CN109913577B - 与小麦抗条锈病基因Yr1152紧密连锁的分子标记及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及与小麦抗条锈病基因Yr1152紧密连锁的分子标记及其应用。本发明提供小麦抗条锈病新基因Yr1152的精细定位以及与Yr1152基因紧密连锁的2个STS分子标记ID250和ID260。本发明提供的STS分子标记及其特异性引物对可用于高效、快速、准确鉴定抗条锈病小麦品种以及小麦品种是否含有抗条锈病基因Yr1152，且不受小麦品种的限制，在小麦抗条锈病基因Yr1152的克隆和检测、抗条锈病小麦鉴定和抗条锈病小麦育种中具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及与小麦抗条锈病基因Yr1152紧密连锁的分子标记及其应用。
背景技术
小麦是重要的粮食作物，条锈病是影响小麦产量最主要的病害之一。合理利用小麦自身抗条锈病基因，尤其是育成品系中的有效基因，利用与其紧密连锁分子标记辅助育种，对解析小麦抗条锈病机理及培育抗条锈病新品种的意义重大。
目前已发现的小麦抗条锈病基因有上百个，在小麦的各条染色体均有分布。国际上已正式命名84个抗条锈病基因，这些基因存在于81个位点上，多数来源于普通小麦，但育种中持续有效的大部分基因来源于小麦近缘种属。
分子标记是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记，是DNA水平遗传多态性的直接的反映。与其它几种遗传标记(形态学标记、生物化学标记、细胞学标记)相比，DNA分子标记具有的优越性包括：大多数分子标记为共显性，对于隐性性状的选择十分便利；基因组变异极其丰富，分子标记的数量几乎是无限的；在生物发育的不同阶段，不同组织的DNA都可用于分子标记分析；分子标记揭示来自DNA的变异；表现为中性，不影响目标性状的表达，与不良性状无连锁；检测手段简单、迅速。
因此，开发小麦抗条锈病新基因以及与之紧密连锁的分子标记对于小麦抗条锈病育种具有重要意义。
发明内容
为了解决现有技术中存在的技术问题，本发明的目的是提供与小麦抗条锈病新基因Yr1152紧密连锁的分子标记及其应用。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：发明人前期研究中通过抗病性遗传分析、混池RNA测序(BSR-Seq)和比较基因组分析，在自主选育的小麦品系中育1152中发现一个新的显性抗条锈病单基因Yr1152，该基因位于小麦5BL染色体上(张怀志等，2017，小麦抗条锈病基因关联分析和BSR-Seq分析，第八届全国小麦基因组学及分子育种大会摘要集)。本发明通过以高感条锈病小麦品种农大399为母本、高抗条锈病小麦品系中育1152为父本的进行杂交，以杂交F2单株及F2:3家系为作图群体，通过初步定位和精细定位，将小麦抗条锈病基因Yr1152定位于小麦5BL染色体635,089,543bp～638,837,351bp区间内，覆盖3.75Mb的基因组区间。针对Yr1152基因，本发明开发了2个与Yr1152基因紧密连锁的STS分子标记ID250和ID260，其中ID250采用序列如SEQ ID NO.1-2所示的引物对扩增，ID260采用序列如SEQ ID NO.3-4所示的引物对扩增。利用STS标记ID250和ID260在农大399为母本、中育1152为父本的杂交F2代单株及自交后代中筛选抗病小麦，符合率达100％。
具体地，本发明的技术方案如下：
首先，本发明提供与小麦抗条锈病基因Yr1152紧密连锁的分子标记，所述Yr1152位于小麦5BL染色体635,089,543bp～638,837,351bp区间内，所述分子标记包括采用序列如SEQ ID NO.1-2所示的引物对扩增得到的分子标记ID250，以及采用序列如SEQ ID NO.3-4所示的引物对扩增得到的分子标记ID260。
上述引物具体序列如下：
ID250正向引物：SEQ ID NO.1：GGTGATGCTGTTCGTGTGTT；
ID250反向引物：SEQ ID NO.2：ACTTCGGAAAATTGCCACCC；
ID260正向引物：SEQ ID NO.3：CGTTTGAGATGGTTTGGGCA；
ID260反向引物：SEQ ID NO.4：TCAGAAACGAAGGGAGCAGT。
针对上述分子标记，本发明提供用于检测与小麦抗条锈病基因Yr1152紧密连锁的分子标记的特异性引物对，包括如下任一种：
(1)序列如SEQ ID NO.1-2所示的引物对；
(2)序列如SEQ ID NO.3-4所示的引物对；
(3)序列如SEQ ID NO.1-2所示的引物对以及序列如SEQ ID NO.3-4所示的引物对。
进一步地，本发明提供一种小麦抗条锈病基因的检测试剂盒，其包含序列如SEQID NO.1-2所示的引物对和/或序列如SEQ ID NO.3-4所示的引物对。
本发明还提供所述与小麦抗条锈病基因Yr1152紧密连锁的分子标记或用于检测所述分子标记的特异性引物对或含有所述特异性引物对的试剂盒的如下任一应用：
(1)在鉴定或辅助鉴定抗条锈病小麦中的应用；
(2)在小麦抗条锈病基因Yr1152的定位、克隆或检测中的应用；
(3)在小麦抗条锈病分子标记辅助育种或小麦种质改良中的应用。
本发明还提供一种小麦抗条锈病基因Yr1152的检测方法，其为：利用用于检测所述分子标记的特异性引物或含有所述特异性引物的试剂盒进行PCR扩增，根据PCR扩增结果判断待测小麦是否含有小麦抗条锈病基因Yr1152或是否具有条锈病抗性。
作为优选，所述小麦抗条锈病基因Yr1152的检测方法包括如下步骤：
(1)提取待测小麦的基因组DNA；
(2)以所述待测小麦的基因组DNA为模板，利用用于检测所述分子标记的特异性引物或含有所述特异性引物的试剂盒进行PCR扩增；
(3)电泳检测PCR扩增产物，根据条带带型判断待测小麦是否含有小麦抗条锈病基因Yr1152或是否具有条锈病抗性。
作为优选，上述步骤(2)中，所述PCR扩增的反应程序如下：94～98℃预变性2min；94～98℃变性30s，55℃退火30～45s，72℃延伸0.5～1min，25～35个循环；72℃延伸5～10min。
上述步骤(3)中，所述判断待测小麦是否含有小麦抗条锈病基因Yr1152的标准为：若利用如SEQ ID NO.1-2所示的引物对进行PCR扩增得到的扩增产物包括大小为747bp的条带，和/或，若利用如SEQ ID NO.3-4所示的引物对进行PCR扩增得到的扩增产物包括大小为677bp的条带，则将所述待测小麦含有小麦抗条锈病基因Yr1152，候选为抗条锈病小麦。
本发明的有益效果在于：本发明提供小麦抗条锈病新基因Yr1152的精细定位以及与Yr1152基因紧密连锁的2个STS分子标记ID250和ID260，同时提供了用于检测这2个分子标记的特异性引物对。本发明提供的STS分子标记及其特异性引物对可用于高效、快速、准确鉴定小麦品种是否含有抗条锈病基因Yr1152以及抗条锈病小麦(2个STS分子标记无论单独使用还是同时使用，鉴定抗条锈病小麦的准确率均达到99.5％以上)，且不受小麦品种的限制，在小麦抗条锈病基因Yr1152的克隆和检测、抗条锈病小麦鉴定和抗条锈病小麦育种中具有重要意义。
附图说明
图1为本发明实施例1中抗条锈病基因Yr1152比较基因组遗传连锁图谱。
图2为本发明实施例2中使用STS分子标记ID250的特异性引物对(SEQ ID NO.1-2)扩增待测小麦的结果，其中，M：DNA maker；1：农大399；2：F1单株；3：中育1152；4-24：F2群体单株。
图3为本发明实施例2中使用STS分子标记ID260的特异性引物对(SEQ ID NO.3-4)扩增待测小麦的结果，其中，M：DNA maker；1：农大399；2：中育1152；3：F1单株；4-24：F2群体单株。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
其中，6％聚丙烯酰胺凝胶的制备方法如下：
57克丙烯酰胺(Acrylamide)，3克双苯酰亚胺(Bis)，420克尿素(Urea)，100毫升10×TBE缓冲液(溶剂为水，溶质及其浓度为tris 108g/L、硼酸55g/L、EDTA 7.43g/L)，加ddH2O至1000毫升。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的STS标记及其引物对的名称是一致的，如STS标记ID250的引物对为ID250。
实施例1与抗条锈病基因Yr1152紧密连锁的分子标记的获得和Yr1152基因的精细定位
1、群体构建
以农大399(高感条锈病小麦品种，冀审麦20120004)为母本、中育1152(高抗条锈病小麦品系)材料(张怀志等，2017，小麦抗条锈病基因关联分析和BSR-Seq分析，第八届全国小麦基因组学及分子育种大会摘要集)为父本，分别杂交后产生F1代，2013-2014年将F1代植株进行自交，于2014年种植所有F2种子，2015年获得F2的262粒种子(初步定位群体)，2015-2016年全部F2种植成F2：3家系，于2016年通过F2：3家系表现型调查明确F2代表现型；2015-2016年种植农大399/中育1152F1代植株自交，于2016年种植所有F2种子，2017年获得F2的1286粒种子(精细定位群体)，2016-2017年全部F2种植成F2：3家系，于2017年通过F2：3家系表现型调查明确F2代表现型。
2、田间调查及样品采集
对上述步骤1中田间种植的母本、父本、F1代植株、F2代植株和F2：3家系植株进行性状调查，春天返青期用覆膜法于小麦拔节期喷洒CYR34菌种孢子悬浮液接种，待感病对照农大399充分发病后,调查供试材料的抗病性状并记录。抗病性分6级，其中免疫(0)、近免疫(0；)、高度抗病(1)、中度抗病(2)为抗病表型，中度感病(3)、高度感病(4)为感病表型，具体标准为：
免疫：整个植株叶片无明显症状，即无条锈菌夏孢子堆、无褪绿斑、无坏死；
近免疫：整个植株叶片无条锈菌夏孢子堆、无或者零星褪绿斑、无坏死；
高度抗病：植株叶片无条锈菌夏孢子堆、有褪绿斑；
中度抗病：植株叶片有褪绿斑和少量条锈菌夏孢子堆，褪绿斑面积大于夏孢子堆面积；
中度感病：植株叶片有褪绿斑和条锈菌夏孢子堆，夏孢子堆面积大于褪绿斑面积；
高度感病：植株叶片布满条锈菌夏孢子堆，叶片大面积坏死。
田间调查结果如下：
母本表型：植株叶片布满条锈菌夏孢子堆，叶片大面积坏死(即高度感病)；
父本表型：整个植株均绿叶，叶片无条锈菌夏孢子堆、无或者少量褪绿斑、无坏死(即高度抗病到近免疫)；
F1代表型：植株均绿叶，叶片无条锈菌夏孢子堆，无或有少量褪绿斑(即高度抗病)；
F2代表型：有三种：与母本表型一致、与父本表型一致、或与F1代植株表型一致。
调查完成后，摘取较小的嫩叶作为DNA提取的材料，-80℃保存，以备DNA的提取。
3、亲本和F2代群体基因组DNA的提取
将上述步骤2采集的亲本和F2代群体各单株的叶片分别按常规方法提取基因组DNA。
4、初步定位
(1)抗条锈病性状初步定位与引物筛选
利用BSR-Seq对中育1152和农大399两个品种(系)所构建的F2:3家系中40个纯合抗病家系、40个纯合感病家系进行分析，得到66个已知染色体位置候选SNP，有44个分布在第5部分同源群上，其中31个(47.0％)分布在5BL染色体上，表明抗条锈病基因Yr1152位于小麦5B染色体长臂，利用已公布小麦5B染色体上的69个SSR引物对(Somers DJ,Isaac P,Edwards K(2004)A high-density microsatellite consensus map for bread wheat(Triticumaestivum L.).TheorAppl Genet,109:1105-1114)结合进行初步筛选。
(2)SSR标记多态性筛选
分别用步骤(1)的69个引物对、并分别以父本和母本的基因组DNA为模板，进行PCR扩增，选择扩增产物在父本和母本间存在多态性的SSR标记；
再用在父本和母本间存在多态性的SSR标记分别对F2代中的6个抗条锈病和6个感条锈病单株的基因组DNA进行PCR扩增进一步验证，最终筛选获得在抗条锈病和感条锈病表型单株间存在多态性的SSR标记4个。
(3)SSR标记与目标性状或目标基因的连锁分析
在2015年种植F2代群体中，选取表型为抗条锈病和感条锈病数量之比约为3:1的44个单株的基因组DNA，用步骤(2)最终筛选的4个SSR引物对分别进行PCR扩增，记录每个引物对对每个单株的扩增结果(即带型或产物大小)，将带型结果与性状进行比对。结果显示，在这44个单株中，这4个引物对在感病单株带型结果、性状均与母本相一致；在抗病单株带型结果分为两类：一类带型结果、性状均与父本相一致，一类带型结果、性状均与F1相一致，证明这4个引物对与目的基因是连锁的，4个引物对分别为Xbarc142-5BL、Xbarc232-5BL、Xwmc28-5BL和Xbarc59-5BL，在小麦5B染色体上相对位置与序列如表1所示。
表1初步定位得到的与Yr1152连锁的SSR标记
注：表1中的产物大小是指以中育1152抗条锈病材料的基因组DNA为模板的扩增结果。
然后，取2015年种植F2群体中的所有植株(共262个)的基因组DNA，分别用这4个引物对进行PCR扩增，记录带型并统计SSR标记与目的基因Yr1152之间发生单交换植株数、双交换植株数、不交换植株数，计算重组率，结果如表2所示。
不交换：所有引物对带型结果与性状一致；
左单交换：左侧(着丝粒侧)引物对带型结果与性状不一致，右侧(长臂端粒侧)引物对带型结果与性状一致；
右单交换：右侧(长臂端粒侧)引物对带型结果与性状不一致，左侧(着丝粒侧)引物对带型结果与性状一致；
双交换：中间引物对带型结果与性状一致，两侧引物对带型结果与性状不一致；
重组率＝(2×双交换数+单交换数)/(总数×2)×100％。
表2初步定位得到的SSR标记在F2代初步定位群体植株中重组情况
| SSR引物对 | 左单交换数 | 右单交换数 | 双交换数 | 不交换数 | 总数 | 重组率(％) |
| Xbarc142 | 99 | 0 | 0 | 163 | 262 | 18.9 |
| Xbarc232 | 21 | 0 | 0 | 241 | 262 | 4.0 |
| Xwmc28 | 0 | 28 | 0 | 234 | 262 | 5.3 |
| Xbarc59 | 0 | 59 | 0 | 203 | 262 | 11.3 |
表1和表2的结果表明：基因Yr1152位于5BL染色体的SSR标记Xbarc232-5BL与Xwmc28-5BL之间，遗传区间为9.3cM，与SSR标记Xbarc232-5BL、Xwmc28-5BL的遗传距离分别为4.0cM与5.3cM，与5BL已定位的其他已知抗条锈病基因区间不同。
5、精细定位
(1)根据Yr1152基因初步定位的9.3cM区间和BSR-Seq结果，结合UC Davis的粗山羊草SNP遗传连锁图谱和物理图谱，通过同源比对找到粗山羊草基因组5D染色体12.2Mb的物理区间。用Primer5软件设计得到STS引物，共计300个引物对。
(2)按照步骤4中(2)的方法，从步骤(1)获得的300对STS引物中筛选得到9对在亲本间具有多态性的引物；
(3)按照步骤4中(3)的方法，将步骤(2)筛选得到9对引物在精细定位F2群体中进行连锁性分析，得到9对引物是与目的基因Yr1152紧密连锁的(表3)；用这9对引物分别对初步定位群体中的262个单株的基因组DNA进行PCR扩增和精细定位群体1286个单株的基因组DNA进行PCR扩增，记录带型并统计STS标记与目的基因Yr1152之间发生单交换植株数、双交换植株数、不交换植株数，计算重组率，结果如表4所示。
表3精细定位得到的与Yr1152连锁的STS标记
注：表3中的产物大小是指以中育1152抗条锈病材料的基因组DNA为模板的扩增结果。
表4精细定位得到的STS标记在F2代精细定位群体植株中的重组情况
| STS引物对 | 左单交换数 | 右单交换数 | 双交换数 | 不交换数 | 总数 | 重组率(％) |
| ID163 | 120 | 0 | 0 | 1166 | 1286 | 4.67 |
| ID170 | 113 | 0 | 0 | 1173 | 1286 | 4.39 |
| ID223 | 99 | 0 | 0 | 1187 | 1286 | 3.85 |
| ID244 | 13 | 0 | 0 | 1273 | 1286 | 0.51 |
| ID247 | 13 | 0 | 0 | 1273 | 1286 | 0.51 |
| ID250 | 10 | 0 | 0 | 1276 | 1286 | 0.39 |
| ID260 | 0 | 5 | 0 | 1281 | 1286 | 0.19 |
| ID262 | 0 | 11 | 0 | 1275 | 1286 | 0.43 |
| ID266 | 0 | 11 | 0 | 1275 | 1286 | 0.43 |
抗条锈病基因Yr1152比较基因组遗传连锁图谱如图1所示。表3、表4和图1的结果表明：基因Yr1152位于ID250和ID260两个标记之间，同源对应粗山羊草物理距离为5.49Mb，对应小麦品种中国春参考基因组序列物理区间为3.75Mb。
实施例2利用STS标记ID250和ID260鉴定或辅助鉴定抗条锈病小麦
1、待测小麦：中育1152和农大399及其杂交后产生F1代中的单株进行自交得到F2代中的1286个单株。
2、将步骤1待测小麦种植于大田，按照实施例1步骤2的方法调查各单株的有无抗条锈病性状；
3、取步骤2待测小麦的叶片，分别按常规方法提取基因组DNA；
4、PCR检测及记录
(1)采用STS标记ID250的引物对ID250(由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的单链DNA组成)对待测小麦的基因组DNA进行PCR扩增。
反应体系：10×PCR Buffer 1μL，2.5mMdNTPs 0.2μL，10mM正向引物F(SEQ IDNO.1)0.2μL，10mM反向引物R(SEQ ID NO.2)0.2μL，DNA模板(30ng/μL)1μL，Taq DNA聚合酶(5U/μL，Taq DNA聚合酶及配套的Buffer、dNTPs由宝日医生物技术(北京)有限公司购买，RR001B)0.1μL，用水补足至10μL。
反应程序：95℃预变性2min；(94℃变性30s；55℃退火45s；72℃延伸1min)32个循环；72℃延伸5min。
将扩增产物用6％聚丙烯酰胺凝胶(测序胶)进行检测，根据扩增产物的大小判断该小麦是否为抗条锈病小麦。
抗条锈病性状是指接种条锈病菌，感病对照充分发病后，植株叶片表现无条锈菌夏孢子堆或者有少量条锈菌夏孢子堆但褪绿斑叶面积占比大于夏孢子堆叶面积占比(即中度抗病到免疫)。
根据PCR扩增产物结果判断抗条锈病小麦的标准如下：若引物对ID250对待测小麦的基因组DNA的扩增产物包括大小为747bp的条带，则该待测小麦为或候选为抗条锈病小麦；若引物对ID250对待测小麦的基因组DNA的扩增产物包括大小为747bp的条带，则该待测小麦不为或候选不为抗条锈病小麦。
部分扩增产物的电泳结果如图2所示，其中，M：DNA maker；1：农大399；2：F1单株；3：中育1152；4-24：F2群体单株。
(2)采用STS标记ID260的引物对ID260(由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的单链DNA组成)对待测小麦的基因组DNA进行PCR扩增。
反应体系：10×PCR Buffer 1μL，2.5mMdNTPs 0.2μL，10mM正向引物F(SEQ IDNO.3)0.2μL，10mM反向引物R(SEQ ID NO.4)0.2μL，DNA模板(30ng/μL)1μL，Taq DNA聚合酶(5U/μL，Taq DNA聚合酶及配套的Buffer由宝日医生物技术(北京)有限公司购买，RR001B)0.1μL，用水补足至10μL。
反应程序：95℃预变性2min；(94℃变性30s；55℃退火45s；72℃延伸1min)32个循环；72℃延伸5min。
将扩增产物用6％聚丙烯酰胺凝胶(测序胶)进行检测，根据扩增产物的大小判断该小麦是否为抗条锈病小麦。
抗条锈病性状是指接种条锈病菌，感病对照充分发病后，植株叶片表现无条锈菌夏孢子堆或者有少量条锈菌夏孢子堆但褪绿斑叶面积占比大于夏孢子堆叶面积占比(即中度抗病到免疫)。
根据PCR扩增产物结果判断抗条锈病小麦的标准如下：若引物对ID260对待测小麦的基因组DNA的扩增产物包括大小为677bp的条带，则该待测小麦为或候选为抗条锈病小麦；若引物对ID260对待测小麦的基因组DNA的扩增产物不包括大小为677bp的条带，则该待测小麦不为或候选不为抗条锈病小麦。
部分检测结果如图3所示，其中，M：DNA maker；1：农大399；2：中育1152；3：F1单株；4-24：F2群体单株。
5、检测结果比对
将步骤4中的PCR扩增检测结果与田间调查表型进行比对，分析采用STS分子标记检测的准确性，结果如表5和表6所示。
表5 STS标记ID250和ID260在F2代精细定位群体植株中的鉴定
| 植株数目 | 植株编号 | 类别 | 田间表型 | ID250 | ID260 |
| 302 | - | 不交换 | R | A | A |
| 314 | - | 不交换 | S | B | B |
| 655 | - | 不交换 | H | H | H |
| 1 | 8 | 左单交换 | H | B | H |
| 1 | 61 | 左单交换 | R | H | A |
| 1 | 73 | 左单交换 | R | H | A |
| 1 | 348 | 左单交换 | S | H | B |
| 1 | 373 | 左单交换 | H | B | H |
| 1 | 412 | 左单交换 | R | H | A |
| 1 | 630 | 左单交换 | H | A | H |
| 1 | 696 | 左单交换 | S | H | B |
| 1 | 832 | 左单交换 | R | H | A |
| 1 | 1050 | 左单交换 | H | A | H |
| 1 | 314 | 右单交换 | H | H | B |
| 1 | 472 | 右单交换 | S | B | H |
| 1 | 491 | 右单交换 | H | H | A |
| 1 | 583 | 右单交换 | R | A | H |
| 1 | 1183 | 右单交换 | R | A | H |
注：表5中田间表型R、S、H分别指抗病型、感病型、杂合型；分子标记对应的A、B、H分别指抗病型、感病型、杂合型。
表6初步定位和精细定位得到的标记在F2代精细定位群体植株中的鉴定情况
表5和表6结果表明，将步骤4中步骤(1)引物对ID250鉴定候选为抗条锈病小麦的结果与步骤2的田间调查结果进行比较，检测结果符合率为99.61％；
将步骤4中步骤(2)引物对ID260鉴定候选为抗条锈病小麦的结果与步骤2的田间调查结果进行比较，检测结果符合率为99.81％；
将步骤4中步骤(1)和(2)2个引物对均候选为抗条锈病小麦的结果与步骤2的田间调查结果进行比较，检测结果符合率为100％。
上述结果表明，本发明提供的ID250(SEQ ID NO.1-2)和ID260(SEQ ID NO.3-4)2个分子标记扩增引物对，无论是单独还是同时使用，用来鉴定抗条锈病小麦的准确率都较高，准确率均达到99.5％以上。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 中国农业科学院棉花研究所
<120> 与小麦抗条锈病基因Yr1152紧密连锁的分子标记及其应用
<130> KHP191111542.5
<160> 26
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ggtgatgctg ttcgtgtgtt 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
acttcggaaa attgccaccc 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
cgtttgagat ggtttgggca 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tcagaaacga agggagcagt 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gcttcttgat cggacgtgtc 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
atgatcaggc catgggtgaa 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
gccatcatca gcagacacag 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
atgaggagac ggacacacag 20
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
cgttcttgaa ctcgtagccg 20
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
atagaagcac gtccacccaa 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
ttgcaagggt aaaagtggcc 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
caccttcaca tcagtagcgc 20
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
ggtcacagat ccaggacaca 20
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
acatccatct gatccccgtc 20
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
gacgggatca tggaaagcac 20
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
ccaaatcgcc gttctctctg 20
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
gatcatggaa agcaccgcat 20
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
acgaaacaga accagccaac 20
<210> 19
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
ccggtgagag gactaaaa 18
<210> 20
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
ggcctgtcaa ttatgagc 18
<210> 21
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
cgcatccaac catccccacc caaca 25
<210> 22
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
cgcagtagat ccaccacccc gccaga 26
<210> 23
<211> 22
<212> DNA
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atcacgcatg tctgctatgt at 22
<210> 24
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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attagaccat gaagacgtgt at 22
<210> 25
<211> 24
<212> DNA
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gcgttggcta atcatcgttc cttc 24
<210> 26
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
agcaccctac ccagcgtcag tcaat 25
Claims (4)
1.与小麦抗条锈病基因Yr1152紧密连锁的分子标记在预测小麦的条锈病抗性中的应用，所述Yr1152位于小麦5BL染色体635,089,543bp~638,837,351bp区间内，所述分子标记为采用序列如SEQ ID NO.1-2所示的引物对扩增得到的分子标记和采用序列如SEQ IDNO.3-4所示的引物对扩增得到的分子标记。
2.与小麦抗条锈病基因Yr1152紧密连锁的分子标记的特异性引物对或含有所述特异性引物对的检测试剂盒在鉴定或辅助鉴定抗条锈病小麦中的应用，所述Yr1152位于小麦5BL染色体635,089,543bp~638,837,351bp区间内，所述分子标记为采用序列如SEQ IDNO.1-2所示的引物对扩增得到的分子标记和采用序列如SEQ ID NO.3-4所示的引物对扩增得到的分子标记，所述特异性引物对为序列如SEQ ID NO.1-2所示的引物对和序列如SEQID NO.3-4所示的引物对。
3.与小麦抗条锈病基因Yr1152紧密连锁的分子标记或所述分子标记的特异性引物对或含有所述特异性引物对的检测试剂盒在小麦抗条锈病分子标记辅助育种中的应用，所述Yr1152位于小麦5BL染色体635,089,543bp~638,837,351bp区间内，所述分子标记为采用序列如SEQ ID NO.1-2所示的引物对扩增得到的分子标记和采用序列如SEQ ID NO.3-4所示的引物对扩增得到的分子标记，所述特异性引物对为序列如SEQ ID NO.1-2所示的引物对和序列如SEQ ID NO.3-4所示的引物对。
4.与小麦抗条锈病基因Yr1152紧密连锁的分子标记或所述分子标记的特异性引物对或含有所述特异性引物对的检测试剂盒在小麦抗条锈病种质改良中的应用，所述Yr1152位于小麦5BL染色体635,089,543bp~638,837,351bp区间内，所述分子标记为采用序列如SEQID NO.1-2所示的引物对扩增得到的分子标记和采用序列如SEQ ID NO.3-4所示的引物对扩增得到的分子标记，所述特异性引物对为序列如SEQ ID NO.1-2所示的引物对和序列如SEQ ID NO.3-4所示的引物对。
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| GR01 | Patent grant | ||
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