CN101744878A - 丹参水溶性提取物、其制剂及用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种丹参水溶性提取物，其中总酚酸的重量百分含量为80-100％，其特征在于它含有丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸E，其含量百分含量分别为40％-90％、3.0-15％、2-10％、0.2-2.2％。本发明还提供了含有该提取物的制剂，以及该提取物。

Description

丹参水溶性提取物、其制剂及用途

技术领域

本发明涉及中药提取物、其制剂及用途领域，特别涉及丹参提取物、其制剂及用途领域。

背景技术

近年来，心脑血管疾病逐年增加，已成为危害人类健康的第一杀手。寻找和研制有效的心血管疾病治疗药物已经成为药物研究领域的热点问题。传统中药因其疗效好、副作用小，得到越来越多的关注，其中，研究比较多的是丹参及其制剂。丹参是唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)的干燥根及根茎，是传统的活血化淤中药之一，有长期的临床应用基础。丹参注射液是临床上治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、缺血性中风等的常用药物，但现有制剂因有效成分不明确，质量控制指标不严格等，导致临床疗效不稳定，不良反应时有发生，不符合中药现代化和国际化的要求。

发明内容

本发明提供了一种组分清楚、药效明显且刺激作用的丹参水溶性提取物。

本发明述的提取物，其中总酚酸的重量百分含量为80-100％，其特征在于它含有丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸E，其含量百分含量分别为40％-90％％、3.0-15％、2-10％、0.2-2.2％。本发明的提取物，其优选为其中总酚酸的重量百分含量为80-100％，其特征在于它含有丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸E，其含量百分含量分别为45％-80％％、3.0-12％、2-8％、0.2-2.2％。本发明的提取物，更优选为其中总酚酸的重量百分含量为80-96％，其特征在于它含有丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸E，其含量百分含量分别为45-70％、3.0-6.0％、2.3-5.0％、0.2-2.2％。

本发明的提取物，是按照包括如下步骤的方法制备的：

(1)丹参用水或含水乙醇提取；

(2)提取液在除去乙醇后经聚酰胺层析或非极性或弱极性大孔树脂层析或聚酰胺与大孔树脂组合进行纯化。

优选的方法包括如下步骤：

(1)丹参用含水乙醇，提取液浓缩至无醇；

(2)提取物经过聚酰胺层析，用水或30％以下的乙醇洗去杂质，以30-100％乙醇或0.01-0.5％碳酸氢钠或0.01-0.5％碳酸钠洗脱，收集洗脱液，调节pH值不高于5.5，通过大孔树脂柱，水洗或20％以下乙醇洗去杂质，30-100％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得。

最优选的方法包括如下步骤：

(1)丹参用浓度20％-90％乙醇提取，提取液浓缩至无醇；

(2)提取物经过聚酰胺层析，用水或30％以下的乙醇洗去杂质，以30-95％乙醇或0.05-0.3％碳酸氢钠或0.01-0.3％碳酸钠洗脱，收集洗脱液，调pH1-5.5，通过弱极性或非极性大孔树脂柱，水洗或20％以下乙醇洗去杂质，30-95％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得。

还提供用本发明的中药有效组分作为药物活性成分制备成的药物组合物，本发明的药物组合物，包括有效组分，根据需要该组合物还可以加入药物可接受的载体。

本发明的组合物，是单位剂量的药物制剂形式，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂每袋等。

本发明的组合物其中的有效组分，其在制剂中所占重量百分比可以是0.1-99.9％，其余为药物可接受的载体。

本发明的组合物，通过将上述有效组分和药物可接受的载体混合制备得到。

本发明的组合物，其药物制剂形式可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的制剂，优选的是口服剂型，如：胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等。

本发明的组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。

适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。

可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。

口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。

对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。

本发明的组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

本发明的组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量，可每日服三次，每次1-20剂，如：1-20袋或粒或片。

本发明还提供了上述丹参水溶性提取物在制备治疗心脑血管疾病中的应用。其中所述的心脑血管疾病可以是脑缺血性疾病，特别是脑梗塞，它能缩小脑梗塞面积，减轻脑梗塞后的脑功能障碍，改善学习记忆功能障碍，因此可用于脑梗塞后遗症，特还可以减轻脑水肿。所述的心脑血管疾病还可以是高凝血状态。

药效试验表明，上述丹参水溶性提取物对脑缺血有很好的治疗作用，能减少脑梗塞面积、减轻脑水肿、减轻脑功能障碍、改善学习记忆功能障碍；另外，丹参水溶性提取物还有明显的抗血栓和抗血小板聚集作用。

药效试验

本发明的试验所用的丹参水溶性提取物都是采用实施例3的方法制备。

药效试验1：对脑缺血的治疗作用

1.1试验目的

观察权利要求所述丹参提取物对阻断大脑中动脉造成的大鼠局灶性脑缺血的神经功能症状、脑梗塞面积及脑含水量的影响。

1.2试验材料

1.2.1动物

Wistar雄性大鼠，体重280-330克。

合格证号：医动字第01-3008号。

1.2.2仪器

KW65-3A型高频电刀由北京医用电子仪器厂生产；SXP-1B型手术显微镜为上海医用光学仪器厂产品；恒温水浴箱为产品；P/G2003-培养/干燥箱由重庆试验设备厂生产。

1.2.3药品与试剂

丹参水溶性提取物：批号20021008

丹参水溶性提取物粉针剂：批号20021201，(每135mg含丹参水溶性提取物100mg)复方丹参注射液为黄山天目药业股份有限公司产品，批号：990506。

四氮唑兰(TTC)由中国人民解放军军事医学科学院生产，化学纯，批号：870401。

1.2.4被测药物配制方法

丹参水溶性提取物粉针剂，丹参水溶性提取物用灭菌生理盐水配成所需浓度。

1.2.5被测药物剂量及给药途径

丹参水溶性提取物粉针剂27、13.5、6.75mg/Kg，丹参水溶性提取物20、10、5mg/Kg复方丹参注射液2、1g/Kg，均由舌下静脉注射。

1.2.6试验组的设置

采用雄性Wistar大鼠，随机分为9组：假手术组，对照组(iv生理盐水)，丹参水溶性提取物粉针剂27、13.5、6.75mg/Kg 3组，丹参水溶性提取物(981008)20、10、5mg/Kg3组，及复方丹参注射液2、1g/Kg 2组。

1.2.7被测药物的保存方法

临用时稀释，4℃冰箱保存，连续使用3天。

1.3试验方法

1.3.1大鼠局灶性脑缺血试验

大鼠经水合氯醛350mg/Kg ip麻醉后，左侧卧位固定于鼠板上，于手术显微镜下沿外耳道与眼眦连线中点切开皮肤，暴露出颧弓，用小牵张器将鳞状骨和下颌骨间距撑开，与颅骨底开一1cm×1cm的骨窗，撕开硬脑膜，暴露出大脑中动脉，用高频电刀电凝阻断一侧大脑中动脉造成局部脑缺血，逐层缝合切口。术中、术后室温严格控制在24～25℃。

除假手术组外，其他各组均阻断一侧大脑中动脉。在阻断一侧大脑中动脉30min后，由舌下静脉给药，24h后，参照文献方法判断神经症状，然后断头取脑，测定脑含水量。

另取Wistar雄性大鼠，分组及给药同前，在阻断一侧大脑中动脉后24h，断头取脑，参照文献方法测定脑梗塞面积。

1.3.2脑梗塞面积的测定

将剥离完整的大脑放入4℃冰箱内盛有生理盐水的小杯中，10min后，去除嗅球、小脑及低位脑干，沿冠状面切为5片，立即放入TTC染色液中，避光在37℃水浴中温孵30min。取出脑片放入10％福尔马林液中固定。正常组织为玫瑰红色，缺血组织呈白色。用重量求积法测定梗塞面积，计算梗塞区域占全脑面积的百分比。

1.3.3神经症状评分判断标准

a.提起大鼠尾部，观察两前肢情况，正常动物两前肢向前伸直并且对称。手术后，脑缺血半球的对侧前肢内收，肩内旋。观察其程度不同评为0-4分。

b.牵拉两肢，正常大鼠肌力对称，手术后脑缺血半球的对侧前肢肌无力，观察其程度不同评为0-3分。

c.推两肩，正常大鼠为双侧肩阻力对称，手术后脑缺血半球的对侧肩阻力下降，观察其程度不同评为0-3分。

根据以上标准，满分为10分，分数越高，说明脑功能障碍越严重。以此作为脑功能障碍的指标。

1.3.4脑含水量的测定

用干湿法测定脑含水量。动物处死后，取出全脑，去除嗅脑，低位脑干及小脑，立即称取脑湿重，置120℃烘箱中烘烤18h至衡重后称脑干重。脑含水量公式为：脑含水量(％)＝(脑湿重-脑干重)/脑湿重*100％

1.4实验结果

1.4.1丹参水溶性提取物针剂及丹参水溶性提取物对MCAO大鼠脑梗塞面积的影响如表1所示，丹参水溶性提取物20、10mg/Kg，丹参水溶性提取物粉针剂27、13.5mg/Kgiv，可显著缩小大鼠MCAO 24h后的脑梗塞面积，与对照组比较，有显著差异。且二者作用相当，无显著性差别。丹参水溶性提取物10mg/Kg、丹参水溶性提取物粉针剂13.5mg/Kg与复方丹参注射液2g/Kg作用相当。

表1.丹参水溶性提取物及丹参水溶性提取物粉针剂iv对MCAO大鼠脑梗塞面积的影响

*p＜0.05，**p＜0.01与对照组比较

n＝10

1.4.2丹参水溶性提取物及丹参水溶性提取物粉针剂对MCAO大鼠神经功能症状的影响

对照组大鼠麻醉清醒后即有偏瘫样症状出现，主要表现为手术对侧前肢内收、肩内旋、前肢肌张力下降，向手术对侧推动时抵抗阻力下降。丹参水溶性提取物20、10mg/Kg，丹参水溶性提取物粉针剂27、13.5mg/Kg，可显著改善神经功能症状，与对照组比较，有显著差异，且二者作用相当，无显著性差别。丹参水溶性提取物10mg/Kg、丹参水溶性提取物粉针剂13.5mg/Kg与复方丹参注射液2g/Kg作用相当。

表2.丹参水溶性提取物针剂及丹参水溶性提取物对MCAO大鼠神经功能症状的影响

*p＜0.05，**p＜0.01与对照组比较

n＝10

1.4.3丹参水溶性提取物及丹参水溶性提取物粉针剂对MCAO大鼠脑含水量的影响

如表3所示，阻断大鼠一侧中动脉24h后，对照组的脑含水量为82.82±1.29，而假手术组的脑含水量为80.91±0.79，二者相比有显著差别，提示阻断一侧中动脉24h后，阻断侧脑半球形成了严重水肿。丹参水溶性提取物20、10mg/Kg，丹参水溶性提取物粉针剂27、13.5mg/Kg，可显著减轻缺血性脑水肿，且二者作用相当，无显著性差别。丹参水溶性提取物10mg/Kg、丹参水溶性提取物粉针剂13.5mg/Kg与复方丹参注射液注射2g/Kg作用相当。

表3.丹参水溶性提取物针剂及丹参水溶性提取物iv对MCAO大鼠脑含水量的影响

*p＜0.05，**p＜0.01与对照组比较

n＝10

1.5实验结论

1.5.1用电烧灼法阻断大鼠一侧大脑中动脉(MCAO)造成大鼠局部脑缺血，且在阻断侧脑半球形成了严重水肿。

1.5.2丹参水溶性提取物20、10mg/Kg，丹参水溶性提取物粉针剂27、13.5mg/Kgiv，可显著改善神功能症状，与对照组比较，有显著差异，丹参水溶性提取物与丹参水溶性提取物针剂二者作用相当，无显著差别。丹参水溶性提取物10mg/Kg，丹参水溶性提取物粉针剂13.5mg/Kg与复方丹参注射液2g/Kg作用相当。

1.5.3丹参水溶性提取物20、10mg/Kg，丹参水溶性提取物粉针剂27、13.5mg/Kgiv，可显著缩小大鼠MCAO 24h后的脑梗塞面积，与对照组比较，有显著差异，且二者作用相当，无显著性差别。丹参水溶性提取物10mg/Kg、丹参水溶性提取物粉针剂13.5mg/Kg与复方丹参注射液2g/Kg作用相当。

1.5.4丹参水溶性提取物20、10mg/Kg，丹参水溶性提取物粉针剂27、13.5mg/Kgiv，可显著减轻缺血性脑水肿，而其小剂量作用不明显；丹参水溶性提取物与丹参水溶性提取物粉针剂二者作用相当；丹参水溶性提取物20、10mg/Kg，丹参水溶性提取物粉针剂13.5mg/Kg、与复方丹参注射液2g/Kg作用相当。

药效试验2丹参水溶性提取物对凝血系统功能的影响

2.1动物：昆明种雄性小鼠，24-28克，购自中国医学科学院动物中心

2.2药物：丹参水溶性提取物：

分别配成3mg/10ml，6mg/10ml，10mg/10ml

复方丹参注射液：

配成200mg/10ml，2000mg/10ml

以上药液均按0.1ml/10g尾静脉注射

2.3方法：

将小鼠随机分为六组，分别尾静脉注射生理盐水、复方丹参注射液200mg/kg、2000mg/kg，丹参水溶性提取物3mg/kg、6mg/kg、10mg/kg；半小时后将小鼠用摘眼球法取血，滴血在载玻片上测定凝血时间，其余血用3.8％柠檬酸钠抗凝送检测定：血小板、凝血酶原及纤维蛋白原。

2.4结果：

静脉注射复方丹参注射液200mg/kg、2000mg/kg，丹参水溶性提取物3mg/kg、6mg/kg、10mg/kg对凝血时间、血小板、凝血酶原及纤维蛋白原均无影响。

静脉注射丹参水溶性提取物对小鼠凝血时间的影响(n＝10)

静脉注射丹参水溶性提取物对小鼠血小板计数的影响(n＝5)

静脉注射丹参水溶性提取物对小鼠凝血酶原的影响(n＝5)

静脉注射丹参水溶性提取物对小鼠纤维蛋白原的影响(n＝5)

2.5小结：

丹参水溶性提取物有明显的抗血栓和抗血小板聚集作用，但对凝血系统没有影响；复方丹参注射液即无抗血栓作用也不影响凝血系统功能。

药效试验3丹参水溶性提取物对脑缺血再灌注小鼠学习记忆功能障碍的改善作用

3.1试验目的 研究丹参水溶性提取物对缺血再灌注小鼠的学习记忆功能障碍的改善作用和耐缺氧能力的影响。

3.2试验材料

3.2.1受试药物 丹参水溶性提取物，用生理盐水配成浓度为3mg/kg、6mg/kg和10mg/kg的溶液。复方丹参注射液，北京第四制药厂生产，批号990101.

3.2.2动物 昆明种小鼠，♂，体重23±4g，共84只，中国医学科学院试验动物中心提供。合格证：医动字第01-3008

3.2.3实验仪器 小鼠跳台实验自动记录仪，中国医学科学院仪电室制造.

3.3试验方法 小鼠随机分为七组：假手术组，对照组(iv等容量生理盐水)，复方丹参注射液组(分别iv丹参注射液50mg/kg，200mg/kg，2g/kg)，丹参水溶性提取物组(分别iv总丹参水溶性提取物3mg/kg，6mg/kg，10mg/kg)，每组12只，以戊巴比妥钠(60mg/kg，ig)麻醉后，仰卧位固定。颈正中切口，分离双侧颈总动脉，并穿以零号丝线。双侧颈总动脉阻断血流10min，然后恢复血流10min，如此重复三次，缝合皮肤，术后小鼠正常饲养^[1]。假手术组只分离双侧颈总动脉。缺血再灌注后10min，尾静脉注射药物，每天一次，连续三天。第二天给药半小时后进行跳台实验^[2]。将待测小鼠放入跳台仪中，适应环境3min，然后向底部栅板通电，观察小鼠跳上高台时间(反应时间)和5min内小鼠由高台跳下受到电击的次数(训练期错误次数)。24小时后，将小鼠放于实验仪高台上，底部栅板同时通电，记录小鼠跳下高台的时间(潜伏期)，和5min内受到电击次数(重测期错误次数)。缺血再灌注小鼠分组与给药方法同上，采用断头法完全中断全脑血液供应，观察小鼠全脑停止供血后张口呼吸持续时间。

3.4试验结果 上述结果用X±S表示，组间比较用t检验。

3.4.1丹参水溶性提取物iv对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

跳台试验主要是观察训练后24小时记忆获得障碍的影响，训练期的反应时间和错误次数仅供参考.如表1示，与对照组相比，丹参水溶性提取物3mg/kg可减少反应时间(P＜0.05)，延长潜伏期(P＜0.05)，减少重测期错误次数(P＜0.01)；丹参水溶性提取物6mg/kg可延长潜伏期(P＜0.01)，减少重测期错误次数(P＜0.01)；丹参水溶性提取物10mg/kg可减少反应时间(P＜0.001)，延长潜伏期(P＜0.01)，减少测试期和重测期错误次数(分别为P＜0.05，P＜0.01)。复方丹参注射液50mg/kg可减少反应时间(P＜0.05)，减少训练期错误次数(P＜0.05)，复方丹参注射液200mg/kg可延长潜伏期(P＜0.01)，减少训练期和重测期错误次数(P＜0.05，p＜0.01)，复方丹参注射液2g/kg可减少反应时间(P＜0.001)，可延长潜伏期(P＜0.001)，减少训练期和重测期错误次数(分别为p＜0.001，p＜0.01)，

表1丹参水溶性提取物和复方丹参注射液iv对小鼠脑缺血再灌注损伤引起的记忆障碍的保护作用

*P＜0.05  **P＜0.01  ***P＜0.001  VS.对照组

3.4.2丹参水溶性提取物iv对脑缺血再灌注小鼠的耐缺氧能力的影响

如表2示，与对照组相比，丹参水溶性提取物3mg/kg，6mg/kg，10mg/kg和复方丹参注射液50mg/kg，200mg/kg，2g/kg皆可显著提高脑缺血再灌注小鼠的耐缺氧能力(p＜0.001).

表2丹参水溶性提取物和复方丹参注射液iv对脑缺血再灌注小鼠耐缺氧能力的影响

*P＜0.05  ***P＜0.001 VS.对照组

3.5试验结论：丹参水溶性提取物3mg/kg，6mg/kg，10mg/kg可改善脑缺血再灌注小鼠的学习记忆，显著提高其耐缺氧能力，丹参水溶性提取物10mg/kg的作用与复方丹参注射液2g/kg的作用相当。

药效试验4丹参水溶性提取物对大鼠中脑动脉血栓的实验研究

4.1试验目的：观察丹参水溶性提取物对大鼠大脑中动脉血栓所致局部脑缺血性损伤的保护作用

4.2试验材料

4.2.1受试药物 丹参水溶性提取物，，批号981008，用生理盐水配成所需浓度；复方丹参注射液，北京第四制药厂生产，批号990101，以生理盐水稀释至所需浓度。

4.2.2动物 雄性Wistar大鼠，二级，体重240-260g，共64只，由中国医学科学院实验动物中心提供，合格证：医动字第01-3008

4.2.3实验仪器：SXP型手术显微镜为上海医用光学仪器厂产品；恒温水浴振荡器为江苏省太仓县医疗器械厂生产，SHZ-22型；石蜡切片机为美国AO公司。

4.3试验方法

4.3.1大鼠大脑中动脉血栓模型

大鼠以12％水合氯醛350mg/kg ip.麻醉后，置于鼠板上，于手术显微镜下延右侧外耳道与眼眦连线中点切开皮肤，暴露出颧弓，用小牵张器将磷状骨和下颌骨间距撑开，于颅底开一1cm×1cm的骨窗，撕开硬脑膜，暴露出右侧位于嗅束和大脑下静脉之间的一段大脑中动脉，置一小片塑料薄膜保护血管周围脑组织，将吸有50％三氯化铁溶液(1mol/L盐酸)10μL的小片定量滤纸(2×2mm)敷在此段大脑中动脉上，30min后取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，回笼饲养。术中术后室温均严格控制在24-25℃。

4.3.2动物分组

取Wistar雄性大鼠，随机分为8组，每组动物8只，假手术组(生理盐水)，模型组(生理盐水)，丹参水溶性提取物组(丹参水溶性提取物3、6、及10mg/kg)及复方丹参注射液组(丹参50、200mg/kg和2000mg/kg)假手术组除在大脑中动脉敷生理盐水外，其余手术操作同模型组。各组在术后30分钟由舌下静脉给药一次，24小时后参照文献方法判断神经症状，然后断头取脑，测定脑梗塞面积。

4.3.3神经症状的评分

手术后24小时对每只动物进行评分，根据其症状严重程度分3级共10分。具体方法如下(表1)：

表1.神经症状评分

根据以上标准，满分为10分，分数越高，说明脑功能障碍越严重。

4.3.4脑梗塞面积的测定

动物经神经症状评分后，断头取脑。剔除嗅脑、低位脑干及小脑，剩余部分在冰上沿冠状面切成厚度基本相同的5片，于37℃TTC染料中温浴30分钟，正常脑组织呈玫瑰红色，梗塞区呈白色。然后将脑片置于10％的甲醛中固定，将白色组织仔细取下称重，以梗塞组织重量占总脑重量的百分比作为梗塞面积。

4.3.5脑组织形态学观察

动物于术后24小时，断头取材，取大脑中动脉血栓形成部位用4％多聚甲醛中固定，乙醇脱水，石蜡包埋，切片7μm，HE染色，光学显微镜下观察。

4.4试验结果

上述结果用X±S表示，组间比较用t检验。

4.4.1丹参水溶性提取物对行为缺陷程度的影响

丹参水溶性提取物6、10mg/kg可明显减轻大鼠脑血栓24h后的神经症状，与模型组比较有明显差异(P＜0.01，P＜0.001)。而复方丹参注射液则无明显作用(P＞0.05)。(表2)

表2.丹参水溶性提取物对大鼠中动脉血栓模型的大鼠神经症状的影响(n＝8，x±s)

与模型组比较：**P＜0.01，***P＜0.001

4.4.2丹参水溶性提取物对脑梗塞范围的影响

如表3所示，丹参水溶性提取物6、10mg/kg可明显缩小大鼠脑栓塞24小时后的脑梗塞面积，与模型组比较有显著差异，丹参水溶性提取物剂量减至3mg/kg则无明显作用(P＞0.05)。复方丹参注射液50、200和2000mg/kg均无明显作用(P＞0.05)。(表3)

表3.丹参水溶性提取物对大脑中动脉血栓模型的大鼠脑梗塞面积的影响(n＝8，x±s)

与模型组比较：**P＜0.01，***P＜0.001

4.4.3丹参水溶性提取物对脑组织形态学变化的影响

模型组大鼠在手术24小时后，肉眼观察病灶大脑中动脉皮层供血区苍白，脑表面血管较对侧充血，受损段大脑中动脉呈暗紫色，丹参水溶性提取物组6、10mg/kg大鼠经大脑中动脉血栓形成24小时后，病灶侧脑表面未呈现明显的苍白、无光，受损段大脑中动脉较模型组红润。光镜下观察，模型组大脑中动脉内充满血栓(图1)，丹参水溶性提取物组6、10mg/kg脉血管内血栓减少，大剂量组作用更为明显(图5)。复方丹参注射液各组与模型组比较未见明显差别(图6，7，8)。

4.5试验结论

本实验用三氯化铁局部涂抹损伤血管，从脑梗塞范围和行为障碍为观察指标判断，形成了大鼠大脑中动脉血栓模型。丹参水溶性提取物6、10mg/kg于术后30分钟静脉注射，可明显缩小脑血栓形成24小时后的脑梗塞范围，改善行为障碍。脑组织病理形态观察中，丹参水溶性提取物6，10mg/kg组动物大脑中动脉内血栓减少，大剂量组作用更为明显。复方丹参注射液50、200和2000mg/kg均无明显作用。说明丹参水溶性提取物可减轻脑血栓形成所致的脑缺血性损伤，为临床治疗脑血栓提供了实验依据。

药效试验5丹参水溶性提取物对大脑中动脉合并同侧颈总动脉结扎大鼠皮层血流量的影响

5.1实验目的

观察丹参水溶性提取物对脑缺血大鼠皮层血流量的影响。

5.2实验材料

5.2.1仪器：lS-3型组织血流仪，北京立科技术公司生产；大鼠脑立体定位仪，西北光学仪器厂生产。

5.2.2药品：复方丹参注射液，中国黄山天目药业有限公司生产，批号990506；丹参水溶性提取物，批号981008

5.2.3动物：Wistar大鼠，雌雄各半，体重180-200克，由中国医学科学院动物所实验动物繁育厂提供，合格证编号：医动字第01-3008号。

5.3实验方法

5.3.1大鼠脑缺血模型：

大鼠用25％乌拉坦(1250mg/kg)腹腔注射麻醉，切开颈正中皮肤，分离右侧颈总动脉，在动脉下埋线并打活结，以备结扎。在右侧眼眶后皮肤作一个1.5cm长的切口，剥离并切除颞肌，暴露颞鳞骨，在颞鳞骨接缝处用牙科钻作直径2.5mm的骨窗，暴露大脑中动脉主干，以备凝闭。切开颅顶皮肤，在右侧颅顶前囟中心后1mm，旁开2mm处用牙科钻作直径2.5mm骨窗，以备插测量电极；分离颈后皮肤，以备插参比电极。

5.3.2分组及给药：

实验共分7组，分别是假手术组，模型组，复方丹参注射液0.2g/kg及2g/kg，丹参水溶性提取物3mg/kg，6mg/kg及10mg/kg组。所有药物均用生理盐水溶解，给药途径为舌下静脉注射，给药体积为2ml/kg体重。药物于大脑中动脉凝闭及颈总动脉结扎后30分钟时给入，其中模型及假手术组给予相同体积的生理盐水。

5.3.3测定过程：

将大鼠固定于脑立体定位仪，参比电极置于颈背部皮下，测量电极通过颅顶骨窗置于皮层下0.8mm，测定正常血流，然后将大鼠颈总动脉结扎，并将大脑中动脉凝闭，30分钟后舌下静脉给药，分别于给药后15分钟及30分钟测定血流。

5.3.4结果处理：为排除个体差异计算相对血流，结果用组间比较，t检验。

相对血流＝(结扎后血流/结扎前血流)×100％。

5.4实验结果

结果见表1

表1丹参水溶性提取物静脉注射对大脑中动脉凝闭合并同侧颈总动脉结扎大鼠皮层血流量的影响

注：与模型组相比，*p＜0.05，**p＜0.01

结果显示，单侧大脑中动脉凝闭合并同侧颈总动脉结扎后缺血区皮层血流明显减少(p＜0.01)，丹参水溶性提取物6mg/kg及10mg/kg组皮层血流明显恢复(p＜0.05)，丹参水溶性提取物3mg/kg组血流有一定程度恢复，但与模型组比较无显著差异(p＞0.05)，结果提示丹参水溶性提取物有改善缺血区皮层血流作用。

5.5试验结论

本实验采用单侧大脑中动脉凝闭合并同侧颈总动脉结扎造成大鼠局灶脑缺血，采用氢气清除法测定缺血前后中动脉供血区血流变化，并观察丹参水溶性提取物的作用，结果发现，血管被凝闭及结扎后皮层血流明显减少，约为正常值的50％左右，并且随时间有进一步下降趋势，舌下静脉给予丹参水溶性提取物6mg/kg及10mg/kg能明显提高缺血区皮层血流，使其下降的幅度明显降低。表明丹参水溶性提取物能改善脑缺血区血流供应。

药效试验6丹参水溶性提取物对血小板聚集功能的影响

6.1试验目的 研究丹参水溶性提取物对血小板聚集功能的影响。

6.2试验材料

6.2.1受试药物 丹参水溶性提取物，用生理盐水配成浓度为3mg/kg、6mg/kg和10mg/kg的溶液。复方丹参注射液，北京第四制药厂生产，批号990101。胶原，取剃毛后的一块大鼠皮肤，剥离干净，剪碎，按湿重每0.1g加入1ml生理盐水，磨成匀浆，以3000转/min离心10min，吸取上清液，放置冰箱(4℃)备用.ADP，Sigma，用0.1M PBS配成0.5mM的溶液。花生四烯酸(AA)，Fluka，瑞士，批号287300，先用少量无水乙醇溶解，再加入等当量Na2CO3，用0.1M PBS配成32.8mM的溶液。

6.2.2动物 Wistar大鼠，♂，体重180～320g，中国医学科学院实验动物中心提供，合格证：医动字第01-3008。

6.2.3实验仪器 血小板聚集仪，NKK HEMA TRACER1，日本。

6.3试验方法

6.3.1体外给药实验：用1％硅油硅化搅拌棒、试管、离心管等。大鼠用12％水合氯醛麻醉(360mg/kg)，颈动脉取血，每ml血加10％抗凝剂(3.8％枸橼酸钠)，1100转/min，离心5min，连续离心两次，吸出上层合并即PRP。余下的再以3000转/min离心10min，上层即PPP。用PPP稀释PRP，PRP∶PPP＝3∶1，用PRP调100％，PPP调零。每管加入160μl PRP，加入20μl生理盐水或药物，温育5min，再加入诱导剂(ADP为5μl，胶原和花生四烯酸为20μl)，按比浊法测定血小板聚集性。

6.3.2体内给药实验：将大鼠随机分为6组：对照组，舌下静脉注射等容量生理盐水；丹参水溶性提取物组，分别舌下静脉注射丹参水溶性提取物3mg/kg、6mg/kg和10mg/kg；复方丹参注射液组，分别舌下静脉注射复方丹参注射液200mg/kg和2g/kg。大鼠麻醉后，给予不同剂量的药物，半小时后分离PRP和PPP，方法同上。用PPP稀释PRP，使计数达3×10¹¹个血小板/L。每管加入160μl PRP，加入20μl生理盐水，温育5min，再加入诱导剂(ADP为5μl，胶原为20μl)，测定血小板聚集性。

6.4试验结果

上述结果用X±S表示，组间比较用t检验。

6.4.1丹参水溶性提取物体外给药对血小板聚集的影响

丹参水溶性提取物可抑制胶原诱导的血小板聚集，拟合方程为Y＝-235.96X+82.341，IC50＝0.22mg/ml，丹参水溶性提取物可抑制ADP诱导的血小板聚集，拟合方程为Y＝-17.904X+74.138，IC50＝2.30mg/ml，丹参水溶性提取物可抑制AA诱导的血小板聚集，拟合方程为Y＝-15.355X+94.521，IC50＝3.65mg/kg(见附图1、2和3)。

表1丹参水溶性提取物体外给药对血小板聚集的影响(X±S，n＝3-4)

*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001 VS.对照组^▲n＝3 ^▲▲n＝4(动物数)复方丹参：复方丹参注射液。

6.4.2丹参水溶性提取物体内给药对血小板聚集的影响

如表所示，丹参水溶性提取物6mg/kg、10mg/kg可完全抑制胶原诱导的血小板聚集(P＜0.001)，丹参水溶性提取物10mg/kg可显著地抑制ADP诱导的血小板聚集(P＜0.001)。复方丹参注射液200mg/kg和2g/kg对胶原和ADP诱导的血小板聚集无抑制作用(P＞0.05)。

表：丹参水溶性提取物对胶原和ADP诱导的血小板聚集的影响(X±S，n＝8)

***P＜0.001 VS.对照组

6.5试验结论 丹参水溶性提取物体外给药可抑制胶原、ADP和花生四烯酸(AA)诱导的血小板聚集，体内给药，丹参水溶性提取物6mg/kg可完全抑制胶原诱导的血小板聚集，10mg/kg可显著抑制ADP诱导的血小板聚集；复方丹参注射液200mg/kg和2g/kg体内给药对胶原和ADP诱导的血小板聚集功能无抑制作用。

6丹参水溶性提取物粉针剂的过敏试验

6.1试验目的

为检查丹参水溶性提取物粉针剂是否会产生过敏作用，按《注射剂研制指导原则及有关规定汇编》的附件1要求，进行了如下豚鼠过敏试验：

6.2试验材料

6.2.1药物：丹参水溶性提取物粉针剂，100mg/支，，各以生理盐水配成应用液，浓度均为2mg/ml。

6.2.2动物：豚鼠，购自军事医学科学院，雌雄均有健康

6.3试验方法

各批号取体重250-300克的健康豚鼠雌雄各三只，连续3次，间日腹腔注射一次丹参水溶性提取物粉针剂应用液0.5ml/只。第14天和第21天时给予静脉注射相同批号的丹参水溶性提取物粉针剂应用液1ml/只在注射后15分钟内均不得出现过敏反应。如有竖毛、呼吸困难、喷嚏、干呕或咳嗽三声等现象中的两种或两种以上者，或有罗音、抽搐、虚脱或死亡现象之一者，应判为阳性。

6.4试验结果

本实验三种批号981201-1，981201 symbol 151\f″Times New Roman″2，981202-1连续3次，间日腹腔注射一次丹参水溶性提取物粉针剂应用液0.5ml/只，在第14天时给予豚鼠股静脉注射浓度为2mg/ml丹参水溶性提取物粉针剂1ml/只，同时观察动物有无过敏反应，观察30分钟，未见豚鼠发生竖毛，呼吸困难，喷嚏，干呕或咳嗽三声；罗音，抽搐，虚脱或死亡现象，以上三种批号无过敏反应。

本实验三种批号981201-1，981201-2，981202-1连续3次，间日腹腔注射一次丹参水溶性提取物粉针剂应用液0.5ml/只，在第21天时给予豚鼠股静脉注射浓度为2mg/ml丹参水溶性提取物粉针剂1ml/只，同时观察动物有无过敏反应，观察30分钟，未见豚鼠发生竖毛，呼吸困难，喷嚏，干呕或咳嗽三声；罗音，抽搐，虚脱或死亡现象，以上三种批号无过敏反应。

6.5试验结论：以上三批药物均未发现过敏反应。

7丹参水溶性提取物刺激性试验

7.1试验材料

7.1.1.1试验样品：丹参水溶性提取物：批号：20060601、20060801、20061101-2天津天士力之骄药业有限公司生产

氯化钠注射液：天津天安药业股份有限公司 批号：200605241

7.1.1.2试验动物：家兔北京科宇动物养殖中心许可证号：SCXK(京)2007-00037.2肉眼观察法

7.2.1肌肉刺激性：

7.2.1.1试验方法：取体重2公斤以上健康家兔2只，雌者无孕，分别在其左右两腿股四头肌内以无菌操作方法注射供试品溶液(1支注射用丹参总酚酸(冻干)溶解到250ml0.9％氯化钠注射液中)1ml，48小时后，处死家兔，解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射给药部位局部肌肉反应情况，如充血、红肿、变性、坏死等。根据注射部位肌肉的刺激反应，按下表换算成相应的反应分值。

7.2.1.2试验结果见下表：

7.2.2血管刺激性

7.1.2.2.1试验方法：取体重2.5～3.0kg健康、两耳无损的家兔2只，雌兔无孕，每只家兔每日一侧耳缘静脉滴注供试品溶液(1支注射用丹参总酚酸(冻干)溶解到250ml 0.9％氯化钠注射液中)40ml(滴速不超过40滴/min)，另一侧为阴性对照，给予同等体积生理盐水，连续给药七次。肉眼观察：每天给药前以及最后一次给药后72小时对动物和注射部位进行肉眼观察：血管及周围组织应无异常变化，应无充血、节结、水肿现象，并与生理盐水侧对照。最后一次给药后72小时后将2只动物处死，做组织学检查。应无明显病理变化。

7.2.2.1试验结果

肉眼观察结果见下表：

7.2.2.1试验结论：肉眼观察无明显刺激反应。

7.3组织切片检查

7.3.1检验方法

组织经修块，梯度酒精脱水，石蜡包埋，切片厚度5μM，HE染色，光镜下检查。

7.3.2实验方法

7.3.2.1肌肉刺激性试验(病理结果见附图4-15)

生理盐水组：给药1次后48小时，第二组和第三组各有1只动物局部少量肌纤维肌浆溶解坏死。其余各只动物肌纤维排列整齐，横纹清晰，未见变性、坏死及炎细胞浸润等病理改变。

受试药物组：给药1次后48小时，第一组和第三组各有1只动物局部少量肌纤维溶解坏死。其余各只动物肌纤维排列整齐，横纹清晰，未见变性、坏死及炎细胞浸润等病理改变。

7.3.2.2血管刺激性试验(病理结果见附图16-27)

生理盐水组：连续给药7天，末次给药后72小时，第一组和第二组各有1只动物注射血管部分内皮细胞轻度肿胀，少量内皮细胞脱落，其中第二组1只动物血管周围轻度水肿；第二组另1只动物注射血管较明显扩张，血管内皮细胞、血管壁及血管周围未见明显异常。其余各只动物注射血管内皮光滑、完整，内皮细胞未见水肿、变性、脱落及增生，血管腔内未见血栓形成，血管壁及血管周围未见炎细胞浸润等病理改变。

受试药物组：连续给药7天，末次给药后72小时，第二组有1只动物注射血管部分内皮细胞轻度肿胀，少量内皮细胞脱落，血管壁及血管周围未见明显异常；第三组1只动物注射血管明显扩张，血管内皮细胞、血管壁及血管周围未见明显异常。其余各只动物注射血管内皮光滑、完整，内皮细胞未见水肿、变性、脱落及增生，血管腔内未见血栓形成，血管壁及血管周围未见炎细胞浸润等病理改变。

7.3.3试验结果

7.3.3.1肌肉刺激性试验

镜下检查结果可见：给药后48小时，受试药物第一组和第三组各有1只动物局部少量肌纤维肌浆溶解坏死，生理盐水组亦有2只动物局部少量肌纤维肌浆溶解坏死。由于上述病变范围较小，且受试药物组与生理盐水组比较没有明显组织学差异，分析此变化非受试药物的刺激性，可能为机械刺激所致。

7.3.3.2血管刺激性试验

镜下检查结果可见：末次给药后72小时，受试药物第二组有1只动物注射血管部分内皮细胞轻度肿胀，少量内皮细胞脱落；第三组1只动物注射血管明显扩张。生理盐水组2只动物注射血管部分内皮细胞轻度肿胀，少量内皮细胞脱落，其中1只动物血管周围轻度

水肿；另见1只动物注射血管较明显扩张。上述病变受试药物组与生理盐水组比较没有明显组织学差异，分析为由于多次给药机械损伤引起的病理改变，而非药物的直接作用。

7.3.2试验结论

7.3.3.1肌肉刺激性试验

受试药物丹参水溶性提取物分为三组，每组2只，分别给家兔臀部肌肉注射，给药1次后48小时取材。结果表明：三个组别的丹参水溶性提取物与生理盐水组比较，对家兔的臀部肌肉未见明显刺激性。

7.3.3.2血管刺激性试验

受试药物丹参水溶性提取物分为三组，每组2只，分别给家兔耳部血管注射，连续给药7天，于末次给药后72小时取材。结果表明：三个组别的丹参水溶性提取物与生理盐水组比较，对家兔的耳部血管无明显刺激性。

附图说明

图1丹酚酸对胶原诱导的血小板聚集的影响：丹参水溶性提取物可抑制胶原诱导的血小板聚集，拟合方程为Y＝-235.96X+82.341，IC50＝0.22mg/ml

图2丹酚酸对ADP诱导的血小板聚集的影响：丹参水溶性提取物可抑制ADP诱导的血小板聚集，拟合方程为Y＝-17.904X+74.138，IC50＝2.30mg/ml

图3丹酚酸对花生四烯酸诱导的血小板聚集的影响：丹参水溶性提取物可抑制AA诱导的血小板聚集，拟合方程为Y＝-15.355X+94.521，IC50＝3.65mg/kg

图4给药1次后48小时，丹参水溶性提取物组1号动物臀部肌肉肌纤维排列整齐，横纹清晰，未见明显病理改变  HE×200

图5给药1次后48小时，生理盐水组1号动物臀部肌肉肌纤维排列整齐，横纹清晰，未见明显病理改变 HE×200

图6给药1次后48小时，丹参水溶性提取物组2号动物臀部肌肉局部少量肌纤维肌浆溶解坏死 HE×200

图7给药1次后48小时，生理盐水组3号肌纤维排列整齐，横纹清晰，未见明显病理改变 HE×200

图8给药1次后48小时，丹参水溶性提取物组3号动物臀部肌肉肌纤维排列整齐，横纹清晰，未见明显病理改变 HE×200

图9给药1次后48小时，生理盐水组3号动物臀部肌肉局部少部分肌纤维坏死，少量肌浆溶解 HE×200

图10给药1次后48小时，丹参水溶性提取物组4号动物臀部肌肉肌纤维排列整齐，横纹清晰，未见明显病理改变 HE×200

图11给药1次后48小时，生理盐水组4号动物臀部肌肉肌纤维排列整齐，横纹清晰，未见明显病理改变 HE×200

图12给药1次后48小时，丹参水溶性提取物组5号动物臀部肌肉肌纤维排列整齐，横纹清晰，未见明显病理改变 HE×200

图13给药1次后48小时，生理盐水组5号动物臀部肌肉肌纤维排列整齐，横纹清晰，未见明显病理改变 HE×200

图14给药1次后48小时，丹参水溶性提取物组6号动物臀部肌肉局部少量肌纤维肌浆溶解坏死 HE×200

图15给药1次后48小时，生理盐水组6号动物臀部肌肉局部少量肌纤维肌浆溶解坏死HE×200

图16末次给药后72小时，生理盐水组1号动物注射血管血管内皮光滑完整，管腔、管壁、管周未见明显异常 HE×100

图17末次给药后72小时，丹参水溶性提取物组1号动物注射血管血管内皮光滑完整，管腔、管壁、管周未见明显异常 HE×100

图18末次给药后72小时，生理盐水组2号动物注射血管部分血管内皮细胞轻度肿胀，少量脱落，管壁、管周未见明显异常 HE×200

图19末次给药后72小时，丹参水溶性提取物组2号动物注射血管血管内皮光滑完整，管腔、管壁、管周未见明显病理改变 HE×100

图20末次给药后72小时，生理盐水组3号动物注射血管血管较明显扩张，内皮细胞、管壁、管周未见明显异常 HE×100

图21末次给药后72小时，丹参水溶性提取物组3号动物注射血管血管内皮光滑完整，管腔、管壁、管周未见明显异常 HE×100

图22末次给药后72小时，生理盐水组4号动物注射血管部分血管内皮细胞轻度肿胀，少量脱落，血管周围轻度水肿 HE×200

图23末次给药后72小时，丹参水溶性提取物组4号动物注射血管部分血管内皮细胞轻度肿胀，少量脱落，管壁、管周未见明显异常 HE×200

图24末次给药后72小时，生理盐水组5号动物注射血管血管内皮光滑完整，管腔、管壁、管周未见明显异常 HE×100

图25末次给药后72小时，丹参水溶性提取物组5号动物注射血管血管明显扩张，内皮细胞、管壁、管周未见明显异常 HE×100

图26末次给药后72小时，生理盐水组6号动物注射血管血管内皮光滑完整，管腔、管壁、管周未见明显异常 HE×100

图27末次给药后72小时，丹参水溶性提取物组6号动物注射血管血管内皮光滑完整，管腔、管壁、管周未见明显异常 HE×100

具体实施方式

下面将结合本发明的实施例进一步详细说明本发明的实质内容，该实施例仅用于说明本发明而对本发明并没有限制。

实施例1

丹参饮片1000克，6000ml水回流提取四次，每次0.5小时。合并提取液，离心，上清液通过500克聚酰胺，12000ml水冲洗，无水乙醇12000ml洗脱，洗脱液浓缩到无醇并加水到约1克药材/ml，调pH值4.5，通过1000克大孔树脂，4000ml水冲洗，8000ml50％乙醇洗脱，浓缩乙醇洗脱液，减压干燥。得提取物30克，丹参水溶性提取物B含量58.3％、迷迭香酸3.5％、紫草酸4.2％、丹参水溶性提取物E 0.5％，四种成分总含量66.5％。总酚酸85％。

实施例2

丹参饮片1000克，5000ml 75％乙醇回流提取三次，每次1小时。合并提取液，浓缩至无醇，过滤，滤液调pH值3.5后通过300克聚酰胺，12000ml水冲洗，50％乙醇12000ml洗脱，洗脱液浓缩到无醇并加水到约1克药材/ml，浓缩液调pH 5.0，通过1000克大孔树脂，4000ml水冲洗，1000ml50％乙醇洗脱，浓缩乙醇洗脱液，减压干燥。得提取物45克，丹参水溶性提取物B含量71％、迷迭香酸3.1％、紫草酸2.7％、丹参水溶性提取物E0.2％，四种成分总含量77％。总酚酸92％。

实施例3

丹参饮片1000克，5500ml水回流提取三次，第一次1小时，第二、三次0.5小时。合并提取液，调PH值2.5，离心，上清液通过500克聚酰胺，12000ml水冲洗，0.1％碳酸氢钠12000ml洗脱，洗脱液调pH 2.0，浓缩液通过1000克大孔树脂，4000ml水冲洗，8000ml50％乙醇洗脱，浓缩乙醇洗脱液，减压干燥。得提取物30克，丹参水溶性提取物B含量55.48％、迷迭香酸3.55％、紫草酸4.42、丹参水溶性提取物E 0.32％，四种成分总含量63.77％。总酚酸87％。

实施例4

丹参饮片1000克，5500ml 90％乙醇回流提取三次，第一次1小时，第二、三次0.5小时。合并提取液，调PH值1，离心，上清液通过500克聚酰胺，12000ml水冲洗，0.3％碳酸氢钠12000ml洗脱，洗脱液调pH 1.0，浓缩液通过1000克大孔树脂，4000ml15％乙醇冲洗，8000ml95％乙醇洗脱，浓缩乙醇洗脱液，减压干燥。得提取物30克，丹参水溶性提取物B含量54.00％、迷迭香酸3.55％、紫草酸5.02、丹参水溶性提取物E 0.40％，四种成分总含量62.97％。总酚酸87％。

Claims (14)

1.一种丹参水溶性提取物，其中总酚酸的重量百分含量为80-100％，其特征在于它含有丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸E，其含量百分含量分别为40％-90％％、3.0-15％、2-10％、0.2-2.2％。

2.如权利要求1所述的提取物，其中总酚酸的重量百分含量为80-100％，其特征在于它含有丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸E，其含量百分含量分别为45％80％％、3.0-12％、2-8％、0.2-2.2％。

3.一种丹参水溶性提取物，其中总酚酸的重量百分含量为80-96％，其特征在于它含有丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸E，其含量百分含量分别为45-70％、3.0-6.0％、2.3-5.0％、0.2-2.2％。

4.如权利要求1～3的任一权利要求的提取物，是按照包括如下步骤的方法制备的：

(1)丹参用水或含水乙醇提取；

(2)提取液在除去乙醇后经聚酰胺层析或非极性或弱极性大孔树脂层析或聚酰胺与大孔树脂组合进行纯化。

5.如权利要求4的提取物，是按照包括如下步骤的方法制备的：

(1)丹参用含水乙醇，提取液浓缩至无醇；

(2)提取物经过聚酰胺层析，用水或30％以下的乙醇洗去杂质，以30-100％乙醇或0.01-0.5％碳酸氢钠或0.01-0.5％碳酸钠洗脱，收集洗脱液，调节pH值不高于5.5，通过大孔树脂柱，水洗或20％以下乙醇洗去杂质，30-100％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得。

6.如权利要求5的提取物，是按照包括如下步骤的方法制备的：

(1)丹参用浓度20％-90％乙醇提取，提取液浓缩至无醇；

(2)提取物经过聚酰胺层析，用水或30％以下的乙醇洗去杂质，以30-95％乙醇或0.05-0.3％碳酸氢钠或0.01-0.3％碳酸钠洗脱，收集洗脱液，调pH 1-5.5，通过弱极性或非极性大孔树脂柱，水洗或20％以下乙醇洗去杂质，30-95％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得。

7.一种药物组合物，由权利要求1～6的任一权利要求的提取物和药学上可接受的载体制成。

8.根据权利要求7的制剂，该制剂为注射液、注射用无菌粉末、注射用冻干粉针、片剂、胶囊、口服液、滴丸或颗粒剂。

9.根据权利要求1～5的任一提取物在制备治疗心脑血管疾病中的药物中的应用。

10.根据权利要求9的应用，其中所述的心脑血管疾病是脑缺血性疾病。

11.根据权利要求10的应用，其中所述的脑缺血性疾病是脑梗塞。

12.根据权利要求11的应用，其中所述的脑缺血性疾病是脑梗塞后遗症。

13.根据权利要求10的应用，其中所述的脑缺血性疾病是脑水肿。

14.根据权利要求9的应用，其中所述的心脑血管疾病是高凝血状态。

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