CN101693884B - 一种从胎盘、脐带或脂肪组织中分离提取干细胞的方法 - Google Patents
一种从胎盘、脐带或脂肪组织中分离提取干细胞的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101693884B CN101693884B CN2009101175229A CN200910117522A CN101693884B CN 101693884 B CN101693884 B CN 101693884B CN 2009101175229 A CN2009101175229 A CN 2009101175229A CN 200910117522 A CN200910117522 A CN 200910117522A CN 101693884 B CN101693884 B CN 101693884B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- collagenase
- stem cells
- umbilical cord
- placenta
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 36
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 title claims abstract description 21
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 title claims abstract description 21
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 title claims abstract description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 55
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 claims abstract description 26
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 23
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 claims abstract description 17
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims abstract description 12
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 24
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 16
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 16
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 11
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 11
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 11
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 7
- NEEHYRZPVYRGPP-IYEMJOQQSA-L calcium gluconate Chemical compound [Ca+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O NEEHYRZPVYRGPP-IYEMJOQQSA-L 0.000 claims description 7
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 6
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 claims 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 claims 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims 1
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 abstract description 15
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 abstract description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 abstract 2
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 abstract 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract 1
- 239000012716 precipitator Substances 0.000 abstract 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 10
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 9
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 5
- ZEYOIOAKZLALAP-UHFFFAOYSA-M sodium amidotrizoate Chemical compound [Na+].CC(=O)NC1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I ZEYOIOAKZLALAP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 5
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 5
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 210000003995 blood forming stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 238000007443 liposuction Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000001612 separation test Methods 0.000 description 1
- 210000001988 somatic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002660 stem cell treatment Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种从胎盘、脐带或脂肪组织中分离提取干细胞的方法，其工艺步骤为：首先将胎盘、脐带或脂肪组织与细胞保养液按2.5～4∶1的重量比混合放入组织粉碎桶中，粉碎后加入胶原酶混匀，在37℃左右条件下孵育，过滤，加入沉淀剂，静置后吸取上清液，离心，除去上清液，将浓缩的细胞加入到泛影酸钠-聚蔗糖400#的液体上，再离心，收取中间10-15ml的细胞层，用细胞保养液清洗，将收集的细胞计数，检测细胞存活率≥95％时，即可以供临床使用。本发明不仅实现了从胎盘、脐带或脂肪组织中分离提取所有干细胞，而且实现了工业化生产，使医生在临床上方便、安全、规范地获取成体干细胞，像用药一样地使用成体干细胞治疗病人的疾病，解决临床上很难获取成体干细胞的瓶颈，推广细胞治疗技术。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，特别是涉及一种从胎盘、脐带或脂肪组织中分离提取干细胞的方法。
背景技术
目前国际上从人类骨髓、脐带血中分离细胞的方法很多，本申请人也申请了两项专利技术，如《骨髓脐带血干细胞体外分离试剂盒及其应用方法》(申请号200710137781.9)和《一种有核细胞体外分离试剂盒及其应用方法》(申请号200610106875.5)。这些技术为从人体骨髓和胎儿分娩后的脐带血中获取干细胞提供了技术保障，为干细胞的临床应用开辟了广阔的前景。
但是近年来的研究发现人胎盘和脐带不仅仅是血中含有大量的干细胞，而且在实体组织中也含有大量的成体干细胞ACS(adult stem cell)，如间充质干细胞MSC、(mesenchymal stem cell)、多能成体干细胞MAPC(multipotent adult progenitor cell)、多能成体祖细胞USSC(unrestricted somatic stem cell)、内皮祖细胞EPC(endothelialprogenitor cell)、脂肪-衍生干细胞ASC(adipose--derived stern cell)，脂肪干细胞FSC(fat stem cells)、成纤维干细胞(fibroblasts stemcell)、造血干细胞HSC(hematopoietic stem cell)等。一直以来，在胎儿分娩后，胎盘和脐带就成废物。从这些废弃的实体组织中收集提取成体干细胞，将会对成体干细胞的临床应用和研究提供丰富的干细胞来源。
近年来科学家们也发现脂肪组织中除含有丰富的脂肪干细胞(FSC)以外，还含有成纤维干细胞(fibroblasts stem cell)、间充质干细胞(MSC)，造血干细胞HSC(hematopoietic stem cell)等成体干细胞(ACS)。脂肪组织中干细胞的种类与数量仅次于骨髓组织，是人体的第二大储存干细胞的组织。在临床上采集骨髓和采集腹部的脂肪，两者相比，采集脂肪病人更容易接受，相比痛苦也小一点。还有近年来美容和减肥的吸脂手术后可获得大量的脂肪，将这些脂肪中的干细胞分离提取再利用也是一个非常好的途径。
胎盘、脐带及脂肪组织尽管结构不同、组织种类不同，但都是实体组织。虽然两种组织储存的成体干细胞的种类和数量方面有差异，但是存在于组织中细胞池(也叫壁龛、集落)的存在形式是相同的，所以可用同一种获取的方法获得。
目前，尽管已经有从胎盘脐带组织中提取间充质干细胞的方法，也有从胎盘脐带组织中获取营养层干细胞的方法，但都是实验室技术，距离产品的产业化还有很长一段距离；第二，这些方法只能获取单一种类的干细胞，不能有效保留全部的成体干细胞/祖细胞；第三由于是实验室技术没有操作规范的和产品质量要求，在临床推广应用时无法保证生物安全性和质量控制。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种可在临床推广应用，方便可靠，安全有效的从胎盘、脐带或脂肪组织中分离提取干细胞的方法，该方法可获得成体组织中所有的干细胞。
本发明的技术方案为：
本发明不仅实现了从胎盘、脐带或脂肪组织中分离提取所有干细胞，而且实现了工业化生产，使医生在临床上方便、安全、规范地获取成体干细胞，像用药一样地使用成体干细胞治疗病人的疾病，解决临床上很难获取成体干细胞的瓶颈，推广细胞治疗技术。本发明的方法简单可靠，操作规范，安全有效，避免交叉污染，规范操作，能够保证质量控制的产品。
具体实施方式
实施例1
试剂盒组成：
1、沉淀剂5％羟乙基淀粉，0.4％葡萄糖酸钙的水溶液，PH值为7.4±0.2，渗透压279mOsm/kg。
2、泛影酸钠-聚蔗糖400#：5％聚蔗糖400#等，12.5％泛影酸钠的混合液，密度1.077-1.080，PH值为7.4±0.2。
3、细胞保养液磷酸缓冲液，PH值为7.4±0.2。
4、胶原酶II或III或IV50-100mg或0.25％胰蛋白酶10ml。
5、试剂盒同时配有一次性灭菌的组织粉碎桶、粉碎机刀头、蔡氏过滤器、50ml硅化离心管，10ml和25ml移液管、细胞转移管组成的一个组合包装。采用吸塑盒密封的一次性使用的包装。采用γ射线消毒或是环氧乙烷消毒。每一套试剂盒配一套一次性用品。
上述的1-3条试剂配制后经过121℃高压灭菌35分钟，分别存放试剂盒中，测试细菌内毒素≤0.5EU/ml，2～8℃保存和运输，胶原酶分装后与上述试剂一起保存。
取新鲜胎盘和脐带一个称量以后，按重量与细胞保养液以4∶1的比例放到组织粉碎桶，以6000转/分4分钟粉碎，加入胶原酶1支混匀后，放置到37℃±0.5℃的水浴箱中30分钟。
用蔡氏漏斗过滤后按体积4∶1加入沉淀剂，混匀后静置20-30分钟，收取上清夜，离心力1100Xg离心5分钟，除去上清夜，加到泛影酸钠-聚蔗糖400#液体上面(鸡尾酒加法)。用离心力650Xg离心30分钟，吸取细胞层，用细胞保养液清洗3次。进行细胞计数和细胞存活率检测后即可使用。
细胞存活率≥96％；
细胞收集率为200g胎盘脐带组织收集细胞总数应为2.5-4.9×108。
上述浓度为质量浓度，其操作方法为质量规范方法，其产品的包装组合为实用技术组合。
实施例2
试剂盒组成：
1、沉淀剂7％羟乙基淀粉，0.2％葡萄糖酸钙的水溶液，PH值为7.4±0.2，渗透压279mOsm/kg。
2、泛影酸钠-聚蔗糖400#：6％聚蔗糖400#等，10％泛影酸钠的混合液，密度1.077-1.080，PH值为7.4±0.2，渗透压279mOsm/kg。
3、细胞保养液、磷酸缓冲液。
4、胶原酶II或III或IV50-100mg或0.25％胰蛋白酶10ml。。
5、试剂盒同时配有一次性灭菌的组织粉碎桶、粉碎力头、蔡氏过滤器、50ml硅化离心管，10ml和25ml移液管、细胞转移管组成的一个组合包装。采用吸塑盒密封的一次性使用的包装。采用γ射线消毒或是环氧乙烷消毒。每一套试剂盒配一套一次性用品。
上述的1-3条试剂配制后经121℃高压灭菌35分钟。测试细菌内毒素≤0.5EU/ml，分别存放试剂盒中，2～8℃保存和运输，胶原酶分装后与上述试剂一起保存。
取新鲜胎盘和脐带一个称量以后，按重量与细胞保养液以3∶1的比例放到组织粉碎桶，以6000转/分4分钟粉碎，加入胶原酶1支混匀后，放置到37℃±0.5℃的水浴箱中30分钟。
具体操作方法同实施例1。
细胞收集率为200g胎盘脐带组织收集细胞总数应为2.5-4.9×108。
上述浓度为质量浓度，其操作方法为质量规范方法，其产品的包装组合为实用技术组合。
实施例3
试剂盒组成：
1、沉淀剂5％羟乙基淀粉，0.4％葡萄糖酸钙的水溶液，PH值为7.4±0.2，渗透压279mOsm/kg。
2、泛影酸钠-聚蔗糖400#：5％聚蔗糖400#等，12.5％泛影酸钠的混合液，密度1.077-1.080，PH值为7.4±0.2，渗透压279mOsm/kg。
3、细胞保养液磷酸缓冲液。
4、胶原酶II或III或IV50-100mg或0.25％胰蛋白酶10ml。
5、试剂盒同时配有一次性灭菌的组织粉碎桶、粉碎力头、蔡氏过滤器、50ml硅化离心管，10ml和25ml移液管、细胞转移管组成的一个组合包装。采用吸塑盒密封的一次性使用的包装。采用γ射线消毒或是环氧乙烷消毒。每一套试剂盒配一套一次性用品。
上述的1-3条试剂配制后经过121℃高压灭菌35分钟，分别存放试剂盒中，测试细菌内毒素≤0.5EU/ml，2～8℃保存和运输，胶原酶分装后与上述试剂一起保存。
取新鲜的脂肪组织，按重量与细胞保养液以4∶1的比例放到组织粉碎桶，以3000转/分2分钟粉碎，加入胶原酶1支混匀后，放置到37℃±0.5℃的水浴箱中30分钟。
用蔡氏漏斗过滤后按体积4∶1加入沉淀剂，混匀后静置20-30分钟，收取上清夜，离心力1100Xg离心5分钟，除去上清夜，加到泛影酸钠-聚蔗糖400#液体上面(鸡尾酒加法)。用离心力650Xg离心20分钟，吸取细胞层，用细胞保养液清洗3次。进行细胞计数和细胞存活率检测后即可使用。
细胞存活率≥96％。
细胞收集率为350g吸取的脂肪组织收集细胞总数应为1×108。
上述浓度为质量浓度，其操作方法为质量规范方法，其产品的包装组合为实用技术组合。
实施例4
试剂盒组成：
1、沉淀剂7％羟乙基淀粉，0.2％葡萄糖酸钙的水溶液，PH值为7.4±0.2，渗透压279mOsm/kg。
2、泛影酸钠-聚蔗糖400#：6％聚蔗糖400#等，10％泛影酸钠的混合液，密度1.077-1.080，PH值为7.4±0.2，渗透压279mOsm/kg。
3、细胞保养液：磷酸缓冲液。
4、胶原酶II或III或IV50-100mg或0.25％胰蛋白酶10ml。
5、试剂盒同时配有一次性灭菌的组织粉碎桶、粉碎力头、蔡氏过滤器、50ml硅化离心管，10ml和25ml移液管、细胞转移管组成的一个组合包装。采用吸塑盒密封的一次性使用的包装。采用γ射线消毒或是环氧乙烷消毒。每一套试剂盒配一套一次性用品。
上述的1-3条试剂配制后经121℃高压灭菌35分钟。测试细菌内毒素≤0.5EU/ml，分别存放试剂盒中，2～8℃保存和运输，胶原酶分装后与上述试剂一起保存。
取新鲜的脂肪组织，按重量与细胞保养液以4∶1的比例放到组织粉碎桶中，以3000转/分2分钟粉碎，加入胶原酶1支混匀后，放置到37℃±0.5℃的水浴箱中30分钟。
具体应用方法同实施例1。
细胞存活率≥96％。
细胞收集率为350g吸取的脂肪组织收集细胞总数应为1×108。
上述浓度为质量浓度，其操作方法为质量规范方法，其产品的包装组合为实用技术组合。
实施例5
试剂盒组成：
1、沉淀剂7％羟乙基淀粉，0.2％葡萄糖酸钙的水溶液，PH值为7.4±0.2，渗透压279mOsm/kg。
2、泛影酸钠-聚蔗糖400#：6％聚蔗糖400#等，10％泛影酸钠的混合液，密度1.077-1.080，PH值为7.4±0.2，渗透压279mOsm/kg。
3、细胞保养液：磷酸缓冲液。
4、胶原酶II或III或IV50-100mg或0.25％胰蛋白酶10ml。
5、试剂盒同时配有一次性灭菌的组织粉碎桶、粉碎力头、蔡氏过滤器、50ml硅化离心管，10ml和25ml移液管、细胞转移管组成的一个组合包装。采用吸塑盒密封的一次性使用的包装。采用γ射线消毒或是环氧乙烷消毒。每一套试剂盒配一套一次性用品。
上述的1-3条试剂配制后经121℃高压灭菌35分钟。测试细菌内毒素≤0.5EU/ml，分别存放试剂盒中，2～8℃保存和运输，胶原酶分装后与上述试剂一起保存。
取新鲜的脂肪组织，按重量与细胞保养液以2.5∶1的比例放到组织粉碎桶中，以3000转/分2分钟粉碎，加入胶原酶1支混匀后，放置到37℃±0.5℃的水浴箱中30分钟。
具体应用方法同实施例1。
细胞存活率≥96％。
细胞收集率为350g吸取的脂肪组织收集细胞总数应为1×108。
上述浓度为质量浓度，其操作方法为质量规范方法，其产品的包装组合为实用技术组合。
本发明的具体实施方式不限于上述实施例所提供的方式。
Claims (3)
1.一种从胎盘、脐带或脂肪组织中分离提取干细胞的方法，其工艺步骤为：
首先将胎盘、脐带或脂肪组织与细胞保养液按2.5～4：1的重量比混合放入组织粉碎桶中，以3000—6000转∕分的转速粉碎2—4分钟，然后加入胶原酶充分混匀，放置到37℃±0.5℃的水浴箱中孵育20—30分钟，用200目过滤器过滤，按组织悬液量的25%—40%比例加入沉淀剂，混匀后静置10～30分钟，吸取上清液，用1100Xg的离心力离心3～5分钟，除去上清液，将浓缩的细胞加入到泛影酸钠-聚蔗糖400#的液体上，用离心力650Xg离心10—30分钟，收取中间10—15ml的细胞层，用细胞保养液清洗3—4次，将收集的细胞计数，检测细胞存活率≥95%时，即可以供临床使用；所述的细胞保养液为磷酸缓冲液，PH值为7.4±0.2；所述的胶原酶为胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅲ或胶原酶Ⅳ；所述的沉淀剂是指由5—7%的羟乙基淀粉/甲基纤维素/羧甲基淀粉与0.2—0.4%葡萄糖酸钙组成的水溶液，PH值为7.4±0.2；所述的泛影酸钠-聚蔗糖400#，其密度为1.077—1.080，PH值为7.4±0.2。
2.一种从胎盘、脐带或脂肪组织中分离提取干细胞的试剂盒，其特征在于其组成包括细胞保养液、胶原酶、沉淀剂和泛影酸钠-聚蔗糖400#，各试剂分开保存于同一个试剂盒中，每一套试剂盒与一套一次性用品配套作为一次分离提取的器具；所述的细胞保养液为磷酸缓冲液，PH值为7.4±0.2；所述的胶原酶为胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅲ或胶原酶Ⅳ；所述的沉淀剂是指由5—7%的羟乙基淀粉/甲基纤维素/羧甲基淀粉与0.2—0.4%葡萄糖酸钙组成的水溶液，PH值为7.4±0.2；所述的泛影酸钠-聚蔗糖400#，其密度为1.077—1.080，PH值为7.4±0.2。
3.按照权利要求2所述的从胎盘、脐带或脂肪组织中分离提取干细胞的试剂盒，其特征是：所述一套一次性用品是由一次性灭菌的组织粉碎桶、粉碎力头、蔡氏过滤器、50ml硅化离心管、10ml和25ml移液管和细胞转移管组成的一个组合包装。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009101175229A CN101693884B (zh) | 2009-10-21 | 2009-10-21 | 一种从胎盘、脐带或脂肪组织中分离提取干细胞的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009101175229A CN101693884B (zh) | 2009-10-21 | 2009-10-21 | 一种从胎盘、脐带或脂肪组织中分离提取干细胞的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101693884A CN101693884A (zh) | 2010-04-14 |
| CN101693884B true CN101693884B (zh) | 2012-05-23 |
Family
ID=42092886
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2009101175229A Active CN101693884B (zh) | 2009-10-21 | 2009-10-21 | 一种从胎盘、脐带或脂肪组织中分离提取干细胞的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101693884B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2792741A1 (en) * | 2013-04-18 | 2014-10-22 | Jaroslav Michalek | Method for isolation of adipose tissue-derived stromal vascular fraction cells |
| CN108272643A (zh) * | 2018-02-01 | 2018-07-13 | 伯仕利生物科技发展（盐城）有限公司 | 一种用于多重干细胞复合冻干粉及溶媒的制备方法 |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102465148A (zh) * | 2010-11-01 | 2012-05-23 | 张正前 | 人源干细胞生物活性物质及其制备与应用 |
| CN103087987A (zh) * | 2011-10-27 | 2013-05-08 | 北京清美联创干细胞科技有限公司 | 一种组织工程用细胞体外分离试剂盒及其应用方法 |
| CN102643781B (zh) * | 2012-02-23 | 2014-09-10 | 中航（宁夏）生物有限责任公司 | 一种优化的有核细胞体外分离试剂盒及使用方法 |
| JP6779866B2 (ja) * | 2014-06-13 | 2020-11-04 | チルドレンズ メディカル センター コーポレイション | ミトコンドリアを単離するための製品および方法 |
| CN109152795A (zh) | 2016-01-15 | 2019-01-04 | 儿童医学中心公司 | 线粒体和组合的线粒体试剂的治疗用途 |
| CN105969722A (zh) * | 2016-07-19 | 2016-09-28 | 安徽惠恩生物科技股份有限公司 | 一种胎盘多能干细胞提取制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101144070A (zh) * | 2007-07-17 | 2008-03-19 | 王怀林 | 骨髓脐带血干细胞体外分离试剂盒及其应用方法 |
| CN100485029C (zh) * | 2006-08-07 | 2009-05-06 | 王怀林 | 一种有核细胞体外分离试剂盒及其应用方法 |
-
2009
- 2009-10-21 CN CN2009101175229A patent/CN101693884B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100485029C (zh) * | 2006-08-07 | 2009-05-06 | 王怀林 | 一种有核细胞体外分离试剂盒及其应用方法 |
| CN101144070A (zh) * | 2007-07-17 | 2008-03-19 | 王怀林 | 骨髓脐带血干细胞体外分离试剂盒及其应用方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 莫文健等.无血清脐血巨核系祖细胞体外扩增的研究.《中华实验血液学杂志》.2004,第12卷(第2期),133-137. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2792741A1 (en) * | 2013-04-18 | 2014-10-22 | Jaroslav Michalek | Method for isolation of adipose tissue-derived stromal vascular fraction cells |
| WO2014169885A1 (en) * | 2013-04-18 | 2014-10-23 | Jaroslav Michalek | Method for isolation of adipose tissue-derived stromal vascular fraction cells |
| CN108272643A (zh) * | 2018-02-01 | 2018-07-13 | 伯仕利生物科技发展（盐城）有限公司 | 一种用于多重干细胞复合冻干粉及溶媒的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101693884A (zh) | 2010-04-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101693884B (zh) | 一种从胎盘、脐带或脂肪组织中分离提取干细胞的方法 | |
| CN103667187B (zh) | 一种人脂肪干细胞的分离培养方法和干细胞库的构建方法 | |
| EP2550357B1 (en) | Cell-culture-bag | |
| CN102002475B (zh) | 人脂肪成体干细胞的获取方法及该干细胞库的构建方法 | |
| CN104498433B (zh) | 一种脂肪干细胞的提取方法以及制剂和应用 | |
| CN107475190B (zh) | 一种脂肪svf细胞临床级高效制备和冻存的方法及其用途 | |
| CN106367389A (zh) | 一种人脐带间充质干细胞因子的制备方法及应用 | |
| CN102643781B (zh) | 一种优化的有核细胞体外分离试剂盒及使用方法 | |
| CN107299082A (zh) | 从组织中分离胎盘间质细胞并培养成间充质干细胞的方法 | |
| CN101984049A (zh) | 从脂肪组织中分离间充质干细胞的方法 | |
| CN102604892A (zh) | 一种人类骨髓、脐带血或外周血干细胞样本密度分离液及干细胞分离方法 | |
| CN101638637A (zh) | 人类骨髓、脐带血、外周血细胞处理试剂盒及细胞处理方法 | |
| CN103469309A (zh) | 一种组织匀浆法分离活细胞构建细胞库的方法 | |
| US8673639B2 (en) | Methods for isolating stem cells | |
| CN107034186A (zh) | 一种从人脐带血中分离纯化干细胞的方法 | |
| CN102492654A (zh) | 一种分离人脐带血干细胞的试剂盒及其使用方法 | |
| CN102250839A (zh) | 一种通用型细胞处理试剂盒及其应用方法 | |
| CN108456644A (zh) | 高活力高纯度人体肠菌胶囊制备方法 | |
| CN112852723A (zh) | 一种原代胎盘壁蜕膜间充质干细胞的处理和培养方法 | |
| CN111172106B (zh) | 一种从人胎盘或脐带中提取间充质干细胞及提取其分泌物的方法 | |
| CN106190969A (zh) | 一种蜕膜间充质干细胞的制备方法 | |
| ES2525273T3 (es) | Proceso de alta seguridad para la preparación de fracciones de células madre purificadas | |
| CN205635588U (zh) | 一种快速分离牙髓干细胞的试剂盒 | |
| CN106265739A (zh) | 一种利用关节镜冲洗液制备间充质干细胞制剂的方法 | |
| CN106110302A (zh) | 治疗糖尿病足的干细胞制剂 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: NINGXIA ZHONGLIANDA BIOTECH CO., LTD . Free format text: FORMER OWNER: WANG QINYI Effective date: 20100504 Free format text: FORMER OWNER: WANG HUAILIN |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 750001 NO.36, GULOU NORTH STREET, XINGQING DISTRICT, YINCHUAN CITY, NINGXIAHUI AUTONOMOUS REGION TO: 750004 NO.36, GULOU NORTH STREET, YINCHUAN CITY, NINGXIA AUTONOMOUS REGION |
|
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20100504 Address after: 750004 No. 36 Gulou North Street, Ningxia autonomous region, Yinchuan Applicant after: Ningxia Zhonglianda Biotech Co., Ltd. Address before: 750001 No. 36 Gulou North Street, Xingqing District, the Ningxia Hui Autonomous Region, Yinchuan Applicant before: Wang Qinyi Co-applicant before: Wang Huailin |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C56 | Change in the name or address of the patentee |
Owner name: AVIC (NINGXIA) BIOLOGY LLC Free format text: FORMER NAME: NINGXIA ZHONGLIANDA BIOLOGICAL CO., LTD. |
|
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 750011 Innovation Park, 78 Development Zone, the Ningxia Hui Autonomous Region, Yinchuan Patentee after: AVIC (NINGXIA) BIOLOGY CO., LTD. Address before: 750004 No. 36 Gulou North Street, the Ningxia Hui Autonomous Region, Yinchuan Patentee before: Ningxia Zhonglianda Biotech Co., Ltd. |
|
| C56 | Change in the name or address of the patentee | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 750011 Innovation Park, 78 Development Zone, the Ningxia Hui Autonomous Region, Yinchuan Patentee after: AVIC (Ningxia) biological Limited by Share Ltd Address before: 750011 Innovation Park, 78 Development Zone, the Ningxia Hui Autonomous Region, Yinchuan Patentee before: AVIC (NINGXIA) BIOLOGY CO., LTD. |