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CN108992671A - 一种药物组合物及其制备治疗肝损伤的药物中的用途 - Google Patents

一种药物组合物及其制备治疗肝损伤的药物中的用途 Download PDF

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CN108992671A CN201710416736.0A CN201710416736A CN108992671A CN 108992671 A CN108992671 A CN 108992671A CN 201710416736 A CN201710416736 A CN 201710416736A CN 108992671 A CN108992671 A CN 108992671A
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Abstract

一种药物组合物及其制备治疗肝损伤的药物中的用途，具体地，本发明的药物组合物中包含了肿瘤坏死因子(TNF)‑a拮抗剂和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)拮抗剂。肿瘤坏死因子拮抗剂选自sTNFR‑Fc抗体融合蛋白，肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体拮抗剂选自sDR5‑Fc融合蛋白。本发明还公开了该药物组合物在制备治疗肝损伤药物中的用途，其中，肝损伤选自急性肝衰竭或急性肝损伤、亚急性肝衰竭、慢加急性肝衰竭、慢性肝衰竭或慢性肝损伤、内毒素诱导的肝损伤的药物中的用途。本发明中肿瘤坏死因子拮抗剂和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体拮抗剂能够协同作用，为治疗肝损伤，尤其是内毒素引起的肝衰竭提供了用药思路。

Description

一种药物组合物及其制备治疗肝损伤的药物中的用途
技术领域
本发明涉及药物组合物，及其在治疗肝损伤的药物中的用途。
背景技术
肝脏受到多种因素引起严重损害时，肝细胞短期内大量死亡，导致其功能发生严重障碍或失代偿，进而出现以凝血机制障碍和黄疸、肝性脑病、腹水等为主要表现的一组临床症候群，称之为肝衰竭。一般发病急骤、病情重、进展快、治疗难度大、并发症多、病死率高、医疗费用昂贵、预后不良。肝衰竭如不及时治疗病死率高达70％以上，肝衰竭发展到重度昏迷时，90％的患者将死亡，因此肝衰竭有“九死一生”之说，肝衰竭的治疗仍是世界难题。
内毒素(endotoxin)是革兰阴性细菌细胞壁外层成分，其主要化学成分是脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)。正常生理情况下，人体肠道存在大量革兰氏阴性细菌并产生LPS，肠粘膜有严密的屏蔽功能，能阻挡大部分的致病菌进入人体，但仍会有少量的细菌和内毒素被吸收，这些少量的细菌和内毒素到达肝脏时会被肝脏内的巨噬细胞吞噬降解失去毒性，所以对人体不会造成伤害。然而，当肝脏发生损伤时，血液或病灶内细菌产生并释放大量LPS，肝脏对内毒素清除能力降低，同时肠粘膜通透性增加，肠道屏障受损，大量的内毒素趁机进入血液循环，引起血液LPS浓度迅速升高，形成肠源性内毒素血症。这些内毒素滞留在静脉血中会激活枯否细胞分泌大量促炎细胞因子及各种炎性介质，导致对内毒素的敏感性成倍的増加。内毒素血症的产生可加重肝损害并可导致各种并发症。慢性肝病患者多伴有肠源性内毒素血症，其发生率在各型肝病分别为：急性重型肝炎59％～100％，暴发性肝衰竭100％，慢性肝炎20％～50％，肝硬化15％～92％。
D-氨基半乳糖(D-galactosamine，D-GalN)是一种仅在肝细胞中代谢的氨基糖，能够特异性的消耗肝脏内的UTP，从而抑制相应的以其为原料的核酸、蛋白质等物质的合成，细胞膜的结构和功能因膜蛋白合成受损发生改变，最终致使肝细胞产生损伤甚至死亡。单独的LPS会导致全身系统性的炎症反应，而LPS联合D-GaIN则能够特异性的引发肝脏的暴发性损伤和衰竭，而不影响其他器官。
目前肝衰竭的治疗尚缺乏特效药物和手段，一般内科药物治疗效果差，临床死亡率居高不下；人工肝治疗作为一种支持治疗手段，并不能完全扭转肝细胞大片坏死所致的肝功能衰竭；肝脏移植是唯一有效的治疗途径，但是由于价格昂贵、供肝短缺及技术因素的限制，肝移植还远未普及。需开发新的作用机理、提高治疗效果和生存率的治疗药物。
目前内毒素诱导肝衰竭的基本治疗原则是：主要以减少炎症因子以及缓解并发症为主。
治疗药物主要包括：
(1)N-乙酰半胱氨酸(N–acetylcysteine，NAC)：NAC是细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)的前体，具有肝细胞保护作用而用于治疗多种原因引起的肝细胞损害。NAC可以直接清除自由基，增加机体抗氧化应激能力，并可减少炎性细胞因子、趋化因子和黏附分子产生。此外，NAC还可以调节机体免疫状态和细胞凋亡程序。在综合治疗基础上用于肝衰竭早期治疗，以降低胆红素、提高凝血酶原活动度。
(2)绿汀诺(注射用还原型谷胱甘肽，GSH)：GSH是人类细胞质中自然合成的一种肽，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，含有巯基(－SH)，参与体内三羧酸循环及糖代谢。它激活体内SH酶等，促进碳水化合物、脂肪及蛋白质的代谢。还原型谷胱甘肽还可通过巯基与体内的自由基结合，促进易代谢的低毒化合物的形成，因此对部分外源性毒性物质具有减毒作用，保护肝脏的合成、解毒、灭活等功能。
(3)微生态调节剂亦称微生态制剂：是利用对宿主有益无害的正常微生物或其促进物质制成的生态制剂，可以有效调整肠道失调菌群，恢复肠道微生态环境，抑制G-杆菌过量增殖，明显降低血清内毒素水平。在细胞因子水平上，微生态调节剂能够降低TNFα、IL-6含量，升高IL-10、IL-2水平，抑制炎性介质的产生和减轻免疫反应对肝细胞的损伤，从而改善慢性重型肝炎患者的临床症状和肝功能。微生态调节剂可以分为三类：第一类是活菌制剂(益生菌)，代表药物为培菲康；第二类是优势种群生长促进物质(益生元)，代表药物为乳果糖；第三类是活菌与促活菌物质的联合制剂，称为合生元。
因此，寻找更多有效且安全的药物对治疗内毒素诱导的肝衰竭有着重要的意义。
肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factorα，TNF-α)是炎症反应的主要细胞因子，也是炎症反应中释放最早、最重要的内源性介质。有研究显示LPS能够激活包括外周血单核细胞在内的各种细胞，能够诱导产生各种内源性的活性物质，如TNFs、IFNs、ILs和CSFs等。TNF-α与靶细胞膜上肿瘤坏死因子受体(Tumor Necrosis Factor Receptor,TNFR)结合，实现其细胞毒性、抗病毒、免疫调节等生物学功能。TNFR存在于多种正常细胞及肿瘤细胞表面，有TNFR1和TNFR2两种亚型，由于TNFR1胞内区含死亡结构域，在溶细胞活性上起主要作用。当TNF-α与靶细胞膜上TNFR2的胞外区结合后，经信号传导使得NF-κB活化，启动和放大一系列参与炎症反应的细胞因子表达，导致失控性炎症反应。TNF-α还具有与受体结合诱导细胞凋亡以及激活JNK信号通路等功能。因此可以通过早期抑制TNF-α的活性阻断TNF-α介导NF-κB信号转导来减轻细胞因子过度表达，调控失控性炎症反应，达到保护脏器功能的目的。
目前已上市的TNF拮抗剂主要包括可溶性肿瘤坏死因子受体II(sTNFRII)与IgG的Fc段形成的融合蛋白(sTNFRII-Fc，依那西普)和抗TNF的单克隆抗体(如嵌合型TNF抗体——Infliximab英夫利昔单抗和人源化TNF抗体——Adalimumab阿达木单抗)两大类。它们均可缓解及阻止类风湿关节炎的临床及影像学进展，显著减轻类风湿关节炎患者的症状、改善功能及提高生活质量等；可显著改善银屑病性关节炎患者的关节炎症状，减缓其影像学进展。可降低强直性脊柱炎患者的疾病活动度，延缓影像学进展以及改善生活质量。不同厂家sTNFRII-Fc融合蛋白的商品名分别为：益赛普、强克、恩利。益赛普(Etanercept)，是一个同源二聚体，由中国仓鼠卵巢细胞(CHO)分泌表达获得，借助Fc的二聚体化作用，Etanercept拮抗TNF的能力是相应sTNFR II单体的50-1000倍，因此竞争性地与血中TNF-α结合，阻断它和细胞表面TNF受体结合，降低其活性。目前该药物用于治疗：1)中度及重度活动性类风湿关节炎；2)18岁及18岁以上成人中度至重度斑块状银屑病；3)活动性强直脊柱炎。目前，还没有TNF拮抗剂获批用于肝损伤疾病的治疗。
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor related apoptosisinducing ligand,TRAIL)与细胞膜表面的死亡受体5(Death receptor 5,DR5)结合后可引发细胞凋亡。现已发现许多细菌感染能触发或抑制细胞凋亡，并且有结果显示细菌引起的细胞凋亡中有TRAIL的参与。可溶性DR5(soluble DR5,sDR5)为DR5不含跨膜区域的可溶性形式，可以与TRAIL配体相结合，但不能向细胞内传导凋亡信号，可阻断TRAIL-DR5介导的细胞凋亡。sDR5是人体自身蛋白，具毒性小、无免疫原性的优点，目前国内外尚无针对该靶点的治疗肝病药物获批或上市。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种药物组合物以及该药物组合物制备治疗和预防肝损伤的药物中的用途。
具体地，本发明一个方面提供了一种药物组合物，其包括肿瘤坏死因子拮抗剂和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体拮抗剂。
在一些具体实施方案中，所述肿瘤坏死因子拮抗剂选自可溶性肿瘤坏死因子受体II的Fc融合蛋白、抗TNF的单克隆抗体中一种或多种的组合；更优选为sTNFR-Fc融合蛋白。
在一些具体实施方案中，所述肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体拮抗剂选自死亡受体的Fc融合蛋白、抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的单克隆抗体中一种或多种的组合，优选为SEQ ID No.1-4中的一种或多种。
本发明再一个方面提供了前述的药物组合物在制备治疗肝损伤药物中的用途。
在一些具体实施方案中，其中肝损伤选自急性肝衰竭或急性肝损伤、亚急性肝衰竭、慢加急性肝衰竭、慢性肝衰竭或慢性肝损伤、存在内毒素血症的肝损伤和肝衰竭的药物中的用途。
本发明再一个方面提供了一种治疗肝损伤的药物，其包含肿瘤坏死因子拮抗剂和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体拮抗剂，所述其中肿瘤坏死因子受体拮抗剂和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体拮抗剂混合或分隔放置。
本发明使用肿瘤坏死因子拮抗剂和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体拮抗剂联合用药，可以有效的抑制炎症和细胞死亡，提高生存率，起到显著的协同治疗效果。
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体拮抗剂和肿瘤坏死因子拮抗剂能够分别通过与TRAIL和TNF-α结合，中和TRAIL和TNF-α，本发明人意外的发现两种通路的同时阻断可以显著提高生存率，减少肝脏病理损伤，降低炎症因子水平，从而起到有效改善病情的作用，具有协同作用。本发明采用融合蛋白形式的活性成分，以sDR5-Fc联合sTNFR-Fc融合蛋白验证了TRAIL和TNF两条作用通路具有协同关系可以作为治疗肝衰竭的药物，其作用机理明确新颖、作用效果独特、疗效显著，安全性高，极具开发潜力。
本文中使用的一般术语被定义成具有以下含义：
本文中使用的术语“包含”和“包括”具有开放和非限制性意义。
本文中定义的术语“药物组合物”是指在一个单位剂型中的固定组合、非固定组合或者用于合并给药的各组分的药盒；术语“固定组合”指活性成分以单一活性成分或剂型同时施用于受试者。术语“非固定组合”指活性成分以单独的活性成分同时或无特定时间限制地依次施用于受试者，其中这种施用使得受试者体内两种活性成分均达到治疗有效水平。其中肿瘤坏死因子拮抗剂和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体拮抗剂可在同一时刻同时、独立给药或在该组合显示协助作用的时间区间内分开给药。
本文中使用的术语“协同作用”是指两种活性成分，其产生大于各药物单独给药效果的简单相加的效果(例如增加肝衰竭受试者的存活率)。根据协同因子(synergy factor，SF)的计算公式(Mario Cortina-Borja,A David Smith,Onofre Combarros,Donald JLehmann.The synergy factor:a statistic to measure interactions in complexdiseases.BMC Res Notes.2009；2:105.)，可以计算出sDR5-Fc和sTNFR-Fc在治疗内毒素诱导肝衰竭的协同因子为100％/(25％*66.67％)＝5.997>1，表明sDR5-Fc和sTNFR-Fc有明显的协同治疗效果。
本发明所述的sDR5-Fc融合蛋白选自专利申请CN201610067931.2或PCT/CN2016/089650中公开的sDR5-Fc融合蛋白。具体的选自具有如下氨基酸序列SEQ ID NO.1～4的sDR5-Fc融合蛋白。
SEQ ID NO.1：
ITQQDLAPQQRAAPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECVHKEGSSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK；
SEQ ID NO.2：
ITQQDLAPQQRAAPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECVHKEEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK；
SEQ ID No.3：
AAPQQKRSSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECVHKEEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK；
SEQ ID NO.4：
SSPSEGLCPPGHHISEDGRDCISCKYGQDYSTHWNDLLFCLRCTRCDSGEVELSPCTTTRNTVCQCEEGTFREEDSPEMCRKCRTGCPRGMVKVGDCTPWSDIECVHKEEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK。
有益效果
1.本发明人为肝损伤治疗药物的研发提供了新的思路。
2.本发明肿瘤坏死因子拮抗剂联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体拮抗剂通过阻断TRAIL/DR5通路诱导的细胞凋亡，并阻断TNF-a/TNFRII通路介导的炎症反应和细胞凋亡以减少内毒素诱导急性肝衰竭产生的死亡和肝脏病理改变，从而达到保护肝功能、提高生存率的作用。
附图说明
图1为内毒素诱导急性肝衰竭小鼠的生存率结果图，其中相比于sDR5-Fc或sTNFR-Fc单独给药，sDR5-Fc联合sTNFR-Fc给药显著性提高小鼠的生存率，P<0.05。协同因子为100％/(25％*66.67％)＝5.997>1，表明sDR5-Fc和sTNFR-Fc有明显的协同治疗效果。
图2为小鼠的血清转氨酶水平结果图，其中sDR5-Fc联合sTNFR-Fc能显著性降低内毒素诱导急性肝衰竭小鼠的血清转氨酶水平。造模6h时，sDR5-Fc治疗组的肝损伤水平与生理盐水组相类似，而sTNFR-Fc治疗组与联合治疗药物组能明显抑制或延缓肝损伤的发生，转氨酶水平明显低(P<0.05)。造模24h时，sDR5-Fc治疗组与生理盐水组的小鼠已大量死亡，sTNFR-Fc治疗组表现出明显的肝损伤，而联合治疗药物组仍然能明显抑制肝损伤的发生，转氨酶水平明显低(P<0.05)。
图3为小鼠的血清炎症因子水平结果图，其中sDR5-Fc联合sTNFR-Fc能显著性降低内毒素诱导急性肝衰竭小鼠的血清炎症因子的水平。造模6h时，sDR5-Fc组相对于生理盐水组IL-6的水平相类似，而sTNFR-Fc治疗组与联合治疗药物组能显著降低IL-6的水平(P<0.05)。sDR5-Fc组、sTNFR-Fc治疗组与联合治疗药物组相对于生理盐水组，均能明显提高抗炎因子IL-10的水平，从而下调炎症反应，拮抗炎症介质。造模24h和48h时，sTNFR-Fc治疗组与联合治疗药物组的IL-10的水平持续升高，联合治疗药物组的IL-6水平显著低于sTNFR-Fc治疗组(P<0.05)。由该图可以看到，sDR5-Fc不仅可以通过与TRAIL结合，阻断细胞凋亡，而且具有明显的抗炎作用，且能与sTNFR-Fc起到协同抗炎的作用。
图4为小鼠的肝脏病理损伤结果图，其中A为生理盐水组，肝细胞大面积死亡；B为sDR5-Fc组，肝细胞死亡数量较生理盐水组少；C为sTNFR-Fc组，可以看到形态正常的肝细胞；D为sDR5-Fc+sTNFR-Fc组，肝脏结构保持良好，绝大部分肝细胞形态正常。从图中可以看出sDR5-Fc联合sTNFR-Fc能显著性降低内毒素诱导急性肝衰竭小鼠的肝脏病理损伤。
图5为小鼠的肝脏中TRAIL阳性浸润淋巴细胞的数量结果图，其中，A为sTNFR-Fc组，看到血管周围大量浸润TRAIL阳性淋巴细胞；B为sDR5-Fc+sTNFR-Fc组，看到血管周围浸润淋巴细胞很少，其中TRAIL阳性淋巴细胞更少。因此sDR5-Fc联合sTNFR-Fc能显著性降低内毒素诱导急性肝衰竭小鼠的肝脏中TRAIL阳性浸润淋巴细胞的数量。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不局限于此。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种试剂和样品，除另有说明均为市售产品。
除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。本发明所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
实施例1人sDR5-Fc抗体融合蛋白联合sTNFR-Fc抗体融合蛋白能治疗内毒素诱导的小鼠急性肝衰竭。
将14只C57BL/6小鼠随机分成4组(1～4组)，每组3～4只，每只小鼠腹腔注射给予800mg/kg D-氨基半乳糖(D-GaIN)和50ug/kg细菌脂多糖(LPS)，注射体积为10ml/kg。造模1h前，每组小鼠分别给予：(1组)静脉注射10ml/kg的生理盐水、(2组)静脉注射16.1mg/kgsDR5-Fc蛋白、(3组)腹腔注射50mg/kg重组人II型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(上海中信国健药业有限公司，国药准字S20050058，益赛普，sTNFR-Fc)、(4组)静脉注射16.1mg/kg sDR5-Fc蛋白(SEQ ID NO.4)并腹腔注射50mg/kg sTNFR-Fc。造模后6h、24h和48h进行颌下静脉采血，分离血清，检测血清转氨酶水平和炎性细胞因子水平。在造模后48h处死小鼠，取部分肝脏放入4％PFA中固定，石蜡包埋、切片、HE染色、TRAIL免疫组化染色。可以看到sDR5-Fc和sTNFR-Fc联合能显著性的提高小鼠存活率，降低小鼠血清转氨酶水平，减轻小鼠肝脏病理损伤，减少炎性因子的表达水平，同时TRAIL阳性的浸润淋巴细胞数量显著减少。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 深圳市中科艾深医药有限公司
<120> 一种药物组合物及其制备治疗肝损伤的药物中的用途
<160> 4
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 370
<212> PRT
<213> 融合蛋白
<400> 1
Ile Thr Gln Gln Asp Leu Ala Pro Gln Gln Arg Ala Ala Pro Gln Gln
1 5 10 15
Lys Arg Ser Ser Pro Ser Glu Gly Leu Cys Pro Pro Gly His His Ile
20 25 30
Ser Glu Asp Gly Arg Asp Cys Ile Ser Cys Lys Tyr Gly Gln Asp Tyr
35 40 45
Ser Thr His Trp Asn Asp Leu Leu Phe Cys Leu Arg Cys Thr Arg Cys
50 55 60
Asp Ser Gly Glu Val Glu Leu Ser Pro Cys Thr Thr Thr Arg Asn Thr
65 70 75 80
Val Cys Gln Cys Glu Glu Gly Thr Phe Arg Glu Glu Asp Ser Pro Glu
85 90 95
Met Cys Arg Lys Cys Arg Thr Gly Cys Pro Arg Gly Met Val Lys Val
100 105 110
Gly Asp Cys Thr Pro Trp Ser Asp Ile Glu Cys Val His Lys Glu Gly
115 120 125
Ser Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
130 135 140
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
145 150 155 160
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
165 170 175
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
180 185 190
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
195 200 205
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
210 215 220
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
225 230 235 240
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
245 250 255
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
260 265 270
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
275 280 285
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
290 295 300
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
305 310 315 320
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
325 330 335
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
340 345 350
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
355 360 365
Gly Lys
370
<210> 2
<211> 359
<212> PRT
<213> 融合蛋白
<400> 2
Ile Thr Gln Gln Asp Leu Ala Pro Gln Gln Arg Ala Ala Pro Gln Gln
1 5 10 15
Lys Arg Ser Ser Pro Ser Glu Gly Leu Cys Pro Pro Gly His His Ile
20 25 30
Ser Glu Asp Gly Arg Asp Cys Ile Ser Cys Lys Tyr Gly Gln Asp Tyr
35 40 45
Ser Thr His Trp Asn Asp Leu Leu Phe Cys Leu Arg Cys Thr Arg Cys
50 55 60
Asp Ser Gly Glu Val Glu Leu Ser Pro Cys Thr Thr Thr Arg Asn Thr
65 70 75 80
Val Cys Gln Cys Glu Glu Gly Thr Phe Arg Glu Glu Asp Ser Pro Glu
85 90 95
Met Cys Arg Lys Cys Arg Thr Gly Cys Pro Arg Gly Met Val Lys Val
100 105 110
Gly Asp Cys Thr Pro Trp Ser Asp Ile Glu Cys Val His Lys Glu Glu
115 120 125
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
130 135 140
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
145 150 155 160
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
165 170 175
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
180 185 190
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
195 200 205
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
210 215 220
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
225 230 235 240
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
245 250 255
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
260 265 270
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
275 280 285
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
290 295 300
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
305 310 315 320
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
325 330 335
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
340 345 350
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355
<210> 3
<211> 348
<212> PRT
<213> 融合蛋白
<400> 3
Ala Ala Pro Gln Gln Lys Arg Ser Ser Pro Ser Glu Gly Leu Cys Pro
1 5 10 15
Pro Gly His His Ile Ser Glu Asp Gly Arg Asp Cys Ile Ser Cys Lys
20 25 30
Tyr Gly Gln Asp Tyr Ser Thr His Trp Asn Asp Leu Leu Phe Cys Leu
35 40 45
Arg Cys Thr Arg Cys Asp Ser Gly Glu Val Glu Leu Ser Pro Cys Thr
50 55 60
Thr Thr Arg Asn Thr Val Cys Gln Cys Glu Glu Gly Thr Phe Arg Glu
65 70 75 80
Glu Asp Ser Pro Glu Met Cys Arg Lys Cys Arg Thr Gly Cys Pro Arg
85 90 95
Gly Met Val Lys Val Gly Asp Cys Thr Pro Trp Ser Asp Ile Glu Cys
100 105 110
Val His Lys Glu Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
115 120 125
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
130 135 140
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
145 150 155 160
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
165 170 175
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
180 185 190
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
195 200 205
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
210 215 220
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
225 230 235 240
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
245 250 255
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
260 265 270
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
275 280 285
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
290 295 300
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
305 310 315 320
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
325 330 335
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345
<210> 4
<211> 341
<212> PRT
<213> 融合蛋白
<400> 4
Ser Ser Pro Ser Glu Gly Leu Cys Pro Pro Gly His His Ile Ser Glu
1 5 10 15
Asp Gly Arg Asp Cys Ile Ser Cys Lys Tyr Gly Gln Asp Tyr Ser Thr
20 25 30
His Trp Asn Asp Leu Leu Phe Cys Leu Arg Cys Thr Arg Cys Asp Ser
35 40 45
Gly Glu Val Glu Leu Ser Pro Cys Thr Thr Thr Arg Asn Thr Val Cys
50 55 60
Gln Cys Glu Glu Gly Thr Phe Arg Glu Glu Asp Ser Pro Glu Met Cys
65 70 75 80
Arg Lys Cys Arg Thr Gly Cys Pro Arg Gly Met Val Lys Val Gly Asp
85 90 95
Cys Thr Pro Trp Ser Asp Ile Glu Cys Val His Lys Glu Glu Pro Lys
100 105 110
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
115 120 125
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
130 135 140
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
145 150 155 160
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
165 170 175
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
180 185 190
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
195 200 205
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
210 215 220
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
225 230 235 240
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
245 250 255
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
260 265 270
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
275 280 285
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
290 295 300
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
305 310 315 320
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
325 330 335
Leu Ser Pro Gly Lys
340

Claims (7)

1.一种药物组合物，其包括肿瘤坏死因子拮抗剂和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体拮抗剂。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，所述肿瘤坏死因子拮抗剂选自可溶性肿瘤坏死因子受体II的Fc融合蛋白、抗TNF-α的单克隆抗体中一种或多种的组合；更优选为sTNFR-Fc融合蛋白中一种或多种的组合。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，所述肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体拮抗剂选自死亡受体的Fc融合蛋白、抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的单克隆抗体中一种或多种的组合，优选为SEQ ID No.1-4中的一种或多种。
4.根据权利要求1-3任一项所述的药物组合物在制备治疗肝损伤药物中的用途。
5.根据权利要求4中所述的用途，其中肝损伤选自急性肝衰竭或急性肝损伤、亚急性肝衰竭、慢加急性肝衰竭、慢性肝衰竭或慢性肝损伤、药物诱导的肝损伤、内毒素诱导的肝损伤、存在内毒素血症的肝损伤和肝衰竭的药物中的用途。
6.一种治疗肝损伤的药物，其包含肿瘤坏死因子拮抗剂和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体拮抗剂，所述其中肿瘤坏死因子拮抗剂和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体拮抗剂混合或分隔放置。
7.根据权利要求6所述的药物，所述药物的剂型为非肠道给药制剂，优选为注射剂。
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