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CN109125729A - 与非小细胞肺癌诊疗相关的基因BRD9及其siRNAs和应用 - Google Patents

与非小细胞肺癌诊疗相关的基因BRD9及其siRNAs和应用 Download PDF

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CN109125729A
CN109125729A CN201811036700.0A CN201811036700A CN109125729A CN 109125729 A CN109125729 A CN 109125729A CN 201811036700 A CN201811036700 A CN 201811036700A CN 109125729 A CN109125729 A CN 109125729A
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brd9
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sirna
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胡荣宽
杨光
李琴
黄春晓
张佩琢
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SUZHOU GENEPHARMA CO Ltd
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Abstract

本发明公开了与非小细胞肺癌诊疗相关的基因BRD9及其siRNAs和应用。本发明提供了抑制BRD9蛋白活性的物质在制备治疗肿瘤的产品中的应用；或，抑制或沉默BRD9基因表达的物质在制备治疗肿瘤的产品中的应用。本发明发现人BRD9基因在非小细胞肺癌早期诊断和治疗药物制备中的用途，进一步构建了人BRD9基因小分子干扰RNAsiRNA，其能够高效抑制BRD9基因表达，进而抑制肺癌细胞的生长和侵袭，在肿瘤治疗中具有重要意义，为临床治疗非小细胞癌奠定基础。

Description

与非小细胞肺癌诊疗相关的基因BRD9及其siRNAs和应用
技术领域
本发明属于生物技术和治疗领域，具体涉及与非小细胞肺癌诊疗相关的基因BRD9及其siRNAs和应用。
背景技术
肺癌是发生率居全球首位，且恶性程度非常奥的一类肿瘤，据统计，2018年美国肺癌发生人数为24.3万，其中有15万人死于肺癌。肺癌可以分为非小细胞肺癌和小细胞肺癌，其中非小细胞肺癌约占80-85％，而小细胞肺癌则占10-15％左右。而非小细胞肺癌又可以分为腺癌、鳞癌和大细胞癌(Cancer Statistics,2018,Ca cancer J clin 2018；68:7-30)。肺癌的发生通常与吸烟、油烟及环境污染等因素相关。目前肺癌早期确诊率不高，虽然有一些标志物和影像学诊断方式，但是很多肺癌患者被诊断时已经是中晚期；此外，肺癌主要以放化疗、靶向治疗(EGFR，ALK等)、免疫治疗(PD1抗体)和手术治疗为主。其中靶向治疗具有很强的耐药性，而免疫治疗应答率并不理想，很多肺癌患者并无其他有效治疗方案。
BRD9是包含bromodomain结构域的蛋白，可以跟SWI/SNF组成复合物。BRD9被认为参与多种跟组蛋白赖氨酸乙酰化的调控，但是并没有其他机制相关的报道。
SiRNA是一类小RNA序列，通常是20-25nt的双链RNA。SiRNA可以通过结合靶基因的编码区(CDS)，引起mRNA水平的降解，导致蛋白翻译受阻。大量的研究表明，siRNA可以作用于多种靶基因，从而治疗该基因引起的各类疾病。
发明内容
本发明的一个目的是提供抑制BRD9蛋白活性的物质或抑制或沉默BRD9基因表达的物质的用途。
本发明提供了抑制BRD9蛋白活性的物质在制备治疗肿瘤的产品中的应用；
或，本发明提供了抑制或沉默BRD9基因表达的物质在制备治疗肿瘤的产品中的应用。
或，本发明提供了抑制BRD9蛋白的物质在制备抑制肿瘤细胞增殖的产品中的应用；
或，本发明提供了抑制或沉默BRD9基因表达的物质在制备抑制肿瘤细胞增殖的产品中的应用。
或，本发明提供了抑制BRD9蛋白的物质在制备抑制肿瘤细胞侵袭的产品中的应用；
或，本发明提供了抑制或沉默BRD9基因表达的物质在制备抑制肿瘤细胞侵袭的产品中的应用。
上述应用中，所述肿瘤为肺癌；
所述肿瘤细胞为肺癌细胞；
或，所述肺癌为非小细胞肺癌；
或，所述肺癌细胞为非小细胞肺癌细胞。
上述应用中，所述抑制BRD9蛋白活性的物质或抑制或沉默BRD9基因表达的物质为BRD9蛋白抑制剂或抑制BRD9基因表达的siRNA。
上述应用中，所述抑制BRD9基因表达的siRNA为如下1)或2)：
1)所示的siRNA由正义链和反义链退火形成；
1)所示的siRNA的正义链的核苷酸序列为序列1，1)所示的siRNA的反义链的核苷酸序列为序列2；
2)所示的siRNA由正义链和反义链退火形成；
2)所示的siRNA的正义链的核苷酸序列为序列3，2)所示的siRNA的反义链的核苷酸序列为序列4。
本发明另一个目的是提供一种siRNA。
本发明提供的siRNA，其为上述抑制BRD9基因表达的siRNA。
本发明第三个目的是提供BRD9蛋白或其基因的应用。
本发明提供的BRD9蛋白或其基因在作为非小细胞肺癌早期诊断标记物中的应用。
本发明第4个目的是提供检测BRD9蛋白或其基因表达的物质的用途。
本发明提供的检测BRD9蛋白或其基因表达的物质在制备检测或诊断待测样本是否为非小细胞肺癌中的应用；
或，本发明提供的检测BRD9蛋白或其基因表达的物质在制备检测或诊断待测患者是否患有非小细胞肺癌中的应用；
或，本发明提供的检测BRD9蛋白或其基因表达的物质在制备检测或诊断待测细胞是否为非小细胞肺癌细胞中的应用。
上述应用中，所述检测BRD9蛋白表达的物质为BRD9蛋白的抗体；
或所述检测BRD9基因表达的物质为扩增BRD9基因的引物对；
或所述引物对具体由序列5所示的单链DNA分子和序列6所示的单链DNA分子组成。
所述产品为试剂盒。
本发明发现人BRD9基因在非小细胞肺癌早期诊断和治疗药物制备中的用途，进一步构建了人BRD9基因小分子干扰RNAsiRNA，其能够高效抑制BRD9基因表达，进而抑制肺癌细胞的生长和侵袭，在肿瘤治疗中具有重要意义，为临床治疗非小细胞癌奠定基础。
附图说明
图1为BRD9在非小细胞肺癌患者癌旁组织和非小细胞肺癌患者肿瘤组织样品中的相对表达量。
图2为非小细胞肺癌患者癌旁组织和非小细胞肺癌患者肿瘤组织样品免疫组化(IHC)检测BRD9结果。
图3为转siRNA的细胞中BRD9 mRNA的表达。
图4为干扰BRD9后非小细胞肺癌细胞增殖情况。
图5为干扰BRD9后非小细胞肺癌的侵袭情况。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述非限制性实施例可以使本领域的技术人员更好的理解本发明。
任何熟悉本领域的技术人员在本发明的纰漏范围内，根据本发明的技术方案及构思进行替换或改变均属于本发明的保护范畴。
FBS(Gibco)
DMEM培养基(Gibco)
PBS，PH7.4
Trypsin-EDTA Solution(0.05％Trypsin-EDTA,Gibco)
Lipofectamin2000转染试剂(Invitrogen)
siRNA oligo(genepharma)
本发明下述实施的研究对象：非小细胞肺癌样品150份，均采集自2014年到2018年，其中105份来自苏州明基医院，另外45份来自苏州大学附属第二医院，均为确诊为非小细胞肺癌的患者(知情同意的志愿者，于手术后取样用于病理检测或本实验)，所取组织包括癌旁及肿瘤组织。患者临床信息如表1.
H226细胞系购自中科院典藏细胞库。
表1为临床特诊
实施例1、BRD9作为非小细胞肺癌诊断标志物的发现
(一)BRD9作为非小细胞肺癌诊断标志物
BRD9蛋白的氨基酸序列为序列7，其编码基因的核苷酸序列为序列8。
一、BRD9的mRNA作为非小细胞肺癌诊断标志物
1、总RNA的获得
取医院石蜡病理切片或被病理诊断为非小细胞肺癌的患者样品共150例，包括癌旁组织及肿瘤组织(表1)，提取总RNA，方法具体如下：
1)取样品共1ml Ezol裂解液。
2)加入0.2ml三氯甲烷，剧烈摇动10s，室温放置3分钟。
3)4℃，12,000rpm离心20min。
4)将上清水相转移至另一新的无RNA酶离心管中，并加入等体积的异丙醇，混匀，-80℃放置1h。
5)4℃，12,000rpm离心10min，去上清。
6)加入1ml75％乙醇洗涤沉淀。
7)4℃，5,000rpm离心3min，去上清，室温晾干。
8)加入40ulRNA-free水溶解RNA。
2、qPCR检测
将上述1得到的RNA反转录得到cDNA，以cDNA为模板，用homo-BRD9-F1和homo-BRD9-R1进行qPCR扩增，以GAPDH作为内参基因，GAPDH-F和GAPDH-R作为内参引物。
homo-BRD9-F1 TGGGAGCTACAGCAAGAAAGT(序列5)
homo-BRD9-R1 CTGGAAGAGCGTCCTAGAGTG(序列6)
GAPDH-F CATGAGAAGTATGACAACAGCCT
GAPDH-R AGTCCTTCCACGATACCAAAGT
定量PCR反应程序：
95℃,30秒预变性；
95℃,10秒；60℃,30秒.40循环；
qPCR结果如图1所示，BRD9在非小细胞肺癌患者癌旁组织和非小细胞肺癌患者肿瘤组织样品中的相对表达量有显著差异，与癌旁组织相比，在非小细胞肺癌患者肿瘤组织中的BRD9的相对表达量明显提高；根据SPSS软件计算得出BRD9 MRNA在组织样品中的含量用于鉴别正常和非小细胞肺癌的AUC值为0.813，95％可信区间为0.706-0.929.P值<0.001。
二、BRD9的蛋白作为非小细胞肺癌诊断标志物
取医院石蜡病理切片或被病理诊断为非小细胞肺癌的患者样品共150例，包括癌旁组织及肿瘤组织进行如下操作：
1、脱蜡、水化
1)60℃×20min→Xylene 2×10minutes。
1/2+1/2
2)100％absolute ethanol：2×5minutes。
3)95％ethanol 2minutes。
3)80％ethanol 2minutes。
4)70％ethanol 2minutes。
5)distilled water：5min。
6)PBS(PH 7.4)洗3次×3min。
2、细胞通透、封闭内源性过氧化物酶
7)用封闭通透液浸润切片30分钟(RT避光)。配法是用预热40ml PBS加120ulTritonX-100加热几分钟后，临用前加400ul 30％H2O2。
8)PBS溶液洗3次×3min。
3、抗原修复暴露抗原决定族
9)将盛有400ml0.01M柠檬酸钠缓冲溶液(pH6.0)的玻璃染色缸在95度水浴锅预热10min，将切片放入其中孵育20min，在微波炉里高火4min至沸腾后。
4、封闭非特异性蛋白
10)PBS溶液洗3次×3min。
11)将切片取出，周围水分用滤纸吸干，用组化笔在组织周围画上圈，在圆圈内组织滴入5％羊血清(与二抗来源一致)后放入湿盒中，室温30(10～30)min；
5、一抗孵育
12)甩去切片上的羊血清，用滤纸擦干组织周围残留血清，直接加入已稀释的一抗(1：250、500、1000)后，放入湿盒中室温1小时，然后4度过夜，从冰箱中取出需37度复温45min。
6、二抗孵育
13)将一抗倒掉并用PBS洗5min×5次。
14)用滤纸将圆圈周围的水吸去，加入已稀释的二抗后放入37度恒温烤箱中30min。
15)用PBS洗5次×5min。
8、显色
18)加入DAB(快速滴入，观察染色情况，倒掉染液)，显色时间控制在约5min(3～10min)，由镜下观察颜色控制时间。0.05％DAB(避光)(1：20储备液)：5ul 20×DAB+0.1ul30％H2O2+95ul PBS。1％DAB储备液的配制：50mg DAB+5ml 0.05mol/L PBS充分溶解，-20℃保存。
结果如图2所示，可以看出，BRD9在非小细胞肺癌患者癌旁组织和非小细胞肺癌患者肿瘤组织样品中的蛋白表达有显著差异，与癌旁组织相比，在非小细胞肺癌患者肿瘤组织中的BRD9的蛋白表达明显提高。
因此，BRD9的mRNA或者蛋白可以作为非小细胞肺癌诊断标志物。
(二)、设计抑制BRD9蛋白表达或活性的物质
根据BRD9基因序列，设计干扰其基因表达的2种siRNA如下表2所示：
表2为2种SiRNA
上述2种siRNA中，每一种均由其正义链和其反义链退火得到。
实施例2、抑制BRD9蛋白表达或活性的物质在抑制肿瘤中的应用
一、siRNA转染细胞
1、H226细胞(人肺鳞癌细胞)在10cm dish中培养至80-90％融合时，倾去培养液，用3ml PBS洗涤细胞两次；
2.加1ml Trypsin-EDTA solution,混匀后，小心吸去胰酶溶液，37℃放置1分钟。加入2ml完全培养基，吹打使细胞形成单细胞悬液；
3.血球计数板计数，按照每孔约1X105的细胞量接种于24孔板；
5.24孔板中加入1ul Lipo2000；
6.期间将前一天铺好的24孔板中培养基移除，按300μl/孔(24孔板)加入培养基；20min静置时间到后，将含有siRNA和lipo2000的转染混合物(siRNA终浓度为50nM；具体配置如下：混合液甲：100μl DMEM和10pmol siRNA混匀；混合液乙：99μl DMEM培养液和1μlLipofectamin2000转染试剂混匀；再将混合液甲和混合液乙等体积混匀，得到含有siRNA和lipo2000的转染混合物)分别加入到以上的24孔板中，200μl/孔，同时设立si-control孔，将孔板摇匀，在培养箱中温育5小时。
7.移除转染液，用PBS漂洗后，加入培养基继续培养，转染si-control的孔拍照观察转染效率。
二、逆转录及qPCR检测
1、上述一中转染48小时以后收取细胞样品提取总RNA，采用逆转录引物进行逆转录，得到cDNA。
2、以步骤1得到的cDNA为模板，进行荧光定量PCR，检测各组BRD9的mRNA水平，反应体系：(20μl)：由10μl 2×SYBR Green qPCR Mix(ThermoFisher kit)、上游引物溶液(20μM)、下游引物溶液(20μM)、模板、rTaq DNA聚合酶溶液(5U/μL)和dd H2O组成。反应体系中，上游引物和下游引物的浓度均为0.10μM，rTaq DNA聚合酶的浓度为0.05U/μL，模板加入量为50ng。
反应条件：94℃3min；94℃12s、62℃30s、72℃30s，40个循环。
引物：
BRD9FP:5’-TGGGAGCTACAGCAAGAAAGT-3’,
BRD9RP:5’-CTGGAAGAGCGTCCTAGAGTG-3’；
GAPDH FP:5’-CATGAGAAGTATGACAACAGCCT-3’,
GAPDH RP:5’-AGTCCTTCCACGATACCAAAGT-3’；
结果如图3所示，表明得到转Si-BRD9-1的H226细胞、转Si-BRD9-2的H226细胞和转Si-control的H226细胞,并且两条siRNA能够抑制BRD9 mRNA的表达。
三、CCK8细胞增殖实验
1.将上述一得到的转Si-BRD9-1的H226细胞、转Si-BRD9-2的H226细胞和转Si-control的H226细胞，传代后培养过夜，倾去培养液，用3ml PBS洗涤细胞两次。
2.加1ml Trypsin-EDTA solution,混匀后，小心吸去胰酶溶液，37℃放置3分钟
3.加入3ml含10％FBS的培养液，吹打使细胞形成单细胞悬液。
4.血球计数板计数，将细胞稀释至5×105细胞/ml。
5.按3×103细胞/孔的浓度接种96孔板，同时设置调零组组，即直接在孔中加入100μ1完全培养基，每组设5重复，混匀后于37℃5％CO2培养。
6.至0、24、48、72……小时，倾去培养液，加入新鲜的培养基100μl，每孔避光加入CCK8 10μl，避光培养2小时，酶标仪450nm波长测OD值。
结果如图4所示，可以看出，Si-BRD9-1和Si-BRD9-2均能够降低H226细胞的增殖。
四、细胞侵袭
1.包被基底膜：用含X％FBS的完全培养液按1：X稀释50mg/L Matrigel，取60μl包被Transwell小室底部膜的上室面，放37℃/5％CO2培养箱孵育4小时，吸弃上清。
2.侵染将上述一得到的转Si-BRD9-1的H226细胞、转Si-BRD9-2的H226细胞和转Si-control的H226细胞，培养至24h，撤去完全培养基，以X％FBS培养基继续培养24h。
3.倾去培养液，用3ml PBS洗涤细胞两次。
4.加1ml Trypsin-EDTA solution,混匀后，小心吸去胰酶溶液，37℃放置3-5分钟。
5.在加入2ml含X％FBS的完全培养液，吹打使细胞形成单细胞悬液。血球计数板计数，将细胞稀释至3×105细胞/ml。
6.按5×103(3×103)细胞/孔的浓度接种于transwell小室，下室加入血清浓度为20％的培液700μl，37℃5％CO2培养48h。
7.取出小室，PBS洗一次。加入预冷的甲醇，-20℃固定10min。
8.弃净甲醇，PBS洗。在PBS中用棉签轻轻刮去小室上表面的Matrigel胶，用PBS洗上表面3次。拿出小室倒置，风干。
9.将小室放入一新的24-well中，加入200ul 0.1％结晶紫，使膜浸没，37℃染色30min。
10.用ddH2O洗3次。小室风干后，放入孔中，倒置显微镜下取若干视野，拍照计数。
结果如图5所示，可以看出，针对BRD9的siRNA能够降低非小细胞癌细胞系的侵袭能力。
序列表
<110> 苏州吉玛基因股份有限公司
<120>与非小细胞肺癌诊疗相关的基因BRD9及其siRNAs和应用
<160> 8
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 1
gcaauugcuc cuggauauut t 21
<210> 2
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 2
aauauccagg agcaauugct t 21
<210> 3
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 3
gcgcuuucga ugcagaauat t 21
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 4
uauucugcau cgaaagcgct t 21
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
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tgggagctac agcaagaaag t 21
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
ctggaagagc gtcctagagt g 21
<210> 7
<211> 597
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 7
Met Gly Lys Lys His Lys Lys His Lys Ala Glu Trp Arg Ser Ser Tyr
1 5 10 15
Glu Asp Tyr Ala Asp Lys Pro Leu Glu Lys Pro Leu Lys Leu Val Leu
20 25 30
Lys Val Gly Gly Ser Glu Val Thr Glu Leu Ser Gly Ser Gly His Asp
35 40 45
Ser Ser Tyr Tyr Asp Asp Arg Ser Asp His Glu Arg Glu Arg His Lys
50 55 60
Glu Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Ser Glu Lys Glu Lys His Leu
65 70 75 80
Asp Asp Glu Glu Arg Arg Lys Arg Lys Glu Glu Lys Lys Arg Lys Arg
85 90 95
Glu Arg Glu His Cys Asp Thr Glu Gly Glu Ala Asp Asp Phe Asp Pro
100 105 110
Gly Lys Lys Val Glu Val Glu Pro Pro Pro Asp Arg Pro Val Arg Ala
115 120 125
Cys Arg Thr Gln Pro Ala Glu Asn Glu Ser Thr Pro Ile Gln Gln Leu
130 135 140
Leu Glu His Phe Leu Arg Gln Leu Gln Arg Lys Asp Pro His Gly Phe
145 150 155 160
Phe Ala Phe Pro Val Thr Asp Ala Ile Ala Pro Gly Tyr Ser Met Ile
165 170 175
Ile Lys His Pro Met Asp Phe Gly Thr Met Lys Asp Lys Ile Val Ala
180 185 190
Asn Glu Tyr Lys Ser Val Thr Glu Phe Lys Ala Asp Phe Lys Leu Met
195 200 205
Cys Asp Asn Ala Met Thr Tyr Asn Arg Pro Asp Thr Val Tyr Tyr Lys
210 215 220
Leu Ala Lys Lys Ile Leu His Ala Gly Phe Lys Met Met Ser Lys Gln
225 230 235 240
Ala Ala Leu Leu Gly Asn Glu Asp Thr Ala Val Glu Glu Pro Val Pro
245 250 255
Glu Val Val Pro Val Gln Val Glu Thr Ala Lys Lys Ser Lys Lys Pro
260 265 270
Ser Arg Glu Val Ile Ser Cys Met Phe Glu Pro Glu Gly Asn Ala Cys
275 280 285
Ser Leu Thr Asp Ser Thr Ala Glu Glu His Val Leu Ala Leu Val Glu
290 295 300
His Ala Ala Asp Glu Ala Arg Asp Arg Ile Asn Arg Phe Leu Pro Gly
305 310 315 320
Gly Lys Met Gly Tyr Leu Lys Arg Asn Gly Asp Gly Ser Leu Leu Tyr
325 330 335
Ser Val Val Asn Thr Ala Glu Pro Asp Ala Asp Glu Glu Glu Thr His
340 345 350
Pro Val Asp Leu Ser Ser Leu Ser Ser Lys Leu Leu Pro Gly Phe Thr
355 360 365
Thr Leu Gly Phe Lys Asp Glu Arg Arg Asn Lys Val Thr Phe Leu Ser
370 375 380
Ser Ala Thr Thr Ala Leu Ser Met Gln Asn Asn Ser Val Phe Gly Asp
385 390 395 400
Leu Lys Ser Asp Glu Met Glu Leu Leu Tyr Ser Ala Tyr Gly Asp Glu
405 410 415
Thr Gly Val Gln Cys Ala Leu Ser Leu Gln Glu Phe Val Lys Asp Ala
420 425 430
Gly Ser Tyr Ser Lys Lys Val Val Asp Asp Leu Leu Asp Gln Ile Thr
435 440 445
Gly Gly Asp His Ser Arg Thr Leu Phe Gln Leu Lys Gln Arg Arg Asn
450 455 460
Val Pro Met Lys Pro Pro Asp Glu Ala Lys Val Gly Asp Thr Leu Gly
465 470 475 480
Asp Ser Ser Ser Ser Val Leu Glu Phe Met Ser Met Lys Ser Tyr Pro
485 490 495
Asp Val Ser Val Asp Ile Ser Met Leu Ser Ser Leu Gly Lys Val Lys
500 505 510
Lys Glu Leu Asp Pro Asp Asp Ser His Leu Asn Leu Asp Glu Thr Thr
515 520 525
Lys Leu Leu Gln Asp Leu His Glu Ala Gln Ala Glu Arg Gly Gly Ser
530 535 540
Arg Pro Ser Ser Asn Leu Ser Ser Leu Ser Asn Ala Ser Glu Arg Asp
545 550 555 560
Gln His His Leu Gly Ser Pro Ser Arg Leu Ser Val Gly Glu Gln Pro
565 570 575
Asp Val Thr His Asp Pro Tyr Glu Phe Leu Gln Ser Pro Glu Pro Ala
580 585 590
Ala Ser Ala Lys Thr
595
<210> 8
<211> 1794
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
atgggcaaga agcacaagaa gcacaaggcc gagtggcgct cgtcctacga ggattatgcc 60
gacaagcccc tggagaagcc tctaaagcta gtcctgaagg tcggaggaag tgaagtgact 120
gaactctcag gatccggcca cgactccagt tactatgatg acaggtcaga ccatgagcga 180
gagaggcaca aagaaaagaa aaagaagaag aagaagaagt ccgagaagga gaagcatctg 240
gacgatgagg aaagaaggaa gcgaaaggaa gagaagaagc ggaagcgaga gagggagcac 300
tgtgacacgg agggagaggc tgacgacttt gatcctggga agaaggtgga ggtggagccg 360
cccccagatc ggccagtccg agcgtgccgg acacagccag ccgaaaatga gagcacacct 420
attcagcaac tcctggaaca cttcctccgc cagcttcaga gaaaagatcc ccatggattt 480
tttgcttttc ctgtcacgga tgcaattgct cctggatatt caatgataat aaaacatccc 540
atggattttg gcaccatgaa agacaaaatt gtagctaatg aatacaagtc agttacggaa 600
tttaaggcag atttcaagct gatgtgtgat aatgcaatga catacaatag gccagatacc 660
gtgtactaca agttggcgaa gaagatcctt cacgcaggct ttaagatgat gagcaaacag 720
gcagctcttt tgggcaatga agatacagct gttgaggaac ctgtccctga agttgtacca 780
gtacaagtag aaactgccaa gaaatccaaa aagccgagta gagaagttat cagctgcatg 840
tttgagcctg aagggaatgc ctgcagcttg acggacagta ccgcagagga gcacgtgctg 900
gcgctggtgg agcacgcagc tgacgaagct cgggacagga tcaaccggtt cctcccaggc 960
ggcaagatgg gctatctgaa gaggaacggg gacgggagcc tgctctacag cgtggtcaac 1020
acggccgagc cggacgctga tgaggaggag acccacccgg tggacttgag ctcgctctcc 1080
agtaagctac tcccaggctt caccacgctg ggcttcaaag acgagagaag aaacaaagtc 1140
acctttctct ccagtgccac tactgcgctt tcgatgcaga ataattcagt atttggcgac 1200
ttgaagtcgg acgagatgga gctgctctac tcagcctacg gagatgagac aggcgtgcag 1260
tgtgcgctga gcctgcagga gtttgtgaag gatgctggga gctacagcaa gaaagtggtg 1320
gacgacctcc tggaccagat cacaggcgga gaccactcta ggacgctctt ccagctgaag 1380
cagagaagaa atgttcccat gaagcctcca gatgaagcca aggttgggga caccctagga 1440
gacagcagca gctctgttct ggagttcatg tcgatgaagt cctatcccga cgtttctgtg 1500
gatatctcca tgctcagctc tctggggaag gtgaagaagg agctggaccc tgacgacagc 1560
catttgaact tggatgagac gacgaagctc ctgcaggacc tgcacgaagc acaggcggag 1620
cgcggcggct ctcggccgtc gtccaacctc agctccctgt ccaacgcctc cgagagggac 1680
cagcaccacc tgggaagccc ttctcgcctg agtgtcgggg agcagccaga cgtcacccac 1740
gacccctatg agtttcttca gtctccagag cctgcggcct ctgccaagac ctaa 1794

Claims (10)

1.抑制BRD9蛋白活性的物质在制备治疗肿瘤的产品中的应用；
或，抑制或沉默BRD9基因表达的物质在制备治疗肿瘤的产品中的应用。
2.抑制BRD9蛋白的物质在制备抑制肿瘤细胞增殖的产品中的应用；
或，抑制或沉默BRD9基因表达的物质在制备抑制肿瘤细胞增殖的产品中的应用。
3.抑制BRD9蛋白的物质在制备抑制肿瘤细胞侵袭的产品中的应用；
或，抑制或沉默BRD9基因表达的物质在制备抑制肿瘤细胞侵袭的产品中的应用。
4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于：
所述肿瘤为肺癌；
所述肿瘤细胞为肺癌细胞；
或，所述肺癌为非小细胞肺癌；
或，所述肺癌细胞为非小细胞肺癌细胞。
5.根据权利要求1-4中任一所述的应用，其特征在于：
所述抑制BRD9蛋白活性的物质或抑制或沉默BRD9基因表达的物质为BRD9蛋白抑制剂或抑制BRD9基因表达的siRNA。
6.根据权利要求1-5中任一所述的应用，其特征在于：
所述抑制BRD9基因表达的siRNA为如下1)或2)：
1)所示的siRNA由正义链和反义链退火形成；
1)所示的siRNA的正义链的核苷酸序列为序列1，1)所示的siRNA的反义链的核苷酸序列为序列2；
2)所示的siRNA由正义链和反义链退火形成；
2)所示的siRNA的正义链的核苷酸序列为序列3，2)所示的siRNA的反义链的核苷酸序列为序列4。
7.一种siRNA，其为权利要求1-6中任一中所述抑制BRD9基因表达的siRNA。
8.BRD9蛋白或其基因在作为非小细胞肺癌早期诊断标记物中的应用。
9.检测BRD9蛋白或其基因表达的物质在制备检测或诊断待测样本是否为非小细胞肺癌中的应用；
或，检测BRD9蛋白或其基因表达的物质在制备检测或诊断待测患者是否患有非小细胞肺癌中的应用；
或，检测BRD9蛋白或其基因表达的物质在制备检测或诊断待测细胞是否为非小细胞肺癌细胞中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：
所述检测BRD9蛋白表达的物质为BRD9蛋白的抗体；
或所述检测BRD9基因表达的物质为扩增BRD9基因的引物对；
或所述引物对具体由序列5所示的单链DNA分子和序列6所示的单链DNA分子组成。
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