CN108603877A - 使用多基质的分析物检测 - Google Patents
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Abstract
本公开提供了用于检测样品中的分析物的方法和/或试剂盒。一些实施方式提供了分析物检测系统、试剂盒和使用其的方法，包括：包含至少一个标签并能够结合分析物的第一试剂；共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂；包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的第一微珠；和包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第二微珠。
Description
交叉引用
本申请要求2015年10月2日提交的美国临时专利申请号62/236,676和2015年10月5日提交的美国临时专利申请号62/237,522的优先权益。前述所有关联申请被整体引入作为参考。
技术领域
本公开涉及检测样品中的分析物的方法。
序列表
本申请包含以ASCII形式电子提交的序列表，其被整体引入作为参考。所述创建于2016年9月27日的ASCII拷贝被命名为013018-0008-228_SL.txt，大小2,227b。
背景技术
样品中分析物的检测在许多行业中是重要的，包括例如研究、免疫学、水质评估、环境科学和工程学、医学等。参见例如美国专利号9,086,407和美国专利申请号15/222,376，其被整体引入作为参考。
可以使用用于检测样品中的分析物的不同方法，包括，例如，高压液相色谱法(HPLC)、质谱法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)。尽管HPLC和质谱法可用于根据电荷和/或大小来检测分析物，但ELISA可用于检测基于分析物上可被检测试剂(例如，抗体，适配子等)捕获和识别的抗原的分析物，使其成为重要的检测方法，特别是在生命科学领域。ELISA可用于检测样品中分析物的存在、不存在或数量。
尽管常规ELISA是广泛使用的方法，但仍然需要开发具有较低成本和减少的测定时间的改进的测定方法。首先，常规ELISA可能需要昂贵的捕获和检测试剂，如抗体。因此，对抗体的需求降低的技术可以减少检测费用。另外，常规的ELISA需要至少2小时才能完成，并且通常包括至少2次独立的孵育和洗涤步骤。因此，希望提供一种用于检测样品中的分析物的方法，与常规ELISA相比，其花费较少的时间和投入来执行，同时维持或提高检测的灵敏度。
本说明书中对任何现有技术的引用不是也不应被视为承认或以任何形式暗示该现有技术在任何国家构成公知常识的一部分。
发明概述
某些实施方式可以提供用于检测分析物的系统，该系统包含：包含至少一个标签(例如生物素或肽标签)并能够结合分析物的第一试剂(例如，单克隆抗体、多克隆抗体、多价抗体、嵌合抗体、多特异性抗体或其抗体片段；适配子；affimer；蛋白；蛋白受体；蛋白受体；蛋白配体；或包含例如免疫球蛋白融合伴侣、稳定受体或配体的融合伴侣或提供结合目标的融合伴侣的融合蛋白)，共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂(例如，单克隆抗体、多克隆抗体、多价抗体、嵌合抗体、多特异性抗体或其抗体片段；适配子；affimer；蛋白；蛋白受体；蛋白受体；蛋白配体；或包含例如免疫球蛋白融合伴侣、稳定受体或配体的融合伴侣或提供结合目标的融合伴侣的融合蛋白)，包含能够结合带标签的第一试剂的结合子(例如，单克隆抗体、多克隆抗体、多价抗体、嵌合抗体、多特异性抗体或其抗体片段；适配子；affimer；蛋白；蛋白受体；蛋白受体；蛋白配体；包含例如免疫球蛋白融合伴侣、稳定受体或配体的融合伴侣或提供结合目标的融合伴侣的融合蛋白；抗生物素蛋白，链霉亲和素，抗生物素蛋白衍生物或链霉亲和素衍生物)的第一微珠，和包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂(例如，单克隆抗体、多克隆抗体、多价抗体、嵌合抗体、多特异性抗体或其抗体片段；适配子；affimer；蛋白；蛋白受体；蛋白受体；蛋白配体；或包含例如免疫球蛋白融合伴侣、稳定受体或配体的融合伴侣或提供结合目标的融合伴侣的融合蛋白)的第二微珠。
某些实施方式可以提供用于检测分析物的系统，该系统包含：多个能够结合分析物的第一试剂和多个能够结合分析物的第二试剂。每个第一试剂可以包括：能够结合分析物的第一抗原性方面的第一区域和多个第一标签。每个第二试剂可以包括：能够结合分析物的第二抗原性方面的第二区域和多个共价结合的肽第二标签。该系统可进一步包含第一微珠和第二微珠。第一微珠(例如乳胶微珠；例如包被或含有配置为在一个或多个光波长下发射单线态氧的基质的微珠)可以包括多个在其上缀合的结合子，其中该多个结合子中的至少一个能够选择性结合该多个第一标签中的至少一个。第二微珠(例如乳胶微珠；例如含有或包被配置为在用单线态氧激活然后照射后在预设的波长下发射光的铕或铽化合物的微珠)可以包括在其上缀合的多个抗肽试剂，其中至少一个抗肽试剂能够选择性结合该多个共价结合的肽第二标签中的至少一个。当第一微珠和第二微珠彼此被置于一定距离内时，第一微珠和第二微珠可以能够可检测地相互反应(例如通过化学迁移相互作用)。
某些实施方式可以提供用于检测至少两种分析物的系统，包含：能够结合第一分析物的第一供体试剂；与供体微珠缀合的第一结合子，所述第一结合子能够结合第一供体试剂；能够结合第二分析物的带标签的第二供体试剂；与供体微珠缀合的第二结合子，所述第二结合子能够结合带标签的第二供体试剂；能够结合第一分析物的带标签的第一受体试剂，该带标签的第一受体试剂包含多个共价结合的第一肽标签；与抗第一肽试剂缀合的第一受体微珠，该抗第一肽试剂能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个；能够结合第二分析物的第二受体试剂；和能够结合第二受体试剂的第二受体微珠。在某些实施方式中，结合子和第二结合子可以是相同种类的结合子。在某些实施方式中，第二受体试剂可直接缀合第二受体微珠。在某些实施方式中，第二受体试剂可以是包含多个共价结合的第二肽标签的带标签的第二受体试剂。
某些实施方式可以提供分析物检测试剂盒，包含：包含至少一个标签并能够结合分析物的第一试剂，共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂，包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的第一微珠和包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第二微珠。在某些实施方式中，分析物检测试剂盒可具有至少9个月的存储周期，例如至少1年或至少2年。
某些实施方式可以提供分析物检测试剂盒，包含：包含至少一个标签并能够结合分析物的第一试剂，共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂，包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的供体微珠和包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠。
某些实施方式可以提供可用于检测单一样品中的多个分析物的一系列互补分析物检测试剂盒，其包含至少一个第一试剂盒和一个第二试剂盒。第一试剂盒可以包括：包含至少一个标签并能够结合该多个分析物的第一分析物的第一试剂，共价结合多个肽标签并能够结合第一分析物的第二试剂，包含能够结合第一试剂盒的带标签的第一试剂的结合子的供体微珠和包含能够结合第一试剂盒的第二试剂上存在的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠。第二试剂盒可以包括：包含至少一个标签并能够结合该多个分析物的第二分析物的第一试剂，共价结合多个肽标签并能够结合第二分析物的第二试剂，包含能够结合第二试剂盒的带标签的第一试剂的结合子的供体微珠和包含能够结合第二试剂盒的第二试剂的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠。在某些实施方式中，常规结合子可被用于第一试剂盒和第二试剂盒。在某些实施方式中，常规供体微珠可被用于第一试剂盒和第二试剂盒。在某些实施方式中，常规肽标签和常规抗肽试剂可被用于第一试剂盒和第二试剂盒。在某些实施方式中，常规受体微珠可被用于第一试剂盒和第二试剂盒。
某些实施方式可以提供可用于检测相同样品中的多个分析物的一系列互补分析物检测试剂盒，其包含至少一个第一试剂盒和一个第二试剂盒。第一试剂盒可以包括：包含至少一个标签并能够结合该多个分析物的第一分析物的第一试剂，共价结合多个肽标签并能够结合第一分析物的第二试剂，包含能够结合第一试剂盒的带标签的第一试剂的结合子的供体微珠和包含能够结合第一试剂盒的第二试剂的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠。第二试剂盒可以包括：包含至少一个标签并能够结合该多个分析物的第二分析物的第一试剂，共价结合多个肽标签并能够结合第二分析物的第二试剂，包含能够结合第二试剂盒的带标签的第一试剂的结合子的供体微珠和包含能够结合第二试剂盒的第二试剂中存在的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠。在提供该系列互补分析物检测试剂盒的示例性实施方式中，来自第一试剂盒的分析物检测信号可以不同于来自第二试剂盒的分析物检测信号。
某些实施方式可以提供多重分析物检测试剂盒，包含：包含至少一个标签并能够结合第一分析物的第一试剂，共价结合多个肽标签并能够结合第一分析物的第二试剂，包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的供体微珠，包含能够结合第二试剂上存在的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠，包含至少一个标签并能够结合第二分析物的第三试剂，共价结合多个肽标签并能够结合第二分析物的第四试剂；包含能够结合带标签的第三试剂的结合子的另外的供体微珠和包含能够结合第四试剂上存在的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的另外的受体微珠。在某些实施方式中，供体微珠和另外的供体微珠是相同的微珠。
某些实施方式可以提供多重分析物检测试剂盒，包含：包含至少一个标签并能够结合第一分析物的第一试剂，共价结合多个肽标签并能够结合第一分析物的第二试剂；包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的供体微珠和包含能够结合第二试剂上存在的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠，包含至少一个标签并能够结合第二分析物的第三试剂，共价结合多个肽标签并能够结合第二分析物的第四试剂，包含能够结合带标签的第三试剂的结合子的另外的供体微珠和包含能够结合第四试剂上存在的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的另外的受体微珠。受体微珠和另外的受体微珠可以发射不同信号。
某些实施方式可以提供分析物检测试剂盒，包含：包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的第一微珠，能够共价结合第二试剂的多个肽标签，其中第二试剂能够结合特定分析物，和包含能够结合该能够共价结合第二试剂的多个肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第二微珠。
某些实施方式可以提供用于检测分析物的方法，包括：用第一试剂和第二试剂结合分析物。第一试剂可以包括一个或多个第一标签。第二试剂可以包括多个共价结合的肽第二标签。该方法可进一步包括：使一个或多个第一标签中的至少一个连接与第一微珠缀合的结合子，使多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合与第二微珠缀合的抗肽试剂，和通过测知连接的第一微珠和结合的第二微珠之间相互作用后的发射来检测分析物的存在。在某些实施方式中，该方法无需任何洗涤步骤。
某些实施方式可以提供用于检测分析物的方法，包括：使带标签的第一试剂与分析物结合并单独使带标签的第二试剂与分析物结合。带标签的第一试剂可以包括一个或多个第一标签。带标签的第二试剂可以包括多个共价结合的肽第二标签。该方法可进一步包括使一个或多个第一标签中的至少一个连接与第一微珠缀合的结合子，使多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合与第二微珠缀合的抗肽试剂，和通过测知由连接的第一微珠和结合的第二微珠之间的相互作用导致的发射来检测分析物的存在。
某些实施方式可以提供用于检测分析物的方法，包括：使第一试剂与分析物结合并单独使带标签的第二试剂与分析物结合。带标签的第二试剂可以包括多个共价结合的肽标签。该方法可进一步包括使第一试剂连接与第一微珠缀合的结合子，使该多个共价结合的肽标签中的至少一个结合与第二微珠缀合的抗肽试剂，和通过从结合的第二微珠测知由连接的第一微珠和所述结合的第二微珠之间的相互作用导致的发射来检测分析物的存在。
某些实施方式可以提供用于检测分析物的方法，包括：形成分析物复合物，其中分析物复合物包含：包含一个或多个第一标签并结合分析物的第一试剂；和共价结合多个肽标签并结合所述分析物的第二试剂。该方法可进一步包括：使一个或多个第一标签中的至少一个连接与第一微珠缀合的结合子，使多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合与第二微珠缀合的抗肽试剂，并通过测知连接的第一微珠和结合的第二微珠之间的相互作用所导致的发射来检测分析物的存在。
某些实施方式可以提供用于检测样品中特定分析物的存在或确定其不存在的方法，包括；将带标签的第一试剂和带标签的第二试剂混合入样品中。带标签的第一试剂可以能够结合该特定分析物。带标签的第二试剂可以包括多个共价结合的肽第二标签并可以能够单独结合该特定分析物。该方法可进一步包括：用第一微珠捕获带标签的第一试剂，使带标签的第二试剂结合第二微珠，以及通过测知捕获的第一微珠和所述结合的第二微珠之间的相互作用所导致的发射来检测该特定分析物的存在或确定其不存在。
某些实施方式可以提供在多个非分析物抗体存在下检测分析物的方法，包括：将第一试剂和带标签的第二试剂混合入包含分析物和该多个非分析物抗体的样品。带标签的第二试剂可以包括多个共价结合的肽第二标签。该方法可进一步包括：使第一试剂直接结合分析物，使带标签的第二试剂直接结合分析物，并将包含结合子的第一微珠和包含抗肽试剂的第二微珠引入该结合的分析物。结合子可优选结合第一试剂而不是非分析物抗体。抗肽试剂可以能够结合至少一个共价结合的肽第二标签。该方法可进一步包括：通过测知连接的第一微珠和结合的第二微珠之间的相互作用所导致的发射来检测分析物的存在。
某些实施方式可以提供在多个非分析物抗体存在下检测分析物的方法，包括：将第一试剂和带标签的第二试剂混合入包含分析物和该多个非分析物抗体的样品。带标签的第二试剂可以包括多个共价结合的肽第二标签。该方法可进一步包括：使第一试剂直接结合分析物，使带标签的第二试剂直接结合分析物，和将包含结合子的第一微珠和包含抗肽试剂的第二微珠引入该结合的分析物。结合子可优选结合第一试剂而不是非分析物抗体。抗肽试剂可以能够结合至少一个共价结合的肽第二标签。该方法可进一步包括：用结合子捕获带标签的第一试剂，并使多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合与第二微珠缀合的抗肽试剂，以及通过测知连接的第一微珠和结合的第二微珠之间的相互作用导致的发射来检测分析物的存在。
某些实施方式可以提供用于在样品中检测至少两种不同分析物的方法，包括：使第一供体试剂结合该至少两种分析物中的第一分析物，并单独使带标签的第一受体试剂结合第一分析物。带标签的第一受体试剂可以包括多个共价结合的肽标签。在某些进一步的实施方式中，该方法可进一步包括：使带标签的第二供体试剂结合该至少两种分析物中的第二分析物，并单独使第二受体试剂结合第二分析物，使第一供体试剂连接供体微珠上缀合的第一结合子，使第二供体试剂连接供体微珠上缀合的第二结合子，使该多个共价结合的肽标签中的至少一个结合第一受体微珠上缀合的抗肽试剂，使第二受体试剂结合第二受体微珠，并通过测知供体微珠及第一和第二受体微珠之间相互作用的产物来检测该至少两种不同分析物。在某些实施方式中，该方法可以包括：使带标签的第二供体试剂结合该至少两种分析物中的第二分析物，并单独使第二受体试剂结合第二分析物，其中第二受体试剂直接缀合第二受体微珠，使第一供体试剂连接供体微珠上缀合的第一结合子，并使第二供体试剂连接供体微珠上缀合的第二结合子，使该多个共价结合的肽标签中的至少一个结合第一受体微珠上缀合的抗肽试剂，并通过测知供体微珠及第一和第二受体微珠之间相互作用的产物检测该至少两种不同分析物。
某些实施方式可以提供用于检测分析物的至少两种表位的方法，包括：使带标签的供体试剂结合分析物，使带标签的供体试剂连接供体微珠上缀合的结合子，并使带标签的第一受体试剂结合分析物的第一表位，并单独使第二受体试剂结合分析物的第二表位。带标签的第一受体试剂可以包括多个共价结合的肽第一标签。在某些进一步的实施方式中，第二受体试剂可以结合第二受体微珠。在某些实施方式中，该方法可进一步包括：使该多个共价结合的肽标签中的至少一个结合第一受体微珠上缀合的抗肽第一试剂。在某些实施方式中，该方法可进一步包括：使该多个共价结合的肽标签中的至少一个结合第一受体微珠上缀合的抗肽第一试剂，使第二受体试剂结合第二受体微珠，并通过测知供体微珠及两种受体微珠之间相互作用的产物检测分析物的该至少两种表位。
某些实施方式可以提供检测复合物，包含：一个或多个分析物复合物，其各自包含：分析物，包含一个或多个第一标签并结合分析物的第一试剂和共价结合多个肽标签并单独结合所述分析物的第二试剂。该检测复合物可进一步包含：其上缀合有多个结合子的第一微珠，其中一个或多个分析物复合物中存在的一个或多个第一标签中的至少一个结合该多个结合子之一。该检测复合物可进一步包含：至少其上缀合有多个抗肽试剂的第二微珠，其中来自一个或多个分析物复合物的该多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合该多个抗肽试剂之一。在某些实施方式中，该至少第二微珠可以是多个微珠。在某些实施方式中，检测复合物可以包括第一微珠，多个分析物复合物结合第一微珠，且每个该多个分析物复合物结合单独的第二微珠。
某些实施方式可以提供多重分析物检测复合物，包含第一分析物复合物和第二分析物复合物。第一分析物复合物可以包含：第一分析物；结合第一分析物的带标签的供体试剂，该带标签的供体试剂包含一个或多个供体标签；和结合第一分析物的带标签的受体试剂，该带标签的受体试剂包含多个共价结合的肽标签。第二分析物复合物可以包括：第二分析物，结合第二分析物的另外的供体试剂和结合第二分析物的另外的受体试剂。该多重分析物检测复合物可进一步包含：其上缀合多个结合子的供体微珠，来自结合该多个结合子之一的每个第一和第二分析物复合物的一个或多个第一标签中的至少一个，和结合该多个结合子之一的另外的供体试剂。该多重分析物检测复合物可进一步包含：其上缀合多个抗肽试剂的第一受体微珠，结合该多个抗肽试剂之一的该多个共价结合的肽第二标签中的至少一个。该多重分析物检测复合物可进一步包含：结合另外的受体试剂的第二受体微珠。在某些实施方式中，第一受体微珠包含铕。在某些实施方式中，第二受体微珠包含铽。在某些实施方式中，该多重分析物检测复合物进一步包含第三受体微珠和第四受体微珠。在某些实施方式中，第三受体微珠包含红荧烯，且第四受体微珠包含钐。
某些实施方式可以提供多表位检测复合物，包括：分析物复合物，包含：分析物；结合分析物的带标签的供体试剂，包含一个或多个供体标签的带标签的供体试剂；结合分析物第一表位的带标签的受体试剂，该带标签的受体试剂包含多个共价结合的肽标签；和另外的结合分析物第二表位的受体试剂。该多重表位检测复合物可进一步包含：其上缀合多个结合子的供体微珠，其中该一个或多个供体标签中的至少一个结合该多个结合子之一。该多重表位检测复合物可进一步包含：其上缀合多个抗肽试剂的第一受体微珠，该多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合该多个抗肽试剂之一。该多重表位检测复合物可进一步包含：结合另外的受体试剂的第二受体微珠。
某些实施方式可以采用用于检测例如确定或定量疑似含有分析物的样品中的分析物的方法。一种方法可以包括在使得分析物(如果存在的话)引起光敏剂(例如第一微珠或供体微珠上的光敏剂)和光敏指示剂前体分子(例如，存在于第二微珠或受体微珠上的光敏指示剂前体分子)极为接近的条件下处理疑似含有分析物的样品。光敏剂产生单线态氧，其激活光敏指示剂前体以产生光敏指示剂分子。在用光照射时，光敏指示剂分子产生可被测量的光。光敏指示剂产生的光量与样品中分析物的量有关。还公开了组合物、试剂盒和化合物。
某些实施方式可以采用用于检测能够直接或间接与光敏剂和/或光敏指示剂前体结合的分析物的方法。在一个实施方式中，该方法包括第一步骤，其中组合提供：疑似含有分析物的样品；能够在激发态产生单线态氧的光敏剂，其中光敏剂与分析物偶联；和能够在与单线态氧反应时形成光敏指示剂的光敏指示剂前体，其中所述光敏指示剂前体与分析物偶联；然后通过用光照射激发光敏剂的第二步骤；以及测量光敏指示剂的荧光的最后一个步骤。光敏剂和光敏指示剂前体中的至少一种能够直接或间接结合分析物或与分析物互补的试剂。测得的荧光与样品中分析物的量有关。在另一个实施方式中，该方法包括第一步骤，其中在含水样品中混合：疑似含有分析物的样品；第一可悬浮颗粒，例如微珠或供体微珠，其包含能够在激发态产生单线态氧的光敏剂，其中所述颗粒具有与之结合的结合子；和第二可悬浮颗粒，例如微珠或受体微珠，其包含能够在与单线态氧反应时形成光敏指示剂的光敏指示剂前体，其中所述颗粒具有与之结合的第二结合子，例如抗肽试剂或链霉亲和素；照射样品以激发光敏剂产生单线态氧的第二步骤；以及测量光敏指示剂的荧光的最后一个步骤。每个结合子能够直接或间接地与分析物或与分析物互补的试剂(例如带标签的试剂)结合。测得的荧光与样品中分析物的量有关。
在另一个实施方式中，该方法可以包括第一步骤，其组合提供：疑似含有分析物的样品；能够在激发态产生单线态氧的光敏剂，其中所述光敏剂与结合子偶联；和悬浮颗粒，例如微珠或受体微珠，其具有与其结合的另外的结合子，例如抗肽试剂，其中可悬浮颗粒包含能够在与单线态氧反应时形成光敏指示剂的光敏指示剂前体；用光照射组合物以激发光敏剂的第二步骤；以及测量光敏指示剂的荧光的最后一个步骤。每种结合子能够直接或间接结合分析物或与分析物互补的试剂(例如带标签的试剂)。测得的荧光与样品中分析物的量有关。
某些实施方式可以提供用于检测分析物的方法。该方法可以包括第一步骤，其组合提供：疑似含有分析物的样品；能够在激发态产生单线态氧的光敏剂，其中所述光敏剂与第一结合子偶联；和能够在与单线态氧反应时形成光敏指示剂的光敏指示剂前体，其中所述光敏指示剂前体与第二结合子偶联；用光照射组合物以激发光敏剂的第二步骤；以及测量光敏指示剂的荧光的最后一个步骤。每种结合子都能够直接或间接地与分析物或与分析物互补的试剂结合。测得的荧光与样品中分析物的量有关。
在另一个实施方式中，分析物检测系统可以包含2种或更多种(例如3种或更多种，或4种或更多种)不同类型的受体微珠，每种受体微珠采用在不同(或可检测地不同)波长处发荧光的光敏指示剂前体。每种不同类型的受体微珠可以提供不同的光敏指示剂。不同类型的受体微珠可以包含例如能够与单线态氧反应以产生能够发荧光的光敏指示剂的红荧烯、铕(例如铕螯合物)、钐或铽。
某些实施方式可以提供一种用于减少制备能够检测不同分析物的多个多重微珠测定试剂盒所需的库存需求的方法，包括：插入能够通过化学转移相互作用激发的通用受体微珠，该通用受体微珠包含缀合的抗肽试剂，所述抗肽试剂能够结合肽标签的某种类型或氨基酸序列至所述多个测定试剂盒中的每一个中。
在某些上述实施方式中，当带标签的第一试剂结合到受体(或光敏指示剂前体)微珠时，抗肽第二试剂可以结合供体(或光敏)微珠。
附图详述
图1：实施例1和比较实施例A&B的α信号相对于pERK裂解物浓度的图。
图2：实施例2-3和比较实施例C&D的信号背景比相对于p-AKT S473裂解物浓度的图。
图3：实施例4-11的α信号相对于胰岛素浓度的图。
图4：实施例12的α信号相对于渥曼青霉素浓度的图。
图5：实施例13的α信号相对于渥曼青霉素浓度的图。
图6：实施例14的α信号相对于胰岛素浓度的图。
图7：单分析物，2表位靶向检测系统。
图8：双分析物靶向检测系统。
发明详述
某些实施方式提供了一种分析物检测系统，包括：i)结合第一微珠并能够结合分析物的第一试剂；ii)共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂；和iii)包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第二微珠。
某些实施方式提供了一种分析物检测系统，包括：i)能够结合分析物的第一试剂；ii)共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂；iii)能够结合第一试剂的第一微珠；和iv)包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第二微珠。
某些实施方式提供了一种分析物检测系统，包括：i)包含至少一个标签并能够结合分析物的第一试剂；ii)共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂；iii)包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的第一微珠；和iv)包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第二微珠。
某些实施方式提供了一种分析物检测系统，包括：i)共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第一试剂；ii)包含至少一个标签并能够结合分析物的第二试剂；iii)包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第一微珠；和iv)包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的第二微珠。
某些实施方式提供了一种分析物检测系统，包括：i)包含至少一个第一标签并能够结合分析物的第一试剂；ii)包含至少一个第二标签并能够结合分析物的第二试剂；iii)包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的第一微珠；和iv)包含结合子能够结合带标签的第二试剂的第二微珠。
在某些实施方式中，第一试剂(或前述任意实施方式的供体试剂)可以包括，例如，可以能够结合分析物的试剂，例如抗体，包括，例如，单克隆抗体、多克隆抗体、多价抗体、嵌合抗体、多特异性抗体或其抗体片段；适配子；affimer；蛋白；蛋白受体；蛋白受体；蛋白配体；包含例如免疫球蛋白融合伴侣、稳定受体或配体的融合伴侣或提供结合目标的融合伴侣的融合蛋白；抗生物素蛋白，链霉亲和素，抗生物素蛋白衍生物或链霉亲和素衍生物。
在某些实施方式中，第一试剂可以包括至少一个标签或多个标签。该可以连接、缀合或共价结合第一试剂的至少一个标签或多个标签可以是配体。在某些实施方式中，包含范围为1-50个标签的多个标签可以连接(例如缀合或共价结合)第一试剂，例如，包含范围为2-50个标签的多个标签，例如5-8、3-7、2-5或例如10-15、15-20或25-50个标签，可以连接、缀合或共价结合第一试剂。在某些实施方式中，不多于50个标签可以连接(例如缀合或共价结合)第一试剂，例如，不多于12个标签，例如不多于10、不多于8、不多于7、不多于6、不多于5或不多于3个标签，可以连接、缀合或共价结合第一试剂。在某些实施方式中，一个标签可以连接(例如缀合或共价结合)第一试剂，例如，2个标签，例如3、4、5、8、10或12个标签，可以连接、缀合或共价结合第一试剂。在某些实施方式中，带标签的第一试剂的多个标签中的至少一个是配体，或带标签的第一试剂的多个标签是配体标签，其中配体标签是生物素、生物素衍生物或肽标签。
可以连接、缀合或共价结合第一试剂的合适的配体可以包括但不限于生物素或其衍生物，例如1-[4-叠氮邻羟苯基氨基]-6-[生物素氨基]-己烷；补骨脂素-PEG3-生物素；或TFPA-PEG3-生物素；金属螯合物，例如铜、镍或钴；马来酸酐；马来酰亚胺；或肽标签，例如FLAG-标签。在某些实施方式中，带标签的第一试剂的多个标签中的至少一个是配体；或带标签的第一试剂的多个标签是连接、缀合或共价结合供体微珠(例如第一微珠)的结合子的表位，或包含连接、缀合或共价结合供体微珠(例如第一微珠)的结合子的表位。
在某些实施方式中，与第一试剂连接、缀合或共价结合的配体可包含肽标签、聚组氨酸标签(His-标签)、HA-标签、myc-标签、生物素或其衍生物包括例如亚氨基生物素、D-脱硫生物素、DSB-X-生物素、生物素二聚体或芳基锡烷基生物素三聚体。生物素及其衍生物可以通过生物素化与第一试剂结合。用于生物素化靶分子的生物素化试剂和方法在本领域中是已知的并且包括由Hermanson(Bioconjugate Techniques，Academic Press，2008)描述的那些。生物素化可以包括例如伯胺生物素化、巯基生物素化、羧基生物素化或糖蛋白生物素化。用上述配体标记蛋白、RNA、DNA和其它分子的方法在本领域中通常是已知的，并且可以包括由Wong(Chemistry of Protein Conjugation和Cross-Linking，CRC Press LLC，1991)描述的方法。在某些实施方式中，与第一试剂连接、缀合或共价结合的配体是肽标签或包含肽标签。
例如，在某些实施方式中，肽标签是FLAG-标签DYKDDDDK(SEQ ID NO：1)、具有氨基酸序列CDYKDDDDK(SEQ ID NO：8)的肽标签、FLAG八肽或多肽蛋白标签，其可以连接、缀合或共价结合第一抗体或添加至第一抗体，例如使用重组DNA技术连接、缀合或共价结合第一抗体。可以连接、缀合或共价结合第一抗体的合适的肽标签可以包括但不限于具有不多于100个氨基酸的氨基酸序列，例如，不多于50个氨基酸、不多于30个氨基酸、不多于25个氨基酸，例如不多于20、不多于15、不多于12、不多于10、不多于9或不多于8个氨基酸。在某些实施方式中，可以连接、缀合或共价结合第一抗体的肽标签可以具有范围为5-15个氨基酸的氨基酸序列，例如，范围为6-12个氨基酸，例如7-10或8-9个氨基酸。在某些实施方式中，肽标签具有氨基酸序列DYKDDDDK(SEQ ID NO：1)或CDYKDDDDK(SEQ ID NO：8)。在某些实施方式中，肽标签可以不是天然产生的。在某些实施方式中，肽标签可以不是在取样的生物体中天然产生的。
在某些实施方式中，第二试剂(或前述任意实施方式的受体试剂)可以包括，例如，可以能够结合分析物的试剂，例如抗体，包括，例如，单克隆抗体、多克隆抗体、多价抗体、嵌合抗体、多特异性抗体或其抗体片段；适配子；affimer；蛋白；蛋白受体；蛋白配体；或包含例如免疫球蛋白融合伴侣、稳定受体或配体的融合伴侣或提供结合目标的融合伴侣的融合蛋白。
在某些实施方式中，第二试剂可以包括至少一个共价结合第二试剂的肽标签或多个肽标签。在某些实施方式中，该共价结合第二试剂的多个肽标签可以是范围为1-15肽标签，例如共价结合第二试剂的2-9、5-8、3-7、2-5或10-15肽标签。在某些实施方式中，不多于15肽标签可以共价结合第二试剂，例如，不多于12肽标签，例如不多于10、不多于8、不多于7、不多于6、不多于5或不多于3肽标签，可以共价结合第二试剂。
可以共价结合第二试剂的合适的肽标签可以包括但不限于具有不多于30个氨基酸的氨基酸序列，例如，不多于25个氨基酸，例如不多于20、不多于15、不多于12、不多于10、不多于9或不多于8个氨基酸。在某些实施方式中，共价结合第二抗体的多个肽标签的至少一个、多个或每个可以具有范围为5-15个氨基酸的氨基酸序列，例如，范围为6-12个氨基酸，例如7-10或8-9个氨基酸。在某些实施方式中，共价结合第二抗体的多个肽标签的至少一个、多个或每个包含具有氨基酸序列DYKDDDDK(SEQ ID NO：1)的FLAG-标签、具有氨基酸序列CDYKDDDDK(SEQ ID NO：8)的肽标签、FLAG八肽或者是多肽蛋白标签。在某些实施方式中，例如，肽标签具有氨基酸序列DYKDDDDK(SEQ ID NO：1)或肽标签具有氨基酸序列CDYKDDDDK(SEQ ID NO：8)。在某些实施方式中，蛋白标签可以通过使用重组DNA技术共价结合第二抗体。在某些实施方式中，带标签的第二抗体的多个肽标签中的至少一个，或带标签的第二抗体的多个标签，是连接、缀合或共价结合受体微珠(例如第二微珠)抗肽抗体的表位，或包含连接、缀合或共价结合受体微珠(例如第二微珠)抗肽抗体的表位。
可以共价结合第二试剂的合适的肽标签可以包括但不限于FLAG-标签，例如DYKDDDDK(SEQ ID NO：1)；肽标签，具有氨基酸序列KRITVEEALAHPYLEQYYDPTDE(SEQ ID NO：2)；肽标签，具有氨基酸序列HHHHHH(SEQ ID NO：3)；肽标签，具有氨基酸序列EQKLISEEDL(SEQ ID NO：4)；肽标签，具有氨基酸序列YPYDVPDYA(SEQ ID NO：5)；肽标签，具有氨基酸序列YTDIEMNRLGK(SEQ ID NO：6)；肽标签，具有氨基酸序列QPELAPEDPED(SEQ ID NO：7)；肽标签，具有氨基酸序列CDYKDDDDK(SEQ ID NO：8)FLAG八肽；多肽蛋白标签；或不包括多个连续的具有相同电荷的氨基酸的多肽序列。在某些实施方式中，至少部分肽标签可以不是天然产生的。在某些实施方式中，肽标签不变性或失活其连接的肽带标签的试剂。在某些实施方式中，至少一个肽标签比FLAG-标签更亲水。在某些实施方式中，至少部分肽标签可以从其连接的肽带标签的试剂上通过特定蛋白酶肠激酶(肠肽酶)去除。在某些实施方式中，至少部分肽标签可以不是在取样的生物体中天然产生的。在某些实施方式中，肽标签可以包括不多于100个氨基酸的氨基酸序列，例如，不多于50、不多于30、不多于20、不多于15、不多于12、不多于10、不多于9或不多于8个氨基酸。在某些实施方式中，肽标签可以包括范围在4-100个氨基酸的氨基酸序列，例如范围为4-50、4-30、4-20、6-15、6-12、8-20、8-15或范围为8-12个氨基酸。在某些实施方式中，肽标签可以包括一个或多个上述特征，例如，肽标签可以包括不多于15个氨基酸，可以不是天然产生的和/或可以比FLAG标签更亲水。
在某些实施方式中，肽标签还可以连同其他亲和标签(例如多组氨酸标签(His-标签)、HA-标签或myc-标签)一起使用。在某些进一步的实施方式中，例如，连接、缀合或共价结合第一试剂的配体可以包括一个或多个上述标签，例如一个或多个肽标签也可以连同一个或多个多组氨酸标签(His-标签)、HA-标签或myc-标签一起使用。
用于与分析物结合的测定中的试剂可以用肽标记。例如，向第一试剂添加肽标签(如FLAG标签)允许第一试剂与针对肽标签(例如肽标签如FLAG-标签序列)的抗肽试剂结合和/或偶联。在某些实施方式中，肽标签例如FLAG标签也可以连同其他亲和标签例如多组氨酸标签(His-标签)、HA-标签或myc-标签一起使用。FLAG-标签是在科学文献中公开的全功能表位标签的第一个实例(参见Hopp等人，Bio/Technology 6：1204-1210，1988)。其结构已经被优化以与其所连接的蛋白相容，因为它比其他常见表位标签更亲水，因此不太可能使其所附加的蛋白变性或失活。另外，通过用特定的蛋白酶肠激酶(肠肽酶)处理，它可以很容易地从蛋白中去除。
除了包含在一个或多个位点处与诸如第一试剂或第二试剂的试剂连接、缀合或共价结合的配体之外，试剂还必须能够结合、捕获或连接分析物，例如与分析物的表位结合，例如分析物的磷酸表位。例如，在某些实施方式中，带标签的能够结合分析物的第一试剂第一表位，并且第二试剂能够结合分析物的第二表位。在某些实施方式中，分析物的第一表位和分析物的第二表位的表位类型是相同类型的表位，或者是两种不同类型的表位。在某些实施方式中，第一试剂和第二试剂是相同类型的试剂。在某些实施方式中，第一试剂和第二试剂是不同类型的抗体。在某些实施方式中，分析物的第一表位和/或分析物的第二表位是磷酸表位。在某些实施方式中，分析物的第一表位和分析物的第二表位不重叠但仍彼此紧密接近或不重叠并且彼此远离。在某些实施方式中，分析物的第一表位和分析物的第二表位不重叠并且足够远离每一个，使得第一和第二试剂之间不引起空间相互作用或基本上不引起空间相互作用。在某些实施方式中，表位分别与第一试剂和第二试剂结合。在某些实施方式中，所述试剂可以包含天然存在的抗体或突变抗体，或者可以是含有抗体或蛋白受体的结合片段的蛋白。
在某些实施方式中，分析物检测系统、试剂盒和使用其的方法使用至少两种类型的微珠，例如，供体微珠和受体微珠。例如，在某些实施方式中，分析物检测系统、试剂盒和使用其的方法使用两种或更多类型的微珠，包括供体第一微珠和受体第二微珠。在某些实施方式中，使用大约相同数量的供体和受体微珠。在某些实施方式中，受体微珠与供体微珠的比例范围为0.1-10，例如范围为0.1-0.2、0.2-0.5、0.5-1、1-2、2-5或5-10。在某些实施方式中，受体微珠与供体微珠的比例范围为0.1-10，例如范围为0.2-5、0.5-2、0.66-1.5、0.75-1.33、0.8-1.25、0.9-1.1或0.95-1.05。在某些实施方式中，分析物检测系统、试剂盒和使用其的方法使用多种微珠，例如，多种供体微珠和多种受体微珠，例如第一供体微珠、第二供体微珠和第一受体微珠；第一供体微珠、第一受体微珠和第二受体微珠；或第一供体微珠、第二供体微珠、第一受体微珠和第二受体微珠。
在某些实施方式中，分析物检测系统、试剂盒和使用其的方法使用至少三种类型的微珠，例如，至少一种供体微珠和至少第一受体微珠和第二受体微珠。在某些实施方式中，存在的至少一种供体微珠的数量相对于第一受体微珠的数量的比例范围为0.1-10，例如范围为0.1-0.2、0.2-0.5、0.5-1、1-2、2-5或5-10。
在某些实施方式中，存在的至少一种供体微珠的数量相对于第一受体微珠的数量的比例范围为0.1-10，例如范围为0.2-5、0.5-2、0.66-1.5、0.75-1.33、0.8-1.25、0.9-1.1或0.95-1.05。在某些实施方式中，存在的至少一种供体微珠的数量相对于第一受体微珠的数量的比例范围为1-3，例如范围为1.25-2.75、1.5-2.5、1.75-2.25或1.95-2.05。
在某些实施方式中，存在的至少一种供体微珠的数量相对于第二受体微珠的数量的比例范围为0.1-10，例如范围为0.1-0.2、0.2-0.5、0.5-1、1-2、2-5或5-10。在某些实施方式中，存在的至少一种供体微珠的数量相对于第二受体微珠的数量的比例范围为0.1-10，例如范围为0.2-5、0.5-2、0.66-1.5、0.75-1.33、0.8-1.25、0.9-1.1或0.95-1.05。在某些实施方式中，存在的至少一种供体微珠的数量相对于第二受体微珠的数量的比例范围为1-3，例如范围为1.25-2.75、1.5-2.5、1.75-2.25或1.95-2.05。在某些实施方式中，存在的至少一种供体微珠的数量相对于该至少第一受体微珠和第二受体微珠的总量(例如第一、第二、第三和第四受体微珠的总量)的比例范围为0.1-10，例如范围为0.1-0.2、0.2-0.5、0.5-1、1-2(例如2)、2-5或5-10。在某些实施方式中，存在的至少一种供体微珠的数量相对于该至少第一受体微珠和第二受体微珠的总量的比例范围为0.1-10，例如范围为0.2-5、0.5-2、0.66-1.5、0.75-1.33、0.8-1.25、0.9-1.1或0.95-1.05。在某些实施方式中，存在的至少一种供体微珠的数量相对于该至少第一受体微珠和第二受体微珠的总量的比例范围为1-3，例如范围为1.25-2.75、1.5-2.5、1.75-2.25或1.95-2.05。
可用于分析物检测系统、试剂盒及使用其的方法的合适的微珠包括但不限于乳胶珠、磁珠、掺杂有能够释放单线态氧的光敏剂的微珠、掺杂有能够与单线态氧反应以产生能够发荧光的光敏指示剂的光敏指示剂前体的微珠、能够被光刺激的微珠、能够发荧光的微珠或能够通过例如经由发射单线态氧的化学转移相互作用与第二微珠相互作用的微珠。参见例如美国专利号5,807,675，其在此全文引入作为参考。在某些实施方式中，微珠可以具有范围为20nm至20mm的直径，例如50-500nm、100-500nm、150-350nm、250-350nm，250-275nm、280-310nm、290-325nm、310-350nm或325-350nm。在某些实施方式中，当第一类型的微珠和第二类型的微珠彼此足够接近时，第一类型的微珠(例如供体微珠)可以能够通过化学转移相互作用与第二类型的微珠(例如受体微珠)发生反应，例如当微珠被配置在彼此15-250nm的范围内，例如，15-225nm、25-225nm、50-225nm、100-225nm、150-225nm、100-200nm、25-75nm、50-100nm、175-225nm、190-210nm、225-250nm或150-200nm，例如彼此在25nm内，例如彼此在50nm内、在75nm内、在100nm内、在125nm内、在150nm内、在175nm内、在180nm内、在190nm内、在200nm内、在210nm内、在220nm内、在230nm内或在240nm内。
可用于分析物检测系统、试剂盒及使用其的方法的合适的供体微珠包括但不限于乳胶珠、磁珠、掺杂有能够释放单线态氧的光敏剂的微珠、能够被光刺激的微珠或能够通过例如经由发射单线态氧的化学转移相互作用而相互作用的微珠。在某些实施方式中，分析物检测系统、试剂盒及使用其的方法可以利用两种或更多种类型的供体微珠，使得每种类型的供体微珠在被相同波长的光刺激时可以发射单线态氧。在某些实施方式中，分析物检测系统、试剂盒及使用其的方法可以利用两种或更多种类型的供体微珠，使得不同波长的光刺激不同类型的供体微珠以在受到刺激时发射单线态氧，用于例如，第一波长的光刺激第一类型的供体微珠以发射单态氧，并且第二波长的光刺激第二类型的供体珠以发射单线态氧。例如，在某些实施方式中，供体微珠可以在受到波长范围为250-1100nm的光的刺激时发射单线态氧，例如，受到波长范围为300-1000nm、620-700nm、620-650nm、640-700nm、650-700nm、670-690nm、680-700nm或660-680nm的光的刺激，例如受到波长为620nm、630nm、640nm、650nm、660nm、670nm、675nm、680nm、685nm、690nm或700nm的光的刺激。例如，在某些实施方式中，分析物检测系统、试剂盒和使用其的方法可以利用两种或更多种类型的供体微珠，使得所使用的每种类型的供体微珠在被相同波长的光刺激时可以发射单线态氧，例如波长在650-700nm范围内的光，例如680nm波长的光。
可用于分析物检测系统、试剂盒及使用其方法的合适受体微珠珠包括但不限于乳胶珠、磁珠、掺杂有能够与单线态氧反应以产生能够发荧光的光敏指示剂的光敏指示剂前体(例如红荧烯、铕、铕螯合物、钐或铽)的微珠、能够被光刺激的微珠、能够发荧光的微珠或能够通过化学转移相互作用(例如通过发射单线态氧)进行相互作用的微珠。在某些实施方式中，当紧密接近所述供体微珠时，受体微珠响应于与供体微珠的化学转移相互作用(例如通过供体微珠发射单线态氧)发射光，例如荧光。例如，受体微珠，例如与在分析物检测系统、试剂盒及使用其的方法中使用的第二试剂共价结合的多个肽标签中的至少一个的结合相关的微珠，可以包含与单线态氧反应形成光敏指示剂的光敏指示剂前体。在某些实施方式中，分析物检测系统、试剂盒和使用其的方法可以利用两种或更多种类型的受体微珠，使得当受到照射时，不同类型的受体微珠在不同的波长下发射荧光，例如，当受到照射时，第一类型的受体微珠在第一波长发射荧光，以及当受到照射时，第二类型的受体微珠在第二波长发射荧光。在某些实施方式中，受体微珠可以被波长范围为250-1100nm的光照射，例如，被波长范围为300-1000nm、450-950nm、360-441nm、620-700nm、600-630nm、620-650nm、640-700nm、650-700nm、670-690nm、680-700nm或660-680nm的光照射，例如被波长620nm、630nm、640nm、650nm、660nm、670nm、675nm、680nm、685nm、690nm或700nm的光照射。
在某些实施方式中，当受到照射时，受体微珠上的光敏指示剂可以在500-625nm的波长范围内发荧光(即，发射荧光)，例如在波长范围525-575nm、525-550nm、540-560nm、540-550nm、590-620nm、600-625nm或610-620nm内发荧光，例如在520nm、530nm、535nm、540nm、545nm、550nm、555nm、560nm、600nm、605nm、610nm、615nm、620nm或625nm的波长发荧光。例如，当受到照射时，第一类型的受体微珠可以在范围为525-575nm的第一波长发荧光，例如在545nm的第一波长发荧光，以及当受到照射时，第二类型的受体微珠可以在范围为590-625nm的第二波长发荧光，例如在615nm的第二波长发荧光。
包被、连接、缀合或结合微珠(例如，第一微珠，例如供体微珠)的合适的结合子可以包括但不限于抗体，包括，例如，单克隆抗体、多克隆抗体、多价抗体、嵌合抗体、多特异性抗体或其抗体片段；适配子；affimer；蛋白；蛋白受体；蛋白受体；蛋白配体；或包含例如免疫球蛋白融合伴侣、稳定受体或配体的融合伴侣或提供结合目标的融合伴侣的融合蛋白；抗生物素蛋白，链霉亲和素，抗生物素蛋白衍生物或链霉亲和素衍生物。抗生物素蛋白或链霉亲和素的衍生物是本领域已知的，并可包括被修饰以增强其与修饰和/或未修饰的固体基质或配体的结合亲和力的抗生物素蛋白或链霉亲和素形式。例如，链霉亲和素可以被修饰以在分子上添加一个或多个胺基基团、组氨酸残基或巯基基团。在某些实施方式中，链霉亲和素衍生物可以包括中性抗生物素蛋白、captavidin或链霉亲和素变体(例如H127C或S139C)。在某些实施方式中，疏水性或亲水性结合子可分别被动地结合至疏水性或亲水性固体基质。例如，链霉亲和素(或其衍生物)可以被动地结合到疏水性固体基质上。在某些实施方式中，固体基质可以包含有助于结合子与固体基质共价结合的接头。例如，接头可以包含谷胱甘肽、马来酸酐、金属螯合物或马来酰亚胺。然后可以通过接头将结合子结合到固体基质上。
在某些实施方式中，结合子是对与抗体(例如第一抗体)连接、缀合或共价结合的至少一种配体具有亲和力的抗体。例如，另外的抗体结合子可以具有对连接、缀合或共价结合抗体(例如第一抗体)的多个配体中的至少一个或每一个的结合的选择性亲和力。例如，在某些实施方式中，所述结合子可以是另一种抗体，例如对与第一抗体连接、缀合或共价结合的至少一个肽标签或多个肽标签具有选择性亲和力的第二抗肽抗体。
在某些实施方式中，结合子是包被在第一微珠上的蛋白A和/或蛋白G。例如，在某些实施方式中，第一微珠可以在溶液中用适于连接抗体的蛋白A和/或蛋白G包被。然而，在某些实施方式中，蛋白质A和/或蛋白质G可能在含有内源性抗体(例如血清或血浆)的样品中提供降低的效用，因为这些将阻断期望试剂的结合。
在某些实施方式中，包被、连接、缀合或结合微珠(例如，第一微珠或第二微珠，例如受体微珠)的抗肽试剂可以包括但不限于包含对共价结合第二试剂的肽标签，例如具有氨基酸序列DYKDDDDK(SEQ ID NO：1)或CDYKDDDDK(SEQ ID NO：8)的肽标签的氨基酸序列或其部分高度选择性的结合区域的抗体。例如，抗肽试剂的结合区域可以与至少60％的共价结合第二试剂肽标签的氨基酸序列(例如70％、80％、90％、95％或100％的共价结合第二试剂肽标签的氨基酸序列)是高度选择性的，。
在一些实施方式中，可用封闭剂处理第一微珠或第二微珠，所述封闭剂非特异性地结合并饱和结合位点，以防止不需要的组分(例如分析物，存在于分析物中的非分析物抗体样品)直接结合第一或第二微珠上的过量位点。封闭剂的例子可以包括例如明胶、BSA、蛋清蛋白、酪蛋白和脱脂乳。在一些实施方式中，固体基质和/或结合的固定剂可以在加入捕获剂之前或与加入捕获剂同时用阻断剂处理。
某些实施方式提供用于检测分析物的方法，包括：i)使分析物结合第一试剂和第二试剂，其中：a)第一试剂包含一个或多个第一标签；和b)第二试剂包含多个共价结合的肽第二标签；ii)使一个或多个第一标签中的至少一个连接与第一微珠缀合的结合子；iii)使多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合与第二微珠缀合的抗肽试剂；和iv)通过测知连接的第一微珠和结合的第二微珠之间的相互作用所导致的发射来检测分析物的存在。
在某些实施方式中，分析物结合第一试剂和第二试剂形成分析物复合物，然后得到的分析物复合物被固定于两种不同类型的微珠，包含第一微珠，例如受体微珠和第二微珠，例如供体微珠。在某些实施方式中，第一微珠是受体微珠，第二微珠是供体微珠。例如，在某些实施方式中，该方法可进一步包括使一个或多个第一标签中的至少一个连接与第一微珠缀合的结合子，并使多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合与第二微珠缀合的抗体。得到的分析物复合物，其现在连接第一微珠并结合第二微珠，可通过测知由连接的第一微珠和结合的第二微珠之间的相互作用所导致的发射来用于检测分析物的存在。例如，当用光照射时，第一微珠，其现在通过连接和结合的分析物复合物而紧密临近第二微珠并具有在微珠内包含的光敏剂，可发射单线态氧。由第一微珠产生的单线态氧可由于其紧密的临近而与第二微珠内包含的光敏指示剂前体反应，以产生能够在受到光照射的时候发射荧光的光敏指示剂。
在某些实施方式中，检测方法还可以包括通过用光照射激发包含在供体微珠内或包被在供体微珠上的光敏剂，以产生与包含在受体微珠内或包被在受体微珠上的光敏指示剂前体反应的单线态氧，以产生所述在受体微珠内或受体微珠上的光敏指示剂。在某些实施方式中，检测方法可以进一步包括照射在受体微珠内或受体微珠上产生的光敏指示剂并测量由所述光敏指示剂发射的荧光。
某些实施方式包括分散在样品中的至少一种(例如多种)检测复合物，以及用于制备其的方法和试剂盒，其中所述至少一种检测复合物包含(1)分析物复合物，例如夹心复合物，其包含与第一试剂结合的分析物，所述第一试剂包含一个或多个第一标签并且单独结合至与多个肽共价结合的第二试剂，例如，与其直接结合；(2)其上缀合有多个结合子的第一微珠，其中从所述一个或多个分析物复合物存在的所述一个或多个第一标签中的至少一个结合该多个结合子之一；和(3)具有缀合于其上的多种抗肽试剂(例如多种抗肽抗体)的第二微珠，其中来自所述一种或多种分析物复合物的所述多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合该多个抗肽试剂之一；其中第一微珠能够与第二微珠发生化学转移相互作用。在某些实施方式中，所述至少一种检测复合物还包含至少第二分析物复合物，例如2-5、2-3、2-4或3-5个分析物复合物。例如，可能有2-5个分析物复合物结合在第一微珠和第二微珠之间。某些实施方式包括用合适波长的光照射至少一部分检测复合物中的供体微珠，以触发检测复合物中至少一部分受体微珠的激发，并且在照射至少一部分受体微珠时，至少一部分受体微珠发荧光。在某些实施方式中，该方法还包括检测受体微珠发射的光。
某些实施方式提供检测样品中特定分析物的存在或确定样品中特定分析物不存在的方法，可包括在样品中存在多种非分析物抗体的情况下用两种微珠检测分析物，可以包括检测样品中的至少两种不同的分析物，或者可以包括检测样品中分析物的至少两种表位。例如，在某些实施方式中，当照射第一微珠和第二微珠时感测不到检测范围内的荧光时，确定不存在特定分析物。
在某些实施方式中，一种方法可以包括在样品中提供分析物，所述样品含有样品中(例如生物样品中)的多种组分，例如两种不同类型的分析物或多种分析物类型。例如，在某些实施方式中，待检测的特定分析物可以包含在也含有非分析物抗体的样品内。在某些实施方式中，结合子优先与非分析物抗体上的第一试剂结合，并且抗肽试剂优先结合与多个肽标签共价结合的第二试剂。在某些实施方式中，第一试剂可以与分析物上的一个表位结合，并且与多个肽标签共价结合的第二试剂可以结合相同分析物上的第二表位。
在某些实施方式中，所述方法可以包括混合样品、带标签的第一试剂、带标签的第二试剂和至少一种或多种第二微珠，随后添加至少一种或多种第一微珠，例如供体微珠。在某些实施方式中，所述方法可以包括将样品、带标签的第一试剂、带标签的第二试剂和至少一种或多种第二微珠孵育约1小时，随后添加至少一种或多种第一微珠，例如供体微珠，并进一步孵育约1小时。在某些实施方式中，将至少一种或多种第一微珠和至少一种或多种第二微珠添加至混合物可以同时或顺序地进行。在某些实施方式中，在第二微珠之前、同时或之后将第二微珠添加到混合物中，并将所得混合物孵育一段时间，例如少于30分钟、少于一小时、大约一小时、超过一小时、少于两小时。在某些实施方式中，该方法包括在存在或不存在第一微珠的条件下将第二微珠与孵育的混合物混合，并将所得混合物孵育一段时间，例如少于30分钟、少于一次小时、大约一小时、超过一小时、少于两小时。在某些实施方式中，在第二微珠之前、同时或之后将第一微珠添加到混合物中，并将所得混合物孵育一段时间，例如少于30分钟、少于一次小时、大约一小时、超过一小时、少于两小时。在某些实施方式中，该方法包括在存在或不存在第二微珠的条件下将第一微珠与孵育的混合物混合，并将所得混合物孵育一段时间，例如少于30分钟，少于一次小时，大约一小时，超过一小时，少于两小时。在某些实施方式中，在存在或不存在第一微珠的情况下将样品、带标签的第一试剂、带标签的第二试剂和第二微珠孵育一段时间，例如约1小时、少于一小时、多于一小时、少于两小时或大约两小时。
在某些实施方式中，连接、缀合或共价结合至第一微珠的结合子的浓度至少与混合物中带标签的第一试剂的浓度一样大。在某些实施方式中，连接、缀合或共价结合至第一微珠的结合子的浓度比混合物中带标签的第一试剂的浓度大至少2倍，例如，结合子的浓度至少为比混合物中带标签的第一试剂的浓度大3倍，例如至少4倍、至少5倍、至少7倍、至少9倍、或至少10倍。在某些实施方式中，与第一微珠连接、缀合或共价结合的结合子的浓度在混合物中带标签的第一试剂浓度的2-15倍的范围内，例如，结合子浓度比混合物中带标签的第一试剂的浓度高2-10倍，例如2-8倍、2-5倍、4-12倍、3-9倍、4-8倍，或者10-15倍。
在某些实施方式中，连接、缀合或共价结合第一微珠的结合子可以相对于混合物中带标签的第一试剂以重量：重量至少100:1、125:1、150:1、200:1、250:1、300:1、400:1、500:1、750:1或1000:1的比例存在。在某些实施方式中，结合子可以相对于混合物中带标签的第一试剂以重量：重量范围为100:1-1000:1、100:1-500:1、100:1-300:1、250:1-300:1、300:1-1000:1、300:1-500:1、300:1-400:1、300:1-350:1、325:1-375:1、300:1-310:1、310:1-320:1、320:1-330:1、330:1-340:1、340:1-350:1或350:1-360:1的比例存在。
在某些实施方式中，连接、缀合或共价结合第一微珠的结合子可以相对于混合物中带标签的第一试剂以摩尔：摩尔至少100:1、125:1、150:1、200:1、250:1、300:1、400:1、500:1、750:1或1000:1的比例存在。在某些实施方式中，结合子可以相对于混合物中带标签的第一试剂以摩尔：摩尔范围为100:1-1000:1、100:1-500:1、100:1-300:1、250:1-300:1、300:1-1000:1、300:1-500:1、300:1-400:1、300:1-350:1、325:1-375:1、300:1-310:1、310:1-320:1、320:1-330:1，330:1-340:1，340:1-350:1或350:1-360:1的比例存在。
在某些实施方式中，抗肽试剂(例如连接、缀合或共价结合第二微珠的抗肽试剂)的浓度至少与混合物中带标签的第一试剂的浓度一样大。在某些实施方式中，抗肽试剂(例如连接、缀合或共价结合第二微珠的抗肽试剂)的浓度是混合物中带标签的第二试剂的浓度的至少2倍，例如，抗肽试剂的浓度是混合物中带标签的第二试剂的浓度的至少3倍，例如至少4倍、至少5倍、至少7倍、至少9倍或至少10倍。在某些实施方式中，抗肽试剂(例如连接、缀合或共价结合第二微珠的抗肽试剂)的浓度范围是混合物中带标签的第二试剂的浓度的2-15倍，例如，抗肽试剂的浓度范围为混合物中带标签的第二试剂的浓度2-10倍，例如2-8倍、2-5倍、4-12倍、3-9倍、4-8倍或10-15倍。
在某些实施方式中，抗肽试剂可以相对于混合物中带标签的第二试剂以重量：重量至少100:1、125:1、150:1、200:1、250:1、300:1、400:1、500:1、750:1或1000:1的比例存在。在某些实施方式中，结合子可以相对于混合物中带标签的第二试剂以重量：重量范围为100:1-1000:1、100:1-500:1、100:1-300:1、250:1-300:1、300:1-1000:1、300:1-500:1、300:1-400:1、300:1-350:1、325:1-375:1、300:1-310:1、310:1-320:1、320:1-330:1、330:1-340:1、340:1-350:1或350:1-360:1的比例存在，。
在某些实施方式中，抗肽试剂可以相对于混合物中带标签的第二试剂以摩尔：摩尔至少100:1、125:1、150:1、200:1、250:1、300:1、400:1、500:1、750:1或1000:1的比例存在。在某些实施方式中，结合子可以相对于混合物中带标签的第二试剂以摩尔：摩尔范围为100:1-1000:1、100:1-500:1、100:1-300:1、250:1-300:1、300:1-1000:1、300:1-500:1、300:1-400:1、300:1-350:1、325:1-375:1、300:1-310:1、310:1-320:1、320:1-330:1、330:1-340:1、340:1-350:1或350:1-360:1的比例存在。
在某些实施方式中，抗肽试剂(例如连接、缀合或共价结合第一微珠或第二微珠的抗肽试剂)的浓度低于5000纳克抗肽试剂每微升溶液，例如，低于2500ng/ml、低于2000ng/ml、低于1500ng/ml、低于1000ng/ml、低于500ng/ml、低于400ng/ml、低于300ng/ml、低于250ng/ml、低于200ng/ml、低于100ng/ml或低于50ng/ml。在某些实施方式中，抗肽试剂(例如连接、缀合或共价结合第二微珠的抗肽试剂)的浓度范围为1-500ng/ml，例如，1-400ng/ml、1-300ng/ml、1-250ng/ml、1-200ng/ml、1-100ng/ml或1-50ng/ml。在某些实施方式中，抗肽试剂(例如连接、缀合或共价结合第一微珠或第二微珠的抗肽试剂)的浓度为多达10μg/ml的浓度，例如，多达1μg/ml、5μg/ml或8μg/ml。
在某些实施方式中，分析物的浓度范围为1-100ng/ml，例如，1-50ng/ml、1-25ng/ml、10-50ng/ml、1-10ng/ml。在某些实施方式中，分析物的浓度低于1ng/mL。在某些实施方式中，分析物的浓度高于50ng/mL。在某些实施方式中，分析物的浓度为100ng/ml或更低、10ng/ml或更低、1ng/ml或更低、100pg/ml或更低或10pg/ml或更低、1pg/ml或更低、100fg/ml或更低、10fg/ml或更低或1fg/ml或更低。在某些实施方式中，分析物的浓度高于10ng/ml、高于1ng/ml、高于100pg/ml或高于10pg/ml、高于1pg/ml、高于100fg/ml、高于10fg/ml或高于1fg/ml。在某些实施方式中，分析物的浓度为1fg/ml-100ng/ml、1fg/ml-10ng/ml、1fg/ml-1ng/ml、10fg/ml-100ng/ml、10fg/ml-10ng/ml、10fg/ml-1ng/ml、100fg/ml-100ng/ml、100fg/ml-10ng/ml、100fg/ml-1ng/ml、1pg/ml-100ng/ml、1pg/ml-10ng/ml或1pg/ml-1ng/ml。
在某些实施方式中，结合子与第一试剂结合的亲和力或速率常数与结合子与任意非分析物抗体结合的亲和力或速率常数大致相同。在某些实施方式中，结合子与第一试剂结合的亲和力或速率常数至少2倍于结合子与任意非分析物抗体结合的亲和力或速率常数。例如，结合子与第一试剂结合的亲和力或速率常数至少5倍于、例如至少10倍于、至少25倍于、至少50倍于、至少75倍于、或至少100倍于结合子与任意非分析物抗体结合的亲和力或速率常数。
在某些实施方式中，抗肽试剂与带标签的第二试剂结合的亲和力或速率常数与结合子与任意非分析物抗体结合的亲和力或速率常数大致相同。在某些实施方式中，抗肽试剂与带标签的第二试剂结合的亲和力或速率常数至少2倍于结合子与任意非分析物抗体结合的亲和力或速率常数。例如，抗肽试剂与带标签的第二试剂结合的亲和力或速率常数至少5倍于、例如至少10倍于、至少25倍于、至少50倍于、至少75倍于或至少100倍于结合子与任意非分析物抗体结合的亲和力或速率常数。
在某些实施方式中，抗肽试剂与带标签的第二试剂结合的解离常数与结合子与任意非分析物抗体结合的解离常数大致相同。在某些实施方式中，抗肽试剂与带标签的第二试剂结合的解离常数比结合子与任意非分析物抗体结合的解离常数小至少2倍。例如，抗肽试剂与带标签的第二试剂结合的解离常数比结合子与任意非分析物抗体结合的解离常数小至少5倍，例如小至少10倍、小至少25倍、小至少50倍、小至少75倍或小至少100倍。
在某些实施方式中，将多个带标签的第一试剂和/或多个第二试剂储存于预设温度，例如，4℃、室温、低于10℃、低于20℃或低于30℃。
在某些实施方式中，带标签的第一试剂可以储存在或引入第一液体缓冲液中，并且带标签的第二试剂可以储存在或引入第二液体缓冲液中。
在某些实施方式中，微珠，例如第一微珠或第二微珠可以在低光条件下储存，例如在密封容器中储存。在某些实施方式中，供体微珠可以在低光条件下储存，例如密封容器中储存。
实施例
实施例1–使用肽/抗肽和直接缀合系统进行分析物检测的比较。
使用生物素化的抗-pERK IgG在可比较的条件下进行了一系列pERK分析物检测实验。在实施例1(肽/抗肽实验)中，用多个氨基酸肽标签，特别的CDYKDDDDK(SEQ ID NO：8)对抗全ERK IgG进行标记，并用鼠单克隆IgG1抗肽试剂缀合受体微珠。在比较实施例A和B中，抗全ERK IgG直接缀合到受体微珠上。抗全ERK IgG的浓度注于表1，所有其他变量保持恒定。
表1
孵育后，使生物素化的抗-pERK IgG结合链霉亲和素包被的光敏剂供体微珠，而在实施例1中，带标签的抗全ERK IgG另外通过鼠单克隆IgG1抗肽试剂结合至光敏性前体受体微珠。对每个实施例检测到的信号的量示于图1。
实施例2-3–非分析物抗体的效果。
在不存在任何非分析物抗体的情况下对血清活化的HEK-293细胞的蛋白裂解物样品进行一系列实验，并且再次在非分析物兔抗体存在下以固定浓度10mg/ml并在相当的条件和浓度下分析p-AKT 1/2/3(Ser473)分析物。使用肽标记的抗体与受体微珠上缀合的互补抗体进行实施例2(没有非分析物抗体)和3(掺杂非分析物抗体)，比较实施例C(没有非分析物抗体)和D(掺杂非分析物抗体)重复相同的测定，但使用未标记的抗体和蛋白质A包被的受体微珠。记录的信号与背景信号的比例在图2中给出。
实施例4-11–多重分析物的检测。
通过将部分样品递送至测定板的各个培养孔并使用生物素化的抗体和肽标记的抗体结合分析物，从单一裂解物样品中分析一式三份的磷蛋白和总蛋白分析物。表2列出了实施例4-11每一个中检测到的蛋白。
表2
在孵育中，用多个标签(每个标签都具有氨基酸序列CDYKDDDDK(SEQ ID NO：8))标记的肽标记的抗体结合与光敏性前体受体微珠缀合的鼠单克隆IgG1抗肽抗体，而生物素化的抗体结合链霉亲和素包被的光敏剂供体微珠。
为了产生裂解物样品的细胞，将个体的MCF-7细胞以200K细胞/ml接种于200mlMEM+10％FCS中过夜。然后使用MEM+0％FCS使细胞血清饥饿2小时，并用剂量范围的胰岛素刺激30分钟。每个实施例4-11中检测的信号的量见于图3。
实施例12–多表位的多重检测。
如下制备细胞裂解物：将MCF-7细胞以200K/ml在200mL MEM+10％FCS中接种过夜。然后将细胞用不同浓度的渥曼青霉素在MEM+1％FBS中处理2小时，然后用剂量范围的胰岛素刺激30分钟，然后裂解。
将细胞裂解物在具有表3中列出的组分的多孔板中孵育以检测AKT(pS473)和总AKT1蛋白靶标。
表3
使用酶标仪在如图4所示的指定的渥曼青霉素浓度下检测孵育的细胞裂解物中AKT(pS473)和总AKT1的检测信号。
实施例13–多分析物的多重检测。
如下制备细胞裂解物：将MCF7细胞以40K/ml在10％胎牛血清的96孔板中在37℃和95％空气/5％CO2下接种过夜。然后将细胞用图5所示浓度的渥曼青霉素处理2小时，并用剂量范围的胰岛素刺激10分钟，然后裂解。
将细胞裂解物在具有表4中列出的组分的多孔板中孵育以检测裂解物AKT(pS473)和ERK(pT202Y204)蛋白靶标。
表4
使用酶标仪检测孵育的细胞裂解物中的AKT(pS473)和ERK(pT202Y204)检测信号，如图5所示。
实施例14–多分析物的多重检测。
如下制备细胞裂解物：将MCF7细胞以40K/ml在10％胎牛血清的96孔板中在37℃和95％空气/5％CO2下接种过夜。然后将细胞血清饥饿2小时，并用图6所示浓度的胰岛素处理10分钟，然后裂解。
将细胞裂解物在具有表4中列出的组分的多孔板中孵育以检测裂解物AKT(pS473)和ERK(pT202Y204)蛋白靶标。
使用酶标仪检测孵育的细胞裂解物中的AKT(pS473)和ERK(pT202Y204)检测信号，如图6所示。
预测实施例：
如图7所示，单目标分析物检测系统包含与针对靶蛋白上的磷酸化位点的抗体直接缀合的AlphaLISA 615受体微珠TM，其中AlphaPlex 545受体微珠TM用CaptSure试剂TM包被，其结合CaptSure标记的抗总抗体，并且其中所述Alpha供体微珠结合所述生物素化的抗总抗体。
如图8所示，双目标分析物检测系统包含AlphaLISA 615受体微珠TM和AlphaPlex545受体微珠TM，其各自通过与微珠偶联的特异性抗体结合不同的蛋白，其中一个受体微珠将直接缀合到抗体上，其他将通过CaptSure试剂TM结合抗体，并且其中连接的类型将取决于所使用的特定AlphaPlex SureFire Ultra试剂盒。
本说明书中提及的所有出版物和专利申请通过引用并入本文，其程度如同每个单独的出版物或专利申请被具体地和单独地指示通过引用并入。
尽管在此已经示出和描述了优选实施方式，但是对于本领域技术人员而言显而易见的是，这样的实施例仅作为示例提供。意图是以下权利要求限定本发明的范围，并且由此涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等同物。
示例性实施方式
在一个实施方式中，分析物检测系统包含：
i)包含至少一个标签并能够结合分析物的第一试剂；
ii)共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂；
iii)包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的第一微珠；和
iv)包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第二微珠。
在一个实施方式中，分析物检测系统包含：
i)能够结合分析物的多个第一抗体，其中每个第一抗体包含：
a)能够结合分析物的第一抗原性方面的第一区域；和
b)多个第一标签；
ii)能够单独结合分析物的多个第二抗体，其中每个该多个第二抗体包含：
a)能够结合分析物的第二抗原性方面的第二区域；和
b)多个共价结合的肽第二标签；
iii)包含多个结合子缀合于其上的第一微珠，其中该多个结合子中的至少一个能够选择性结合该多个第一标签中的至少一个；和
iv)包含多个抗肽抗体缀合于其上的第二微珠，其中：
a)至少一个抗肽抗体能够选择性结合该多个共价结合的肽第二标签中的至少一个；和
b)当第一微珠和第二微珠被彼此置于某特定距离之内时，第二微珠能够可检测地于第一微珠相互作用。
在一个实施方式中，分析物检测系统包含：
i)多个能够结合分析物的第一试剂，其中每个该多个第一试剂包含：
a)能够结合分析物的第一抗原性方面的第一区域；和
b)多个第一标签；
ii)多个能够单独结合分析物的第二试剂，其中每个该多个第二试剂包含：
a)能够结合分析物的第二抗原性方面的第二区域；和
b)多个共价结合的肽第二标签；
iii)包含多个结合子缀合于其上的第一微珠，其中该多个结合子中的至少一个能够选择性结合该多个第一标签中的至少一个；和
iv)包含多个抗肽试剂缀合于其上的第二微珠，其中：
a)至少一个抗肽试剂能够选择性结合该多个共价结合的肽第二标签中的至少一个；和
b)当第一微珠和第二微珠被彼此置于某特定距离之内时第二微珠能够可检测地与第一微珠相互作用。
在一个实施方式中，检测至少两种分析物的系统包含：
i)能够结合第一分析物的供体抗体；
ii)与供体微珠缀合的结合子，所述结合子能够结合供体抗体；
iii)能够结合第二分析物的带标签的另外的供体抗体；
iv)另外的与供体微珠缀合的结合子，所述另外的结合子能够结合带标签的另外的供体抗体；
v)能够结合分析物的带标签的受体抗体，该带标签的受体抗体包含多个共价结合的肽标签；和
vi)缀合抗第一肽抗体的第一受体微珠，该抗第一肽抗体能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个；
vii)能够结合第二分析物的另外的受体抗体；和
viii)能够结合另外的受体抗体的第二受体微珠。
在一个实施方式中，检测至少两种分析物的系统包含：
i)能够结合第一分析物的供体试剂；
ii)与供体微珠缀合的结合子，所述结合子能够结合供体试剂；
iii)能够结合第二分析物的带标签的另外的供体试剂；
iv)另外的与供体微珠缀合的结合子，所述另外的结合子能够结合带标签的另外的供体试剂；
v)能够结合分析物的带标签的受体试剂，该带标签的受体试剂包含多个共价结合的肽标签；和
vi)缀合抗第一肽试剂的第一受体微珠，抗第一肽试剂能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个；
vii)能够结合第二分析物的另外的受体试剂；和
viii)能够结合另外的受体试剂的第二受体微珠。
在一个实施方式中，分析物检测试剂盒包含：
i)包含至少一个标签并能够结合分析物的第一试剂；
ii)共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂；
iii)包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的第一微珠；和
iv)包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第二微珠。
在一个实施方式中，分析物检测试剂盒包含：
i)包含至少一个标签并能够结合分析物的第一试剂；
ii)共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂；
iii)包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的供体微珠；和
iv)包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠。
在一个实施方式中，可用于检测相同样品中的第一和第二分析物的一系列的两种互补分析物检测试剂盒包含：
A)第一试剂盒，包含：
i)包含至少一个标签并能够结合第一分析物的第一试剂；
ii)共价结合多个肽标签并能够结合第一分析物的第二试剂；
iii)包含能够结合第一试剂盒的带标签的第一试剂的结合子的供体微珠；和
iv)包含能够结合第一试剂盒的第二试剂上存在的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠，和
B)第二试剂盒，包含：
i)包含至少一个标签并能够结合第二分析物的第一试剂；
ii)共价结合多个肽标签并能够结合第二分析物的第二试剂；
iii)包含能够结合第二试剂盒的带标签的第一试剂的结合子的供体微珠；和
iv)包含能够结合第二试剂盒的第二试剂上存在的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠。
在一个实施方式中，可用于检测相同样品中的第一和第二分析物的一系列的两种互补分析物检测试剂盒包含：
A)第一试剂盒，包含：
i)包含至少一个标签并能够结合第一分析物的第一试剂；
ii)共价结合多个肽标签并能够结合第一分析物的第二试剂；
iii)包含能够结合第一试剂盒的带标签的第一试剂的结合子的供体微珠；和
iv)包含能够结合第一试剂盒的第二试剂上存在的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠，和
B)第二试剂盒，包含：
i)包含至少一个标签并能够结合第二分析物的第一试剂；
ii)共价结合多个肽标签并能够结合第二分析物的第二试剂；
iii)包含能够结合第二试剂盒的带标签的第一试剂的结合子的供体微珠；和
iv)包含能够结合第二试剂盒的第二试剂上存在的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠，其中第一试剂盒的分析物检测信号不同于第二试剂盒的分析物检测信号。
在一个实施方式中，多重分析物检测试剂盒包含：
i)包含至少一个标签并能够结合第一分析物的第一试剂；
ii)共价结合多个肽标签并能够结合第一分析物的第二试剂；
iii)包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的供体微珠；和
iv)包含能够结合第二试剂上存在的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠；
v)包含至少一个标签并能够结合第二分析物的第三试剂；
vi)共价结合多个肽标签并能够结合第二分析物的第四试剂；
vii)包含能够结合带标签的第三试剂的结合子的另外的供体微珠；和
viii)包含能够结合第四试剂上存在的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的另外的受体微珠。
在一个实施方式中，多重分析物检测试剂盒包含：
i)包含至少一个标签并能够结合第一分析物的第一试剂；
ii)共价结合多个肽标签并能够结合第一分析物的第二试剂；
iii)包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的供体微珠；和
iv)包含能够结合第二试剂上存在的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠；
v)包含至少一个标签并能够结合第二分析物的第三试剂；
vi)共价结合多个肽标签并能够结合第二分析物的第四试剂；
vii)包含能够结合带标签的第三试剂的结合子的另外的供体微珠；和
viii)包含能够结合第四试剂上存在的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的另外的受体微珠，其中受体微珠和另外的受体微珠发射不同信号。
在一个实施方式中，分析物检测试剂盒包含：
i)包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的第一微珠；
ii)能够共价结合第二试剂的多个肽标签，其中第二试剂能够结合特定分析物；和
iii)包含能够结合该能够共价结合第二试剂的多个肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第二微珠。
在一个实施方式中，用于检测分析物的方法包括：
i)使分析物结合第一试剂和第二试剂，其中：
a)第一试剂包含一个或多个第一标签；和
b)第二试剂包含多个共价结合的肽第二标签；
ii)使一个或多个第一标签中的至少一个连接与第一微珠缀合的结合子；
iii)使多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合与第二微珠缀合的抗肽试剂；和
iv)通过测知连接的第一微珠和结合的第二微珠之间的相互作用导致的发射来检测分析物的存在。
在一个实施方式中，用于检测分析物的方法包括：
i)使带标签的第一试剂结合分析物并单独使带标签的第二试剂与分析物结合，其中：
a)带标签的第一试剂包含一个或多个第一标签；和
b)带标签的第二试剂包含多个共价结合的肽第二标签；
ii)使一个或多个第一标签中的至少一个连接与第一微珠缀合的结合子；
iii)使多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合与第二微珠缀合的抗肽试剂；和
iv)通过测知连接的第一微珠和结合的第二微珠之间的相互作用导致的发射来检测分析物的存在。
在一个实施方式中，用于检测分析物的方法包括：
i)使第一试剂结合分析物并单独使带标签的第二试剂与分析物结合，其中带标签的第二试剂包含多个共价结合的肽标签；
ii)使第一试剂连接与第一微珠缀合的结合子；
iii)使该多个共价结合的肽标签中的至少一个结合与第二微珠缀合的抗肽试剂；和
iv)通过从结合的第二微珠测知由连接的第一微珠和所述结合的第二微珠之间的相互作用导致的发射来检测分析物的存在。
在一个实施方式中，用于检测分析物的方法包括：
i)形成分析物复合物，其中分析物复合物包含：
a)包含一个或多个第一标签并结合分析物的第一试剂；和
b)共价结合多个肽标签并结合所述分析物的第二试剂；
ii)使一个或多个第一标签中的至少一个连接与第一微珠缀合的结合子；
iii)使多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合与第二微珠缀合的抗体(或另一类型的试剂，例如单克隆抗体、多克隆抗体、多价抗体、嵌合抗体、多特异性抗体或其抗体片段；适配子；affimer；蛋白；蛋白受体；蛋白受体；蛋白配体；或包含例如免疫球蛋白融合伴侣、稳定受体或配体的融合伴侣或提供结合目标的融合伴侣的融合蛋白)；
和
iv)通过测知由连接的第一微珠和结合的第二微珠之间的相互作用导致的发射来检测分析物的存在。
在一个实施方式中，用于检测样品中特定分析物的存在或确定其不存在的方法包括：
i)使带标签的第一试剂和带标签的第二试剂混合入样品中，其中：
a)带标签的第一试剂能够结合该特定分析物；和
b)带标签的第二试剂包含多个共价结合的肽第二标签并能够单独结合该特定分析物；
ii)用第一微珠捕获带标签的第一试剂；
iii)使带标签的第二试剂结合第二微珠；和
iv)通过测知捕获的第一微珠和所述结合的第二微珠之间的相互作用所导致的发射来检测该特定分析物的存在或确定其不存在。
在一个实施方式中，在多个非分析物抗体存在下检测分析物的方法包括：
i)使第一试剂和带标签的第二试剂混合入包含分析物和该多个非分析物抗体的样品中，其中带标签的第二试剂包含多个共价结合的肽第二标签；
ii)使第一试剂直接结合分析物并使带标签的第二试剂直接结合分析物；
和
iii)将包含结合子的第一微珠和包含抗肽试剂的第二微珠引入该结合的分析物，其中：
a)结合子优选结合第一试剂而不是非分析物抗体；和
b)抗肽试剂能够结合至少一个共价结合的肽第二标签。
iv)通过测知由连接的第一微珠和结合的第二微珠之间的相互作用导致的发射来检测分析物的存在。
在一个实施方式中，在多个非分析物抗体存在下检测分析物的方法包括：
i)使第一试剂和带标签的第二试剂混合入包含分析物和该多个非分析物抗体的样品中，其中带标签的第二试剂包含多个共价结合的肽第二标签；
ii)使第一试剂直接结合分析物并使带标签的第二试剂直接结合分析物；
和
iii)将包含结合子的第一微珠和包含抗肽试剂的第二微珠引入该结合的分析物，其中：
a)结合子优选结合第一试剂而不是非分析物抗体；和
b)抗肽试剂能够结合至少一个共价结合的肽第二标签。
iv)用结合子捕获带标签的第一试剂并使多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合与第二微珠缀合的抗肽试剂；和
v)通过测知由连接的第一微珠和结合的第二微珠之间的相互作用导致的发射来检测分析物的存在。
在一个实施方式中，用于检测样品中至少两种不同分析物的方法包括：
i)使供体抗体结合第一分析物并单独使带标签的受体抗体结合第一分析物，带标签的受体抗体包含多个共价结合的肽标签；
ii)使带标签的另外的供体抗体结合第二分析物并单独使另外的受体抗体结合第二分析物；
iii)使供体抗体连接供体微珠上缀合的结合子并使另外的供体抗体连接另外的供体微珠上缀合的结合子；
iv)使该多个共价结合的肽标签中的至少一个结合与第一受体微珠缀合的抗肽试剂；
v)使另外的受体抗体结合第二受体微珠；和
vi)通过测知供体微珠及第一和第二受体微珠之间相互作用的产物检测该至少两种不同的分析物。
在一个实施方式中，用于检测样品中至少两种不同分析物的方法包括：
i)使供体试剂结合第一分析物并单独使带标签的受体试剂结合第一分析物，带标签的受体试剂包含多个共价结合的肽标签；
ii)使带标签的另外的供体试剂结合第二分析物并单独使另外的受体试剂结合第二分析物；
iii)使供体试剂连接供体微珠上缀合的结合子并使另外的供体试剂连接另外的供体微珠上缀合的结合子；
iv)使该多个共价结合的肽标签中的至少一个结合与第一受体微珠缀合的抗肽试剂；
v)使另外的受体试剂结合第二受体微珠；和
vi)通过测知供体微珠及第一和第二受体微珠之间相互作用的产物检测该至少两种不同的分析物。
在一个实施方式中，用于检测分析物的至少两种表位的方法包括：
i)使带标签的供体试剂结合分析物；
ii)使带标签的供体试剂连接供体微珠上缀合的结合子；
iii)使带标签的第一受体试剂结合分析物的第一表位并单独使第二受体试剂结合分析物的第二表位，所述带标签的第一受体试剂包含多个共价结合的肽第一标签；
iv)使该多个共价结合的肽标签中的至少一个结合与第一受体微珠缀合的抗肽第一试剂；
v)使第二受体试剂结合第二受体微珠；和
vi)通过测知供体微珠及两种受体微珠之间相互作用的产物检测该至少两种不同的分析物。
在一个实施方式中，检测复合物包含：
i)一个或多个分析物复合物，包含：
a)分析物；
b)包含一个或多个第一标签并结合分析物的第一试剂；和
c)共价结合多个肽标签并单独结合所述分析物的第二试剂；
ii)其上缀合有多个结合子的第一微珠，其中来自该一个或多个分析物复合物的一个或多个第一标签中的至少一个结合该多个结合子之一；和
iii)其上缀合有多个抗肽试剂的第二微珠，其中来自该一个或多个分析物复合物的多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合该多个抗肽试剂之一。
在一个实施方式中，多重分析物检测复合物包含：
i)第一分析物复合物，包含：
a)第一分析物；
b)结合第一分析物的带标签的供体抗体，该带标签的供体抗体包含一个或多个供体标签；和
c)结合第一分析物的带标签的受体抗体，该带标签的受体抗体包含多个共价结合的肽标签；
ii)第二分析物复合物，包含：
a)第二分析物；
b)结合第二分析物的另外的供体抗体；和
c)结合第二分析物的另外的受体抗体；
iii)其上缀合多个结合子的供体微珠，来自每个第一和第二分析物复合物的一个或多个第一标签中的至少一个结合该多个结合子之一，且另外的供体抗体结合该多个结合子之一；
iv)其上缀合有多个抗肽抗体的第一受体微珠，该多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合该多个抗肽抗体之一；和
v)结合另外的受体抗体的第二受体微珠。
在一个实施方式中，多重分析物检测复合物包含：
i)第一分析物复合物，包含：
a)第一分析物；
b)结合第一分析物的带标签的供体试剂，该带标签的供体试剂包含一个或多个供体标签；和
c)结合第一分析物的带标签的受体试剂，该带标签的受体试剂包含多个共价结合的肽标签；
ii)第二分析物复合物，包含：
a)第二分析物；
b)结合第二分析物的另外的供体试剂；和
c)结合第二分析物的另外的受体试剂；
iii)其上缀合多个结合子的供体微珠，来自每个第一和第二分析物复合物的一个或多个第一标签中的至少一个结合该多个结合子之一，且另外的供体试剂结合该多个结合子之一；
iv)其上缀合多个抗肽试剂的第一受体微珠，该多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合该多个抗肽试剂之一；和
v)结合另外的受体试剂的第二受体微珠。
在一个实施方式中，多重表位检测复合物包含：
i)分析物复合物，包含：
a)分析物；
b)结合分析物的带标签的供体试剂，该带标签的供体试剂包含一个或多个供体标签；
c)结合分析物的第一表位的带标签的受体试剂，该带标签的受体试剂包含多个共价结合的肽标签；和
d)结合分析物的第二表位的另外的受体试剂；
ii)其上缀合多个结合子的供体微珠，其中该一个或多个供体标签中的至少一个结合该多个结合子之一；
iii)其上缀合多个抗肽试剂的第一受体微珠，该多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合该多个抗肽试剂之一；和
iv)结合另外的受体试剂的第二受体微珠。
在一个实施方式中，检测样品中分析物的方法包括：
i)形成多个分散于样品中的检测复合物，其中第一微珠能够与第二微珠进行化学转移相互作用；
ii)用合适波长的光照射至少部分检测复合物中的供体微珠以引发检测复合物中至少部分受体微珠的激发；和
iii)检测受体微珠发射的光。
在某些实施方式中，下述进一步的实施方式中的一个或多于一个(包括例如全部)可以包括每个其他的实施方式或其部分。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是单克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是多克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是多价抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是嵌合抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是多特异性抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是抗体片段。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是适配子。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是affimer。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是蛋白配体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是融合蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是免疫球蛋白融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是稳定受体或配体的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂是提供结合目标的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是单克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是多克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是多价抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是嵌合抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是多特异性抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是抗体片段。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是适配子。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是affimer。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是蛋白配体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是融合蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是免疫球蛋白融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是稳定受体或配体的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂是提供结合目标的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是单克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是多克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是多价抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是嵌合抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是多特异性抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是抗体片段。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是适配子。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是affimer。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是蛋白配体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是融合蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是免疫球蛋白融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是稳定受体或配体的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第三试剂是提供结合目标的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是单克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是多克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是多价抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是嵌合抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是多特异性抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是抗体片段。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是适配子。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是affimer。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是蛋白配体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是融合蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是免疫球蛋白融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是稳定受体或配体的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第四试剂是提供结合目标的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是单克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是多克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是多价抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是嵌合抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是多特异性抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是抗体片段。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是适配子。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是affimer。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是蛋白配体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是融合蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是免疫球蛋白融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是稳定受体或配体的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂是提供结合目标的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是单克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是多克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是多价抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是嵌合抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是多特异性抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是抗体片段。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是适配子。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是affimer。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是蛋白配体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是融合蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是免疫球蛋白融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是稳定受体或配体的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是提供结合目标的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是单克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是多克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是多价抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是嵌合抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是多特异性抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是抗体片段。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是适配子。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是affimer。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是蛋白配体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是融合蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是免疫球蛋白融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是稳定受体或配体的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂是提供结合目标的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是单克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是多克隆抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是多价抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是嵌合抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是多特异性抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是抗体片段。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是适配子。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是affimer。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是蛋白受体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是蛋白配体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是融合蛋白。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是免疫球蛋白融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是稳定受体或配体的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体试剂是提供结合目标的融合伴侣。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中带标签的第一试剂能够结合分析物的第一表位且第二试剂能够结合分析物的第二表位。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中分析物的第一表位和分析物的第二表位是相同类型的表位。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中分析物的第一表位和分析物的第二表位是两种不同类型的表位。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中分析物的第一表位和/或分析物的第二表位是磷酸表位。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该至少一个标签缀合第一试剂。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该至少一个标签共价结合第一试剂。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该至少一个标签是配体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂包含多个标签。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂包含范围为1-15个标签。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂包含范围为2-9个标签。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一试剂包含范围为5-8个标签。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中带标签的第一试剂的多个标签中的至少一个是配体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中配体是生物素。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中配体是肽标签。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子选择性地结合带标签的第一试剂的至少一个标签。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是另外的抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是另外的试剂。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子是链霉亲和素。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中另外的抗体对该至少一个标签具有亲和力。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中另外的抗体选择性地结合该至少一个标签。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中另外的试剂对该至少一个标签具有亲和力。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中另外的试剂选择性地结合该至少一个标签。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂共价结合范围为1-15个肽标签。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂共价结合范围为2-9个肽标签。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第二试剂共价结合范围为5-8个肽标签。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中至少一个共价结合的肽标签包含不多于30个氨基酸。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中至少一个共价结合的肽标签包含不多于25个氨基酸。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中至少一个共价结合的肽标签包含不多于10个氨基酸。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中至少一个共价结合的肽标签包含不多于8个氨基酸。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个共价结合的肽标签中的至少一个包含范围为5-15个氨基酸。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个共价结合的肽标签中的至少一个包含范围为6-12个氨基酸。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个共价结合的肽标签中的至少一个包含范围为7-10个氨基酸。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个共价结合的肽标签中的至少一个包含范围为8-9个氨基酸。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个共价结合的肽标签中的至少一个包含氨基酸序列DYKDDDDK(SEQ ID NO：1)。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个共价结合的肽标签中的至少一个由氨基酸序列DYKDDDDK(SEQ ID NO：1)组成。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个共价结合的肽标签中的至少一个包含氨基酸序列CDYKDDDDK(SEQ ID NO：8)。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个共价结合的肽标签中的至少一个由氨基酸序列CDYKDDDDK(SEQ ID NO：8)组成。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一微珠和/或第二微珠具有范围为250-350nm的直径。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一微珠和/或第二微珠是乳胶微珠。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一微珠和第二微珠能够通过化学转移相互作用发生相互作用。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一微珠包含能够在其激发态下产生单线态氧的光敏剂。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一微珠是供体微珠且第二微珠是受体微珠。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体微珠在受到光刺激时发射单线态氧。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体微珠在受到波长范围为620-700nm的光刺激时发射单线态氧。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体微珠在受到波长范围为650-700nm的光刺激时发射单线态氧。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体微珠在受到波长680nm的光刺激时发射单线态氧。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体微珠包含红荧烯、铕、铕螯合物、钐或铽。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中与供体微珠的化学转移相互作用是来自供体微珠的单线态氧的发射。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受体微珠包含与单线态氧反应形成光敏指示剂的光敏指示剂前体；
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受到照射的受体微珠上的光敏指示剂发射波长范围为500-625nm的荧光。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受到照射的受体微珠上的光敏指示剂发射波长范围为525-575nm的荧光。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受到照射的受体微珠上的光敏指示剂发射波长为545nm的荧光。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受到照射的受体微珠上的光敏指示剂发射波长范围为600-625nm的荧光。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中受到照射的受体微珠上的光敏指示剂发射波长为615nm的荧光。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中发射的荧光具有范围为520-620nm的峰值。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中发射的荧光具有615nm的峰值。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中当供体微珠和受体微珠被置于彼此200nm之内时，这两种微珠能够通过化学转移相互作用发生相互作用。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个共价结合的肽标签中的至少一个包含抗肽试剂的表位。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，进一步包含通过用光照射来激发所述光敏剂以产生与所述光敏指示剂前体反应的单线态氧以产生所述光敏指示剂；和照射所述光敏指示剂并检测所述光敏指示剂发射的荧光。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该发射是荧光，且从结合的第二微珠发射。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中带标签的第一试剂在第一表位结合分析物，第二试剂在第二表位结合分析物。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一表位和第二表位是远离的。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一表位和第二表位是邻近的。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一表位和第二表位是相同类型的表位。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一表位和第二表位是两种不同类型的表位。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一表位和/或第二表位是磷酸表位。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该一个或多个第一标签包含1-15个肽标签。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该一个或多个第一标签包含2-9个肽标签。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该一个或多个第一标签包含5-8个肽标签。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该一个或多个第一标签包含多个生物素或其衍生物且结合子包含链霉亲和素或其衍生物。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该一个或多个第一标签包含多个生物素且结合子包含链霉亲和素。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该一个或多个第一标签包含多个共价结合的肽第一标签且结合子包含第二抗肽试剂。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子包被于第一微珠。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂包被于第一微珠。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子共价结合于第一微珠。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂共价结合于第一微珠。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子包被于第二微珠。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂包被于第二微珠。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子共价结合于第二微珠。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂共价结合于第二微珠。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中分析物在样品中提供。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中样品、带标签的第一试剂、带标签的第二试剂和第二微珠混合在一起。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂的浓度至少2倍于混合物中带标签的第二试剂的浓度。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂的浓度至少5倍于混合物中带标签的第二试剂的浓度。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂的浓度至少10倍于混合物中带标签的第二试剂的浓度。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂的浓度低于500ng/ml。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂的浓度低于250ng/ml。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂的浓度低于50ng/ml。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中分析物的浓度范围为1-10ng/ml。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中分析物的浓度低于1ng/ml。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中分析物的浓度范围为10-50ng/ml。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中分析物的浓度高于50ng/ml。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中将第一微珠加至混合物，并将得到的混合物孵育少于30分钟。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中将第一微珠加至混合物，并将得到的混合物孵育少于1小时。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中将第一微珠加至混合物，并将得到的混合物孵育多于1小时。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中将第一微珠加至混合物，并将得到的混合物孵育多达2小时。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中将样品、带标签的第一试剂、带标签的第二试剂和第二微珠孵育大约1小时。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中将样品、带标签的第一试剂、带标签的第二试剂和第二微珠孵育低于1小时。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中将样品、带标签的第一试剂、带标签的第二试剂和第二微珠孵育多于1小时。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中将样品、带标签的第一试剂、带标签的第二试剂和第二微珠孵育多达2小时。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中将第一微珠与孵育的混合物进行混合，并将得到的混合物孵育少于30分钟。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中将第一微珠与孵育的混合物进行混合，并将得到的混合物孵育少于1小时。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中将第一微珠与孵育的混合物进行混合，并将得到的混合物孵育大约1小时。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中将第一微珠与孵育的混合物进行混合，并将得到的混合物孵育多于1小时。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中将第一微珠与孵育的混合物进行混合，并将得到的混合物孵育多达2小时。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中所述发射是来自结合的第二微珠的发射。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中通过用第一光照射第一微珠，并测知由第二微珠发射的第二光来检测特定分析物，该第二光的发射响应与第一微珠的化学转移相互作用。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中当用第一光照射第一微珠并进一步照射第二微珠时，没有测知第二光。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个共价结合的肽标签中的至少一个结合与第二微珠缀合的抗肽试剂。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子与第一试剂结合的速率常数至少2倍于结合子与任意非分析物抗体结合的速率常数。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子与第一试剂结合的速率常数至少5倍于结合子与任意非分析物抗体结合的速率常数。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子与第一试剂结合的速率常数至少10倍于结合子与任意非分析物抗体结合的速率常数。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子与第一试剂结合的速率常数至少100倍于结合子与任意非分析物抗体结合的速率常数。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子与第一试剂结合的解离常数至少2倍于结合子与任意非分析物抗体结合的解离常数。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子与第一试剂结合的解离常数至少5倍于结合子与任意非分析物抗体结合的解离常数。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子与第一试剂结合的解离常数至少10倍于结合子与任意非分析物抗体结合的解离常数。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子与第一试剂结合的解离常数至少100倍于结合子与任意非分析物抗体结合的解离常数。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂优选结合至少一个共价结合的肽标签而不是非分析物抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂与带标签的第二试剂结合的速率常数至少2倍于结合子与任意非分析物抗体结合的速率常数。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂与带标签的第二试剂结合的速率常数至少5倍于结合子与任意非分析物抗体结合的速率常数。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂与带标签的第二试剂结合的速率常数至少10倍于结合子与任意非分析物抗体结合的速率常数。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中抗肽试剂与带标签的第二试剂结合的速率常数至少100倍于结合子与任意非分析物抗体结合的速率常数。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个带标签的第一抗体和/或该多个第二抗体储存于0-4℃。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个带标签的第一试剂和/或该多个第二试剂储存于0-4℃。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个带标签的第一抗体和/或该多个第二抗体储存于室温。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个带标签的第一试剂和/或该多个第二试剂储存于室温。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个带标签的第一抗体和/或该多个第二抗体储存于20℃以下。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个带标签的第一抗体和/或该多个第二抗体储存于30℃以下。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中带标签的第一抗体处于第一液体缓冲液中，带标签的第二抗体处于第二液体缓冲液中。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个带标签的第一试剂和/或该多个第二试剂储存于20℃以下。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该多个带标签的第一试剂和/或该多个第二试剂储存于30℃以下。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中带标签的第一试剂处于第一液体缓冲液中，带标签的第二试剂处于第二液体缓冲液中。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体微珠储存于低光条件下。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中检测系统具有至少9个月的保存期限。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中检测系统具有至少1年的保存期限。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一微珠和第二微珠能够发生相互作用来产生可检测的发射。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一微珠和第二微珠被置于彼此200nm之内。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一微珠和第二微珠被置于彼此150nm之内。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一微珠和第二微珠被置于彼此50nm之内。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中第一微珠和第二微珠被置于彼此25nm之内。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该一个或多个分析物复合物是1-5种分析物复合物。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中该一个或多个分析物复合物是2-4种分析物复合物。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体抗体和带标签的另外的供体抗体是相同类型的抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂和带标签的另外的供体试剂是相同类型的试剂。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体抗体和带标签的另外的供体抗体是不同类型的抗体。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中供体试剂和带标签的另外的供体试剂是不同类型的试剂。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中结合子和另外的结合子是相同类型的结合子。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中：
i)供体抗体和带标签的另外的供体抗体每种都包含多个生物素标签；和
ii)结合子和另外的结合子每种都包含链霉亲和素。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中：
i)供体抗体和另外的供体抗体每种都包含多个肽标签；和
ii)结合子和另外的结合子每种都包含与供体微珠缀合的抗肽试剂。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中：
i)供体抗体包含多个能够结合结合子的肽第二标签，所述结合子包含与供体微珠缀合的第二抗肽试剂；和
ii)另外的供体抗体包含能够结合结合子的多个肽第三标签，所述结合子包含与供体微珠缀合的第三抗肽试剂。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中另外的受体抗体直接缀合第二受体微珠。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中另外的受体抗体包含能够结合与第二受体缀合的第二抗肽试剂的多个共价结合的肽第二标签。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中：
i)供体试剂和带标签的另外的供体试剂每种都包含多个生物素标签；和
ii)结合子和另外的结合子每种都包含链霉亲和素。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中：
i)供体试剂和另外的供体试剂每种都包含多个肽标签；和
ii)结合子和另外的结合子每种都包含与供体微珠缀合的抗肽试剂。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中：
i)供体试剂包含能够结合结合子的多个肽第二标签，所述结合子包含与供体微珠缀合的第二抗肽试剂；和
ii)另外的供体试剂包含多个肽第三标签能够结合结合子，所述结合子包含第三与供体微珠缀合的抗肽试剂。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中另外的受体试剂直接缀合第二受体微珠。
在进一步的实施方式中，上述任一实施方式及后文任何一个或多个实施方式的系统、试剂盒、方法或检测复合物，其中另外的受体试剂包含能够结合与第二受体缀合的第二抗肽试剂的多个共价结合的肽第二标签。
在另外的实施方式中，上述实施方式的任一方法及本文中任何一种或多种另外的实施方式，其中该方法包括：
i)形成分散在样品中的多个检测复合物，其中第一微珠能够与第二微珠进行化学转移相互作用；
ii)用合适波长的光照射至少部分检测复合物中的供体微珠以引发检测复合物中至少部分受体微珠的激发；和
iii)检测受体微珠发射的光。
序列表
<110> TGR生物科学私人有限公司
<120> 使用多基质的分析物检测
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<140>
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<160> 8
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成肽
<400> 1
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
1 5
<210> 2
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成肽
<400> 2
Lys Arg Ile Thr Val Glu Glu Ala Leu Ala His Pro Tyr Leu Glu Gln
1 5 10 15
Tyr Tyr Asp Pro Thr Asp Glu
20
<210> 3
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成6xHis标签
<400> 3
His His His His His His
1 5
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述:合成肽
<400> 4
Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu
1 5 10
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成肽
<400> 5
Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala
1 5
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成肽
<400> 6
Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
1 5 10
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成肽
<400> 7
Gln Pro Glu Leu Ala Pro Glu Asp Pro Glu Asp
1 5 10
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成肽
<400> 8
Cys Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
1 5
Claims (20)
1.分析物检测系统，包含：
i)包含至少一个标签并能够结合分析物的第一试剂；
ii)共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂；
iii)包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的第一微珠；和
iv)包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第二微珠。
2.权利要求1的系统，其中抗肽试剂包含affimer。
3.权利要求1的系统，其中第一试剂包含第一抗体。
4.权利要求3的系统，其中该至少一个标签包含多种生物素或其衍生物。
5.权利要求4的系统，其中第一微珠用链霉亲和素或其衍生物包被。
6.权利要求1的系统，其中第二试剂包含第二抗体。
7.权利要求6的系统，其中抗肽试剂包含抗肽抗体。
8.权利要求7的系统，其中存在的抗肽抗体相对于第二抗体的重量：重量比为至少100：1。
9.权利要求1的系统，其中：
A)第一微珠是包含光敏剂的供体微珠；和
B)第二微珠是配置为通过化学转移相互作用与供体微珠相互作用的受体微珠。
10.权利要求9的系统，其中供体微珠在受到波长范围为650-700nm的光刺激时发射单线态氧。
11.权利要求9的系统，其中受体微珠包含与单线态氧反应形成光敏指示剂的光敏指示剂前体，其中照射光敏指示剂发射波长范围为500-625nm的荧光。
12.权利要求9的系统，其中每种第一微珠和第二微珠具有250-350nm范围的直径。
13.权利要求9的系统，其中存在的第二微珠相对于第一微珠的比例范围为0.1-0.2。
14.分析物检测试剂盒，包含：
i)包含至少一个标签并能够结合分析物的第一试剂；
ii)共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂；
iii)包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的第一微珠；和
iv)包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第二微珠。
15.用于检测分析物的方法，包含：
i)使分析物结合第一试剂和第二试剂，其中：
a)第一试剂包含一个或多个第一标签；和
b)第二试剂包含多个共价结合的肽第二标签；
ii)使一个或多个第一标签中的至少一个连接与第一微珠缀合的结合子；
iii)使多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合与第二微珠缀合的抗肽试剂；和
iv)通过测知由连接的第一微珠和结合的第二微珠之间的相互作用导致的发射来检测分析物的存在。
16.权利要求14的方法，其中第一表位和第二表位是相同类型的表位。
17.权利要求14的方法，其中第一表位和第二表位是两种不同类型的表位。
18.检测复合物，包含：
i)一个或多个分析物复合物，包含：
a)分析物；
b)包含一个或多个第一标签并结合分析物的第一试剂；和
c)共价结合多个肽标签并单独结合所述分析物的第二试剂；
ii)其上缀合有多个结合子的第一微珠，其中该一个或多个分析物复合物中存在的一个或多个第一标签中的至少一个结合该多个结合子之一；和
iii)其上缀合有多个抗肽抗体的第二微珠，其中来自该一个或多个分析物复合物的多个共价结合的肽第二标签中的至少一个结合该多个抗肽抗体之一。
19.权利要求18的检测复合物，其中第一微珠和第二微珠被置于彼此50nm之内。
20.权利要求18的检测复合物，其中该一个或多个分析物复合物是1-5个分析物复合物。
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