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CN109384790B - 成纤维细胞生长因子受体抑制剂及其用途 - Google Patents

成纤维细胞生长因子受体抑制剂及其用途 Download PDF

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CN109384790B CN201810891744.5A CN201810891744A CN109384790B CN 109384790 B CN109384790 B CN 109384790B CN 201810891744 A CN201810891744 A CN 201810891744A CN 109384790 B CN109384790 B CN 109384790B
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Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及式I所示的成纤维细胞生长因子受体(FGFR)不可逆抑制剂，其药学上可接受的盐、立体异构体，本发明还涉及这些化合物的药物制剂、药物组合物及其应用。R1、R2、R3、R4、m、X、warhead1、warhead2如说明书中所定义。本发明化合物对成纤维细胞生长因子受体具有高效的和高选择性的抑制作用，可以应用于FGF/FGFR异常介导的相关疾病治疗，尤其是在癌症疾病方面的治疗。

Description

成纤维细胞生长因子受体抑制剂及其用途
本申请要求于2017年08月08日提交中国专利局、申请号为201710672089.X发明名称为“成纤维细胞生长因子受体抑制剂及其用途”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及成纤维细胞生长因子受体(FGFR)不可逆抑制剂，或其药学上可接受的盐、立体异构体及其应用。
背景技术
酪氨酸激酶受体在肿瘤血管的生成、肿瘤细胞的增殖、迁移以及浸润方面发挥着重要的作用，目前已经相继有100多个酪氨酸激酶抑制剂药物上市或进入临床试验阶段。这些小分子酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)多以可逆性抑制的方式来发挥作用，由此带来了一些缺点：①选择性不够好，②药效不够强烈和持久，③易引发耐药性。因此，促使科学家将研究方向集中在不可逆的TKI的开发上。
不可逆性TKI通常以可逆性TKI的骨架结构为原型，在合适的位置连接上亲电的功能团，该亲电的功能团可以与酪氨酸激酶的ATP结合域附近的半胱氨酸残基(富电子的亲核结构)发生亲电反应形成共价键，从而不可逆的抑制激酶活性。与可逆性TKI相比，不可逆性TKI具有诸多独特的优势：①不可逆性TKI以永久性灭活的方式来发挥作用，这种抑制酶活性的方式使得其作用更为强烈而持久，即使药物分子从循环系统中被完全清除掉，其药效也仍能维持。②因为其与激酶的结合并不存在ATP竞争性，也使得激酶突变的可能性降低而减轻或规避了耐药性的产生。③因其分子结构上的亲电功能团可选择性地与半胱氨酸残基上的巯基反应，因此不可逆性TKI的选择性非常高。基于以上特点，开发不可逆的TKI正逐渐成为研发的热点方向。
成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor,FGFR)是属于酪氨酸激酶受体家族中的重要一员，FGFR包含4个成员，即FGFR-1、FGFR-2、FGFR-3和FGFR-4。它们多为单链的糖蛋白分子，分子质量在110-150kd，结构分为胞外区，跨膜区和胞内区组成。在正常生理条件下，FGFR与其配体成纤维细胞生长因子(fibroblast growthfactor，FGF)结合，FGFR 发生二聚体化以及自身的磷酸化，激活下游的信号通路，如JAK/STAT通路、磷脂酶C通路、磷酸酰肌醇-3-激酶PI3K以及MAPK信号通路，以上信号通路在肿瘤生长和血管发生过程中发挥着重要的作用。FGFR的异常与多种肿瘤的发生有密切关系，如膀胱癌(包括泌尿道上皮癌等)、乳腺癌、胆管癌、胃癌、卵巢癌、唾腺癌、结直肠癌、非小细胞肺癌、小细胞肝癌、肝癌、子宫内膜癌、宫颈癌、胰腺癌、横纹肌肉瘤、多发性骨髓瘤、前列腺癌、食道癌、胶质瘤、骨髓增生异常综合征、侏儒综合征、肾盂肿瘤、软骨肉瘤、黑色素瘤等。
尽管目前已经公开了一系列的FGFR的不可逆抑制剂的专利申请，如WO2015120049专利公开了化合物PRN1371，目前处于临床I期，化学结构如下：
Figure BDA0001757113050000021
目前尚无FGFR的不可逆抑制剂药物，尤其是对泛(FGFR)pan-FGFR具有高选择性的不可逆抑制剂上市。
发明内容
本发明的一个目的是提供一类新型的pan-FGFR不可逆抑制剂，此类抑制剂对pan-FGFR 具有很好的抑制活性，为由pan-FGFR异常介导的疾病的治疗提供了可能性。本发明还提供上述FGFR抑制剂的应用。
本发明采用的技术方案如下：
通式(I)所示的成纤维细胞生长因子受体(FGFR)不可逆抑制剂，或其药学上可接受的盐、立体异构体：
Figure BDA0001757113050000022
其中，
warhead1和warhead2指的是能够与亲核试剂形成共价键的部分，warhead1和warhead2不同时存在；
X选自C或N，当X为C时，
Figure BDA0001757113050000023
代表双键，当X为N时，
Figure BDA0001757113050000024
代表单键；
当warhead1存在时，R1选自C1-6亚烷基、C2-8亚烯基、C2-8亚炔基、卤代C1-6亚烷基或 -(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p-；当warhead1不存在时，R1选自氢、C1-6烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、卤代C1-6烷基或-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p；
当warhead2存在时，R2选自C1-6亚烷基、C2-8亚烯基、C2-8亚炔基、卤代C1-6亚烷基或 -(L3)q-Cy3-；当warhead2不存在时，R2选自氢、C1-6烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、卤代C1-6烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy1、Cy2分别独立地选自如下基团或其二价基：经一至多个Ra取代，或未经取代的3-12 元环烷基、3-12元环烯基、3-12元杂环基、芳基或5-10元杂芳基，成环碳原子可任选被氧化为C(O)，成环硫原子可任选被氧化为S(O)、S(O)2或S(O)(N)；
Cy3选自如下基团或其二价基：经一至多个Rb取代的，或未经取代的3-12元环烷基、3-12 元环烯基、3-12元杂环基、芳基或5-10元杂芳基，成环碳原子可任选被氧化为C(O)，成环硫原子可任选被氧化为S(O)、S(O)2或S(O)(N)；
Ra、Rb分别独立地选自：
(i)氢；
(ii)羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素、C2-6烯基羰基氨基或＝CH2；
(iii)任选被羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、(C1-6烷基)2氨基、C1-6烷基羰基氨基、C1-6烷基磺酰氨基或3-8 元杂环基取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、(C1-6烷基)2氨基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、C2-8烯基、C2-8炔基、C1-6烷基磺酰基或C1-6烷基硫基，所述的3-8元杂环基可任选被羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基或(C1-6烷基)2氨基取代；
(iv)任选被羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基或(C1-6烷基)2氨基取代的3-8元环烷基、5-8元环烯基或3-8元杂环基；
或
(v)氨基-羰基、氰基-羰基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基氨基-羰基、(C1-6烷基)2氨基-羰基、 C1-6烷氧基-羰基、3-8元环烷基-羰基或3-8元杂环基-羰基；
R3选自氢、C1-6烷基、C1-6烷基氨基C1-6烷基、(C1-6烷基)2氨基C1-6烷基、卤代C1-6烷基、卤代C2-8烯基、C2-8炔基，或任选被取代基Q1取代的3-12元环烷基、3-12元环烯基、3-12 元杂环基、芳基或5-10元杂芳基，所述取代基Q1选自：羟基、氨基、氰基、硝基、卤素、羧基、酰胺基、氨基羰基、氨基磺酰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、(C1-6烷基)2氨基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、C2-8烯基、C2-8炔基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基羰基氨基、(C1-6烷基)2羰基氨基、C1-6烷基氨基羰基、(C1-6烷基)2氨基羰基、C1-6烷基氨基磺酰基、(C1-6烷基)2氨基磺酰基或C1-6烷氧基C1-6烷氧基；
R4选自氢、羟基、氨基、氰基、硝基、卤素、羧基、酰胺基、氨基羰基、氨基磺酰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、(C1-6烷基)2氨基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、 C2-8烯基、C2-8炔基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基羰基氨基、(C1-6烷基)2羰基氨基、C1-6烷基氨基羰基、(C1-6烷基)2氨基羰基、C1-6烷基氨基磺酰基、(C1-6烷基)2氨基磺酰基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基，或任选被取代基Q2取代的3-12元环烷基、3-12元环烯基、3-12元杂环基、芳基或 5-10元杂芳基，所述取代基选自：羟基、氨基、氰基、硝基、卤素、羧基、酰胺基、氨基羰基、氨基磺酰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、(C1-6烷基)2氨基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、C2-8烯基、C2-8炔基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基羰基氨基、(C1-6烷基)2羰基氨基、C1-6烷基氨基羰基、(C1-6烷基)2氨基羰基、C1-6烷基氨基磺酰基、(C1-6烷基)2氨基磺酰基或C1-6烷氧基C1-6烷氧基；或者，两个相邻的R4与它们分别连接的原子一起形成3-8元环烷基、3-8元环烯基、3-8元杂环基、芳基或5-6元杂芳基；
L1、L2、L3分别独立地为键、-N(Rc)-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2NH-、-C(O)-、-NHC(O)-、-OC(O)-、C1-6亚烷基、C2-8亚烯基或C2-8亚炔基，Rc选自氢或C1-6烷基；
n、t、p、q分别独立地为0或1；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团。
本发明的另一种实施方式涉及通式(I)所示的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1和warhead2分别独立地选自
Figure BDA0001757113050000031
Figure BDA0001757113050000032
warhead1和warhead2不同时存在；
R10、R11、R12、R13、R14、R15分别独立地选自氢、卤素、C1-6烷基或卤代C1-6烷基；
Cy4选自如下基团的二价基：3-12元环烷基、3-12元环烯基、3-12元杂环基、芳基或5-10 元杂芳基；
z为0-4的整数；
X选自C或N，当X为C时，
Figure BDA0001757113050000033
代表双键，当X为N时，
Figure BDA0001757113050000034
代表单键；
当warhead1存在时，R1选自C1-6亚烷基、卤代C1-6亚烷基或-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p-；当 warhead1不存在时，R1选自氢、C1-6烷基、卤代C1-4烷基或-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p；
当warhead2存在时，R2选自C1-6亚烷基、卤代C1-6亚烷基或-(L3)q-Cy3-；当warhead2不存在时，R2选自氢、C1-6烷基、卤代C1-6烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy1、Cy2分别独立地选自如下基团或其二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的 3-8元单杂环基、6-11元桥杂环基、7-12元螺杂环基或6-11元并杂环基、芳基或5-10元杂芳基，成环碳原子可任选地被氧化为C(O)，成环硫原子可任选被氧化为S(O)或S(O)2；
Cy3选自如下基团或其二价基：经一至多个Rb取代的，或未经取代的3-8元单杂环基、 6-11元桥杂环基、7-12元螺杂环基或6-11元并杂环基、芳基或5-10元杂芳基，成环碳原子可任选地被氧化为C(O)，成环硫原子可任选被氧化为S(O)或S(O)2；
Ra、Rb分别独立地选自：
(i)氢、羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素、C2-8烯基羰基氨基或＝CH2，
(ii)任选被羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧 C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、(C1-6烷基)2氨基、C1-6烷基羰基氨基、C1-6烷基磺酰氨基或3-8 元杂环基取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、(C1-6烷基)2氨基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、C2-8烯基、C2-8炔基、C1-6烷基磺酰基或C1-6烷基硫基，
(iii)任选被羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基或(C1-6烷基)2氨基取代的3-8元环烷基或3-8元杂环基，
或
(iv)氨基-羰基、氰基-羰基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基氨基-羰基、(C1-6烷基)2氨基-羰基、C1-6烷氧基-羰基、3-8元环烷基-羰基或3-8元杂环基-羰基；
R3选自氢或C1-6烷基；
R4选自氢、羟基、氨基、氰基、硝基、卤素、羧基、酰胺基、氨基羰基、氨基磺酰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、(C1-6烷基)2氨基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、 C2-8烯基、C2-8炔基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基羰基氨基，(C1-6烷基)2羰基氨基、C1-6烷基氨基羰基、(C1-6烷基)2氨基羰基、C1-6烷基氨基磺酰基、(C1-6烷基)2氨基磺酰基或C1-6烷氧基 C1-64烷氧基；
L1、L2、L3分别独立地为键、-N(Rc)-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-、-NHC(O)-、-OC(O)-或C1-6亚烷基，Rc选自氢或C1-6亚烷基；
n、t、p、q分别独立地为0或1；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团；
当R1为-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p-，t和p为0，且Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8元单杂环基或苯基的二价基时，R2为-(L3)q-Cy3，且Cy3为经一至多个Rb取代，或未经取代的7-12元螺杂环基。
本发明的另一种实施方式涉及通式(I)所示的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1和warhead2分别独立地选自
Figure BDA0001757113050000041
Figure BDA0001757113050000042
warhead1和warhead2不同时存在；
R12、R13、R14分别独立地选自氢或C1-4烷基；
X选自C或N，当X为C时，
Figure BDA0001757113050000043
代表双键，当X为N时，
Figure BDA0001757113050000044
代表单键；
当warhead1存在时，R1选自C1-4亚烷基或-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p-；当warhead1不存在时， R1选自氢、C1-4烷基或-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p；
当warhead2存在时，R2选自C1-4亚烷基、卤代C1-4亚烷基或-(L3)q-Cy3-；当warhead2不存在时，R2选自氢、C1-4烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy1、Cy2分别独立地选自如下基团或其二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的 3-8元单杂环基、7-12元螺杂环基或芳基；
Cy3选自如下基团或其二价基：经一至多个Rb取代的，或未经取代的3-8元单杂环基或 7-12元螺杂环基；
Ra、Rb分别独立地为氢、C1-4烷基或羟基C1-4烷基；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
L1、L2、L3分别独立地为键或C1-4亚烷基；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团；
当R1为-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p-，t和p为0，且Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8元单杂环基或苯基的二价基时，R2为-(L3)q-Cy3，且Cy3为经一至多个Rb取代，或未经取代的7-12元螺杂环基。
本发明的另一种实施方式涉及通式(I)所示的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1和warhead2分别独立地选自
Figure BDA0001757113050000051
Figure BDA0001757113050000052
warhead1和warhead2不同时存在；
R12、R13、R14分别独立地选自氢或C1-4烷基；
X选自C或N，当X为C时，
Figure BDA0001757113050000053
代表双键，当X为N时，
Figure BDA0001757113050000054
代表单键；
当warhead1存在时，R1选自C1-4亚烷基或-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p-；当warhead1不存在时， R1选自氢、C1-4烷基或-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p；
当warhead2存在时，R2选自C1-4亚烷基或-(L3)q-Cy3-；当warhead2不存在时，R2选自氢、 C1-4烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy1、Cy2分别独立地选自如下基团或其二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的 3-8元单杂环基、6-11元桥杂环基、7-12元螺杂环基或6-11元并杂环基；
Cy3选自如下基团或其二价基：经一至多个Rb取代的，或未经取代的3-8元单杂环基、 6-11元桥杂环基、7-12元螺杂环基、6-11元并杂环基；
Ra、Rb分别独立地选自：
(i)氢、羟基、氨基、氰基或卤素，
或
(ii)C1-4烷基、C1-4烷基氨基、(C1-4烷基)2氨基、羟基C1-4烷基、氰基C1-4烷基或卤代C1-4烷基；
L1、L2、L3分别独立地为键或C1-4亚烷基；
n、t、p、q分别独立地为0或1；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团；
当R1为-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p-，t和p为0，且Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8元单杂环基的二价基时，R2为-(L3)q-Cy3，且Cy3为经一至多个Rb取代，或未经取代的7-12元螺杂环基。
本发明的另一种实施方式涉及通式(I)所示的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1和warhead2分别独立地选自
Figure BDA0001757113050000061
Figure BDA0001757113050000062
warhead1和warhead2不同时存在；
R12、R13、R14分别独立地选自氢或C1-4烷基；
X选自C或N，当X为C时，
Figure BDA0001757113050000063
代表双键，当X为N时，
Figure BDA0001757113050000064
代表单键；
当warhead1存在时，R1选自C1-4亚烷基或-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p-；当warhead1不存在时， R1选自氢、C1-4烷基或-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p；
当warhead2存在时，R2选自C1-4亚烷基或-(L3)q-Cy3-；当warhead2不存在时，R2选自氢、 C1-4烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy1、Cy2分别独立地选自如下基团或其二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的 3-8元单杂环基或7-12元螺杂环基；
Cy3选自如下基团或其二价基：经一至多个Rb取代的，或未经取代的3-8元单杂环基或 7-12元螺杂环基；
Ra为氢或C1-4亚烷基；
Rb为氢、C1-4亚烷基或羟基C1-4烷基；
L1、L2、L3分别独立地为键或C1-4亚烷基；
n、t、p、q分别独立地为0或1；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团；
当R1为-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p-，t和p为0，且Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8元单杂环基的二价基时，R2为-(L3)q-Cy3，且Cy3为经一至多个Rb取代，或未经取代的7-12元螺杂环基。
本发明的另一种实施方式涉及通式(I)所示的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1和warhead2分别独立地选自
Figure BDA0001757113050000065
Figure BDA0001757113050000066
warhead1和warhead2不同时存在；
R12、R13、R14分别独立地选自氢或C1-4烷基；
X选自C或N，当X为C时，
Figure BDA0001757113050000067
代表双键，当X为N时，
Figure BDA0001757113050000068
代表单键；
当warhead1存在时，R1选自C1-4亚烷基或-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p-；当warhead1不存在时， R1选自氢、C1-4烷基或-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p；
当warhead2存在时，R2选自C1-4亚烷基或-(L3)q-Cy3-；当warhead2不存在时，R2选自氢、 C1-4烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy1和Cy2分别独立地选自如下结构的一价基或二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的
Figure BDA0001757113050000071
Cy3选自如下如结构的一价基或二价基：经一至多个Rb取代的，或未经取代的
Figure BDA0001757113050000072
Ra、Rb分别独立的选自氢、C1-4烷基或羟基C1-4烷基；
L1、L2、L3分别独立地为键或C1-4亚烷基；
n、t、p、q分别独立地为0或1；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素原子、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团；
当R1为-(L1)n-Cy1-(L2)t-(Cy2)p-，t和p为0，且Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的
Figure BDA0001757113050000073
的二价基时，R2为-(L3)q-Cy3，且Cy3为经一至多个Rb取代的，或未经取代的
Figure BDA0001757113050000074
的一价基。
本发明的另一种实施方式涉及通式(I)所示的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1是
Figure BDA0001757113050000075
warhead2不存在；
R12、R13分别独立地选自氢或C1-4烷基；
X选自C或N，当X为C时，
Figure BDA0001757113050000076
代表双键，当X为N时，
Figure BDA0001757113050000077
代表单键；
R1为-(L1)n-Cy1-；
Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的7-12元亚螺杂环基，优选7-12元含N亚螺杂环基，warhead1与Cy1中任意的成环N杂原子相连；
L1为键或C1-4亚烷基；
Ra选自氢或C1-4烷基；
R2选自氢或C1-4烷基；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
n为0或1；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团。
本发明的另一种实施方式涉及通式(I)所示的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
Cy1为如下结构的二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的
Figure BDA0001757113050000081
Figure BDA0001757113050000082
warhead1与Cy1中任意的成环N杂原子相连。
本发明的另一种实施方式涉及前述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，所述成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂如通式(I-A)所示：
Figure BDA0001757113050000083
其中，
warhead1选自
Figure BDA0001757113050000084
R12、R13、R14分别独立地选自氢或C1-4烷基；
X选自C或N，当X为C时，
Figure BDA0001757113050000085
代表双键，当X为N时，
Figure BDA0001757113050000086
代表单键；
R2选自氢、C1-4烷基、卤代C1-4烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy1、Cy2分别独立地选自如下基团的二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8 元单杂环基、6-11元桥杂环基、7-12元螺杂环基或6-11元并杂环基；
Cy3选自如下基团：经一至多个Rb取代的，或未经取代的3-8元单杂环基、6-11元桥杂环基、7-12元螺杂环基或6-11元并杂环基；
Ra、Rb分别独立地选自氢、羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素、C2-4烯基羰基氨基、＝CH2或任选被羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧C1-4烷氧基、C1-4烷基氨基、(C1-4烷基)2氨基、C1-4烷基羰基氨基、C1-4烷基磺酰氨基或3-8元杂环基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷基氨基、(C1-4烷基)2氨基、卤代C1-4烷基、卤代 C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷基磺酰基或C1-4烷基硫基；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、羟基、氨基、氰基、硝基、卤素、羧基、酰胺基、氨基羰基、氨基磺酰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷基氨基、(C1-4烷基)2氨基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、 C2-8烯基、C2-8炔基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基羰基氨基，(C1-4烷基)2羰基氨基、C1-4烷基氨基羰基、(C1-4烷基)2氨基羰基、C1-4烷基氨基磺酰基、(C1-4烷基)2氨基磺酰基或C1-4烷氧基 C1-4烷氧基；
L1、L2、L3分别独立地为键、-N(Rc)-、-O-、-S-或C1-4亚烷基，Rc选自氢或C1-4烷基；
n、t、p、q分别独立地为0或1；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团；
当t和p为0，且Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8元单杂环基的二价基时， R2为-(L3)q-Cy3，且Cy3为经一至多个Rb取代，或未经取代的7-12元螺杂环基。
本发明的另一种实施方式涉及前述通式(I-A)所示的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
其中，
warhead1选自
Figure BDA0001757113050000091
R12、R13、R14分别独立地选自氢或C1-4烷基；
X选自C或N，当X为C时，
Figure BDA0001757113050000092
代表双键，当X为N时，
Figure BDA0001757113050000093
代表单键；
R2选自氢、C1-4烷基、卤代C1-4烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy1、Cy2分别独立地选自如下基团的二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8 元单杂环基或7-12元螺杂环基；
Cy3选自如下基团：经一至多个Rb取代的，或未经取代的3-8元单杂环基或7-12元螺杂环基；
Ra、Rb分别独立地选自氢、C1-4烷基或羟基C1-4烷基；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
L1、L2、L3分别独立地为键、或C1-4亚烷基；
n、t、p、q分别独立地为0或1；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团；
当t和p为0，且Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8元单杂环基的二价基时， R2为-(L3)q-Cy3，且Cy3为经一至多个Rb取代，或未经取代的7-12元螺杂环基。
本发明的另一种实施方式涉及前述通式(I-A)所示的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1选自
Figure BDA0001757113050000094
R12、R13、R14分别独立地选自氢或C1-4烷基；
X选自C或N，当X为C时，
Figure BDA0001757113050000095
代表双键，当X为N时，
Figure BDA0001757113050000096
代表单键；
Cy1、Cy2分别独立的选自如下基团的二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8 元含氮单杂环基、6-11元含氮桥杂环基或7-12元含氮螺杂环基；
R2选自氢、C1-4烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy3为经一至多个Rb取代的，或未经取代的7-12元螺杂环基；
Ra、Rb、R3分别独立地选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
L1、L2、L3分别独立地为键或C1-4亚烷基；
n、t、p、q分别独立地为0或1；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团；
当t和p为0，且Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8元含氮单杂环基的二价基时，R2为-(L3)q-Cy3，且Cy3为经一至多个Rb取代的，或未经取代的7-12元螺杂环基。
本发明的另一种实施方式涉及前述通式(I-A)所示的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1选自
Figure BDA0001757113050000101
R12、R13、R14分别独立地选自氢或C1-4烷基；
X选自C或N，当X为C时，
Figure BDA0001757113050000102
代表双键，当X为N时，
Figure BDA0001757113050000103
代表单键；
Cy1、Cy2分别独立地选自如下结构的二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的
Figure BDA0001757113050000104
R2选自氢、C1-4烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy3为经一至多个Rb取代的，或未经取代的7-12元螺杂环基；
Ra、Rb、R3分别独立地选自氢、C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
L1、L2、L3分别独立地为键或C1-4亚烷基；
n、t、p、q分别独立地为0或1；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团；
当t和p为0时，且Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的
Figure BDA0001757113050000105
的二价基时，R2为-(L3)q-Cy3，且Cy3为经一至多个Rb取代的，或未经取代的7-12元螺杂环基。
本发明的另一种实施方式涉及前述通式(I-A)所示的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1是
Figure BDA0001757113050000106
R12、R13分别独立地选自氢或C1-4烷基；
Cy1为如下结构的二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的
Figure BDA0001757113050000107
Figure BDA0001757113050000108
warhead1与Cy1中任意的成环N杂原子相连；
t、p分别为0；
n为0；
Ra选自氢或C1-4烷基；
R2选自氢或C1-4烷基；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团。
本发明的另一种实施方式涉及前述通式(I-A)所示的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1是
Figure BDA0001757113050000111
R12、R13、R14分别独立地选自氢或C1-4烷基；
Cy1为如下结构的二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的
Figure BDA0001757113050000112
warhead1与Cy1中任意的成环N杂原子相连；
t、p分别为0；
R2选自氢、C1-4烷基或为-(L3)q-Cy3-；
Cy3为如下结构的一价基：经一至多个Rb取代的，或未经取代的
Figure BDA0001757113050000113
n、q分别独立地为0或1；
Ra、Rb分别独立地选自氢或C1-4烷基；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
L1、L3分别独立地为键、-CH2-或-CH2-CH2-；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团。
本发明的另一种实施方式涉及前述通式(I-A)所示的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1是
Figure BDA0001757113050000114
R12、R13分别独立地选自氢或C1-4烷基；
Cy1、Cy2分别独立地为如下结构的二价基：任选被一至多个Ra取代的，或未取代的
Figure BDA0001757113050000115
Figure BDA0001757113050000116
warhead1与Cy2中任意的成环上N杂原子相连；
n、t分别为0；
p为1；
Ra选自氢或C1-4烷基；
R2选自氢或C1-4烷基；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团。
本发明的另一种实施方式涉及前述通式(I)所示的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，所述成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂如通式(I-B) 所示：
Figure BDA0001757113050000121
其中，
warhead2选自
Figure BDA0001757113050000122
R10、R11、R12、R13、R14分别独立地选自氢或C1-4烷基；
X选自C或N，当X为C时，
Figure BDA0001757113050000123
代表双键，当X为N时，
Figure BDA0001757113050000124
代表单键；
R1选自氢或C1-4烷基；
Cy3为经一至多个Rb取代的，或未经取代的3-8元亚单杂环基；
Rb选自：
(i)氢、羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素、C2-4烯基羰基氨基或＝CH2；
(ii)任选被羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧 C1-4烷氧基、C1-4烷基氨基、(C1-4烷基)2氨基、C1-4烷基羰基氨基、C1-4烷基磺酰氨基或3-8 元杂环基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷基氨基、(C1-4烷基)2氨基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷基磺酰基或C1-4烷基硫基；
(iii)任选被羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷基氨基或(C1-4烷基)2氨基取代的3-8元环烷基或3-8元杂环基；
或
(iv)氨基-羰基、氰基-羰基、C1-4烷基-羰基、C1-4烷基氨基-羰基、(C1-4烷基)2氨基-羰基、C1-4烷氧基-羰基、3-8元环烷基-羰基或3-8元杂环基-羰基；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、羟基、氨基、氰基、硝基、卤素、羧基、酰胺基、氨基羰基、氨基磺酰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷基氨基、(C1-4烷基)2氨基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、 C2-8烯基、C2-8炔基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基羰基氨基，(C1-4烷基)2羰基氨基、C1-4烷基氨基羰基、(C14烷基)2氨基羰基、C1-4烷基氨基磺酰基、(C1-4烷基)2氨基磺酰基或C1-4烷氧基 C1-4烷氧基；
L3分别为键、-N(Rc)-、-O-、-S-或C1-4烷基，Rc选自氢或C1-4烷基；
q为0或1；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团。
本发明的另一种实施方式涉及前述通式(I-B)所示的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体：
warhead2是
Figure BDA0001757113050000125
R12、R13分别独立地选自氢或C1-4烷基；
X选自C或N，当X为C时，
Figure BDA0001757113050000131
代表双键，当X为N时，
Figure BDA0001757113050000132
代表单键；
R1选自氢或C1-4烷基；
Cy3为如下结构的二价基：经一至多个Rb取代的，或未经取代的
Figure BDA0001757113050000133
优选
Figure BDA0001757113050000134
warhead2与Cy3中任意成环N杂原子相连；
q为0；
Rb选自氢、C1-4烷基或羟基C1-4烷基，优选为羟基C1-4烷基；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团。
在另一优选例中，式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体为，所述化合物选自表1中的化合物：
表1
Figure BDA0001757113050000135
Figure BDA0001757113050000141
Figure BDA0001757113050000151
Figure BDA0001757113050000161
本发明还提供了含有前述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体的药物制剂。
在本发明的一些具体实施方式中，所述药物制剂包含一种或多种药用载体。
本发明所述的药用载体可以是一种或多种适合于人使用的固体或液体填料或凝胶物质。所述药用载体优选具有足够的纯度和足够低的毒性，并且与本发明活性成分(成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体)具有相容性且不明显减低活性成分的药效。例如，药用载体可以填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、水性溶剂或非水性溶剂等。
本发明所述的药物制剂，可以制成药学上可接受的任意剂型，以任何合适的给药方式，例如通过口服、肠胃外、直肠或经肺给药等方式施用于需要这种治疗的患者或受试者。用于口服给药时，可以制成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等。用于肠胃外给药时，可以制成注射液、注射用无菌粉末等。
在本发明的一些具体实施方式中，本发明所述的药物制剂，其进一步包含一种或多种第二治疗活性剂，所述的第二治疗活性剂为抗代谢物、生长因子抑制剂、有丝分类抑制剂、抗肿瘤激素类、烷化剂类、金属类、拓扑异构酶抑制剂、激素药、免疫调节剂、肿瘤抑制基因、癌疫苗、免疫检查点或肿瘤免疫治疗相关的抗体和小分子药物。
本发明还提供了前述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体、以及前述的药物制剂在制备治疗FGF(成纤维细胞生长因子)/FGFR异常介导的疾病的药物中的应用。本发明所述的FGF/FGFR异常介导的疾病为癌症；所述的癌症包括肺癌、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、乳腺癌、乳腺导管癌、头颈癌、子宫内膜癌、宫体癌、直肠癌、肝癌、肾癌、肾盂癌、食管癌、食管腺癌、神经胶质瘤、前列腺癌、甲状腺癌、女性生殖系统癌症、原位癌、淋巴瘤、神经纤维瘤病、骨癌、皮肤癌、脑癌、结肠癌、睾丸癌、胃肠道间质瘤、口腔癌、咽癌、多发性骨髓瘤、白血病、非霍奇金淋巴瘤、大肠绒毛腺瘤、黑色素瘤、细胞瘤和肉瘤和/或骨髓增生异常综合症。
本发明还提供了前述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体、以及前述的药物制剂在治疗疾病中的应用。
在本发明的一些具体实施方式中，所述疾病包括FGF/FGFR异常介导的疾病，所述的 FGF/FGFR异常介导的疾病为癌症；所述的癌症包括肺癌、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、乳腺癌、乳腺导管癌、头颈癌、子宫内膜癌、宫体癌、直肠癌、肝癌、肾癌、肾盂癌、食管癌、食管腺癌、神经胶质瘤、前列腺癌、甲状腺癌、女性生殖系统癌症、原位癌、淋巴瘤、神经纤维瘤病、骨癌、皮肤癌、脑癌、结肠癌、睾丸癌、胃肠道间质瘤、口腔癌、咽癌、多发性骨髓瘤、白血病、非霍奇金淋巴瘤、大肠绒毛腺瘤、黑色素瘤、细胞瘤和肉瘤和/或骨髓增生异常综合症。
本发明还提供了一种治疗疾病的方法，该方法包括向有需要的患者给药治疗有效量的前述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，或前述的药物制剂，其中，所述疾病包括FGF/FGFR异常介导的疾病，所述的FGF/FGFR异常介导的疾病为癌症；所述的癌症包括肺癌、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、乳腺癌、乳腺导管癌、头颈癌、子宫内膜癌、宫体癌、直肠癌、肝癌、肾癌、肾盂癌、食管癌、食管腺癌、神经胶质瘤、前列腺癌、甲状腺癌、女性生殖系统癌症、原位癌、淋巴瘤、神经纤维瘤病、骨癌、皮肤癌、脑癌、结肠癌、睾丸癌、胃肠道间质瘤、口腔癌、咽癌、多发性骨髓瘤、白血病、非霍奇金淋巴瘤、大肠绒毛腺瘤、黑色素瘤、细胞瘤和肉瘤和/或骨髓增生异常综合症。
本发明所述的“治疗有效量”是指当给药到患者时至少能够减轻患者病症的症状的前述成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体、以及前述的药物制剂的量。包含“治疗有效量”的实际量会根据多种情况而变化，多种情况包括但不限于所治疗的特定病症、病症的严重程度、患者的体格和健康状况以及给药途径。熟练的医疗从业者可容易地使用医疗领域中已知的方法确定合适的量。
发明详述
本发明所述的“卤素”是指氟、氯、溴和碘等，优选氟和氯。
本发明所述的“卤代”是指取代基中的任一氢原子可被一个或多个相同或不同的卤素取代。“卤素”如前文所定义。
本发明说书的“一价基”和“二价基”是指化合物失去一个或两个氢原子所形成的基团。
本发明所述的“C1-6烷基”指含有1-6个碳原子的烃部分去除一个氢原子衍生的直链或支链的烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、 2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、异己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、 1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基和1-甲基-2-甲基丙基等。所述“C1-4烷基”指含有1-4个碳原子的上述实例。
本发明所述的“C1-6亚烷基”是指前述的“C1-6烷基”进一步去除一个氢原子衍生的直链或支链的二价烷基。
本发明所述的“C2-8烯基”指含有碳碳双键的2-8个碳原子的烯烃部分去除一个氢原子衍生的直链或支链或环状的烯烃基，如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、1,3-丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、1,3-戊二烯基、1,4-戊二烯基、1-己烯基、1,4-己二烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、1,4-环己二烯基、环庚烯基、1,4-环庚二烯基、环辛烯基、 1,5-环辛二烯基等。
本发明所述的“C2-8亚烯基”是指前述的“C2-8烯基”进一步去除一个氢原子衍生的直链或支链的二价烯烃基。
本发明所述的“3-12元环烯基”，在不特别指明的情况下，包括可能形成的所有单环、稠环(包括以并、螺、桥的形式稠合)的情形，例如3-8元单环烯、7-11元螺环烯、7-11元并环烯、6-11元桥环烯等。
本发明所述的“C2-8炔基”指含有碳碳叁键的2-8个碳原子的炔烃部分去除一个氢原子衍生的直链或支链的炔烃基，如乙炔基、丙炔基、2-丁炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-甲基-2-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基等。
本发明所述的“C2-8亚炔基”是指前述的“C2-8炔基”进一步去除一个氢原子衍生的直链或支链的二价炔烃基。
本发明所述的“C1-6烷基氨基”、“(C1-6烷基)2氨基”、“C1-6烷基羰基氨基””、“C1-6烷基磺酰氨基”、“C1-6烷基氨基羰基””、“(C1-6烷基)2氨基-羰基”、“C1-6烷氧基-羰基”、“C1-6烷基磺酰基””、“C1-6烷基硫基”、“C1-6烷基-羰基”、“3-8元环烷基-羰基”、“3-8元杂环基-羰基”分别指 C1-6烷基-NH-、(C1-6烷基)(C1-6烷基)N-、C1-6烷基-C(O)-NH-、C1-6烷基-S(O)2-NH2-、C1-6烷基 -NH-C(O)-、(C1-6烷基)(C1-6烷基)N-C(O)-、C1-6烷基-O-C(O)-、C1-6烷基-S(O)2-、C1-6烷基-S-、 C1-6烷基-C(O)-、3-8元环烷基-C(O)-、3-8元杂环基-C(O)-；所述“C1-6烷基”如前文所定义，优选为“C1-4烷基”。
本发明所述的“C1-6烷氧基”是指前文所定义的“C1-6烷基”通过氧原子与母体分子连接的基团，即“C1-6烷基-O-”基团，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、新戊氧基和正己氧基等。所述的“C1-4烷氧基”指含有1-4个碳原子的上述实例，即“C1-4烷基-O-”基团。
本发明所述的“稠环”是指由两个或两个以上环状结构以并、螺、桥的连接方式所形成的多环系结构。所述的并环是指由两个或两个以上环状结构彼此公用两个相邻的环原子 (即共用一个键)所形成的稠环结构。所述的桥环是指有两个或两个以上环装结构彼此共用两个非相邻的环原子所形成的稠环结构。所述的螺环是指由两个或两个以上环状结构彼此共用一个环原子所形成的稠环结构。
本发明所述的“环烷基”，是指3-12元环烷基，可以是单环、双环、或者多环环烷基系统(也称为稠环系统)。在不特别指明的情况下，包括可能形成的所有单环、稠环(包括以并、螺、桥的形式稠合)的情形。
单环系统是含3-8个碳原子的环烃基基团。3-8元单环烷基实例包括但不限于：环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、环庚烷基、环辛烷基等。稠环环烷基包括并环环烷基、桥环烷基、螺环烷基。
并环环烷基可以为6-11元并环环烷基、7-10元并环环烷基，其的代表性例子包括但不限于双环[3.1.1]庚烷、双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷、双环[3.2.2]壬烷、双环[3.3.1]壬烷和双环 [4.2.1]壬烷。
所述的螺环基可以为7-12元螺环基、7-11元螺环基，其实例包括但不限于：
Figure BDA0001757113050000181
Figure BDA0001757113050000182
所述的桥环基可以为6-11元桥环基、7-10元桥环基，其实例包括但不限于：
Figure BDA0001757113050000191
Figure BDA0001757113050000192
本发明所述的“3-12元杂环基”是指至少一个环碳原子被选自O、S、N的杂原子替代的非芳香性的环状基团，优选1-3个杂原子，同时包括碳原子、氮原子和硫原子可以被氧代。
“杂环基”，是指单环杂环基、双环杂环基系统或多环杂环基系统(也称为稠环系统)，包括饱和、部分饱和的杂环基，但不包括芳环。在不特别指明的情况下，包括可能形成的所有单环、稠环(包括以并、螺、桥的形式稠合)、饱和、部分饱和的情形。
本发明说述的“亚单杂环基”是指前述的“单杂环基”进一步去除一个氢原子衍生的至少一个环碳原子被选自O、S、N的杂原子替代的二价单环状基团。单杂环基可以为3-8元杂环基、3-8元饱和杂环基、3-6元杂环基、4-7元元杂环基、5-7元杂环基、5-6元杂环基、5-6元含氧杂环基、3-8元含氮杂环基、5-6元含氮杂环基、5-6元饱和杂环基等。“3-8”元饱和杂环基，其实例包括但不限于氮杂环丙烷基、氧杂环丙烷基、硫杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡咯基、四氢噻吩基、咪唑烷基、吡唑烷基、1,2-噁唑烷基、1,3-噁唑烷基、1,2-噻唑烷基、1,3-噻唑烷基、四氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、哌啶基、哌嗪基、吡咯基、吗啉基、1,4-二氧杂环己烷基、1,4-氧硫杂环己烷基；“3-8”元部分饱和杂环基，其实例包括但不限于4,5-二氢异噁唑基、4,5-二氢噁唑基、2,5-二氢噁唑基、2,3-二氢噁唑基、3,4-二氢-2H-吡咯基、2,3-二氢-1H-吡咯基、2,5-二氢-1H-咪唑基、4,5- 二氢-1H-咪唑基、4,5-二氢-1H-吡唑基、4,5-二氢-3H-吡唑基、4,5-二氢噻唑基、2,5-二氢噻唑基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、2H-噻喃基、4H-噻喃基、2,3,4,5-四氢吡啶基、1,2-异噁嗪基、 1,4-异噁嗪基或6H-1,3-噁嗪基等。稠杂环包括并杂环基、螺杂环基、桥杂环基，可以是饱和的、部分饱和的或不饱和的，但不是芳香性的。稠杂环基是稠合到苯环、5-6元的单环环烷基、 5-6元单环环烯基、5-6元单环杂环基或5-6元单环杂芳基的5-6元单环杂环基环。所述的并杂环基可以为6-11元并环基、7-10元并环基、6-10元并环基、6-12元饱和并环基，代表性实例包括但不限于：3-氮杂双环[3.1.0]己烷基、3,6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷基、3,8-二氮杂双环 [4.2.0]辛烷基、3,7-二氮杂双环[4.2.0]辛烷基、八氢吡咯并[3,4-c]吡咯基、八氢吡咯并[3,4-b] 吡咯基、八氢吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基、八氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶基、2,3-二氢苯并呋喃-2- 基、2,3-二氢苯并呋喃-3-基、二氢吲哚-1-基、二氢吲哚-2-基、二氢吲哚3-基、2,3-二氢苯并噻吩-2基、八氢-1H-吲哚基、八氢苯并呋喃基。
所述的螺杂环基可以为6-12元螺杂环基、7-12元螺杂环基、7-12元含N螺杂环基、6-12 元饱和螺环基，其实例包括但不限于：
Figure BDA0001757113050000193
Figure BDA0001757113050000194
本发明说述的“亚螺杂环基”是指前述的“螺杂环基”进一步去除一个氢原子衍生的至少一个环碳原子被选自O、S、N的杂原子替代的二价螺环状基团。
所述的桥杂环基可以为6-11元桥杂环基、7-11元桥杂环基、6-12元饱和桥环基，其实例包括但不限于：
Figure BDA0001757113050000201
Figure BDA0001757113050000202
本发明所述“芳基”，是指含有6-14个碳原子的环状芳香性基团，包括6-8元单环芳基和 8-14元稠环芳基，优选6-8元单环芳基。6-8元单环芳基可以是苯基、吡唑、环辛四烯基等。 8-14元稠环芳基可以是萘、菲等。
本发明所述“杂芳基”可以是5-10元杂芳基，是指至少一个环碳原子被选自O、S、N的杂原子替代的芳香性的环状基团，优选1-3个杂原子，同时包括碳原子、硫原子被氧代的情况，例如碳原子被C(O)替代，硫原子被S(O)、S(O)2替代。杂芳基包括单杂芳基和稠杂芳基，在不特别指明的情况下，包括可能形成的所有单环、稠环、全部芳香、部分芳香的情形。单杂芳基可以为5-7元杂芳基、5-6元杂芳基，其实例包括但不仅限于呋喃基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噁唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、吡咯基、四唑基、噻二唑基、噻吩基、三唑基和三嗪基。在某些实施例中，稠杂芳基是稠合到苯基环、5元或6元单环环烷基、5元或6元单环环烯基、5元或6元单环杂环基、或5元或6元单环杂芳基的5元或6元单环杂芳环，其中稠合的环烷基、环烯基和杂环基被作为独立氧代基或硫代基的一个或两个基团选择性取代。稠杂芳基可以为8-12元并杂芳基、9-10元并杂芳基，例子包括但不限于苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、噌啉基、5,6-二氢喹啉-2-基、5,6-二氢异喹啉-1-基、呋喃并吡啶基、吲唑基、吲哚基、异喹啉基、萘啶基、嘌呤基、喹啉基、5,6,7,8-四氢喹啉-2-基、5,6,7,8-四氢喹啉基、5,6,7,8-四氢喹啉-4-基、5,6,7,8-四氢异喹啉-1-基、噻吩并吡啶基、4,5,6,7-四氢并[c][1,2,5] 噁二唑基和6,7-二氢并[c][1,2,5]噁二唑-4(5H)酮基。
本发明所述的“药学上可接受的盐”是指可药用的酸和碱的加成盐或其溶剂化物。这样的可药用盐包括诸如以下的酸的盐：盐酸、磷酸、氢溴酸、硫酸、亚硫酸、甲酸、甲苯磺酸、甲磺酸、硝酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、马来酸、氢碘酸、链烷酸(诸如乙酸、 HOOC-(CH2)n-COOH(其中n是0～4))等。碱的盐：钠盐、钾盐、钙盐、铵盐等。本领域技术人员知晓多种无毒的可药用加成盐。
本发明式(I)化合物的“立体异构体”是指当式(I)、(I-A)、(I-B)化合物存在不对称碳原子时，会产生对映异构体；当化合物存在碳碳双键或环状结构时，会产生顺反异构体；当化合物存在酮或肟时，会产生互变异构体，所有式(I)、(I-A)、(I-B)化合物的对映异构体、非对映异构体、消旋异构体、顺反异构体、互变异构体、几何异构体、差向异构体及其混合物，均包括在本发明范围中。
本发明所述的“warhead”指的是能够与亲核试剂形成共价键的部分。“亲核试剂”是指向亲电体供给电子对以在反应中形成化学键的物质。在一些实施方案中，亲核试剂可为氧亲核试剂，例如，水或羟基；氮亲核试剂，例如，胺；或硫亲核试剂，例如，硫氢基，诸如，胱氨酸残基侧链中的硫氢基。
本发明所述的“warhead”是指抑制剂中可逆地或不可逆地参与供体(例如，蛋白质)与底物的反应的部分。warhead可(例如)与蛋白质形成共价键，或可生成稳定过渡态，或是可逆不可逆烷基化剂。例如，warhead可为抑制剂上可参与键形成反应的官能基，其中在warhead的一部分与供体(例如蛋白质的氨基酸残基)之间形成新的共价键。warhead是亲电体且“供体”是亲核剂，诸如半胱氨酸残基侧链。适宜做warhead部分的包括但不限于以下结构：
Figure BDA0001757113050000211
R11、R12、R13、R14、R15分别独立的选自氢、卤素、氰基、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、 Cy4或任选被取代基取代的C1-4烷基、卤代C1-4烷基、Cy4、C2-8烯基、C2-8炔基，所述取代基选自：羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧C1-4烷氧基、 C1-4烷基氨基、(C1-4烷基)2氨基、C1-4烷基羰基氨基、C1-4烷基磺酰氨基、3-12元杂环基；
Cy4选自3-12元环烷基、3-12元环烯基、3-12元杂环基、芳基或5-10元杂芳基。
z为0-4的整数。
更优选的具体实例为：
Figure BDA0001757113050000212
本发明提供的成纤维细胞生长因子受体(FGFR)不可逆抑制剂，或其药学上可接受的盐、立体异构体对成纤维细胞生长因子受体具有高效的和高选择性的抑制作用，可以应用于 FGF/FGFR异常介导的相关疾病治疗，尤其是在癌症疾病方面的治疗。
具体实施方式
本文中使用的缩写“NMP”是指N-甲基吡咯烷酮；“DIPEA”是指N,N-二异丙基乙胺；“TLC”是指薄层色谱；“PE:EA”是指石油醚:乙酸乙酯；“TFA”是指三氟乙酸；“THF”是指四氢呋喃；“EA”是指乙酸乙酯；“DCM:MeOH”是指二氯甲烷:甲醇；“DCM”是指二氯甲烷；“MTBE”是指甲基叔丁基醚；“TFAA”是指三氟乙酸酐；“TEA”是指三乙胺；“LAN”是指四氢铝锂；“Boc”是指叔丁氧羰基；“MsCl”是指甲磺酰氯；“DEAD”是指偶氮二甲酸二乙酯；“PPh3”是指三苯基磷；“mCPBA”是指间氯过氧苯甲酸；“LC-MS”是指液相色谱-质谱联用。
根据下述实施例及实验例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。另外，下述实施例及实验例中所涉及的材料、仪器等，除有特殊说明外，均可以从商业途径购得。
制备例1:中间体4-氨基-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛的合成
Figure BDA0001757113050000213
步骤1:4-氨基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯的合成
Figure BDA0001757113050000214
将原料4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯(15g,64.4mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(100mL)中，加入三乙胺(19.6g,193.4mmol,3.00eq)，降温至0℃，缓慢加入氨水(7.8g,1288mmol,20.0eq)，加完升至室温反应过夜，LC-MS检测反应完全，静置分液，水相用乙酸乙酯萃取一次，合并有机相，干燥，浓缩，粗品经甲基叔丁基醚浆洗后得白色固体状产物(11.8g,产率:87％)。
步骤2:(4-氨基-2-(甲硫基)嘧啶-5-基)甲醇的合成
Figure BDA0001757113050000221
将原料4-氨基-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(11.8g,55.3mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(100 mL)中，降温至0℃，分批加入四氢铝锂(4.8g,127.4mmol,2.3eq)，加完自然升至室温反应2 小时，LC-MS检测反应完全，向体系中加入四氢呋喃(100mL)，降温至0℃，依次缓慢加入水(10mL)和15％NaOH(10mL)，过滤，滤液干燥，浓缩得黄色固体状产品(10.0g,粗品)。
步骤3:4-氨基-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛的合成
Figure BDA0001757113050000222
将原料(4-氨基-2-(甲硫基)嘧啶-5-基)甲醇(10.0g,粗品,1.0eq)溶于四氢呋喃(100mL)中，加入二氧化锰(40.6g,467.2mmol,8.4eq)，室温反应过夜，LC-MS检测反应完全，过滤，滤液干燥，浓缩，粗品经乙酸乙酯浆洗后得黄色固体状产物(7.7g,两步产率:82.3％)。
制备例2:中间体6-((甲基磺酰基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000223
步骤1:6-((甲基磺酰基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000224
将原料6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(1.1g,5mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(15 mL)，加入三乙胺(1.5g,15mmol,3.0eq)和甲磺酰氯(573mg,5mmol,1.0eq)，室温反应2小时。 LC-MS检测反应完全，反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤两次，干燥，浓缩得白色固体状产物(1.2g,产率:82％)。
制备例3:中间体4-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000225
步骤1:4-(3-羟丙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000226
将原料叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(7g,0.0376mol,1.0eq)溶于乙腈(50mL)，加入3-溴丙烷-1- 醇(5.2g,0.0376mol,1.0eq)和碳酸钾(15.5g,0.1127mol,3.0eq)。反应四个小时后TLC检测反应完全，减压浓缩，残留物倒入水(200mL)中，再加入二氯甲烷(200mL×3)萃取，有机相干燥，浓缩得黄色液体状产品(8.82g,收率:96％)。
步骤2:4-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000231
将原料4-(3-羟丙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(8.82g,0.0361mol,1.0eq)溶于二氯甲烷(80mL)，加入三乙胺(16.4g,0.1623mol,4.5eq)和甲磺酰氯(6.28g,0.0541mol,1.5eq)的二氯甲烷(20 mL)溶液，反应12小时，TLC检测反应完全。向反应瓶中加水(100mL)，二氯甲烷萃取(100 mL×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(PE:EA＝1:1)纯化得黄色液体状产品(6.58g,收率:57％)。
实施例1：1-(1-(1-丙烯酰基哌啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成(化合物1)
步骤1：4-((1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯的合成
Figure BDA0001757113050000232
将4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯(5.0g,21.5mmol,1.0eq)溶解在1,4-二氧六环(30mL) 中，加入三乙胺(7.6g,75.3mmol,3.5eq)和3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(4.4g,25.8mmol, 1.2eq)，95℃加热反应10h，TLC监测反应完全，反应液冷却至室温，浓缩，加入水(50mL)，乙酸乙酯萃取(50mL×2)，合并有机相，浓缩，粗品经硅胶柱层析(PE:EA＝10:1～3:1)，得到 4-((1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(7.5g,收率:95％)。
步骤2：3-((5-(羟甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000233
将四氢铝锂(1.2g,31.6mmol,1.5eq)溶于THF(50mL)中，降温至0℃，加入THF(20mL) 溶解的4-((1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(7.5g,20.4
mmol,1.0eq)，0℃反应2.5h，TLC监测反应完全，冰浴下加入水(1.2mL)，搅拌10min，加入质量分数15％的氢氧化钠水溶液(1.2g)，搅拌15min，加入水(3.5mL)，搅拌10min，抽滤，滤饼用THF少量多次洗涤，滤液用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析 (DCM:MeOH＝100:1～20:1)，得到3-((5-(羟甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3.09g,收率:47％)。
步骤3：3-((5-甲酰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000241
将3-((5-(羟甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3.1g,9.5mmol, 1.0eq)溶于THF(60mL)中，加入二氧化锰(6.6g,75.7mmol,8.0eq)，45℃搅拌反应12h，TLC 监测反应完全，经硅藻土过滤，滤饼用THF少量多次洗涤，滤液浓缩，得到3-((5-甲酰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(2.76g，收率:90％)。
步骤4：3-((5-(((3,5-二甲氧基苯基)氨基)甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1- 羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000242
将3-((5-甲酰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.0g,3.1mmol,1.0 eq)溶于DCM(15mL)中，加入醋酸(0.5mL)和3,5-二甲氧基苯胺(0.7g,4.6mmol,1.5eq)，搅拌反应15min，加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.3g,15.4mmol,5.0eq)，搅拌反应8h，TLC监测反应完全，用饱和碳酸氢钠溶液调节溶液pH＝7～8，DCM萃取(3×50mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝100:1～60:1)，得到3-((5-(((3,5-二甲氧基苯基)氨基)甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(973mg，收率: 70％)。
步骤5：3-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基) 氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000243
将3-((5-(((3,5-二甲氧基苯基)氨基)甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.0g,2.2mmol,1.0eq)溶于THF(20mL)中，降温至0℃，加入三乙胺(657.5mg,6.5mmol, 3.0eq)和固体三光气(771.5mg,2.6mmol,1.2eq)，室温搅拌反应2h，75℃反应1.5h，LC-MS 监测反应完全，冷却至室温，加入饱和氯化铵水溶液(50mL)，DCM萃取(3×50mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝100:1～60:1)，得到 3-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基)氮杂环丁烷 -1-甲酸叔丁酯(845mg，收率:80％)。
步骤6：3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000251
将3-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.9g,3.9mmol,1.0eq)溶于DCM(20mL)中，降温至0℃，加入DCM(2 mL)溶解的磺酰氯(1.3g,9.6mmol,2.5eq)，0℃搅拌反应15min，将反应液滴加入饱和碳酸氢钠水溶液中(50mL)，DCM萃取(3×50mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM：MeOH＝100:1～60:1)，得到3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.67g，收率:61％)。
步骤7：3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基磺酰基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d] 嘧啶-1(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000252
将3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)- 基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(800.0mg,1.4mmol,1.0eq)溶于DCM(20mL)中，降温至0℃，加入间氯过氧苯甲酸(496.2mg,2.8mmol,2.0eq)，0℃搅拌反应2h，LC-MS监测反应完全，反应液直接进行下一步，无需纯化。
步骤8：3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000253
将3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基磺酰基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯上一步反应液加入蜂管中，加入甲胺水溶液(10mL)，45℃密封反应2h，LCMS监测反应完全，冷却至室温，分液，水相拥DCM萃取(20mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM：MeOH＝100:1～60:1)，得到 3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基) 氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(600mg，两步收率:77％)。
步骤9：1-(氮杂环丁烷-3-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并 [4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000261
将3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(600.0mg,1.1mmol,1.0eq)溶于EtOH(10mL)中，加入氯化氢乙醇溶液(25％,10mL)，室温搅拌反应3h，LC-MS监测反应完全，加入饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)，DCM萃取(3×50mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到1-(氮杂环丁烷-3-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -2(1H)-酮(460mg，收率:94％)。
步骤10：4-(3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d] 嘧啶-1(2H)-基)氮杂环丁烷-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000262
将叔丁基1-(氮杂环丁烷-3-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮(460.0mg,1.0mmol,1.0eq)溶于DCM(125mL)中，加入醋酸(0.5mL) 和4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(330mg,1.6mmol,1.5eq)，搅拌反应2h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(665.7mg,3.1mmol,3.0eq)，搅拌反应8h，TLC监测反应完全，用饱和碳酸氢钠溶液调节溶液pH＝7～8，分液，DCM萃取(2×50mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝100:1～20:1)，得到4-(3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基)氮杂环丁烷-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 (406.3mg，收率:62％)。
步骤11：3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-1-(1-(哌啶-4-基)氮杂环丁烷-3- 基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐的合成
Figure BDA0001757113050000271
将4-(3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)氮杂环丁烷-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(406.3mg,0.7mmol,1.0eq)溶于EtOH(15mL) 中，加入氯化氢乙醇溶液(10mL)，室温搅拌反应3h，LC-MS监测反应完全，浓缩，得到3-(2,6- 二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-1-(1-(哌啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d] 嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐(364.8mg，收率:100％)。
步骤12：1-(1-(1-丙烯酰基哌啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000272
将3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-1-(1-(哌啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐(364.8mg,0.7mmol,1.0eq)，溶于THF(10mL)中，加入三乙胺(198.1mg,2.0mmol,3.0eq)，搅拌反应10min，缓慢滴加THF(2mL)溶解的丙烯酰氯(70.9mg,0.8mmol,1.2eq)，室温搅拌反应2h，TLC监测反应完全，加入饱和碳酸氢钠溶液 (20mL)，EA萃取(2×50mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝100:1～20:1)，得到1-(1-(1-丙烯酰基哌啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)-3-(2,6-二氯-3,5- 二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮(200mg，收率:53％)。
分子式:C26H31Cl2N7O4分子量:576.48LC-MS(m/z)＝576.18[M+H+].
:1HNMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):8.00(s,1H),6.98-7.07(m,2H),6.74-6.81(m,1H),6.03-6.08 (m,1H),5.62-5.65(m,1H),4.39(m,2H),4.28(s,1H),3.82-3.95(m,10H),3.14-3.20(m,1H), 2.87-2.98(m,3H),2.77-2.78(s,3H),2.26(m,1H),1.63(m,2H),1.10(m,2H).
实施例2：1-(7-丙烯酰基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成(化合物2)
步骤1：2-((5-(乙氧基羰基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000281
将4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯(3.4g,14.55mmol,1.0eq)溶解在1,4-二氧六环(30mL) 中，室温下依次向体系中加入2-氨基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(4.2g,17.47mmol,1.2 eq)和三乙胺(4.4g,43.69mmol,3.0eq)，加完升至98℃回流搅拌过夜。TLC监测反应完全，反应液浓冷却后加入饱和氯化铵水溶液(100mL)，搅拌5分钟后再加入二氯甲烷(150mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析(200-300目硅胶；石油醚:乙酸乙酯＝40:1)分离得到2-((5-(乙氧基羰基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷 -7-羧酸叔丁酯(6.49g,收率:100％)。
步骤2：2-((5-(羟甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯合成
Figure BDA0001757113050000282
在0℃下，将四氢铝锂(842.5mg,22.2mmol,1.5eq)加入四氢呋喃(10mL)中，搅拌下缓慢滴加2-((5-(乙氧基羰基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(6.49g, 14.8mmol,1.0eq)的四氢呋喃溶液(30mL)，体系温度控制在5℃以下，滴毕，缓慢升至室温搅拌过夜。TLC显示反应完全，将体系冷却至0℃，加入水(842.4mg)，搅拌20分钟后，再在此温度下滴加15％氢氧化钠水溶液(842.5mg)，搅拌20分钟后，再次在0℃下滴加水(2.5g) 搅拌40分钟后抽滤，滤液无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(200-300 目硅胶；二氯甲烷和甲醇＝150:1～40:1)得到2-((5-(羟甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-7-氮杂螺 [3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3.14g,收率:57.0％)。
步骤3：2-((5-甲酰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000283
将2-((5-(羟甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3.12g,7.9 mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(20mL)中，搅拌下室温下加入二氧化锰(6.8g,79mmol,10.0eq)，加毕，室温搅拌过夜。TLC显示反应完全，将体系用硅藻土过滤，滤液无水硫酸钠干燥后抽滤，滤液浓缩得到2-((5-甲酰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯 (3.56g粗品,收率:100％)。
步骤4：2-((5-(((3,5-二甲氧基苯基)氨基)甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-7-氮杂螺[3.5] 壬烷-7-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000291
将2-((5-甲酰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3.56g,9.0 mmol,1.0eq)和3,5-二甲氧基苯胺(2.06g,13.5mmol,1.5eq)溶于四氢呋喃(30mL)中，滴加乙酸(0.5mL)，室温搅拌1小时，冰水浴下分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(9.5g,45mmol,5.0eq)，升至室温搅拌过夜。TLC显示反应完全，将体系冷却至0℃，加入饱和碳酸氢钠水溶液(60mL)，用二氯甲烷(150×3mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(200-300 目硅胶；二氯甲烷和甲醇＝200:1)得到2-((5-(((3,5-二甲氧基苯基)氨基)甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4- 基)氨基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2.89g,收率:61.4％)。
步骤5：2-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)- 基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000292
将2-((5-(((3,5-二甲氧基苯基)氨基)甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7- 羧酸叔丁酯(2.89g,5.45mmol,1.0eq)溶解于四氢呋喃(20mL)中，搅拌下降温至0℃，滴加三乙胺(1.65g,16.35mmol,3.0eq)。滴毕在此温度下搅拌10分钟，滴加三光气(1.46g,7.08mmol, 1.3eq)的四氢呋喃溶液(5mL)，滴毕，缓慢升至室温搅拌1小时，然后升温至72℃回流2小时。LC-MS显示无原料，将体系冷却至室温，向体系中加入饱和氯化铵水溶液(50mL)，用二氯甲烷(150mL×3)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析分离 (200-300目硅胶；二氯甲烷和甲醇＝200:1)得到2-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4- 二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.76g,收率58.6％)。
步骤6：2-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000301
将2-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.76g,3.16mmol,1.0eq)溶解于二氯甲烷(15mL)中，降温至0℃，滴加磺酰氯(1.06g,7.9mmol,2.5eq)的二氯甲烷溶液(10mL)。滴毕在此温度下搅拌15分钟，将反应液滴加到饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)中，分液，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩得到 2-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基)-7- 氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.71g粗品,收率:89.4％)。
步骤7：2-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基磺酰基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d] 嘧啶-1(2H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000302
将2-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)- 基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.71g,2.73mmol,1.0eq)溶解于二氯甲烷(15mL)中，降温至0℃搅拌30分钟，分批加入间氯过氧苯甲酸(1.17g,6.82mmol,2.5eq)的二氯甲烷悬浊液 (10mL)，加完在此温度下搅拌15分钟，将体系滴加到饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)中，分液，有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩得到2-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基磺酰基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.52g, 收率:84.9％)。
步骤8：2-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000303
将2-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基磺酰基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.52g,2.31mmol,1.0eq)加入到甲胺水溶液(30 mL)中，45℃加热3小时。TLC显示反应完全，降至室温，用二氯甲烷(150mL×3)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(200-300目硅胶；二氯甲烷和甲醇＝200:1～80:1)得到2-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(574.1mg,收率41.3％)。
步骤9：3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-1-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐的合成
Figure BDA0001757113050000311
将2-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶
-1(2H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(574.1mg,0.94mmol,1.0eq)加入到乙醇(4mL)中，降温至0℃，滴加氯化氢乙醇溶液(15mL)，加完后升至室温搅拌过夜。TLC显示反应完全，将体系浓缩得到3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-1-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-3,4- 二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐(569.8mg粗品,收率100％)。
步骤10：1-(7-丙烯酰基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000312
将3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-3,4-二氢嘧啶并 [4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐(569.8mg粗品,0.94mmol)加入四氢呋喃(15mL)中，降温至0℃，依次滴加三乙胺(339.9mg,3.36mmol)和丙烯酰氯(121.6mg,1.34mmol)，加完升至室温搅拌2 小时。TLC显示反应完全，向体系浓中加入饱和氯化铵水溶液(20mL)，用二氯甲烷(30mL×3) 萃取，有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(200-300目硅胶；二氯甲烷和甲醇＝200:1～80:1)得到1-(7-丙烯酰基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮(180.75mg,2步收率34.2％)。分子式:C26H30Cl2N6O4分子量:561.46LC-MS(Pos，m/z)＝562.2[M+H+].
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.98(s,1H),6.97-7.01(m,1H),6.73-6.83(m,1H), 6.03-6.07(m,2H),5.62-5.75(s,1H),4.81-4.85(m,1H),4.37(s,2H),3.95(s,6H),3.31-3.50(m, 4H),2.78-2.79(s,3H),2.25-2.35(m,4H),1.51-1.58(m,4H).
实施例3：8-(7-丙烯酰基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成(化合物3)
步骤1：2-(6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-7- 氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000321
将6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(726mg,2mmol, 1.0eq)、2-羟基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(483mg,2mmol,1.0eq)和三苯基磷(787mg, 3mmol,1.5eq)溶解在四氢呋喃(10mL)中，缓慢加入偶氮二甲酸二乙酯(522mg,3mmol,1.5 eq)，25℃反应4h。TLC监测反应完全，反应液倒入水中，加入EA萃取，合并有机相，浓缩，粗品经过硅胶柱层析纯化(PE:EA＝2:1)得2-(6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.1g,收率93％)。
步骤2：2-(6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)- 基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000322
将2-(6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-7-氮杂螺 [3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(587mg,1mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入间氯过氧苯甲酸 (246mg,1mmol,1.0eq,质量分数70％)，25℃反应2h，TLC监测反应完全，反应液不经处理直接用于下步。
步骤3：2-(6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-7- 氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000331
将上步所得反应液直接加入甲胺水溶液中(10mL),25℃反应4h。LC-MS检测反应完全，反应液静止分液，有机相干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(PE:EA＝1:1)得2-(6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯 (230mg,收率40％)。
步骤4：6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-8-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)吡啶并[2,3-d] 嘧啶-8(7H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000332
将2-(6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(230mg,0.40mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1 mL),25℃反应2h。TLC监测反应完全,浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝10:1)得6-(2- 氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-8-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-酮 (100mg,收率53％)。
步骤5：8-(7-丙烯酰基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基) 吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000333
将6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-8-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶 -8(7H)-酮(100mg,0.213mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三乙胺(65mg,0.639mmol) 和丙烯酰氯(19.2mg,0.213mmol)。25℃反应2h，TLC监测反应完全，反应液倒入水中，加入二氯甲烷萃取，合并有机相，浓缩，粗品经过硅胶柱层析(EA洗脱)得8-(7-丙烯酰基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(60 mg,产率54％).
分子式:C27H30ClN5O4分子量:524.02LC-MS(Pos，m/z)＝524.2[M+H+]
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.92(s,1H),7.96(s,1H),7.60(s,1H),6.76(s,1H),6.59-6.60 (m,1H),6.04-6.08(m,2H),5.62-5.65(d,1H),5.37(s,1H),3.89(s,3H),3.80(s,3H),3.50(s,2H), 3.40(s,2H),2.91-2.92(m,3H),2.43(m,2H),1.75-1.79(m,2H),1.59(s,2H),1.47(s,2H).
实施例4 8-(2-丙烯酰基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-(8H)-酮的合成(化合物4)
步骤1：6-(6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-2-氮杂螺 [3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000341
将原料6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(300mg,0.825 mmol,1.2eq)溶解在THF(7.5mL)中，加入6-羟基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(49mg, 0.229mmol,1eq)和三苯基膦(180mg,0.687mmol,3eq)，冷却至0℃，氮气保护下，滴加 DEAD(120mg,0.687mmol,3eq)，缓慢升至室温搅拌过夜。TLC监测反应完全，向反应液中加入水(5mL)，搅拌10min，DCM萃取，浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(PE:EA＝10:1～5:1)得到类白色固体状产品(603mg粗品)。
步骤2：6-(6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-2- 氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000342
将中间体6-(6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-2- 氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(603mg粗品,按0.971mmol计,1eq)溶于DCM(5mL)中，冷却至0℃以下，加入mCPBA(263mg,1.068mg,1.1eq)，0℃反应1小时，TLC监测反应完全，反应液不经处理直接投下步反应。
步骤3：6-(6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲氨基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-2-氮杂螺 [3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成：
Figure BDA0001757113050000351
将上步所得反应液中加入甲胺溶液(20mL)中，封管内50℃反应过夜，DCM萃取(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(PE:EA＝5:1～1:1) 得到类白色固体状产品(187mg)。
步骤4：6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-8-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶 -7(8H)-酮三氟乙酸盐的合成：
Figure BDA0001757113050000352
将中间体6-(6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲氨基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)- 基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(187mg)溶于DCM(3mL)中，冷却至0℃，加入TFA(3mL)，搅拌升至室温反应2小时，TLC监测反应完全，减压浓缩得到产物(109mg粗品)，直接投下步反应。
步骤5：8-(2-丙烯酰基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-(8H)-酮的合成：
Figure BDA0001757113050000353
将中间体6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-8-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)吡啶并 [2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮三氟乙酸盐(109mg粗品)溶于THF(5mL)中，加入三乙胺(124mg,1.23 mmol,5eq)，冷却至-10℃，缓慢加入丙烯酰氯(26.6mg,0.296mmol,1.2eq)的DCM(5mL)溶液，搅拌反应1小时，TLC监测反应完全，加入饱和碳酸氢钠溶液，搅拌，DCM萃取(20mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(DCM:MeOH＝150: 1～80:1)得到白色固体状产品(12mg,收率:9.8％)。
分子式:C25H26ClN5O4分子量:495.96LC-MS(Pos,m/z)＝496.2[M+H]+.
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.93(s,1H),7.98(s,1H),7.63(s,1H),6.77(s,1H),6.60(s, 1H),6.20-6.28(m,1H),6.05-6.10(d,1H),5.64-5.67(d,1H),5.33(s,1H),4.31(s,1H),4.16(s,1H), 4.02(s,1H),3.81-3.90(m,7H),2.92(s,3H),2.72(s,3H),2.16-2.21(t,1H).
实施例5：7-(((3S,5S)-1-丙烯酰基-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成(化合物5)
步骤1：4-(甲基氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯的合成
Figure BDA0001757113050000361
将4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯(22.0g,94.55mmol,1.0eq)溶解在THF(100mL)中，加入TEA(28.70g,283.65mmol,3.0eq)，缓慢滴加甲胺水溶液(100mL)，温度不超过30℃，加毕，室温(25℃)反应过夜，TLC监测。TLC监测反应完全，减压旋干反应液，加入水(50mL)，室温(25℃)搅拌10min，反应液抽滤，滤饼用水洗涤(少量多次洗涤)，滤饼晾干，得到固体4-(甲基氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯(16.98g粗品)。
步骤2：(4-(甲基氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-基)甲醇的合成
Figure BDA0001757113050000362
将四氢铝锂(4.01g,105.47mmol,1.5eq)溶于THF(500mL)中，冰盐浴降温至-10℃～-5℃，缓慢滴加4-(甲基氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯(15.98mg粗品,70.31mmol,1.0eq)的 THF(120mL)溶液中，滴加过程中控制温度-10℃～-5℃，滴加完毕，缓慢升至室温(25℃)，室温(25℃)搅拌反应过夜(12h)，TLC监测。TLC监测反应完全，依次加水(4mL)、10％氢氧化钠水溶液(4mL)和水(12mL)淬灭四氢铝锂，抽滤，滤饼用THF洗涤，滤液合并，加入无水硫酸镁干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(洗脱剂PE:EA＝5:1,2:1)得到(4-(甲基氨基)-2-(甲硫基) 嘧啶-5-基)甲醇(11.24g,收率:86.33％)。
步骤3：4-(甲基氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛的合成
Figure BDA0001757113050000363
将(4-(甲基氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-基)甲醇(11.24g,60.67mmol,1.0eq)溶于DCM(582mL) 中，加入二氧化锰(42.20g,485.36mmol,8.0eq)，室温(25℃)搅拌过夜，TLC监测。TLC监测反应完全，反应液用硅藻土抽滤，滤液浓缩，得到4-(甲基氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛(10.68 g,收率:96.04％)。
步骤4：5-(((3,5-二甲氧基苯基)氨基)甲基)-N-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-4-胺的合成
Figure BDA0001757113050000364
将4-(甲基氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛(5.18g,28.27mmol,1.0eq)溶于DCM(173mL)中，加入3,5-二甲氧基苯胺(5.20g,33.92mmol,1.2eq)，搅拌至溶解，加入三乙酰氧基硼氢化钠(21.97g,103.67mmol,3.7eq)，室温(25℃)搅拌过夜(12h)。TLC监测反应完全，加入饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝7-8，分液，用DCM(20mL×3)萃取水相，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(洗脱剂PE:EA＝10:1～4:1)，得到5-(((3,5-二甲氧基苯基)氨基)甲基)-N-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-4-胺(5.44g，收率:60.0％)。
步骤5：3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-7-(甲硫基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮合成
Figure BDA0001757113050000371
将5-(((3,5-二甲氧基苯基)氨基)甲基)-N-甲基-2-(甲硫基)嘧啶-4-胺(3.84g,12.0mmol,1.0 eq)溶于THF(40.0mL)中，冰水浴降温至0℃，加入TEA(3.64g,18.0mmol,1.5eq)搅拌5min，在氮气保护下，于0℃下缓慢加入三光气(5.64g,36.0mmol,3.0eq)的THF(20.0mL)溶液，加毕，缓慢升至室温(25℃)搅拌2h，然后升温70℃回流过夜(12h)。TLC监测反应完全，向反应液加入饱和氯化铵水溶液(20mL)洗涤，有固体产物析出，过滤，滤饼用冰水洗涤(10mL×3)，滤饼烘干，得到3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-7-(甲硫基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮 (2.80g，收率:67.5％)。
步骤6：3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-7-(甲硫基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -2(1H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000372
将3-(3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-7-(甲硫基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮(2.16g, 6.24mmol,1.0eq)溶于DCM(90mL)中，冰盐浴降温至0℃，缓慢滴加磺酰氯(2.10g,15.60mmol, 2.5eq)的DCM(5mL)溶液，加毕，0℃搅拌15min，TLC监测反应完全，加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应液。分液，水相用DCM萃取(10mL×3)，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(洗脱剂MeOH:DCM＝0～1:30)，得到3-(2,6-二氯-3,5- 二甲氧基苯基)-1-甲基-7-(甲硫基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮(620.00mg,收率:18.5％)。
步骤7：3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-7-(甲基磺酰基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -2(1H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000381
将3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-7-(甲硫基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮(620.00mg,1.49mmol,1.0eq)溶于DCM(18mL)中，冰盐浴降温至0℃，缓慢加入间氯过氧化苯甲酸(70％)(737.70mg,2.98mmol,2.0eq)，加毕，缓慢升至室温(25℃)搅拌过夜(12h)。TLC 监测反应完全，加入饱和硫代硫酸钠水溶液(5mL)，加入饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝7-8，分液，水相用DCM萃取(10mL×3)，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(洗脱剂MeOH:DCM＝0～1:100)，得到3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基 -7-(甲基磺酰基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮(280.00mg,收率:42.0％)。
步骤8：(2S,4S)-4-((6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-甲基-7-氧代-5,6,7,8-四氢嘧啶并[4,5-d] 嘧啶-2-基)氨基)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000382
将3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-7-(甲基磺酰基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -2(1H)-酮(280.00mg,0.63mmol,1.0eq)溶于N-甲基-2-吡咯烷酮(10mL)中，加入(2S,4S)-4-氨基-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(545.00mg,2.52mmol,4.0eq)，TEA(318.40mg,3.15mmol, 5.0eq)，加毕，反应升温至100℃过夜(12h)。TLC监测反应完全，加饱和氯化铵水溶液(10mL)，水(10mL)，EA萃取(15mL×3)，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(洗脱剂MeOH:DCM＝0～1:50)，得到(2S,4S)-4-((6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-8- 甲基-7-氧代-5,6,7,8-四氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2-基)氨基)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(83.70 mg,收率:22.8％)。
步骤9：3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(((3S,5S)-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)-1-甲基 -3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐的合成
Figure BDA0001757113050000383
将(2S,4S)-4-((6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-甲基-7-氧代-5,6,7,8-四氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2-基)氨基)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(83.00mg,0.142mmol,1.0eq)溶于乙醇(2.0mL) 中，加入氯化氢/乙醇溶液(5mL)，室温(25℃)搅拌过夜(12h)。TLC监测反应完全，减压浓缩，得到3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(((3S,5S)-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)-1-甲基-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐(84.88mg粗品)。
步骤10：7-(((3S,5S)-1-丙烯酰基-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000391
将3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(((3S,5S)-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)-1-甲基-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐(84.88mg粗品,0.142mmol)溶于THF(18mL)中，加入 TEA(49.48mg,0.489mmol)，室温(25℃)搅拌15min，冰盐浴降温至0℃，缓慢加入丙烯酰氯 (14.75mg,0.163mmol)的THF(1mL)溶液，加毕，缓慢升至室温(25℃)搅拌30min。TLC监测反应完全，加入饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)，用EA萃取(20mL×3)，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(洗脱剂MeOH:DCM＝0～3:100)得到 7-(((3S,5S)-1-丙烯酰基-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-甲基 -3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮(34.00mg,两步产率44.6％)。
分子式:C23H26Cl2N6O5,分子量:537.40,LC-MS(Pos,m/z)＝538.9[M+H+].
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.01(s,1H),7.40-7.52(d,1H),6.99(s,1H),6.55-6.69(m, 1H),6.10-6.17(m,1H),5.64-5.67(m,1H),5.00-5.07(m,1H),4.46(s,2H),4.35-4.36(m,2H), 4.28-4.29(m,3H),3.83-3.87(m,6H),3.57-3.69(m,3H),3.25-3.26(m,3H).
实施例6：2-(((3S,5S)-1-丙烯酰基-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8- 甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成(化合物6)
步骤1：6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-甲基-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000392
将6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(600mg,1.65mmol, 1.0eq)溶于四氢呋喃(10mL)，降温至0℃，加入氢化钠(125mg,3.63mmol,2.2eq),搅拌两小时后加入碘甲烷(703mg,4.96mmol,3.0eq)，室温搅拌过夜。LC-MS检测反应完全，反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥，浓缩，粗品加入二氯甲烷打浆得6-(2-氯-3,5- 二甲氧基苯基)-8-甲基-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(400mg,收率60％)。
步骤2：6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-甲基-2-(甲基磺酰基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000393
将6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-甲基-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(400mg,1.06 mmol,1.0eq)溶于DMF(6mL)，加入mCPBA(质量分数70％,183mg,1.06mmol,1.0eq)，室温反应两小时，TLC检测反应完全，反应液直接用于下步。
步骤3：(2S,4S)-4-((6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-甲基-7-氧代-7,8-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶 -2-基)氨基)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000401
将上步反应液加入事先溶于DMF(5mL)的(2S,4S)-4-氨基-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(230mg,1.06mmol,1.0eq)，加入三乙胺(537mg,5.30mmol,3.0eq)，50℃反应4h，TLC监测反应完全，反应液倒入水中，加入EA萃取，合并有机相，用水和饱和食盐水各洗一次，干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(PE:EA＝1:1)(2S,4S)-4-((6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-甲基-7- 氧代-7,8-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(140mg,收率 25％)。
步骤4：6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(((3S,5S)-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)-8-甲基吡啶并 [2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000402
将(2S,4S)-4-((6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-甲基-7-氧代-7,8-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基) 氨基)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(140mg,0.26mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(0.5mL)，室温反应两小时。LC-MS检测反应完后，反应液浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝10:1)得6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(((3S,5S)-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(80mg,收率70％)。
步骤5：2-(((3S,5S)-1-丙烯酰基-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8- 甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000403
将6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(((3S,5S)-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)-8-甲基吡啶并 [2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(80mg,0.18mmol,1.0eq)溶解于DMF(1mL)和THF(2mL)混合溶液中，加入三乙胺(55mg,0.54mmol,3.0eq)和丙烯酰氯(16mg,0.18mmo,1.0eq)，室温反应2h。TLC监测反应完全，反应液倒入水中，加入EA萃取，合并有机相，用水和饱和食盐水各洗一次，干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(EA)得2-(((3S,5S)-1-丙烯酰基-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基) 氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(34mg,收率38％)。
分子式:C24H26ClN5O5分子量:499.95LC-MS(Pos,m/z)＝500.1[M+H+].
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.47(s,1H),7.53(s,1H),6.85(s,1H),6.57(s,1H),6.50-6.51 (d,1H),6.43-6.45(m,2H),5.74-5.77(m,1H),4.72-4.77(m,1H),4.42(s,1H),4.13-4.17(m,2H), 4.10(s,3H),3.92(s,3H),3.73-3.82(m,3H),3.58(s,1H),2.59-2.64(m,1H),1.90(s,1H).
实施例7:2-(((3S,5S)-1-丙烯酰基-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成(化合物7)
步骤1：6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000411
将原料6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(300mg,0.825 mmol,1.0eq)加入THF中，加热溶解。降温至0℃，滴加THF溶解的mCPBA(318.8mg,0.907 mmol,1.1eq)。加完搅拌反应2h，TLC监测反应完全，加入饱和碳酸氢钠溶液，用DCM萃取(20mL×3)，有机相合并，干燥，浓缩得6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)吡啶并 [2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(390mg)。
步骤2：(2S,4S)-4-((6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-氧代-7,8-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000412
将6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(270mg,0.682 mmol,1.0eq)、(2S,4S)-4-氨基-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(295mg,1.364mmol,2.0eq)和 DIPEA(176.3mg,1.364mmol,2.0eq)溶于NMP(5mL)中，90℃反应5h。TLC监测反应完全，将反应液倒入水中(30mL)，加入DCM(30mL)，搅拌分液，水相用DCM(20mL)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1～5:1)得(2S,4S)-4-((6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-氧代-7,8-二氢吡啶并[2,3-d] 嘧啶-2-基)氨基)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(76mg,收率:21％)。
步骤3：6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(((3S,5S)-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)吡啶并[2,3-d] 嘧啶-7(8H)-酮盐酸盐的合成
Figure BDA0001757113050000421
将(2S,4S)-4-((6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-氧代-7,8-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(76mg,0.143mmol,1.0eq)溶于乙醇(5mL)中，降温至 0℃，滴加氯化氢乙醇溶液(5mL)，反应6h后TLC监测反应完全，浓缩，粗品用THF溶解，浓缩，重复三次，所得粗品直接投入下一步。
步骤4：2-(((3S,5S)-1-丙烯酰基-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基) 吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000422
将6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(((3S,5S)-5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶 -7(8H)-酮盐酸盐(粗品,0.143mmol,1.0eq)溶于THF(10mL)中，加入三乙胺(72.35mg,0.715 mmol,5.0eq)降温至0℃，缓慢加入丙烯酰氯(12.94mg，0.143mmol,1.0eq)，反应1h后TLC 监测原料剩余少许，补加丙烯酰氯(12.94mg,0.143mmol,1.0eq)，反应2h后TLC显示原料少量剩余，加入饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和DCM(10mL)，分液，水相用DCM萃取(10mL)，合并有机相，浓缩，粗品经制备薄层色谱分离(DCM:MeOH＝20:1)得2-(((3S,5S)-1-丙烯酰基 -5-(羟甲基)吡咯烷-3-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(32mg, 收率:46％)。
分子式:C23H24ClN5O5分子量:485.93LC-MS(Pos，m/z)＝486.2[M+H+].
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):12.12(m,1H),8.61(s,1H),7.91-8.13(m,1H),7.70-7.74(s, 1H),6.58-6.68(m,1H),6.53-6.54(m,1H),6.23-6.24(m,1H),6.05-6.10(s,1H),5.05-5.12(m,1H), 4.10(m,1H),4.09(m,1H),4.02(m,2H),3.87(m,3H),3.79(m,3H),3.18(m,1H),3.16(m,1H), 2.32(m,1H),2.05(s,2H).
实施例8：1-(2-丙烯酰基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成(化合物9)
步骤1：6-((5-(乙氧基羰基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000423
将原料6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(5.0g,23.55mmol,1.0eq)溶解在四氢呋喃 (100mL)中，室温下依次加入4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯(8.2g,35.32mmol,1.5eq)和三乙胺(7.1g,70.65mmol,3.0eq)，加完室温搅拌过夜。TLC监测反应完全，加入饱和氯化铵水溶液(100mL)，搅拌5分钟，加入二氯甲烷(150mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化(硅胶规格:200-300目,二氯甲烷:甲醇＝200:1～90:1)得到产品(8.15g,收率:84.8％)。
步骤2：6-((5-(羟基甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000431
将四氢铝锂(2.26g,59.7mmol,3.0eq)加入四氢呋喃(50mL)搅拌，降温至0℃，搅拌下缓慢滴加6-((5-(乙氧基羰基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(8.15g, 19.9mmol,1.0eq)的四氢呋喃溶液(30mL)，控制温度在5℃以下反应6小时。TLC显示反应完全，0℃下加入水(2.26g)搅拌20分钟后，滴加15％氢氧化钠水溶液(2.26g)，搅拌20分钟，滴加水(6.78g)，搅拌2小时，抽滤，滤液无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化(硅胶规格:200-300目,石油醚:乙酸乙酯＝10:1～3:1)得到产物(2.2g,收率:30.5％)。
步骤3：6-((5-甲酰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000432
将6-((5-(羟基甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(3.03g, 8.26mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(60mL)中，搅拌下加入二氧化锰(7.18g,82.6mmol,10.0eq)，加毕，室温搅拌过夜。TLC显示反应完全，经硅藻土过滤，滤液无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析(硅胶规格:200-300目,石油醚:乙酸乙酯＝20:1～5:1)分离得到产物 (2.70g,收率:90.0％)。
步骤4：6-((5-(((3,5-二甲氧基苯基)氨基)甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2- 羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000441
将6-((5-甲酰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(2.6g,7.13 mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(50mL)中，搅拌溶解，加3,5-二甲氧基苯胺(1.63g,10.69mmol,1.5 eq)和乙酸(0.6mL)，滴毕，室温搅拌2小时，冰水浴下分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(7.55g, 35.65mmol,5.0eq)，加毕，室温搅拌过夜。TLC显示反应完全，加入饱和碳酸氢钠水溶液(150 mL)，用二氯甲烷(150×3mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化(硅胶规格:200-300目,石油醚:乙酸乙酯＝10:1)得产物(2.68g,收率:72.4％)。
步骤5：6-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000442
将6-((5-(((3,5-二甲氧基苯基)氨基)甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷 -2-羧酸叔丁酯(2.68g,5.34mmol,1.0eq)溶解于四氢呋喃(33mL)中，降温至0℃，滴加三乙胺 (1.62g,16.02mmol,3.0eq)，滴毕，搅拌10分钟，滴加三光气(2.06g,6.94mmol,1.3eq)的四氢呋喃溶液(10mL)，滴毕，缓慢升至室温搅拌1小时，加热至70℃反应3.5小时。LC-MS显示无原料，冷却至室温，加入饱和氯化铵水溶液(60mL)，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化(硅胶规格:200-300目,石油醚: 乙酸乙酯＝10:1～5:1)得产物(1.69g,收率:60.3％)。
步骤6：6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)- 基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000443
将6-(3-(3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(1.69g,3.2mmol,1.0eq)溶解于二氯甲烷(12mL)中，降温至0℃搅拌30分钟，滴加磺酰氯(1.08g,8.0mmol,2.5eq)的二氯甲烷溶液(5mL)，滴毕，此温度下搅拌15分钟，TLC反应完全。将体系滴加到饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)中，搅拌，分液，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化(硅胶规格:200-300目,二氯甲烷:甲醇＝200:1)得到产品(702.3mg,收率:36.9％)。
步骤7：6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基磺酰基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000451
将6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H) 基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(448.1mg,0.75mmol,1.0eq)溶解于二氯甲烷(10mL)中，降温至0℃，搅拌30分钟，分批加入间氯过氧苯甲酸(323.9mg,1.87mmol,2.5eq)，加毕，搅拌3小时，TLC监测反应完全。反应液加入饱和硫代硫酸钠水溶液(20mL)，分液，有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩得到产品(589.6mg粗品,收率:100.0％)。
步骤8：6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000452
将6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基磺酰基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(335.7mg粗品,0.42mmol,1.0eq)加入到甲胺水溶液(15mL)中，45℃加热搅拌4小时，TLC显示反应完全。降温至室温，用二氯甲烷(150mL×3) 萃取，有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化(硅胶规格:200-300 目,二氯甲烷:甲醇＝200:1～100:1)得到产品(105.5mg,收率:43.3％)。
步骤9：3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐的合成
Figure BDA0001757113050000461
将6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(105.5mg,0.182mmol,1.0eq)加入到乙醇(3mL) 中，降温至0℃，滴加氯化氢的乙醇溶液(3mL)，滴毕，升至室温搅拌2小时，TLC显示反应完全，将反应液浓缩得到产品(128.6mg粗品,收率:100.0％)。
步骤10：1-(2-丙烯酰基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000462
将3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-1-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐(128.6mg粗品,0.18mmol,1.0eq)加入四氢呋喃(4mL)中，降温至0℃，依次滴加三乙胺(81.3mg,0.804mmol,4.4eq)和丙烯酰氯(29.1mg,0.321mmol,1.7eq)，滴毕，升至室温搅拌2小时，TLC显示反应完全。向体系浓中加入饱和氯化铵水溶液(10mL)，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液经制备薄层色谱纯化(二氯甲烷:甲醇＝30:1)得到产品(11.1mg,收率:11.5％)。
分子式:C24H26Cl2N6O4分子量:533.41LC-MS(m/z)＝533.0[M+H]+.
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.98(s,1H),6.97(s,1H),6.24-6.28(m,1H),6.08-6.09(m, 1H),5.63(m,1H),5.31(m,1H),4.37(s,2H),4.29(s,1H),4.16(s,1H),3.95(s,6H),3.86(s,1H), 2.79-2.80(m,3H),2.66-2.68(m,2H),1.98-2.03(m,2H),1.10(s,1H),0.83-0.86(m,1H).
实施例9：1-(1'-丙烯酰基[1,3'-联吖丁啶]-3-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成(化合物10)
步骤1：3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基磺酰基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d] 嘧啶-1(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000471
将3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H) 基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(700.0mg,1.3mmol,1.0eq)溶于DCM(20mL)中，降温至0℃，加入间氯过氧苯甲酸(434.2mg,2.5mmol,2.0eq)，0℃搅拌反应2h，LC-MS监测反应完全，反应液直接进行下一步，无需纯化。
步骤2：3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000472
将上一步反应液加入封管中，加入甲胺水溶液(10mL)，45℃反应2h，LC-MS监测反应完全，冷却至室温，分液，水相用DCM萃取(20mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝100:1～60:1)，得到3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(470 mg,两步收率:69％)。
步骤3：1-(氮杂环丁烷-3-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并 [4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000473
将3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(470.0mg,0.9mmol,1.0eq)溶于EtOH(10mL)中，加入氯化氢乙醇溶液(10mL)，室温搅拌反应3h，LCMS监测反应完全，加入饱和碳酸氢钠水溶液(50 mL)，DCM萃取(3×50mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到1-(氮杂环丁烷-3-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮 (340mg,收率:89％)。
步骤4：3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)-[-1,3'-联吖丁啶]-1'-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000481
将1-(氮杂环丁烷-3-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并 [4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮(340.0mg,0.8mmol,1.0eq)溶于DCM(125mL)中，加入醋酸(0.5mL)和 3-氧代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(198.7mg,1.2mmol,1.5eq)，搅拌反应2h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(492.1mg,2.3mmol,3.0eq)，搅拌反应8h，TLC监测反应完全，用饱和碳酸氢钠溶液调节溶液pH＝7～8，分液，DCM萃取(2×50mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝100:1～20:1)，得到3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)-基)-[-1,3'-联吖丁啶]-1'-羧酸叔丁酯(240mg，收率:52％)。
步骤5：1-([1,3'-联吖丁啶]-3-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐的合成
Figure BDA0001757113050000482
将3-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)-[-1,3'-联吖丁啶]-1'-羧酸叔丁酯(240.0mg,0.4mmol,1.0eq)溶于EtOH(15mL)中，加入氯化氢乙醇溶液(10mL)，室温搅拌反应3h，LC-MS监测反应完全，浓缩，得到1-([1,3'- 联吖丁啶]-3-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -2(1H)-酮盐酸盐(320mg,收率:100％)。
步骤6：1-(1'-丙烯酰基[-1,3'-联吖丁啶]-3-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000483
将1-([1,3'-联吖丁啶]-3-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并 [4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐(320.0mg,0.6mmol,1.0eq)，溶于THF(15mL)中，加入三乙胺 (244.1mg,2.4mmol,4.0eq)，搅拌反应10min，缓慢滴加THF(1mL)溶解的丙烯酰氯(81.8mg, 0.9mmol,1.5eq)，室温搅拌反应2h，TLC监测反应完全，加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)， EA萃取(2×50mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝100:1～20:1) 得到1-(1'-丙烯酰基[-1,3'-联吖丁啶]-3-基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮(100mg,收率:30％)。
分子式:C24H27Cl2N7O4分子量:548.43LC-MS(m/z)＝548.1[M+H+].
1HNMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):8.00(s,1H),7.05(m,1H),6.97(m,1H),6.25-6.29(m,1H), 6.05-6.09(m,1H),5.63-5.67(m,1H),4.39(m,3H),4.16-4.18(m,1H),3.86-3.95(m,10H), 3.62-3.64(m,2H),3.01(m,2H),2.77-2.78(s,3H).
实施例10：2-((2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-8-(3-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)丙基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成(化合物12)
步骤1：6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000491
将6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(580mg,1.754mmol, 1.0eq)溶解在四氢呋喃(15mL)中，降温0℃，滴加70％mCPBA(616.3mg,1.754mmol,1.1eq) 的四氢呋喃(2mL)溶液，加完0℃-5℃搅拌3h。TLC监测反应完全，向反应液中依次加入饱和碳酸钠溶液(10mL)，饱和食盐水(10mL)，硫代硫酸钠溶液(10mL)，搅拌10min，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得6-(2-氯-3,5- 二甲氧基苯基)-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(605.7mg,收率:100％)。
步骤2：2-((2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶 -7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000492
将6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(605.7mg, 1.594mmol,1.0eq)、2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-胺盐酸盐(475.5mg,3.188mmol,2.0eq)和三乙胺(806 mg,7.970mmol,5.0eq)溶于1,4-二氧六环(10mL)中，加完升温至95℃反应2h。TLC监测无原料，减压浓缩，粗品加水(10mL×1)打浆10min，滤饼再用乙酸乙酯(50mL×2)打浆，过滤，滤饼60℃干燥得2-((2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(220mg,收率:32％)。
步骤3：4-(3-(2-((2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-氧代吡啶并 [2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)丙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000501
将2-((2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)- 酮(220mg,0.5129mmol,1.0eq)溶于DMF(5mL)中，加入4-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)哌嗪-1- 甲酸叔丁酯(248mg,0.769mmol,1.5eq)和碳酸钾(212.3mg,1.539mmol,3.0eq)。加毕，升温 90℃搅拌0.5h。TLC监测无原料，降温至30℃，将反应液倒入冰水中，用二氯甲烷(50mL×2) 萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化 (EA:PE＝1:2,MeOH:DCM＝1:30)得到4-(3-(2-((2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)丙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(288mg,收率:78.6％)。
步骤4：2-((2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-(3-(哌嗪-1-基)丙基) 吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)酮的合成
Figure BDA0001757113050000502
将4-(3-(2-((2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-氧代吡啶并[2,3-d] 嘧啶-8(7H)-基)丙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(288mg,0.440mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(5mL)中，降温至0℃，滴加三氟乙酸(1.5mL)，滴毕，0℃反应3h，减压浓缩掉溶剂，粗品用四氢呋喃 (50mL)溶解，浓缩，重复三次，得到油状液体，加水，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，水相用碳酸钠溶液调pH＝8-9，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，有机相合并，干燥，过滤，浓缩得2-((2- 氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-(3-(哌嗪-1-基)丙基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)酮(129mg,收率:52.8％)。
步骤5：2-((2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-8-(3-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)丙基)-6-(2-氯-3,5- 二甲氧基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000503
将2-((2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-(3-(哌嗪-1-基)丙基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)酮(129mg,0.2323mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(5mL)中，加入三乙胺 (117.5mg,1.162mmol,5.0eq)，降温至0℃，滴加丙烯酰氯(21mg,0.232mmol,1.0eq)。加完0℃搅拌1h。TLC监测反应完全，加入饱和碳酸钠溶液(10mL)，搅拌20min，用二氯甲烷(50mL×3) 萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品经制备薄层色谱纯化得到 2-((2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-8-(3-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)丙基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基) 吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(56mg,收率:39.6％)。
分子式:C31H37ClN6O5分子量:609.13LC-MS(Pos，m/z)＝609.3[M+H+].
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.62(s,1H),8.16-8.17(s,1H),7.72-7.73(m,1H),7.68-7.70 (m,2H),6.73-6.78(s,1H),6.06-6.10(m,1H),5.64-5.67(m,1H),4.63(m,2H),4.53(m,2H),4.32 (m,2H),4.23(m,1H),3.87(s,3H),3.78(s,3H),3.31-3.50(m,4H),2.67(m,2H),2.31-2.51(m, 6H),1.26(m,2H),1.24(m,1H),0.92(m,1H).
实施例11:8-(2-丙烯酰基-2-氮杂螺环[3.3]庚烷-6-基)-6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成(化合物15)
步骤1:2-(3,5-二甲氧基苯基)乙酸甲酯的合成
Figure BDA0001757113050000511
将2-(3,5-二甲氧基苯基)乙酸(25g,0.13mol,1.0eq)溶于甲醇(250mL)，加入DMF(0.5mL) 和氯化亚砜(5mL)，室温反应2小时，浓缩，加入水，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，饱和碳酸氢钠洗涤两次，干燥，浓缩得淡黄色油状产物(28g,产率:100％)。
步骤2:6-(3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000512
将2-(3,5-二甲氧基苯基)乙酸甲酯(14.3g,68.25mmol,1.5eq)和4-氨基-2(甲硫基)嘧啶-5- 甲醛(7.7g,45.5mmol,1.0eq)溶于DMF(50mL)中，加入碳酸钾(12.5g,91mmol,3.0eq)，升温至70℃反应5小时，LC-MS检测反应完，反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤两次，合并有机相，干燥，浓缩，粗品经乙酸乙酯浆洗后得黄色固体状产物(3.8g,产率:26％)。
步骤3:6-(3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000513
将6-(3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(3.8g,11.54mmol,1.0eq) 溶于DMF(30mL)中，降温至0℃，加入70％间氯过氧苯甲酸(2.84g,11.54mmol,1.0eq)，反应2小时后，将反应液加入到甲胺水溶液(30mL)中，升温至50℃反应1小时，反应体系中有固体析出，过滤，滤饼用二氯甲烷淋洗两次，烘干得产物(1.9g,产率:53％)。
步骤4:6-(6-(3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-2-氮杂螺环 [3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000521
将6-(3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(313mg,1mmol)和 6-((甲基磺酰基)氧基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(437mg,1.5mmol,1.5eq)溶于DMF(15 mL)中，加入碳酸钾(414mg,3mmol,3.0eq)，升温至100℃反应12小时。LC-MS检测反应完全，反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤两次，合并有机相，干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(PE:EA＝1:1)得淡黄色固体状产物(230mg,产率:45％)。
步骤5:(6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000522
将6-(6-(3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-2-氮杂螺环 [3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(230mg,0.45mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(5mL)，降温至0℃，加入磺酰氯(135mg,1mmol)，室温反应2小时，LC-MS检测反应完全，反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤两次，合并有机相，干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(PE:EA＝1:1)得淡黄色固体状产物(110mg,产率:42.4％)。
步骤6:6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-8-(2-氮杂-螺[3.3]庚-6-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)酮的合成
Figure BDA0001757113050000523
将(6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(110mg,0.19mmol)溶于二氯甲烷(5mL)，加入三氟乙酸(0.5mL)，室温反应2小时，LC-MS检测反应完全，浓缩得淡黄色油状产物(150mg粗品,产率:100％)，按理论量直接投于下一步反应。
步骤7:8-(2-丙烯酰基-2-氮杂螺环[3.3]庚烷-6-基)-6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000531
将6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-8-(2-氮杂-螺[3.3]庚-6-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)酮(150mg,0.19mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三乙胺(160mg,1.57mmol, 8.0eq)和丙烯酰氯(28.5mg,0.31mmol,1.6eq)，25℃反应2h，TLC监测反应完全，反应液倒入水中，加入二氯甲烷萃取，合并有机相，浓缩，粗品经硅胶柱层析(EA)纯化得淡黄色固体状产品(40mg,产率:40％)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):8.94(s,1H),7.94(s,1H),7.67(s,1H),7.00(s,1H),6.18-6.29 (m,1H),6.04-6.09(d,1H),5.63-5.66(d,1H),5.33(s,1H),4.29(s,1H),4.12(s,1H),3.98(s,7H), 3.84(s,1H),2.92(s,3H),2.70(m,2H),2.01-2.12(m,2H).
分子式:C25H25Cl2N5O4分子量:530.41LC-MS(Pos,m/z)＝530.9[M+H]+.
实施例:12：N-(4-(2-(6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-((2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)乙基)苯基)丙烯酰胺的合成(化合物17)
步骤1：6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)-8-(4-硝基苯)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000532
将6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(3.0g,8.25mmol)、4- 硝基苯乙基甲磺酸酯(5.67g,23.1mmol)和K2CO3(2.28g,16.5mmol)先后加入DMF(40mL)中， 50℃反应2h。将反应液冷却后倒入水(60mL)中，再加入EA(10mL)，搅拌2min后，抽滤，滤饼烘干得白色固体状产物(3.2g,收率:75.6％)。
步骤2：6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)-8-(4-硝基苯乙基)吡啶并[2,3-d]嘧啶 -7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000541
将6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)-8-(4-硝基苯)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(400mg, 0.78mmol,1.0eq)溶解在二氯甲烷(5mL)中，降温0℃。滴加70％mCPBA(301.4mg,0.86mmol, 1.1eq)的二氯甲烷(3mL)中，加毕，室温搅拌2h。TLC监测反应完全，向反应液中依次加入饱和碳酸氢钠溶液(10mL)，食盐水(10mL)，搅拌10min，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(PE:EA＝5:1)得6-(2- 氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)-8-(4-硝基苯乙基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(397mg,收率:93.6％)。
步骤2：6-((6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-(4-硝基苯乙基)-7-氧代-7,8-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-2基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000542
将6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)-8-(4-硝基苯)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(397 mg,0.73mmol,1.0eq)、6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(618.5mg,2.91mmol,4.0eq) 和三乙胺(368.5mg,3.64mmol,5.0eq)溶于1,4-二氧六环(5mL)中，升温至95℃反应过夜。 TLC监测无原料，加饱和氯化铵水溶液(10mL)，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，用无水硫酸干燥，过滤，母液减压浓缩得6-((6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-(4-硝基苯乙基)-7- 氧代-7,8-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-2基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(280mg,收率: 56.7％)。
步骤3：2-((2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-(4-硝基苯乙基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮三氟乙酸盐的合成
Figure BDA0001757113050000543
将6-((6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-(4-硝基苯乙基)-7-氧代-7,8-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-2 基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(280mg,0.41mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(5mL)中，降温0℃，滴加三氟乙酸溶液(5mL)，室温搅拌2h。TLC监测无原料，浓缩，粗品用THF(50 mL)溶解，真空浓缩，重复三次，得到2-((2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-8-(4-硝基苯乙基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮三氟乙酸盐，按理论量投入下一步。
步骤4：6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-((2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-8-(4-硝基苯乙基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000551
将上步所得粗品溶于甲醇(10mL)中，加入37％甲醛水溶液(83.8mg,1.03mmol,2.5eq)加毕，氮气保护下室温搅拌1h。降温至0℃，分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(318.8mg,1.24mmol, 3.0eq)，氮气保护下室温搅拌过夜。TLC监测反应完全，加入饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和饱和食盐水(10mL)，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得固体6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-((2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-8-(4-硝基苯乙基) 吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(200mg,收率:80％)。
步骤5：8-(4-氨基苯乙基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-((2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基) 氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000552
将6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-((2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-8-(4-硝基苯乙基) 吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(200mg,0.338mmol,1.0eq)溶于甲醇(10mL)中，加入饱和氯化铵溶液(3mL)，铁粉(378.9mg,6.766mmol,20eq)加毕，升温回流搅拌2h。TLC监测反应完成，趁热过滤，滤饼用甲醇淋洗，滤液减压浓缩得到固体，用二氯甲烷(100mL×3)打浆，过滤，滤液减压浓缩得到8-(4-氨基苯乙基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-((2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷 -6-基)氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(142mg,收率:75％)。
步骤6：N-(4-(2-(6-(2-氯-3,5二甲氧基苯基)-2-((2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-7- 氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)乙基)苯基)丙烯酰胺的合成
Figure BDA0001757113050000561
将8-(4-氨基苯乙基)-6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-((2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基) 吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(142mg,0.253mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(5mL)中，降温至0℃，滴加丙烯酰氯(22.8mg,0.253mmol,1.0eq)，加完0℃搅拌2h。TLC监测反应完成，加入饱和碳酸钠溶液(10mL)，搅拌20min，分液，水相用二氯甲烷(50mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品经制备薄层色谱纯化得到N-(4-(2-(6-(2-氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-((2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)乙基)苯基)丙烯酰胺(5mg,收率:3％)。
分子式:C33H35ClN6O4分子量:615.13LC-MS(Pos，m/z)＝615.21[M+H+].
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.78(s,1H),7.70-7.75(s,1H),7.65-7.68(d,1H),7.60(s, 1H),7.15-7.20(m,2H),6.70-6.75(m,1H),6.50(m,1H),6.20-6.25(m,1H),5.73-5.75(m,1H), 5.30(m,1H),4.30-4.45(m,4H),4.25(m,1H),3.80-3.85(s,3H),3.75-3.78(s,3H),3.10(m,1H), 2.80-2.85(s,3H),2.65-2.68(m,2H),2.20-2.50(m,1H),1.90-2.00(m,2H),1.40-1.45(m,2H).
实施例13：1-(2-丙烯酰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)-7-氨基-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-3,4- 二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成(化合物18)
步骤1：6-(7-氨基-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)- 基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000562
将6-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基磺酰基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(169.8mg,0.21mmol,1.0eq)加入到胺水溶液(10 mL)中，60℃加热5小时，TLC显示反应完全。体系降温至室温后用二氯甲烷(30mL×3)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化(硅胶规格:200-300目,二氯甲烷:甲醇＝200:1～30:1)得到产品(59.2mg,收率:49.8％)。
步骤2：7-氨基-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3,4-二氢嘧啶并 [4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐的合成
Figure BDA0001757113050000571
将6-(7-氨基-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-1(2H)- 基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(59.2mg,0.10mmol,1.0eq)加入到乙醇(1mL)中，体系降温至0℃，滴加氯化氢乙醇溶液(2mL)，滴毕，升至室温搅拌2小时，TLC显示反应完全，将体系浓缩得到产品(57.2mg粗品,收率:100.0％)。
步骤3：1-(2-丙烯酰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)-7-氨基-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000572
将7-氨基-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3,4-二氢嘧啶并 [4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐(57.2mg粗品,0.10mmol,1.0eq)加入四氢呋喃(3mL)中，降温至0℃，依次滴加三乙胺(37.3mg,0.36mmol,3.6eq)和丙烯酰氯(13.6mg,0.13mmol,1.3eq)，滴毕，升至室温搅拌1小时，TLC显示反应完全。向体系中加入饱和氯化铵水溶液(10mL)，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液经制备薄层色谱纯化(二氯甲烷:甲醇＝30:1)得到产品(1.8mg,收率:3.4％)。
分子式:C23H24Cl2N6O4分子量:519.38LC-MS(m/z)＝520.08[M+H]+.
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.72(s,1H),7.22(s,1H),6.99(m,1H),6.64-6.99(s,1H), 6.21-6.30(m,1H),6.04-6.08(m,1H),5.55-5.65(m,1H),5.31-5.33(m,1H),4.28-4.31(m,2H), 4.15(m,1H),3.94-3.98(s,6H),3.84-3.86(m,1H),2.63-2.66(m,2H),1.98-2.02(m,2H),0.83-0.86 (m,2H).
实施例14：N-(4-(2-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d] 嘧啶-1(2H)-基)乙基)苯基)丙烯酰胺的合成(化合物19)
步骤1：2-(甲硫基)-4-((4-硝基苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲酸乙酯的合成
Figure BDA0001757113050000581
将4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲酸乙酯(20.0g,86.2mmol,1.0eq)、2-(4-硝基苯基)乙-1-胺盐酸盐(20.9g,103.4mmol,1.2eq)和三乙胺(26.2g,258.6mmol,3.0eq)溶于四氢呋喃(200.0mL)，室温搅拌2h，TLC显示反应完全。过滤，滤液减压浓缩得黄色固体2-(甲硫基)-4-((4-硝基苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲酸乙酯(33.0g)直接用于下一步。
步骤2：2-(甲硫基)-4-((4-硝基苯乙基)氨基)嘧啶-5-基)甲醇的合成
Figure BDA0001757113050000582
将四氢铝锂(4.9g,129.3mmol,1.5eq)溶于四氢呋喃(200.0mL)中，0℃下缓慢滴入2-(甲硫基)-4-((4-硝基苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲酸乙酯(33.0g)的四氢呋喃(100.0mL)溶液，0℃下搅拌1h， TLC显示反应完全。冰浴下加入水(4.9mL)，搅拌2min，冰浴下加入10％氢氧化钠水溶液(4.9 mL)，搅拌2min，再加入水(15.0mL)，搅拌15min，硅藻土过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝300:1～40:1)纯化得黄色固体状产物(4.0g,收率:14.5％)。
步骤3：2-(甲硫基)-4-((4-硝基苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲醛的合成
Figure BDA0001757113050000583
将2-(甲硫基)-4-((4-硝基苯乙基)氨基)嘧啶-5-基)甲醇(3.56g,11.122mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(70.0mL)和四氢呋喃(10.0mL)的混合溶剂中，加入二氧化锰(7.74g,88.975mmol,8.0 eq)，室温搅拌过夜。TLC检测反应完全，经硅藻土过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析 (DCM:MeOH＝300:1～150:1)纯化得黄色固体状产物(2.78g,收率:78.1％)。
步骤4：5-(((3,5-二甲氧基苯基)氨基)甲基)-2-(甲硫基)-N-(4-硝基苯基)嘧啶-4-胺的合成
Figure BDA0001757113050000584
将2-(甲硫基)-4-((4-硝基苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲醛(2.78g,8.732mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(50mL)中，加入3,5-二甲氧基苯胺(1.604g,10.478mmol,1.2eq)和三乙酰氧基硼氢化钠 (4.627g,21.830mmol,2.5eq)，室温下搅拌过夜。TLC检测反应完全，加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭，二氯甲烷(10.0mL)萃取三次，有机相干燥，减压浓缩，粗品经硅胶柱层析 (DCM:MeOH＝250:1～100:1)纯化得黄色固体状产品(2.68g,收率:70％)。
步骤5：3-(3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-1-(4-硝基苯基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000591
将5-(((3,5-二甲氧基苯基)氨基)甲基)-2-(甲硫基)-N-(4-硝基苯基)嘧啶-4-胺(2.68g,5.883 mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(50.0mL)，0℃加入三光气(1.89g,6.471mmol,1.1eq)，室温下搅拌 1h，降温至0℃，加入三乙胺(1.79g,17.649mmol,3.0eq)，升温至70℃反应1.5h，TLC检测反应完全。向反应液中加入饱和氯化铵淬灭，乙酸乙酯萃取三次，水洗，饱和氯化钠溶液洗，有机相干燥，减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝300:1～200:1)纯化得白色固体状产物(2.42g,收率:90.3％)。
步骤6：3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-1-(4-硝基苯基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -2(1H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000592
将3-(3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-1-(4-硝基苯基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮 (500.0mg,1.038mmol,1.0eq)溶于二氯甲烷(10.0mL)，降温至0℃，加入二氯甲烷(2.0mL)稀释的二氯亚砜(349.1mg,2.596mmol,2.5eq)，反应15min后，加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭，二氯甲烷萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，甲基叔丁基醚浆洗得白色固体状产物(478.0mg,收率:83.62％)。
步骤7：3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基磺酰基)-1-(4-硝基苯基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d] 嘧啶-2(1H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000601
将3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲硫基)-1-(4-硝基苯基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -2(1H)-酮(478.0mg,0.868mmol,1.0eq)，溶于二氯甲烷(15.0mL)，降温至0℃，加入间氯过氧苯甲酸(470.9mg,1.910mmol,2.2eq)，反应1h，TLC显示反应完全。加入饱和碳酸氢钠淬灭，二氯甲烷萃取，有机相干燥，减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝500:1～400:1)纯化得白色固体状产物(360.0mg,收率：75.7％)。
步骤8：3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-1-(4-硝基苯基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶-2(1H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000602
将3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基磺酰基)-1-(4-硝基苯基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d] 嘧啶-2(1H)-酮(336.0mg,0.6546mmol,1.0eq)、甲胺溶液(286.7mg,2.308mmol,4.0eq)和三乙胺(350.3mg,3.462mmol,6.0eq)溶于二氧六环(5.0mL)和四氢呋喃(2.0mL)中，80℃回流3h， TLC显示反应完全。加入水，二氯甲烷萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝300:1～200:1)纯化得类白色固体状产物(194.0mg,收率:55.4％)。
步骤9：1-(4-氨基苯乙基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d] 嘧啶-2(1H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000603
将3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-1-(4-硝基苯基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -2(1H)-酮(194.0mg,0.364mmol,1.0eq)溶于乙醇(5.0mmo)，加入铁粉(814.7mg,14.549mmol, 40.0eq)和饱和氯化铵溶液(2.5mL)，80℃回流1.5h。TLC显示反应完全，过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝300:1～200:1)纯化得产物(65.0mg,收率:33.5％)。
步骤10：N-(4-(2-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d] 嘧啶-1(2H)-基)乙基)苯基)丙烯酰胺的合成
Figure BDA0001757113050000611
将1-(4-氨基苯乙基)-3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d] 嘧啶-2(1H)-酮(20.0mg,0.0377mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃(1.0mL)，加入三乙胺(11.4mg,0.113 mmol,3.0eq)，0℃加入丙烯酰氯(5.1mg,0.0566mmol,1.5eq)，缓慢升至室温，1h后TLC显示反应完全。加入饱和碳酸氢钠淬灭，二氯甲烷萃取三次，乙酸乙酯萃取三次，有机相合并，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝90:1～50:1)纯化得白色固体 N-(4-(2-(3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶 -1(2H)-基)乙基)苯基)丙烯酰胺(6.0mg,收率:30％)。
分子式：C26H26Cl2N6O4分子量：557.43LC-MS(Pos,m/z)＝558.4[M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):10.07(s,1H),7.99(s,1H),7.59-7.57(d,2H),7.20-7.18(d, 2H),6.99(s,1H),6.46-6.39(m,1H),6.27-6.22(d,1H),5.76-5.73(d,1H),4.42(s,2H),4.14-4.13 (m,2H),3.97(s,6H),2.90-2.86(m,5H),2.02-1.99(m,1H).
对比例1：8-(3-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)丙基)-6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基) 吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成(PRN1371，简称化合物A)
步骤1:2-(3,5-二甲氧基苯基)乙酸甲酯的合成
Figure BDA0001757113050000612
将原料2-(3,5-二甲氧基苯基)乙酸(50g,0.26mol,1.0eq)溶于甲醇(500mL)，加入DMF(0.5 mL)和氯化亚砜(10mL)，室温反应12个小时，LC-MS检测反应完全，浓缩，加入水，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，干燥，浓缩得淡黄色油状产物(53g,收率:100％)。
步骤2:6-(3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000613
将2-(3,5-二甲氧基苯基)乙酸甲酯(19.6g,0.0931mol,1.5eq)和4-氨基-2-(甲硫基)嘧啶-5- 甲醛(10.5g,0.0621mol,1.0eq)溶于NMP(20mL)中，加入碳酸钾(17.1g,0.124mol,3.0eq)，升温至100℃反应12个小时，LC-MS检测反应完全，反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤两次，合并有机相，干燥，浓缩，粗品经乙酸乙酯浆洗后得白色固体状产物(14.745 g,收率:72％).
步骤3:6-(3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000621
将6-(3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(4.0g,0.0121mol,1.0eq) 溶于DMF(50mL)中，降温至0℃，加入70％间氯过氧苯甲酸(3.5g,0.0134mol,1.1eq)，反应 2小时，LC-MS检测反应完全，反应液直接用于下步反应。
步骤4:6-(3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000622
将6-(3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(4.178g,0.0121mol, 1.0eq)溶于甲氨甲醇溶液(300mL)中，50℃反12个小时后，LC-MS检测反应完全，加入水(200 mL)，搅拌10min，过滤，滤饼用二氯甲烷淋洗两次，烘干后得产物(2.75g,收率:72.7％)。
步骤5:4-(3-(6-(3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲氨基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)丙基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000623
将6-(3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(2.75g,0.0088mol,1.0 eq)和4-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.256mg,0.0132mol,1.5eq)混合于 DMF(50mL)中，加入碳酸钾(3.645g,0.0264mol,3.0eq)，升温至90℃反应3小时，LC-MS 检测反应完全，反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤两次，合并有机相，干燥，浓缩得淡黄色油状产物(4.738g,收率:100％)。
步骤5:4-(3-(6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲氨基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)- 基)丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0001757113050000631
将4-(3-(6-(3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲氨基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)丙基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯(4.738g,0.0088mol,1.0eq)溶于二氯甲烷(100mL)，降温至0℃，加入磺酰氯 (2.969g,0.022mol,2.5eq)，室温反应2小时。LC-MS检测反应完全，反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤两次，合并有机相，干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析(PE:EA＝1:1) 纯化得淡黄色固体状产物(5.432g,收率:100％)。按理论量直接投于下一步反应。
步骤6:6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-8-(3-(哌嗪-1-基)丙基)吡啶并[2,3-d] 嘧啶-7(8H)-酮三氟乙酸盐
Figure BDA0001757113050000632
将4-(3-(6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲氨基)-7-氧代吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(7H)-基)丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5.346g,0.0088mol,1.0eq)溶于二氯甲烷(50mL)，加入三氟乙酸(50 mL)，室温反应2小时，LC-MS检测反应完全，浓缩得产物(4.465g粗品)，按理论量直接投于下一步反应。
步骤7:8-(3-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)丙基)-6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的合成
Figure BDA0001757113050000633
将6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-2-(甲基氨基)-8-(3-(哌嗪-1-基)丙基)吡啶并[2,3-d]嘧啶 -7(8H)-酮三氟乙酸盐(4.465g,0.0088mol,1.0eq)溶于四氢呋喃(50mL)中，在加入三乙胺 (4.452g,0.044mol,5.0eq)，在0℃加入丙烯酰氯(1.5g,0.0088mol,1.0eq)，0～5℃反应2h， LC-MS监测反应完全，反应液倒入饱和碳酸钠水溶液(50mL)中，搅拌20min后，加入二氯甲烷萃取(100mL×3)，合并有机相，干燥，浓缩，粗品先经硅胶柱层析(MeOH:DCM＝1:150) 纯化，再加入甲基叔丁基醚浆洗，抽滤得黄色固体状产物(600mg,3步收率:13％)。
分子式:C26H30Cl2N6O4分子量:561.46LC-MS(Pos，m/z)＝561.11[M+H]+.
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.618(s,1H),7.892(s,1H),7.675(s,1H),6.976(s,1H), 6.732-6.800(m,1H),6.054-6.101(m,1H),5.633-5.665(m,1H),4.282-4.368(d,2H),3.951(s,6H), 3.445-3.462(d,4H),2.910-2.921(d,3H),2.301-2.389(d,6H),1.837(s,2H).
与现有技术相比，本发明的化合物具有以下创新点：①化合物对FGFR各亚型的酶学抑制活性更强，因FGFR基因异常的癌细胞杀伤活性更优。②化合物在动物及人的体内外PK 方面成药性更强，可保证给药后动物及人体内有着较佳的暴露量，从而利于药物抑癌效果的体现。③化合物在动物药效模型上呈现了较优的抑制效果，因此预测其在人体内的临床应用效果较佳。
根据下述实验例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实验例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实验例1本发明化合物的细胞活性测试
Hep3B为肝细胞癌FGFR异常细胞，来源于ATCC
RT112/84为膀胱癌FGFR异常细胞，来源于ECACC
SNU-16为胃癌FGFR异常细胞，来源于ATCC
测试物：本发明的化合物，其结构见前文所示。
测试仪器：EnSpireTM或EnVisionTM多功能酶标仪。
试验方法：
各株细胞接种于96孔板中贴壁培养过夜后，加入不同浓度的化合物(12个剂量组，3倍梯度DMSO稀释)使终浓度为0.17-30000nM，其中DMSO终含量均为5‰(v/v)。阴性对照孔仅含有5‰DMSO的培养基，阳性对照孔为含有细胞及5‰DMSO的培养基。在37℃，5％ CO2，95％湿度下孵育72h后待测。每孔加入30μL Cell titer-GloTM试剂，室温孵育30min后，酶标仪读取化学发光终数据。
细胞活力抑制率按照如下公式计算：
Figure BDA0001757113050000641
其中，最大发光值由阳性对照孔得到，最小发光值由阴性对照孔得到，使用XLFit回归得到IC50数值，回归曲线为fit＝(A+((B-A)/(1+((x/C)^D))))，其中，A为化合物最小抑制率， B为化合物最大抑制率，C为IC50，D为斜率。
测试结果如表2和表 3所示：
表2本发明化合物对细胞活力的抑制活性(IC50)
化合物 Hep3B(nM) RT112/84(nM) SNU-16(nM)
2 74 19 13
3 - 123 -
4 110 - -
5 - 69 92
6 - - 149
12 66 22 7
17 - 84 -
表3本发明化合物对细胞活力的抑制活性(IC50)
化合物 Hep3B(nM) RT112/84(nM) SNU-16(nM)
9 26 8 2
14 - 123 50
15 29 25 2
19 22 11 -
-表示未测试。
由表2和表 3结果可见，本发明的化合物对Hep3B、RT112/84、SNU-16等FGFR异常的细胞活力具有良好的抑制活性，说明本发明化合物可以用来治疗由FGF/FGFR异常介导的癌症如肝癌、胃癌、膀胱癌，具有非常好的临床使用价值。
实验例2本发明化合物的酶学活性测试
FAM标记的多肽底物P22来源于GL Biochem
测试物：本发明中的化合物，其结构见前文所示。
测试仪器：使用Caliper EZ ReaderTMⅡ药物筛选平台。
试验方法：
1.化合物板准备
a)在96孔板上设置化合物的10个剂量组，每孔加入DMSO，3倍梯度DMSO稀释，得各化合物的稀释液；化合物的最高浓度为500μM；
b)将步骤a)制备的各化合物稀释液转移至384孔板中，通过1×激酶缓冲液(50mMHEPES，Ph 7.5；0.0015％Brij-35；2mM DTT)稀释，使每孔含有5μL 10％DMSO (v/v)溶解的5×化合物溶液，使得最高终浓度为10μM。阴性对照孔为5μL含有10％DMSO的1×激酶缓冲液。
2.实验步骤
向步骤1b)中的5×化合物溶液中加入10μL 2.5×酶液，在室温中反应10min后，加入总体积为10μL的事先溶解于1×激酶缓冲液中的FAM标记的多肽底物，与ATP启动反应后，孵育30分钟加入25μL终止液(100mM HEPES，pH 7.5；0.015％Brij-35；0.2％CoatingReagent #3；50mM EDTA)终止反应Caliper读取终数据。
测试结果如表4所示：
表4本发明化合物对FGFR的抑制活性(IC50)
Figure BDA0001757113050000651
-表示未测试。
由表4实验结果可见，本发明的化合物对FGFR具有良好的抑制活性，说明本发明化合物在治疗由FGF/FGFR异常介导的疾病方面具有较好的临床应用潜力。
实验例3本发明化合物的小鼠药代动力学评价
1、目的：
评价本发明化合物在BalbC雌性裸小鼠(南京大学-南京生物医药研究院)体内的药代动力学参数，并考察其生物利用度。
2、动物给药及样品采集：
将化合物9用0.5％CMC-Na水溶液(含0.5％吐温-80)分散制备混悬剂，化合物9的混悬剂以10.0mg/kg的剂量向BalbC裸小鼠(共9只，分3组，每组3只)灌胃给药(化合物 9的混悬剂)，采血时间点为给药后：15min，30min，1h，2h，4h，6h，8h，24h，30h。
将化合物9用二甲基乙酰胺(DMA):聚氧乙烯蓖麻油(EL):10％羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)生理盐水:1M HCl＝5:5:89.5:0.5(v/v/v/v)溶解制备溶液，化合物9的溶液以4.0mg/kg的剂量给予BalbC裸小鼠(共9只，分3组，每组3只)以推注给药，采血时间点为给药后(每只采集3个时间点)：5min，15min，30min，1h，2h，4h，6h，8h,24h。
经眼眶后静脉丛采集100μL左右的血液，血液采集后放置到含有EDTA-K2抗凝管中。血液样品在4℃条件下8000rpm离心6min得到血浆样品，血浆必需在血液采集后的30min内制备，血浆测试前存放在-80℃冰箱内。
3、样品分析方法：
从-80℃冰箱中取出来源于9只小鼠个体的待测样品，室温自然融化后涡旋5min；分别精密吸取每个时间点不同个体小鼠10μL血浆样品至1.5mL离心管中(精密吸取标准曲线血浆30μL)；加入200μL浓度为100ng/mL的甲苯磺丁脲的甲醇溶液(内标工作溶液)，混匀；涡旋5min后，12000rpm离心5min；精密吸取50μL上清液至预先加有150μL/每孔水的96 孔板中；涡旋混匀5min，进行LC-MS/MS测定，进样体积为10μL。
4、数据处理方法：
化合物浓度使用AB公司的Analyst 1.6.3输出结果。Microsoft Excel计算均值、标准差、变异系数等参数(Analyst 1.6.3直接输出的不用计算)，药代动力学参数采用Pharsight Phoenix 6.1 软件NCA计算。
结果如表5所示：
表5化合物9在BalbC裸小鼠体内的PK参数(iv：4mg/kg，po：10mg/kg，n＝9)
Figure BDA0001757113050000661
注Tmax po：达峰时间，AUCinf iv/po：药-时曲线下面积，F％：生物利用度
结论：本发明化合物具有较好的体内暴露量和生物利用度。
实验例4本发明化合物的人肝微粒体稳定性评价
目的：评价化合物本发明化合物的人肝微粒体稳定性。
表6温孵体系的构成
Figure BDA0001757113050000662
试验步骤：
(1).从-80℃冰箱中取出肝微粒体(20mg蛋白/mL)，置于37℃水浴恒温振荡器上预温孵3min，融化待用。
(2).按照上面表6中“温孵体系的构成”比例，制备温孵体系混合溶液(不含化合物和β-NADPH)，置于37℃水浴恒温振荡器上预孵育2min。
(3).对照组(不含β-NADPH)：分别取30μL水和30μL化合物工作溶液(10μM)加入到240μL步骤(2)所述温孵体系混合液中，涡旋30s，混匀，反应总体积300μL，复样。放入到37℃水浴恒温振荡器中进行孵育，并开始计时，取样时间点为0min和60min。
(4).样品组：分别取70μLβ-NADPH溶液(10mM)和70μL化合物工作溶液(10μM)加入560μL步骤(2)所述混合溶液中，反应总体积700μL，涡旋30s，混匀，复孔。放入到37℃水浴恒温振荡器中进行孵育，并开始计时，取样时间点为计时后0min,5min,10 min,20min,30min,60min。
(5).涡旋3min后，12000rpm离心5min。
(6).取上清液50μL加入150μL水，涡旋混匀，LC/MS/MS进样分析。
数据分析：
用下列一级动力学公式计算半衰期(t1/2)和清除率(Cl)：
Ct＝C0*e–kt
t1/2＝ln2/k＝0.693/k
Clint＝Vd*k
Vd＝1/肝微粒体中蛋白含量
注：k为化合物剩余量的对数与时间作图的斜率，Vd为表观分布容积。
结果如表7所示：
表7
Figure BDA0001757113050000671
注：R2：决定系数；t1/2：清除半衰期；Clint：固有清除率；Eh：肝提取率。
从上述结果可以看出我们的化合物相比现有技术公开的化合物A在人肝微粒体有较低的清除率。
实验例5本发明化合物的犬血浆稳定性评价
目的：评价本发明化合物犬血浆稳定性。
工作溶液制备：
受试物：取化合物2mg左右，先用DMSO配制成5mM的储备液，再用DMSO稀释成1mM 溶液，最后用水稀释成50μM的待测化合物工作溶液，待用。
终止液：取化合物甲苯磺丁脲2mg左右，先用DMSO配制成1mg/mL的储备液，最后用乙腈稀释成100ng/mL的终止液，并4℃保存，待用。
试验步骤：
1).将冰冻的Beagle犬血浆(购买于瑞德肝脏疾病研究(上海)有限公司)置37℃水浴恒温振荡器中预孵育解冻备用。
2).取10μL待测化合物工作溶液(50μM)加到490μL Beagle犬血浆中，待测物终浓度1μM，两个复样。
3).涡旋混匀，置于37℃水浴恒温振荡器中孵育。
4).在对应的时间点(T＝0h，0.5h，1h，2h，4h；0h的样品不进行温育)取反应液40μL，加入400μL的终止液(100ng/mL的甲苯磺丁脲乙腈溶液)，混匀后置-80℃冻存。
6).待孵育实验完成后，解冻各时间点样品管，混匀后至4℃离心机中12000rpm离心5min。
7).取96孔样品板加入150μL的水，取步骤6)中离心后的上清液50μL至样品孔中，混匀后进行进
样分析。
数据分析：
化合物在血浆中的稳定性采用化合物经各时间点孵育后的保留百分率来评价，样品的浓度用测试化合物的峰面积和内标峰面积之比表示。
计算公式如下：保留率(％)＝CTn/CT0
其中，CTn为化合物在各孵育时间点后终溶液测定浓度，n＝0.5h，1h，2h，
4h；CT0为化合物在起始孵育时终溶液测定浓度。
结果如表8所示：
表8
Figure BDA0001757113050000681
结论：从上述结果可以看出我们的化合物相比现有技术公开的化合物A具有较好的犬血浆稳定性。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。

Claims (17)

1.通式(I-A)所示的成纤维细胞生长因子受体(FGFR)不可逆抑制剂，或其药学上可接受的盐、立体异构体：
Figure FDA0003426345030000011
其中，
warhead1选自
Figure FDA0003426345030000012
R12、R13、R14分别独立地选自氢；
X选自C或N，当X为C时，
Figure FDA0003426345030000013
代表双键，当X为N时，
Figure FDA0003426345030000014
代表单键；
R2选自氢、C1-6烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy1、Cy2分别独立地选自如下基团的二价基：经一至多个Ra取代，或未经取代的3-8元单杂环基、苯基、7-12元螺杂环基；
Cy3选自如下基团：经一至多个Rb取代的，或未经取代的7元螺杂环基；
Ra、Rb分别独立地选自：
(i)氢；
(ii)C1-6烷基；
R3选自氢、C1-6烷基；
R4选自氢、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基；
L1、L2、L3分别独立地为键、C1-6亚烷基；
n、q分别独立地为0或1；
t、p分别为0；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团；
当Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8元单杂环基或苯基的二价基时，R2为-(L3)q-Cy3，且Cy3为经一至多个Rb取代，或未经取代的7元螺杂环基。
2.如权利要求1所述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1选自
Figure FDA0003426345030000021
R12、R13、R14分别独立地选自氢；
X选自C或N，当X为C时，
Figure FDA0003426345030000022
代表双键，当X为N时，
Figure FDA0003426345030000023
代表单键；
R2选自氢、C1-4烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy1选自如下基团的二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8元单杂环基、7-12元螺杂环基；
Cy3选自如下基团：经一至多个Rb取代的，或未经取代的7元螺杂环基；
Ra、Rb分别独立地选自：
(i)氢，
(ii)C1-4烷基；
L1、L3分别独立地为键或C1-4亚烷基；
n、q分别独立地为0或1；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团；
当Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8元单杂环基的二价基时，R2为-(L3)q-Cy3，且Cy3为经一至多个Rb取代，或未经取代的7元螺杂环基。
3.如权利要求1所述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1选自
Figure FDA0003426345030000024
R12、R13、R14分别独立地选自氢；
X选自C或N，当X为C时，
Figure FDA0003426345030000025
代表双键，当X为N时，
Figure FDA0003426345030000026
代表单键；
R2选自氢、C1-4烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy1选自如下结构的二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代
Figure FDA0003426345030000027
Cy3选自如下结构的一价基：经一至多个Rb取代的，或未经取代的
Figure FDA0003426345030000031
Ra、Rb分别独立的选自氢、C1-4烷基；
L1、L3分别独立地为键或C1-4亚烷基；
n、q分别独立地为0或1；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素原子、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团；
当Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的
Figure FDA0003426345030000032
的二价基时，R2为-(L3)q-Cy3，且Cy3为经一至多个Rb取代的，或未经取代的
Figure FDA0003426345030000033
的一价基。
4.如权利要求2所述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1是
Figure FDA0003426345030000034
R12、R13分别独立地选自氢；
X选自C或N，当X为C时，
Figure FDA0003426345030000035
代表双键，当X为N时，
Figure FDA0003426345030000036
代表单键；
Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的7-12元亚螺杂环基；
L1为键或C1-4亚烷基；
Ra选自氢或C1-4烷基；
R2选自氢或C1-4烷基；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
n为0或1；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团。
5.如权利要求4所述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的7-12元含N亚螺杂环基，warhead1与Cy1中任意的成环N杂原子相连。
6.如权利要求4所述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
Cy1为如下结构的二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的
Figure FDA0003426345030000041
Figure FDA0003426345030000042
warhead1与Cy1中任意的成环N杂原子相连。
7.如权利要求1项所述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体：
其中，
warhead1选自
Figure FDA0003426345030000043
R12、R13、R14分别独立地选自氢；
X选自C或N，当X为C时，
Figure FDA0003426345030000044
代表双键，当X为N时，
Figure FDA0003426345030000045
代表单键；
R2选自氢、C1-4烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy1选自如下基团的二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8元单杂环基、7-12元螺杂环基；
Cy3选自如下基团：经一至多个Rb取代的，或未经取代的7元螺杂环基；
Ra、Rb分别独立地选自氢、C1-4烷基；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基；
L1、L3分别独立地为键或C1-4亚烷基；
n、q分别独立地为0或1；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团；
当Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8元单杂环基的二价基时，R2为-(L3)q-Cy3，且Cy3为经一至多个Rb取代，或未经取代的7元螺杂环基。
8.如权利要求7所述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1选自
Figure FDA0003426345030000051
R12、R13、R14分别独立地选自氢；
X选自C或N，当X为C时，
Figure FDA0003426345030000052
代表双键，当X为N时，
Figure FDA0003426345030000053
代表单键；
Cy1选自如下基团的二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8元含氮单杂环基或7-12元含氮螺杂环基；
R2选自氢、C1-4烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy3为经一至多个Rb取代的，或未经取代的7元螺杂环基；
Ra、Rb、R3分别独立地选自氢或C1-4烷基；R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
L1、L3分别独立地为键或C1-4亚烷基；
n、q分别独立地为0或1；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团；
当Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的3-8元含氮单杂环基的二价基时，R2为-(L3)q-Cy3，且Cy3为经一至多个Rb取代的，或未经取代的7元螺杂环基。
9.如权利要求8所述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1选自
Figure FDA0003426345030000054
R12、R13、R14分别独立地选自氢；
X选自C或N，当X为C时，
Figure FDA0003426345030000055
代表双键，当X为N时，
Figure FDA0003426345030000056
代表单键；
Cy1选自如下结构的二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的
Figure FDA0003426345030000057
R2选自氢、C1-4烷基或-(L3)q-Cy3；
Cy3为经一至多个Rb取代的，或未经取代的7元螺杂环基；
Ra、Rb、R3分别独立地选自氢、C1-4烷基；R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
L1、L3分别独立地为键或C1-4亚烷基；
n、q分别独立地为0或1；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团；
当Cy1为经一至多个Ra取代的，或未经取代的
Figure FDA0003426345030000061
的二价基时，R2为-(L3)q-Cy3，且Cy3为经一至多个Rb取代的，或未经取代的7元螺杂环基。
10.如权利要求7-9任一项所述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1是
Figure FDA0003426345030000062
R12、R13分别独立地选自氢；
Cy1为如下结构的二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的
Figure FDA0003426345030000063
Figure FDA0003426345030000064
warhead1与Cy1中任意的成环N杂原子相连；
t、p分别为0；
n为0；
Ra选自氢或C1-4烷基；
R2选自氢或C1-4烷基；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团。
11.如权利要求7-9任一项所述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中：
warhead1是
Figure FDA0003426345030000065
R12、R13、R14分别独立地选自氢；
Cy1为如下结构的二价基：经一至多个Ra取代的，或未经取代的
Figure FDA0003426345030000071
warhead1与Cy1中任意的成环N杂原子相连；
t、p分别为0；
R2为-(L3)q-Cy3；
Cy3为如下结构的一价基：经一至多个Rb取代的，或未经取代的
Figure FDA0003426345030000072
n、q分别独立地为0或1；
Ra、Rb分别独立地选自氢或C1-4烷基；
R3选自氢或C1-4烷基；
R4选自氢、卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
L1、L3分别独立地为键、C1-4烷基；
m是0-5的整数，当m≥2时，R4可以选自相同或不同的基团。
12.如权利要求1-2任一项所述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体，其中，所述成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂选自如下结构的化合物：
Figure FDA0003426345030000073
Figure FDA0003426345030000081
Figure FDA0003426345030000091
13.含有权利要求1-12任一项所述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体的药物制剂。
14.如权利要求13所述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体的药物制剂，所述药物制剂包含一种或多种药用载体。
15.如权利要求14所述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体的药物制剂，所述药物制剂包含一种或多种第二治疗活性剂，所述的第二治疗活性剂为抗代谢物、生长因子抑制剂、有丝分类抑制剂、抗肿瘤激素类、烷化剂类、金属类、拓扑异构酶抑制剂、激素药、免疫调节剂、肿瘤抑制基因、癌疫苗、免疫检查点或肿瘤免疫治疗相关的抗体和小分子药物。
16.权利要求1-12任一项所述的成纤维细胞生长因子受体不可逆抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体或者权利要求13-15任一项所述的药物制剂在制备治疗FGF/FGFR异常介导的疾病的药物中的应用。
17.如权利要求16所述的应用，所述的FGF/FGFR异常介导的疾病为癌症，所述的癌症包括肺癌、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、乳腺癌、乳腺导管癌、头颈癌、子宫内膜癌、宫体癌、直肠癌、肝癌、肾癌、肾盂癌、食管癌、食管腺癌、神经胶质瘤、前列腺癌、甲状腺癌、女性生殖系统癌症、原位癌、淋巴瘤、神经纤维瘤病、骨癌、皮肤癌、脑癌、结肠癌、睾丸癌、胃肠道间质瘤、口腔癌、咽癌、多发性骨髓瘤、白血病、非霍奇金淋巴瘤、大肠绒毛腺瘤、黑色素瘤、细胞瘤和肉瘤和/或骨髓增生异常综合症。
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