CN101584663B - 新型的注射用多西他赛脂质体给药系统及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种新型的注射用多西他赛脂质体给药系统及其制备方法，所述注射用多西他赛脂质体给药系统包含治疗有效量的多西他赛、磷脂膜材、膜稳定材料和药学上可接受的辅剂，其中，所述膜稳定材料包含离子型两亲物质，且所述多西他赛与所述磷脂膜材及所述膜稳定材料的重量比为1∶5∶0.2～1∶50∶50。本发明采用的方法包括：a)乳化步骤：将多西他赛、磷脂膜材和膜稳定材料溶解于有机溶剂中，然后倒入水相中，经乳化设备乳化形成乳剂；和b)挥散步骤：挥散除去有机溶剂，然后包封多西他赛于脂质体内。本方法制备的脂质体平均粒径小且分布窄、包封率高、载药量高、重现性好，适合于工业化生产放大。

Description

新型的注射用多西他赛脂质体给药系统及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种静脉注射用多西他赛脂质体给药系统及制备新方法。

背景技术

脂质体(liposome)或称类脂小球、液晶微囊，是一种靶向药物载体。1971年，英国Rymen等人开始将其用作药物载体。可通过渗透或被巨嗜细胞吞噬后载体被酶类分解而释放药物，从而发挥作用。它具有类细胞结构，进入动物体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。

脂质体进入人体后可被人体网状内皮系统吞噬，主要靶向在肝、脾等含网状内皮系统丰富的器官，对其它部位靶向性差，存在易被体内的蛋白等破坏而引起渗漏而影响疗效等问题。

当脂质体用键合的亲水性聚合物包衣时，它的物理、化学、生物学稳定性都大大提高。在此技术中，脂质体的组成中含有聚乙二醇衍生化磷脂(PEG-DSPE)，其作用是阻止血浆蛋白吸附即调理化于脂质体的表面，从而减少单核吞噬细胞的摄取，延长血循环的时间，使得脂质体能够有效到达病变部位，因此可以更好的发挥疗效，减轻毒性。

多西他赛(Docetaxol)是由欧洲浆果紫杉的针叶中提取的化合物半合成的紫杉醇衍生物，由法国的Rhone-Poulenc Rorer公司开发并上市。其作用机理与紫杉醇类似，通过促进微管双聚体装配成微管，同时防止去多聚化过程而使微管稳定，阻滞细胞于G2和M期，抑制细胞进一步分裂，从而抑制癌细胞的有丝分裂和增殖。多烯紫杉醇抗瘤谱广、抗肿瘤作用强，对难治性的乳腺癌、非小细胞肺癌等的疗效均较突出，临床应用潜力巨大。

多西他赛难溶于水，且脂溶性也不大，这就很大地影响了其临床应用。目前上市品种仅为多西他赛注射液，是用吐温-80及乙醇作溶剂配制而成，易引起较多不良反应，如刺激、溶血、过敏反应、神经毒性、心血管毒性等等。且使用前要使用抗过敏药物，给患者带来了极大的不便和痛苦。

中国专利CN1931157A公开一种可以注射或口服的多西他赛脂质体及其固体制剂。其以磷脂、胆固醇为基本膜材，加入适当的附加剂，采用多种方法制备了各种类型的脂质体，制得的脂质体粒径小，包封率高，稳定性好且毒副作用低，基本达到了临床注射要求。但制备的脂质体浓度较低，生产时需容积较大的容器，成本高，不适合大剂量给药。

中国专利CN1846692A和CN101057831A公开一种多西他赛长循环脂质体及其制备方法。其以大豆磷脂、氢化大豆磷脂、胆固醇加长循环材料聚乙二醇衍生化磷脂及pH调节剂油酸等为原料，用薄膜分散法制备了长循环脂质体，提高了药物的体内循环时间。但制备的脂质体载药量低，且因大量使用长循环材料聚乙二醇衍生化磷脂而使其成本过高，难以实现工业化生产。

由于多西他赛不溶于水且脂溶性也不高的特点。使此类药物在制备成脂质体时，存在载药量低、稳定性差的问题，尤其是冻干后加水重建时，药物易析出结晶。这主要是因为脂溶性的药物在制备脂质体时，药物往往被包封在脂质体的膜上，而如果药物的脂溶性较高，就易制备载药量高且相对稳定的脂质体，如前列地尔，阿霉素等脂质体均较稳定。对于多西他赛，因其脂溶性较差，且水中不溶，在采用常规处方及制备方法时，存在载药量低，制成脂质体不稳定的缺点。理想的脂质体模式是将药物以微晶或其它不溶状态包裹于脂质体内，从而实现较高的载药量，但由于多西他赛脂质体还存在易析出结晶的问题，因此欲使制备的脂质体相对稳定需对形成脂质体膜的材料进行深入改进，使其与药物亲和性增加，阻止药物穿过，从而提高脂质体的稳定性。

发明内容

基于上述问题，本发明人在配方设计上加入新型膜稳定材料，例如胆固醇硫酸酯钠、十二烷基磺酸钠等离子型两亲物质；在制备工艺上，提出乳化挥散法制备多西他赛脂质体。

本发明的一个目的是提供一种新型的注射用多西他赛脂质体给药系统及其冷冻干燥制剂，所述多西他赛脂质体给药系统对注射部位刺激小、在体内循环时间长并具有靶向作用。

本发明的另一目的是提供一种新的用于注射用多西他赛脂质体给药系统的制备方法。本发明制剂使用时用注射用水复溶，可用5％葡萄糖注射液进一步分散，用于静脉注射。

根据本发明，所述多西他赛脂质体给药系统包含治疗有效量的多西他赛、磷脂膜材、膜稳定材料和药学上可接受的辅剂，其中，所述膜稳定材料包含离子型两亲物质，且所述多西他赛与所述磷脂膜材及所述膜稳定材料的重量比为1∶5∶0.2～1∶50∶50。所述离子型两亲物质可以为胆固醇硫酸酯钠、胆固醇磷酸钠、胆固醇磺酸钠、十二烷基磺酸钠或其混合物，尤其是胆固醇硫酸酯钠这种新型膜稳定材料的加入，从根本上改善了脂质体的质量，使得其载药量、包封率、粒度分布及稳定性明显优于文献报道。

根据本发明，新型膜稳定材料胆固醇硫酸酯钠是由胆固醇经硫酸酯化后衍生而来，克服了胆固醇亲水性弱的缺点，保留了其亲脂性强的优点，可参与脂质体膜的组成，可以起到胆固醇调节膜的流动性的功能；又能在脂质体表面形成一层电荷层，增加脂质体微粒间的斥力，避免脂质体融合，发挥稳定脂质体的作用。

根据本发明，所述磷脂膜材可为纯度80％以上的蛋黄磷脂、大豆卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、氢化卵磷脂或其混合物，并且优选大豆卵磷脂。

根据本发明，所述膜稳定材料包含长循环辅料。所述长循环辅料为聚乙二醇衍生化磷脂(例如，PEG2000-DSPE)。在所述聚乙二醇衍生化磷脂的结构中，磷脂部分选自由硬脂酸磷脂酰乙醇胺、胆固醇琥珀酸酯、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝胺酸、二磷脂酰甘油和缩酸磷脂组成的组中的一种或多种，且聚乙二醇的分子量为200～20000，优选500～10000，更优选1000～5000，最优选2000。

根据本发明，所述膜稳定材料包含鱼油材料。所述鱼油材料选自由鱼油、鱼油乙酯、二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯组成的组中的一种或多种；且所述鱼油材料与所述磷脂的重量比为1∶1～1∶50，优选为1∶4.5～1∶12.5。

根据本发明，所述膜稳定材料选自鱼油材料、聚乙二醇衍生化磷脂、胆固醇硫酸酯钠、胆固醇磷酸钠、胆固醇磺酸钠、十二烷基磺酸钠，其可以单独使用，亦可联合使用。根据本发明，在所述注射用多西他赛脂质体给药系统中，所述离子型两亲物质(胆固醇硫酸酯钠、胆固醇磷酸钠、胆固醇磺酸钠、十二烷基磺酸钠或其混合物)与所述多西他赛的重量比为0.2∶1～10∶1，优选为1∶1～1.3∶1。

根据本发明，还可进一步包括药学可接受的辅剂，例如抗氧剂、pH值调节剂和冻干保护剂。

根据本发明，所述pH值调节剂能抑制或阻止药物从脂质体中的释放，此时的pH值并不是药物溶解度最小的pH值，而是在保证包封率的前提下，适当提高药物的溶解度，以加大药物在水相中的化学势，使平衡向油相移动，此pH值的缓冲液也被称作“释放抑制型缓冲液”。这种缓冲液具有很强缓冲能力，能维持体系达到期望的pH值。优选缓冲液为pH值在4.0～9.0之间的Tris-HCl缓冲液，最优选pH值在7.2～7.8之间。

本发明所制得的脂质体可包括冻干保护剂，所述冻干保护剂包括糖和多元醇，冻干保护剂一般是亲水性化合物，主要有糖类、尿素、右旋糖苷、白蛋白或聚乙烯醇等，能防止脂质体中脂类的重排，这样冻干后大部分主药仍包裹在脂质体中。冻干保护剂一般是强的氢键接受体，拥有代表性的立体化学特征，有利于防止双层膜中成分的分子内空间分布。糖类主要包括甘露糖、半乳糖、海藻糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖和葡萄糖等，最优选为乳糖；基于多西他赛脂质体给药系统总重，其用量在5％～20％之间，最优选为10％。多元醇类中，比较常用的是甘露醇和山梨醇。本发明惊奇地发现当单独使用山梨醇或甘露醇时，不能成功地维持脂质体的粒径。甘露醇可以和所提到糖类的任何一种协同使用，最优选组合是与葡萄糖，最优选比例2∶3(w/w)。

根据本发明，所述脂质体给药系统可以是冻干粉形式的制剂。其中，粒径为10nm～1000nm，优选为10nm～300nm；多西他赛与磷脂膜材的重量比即药脂重量比为1∶50～1∶5，优选为1∶8.5～1∶7.0；长循环辅料与磷脂膜材重量比为1∶100～20∶100，优选为3∶100～7∶100；及多西他赛的制剂最终浓度为1～10mg/mL，优选为3～5mg/mL。

根据本发明，首次采用乳化挥散法制备脂质体，所述方法包括：a)乳化步骤：将多西他赛、脂质体膜材和膜稳定材料溶解于有机溶剂中，然后倒入水相中，经乳化设备乳化形成乳剂；和b)挥散步骤：挥散除去有机溶剂，然后包封药物于脂质体内。所有机述溶剂可为例如二氯甲烷、氯仿、乙醚或乙酸乙酯等与水不相混溶且沸点相对较低易于挥散的有机溶剂。其中，优选二氯甲烷。优选在所述乳化步骤中，可通过超声、均质、纳米机处理制备乳剂。在所述乳化步骤中，所述乳剂为经适当乳化设备乳化形成的O/W乳剂，由于膜材大多为二亲性物质，因此乳化后主要存在于乳剂的界面膜上，在挥散除去有机溶剂后，药物可有效的包封于脂质体内。该方法的特点是，采用乳化与挥散两步工艺，方法简单可靠，重现性好。制备的脂质体平均粒径小(50～150nm之间)、粒径分布窄(200nm)，包封率高(95％)，载药量高(12％)，稳定性也显著提高。

根据本发明，所述药物还可以为紫杉醇、卡培他滨、多柔比星、吡柔比星、吉西他宾、依托泊苷、异长春花碱及长春瑞滨。

本发明的脂质体贮存形式是冻干粉形式。所制品为色泽均一、外观饱满块状物，临用前用注射用水稀释即可重建脂质体。这种制剂形式使脂质体稳定性大幅度提高，有利于脂质体产品的贮存及运输。

本发明采用新的脂质体制备方法及膜稳定性材料包载多西他赛。由于鱼油、胆固醇硫酸酯钠、十二烷基磺酸钠等膜稳定材料及pH调节剂的加入，尤其是胆固醇硫酸酯钠这种新型膜稳定材料的加入，从根本上改善了脂质体的质量，使得其载药量、包封率、粒度分布及稳定性明显优于文献报道。

在本发明方法的研制中，我们还发现，如膜材中不加入本发明所使用膜稳定材料中的胆固醇硫酸酯钠、十二烷基磺酸钠等离子型二亲物质，磷脂的溶剂溶解液无法与水或缓冲液乳化，而形成膏状物，在加入吐温-80，普朗尼克F-68等表面活性剂时仍无法分散，但通过加入胆固醇硫酸酯钠或十二烷基磺酸钠等离子型两亲物质，即可分散成粒径均匀的乳剂，且可通过改变超声时间，油水相比例等方式控制粒径，从而制备出粒径不同的脂质体。另外在制备过程中，还发现在脂质体材料中添加鱼油或鱼油乙酯，也使制备的脂质体载药量明显提高。

本发明创新性提出乳化挥散法，通过加入新型膜稳定材料如胆固醇硫酸酯钠，采用乳化与挥散两步工艺来制备脂质体，为脂质体制备方法的创新提供了借鉴。并用该方法成功制备了平均粒径小、粒径分布窄，载药量高、包封率高、稳定性好的脂质体。

具体实施方式

本发明具体实施方式，由以下实施实例说明，以下实例主要是用于进一步说明本发明的制备，但本发明保护范围不限于此。

实施例1

大豆卵磷脂                                        2.45g

鱼油乙酯                                          0.51g

多西他赛                                          0.33g

胆固醇硫酸酯钠                                    0.24g

PEG2000-DSPE                                      0.20g

二氯甲烷                                          20.0mL

Tris-HCl缓冲液(0.005M，pH＝7.6)                   100.0mL

制备过程

精密称取配方量的上述各组分，置50mL烧杯中，加入配方量的二氯甲烷，超声溶解；另取一250mL烧杯加入100mL Tris-HCl缓冲液(0.005M，pH＝7.6)。将二氯甲烷相倾入缓冲液相中，用细胞粉碎机超声处理3～10min，置恒温磁力搅拌器中，40～45℃水浴，并600r/min搅拌，有机溶剂挥尽后即得蓝色乳光透明的脂质体混悬液，过0.22μm的微孔滤膜除菌即得。

冻干配方

多西他赛脂质体混悬液                        90mL

乳糖                                        10g

Tris-HCl缓冲液(0.005M，pH＝7.6)             加至100mL

将配方量的乳糖加入多西他赛脂质体混悬液中，搅拌至溶解，加Tris-HCl缓冲液(0.005M，pH＝7.6)至100mL，过0.22μm的微孔滤膜除菌，分装于西林瓶中，然后至冻干机冷冻干燥即得。

冻干过程

取所制脂质体溶液5mL装入10mL容量的西林瓶中，用胶塞塞住。冻干机在冷阱温度为-40℃下预冷1h后，将这些管西林瓶放入冷阱中，预冻6h。待产品冻实后抽干30小时，稳定下抽干压力为50.5Pa，真空压盖。

实验结果1

按照实施例1制备样品三批，加水重建后进行理化常数研究，结果如下表1。

表1

实施例2

蛋黄卵磷脂                                          2.28g

鱼油乙酯                                            0.51g

多西他赛                                            0.33g

胆固醇硫酸酯钠                                      0.24g

PEG2000-DSPE                                        0.20g

二氯甲烷                                            20.0mL

Tris-HCl缓冲液(0.005M，pH＝7.6)                     100.0mL

其余过程同实施例1

实验结果2

按照实施例2制备样品，加水重建后进行理化常数研究，结果如下表2。

表2

实施例3

大豆卵磷脂                                          2.45g

二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯(1∶1重量比)    0.51g

多西他赛                                            0.33g

胆固醇硫酸酯钠                                      0.36g

PEG2000-DSPE                                        0.20g

二氯甲烷                                            20.0mL

Tris-HCl缓冲液(0.005M，pH＝7.6)                     100.0mL

其余过程同实施例1

按照实施例3制备样品，加水重建后进行理化常数研究，结果如下表3。

表3

实施例4

大豆卵磷脂与磷脂酰胆碱(重量比5∶1)                  2.45g

鱼油乙酯                                            0.26g

多西他赛                                            0.33g

胆固醇硫酸酯钠                                      0.24g

PEG2000-DSPE                                        0.15g

二氯甲烷                                            20.0mL

Tris-HCl缓冲液(0.005M，pH＝7.6)                     100.0mL

其余过程同实施例1

按照实施例4制备样品，加水重建后进行理化常数研究，结果如下表4。

表4

实施例5

大豆卵磷脂与氢化大豆卵磷脂(重量比5∶1)                2.45g

鱼油乙酯                                              0.41g

多西他赛                                              0.33g

胆固醇硫酸酯钠                                        0.24g

PEG2000-DSPE                                          0.20g

二氯甲烷                                              20.0mL

Tris-HCl缓冲液(0.005M，pH＝7.6)                       100.0mL

其余过程同实施例1

按照实施例5制备样品，加水重建后进行理化常数研究，结果如下表5。

表5

实施例6

大豆卵磷脂                                          2.45g

鱼油乙酯                                            0.51g

多西他赛                                            0.33g

胆固醇磷酸酯钠                                      0.24g

PEG2000-DSPE                                        0.20g

二氯甲烷                                            20.0mL

Tris-HCl缓冲液(0.005M，pH＝7.6)                     80.0mL

其余过程同实施例1

按照实施例6制备样品，加水重建后进行理化常数研究，结果如下表6。

表6

实施例7

大豆卵磷脂                                      2.45g

鱼油乙酯                                        0.51g

多西他赛                                        0.33g

胆固醇硫酸酯钠                                  0.24g

PEG2000-DSPE                                    0.15g

二氯甲烷                                        17.0mL

Tris-HCl缓冲液(0.005M，pH＝7.6)                 80.0mL

其余过程同实施例1

按照实施例7制备样品，加水重建后进行理化常数研究，结果如下表7。

表7

实施例8

大豆磷脂                                        2.45g

鱼油乙酯                                        0.51g

多西他赛                                        0.33g

十二烷基硫酸钠                                  0.15g

PEG2000-DSPE                                    0.20g

二氯甲烷                                        20.0mL

Tris-HCl缓冲液(0.005M，pH＝7.6)                 100.0mL

其余过程同实施例1

按照实施例8制备样品，加水重建后进行理化常数研究，结果如下表8。

表8

以上的实施例均证明：本发明的注射用多西他赛脂质体给药系统，制备的脂质体在载药量及稳定性方面都有一定优势，具有载药量高、稳定性好的特点，常规方法制备的多西他赛脂质体载药量很难达到5％以上，且很容易析出药物，而本发明的注射用多西他赛脂质体给药系统载药量可达10％以上，一般24小时内不会析出药物，且采用本发明中的制备方法制得的脂质体平均粒径小(50～150nm之间)、粒径分布窄(200nm)，包封率高(95％)，载药量高(12％)，稳定性也显著提高。

Claims (13)

1.一种注射用多西他赛脂质体，所述注射用多西他赛脂质体包含治疗有效量的多西他赛、磷脂膜材、膜稳定材料和药学上可接受的辅剂，其中，所述多西他赛与所述磷脂膜材及所述膜稳定材料的重量比为1:5:0.2～1:50:50，所述膜稳定材料包含离子型两亲物质和鱼油材料，所述鱼油材料选自由鱼油、鱼油乙酯、二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯组成的组中的一种或多种，且所述鱼油材料与所述磷脂膜材的重量比为1:4.5～1:12.5，所述离子型两亲物质为胆固醇硫酸酯钠、胆固醇磷酸钠、胆固醇磺酸钠、十二烷基磺酸钠或其混合物，且所述多西他赛与所述离子型两亲物质的重量比为1:0.2～1:10。

2.根据权利要求1所述的注射用多西他赛脂质体，其中，所述磷脂膜材为蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、氢化卵磷脂或其混合物。

3.根据权利要求1所述的注射用多西他赛脂质体，其中，所述膜稳定材料包含聚乙二醇衍生化磷脂。

4.根据权利要求3所述的注射用多西他赛脂质体，其中，在所述聚乙二醇衍生化磷脂的结构中，磷脂部分为选自由硬脂酸磷脂酰乙醇胺、胆固醇琥珀酸酯、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝胺酸、二磷脂酰甘油和缩酸磷脂组成的组中的一种或多种，且聚乙二醇的分子量为200～20000。

5.根据权利要求1所述的注射用多西他赛脂质体，其中，所述药学上可接受的辅剂包含抗氧剂、pH值调节剂和冻干保护剂。

6.根据权利要求5所述的注射用多西他赛脂质体，其中，所述pH值调节剂选自pH为4.0～9.0的Tris-HCl缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液或磷酸盐缓冲液。

7.根据权利要求5所述的注射用多西他赛脂质体，其中，所述冻干保护剂包括糖和多元醇，且所述冻干保护剂的量占所述注射用多西他赛脂质体的总重为1%～20%。

8.根据权利要求5所述的注射用多西他赛脂质体，其中，所述冻干保护剂为乳糖。

9.根据权利要求1所述的多西他赛脂质体，其中，所述脂质体是粒径为10nm～1000nm并且多西他赛的制剂最终浓度为1～10mg/mL的冻干粉形式的制剂。

10.一种权利要求1所述的注射用多西他赛脂质体的制备方法，其包括：

a)乳化步骤：将多西他赛、磷脂膜材和膜稳定材料溶解于有机溶剂中，然后倒入水相中，经乳化设备乳化形成乳剂；和

b)挥散步骤：挥散除去有机溶剂，然后包封多西他赛于脂质体内。

11.根据权利要求10所述的注射用多西他赛脂质体的制备方法，其中，在所述乳化步骤中，所述乳剂为通过超声、均质、纳米机处理成的O/W型乳剂。

12.根据权利要求10所述的注射用多西他赛脂质体的制备方法，其中，所述有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙醚或乙酸乙酯。

13.根据权利要求10所述的注射用多西他赛脂质体的制备方法，可用于制备其它抗癌药紫杉醇、长春瑞宾、异长春花碱。