CN109293773B

CN109293773B - 靶向cd38蛋白的抗体、嵌合抗原受体和药物

Info

Publication number: CN109293773B
Application number: CN201811121365.4A
Authority: CN
Inventors: 晁瑞华; 刘明耀; 杜冰; 席在喜
Original assignee: Shanghai Bangyao Biological Technology Co ltd
Current assignee: Shanghai Bangyao Biological Technology Co ltd
Priority date: 2018-09-25
Filing date: 2018-09-25
Publication date: 2020-09-04
Anticipated expiration: 2038-09-25
Also published as: CN109293773A

Abstract

本发明公开了一种靶向CD38蛋白的抗体、嵌合抗原受体和药物，涉及细胞免疫治疗技术领域。本发明提供的抗体具有SEQ ID NO.6‑8所示的重链CDR区和SEQ ID NO.14‑16所示的轻链CDR区，或者是，具有SEQ ID NO.22‑24所示的重链CDR区和SEQ ID NO.30‑32所示的轻链CDR区；该抗体具有特异性结合CD38蛋白的能力，采用该抗体制备的嵌合抗原受体T细胞对CD38蛋白呈阳性的靶细胞具有特异性的杀伤效果，可用于制备治疗或预防肿瘤的药物。

Description

靶向CD38蛋白的抗体、嵌合抗原受体和药物

技术领域

本发明涉及细胞免疫治疗技术领域，具体而言，涉及一种靶向38蛋白的抗体、嵌合抗原受体和药物。

背景技术

多发性骨髓瘤(MM)是以克隆性浆细胞大量增生为特征的恶性肿瘤，是恶性浆细胞病中最常见的一种类型，好发于中老年，患者常伴有骨痛、高钙血症、贫血、肾脏损害。尽管应用传统化疗和造血干细胞移植以及靶向性药物治疗骨髓瘤，使得MM治疗可诱导缓解，但几乎所有患者最终仍会复发并死亡，其中一个重要原因就是随着疾病进展，正常免疫球蛋白的生成受抑，因此容易出现各种细菌性感染。尽管一些单克隆抗体已经在临床前研究和早期临床试验中显示出治疗MM的希望，但并没有得到一致性认可。基因工程技术处理的T细胞将肿瘤抗体特异性识别和共刺激信号结合，具有非MHC依赖性的肿瘤抗原特异性识别、增殖和杀伤能力。近年来，MM抗原特异性的嵌合抗原受体修饰的T细胞(chimeric antigenreceptor，CAR-T细胞)研究也陆续开展并获得初步成效，CAR-T细胞治疗成为有效治疗MM的新方案。T细胞可以被遗传修饰以表达嵌合抗原受体(CAR)，该受体包括抗原识别部分和T细胞活化结构域的融合蛋白。对于B系恶性肿瘤，最常用的是抗CD19 CAR的过继性T细胞方法。抗CD19-CAR转导的T细胞在小鼠中治愈了白血病和淋巴瘤，一些患者也在过继输注的抗CD19-CAR转导的T细胞的早期临床试验中获得缓解，而在MM肿瘤细胞上大部分B细胞标志蛋白表达量极微，甚至不表达，因此针对MM的CAR-T治疗需要寻找新靶点。

除了B细胞成熟抗原(B Cell Maturation Antigen，BCMA，CD269)这一候选抗原外，多发性骨髓瘤细胞广泛表达CD38蛋白。CD38也被称为环状的ADP-核糖水解酶，是一种糖蛋白。CD38分子广泛表达于造血母细胞，在NK细胞、T细胞、B细胞等也有表达。有文献报道，与正常浆细胞相比，骨髓瘤细胞CD38的表达明显增加，使得CD38成为治疗这一癌症的重要靶点。然而，目前针对CD38的抗体类别较少。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供靶向CD38蛋白的抗体，该抗体可特异性结合CD38蛋白，用于制备靶向CD38蛋白的嵌合抗原受体T细胞。

本发明的另一目的在于提供一种靶向CD38蛋白的嵌合抗原受体，其可靶向CD38蛋白，表达该嵌合抗原受体的T细胞可特异性杀伤CD38呈阳性的靶细胞。

本发明的另一目的在于提供一种靶向CD38蛋白的嵌合抗原受体T细胞，该T细胞可特异性地杀伤CD38阳性的靶细胞，可用于治疗CD38阳性的肿瘤。

本发明的另一目的在于提供一种核酸分子。

本发明的另一目的在于提供一种载体。

本发明的另一目的在于提供一种重组细胞。

本发明的另一目的在于提供一种治疗肿瘤的药物，该药物可用于治疗或预防CD38呈阳性的肿瘤。

本发明是这样实现的：

本发明以人CD38(hCD38)蛋白作为抗原，结合噬菌体库展示技术，淘选得到4个现有技术未曾报道的scFV抗体。并经实验验证该4个scFV抗体均具有结合CD38蛋白的能力，采用该scFV抗体制备的嵌合抗原受体T细胞对CD38蛋白呈阳性的靶细胞具有特异性的杀伤效果。因此，该4个scFV抗体可用于制备靶向CD38蛋白的嵌合抗原受体T细胞以及用于制备CD38呈阳性的肿瘤。

基于此，一方面，本发明提供了一种靶向CD38蛋白的抗体，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示，其轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16所示；

或者，所述抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ IDNO.22、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.24所示，其轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32所示。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示；

或者，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.21所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.29所示。

具有上述CDR序列的抗体可特异性结合CD38蛋白，其用于制备靶向CD38蛋白的嵌合抗原受体T细胞。

此外，将本发明提供的抗体用于制备检测CD38蛋白的检测试剂，或者在本发明提供的抗体上添加标记用于检测CD38蛋白，属于本发明的保护范围。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述抗体为全长抗体、F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的一种。

对于本领域技术人员而言，在本发明提供了可特异性结合CD38蛋白的抗体的重链可变区和轻链可变区的基础上，容易构建得到可结合CD38蛋白的全长抗体、F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的任一种抗体类型；无论何种类型的抗体，只要含有上述的重链CDR序列和/或轻链CDR序列，均属于本发明的保护范围。

另一方面，本发明提供了一种靶向CD38蛋白的嵌合抗原受体，其含有上述的靶向CD38蛋白的抗体的重链可变区和轻链可变区。

进一步，在本发明的一些实施方案中，该嵌合抗原受体还具有如下元件中的一种或几种的组合：

信号肽、linker、铰链区、CD8α跨膜结构域、4-1BB共刺激信号传导区和CD3ζ信号传导结构域。

进一步，在本发明的一些实施方案中，上述信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.73所示。

进一步，在本发明的一些实施方案中，上述linker的氨基酸序列如SEQ ID NO.74所示。

进一步，在本发明的一些实施方案中，上述铰链区(hinge)的氨基酸序列如SEQ IDNO.75所示。

进一步，在本发明的一些实施方案中，上述CD8α跨膜结构域的氨基酸序列如SEQID NO.76所示。

进一步，在本发明的一些实施方案中，上述4-1BB共刺激信号传导区的氨基酸序列如SEQ ID NO.77所示。

进一步，在本发明的一些实施方案中，上述CD3ζ信号传导结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO.78所示。

需要说明的是，在其他的实施例中，本领域技术人员可以根据实际情况或需要改变信号肽、linker、铰链区、CD8α跨膜结构域、4-1BB共刺激信号传导区和CD3ζ信号传导结构域的组合类别和序列，无论基于何种形式的改变，只要该嵌合抗原受体具有本发明上述抗体的轻链可变区的CDR序列或轻链可变区序列，和/或上述抗体的重链可变区的CDR序列或重链可变区序列，其均属于本发明的保护范围。

进一步，在本发明的一些实施方案中，信号肽、上述抗体的轻链可变区、linker、上述抗体的重链可变区、铰链区、CD8α跨膜结构域、4-1BB共刺激信号传导区和CD3ζ信号传导结构域以依次串联的方式构成该嵌合抗原受体。

该嵌合抗原受体可靶向CD38蛋白，表达该嵌合抗原受体的T细胞可特异性杀伤CD38呈阳性的靶细胞。

另一方面，本发明提供了一种分离的核酸分子，其编码上述的抗体，或者其编码上述的嵌合抗原受体。

另一方面，本发明提供了一种载体，其含有上述的核酸分子。

另一方面，本发明提供了一种重组细胞，其含有编码上述嵌合抗原受体的核酸分子，或上述的载体。

另一方面，本发明提供了一种靶向CD38蛋白的嵌合抗原受体T细胞，其表达有上述的嵌合抗原受体。

该T细胞可特异性地杀伤CD38呈阳性的靶细胞，可用于治疗CD38阳性的肿瘤。

另一方面，本发明提供了一种治疗肿瘤的药物，其含有上述的嵌合抗原受体T细胞。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述肿瘤为CD38呈阳性的肿瘤。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，CD38呈阳性的肿瘤细胞包括：MM.1S，U266，RPMI8226等细胞。

该药物可用于治疗或预防CD38呈阳性的肿瘤。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述药物还含有药学上可接受的辅料。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为是phage ELISA鉴定结果。

图2为CAR-CD38结构示意图。

图3为流式细胞仪显示CD4+CD8+T细胞感染72Hrs后CAR-CD38阳性率。

图4A为效靶比为3/1时，表达CAR-CD38的T细胞(CAR-CD38-2427-T、CAR-CD38-2430-T)与靶细胞MM.1S共培养，靶细胞比例随时间变化的流式图。

图4B为效靶比为3/1时，表达CAR-CD38的T细胞(CAR-CD38-2446-T、CAR-CD38-2453-T)与靶细胞MM.1S共培养，靶细胞比例随时间变化的流式图。

图5为效靶比为3/1时，表达CAR-CD38的T细胞(CAR-CD38-2427-T、CAR-CD38-2430-T、CAR-CD38-2446-T和CAR-CD38-2453-T)与靶细胞MM.1S共培养，靶细胞比例随时间变化的示意图。

图6为表达靶向CD38嵌合抗原受体的T细胞在经CD38阳性细胞刺激激活后的细胞因子(INF-γ和TNF-α)释放检测结果。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

1噬菌体库淘选

使用生物素化的hCD38蛋白作为全人源抗体库的淘选抗原。首先用封闭液(PBST/5％脱脂奶粉)室温封闭噬菌体抗体2h，噬菌体的投入量为2×10¹²phage，然后加入10μg抗原，室温孵育1h，孵育后加入50μl预封闭的

M-280Streptavidin磁珠，室温孵育30min。

先用PBST洗去未结合的噬菌体，再用0.1M的HCl-Glycine洗脱结合在磁珠上的噬菌体，之后用Tris-HCl中和洗脱液，取部分噬菌体侵染对数生长期的大肠杆菌TG1，收集的噬菌体用于下一轮淘选。

逐渐增加每轮的筛选强度，富集度达到100倍以上时，终止淘选。

2采用phage Elisa筛选抗CD38的单链抗体阳性克隆

(1)挑选四轮淘选后的噬菌体侵染的TGl单克隆，接种于96孔板中，培养基为2YT(含2％glucose、100μg/ml Ampicilline)。

(2)37℃、250rpm过夜培养后转接至新的培养基中，培养至对数生长期后加入M13K07辅助噬菌体，37℃静止侵染1h。

(3)4000rpm离心15min，使用2YT(含100μg/ml Ampicilline、70μg/ml Kanamycin)培养基30℃过夜培养，离心取噬菌体上清，进行ELISA鉴定克隆。

(4)用0.5μg/ml的hCD38抗原包被Costar-9018酶标板，3％BSA4℃封闭过夜，加入收集的噬菌体上清，4℃孵育2h。

(5)洗去未结合的噬菌体后加入Ml3 Bacteriophage抗体(HRP)，4℃孵育1h。洗涤后加入TMB显色液显色，用2M HCl终止反应。

(6)用酶标仪于450nm读数，选择OD450>1.5克隆(见图1)进行测序，对序列进行Germline分析和PTMs位点分析，排除有潜在开发风险的分子后共得到了4个具有结合hCD38蛋白特性的scFv单链抗体(后文也可称为CD38抗体)。

分别是：

抗CD38单链抗体1(命名为抗体2427)：

其重链可变区氨基酸序列为：SEQ ID NO.5，对应的核苷酸编码序列为：SEQ IDNO.1；

其重链可变区的VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8，分别对应的核苷酸编码序列为：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4；

其轻链可变区氨基酸序列为：SEQ ID NO.13，对应的核苷酸编码序列为：SEQ IDNO.9；

轻链可变区的VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别为：SEQ ID NO.14、SEQID NO.15、SEQ ID NO.16，对应的核苷酸编码序列为：SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ IDNO.12；

抗CD38单链抗体2(命名为抗体2430)

其重链可变区氨基酸序列为：SEQ ID NO.21，对应的核苷酸编码序列为：SEQ IDNO.17；

其重链可变区的VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3氨基酸序列分别为：SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.24，分别对应的核苷酸编码序列为：SEQ ID NO.18、SEQ IDNO.19、SEQ ID NO.20；

其轻链可变区氨基酸序列为：SEQ ID NO.29，对应的核苷酸编码序列为：SEQ IDNO.25；

其轻链可变区的VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别为：SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32，对应的核苷酸编码序列为：SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28。

抗CD38单链抗体3(命名为抗体2446)

其重链可变区氨基酸序列分别为：SEQ ID NO.37，对应的核苷酸编码序列为：SEQID NO.33；

其重链可变区的VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3氨基酸序列分别为：SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40，对应的核苷酸编码序列分别为：SEQ ID NO.34、SEQ IDNO.35、SEQ ID NO.36；

其轻链可变区氨基酸序列为：SEQ ID NO.45，对应的核苷酸编码序列为：SEQ IDNO.41；

其轻链可变区的VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别为：SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.48，对应的核苷酸编码序列分别为：SEQ ID NO.42、SEQ IDNO.43、SEQ ID NO.44；

抗CD38单链抗体4(命名为抗体2453)

其重链可变区氨基酸序列为：SEQ ID NO.53，其对应的核苷酸序列为：SEQ IDNO.49；

其重链可变区的VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3氨基酸序列分别为：SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.56，对应的核苷酸编码序列分别为：SEQ ID NO.50、SEQ IDNO.51、SEQ ID NO.52；

其轻链可变区氨基酸序列为：SEQ ID NO.61，对应的核苷酸编码序列为：SEQ IDNO.57；

其轻链可变区的VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列分别为：SEQ ID NO.62、SEQ ID NO.63、SEQ ID NO.64，对应的核苷酸编码序列分别为：SEQ ID NO.58、SEQ IDNO.59、SEQ ID NO.60。

实施例2

构建嵌合抗原受体表达载体

构建方法：

(1)全基因合成：信号肽(核酸序列SEQ ID NO.66，氨基酸序列SEQ ID NO.73)、CD38抗体轻链可变区(2427、2430、2446或2453的轻链可变区)、linker(核酸序列SEQ IDNO.67，氨基酸序列SEQ ID NO.74)、CD38抗体重链可变区(2427、2430、2446或2453的重链可变区)、铰链区(hinge)(核酸序列SEQ ID NO.68，氨基酸序列SEQ ID NO.75)、CD8α跨膜结构域(TM)(核酸序列SEQ ID NO.69，氨基酸序列SEQ ID NO.76)、4-1BB共刺激信号传导区(核酸序列SEQ ID NO.70，氨基酸序列SEQ ID NO.77)以及CD3ζ信号传导结构域(核酸序列SEQID NO.71，氨基酸序列SEQ ID NO.78)。

将上述元件序列依次连接，分别得到4种嵌合抗原受体表达盒，分别命名为2427嵌合抗原受体表达盒(全长核苷酸序列如SEQ ID NO.65所示、氨基酸序列如SEQ ID NO.72所示)、2430嵌合抗原受体表达盒(全长核苷酸序列如SEQ ID NO.79所示、氨基酸序列如SEQID NO.82所示)、2446嵌合抗原受体表达盒(全长核苷酸序列如SEQ ID NO.80所示、氨基酸序列如SEQ ID NO.83所示)和2453嵌合抗原受体表达盒(全长核苷酸序列如SEQ ID NO.81所示、氨基酸序列如SEQ ID NO.84所示)。

并在各表达盒最前端引入Kozac序列，表达盒结构如图2所示。

(2)全基因合成嵌合抗原受体表达盒的序列后，通过XbaI/EcoRI酶切位点连入空载体pCDH-EF1-MSC-T2A-copGFP上，得到嵌合抗原受体表达载体；得到4个嵌合抗原受体表达载体，经测序验证正确后，分别命名为：

pCDH-EF1-CAR-CD38-2427-copGFP，含抗体2427的轻链可变区和重链可变区；

pCDH-EF1-CAR-CD38-2430-copGFP，含抗体2430的轻链可变区和重链可变区；

pCDH-EF1-CAR-CD38-2446-copGFP，含抗体2446的轻链可变区和重链可变区；

pCDH-EF1-CAR-CD38-2453-copGFP，含抗体2453的轻链可变区和重链可变区。

实施例3

制备含嵌合抗原受体表达载体的菌种

方法：

(1)在-80℃冰箱取出DH5α感受态，冰上解冻。

(2)在感受态中加5ng质粒，轻轻混匀，冰上5分钟。

质粒是：pCDH-EF1-CAR-CD38-2427-copGFP、pCDH-EF1-CAR-CD38-2430-copGFP、pCDH-EF1-CAR-CD38-2446-copGFP、或者是pCDH-EF1-CAR-CD3-2453-copGFP。

(3)42℃热击90秒，冰上30分钟。

(4)加0.5ml无抗性的LB，37℃，180rpm培养30分钟。

(5)涂到氨苄抗性的平板上。

(6)37℃倒置过夜培养。

(7)挑单克隆，在氨苄抗性的LB中37℃，200rpm培养9-12小时。

(8)菌液中加甘油，甘油终浓度为10％，-80℃冰箱保存菌种，备用，可用于后续大量提取质粒。

(9)将上述菌种在LB中大量培养后，使用质粒抽提试剂盒(北京天根生化科技有限公司无内毒素质粒抽提试剂盒)抽提质粒，以备感染使用。质粒抽提方法按说明书进行即可。

实施例4

病毒包装

PEI法转染细胞。转染前24小时胰酶消化293T细胞，4×10⁶的293T细胞铺在一个10cm细胞培养皿中，细胞在含有10％FBS的DMEM培养基中，37℃5％CO2培养箱中培养，不超过24小时，当细胞达到60-80％密度时可转染

具体步骤如下：

(1)将质粒，PEI，DMEM培养基置于室温5min。

(2)取DMEM 450μl于1.5mlEP管中，再加入50μl PEI(1μg/μl)混匀，室温静置5min。

(3)取10μg质粒(pCDH-EF1-CAR-CD38-2427-copGFP、pCDH-EF1-CAR-CD38-2430-copGFP、pCDH-EF1-CAR-CD38-2446-copGFP、或是pCDH-EF1-CAR-CD38-2453-copGFP)，10μgpsPAX2，5μg pMD2.G，加入DMEM至500μl，混匀，室温静置5min。

(4)将配好的步骤(2)的PEI-DMEM溶液加入步骤(3)得到的含质粒的DMEM中，混匀，室温静置20min；得到DNA/PEI混合物。

(5)将1ml DNA/PEI混合物慢慢滴入293T培养皿中，轻轻混匀，37℃培养箱孵育6-8h小时。

(6)弃去原有培养基，更换新鲜培养基，放入37℃培养箱继续孵育。

(7)更换培养基48小时后，收集培养基，之后每皿各添加10ml新鲜培养基继续培养，24h后再次收集上清，与48小时收集的上清混合。

(8)4℃，4000g离心10min，除去细胞碎片。

(9)以0.45μm滤器过滤得到的上清。

(10)将过滤后的上清进行切向流过滤。

(11)将切向流过滤后的病毒上清转入超速离心管中，25000rpm离心2h，用无血清培养基对超离后得到的病毒沉淀进行重悬，轻轻吹打直至完全溶解，得到病毒液，采用不同载体得到的病毒液分别命名为：

2427病毒液(含2427嵌合抗原受体表达盒)、2430病毒液(含2430嵌合抗原受体表达盒)、2446病毒液(含2446嵌合抗原受体表达盒)、2453病毒液(含2453嵌合抗原受体表达盒)、空载体病毒液。

(12)将各病毒液分装，置于-80℃冰箱保存，并预留5-10μl病毒浓缩液进行滴度测定。

实施例5

病毒滴度测定

方法：

消化并计数293T细胞，用含10％FBS的DMEM培养基制成细胞悬液，调整细胞密度为4×10⁵/ml，向24孔培养板的每孔中加入0.5ml细胞悬液。细胞贴壁培养8小时后，感染稀释100倍的病毒液1μl、10μl、20μl、30μl、50μl，24小时后换液，48小时后流式检测293T细胞阳性率。

离心、重悬并调节细胞密度为1×10⁶/ml，50μl中加biotin-CD38抗原，终浓度为1ug/ml，孵育30min后，DPBS清洗一次，重悬，染二抗APC-Streptavidin(购自BD)30min，清洗一次后DPBS重悬，流式检测。

实施例6

制备靶向人CD38抗原的嵌合抗原受体的T细胞

1人外周血单核细胞PBMC的分离

使用抗凝管(购自BD)采集外周血约25ml，按照1：1的体积比加入到淋巴细胞分离液中，梯度离心25min，离心后取白膜层细胞，用DPBS洗两遍，得到人外周血单核细胞PBMC。

2CD4+CD8+T细胞富集及活化

重悬PBMC，调整密度为1×10⁵/μl，按照50μl细胞悬液中加入CD4/CD8磁珠各10μl，通过磁极分离得到CD4+CD8+T细胞。

得到的CD4+CD8+T细胞，加入含有10％FBS的AIM-V完全培养基培养，用抗人CD3/CD28抗体(购自美天旎，10μl/ml)活化T细胞，IL-2浓度为200IU/ml。活化24小时后，换液，使用含有IL-2 200IU/ml的完全培养基继续培养。

3慢病毒感染

调节T细胞细胞密度为1×10⁶/ml，按MOI＝10，用实施例4中得到的病毒液(2427病毒液、2430病毒液、2446病毒液或2453病毒液)感染活化48小时后的T细胞，24小时后换液，持续添加IL-2 200IU/ml，采用不同的病毒液，得到不同的可表达靶向人CD38抗原的嵌合抗原受体的T细胞；分别命名为CAR-CD38-2427-T、CAR-CD38-2430-T、CAR-CD38-2446-T或CAR-CD38-2453-T。

4检测靶向人CD38抗原的嵌合抗原受体(CAR-CD38)表达情况

在培养过程中，取病毒感染后72小时的T细胞(CAR-CD38-2427-T、CAR-CD38-2430-T、CAR-CD38-2446-T或CAR-CD38-2453-T)，离心、重悬并调节细胞密度为1×10⁶/ml，50μl中加biotin-CD38抗原，终浓度为0.2ug/ml，孵育30min后，DPBS清洗一次，重悬，染二抗APC-Streptavidin(购自BD)30min，清洗一次后DPBS重悬，流式检测CAR-CD38的阳性率。

结果见图3，结果显示CAR-CD38-2427-T、CAR-CD38-2430-T、CAR-CD38-2446-T或CAR-CD38-2453-T均有表达靶向CD38的嵌合抗原受体，CAR-CD38-2427-T的阳性率为94.5％，CAR-CD38-2430-T的阳性率为92.2％，CAR-CD38-2446-T的阳性率为79.2％，CAR-CD38-2453-T的阳性率为37.6％。

实施例7

体外共培养检测CAR-CD38T的肿瘤杀伤效果，靶细胞为MM.1S。

取感染后72小时的嵌合抗原受体T细胞(CAR-CD38-2427-T、CAR-CD38-2430-T、CAR-CD38-2446-T或CAR-CD38-2453-T)及CD38+肿瘤细胞MM.1S，计数，调节细胞密度为1×10⁶/ml，按照效靶比3:1共培养，即：T细胞1×10⁶，MM.1S 3.3×10⁵，对照细胞为未经病毒感染处理的CD4+CD8+T细胞，记为Ctrl-T细胞。分别在0H，18H，42H，72H检测MM.1S细胞在总细胞中的比例，使用抗体APC-conjugated Human CD38/TNFRSF17 Antibody标记靶细胞，流式检测，结果见图4A和图4B；同时统计细胞杀伤效果，结果见图5。

结果显示，在CAR-CD38-2427-T、CAR-CD38-2430-T、CAR-CD38-2446-T或CAR-CD38-2453-T存在的情况下，随着时间的增加，CD38+靶细胞MM.1S的比例明显减少，在0-72H的时间段内，CAR-CD38-2427-T组：靶细胞由29.1％降低至15.2％；CAR-CD38-2430-T组：靶细胞由35.1％降低至30.7％；CAR-CD38-2446-T组：靶细胞由31.3％降低至5.25％；CAR-CD38-2453-T组：靶细胞由29.1％降低至4.76％。由此说明，4种嵌合抗原受体T细胞CAR-CD38-2427-T、CAR-CD38-2430-T、CAR-CD38-2446-T和CAR-CD38-2453-T均能靶向CD38+肿瘤细胞MM.1S，对肿瘤细胞造成杀伤。

实施例8

ELISA法检测细胞因子表达水平

方法：

样品准备：取感染后72小时的T细胞(CAR-CD38-2427-T、CAR-CD38-2430-T、CAR-CD38-2446-T或CAR-CD38-2453-T)及CD38+肿瘤细胞RAJI，计数，调节细胞密度为1×10⁶/ml，按照效靶比(E:T)1:1共培养，即T细胞1×10⁶，RAJI 1×10⁶，对照细胞为未经病毒感染处理的CD4+CD8+T细胞，记为Ctrl-T细胞。在24H收集上清，-80℃保存备用。

检测：细胞因子INF-γ、TNF-α使用CBA方法检测，按照说明书进行。结果见图6。

从图6中可以看出，4种靶向CD38的嵌合抗原受体T细胞CAR-CD38-2427-T、CAR-CD38-2430-T、CAR-CD38-2446-T和CAR-CD38-2453-T均能产生高浓度的INF-γ和TNF-α，高于对照组(Ctrl-T)。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 上海邦耀生物科技有限公司

<120> 靶向CD38蛋白的抗体、嵌合抗原受体和药物

<160> 84

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

caggtgcagc tgcaggagtc gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctatggtgg gtcctccagt ggtgactact ggagctggat ccgccagccc 120

ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcaatcata gtggaatcac caactacaac 180

ccgtccctca agagtcgagt caccatatca ctagacacgt ccaagaatca gttctccctg 240

aagttgaagt ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtctatt actgtgcgag agaacggggt 300

aacaatggta tggacgtctg gggccaaggc accctggtca ccgtctcgag t 351

<210> 2

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

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<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

gaaatcaatc atagtggaat caccaactac aacccgtccc tcaagagt 48

<210> 4

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

gaacggggta acaatggtat ggacgtc 27

<210> 5

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 5

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Ser Ser Gly Asp

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ile Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Lys Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Glu Arg Gly Asn Asn Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 6

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

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Gly Asp Tyr Trp Ser

1 5

<210> 7

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 7

Glu Ile Asn His Ser Gly Ile Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 8

Glu Arg Gly Asn Asn Gly Met Asp Val

1 5

<210> 9

<211> 330

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

caggctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60

tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaattatg tatactggta ccagcagctc 120

ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggcccgc aggggtccct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240

tccgaggatg aggctgatta ctactgtgca gcatgggatg acagtgtgag tggttgggtg 300

ttcggcggag gcacccagct gaccgtcctc 330

<210> 10

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

tctggaagca gctccaacat cggaagtaat tatgtatac 39

<210> 11

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

aggaataatc agcggcccgc a 21

<210> 12

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

gcagcatggg atgacagtgt gagtggttgg gtg 33

<210> 13

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 13

Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Val

85 90 95

Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 14

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 14

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr

1 5 10

<210> 15

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 15

Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ala

1 5

<210> 16

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 16

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Val Ser Gly Trp Val

1 5 10

<210> 17

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

caggtgcagc tgcaggagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctatggtgg gtcctccagt ggtgactact ggagctggat ccgccagccc 120

ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcaatcata gtggaagcac caactacaac 180

ccgtccctca agagtcgagt caccatatca ctagacacgt ccaagaatca gttctccctg 240

aagttgaggt ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agaacggggt 300

aacaatggta tggacgtctg gggccaaggc accctggtca ctgtctcgag t 351

<210> 18

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

ggtgactact ggagc 15

<210> 19

<211> 48

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

gaaatcaatc atagtggaag caccaactac aacccgtccc tcaagagt 48

<210> 20

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

gaacggggta acaatggtat ggacgtc 27

<210> 21

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 21

Gln Val Gln Leu Gln Glu Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Ser Ser Gly Asp

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Glu Arg Gly Asn Asn Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 22

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 22

Gly Asp Tyr Trp Ser

1 5

<210> 23

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 23

Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 24

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 24

Glu Arg Gly Asn Asn Gly Met Asp Val

1 5

<210> 25

<211> 330

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 25

caggcagggc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60

tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaattatg tatactggta ccagcagctc 120

ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240

tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgag tggttgggtg 300

ttcggcggag gcacccagct gaccgccctc 330

<210> 26

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 26

tctggaagca gctccaacat cggaagtaat tatgtatac 39

<210> 27

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 27

aggaataatc agcggccctc a 21

<210> 28

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 28

gcagcatggg atgacagcct gagtggttgg gtg 33

<210> 29

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 29

Gln Ala Gly Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Ala Leu

100 105 110

<210> 30

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 30

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr

1 5 10

<210> 31

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 31

Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 32

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 32

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Trp Val

1 5 10

<210> 33

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 33

gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60

tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120

cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180

agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240

ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gagagttagc 300

agtggctggc cctactacat ggacgtctgg ggcaaaggga ccacggtcac cgtctcgagt 360

<210> 34

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 34

agctactgga tcggc 15

<210> 35

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 35

atcatctatc ctggtgactc tgataccaga tacagcccgt ccttccaagg c 51

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<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 36

gttagcagtg gctggcccta ctacatggac gtc 33

<210> 37

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 37

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

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100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

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<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 38

Ser Tyr Trp Ile Gly

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<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 39

Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 40

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 40

Val Ser Ser Gly Trp Pro Tyr Tyr Met Asp Val

1 5 10

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 41

gccatccgga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc aactggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccgtcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaccagtt tccccctaac tttcggcgga 300

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 42

cgggcgagtc agggtattag caactggtta gcc 33

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<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 43

gctgcatcca gtttgcaaag t 21

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 44

caacaggcta ccagtttccc cctaact 27

<210> 45

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 45

Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Val Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Thr Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

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<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 46

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 47

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 47

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 48

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 48

Gln Gln Ala Thr Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 49

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 49

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagactac 300

ggtgactacg ggaggtacta cggtatggac gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc 360

tcgagt 366

<210> 50

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 50

agctactata tgcac 15

<210> 51

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 51

ataatcaacc ctagtggtgg tagcacaagc tacgcacaga agttccaggg c 51

<210> 52

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 52

gactacggtg actacgggag gtactacggt atggacgtc 39

<210> 53

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 53

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Tyr Gly Asp Tyr Gly Arg Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 54

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 54

Ser Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 55

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 55

Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 56

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 56

Asp Tyr Gly Asp Tyr Gly Arg Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10

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<211> 330

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 57

cagtctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60

tcctgcactg gaaccaacag tgacgttggt gtttataact atgtctcctg gtaccaacag 120

tatccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgatgtca gtgagcggcc ctcaggggtt 180

tctaatcgct tctctggctc caagtctgtc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240

caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caagcagcaa cactgatgtc 300

ttcggaactg gcaccaaagt gaccgtcctc 330

<210> 58

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 58

actggaacca acagtgacgt tggtgtttat aactatgtct cc 42

<210> 59

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 59

gatgtcagtg agcggccctc a 21

<210> 60

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 60

agctcatata caagcagcaa cactgatgtc 30

<210> 61

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 61

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Asn Ser Asp Val Gly Val Tyr

20 25 30

Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asp Val Ser Glu Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Val Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser

85 90 95

Asn Thr Asp Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 62

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 62

Thr Gly Thr Asn Ser Asp Val Gly Val Tyr Asn Tyr Val Ser

1 5 10

<210> 63

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 63

Asp Val Ser Glu Arg Pro Ser

1 5

<210> 64

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 64

Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Asn Thr Asp Val

1 5 10

<210> 65

<211> 1470

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 65

atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60

atcccacagg ctgtgctgac tcagccaccc tcagcgtctg ggacccccgg gcagagggtc 120

accatctctt gttctggaag cagctccaac atcggaagta attatgtata ctggtaccag 180

cagctcccag gaacggcccc caaactcctc atctatagga ataatcagcg gcccgcaggg 240

gtccctgacc gattctctgg ctccaagtct ggcacctcag cctccctggc catcagtggg 300

ctccggtccg aggatgaggc tgattactac tgtgcagcat gggatgacag tgtgagtggt 360

tgggtgttcg gcggaggcac ccagctgacc gtcctcggct ccacctctgg atccggcaag 420

cccggatctg gcgagggatc caccaagggc caggtgcagc tgcaggagtc gggcgcagga 480

ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc acctgcgctg tctatggtgg gtcctccagt 540

ggtgactact ggagctggat ccgccagccc ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa 600

atcaatcata gtggaatcac caactacaac ccgtccctca agagtcgagt caccatatca 660

ctagacacgt ccaagaatca gttctccctg aagttgaagt ctgtgaccgc cgcggacacg 720

gctgtctatt actgtgcgag agaacggggt aacaatggta tggacgtctg gggccaaggc 780

accctggtca ccgtctcgag taccacgacg ccagcgccgc gaccaccaac accggcgccc 840

accatcgcgt cacagcccct gtccctgcgc ccagaggcgt gccggccagc ggcggggggc 900

gcagtgcaca cgagggggct ggacttcgcc tgtgatatct acatctgggc gcccttggcc 960

gggacttgtg gggtccttct cctgtcactg gttatcaccc tttactgcaa acggggcaga 1020

aagaaactcc tgtatatatt caaacaacca tttatgagac cagtacaaac tactcaagag 1080

gaagatggct gtagctgccg atttccagaa gaagaagaag gaggatgtga actgagagtg 1140

aagttcagca ggagcgcaga cgcccccgcg tacaagcagg gccagaacca gctctataac 1200

gagctcaatc taggacgaag agaggagtac gatgttttgg acaagagacg tggccgggac 1260

cctgagatgg ggggaaagcc gagaaggaag aaccctcagg aaggcctgta caatgaactg 1320

cagaaagata agatggcgga ggcctacagt gagattggga tgaaaggcga gcgccggagg 1380

ggcaaggggc acgatggcct ttaccagggt ctcagtacag ccaccaagga cacctacgac 1440

gcccttcaca tgcaggccct gccccctcgc 1470

<210> 66

<211> 66

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 66

atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60

atccca 66

<210> 67

<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 67

ggctccacct ctggatccgg caagcccgga tctggcgagg gatccaccaa gggc 54

<210> 68

<211> 135

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 68

accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca ccggcgccca ccatcgcgtc acagcccctg 60

tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg 120

gacttcgcct gtgat 135

<210> 69

<211> 72

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 69

atctacatct gggcgccctt ggccgggact tgtggggtcc ttctcctgtc actggttatc 60

accctttact gc 72

<210> 70

<211> 126

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 70

aaacggggca gaaagaaact cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 60

actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 120

gaactg 126

<210> 71

<211> 336

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 71

agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtaca agcagggcca gaaccagctc 60

tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120

cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180

gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240

cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300

tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgc 336

<210> 72

<211> 490

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 72

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala

20 25 30

Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser

35 40 45

Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly

50 55 60

Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ala Gly

65 70 75 80

Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu

85 90 95

Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala

100 105 110

Ala Trp Asp Asp Ser Val Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln

115 120 125

Leu Thr Val Leu Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly

130 135 140

Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ala Gly

145 150 155 160

Leu Leu Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly

165 170 175

Gly Ser Ser Ser Gly Asp Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly

180 185 190

Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ile Thr Asn

195 200 205

Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser

210 215 220

Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Lys Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr

225 230 235 240

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Gly Asn Asn Gly Met Asp Val

245 250 255

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser

275 280 285

Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

290 295 300

Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala

305 310 315 320

Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

325 330 335

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

340 345 350

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

355 360 365

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg

370 375 380

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

385 390 395 400

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

405 410 415

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

420 425 430

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

435 440 445

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

450 455 460

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

465 470 475 480

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 73

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 73

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro

20

<210> 74

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 74

Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 75

<211> 45

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 75

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

<210> 76

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 76

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

20

<210> 77

<211> 42

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 77

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

1 5 10 15

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

20 25 30

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

35 40

<210> 78

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 78

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 79

<211> 1470

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 79

atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60

atcccacagg cagggctgac tcagccaccc tcagcgtctg ggacccccgg gcagagggtc 120

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cagctcccag gaacggcccc caaactcctc atctatagga ataatcagcg gccctcaggg 240

gtccctgacc gattctctgg ctccaagtct ggcacctcag cctccctggc catcagtggg 300

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tgggtgttcg gcggaggcac ccagctgacc gccctcggct ccacctctgg atccggcaag 420

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ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc acctgcgctg tctatggtgg gtcctccagt 540

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gctgtgtatt actgtgcgag agaacggggt aacaatggta tggacgtctg gggccaaggc 780

accctggtca ctgtctcgag taccacgacg ccagcgccgc gaccaccaac accggcgccc 840

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gggacttgtg gggtccttct cctgtcactg gttatcaccc tttactgcaa acggggcaga 1020

aagaaactcc tgtatatatt caaacaacca tttatgagac cagtacaaac tactcaagag 1080

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<210> 80

<211> 1470

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 80

atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60

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accacggtca ccgtctcgag taccacgacg ccagcgccgc gaccaccaac accggcgccc 840

accatcgcgt cacagcccct gtccctgcgc ccagaggcgt gccggccagc ggcggggggc 900

gcagtgcaca cgagggggct ggacttcgcc tgtgatatct acatctgggc gcccttggcc 960

gggacttgtg gggtccttct cctgtcactg gttatcaccc tttactgcaa acggggcaga 1020

aagaaactcc tgtatatatt caaacaacca tttatgagac cagtacaaac tactcaagag 1080

gaagatggct gtagctgccg atttccagaa gaagaagaag gaggatgtga actgagagtg 1140

aagttcagca ggagcgcaga cgcccccgcg tacaagcagg gccagaacca gctctataac 1200

gagctcaatc taggacgaag agaggagtac gatgttttgg acaagagacg tggccgggac 1260

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cagaaagata agatggcgga ggcctacagt gagattggga tgaaaggcga gcgccggagg 1380

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<210> 81

<211> 1485

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 81

atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60

atcccacagt ctgccctgac tcagcctgcc tccgtgtctg ggtctcctgg acagtcgatc 120

accatctcct gcactggaac caacagtgac gttggtgttt ataactatgt ctcctggtac 180

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atcaacccta gtggtggtag cacaagctac gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg 660

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acggccgtgt attactgtgc gagagactac ggtgactacg ggaggtacta cggtatggac 780

gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc tcgagtacca cgacgccagc gccgcgacca 840

ccaacaccgg cgcccaccat cgcgtcacag cccctgtccc tgcgcccaga ggcgtgccgg 900

ccagcggcgg ggggcgcagt gcacacgagg gggctggact tcgcctgtga tatctacatc 960

tgggcgccct tggccgggac ttgtggggtc cttctcctgt cactggttat caccctttac 1020

tgcaaacggg gcagaaagaa actcctgtat atattcaaac aaccatttat gagaccagta 1080

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aaggacacct acgacgccct tcacatgcag gccctgcccc ctcgc 1485

<210> 82

<211> 490

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 82

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gln Ala Gly Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala

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Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser

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Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly

50 55 60

Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly

65 70 75 80

Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu

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Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala

100 105 110

Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln

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Leu Thr Ala Leu Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly

130 135 140

Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Val Gln Leu Gln Glu Trp Gly Ala Gly

145 150 155 160

Leu Leu Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly

165 170 175

Gly Ser Ser Ser Gly Asp Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly

180 185 190

Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn

195 200 205

Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser

210 215 220

Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr

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Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Gly Asn Asn Gly Met Asp Val

245 250 255

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser

275 280 285

Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

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Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

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Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

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Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

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Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg

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Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

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Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

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Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

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Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

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<210> 83

<211> 490

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 83

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser

20 25 30

Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser

35 40 45

Gln Gly Ile Ser Asn Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys

50 55 60

Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val

65 70 75 80

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

85 90 95

Val Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln

100 105 110

Ala Thr Ser Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

115 120 125

Lys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser

130 135 140

Thr Lys Gly Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

145 150 155 160

Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe

165 170 175

Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu

180 185 190

Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser

195 200 205

Pro Ser Phe Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser

210 215 220

Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Ser Ser Gly Trp Pro Tyr Tyr Met Asp Val

245 250 255

Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser

275 280 285

Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

290 295 300

Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala

305 310 315 320

Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

325 330 335

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

340 345 350

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

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Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg

370 375 380

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

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Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

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Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

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435 440 445

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

450 455 460

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

465 470 475 480

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 84

<211> 495

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 84

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val

20 25 30

Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Asn

35 40 45

Ser Asp Val Gly Val Tyr Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Tyr Pro

50 55 60

Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Asp Val Ser Glu Arg Pro Ser

65 70 75 80

Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Val Asn Thr Ala Ser

85 90 95

Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys

100 105 110

Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Asn Thr Asp Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys

115 120 125

Val Thr Val Leu Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly

130 135 140

Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu

145 150 155 160

Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly

165 170 175

Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly

180 185 190

Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr

195 200 205

Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr

210 215 220

Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp

225 230 235 240

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Gly Asp Tyr Gly Arg Tyr

245 250 255

Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

260 265 270

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

275 280 285

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

290 295 300

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile

305 310 315 320

Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val

325 330 335

Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe

340 345 350

Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly

355 360 365

Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg

370 375 380

Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln

385 390 395 400

Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp

405 410 415

Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

420 425 430

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

435 440 445

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

450 455 460

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

465 470 475 480

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490 495

Claims

1.一种靶向CD38蛋白的抗体，其特征在于，其重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示，其轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16所示；

或者，所述抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.24所示，其轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32所示。

2.根据权利要求1所述的靶向CD38蛋白的抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示；

3.根据权利要求1或2所述的靶向CD38蛋白的抗体，其特征在于，所述抗体为全长抗体、F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的一种。

4.一种靶向CD38蛋白的嵌合抗原受体，其特征在于，其含有权利要求1-3任一项所述的靶向CD38蛋白的抗体的重链可变区和轻链可变区。

5.根据权利要求4所述的嵌合抗原受体，其特征在于，该嵌合抗原受体还具有如下元件中的一种或几种的组合：

6.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码权利要求1-3任一项所述的抗体，或者其编码权利要求4或5所述的嵌合抗原受体。

7.一种载体，其特征在于，其含有权利要求6所述的核酸分子。

8.一种重组细胞，其特征在于，其含有编码权利要求4或5所述的嵌合抗原受体的核酸分子，或权利要求7所述的载体。

9.一种靶向CD38蛋白的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，其表达有权利要求4或5所述的嵌合抗原受体。

10.一种治疗肿瘤的药物，其特征在于，其含有权利要求9所述的嵌合抗原受体T细胞。