼠血清ALT、AST及肝脏系数的影响

与空白对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；酒精组比较Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。

从表1可知，灌胃酒精使小鼠肝指数显著增加，灌胃救必应组合物可使酒精损伤小鼠肝指数显著降低。灌胃酒精使小鼠血清ALT、AST显著增加，灌胃救必应组合物可使酒精损伤小鼠血清ALT、AST显著降低。

表2救必应组合物对酒精损伤小鼠肝脏MDA、GSH-PX、SOD的影响

与空白对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；酒精组比较Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。

从表2结果表明，酒精能引起小鼠肝脏MDA含量显著升高、引起GSH-PX酶、SOD活性显著降低，而救必应组合物能显著降低MDA含量，能显著升高GSH-PX酶、SOD活性。

2、救必应组合物对高血脂症及高血脂引起的脂肪肝的改善功能

取雄性大鼠60只，随机分为6组，除空白对照组外，其余各组每天给予高脂饲料：2％胆固醇，10％猪油，0.5％胆酸钠，0.2％丙基硫氧嘧啶，87％基础饲料。除空白对照组自由饮水外，高脂模型组给予等量生理盐水，其余各组经口灌胃，每日1次，按照表1分组，给药，连续给药10周，末次用药后禁食12h，不禁水，断头处死全部动物。断头取血，测血中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度蛋白质(LDL-C)，测定结果见表3；取肝右叶1g，4℃下制成10％的匀浆，3000rpm 10min，取上清液，分别测定TC和TG的含量，测定结果见表4；取新鲜肝组织用生理盐水制成1％肝匀浆，按试剂盒操作说明书测定SOD、GSH、VitE，采用硫代巴比妥酸法测定肝组织MDA的含量，测定结果见表5。

表3救必应组合物对高脂血症大鼠血脂指标的影响结果

与模型对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01；与空白对照组比较，ΔP＜0.05；ΔΔP＜0.01；

结果表明，模型对照组血清TC、TG、LDL-C值明显升高，HDL-C下降，与模型对照组比较救必应组合物能明显降低血清TC、TG含量，显著降低血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量，显著升高血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量。

表4救必应组合物对大鼠肝内TC、TG的影响

与空白对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01；模型组比较Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。

从表4可知，模型对照组与空白对照组相比较，TC、TG含量显著升高。与模型对照组相比较，救必应组合物高、中、低剂量组TC含量均有显著性降低，救必应组合物高、中剂量组TG含量也有显著性降低。

表5救必应组合物对大鼠肝组织SOD、MDA、GSH、VitE含量的影响

与空白对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；模型组比较Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01，ΔΔΔp＜0.001。

从表5可知，模型对照组与空白对照组比较，SOD活性显著性的下降，MDA含量明显增加。用药各组与模型对照组相比较，SOD活性明显增高，MDA含量明显降低，且基本恢复至近似正常对照组的水平。模型组与正常对照组比较GSH和VitE含量明显降低，救必应用药组能明显提高GSH和VitE的含量。

3、救必应组合物对酒精引起的脂肪肝的改善功能

试验大鼠120只，随机分为正常对照组；脂肪肝模型组；阳性对照药东宝肝泰600mg/kg给药剂量组：救必应组合物设100mg/kg、50mg/kg和25mg/kg三个给药剂量组。共6组，每组20只。除正常对照组外，其余各组大鼠每日上午8:30灌胃给予(56％乙醇+0.5mL鱼油)1次，乙醇剂量开始为7g/kg，随后每周递增0.2g/kg，连续4周。正常对照组大鼠灌胃给予等热量的56％葡萄糖+0.5mL鱼油。受试药物用蒸馏水配制成混悬液，每日下午1:00灌胃给予1次，正常对照组与模型对照组大鼠灌胃给予等量的蒸馏水，灌胃体积为10ml/kg/d。试验过程中大鼠自由摄食饮水，每周称量体重1次，以调整给药剂量。于给药第四周末处死动物。标本采集及观测指标，试验结果以均数加减标准差

表示，统计学处理方法采用组间t检验。实验结果见表6和表7。

表6救必应组合物对酒精性脂肪肝大鼠血清ALT、AST和LDH活性的影响

与正常对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；模型组比较Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01，ΔΔΔp＜0.001。

救必应组合物高和中给药组动物血清ALT和AST活性非常明显的低于模型组，本试验结果表明，供试品救必应组合物可明显降低酒精性脂肪肝大鼠血清中异常升高的ALT、AST的活性，说明救必应组合物对肝细胞具有良好的保护作用。救必应组合物高和中给药组对酒精性脂肪肝动物血清LDH水平的异常升高具有明显的降低作用，此项试验结果表明，救必应组合物对酒精所致脂肪肝有很好的保护作用。

表7救心应组合物对酒精性脂肪肝大鼠血清TC、TG和MDA含量及肝组织TG含量的影响

与正常对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；模型组比较Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。

经分别给予救必应组合物100mg/kg、50mg/kg和25mg/kg三个不同给药剂量进行药物治疗后，其中，救必应组合物100mg/kg给药组动物血清中MDA含量明显低于模型组(为P＜0.01)。表明救必应组合物可降低脂肪肝模型动物血清MDA含量，抑制脂肪肝时肝细胞的脂质过氧化反应，从而发挥保护肝细胞免受损伤的作用。救必应组合物高和中两个给药组动物血清中TC、TG含量及肝组织TG含量显著低于模型对照组(分别为P＜0.01或P＜0.05)。表明救必应组合物可以降低酒精所致脂肪肝大鼠血脂含量及肝脏脂类含量的升高，具有抑制肝脏脂肪堆积的作用。

从以上的药效学实验可知，救必应组合物具有预防和治疗酒精性肝损伤、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝及高血脂症的作用，并且长期服用没有副作用。

本发明是通过如下的实验施例得以实现(证实)，但并不意味这本发明就限于此，具体实施方法如下。

实例1

将救必应药材2kg粉碎成粗粉，用8倍量药材重量的70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，至2500ml，滤过，取滤饼得提取物I；滤液挥至无醇味，通过已处理好的D101大孔树脂柱，先用水洗至无色，再用50％乙醇洗脱4BV，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，得提取物II；将提取物I及提取物II合并，干燥，得救必应药物组合物158.6g。利用高效液相色谱法测定，计算，紫丁香苷占23.8％、具栖冬青苷占59.1％、救必应酸占2.9％。

实例2

将救必应药材2kg粉碎成粗粉，用6倍量药材重量的50％的乙醇回流提取3次，每次3小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，至2500ml，滤过，取滤饼得提取物I；滤液挥至无醇味，通过已处理好的D101大孔树脂柱，先用水洗至无色，再用60％乙醇洗脱4BV，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，得提取物II；将提取物I及提取物II合并，干燥，得救必应药物组合物168.4g。利用高效液相色谱法测定，计算，紫丁香苷占19.7％、具栖冬青苷占55.3％、救必应酸占2.2％。

实例3

将救必应药材2kg粉碎成粗粉，用8倍量药材重量的80％的乙醇回流提取2次，每次3小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，至2500ml，滤过，取滤饼得提取物I；滤液挥至无醇味，通过已处理好的AB-8大孔树脂柱，先用水洗至无色，再用40％乙醇洗脱4BV，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，得提取物II；将提取物I及提取物II合并，干燥，得救必应药物组合物148.6g。利用高效液相色谱法测定，计算，紫丁香苷占23.4％、具栖冬青苷占60.1％、救必应酸占3.4％。实例4

将救必应药材2kg粉碎成粗粉，用8倍量药材重量的50％的乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，至2500ml，滤过，取滤饼得提取物I；滤液挥至无醇味，通过已处理好的AB-8大孔树脂柱，先用水洗至无色，再用35％乙醇洗脱4BV，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，得提取物II；将提取物I及提取物II合并，干燥，得救必应药物组合物141.6g。利用高效液相色谱法测定，计算，紫丁香苷占23.9％、具栖冬青苷占62.1％、救必应酸占3.1％。实例5、(胶囊剂)

救必应药物组合物100g，药用淀粉适量，混合均匀，制粒，干燥，整粒，装入1号胶囊，制成1000粒，即得。每次1粒、每日2次。

实施例6、(片剂)

救必应药物组合物100g，药用淀粉适量，糊精适量，混合均匀，制粒，干燥，整粒，干燥，加入润滑剂适量，压片，制成1000片，即得。每次1片、每日2次。

实施例7、(滴丸剂)

称取15g聚乙二醇4000，15g聚乙二醇6000，在水浴上熔化，救必应药物组合物10g，搅拌均匀，倾入保温管中，调节恒温装置，使药液在8090℃下滴入冷却过的液体石蜡中，滴完后，将药丸倾入滤纸上吸干石蜡油，制成1000粒，即得。每次10粒、每日2次。

实施例8、(颗粒剂)

救必应药物组合物100g，糊精400g，乳糖500g，混合均匀，用适量乙醇制粒，干燥、整粒、分装，制成1000袋，即得。每次1袋、每日2次。

Claims (4)

1.一种由救必应提取的药物组合物的制备方法，其特征在于：将救必应药材粉碎成粗粉，用5-10倍量药材重量的50-95％的乙醇回流提取1-3次，每次1-3小时，滤过，滤液回收乙醇，至每1ml含0.8g药材，滤过，取滤饼得提取物I；滤液挥至无醇味，通过已处理好的D101型或AB-8型大孔树脂柱，先用水洗至无色，再用30-80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，得提取物II；将提取物I及提取物II合并，干燥得救必应药物组合物。

2.根据权利要求1所述的救必应药物组合物，其特征在于：主要由具栖冬青苷、紫丁香苷和救必应酸组成。

3.根据权利要求3所述的救必应药物组合物，其特征在于按重量百分比计：具栖冬青苷占30-75％，紫丁香苷占6-25％，救必应酸占1-5％。

4.根据权利要求1所述的救必应药物组合物，在制备酒精性肝损伤、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝及降血脂的药物中的应用。