CN101993479B

CN101993479B - 植物耐逆性相关转录因子TaWRKY1及其编码基因与应用

Info

Publication number: CN101993479B
Application number: CN 200910090496
Authority: CN
Inventors: 陈受宜; 张劲松; 牛灿芳; 马彪; 林晴; 张正斌
Original assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Current assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Priority date: 2009-08-13
Filing date: 2009-08-13
Publication date: 2013-04-10
Anticipated expiration: 2029-08-13
Also published as: CN101993479A

Abstract

本发明公开了一种植物耐逆性相关转录因子TaWRKY1及其编码基因与应用。该蛋白，选自如下(a)或(b)：(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物耐逆性相关的由(a)衍生的蛋白质。实验证明，本发明的蛋白及其编码基因具有提高植物抗逆性功能，转入本发明基因的植物的抗逆性明显高于未转入本发明基因的植物，如转基因拟南芥，经过低温处理后，转基因植物的恢复情况明显好于未转基因拟南芥，且存活率、抽薹率、抽薹平均长度等都较对照组有显著提高。因此，本发明蛋白及其编码基因在培育抗逆性植物、作物育种等领域中将有广阔的应用前景。

Description

植物耐逆性相关转录因子TaWRKY1及其编码基因与应用

技术领域

本发明涉及一种植物耐逆性相关转录因子TaWRKY1及其编码基因与应用，特别是来源于小麦的耐逆性相关转录因子TaWRKY1及其编码基因与应用。

背景技术

环境中物理化学因素的变化，例如干旱、盐碱、低温等胁迫因素对植物的生长发育有重要影响，严重时会造成农作物大规模减产，培育耐逆性作物是种植业的主要目标之一。目前，基因工程育种已经成为增强作物耐逆性的重要方法之一。高等植物细胞有多种途径应答环境中的各种逆境胁迫，其中转录因子起着调控耐逆相关效应基因表达的作用。植物中已经发现了多类转录因子与植物耐逆性相关，例如：EREBP/AP2中的DREB类，bZIP，MYB等等。

WRKY类转录因子是植物转录因子中的一个大家族，仅拟南芥就含有100多种WRKY成员，所有成员均含有一个或两个WRKY结构域，可与启动子中的W-box结合。WRKY家族参与植物多种生物学功能，例如对病原菌的防卫、植物衰亡、形态发生以及对非生物胁迫的应答等。W-box存在于许多与植物防御反应相关的基因启动子中，介导了病原物来源的激发子诱导的转录反应。病毒、细菌和真菌激发子的侵染以及信号物质如水杨酸的处理，也能够诱发WRKY转录因子的mRNA和蛋白质的合成，而且也能增强它与DNA的结合活性。W-box和WRKY转录因子联合调控其下游基因产物从而起到保护和防卫的作用。人们相继从不同植物中克隆得到在逆境下起作用的WRKY转录因子有：拟南芥AtWRKYs、烟草NtWRKYs以及马铃薯StWRKY。尚未克隆小麦中与非生物胁迫相关的该类转录因子。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种与植物耐逆性相关的蛋白及其编码基因。

本发明所提供的蛋白，名称为TaWRKY1，来源于小麦，具体为如下(a)或(b)所示的蛋白：

(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列表中序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物耐逆性相关的由(a)衍生的蛋白质。

序列表中的序列2由318个氨基酸残基组成，是小麦中的WRKY类转录因子。自序列2的氨基末端第126-132位氨基酸残基是保守的WRKYGQK结构，自序列2的氨基末端第146-177位氨基酸残基为一个锌指结构，CTHQGCSVRKHVERASHDLKSVITTYEGKHNH其为IaCTWD&Ib组，保守序列为C-X4-C-X23-HXH，与OsWRKY34相似。

所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加是指在序列2的WRKYGQK结构域和锌指结构域外进行取代和/或缺失和/或添加：所述WRKYGQK结构域为自序列2的氨基末端第126-132位氨基酸残基，锌指结构域为自序列2的氨基末端第146-177位氨基酸残基。

为了使(a)或(b)中的蛋白便于纯化，可在所述蛋白的N端或C端连接上如表1所示的标签。

表1.标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-Arg	5-6(通常为5个)	RRRRR
Poly-Hi s	2-10(通常为6个)	HHHHHH
			FLAG	8	DYKDDDDK
Strep-tag II	8	WSHPQFEK
			c-myc	10	EQKLISEEDL

上述(a)或(b)中的蛋白可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述(b)中的蛋白的编码基因可通过将序列表中序列1所示的DNA序列缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

上述蛋白的氨基酸序列中一个或几个氨基酸残基的取代、替换和/或添加，有的是由于自然发生的变异引起的，有的是由人工诱变处理引起。

本发明所提供的编码基因具体可为如下1)或2)或3)所示的基因：

1)序列表中序列1所示的DNA分子；

2)在严格条件下与1)限定的DNA分子杂交且编码所述植物耐逆性相关蛋白的DNA分子；

3)与1)限定的DNA序列有70％以上同源性且编码所述植物耐逆性相关蛋白的DNA分子。

上述严格条件可为在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

蛋白TaWRKY1的编码基因记作TaWRKY1，序列表中的序列1由957个脱氧核糖核苷酸组成，自5’末端的第1至957位脱氧核糖核苷酸为TaWRKY1的开放阅读框(Open Reading Frame，ORF)，自5’端的第1至3位脱氧核糖核苷酸为TaWRKY1的起始密码子ATG，自5’端的第955至957位脱氧核糖核苷酸为TaWRKY1的终止密码子TAG。TaWRKY1的表达受低温和ABA处理诱导。

含有上述任一所述编码基因的重组载体、重组菌、转基因细胞系或表达盒也属于本发明的保护范围。

所述重组表达载体具体可为在pBI121的BamHI和SacI位点间插入自序列表中序列1的自5’末端的第1-957位脱氧核苷酸得到的pBI121-TaWRKY1。

可用现有的植物表达载体构建含有TaWRKY1基因的重组表达载体。

所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。所述植物表达载体还可包含外源基因的3’端非翻译区域，即包含聚腺苷酸信号和任何其它参与mRNA加工或基因表达的DNA片段。所述聚腺苷酸信号可引导聚腺苷酸加入到mRNA前体的3’端，如农杆菌冠瘿瘤诱导(Ti)质粒基因(如胭脂合成酶Nos基因)、植物基因(如大豆贮存蛋白基因)3’端转录的非翻译区均具有类似功能。

使用TaWRKY1构建重组植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型启动子或组成型启动子，如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、玉米的泛素启动子(Ubiquitin)，它们可单独使用或与其它植物启动子结合使用；此外，使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。

为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境筛选转化植株。

扩增上述任一所述编码基因全长或其任意片段的引物对也属于本发明的保护范围。

所述引物对具体可为如下1)、2)或3)或4)：

1)一条引物的序列如序列表中序列3所示，另一条引物的序列如序列表中序列4所示；此引物是扩增基因全长的引物；

2)一条引物的序列如序列表中序列5所示，另一条引物的序列如序列表中序列6所示；此引物是扩增基因部分片段的引物；

3)一条引物的序列如序列表中序列7所示，另一条引物的序列如序列表中序列8所示；此引物是扩增基因部分片段的引物；

4)一条引物的序列如序列表中序列9所示，另一条引物的序列如序列表中序列10所示。此引物是扩增基因部分片段的引物。

本发明的最后一个目的是提供一种培育耐逆性植物的方法。

本发明所提供的培育耐逆性植物的方法，是向植物中导入上述任一所述的编码基因，培育，得到耐逆性植物。

上述过程中，所述耐逆性具体可为耐低温。

利用任何一种可以引导外源基因在植物中表达的载体，将本发明所提供的小麦WRKY家族转录因子TaWRKY1的编码基因导入植物细胞，可获得对低温胁迫耐受力增强的转基因细胞系及转基因植株。携带有编码基因的表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培育成植株。

所述植物可以是单子叶植物，也可以是双子叶植物，如：大豆、拟南芥、水稻、小麦、玉米、黄瓜、番茄、杨树、草坪草、苜宿等。

上述任一所述蛋白或上述任一所述的编码基因在培育耐逆性植物中的应用也属于本发明的保护范围。

上述应用中，所述耐逆性具体可为耐低温；所述植物可以是单子叶植物，也可以是双子叶植物，如：大豆、拟南芥、水稻、小麦、玉米、黄瓜、番茄、杨树、草坪草、苜宿等。

实验证明，本发明的蛋白及其编码基因具有提高植物抗逆性功能，转入本发明基因的植物的抗逆性明显高于未转入本发明基因的植物，如转基因拟南芥，经过低温处理后，转基因植物的恢复情况明显好于未转基因拟南芥，且存活率、抽薹率、抽薹平均长度等都较对照组有显著提高。因此，本发明蛋白及其编码基因在培育抗逆性植物、作物育种等领域中将有广阔的应用前景。

附图说明

图1RT-PCR分析TaWRKY1在低温和ABA处理下的表达特征。

图2植物表达载体pBI121-TaWRKY1的物理图谱。

图3Northern杂交检测TaWRKY1基因在转基因植株中的表达量。

图4为正常条件下转空载体对照植株和转TaWRKY1基因植株的表型比较。

图5为转空载体对照植株和转TaWRKY1基因植株在低温胁迫下的生长比较照片。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

小麦西峰20号种子购自国家种质库；植物双元表达载体pBI121购自Clonetech公司；野生型哥伦比亚生态型拟南芥(Col-0)的种子购自Arabidopsis BiologicalResource Center(ABRC))。

实施例1、基因的发现

在小麦EST数据库中进行BLAST检索，聚类到43个WRKY类基因片段，命名为TaWRKY1-43。其中26个基因的编码蛋白含有完整的WRKY和锌指结构域，另外17个基因的编码蛋白含有不完整的WRKY或锌指结构域。根据43个WRKY基因片段的序列设计43对引物，其中TaWRKY1所用的引物为：W1RTL：5’-TATTACAAATGCACACACCC-3’(序列5)，和W1RTR：5’-GTGGTCGCAGTAGGAATAG-3’(序列6)；以常规方法从分别经-4℃处理及未处理的三叶期小麦西峰20苗中提取总RNA，以RT-RCR方法测定43个基因的表达与胁迫处理的关系。筛选得到低温/ABA诱导的TaWRKY基因，取其中TaWRKY1基因作进一步研究。

提取小麦西峰20三叶期幼苗的总RNA，将RNA用逆转录酶合成cDNA。运用RACE(Rapidamplification of cDNA Ends)方法，克隆TaWRKY1基因。

引物序列设计如下：

TaWRKY1 5’GSP：5’-GATTGTGAGAACTCTTGTAGACTATCTCTG-3’，(序列7)

TaWRKY1 5’NGSP：5’-GGTTTGGAGGCGGCAAAGGGTGATTGTGAG-3’；(序列9)

TaWRKY1 3’GSP：5’-CGCTGTCCAATGAGATTGATAGAGCAACAC-3’，(序列8)

TaWRKY1 3’NGSP：5’-GATGTAGCTGATGTCTCGTCAACGCTGTCC-3’；(序列10)

5’和3’RACE包括两步扩增反应，需要通用引物(UPM)、巢式通用引物(NUP)、基因特异引物(GSP)、巢式基因特异引物(NGSP)。第一步扩增反应体系20μl：10μl 2×GC buffer I，0.4μl dNTP Mix(10mM)，0.2μl LA-Taq酶，2μl10×UPM(10μM)，6μl超纯水，1μl 5’-RACE第一链cDNA，，0.4μl GSP(10μM)，混匀，上面覆盖液体石蜡油。反应于PE9600型PCR仪上进行，其程序为94℃30sec；94℃10sec；65℃10sec、72℃3min，30个循环；72℃10min。PCR产物-20℃保存。第二步巢式反应体系20μl：10μl 2×GC buffer I，0.1μl LA-Taq酶，0.4μl dNTP Mix(10mM)，0.8μl NUP(10μM)，5.9μl超纯水，2μl第一步扩增产物，0.8μl NGSP(10μM)，混匀，上面覆盖液体石蜡油。整个反应于PE9600型PCR仪上进行，其程序为94℃30sec；94℃10sec；65℃10sec、72℃3min，30个循环；72℃10min。PCR产物-20℃保存。扩增片段送连接到PGEM T Vector或PMD 18-T Vector上送北京三博生物工程公司测序。将扩增片段序列与已知序列拼接得到全长序列，根据全长序列设计引物扩增全长片段，连接到PGEM-T Vector或PMD 18-T Vector上，进一步测序验证序列。进一步验证所用引物：W1VECTORL：5’-CGCGGATCCATGTGGGAAAATGGTAAAAGTG-3’(序列3)

W1VECTORR：5’-CGAGCTCCTATCTTTCCTTTCTTTGCATC-3’(序列4)。

以反转录得到的cDNA为模板，进行PCR扩增，对PCR产物进行0.8％琼脂糖凝胶电泳检测，得到分子量约为1kb的条带，与预期结果相符。用琼脂糖凝胶回收试剂盒(TIANGEN)回收该片段。将该回收片段与pGEM-T Easy(Promega)连接，参照Cohen等的方法，将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，根据pGEM-T Easy载体上的羧卞青霉素抗性标记筛选阳性克隆，得到含有回收片段的重组质粒。以该重组质粒载体上的T7和SP6启动子序列为引物对其进行核苷酸序列测定，测序结果表明扩增到的Ta WRKY1基因的核苷酸序列如序列表中序列1所示，由957个脱氧核糖核苷酸组成，其开放阅读框(ORF)为序列表中序列1的自5′末端第1至957位脱氧核糖核苷酸，编码氨基酸序列是序列表中序列2的蛋白质(记作蛋白TaWRKY1)。将含有序列表中序列1的自5′末端第1-957位脱氧核糖核苷酸的Ta WRKY1基因的重组载体命名为pTE-TaWRKY1。

实施例2、逆境胁迫处理下TaWRKY1基因的表达特征

将小麦西峰20号种子种在盆中，生长至三叶期后取幼苗进行如下胁迫处理：1)低温胁迫处理：将小麦幼苗移入4℃水溶液中，持续光照；2)外源ABA处理：将根部蛭石冲洗干净且生长一致的小麦苗的根浸入100μM ABA溶液中；光照培养，分别在上述各种处理后0、1、3、6、12和24小时后，采集叶片，迅速置于液氮，随后用于总RNA提取。

收集上述叶片1g在液氮中研碎，悬于4mol/L硫氢酸胍中，混合物用酸性苯酚、氯仿抽提，上清中加入无水乙醇沉淀得到总RNA。以序列3和序列4为探针，进行RT-PCR分析。

结果如图1所示，TaWRKY1基因的表达受低温(4℃)和100μM ABA处理的诱导。

实施例3、用TaWRKY1基因培育耐低温胁迫植物

1)TaWRKY1表达载体pBI121-TaWRKY1的构建

以生长至三叶期的小麦西峰20的叶片的总RNA反转录得到的cDNA为模板，用含有BamHI和ScaI接头序列的特异引物，进行PCR扩增；将扩增产物用限制性内切酶BamHI和ScaI双酶切，回收酶切产物，再用限制性内切酶BamHI和ScaI双酶切植物双元表达载体pBI 121，回收载体大片段，将两次酶切的产物进行连接，得到重组表达载体pBI121-TaWRKY1；将重组载体进行克隆测序，结果表明重组载体的结构正确，向载体中插入的基因的序列正确，基因TaWRKY1正向插入植物双元表达载体pBI121的CaMV 35S启动子之后的BamHI和ScaI酶切位点之间(图2)。

引物序列如下：

5’-CGCGGATCCATGTGGGAAAATGGTAAAAGTG-3’(序列3)

5’-CGAGCTCCTATCTTTCCTTTCTTTGCATC-3’(序列4)。

2)转TaWRKY1基因植株的获得和鉴定

载体转化的方法具体如文献(Clough-SJ，Bent-AF.Floral dip：a simplified method forAgrobacterium-mediated transformation ofArabidopsis thaliana.Plant-Journal.1998，16：6，735-743)中所述。将pBI121-TaWRKY1用电击法导入根癌农杆菌AGL1，得到重组农杆菌AGL1/pBI121-TaWRKY1。PCR鉴定后，用抽真空法将农杆菌转入野生型拟南芥Col-0。

将拟南芥Col-0种子在4℃条件下春化72h。用1/3×B₅营养液浸泡装有蛭石(vermiculite)的种植盆，播种后于23℃培养。待植株开花后，剪去其主枝顶端，促进侧枝发展。在剪枝后的4-6天内，准备进行农杆菌转化。将重组农杆菌AGL1/pBI121-TaWRKY1接种于5ml LB+50μg/ml rifampin+50μg/ml卡那霉素培养基中，摇菌过夜。第二天转瓶至1升LB液体培养基中，28℃培养至OD₆₀₀＝0.8左右。离心收集菌体，用1升转化缓冲液悬浮农杆菌。约300-400ml能转化2盆植株。将剪枝后4-6天的植株倒置于含转化菌悬液的玻璃瓶中，抽真空，维持0.05Mpa压力5-10min。

取出种植盆，侧放24h。然后将种植盆直立，培育植株至结实，收获成熟种子(T0代)。将干燥一周后的种子播种于含50μg/ml卡那霉素的0.5×MS上，每皿500粒左右。23℃培养。只有含外源片段的转基因植株才能在卡那霉素选择培养基上生长。长出的植株生长到6片真叶时，移至种植盆中生长，待成熟后分单株收取种子(T1代)。收取的T1代种子分单株同样在含卡那霉素的选择培养基上生长，分单株收取种子(T2代)。直至获得纯系。

按照上述方法制备转pBI121的T₀代转空载体对照植株，获得10个转pBI121的T₀代转空载体对照植株。

提取未进行任何转化的野生型植株、T₀代转空载体对照植株、转TaWRKY1基因T₀代植株的总RNA进行RT-PCR鉴定分析，引物如下：

5’-CGCGGATCCATGTGGGAAAATGGTAAAAGTG-3’(序列3)和

5’-CGAGCTCCTATCTTTCCTTTCTTTGCATC-3’(序列4)

结果表明，在24株转TaWRKY1基因的T₀代植株中，有16株检测出TaWRKY1基因的表达，而10株野生型和10株转空载体的对照植株均没有检测出目的基因的表达。将分子鉴定阳性的植株单株收种子，各单株种子分别播种，用卡那霉素继续筛选以观察T₁代的分离情况，如此重复直至T₃代获得遗传稳定的转基因株系。共获得12个稳定遗传的转基因株系。将T₀代转基因株系进行Northern杂交验证，所用探针为TaWRKY1基因(序列表中的序列1)。

结果表明，转TaWRKY1基因的T₀代植株中，TaWRKY1基因有高表达，而空载体对照植株则未能检出表达(图3)。图3中，Col-0表示转空载体植株，1、2、3、4、5、7、8、9、10、11、12表示转基因株系。泳道4、5、7对应的植株分别为T₀代转基因株系1-4、1-5和1-7的结果；转基因株系1-4、1-5和1-7中目的基因表达量较高但不同，取转基因株系1-4、1-5和1-7作表型分析。T₁代表示T₀代自交产生的种子及由它所长成的植株，T₂代表示T₁代自交产生的种子及由它所长成的植株，T₃代表示T₂代自交产生的种子及由它所长成的植株。经过自交和筛选，至T₃代获得上述1-4、1-5和1-7株系的纯系，进行表型分析。

3)转TaWRKY1基因植株耐低温性鉴定

用于实验的对照植株和转基因株系1-4、1-5和1-7的单株数均为30株。

将转基因株系1-4、1-5和1-7的种子与转空载体的对照植株的种子分别在相同的正常生长条件下进行培养，培养21天。结果如图4所示，表明，转TaWRKY1基因幼苗和成株期的表型与转空载体的对照没有明显差异。图4中，A表示对照和转基因株系幼苗表型；B显示了苗期莲座直径(n＝30)；C表示成株期的表型；D表示成株期的莲座直径(n＝24)。

生长状况相同的21天的转基因拟南芥幼苗经4℃处理16小时、-4℃处理4天、4℃处理24小时，然后置于23℃中继续培养20天，做如下统计。同时以经过相同处理的转空载体植株作为对照。

每次处理各样品30株，实验重复3次。

1)观察其恢复生长状况。结果如图5A所示。

2)统计植株的成活率；存活率的计算为重复3次，每次30株试验的平均数，然后计算标准离差。结果如图5B所示。

3)统计植株的抽薹率：

在每颗植株只抽一个薹的生长期进行统计抽薹率。

抽薹率＝已经抽薹的植株数目/所有实验植株数目。

结果如图5C所示。

4)统计抽薹高度：

抽薹高度：在每颗植株一般只抽一个薹时期进行测量。取平均数。

结果如图5D所示。

分析结果显示，转基因植株1-4、1-5和1-7的成活率依次为93.75％、80.2％、70.09％，均明显高于对照的39.59％；TaWRKY1转基因植株1-4、1-5和1-7的抽薹率依次为75％、67％、66.67％，也高于对照，而对照抽薹率约为16％；TaWRKY1转基因植株1-4、1-5和1-7的薹平均长度依次为7.65cm、7.89cm、3.85cm，而对照薹的平均长度约1.6cm。这些结果表明，TaWRKY1转基因植株的耐低温的性状获得了明显改善，TaWRKY1与耐低温性相关。此外图3表明，1-4中目的基因表达量最高，1-5次之而1-7最低，而转基因植株的成活率、抽薹率、薹平均长度也大体上与TaWRKY1在转基因株系中的表达水平相关。

序列表

<110>中国科学院遗传与发育生物学研究所

<120>植物耐逆性相关转录因子TaWRKY1及其编码基因与应用

<160>10

<210>1

<211>957

<212>DNA

<213>麦属小麦(Triticum aestivum)

<400>1

atgtgggaaa atggtaaaag tgagtgcatt caagacatgc aaggtgtcga gggaagacca 60

gctgctggcc ctcctgtatc tgcatatggt gatacatcta tcatggagtc ccaagatgta 120

gctgatgtct cgtcaacgct gtccaatgag attgatagag caacacaagg caccatttct 180

ttagactgtg atgtaggtga agatgagact gaatccaaaa gaaggaagct ggatgcttca 240

gctagtgtta ctattcctac tgcgaccacc accagttcaa ttgacatggt ggctgcagca 300

tcaagagctg tccgggagcc tcgtgttgtg gttcagacaa caagcgaggt tgacatcctt 360

gacgatggtt atcgctggcg caagtatggt cagaaggttg ttaaaggaaa cccaaatcca 420

aggagctact acaaatgtac ccaccagggc tgttcggtgc gcaagcacgt ggagagagcg 480

tcgcacgatc tgaaatccgt gatcacgaca tacgagggga agcacaacca tgaagttcca 540

gcagccagaa atagcgggaa cgcgggctct ggttccgtca gtgctccagc atcagcgcca 600

caggccaatc tctcacaccg caggcaagaa caagcgcaag gcagctatcc tcagtttggt 660

ggcgcgactc ccttcggttc cttcggcctc ccgccgagag gccatctggg agcggcaggc 720

aacttccact tcgggatggc cccttcaggc atgtcgatgc cgccgatgcc cgccgcccgt 780

catcctccat caatgatgca gggctacccg gggctcatga tgcaggaagg gcagatgaag 840

gcggagccag accagcagtc cgggttcgca gcgtcatcgg cttaccaaca gatgatgggc 900

aggcccccct tttggtcccc agatgtaaat aataggatgc aaagaaagga aagatag 957

<210>2

<211>318

<212>PRT

<213>麦属小麦(Triticum aestivum)

<400>2

Met Trp Glu Asn Gly Lys Ser Glu Cys Ile Gln Asp Met Gln Gly Val

1 5 10 15

Glu Gly Arg Pro Ala Ala Gly Pro Pro Val Ser Ala Tyr Gly Asp Thr

20 25 30

Ser Ile Met Glu Ser Gln Asp Val Ala Asp Val Ser Ser Thr Leu Ser

35 40 45

Asn Glu Ile Asp Arg Ala Thr Gln Gly Thr Ile Ser Leu Asp Cys Asp

50 55 60

Val Gly Glu Asp Glu Thr Glu Ser Lys Arg Arg Lys Leu Asp Ala Ser

65 70 75 80

Ala Ser Val Thr Ile Pro Thr Ala Thr Thr Thr Ser Ser Ile Asp Met

85 90 95

Val Ala Ala Ala Ser Arg Ala Val Arg Glu Pro Arg Val Val Val Gln

100 105 110

Thr Thr Ser Glu Val Asp Ile Leu Asp Asp Gly Tyr Arg Trp Arg Lys

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Val Val Lys Gly Asn Pro Asn Pro Arg Ser Tyr Tyr

130 135 140

Lys Cys Thr His Gln Gly Cys Ser Val Arg Lys His Val Glu Arg Ala

145 150 155 160

Ser His Asp Leu Lys Ser Val Ile Thr Thr Tyr Glu Gly Lys His Asn

165 170 175

His Glu Val Pro Ala Ala Arg Asn Ser Gly Asn Ala Gly Ser Gly Ser

180 185 190

Val Ser Ala Pro Ala Ser Ala Pro Gln Ala Asn Leu Ser His Arg Arg

195 200 205

Gln Glu Gln Ala Gln Gly Ser Tyr Pro Gln Phe Gly Gly Ala Thr Pro

210 215 220

Phe Gly Ser Phe Gly Leu Pro Pro Arg Gly His Leu Gly Ala Ala Gly

225 230 235 240

Asn Phe His Phe Gly Met Ala Pro Ser Gly Met Ser Met Pro Pro Met

245 250 255

Pro Ala Ala Arg His Pro Pro Ser Met Met Gln Gly Tyr Pro Gly Leu

260 265 270

Met Met Gln Glu Gly Gln Met Lys Ala Glu Pro Asp Gln Gln Ser Gly

275 280 285

Phe Ala Ala Ser Ser Ala Tyr Gln Gln Met Met Gly Arg Pro Pro Phe

290 295 300

Trp Ser Pro Asp Val Asn Asn Arg Met Gln Arg Lys Glu Arg

305 310 315

<210>3

<211>31

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>3

cgcggatcca tgtgggaaaa tggtaaaagt g 31

<210>4

<211>29

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>4

cgagctccta tctttccttt ctttgcatc 29

<210>5

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>5

tattacaaat gcacacaccc 20

<210>6

<211>19

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>6

gtggtcgcag taggaatag 19

<210>7

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>7

gattgtgaga actcttgtag actatctctg 30

<210>8

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>8

cgctgtccaa tgagattgat agagcaacac 30

<210>9

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>9

ggtttggagg cggcaaaggg tgattgtgag 30

<210>10

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>10

gatgtagctg atgtctcgtc aacgctgtcc 30

Claims

1.一种培育耐逆性植物的方法，是向植物中导入由序列表中序列2所示氨基酸序列组成的蛋白质的编码基因，培育，得到耐逆性植物；所述耐逆性为耐低温性；所述植物为小麦。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述由序列表中序列2所示氨基酸序列组成的蛋白质的编码基因为序列表中序列1所示的DNA分子。