CN108402460A

CN108402460A - 一种增加骨密度的多功能食品组合物及其制备方法

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Publication number: CN108402460A
Application number: CN201810449028.1A
Authority: CN
Inventors: 魏敏杰; 李博; 宫世强
Original assignee: China Medical University
Current assignee: Shenyang Centenary Biotechnology Development Co., Ltd.
Priority date: 2018-05-11
Filing date: 2018-05-11
Publication date: 2018-08-17
Anticipated expiration: 2038-05-11
Also published as: CN108402460B

Abstract

本发明属于保健品技术领域，更具体地，涉及一种增加骨密度的多功能食品组合物及其制备方法。该多功能食品组合物，由如下重量份数的各组分组成：葛根20～25份、枸杞子12～20份、黄精10～15份、山药4～6份、大枣4～6份、牡蛎2～3份、阿胶2～4份、玉竹2～4份、茯苓1～3份、甘草1～3份、木瓜1～3份、薏苡仁1～2份。本发明的原药材均为药食两用，对动物进行抗骨质疏松试验取得显著疗效，与临床应用的雌激素类药物相比，有着相似的药效，肝肾等不良反应显著降低。同时辅助降血脂、改善记忆。

Description

一种增加骨密度的多功能食品组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于保健品技术领域，更具体地，涉及一种增加骨密度的多功能食品组合物及其制备方法。

背景技术

骨质疏松症(Ostcoporosis ,OP)是老龄化社会的常见病和多发病，是一种以骨量低下，骨微结构破坏，导致骨脆性增加，容易发生骨折的全身性疾病。骨质疏松症通常可分为三种类型，包括原发性骨质疏松症、继发性骨质疏松症及特发性骨质疏松症，其中原发性骨质疏松症约占90%左右。原发性骨质疏松症又可分为两种类型，包括绝经后骨质疏松症及老年性骨质疏松症。前者是由于雌激素的缺乏，降低了钙调节激素对骨代谢的调节作用及降钙素的分泌，导致破骨细胞功能减弱，抑制骨吸收，加快骨形成，引起了骨重建平衡的失调，从而导致骨质疏松症的发生。后者由于老年人的骨髓基质细胞分化为成骨细胞的过程受到抑制，活性衰退延长了骨形成期，降低了骨形成率，表现出“低转换”型的骨质疏松症。目前我国是全球骨质疏松(OP)患者最多的国家，40岁以上人群OP发病率为19.74%，约有1.12亿患者群。预计到2020年，我国将有超过2亿人受到OP和骨量减少的影响。全世界范围内，每3 s会发生1例骨质疏松性骨折。国际骨质疏松基金会( IOF) 的数据显示，有20%～24%的患者在发生髋部骨折1年内死亡，一半的患者生活不能自理。

目前治疗骨质疏松的药物主要有降钙素、双膦酸盐、氟化物、维生素D、钙剂和雌激素替代等，但疗效均存在一定争议。特别是雌激素替代疗法一直是绝经后骨质疏松症的首选，但随着年龄增长，雌激素替代疗法的治疗作用减弱，而且长期使用雌激素可引起子宫内膜和乳腺增生、增加子宫内膜癌、乳腺癌和卵巢癌发生的危险性、提升深静脉血栓形成和肺栓塞发生率，使其在临床上的应用受到了严格限制。我国中医药治疗骨质疏松症的历史悠久，拥有丰富的药食同源的植物资源，毒副作用小，多成分多靶点共同调节机体的平衡，同时改善多方面的代谢。骨质疏松的主要表现为：骨量减少、骨钙溶出、脊柱压缩性骨折、骨微观结构退化、骨脆性增加，并伴有老年呼吸困难、骨质增生、高血压、老年痴呆、高血脂等一些老年性疾病。

因此，从药食两用的药材中找到增加骨密度、辅助降血脂、辅助改善记忆、护肝利胆的功能食品组合物及制备方法是一种行之有效的途径。

发明内容

针对上述现有技术中的不足，本发明提供了一种增加骨密度的多功能食品组合物及其制备方法，制备工艺简单，疗效好，安全无副作用。

本发明的上述目的是通过以下技术方案予以实现的。

一种增加骨密度的多功能食品组合物，由如下重量份数的各组分组成：葛根20～25份、枸杞子12～20份、黄精10～15份、山药4～6份、大枣4～6份、牡蛎2～3份、阿胶2～4份、玉竹2～4份、茯苓1～3份、甘草1～3份、木瓜1～3份、薏苡仁1～2份。

其中，各组分的质量份优选如下：

（1）葛根20份、枸杞子20份、黄精10份、山药6份、大枣5份、牡蛎3份、阿胶2份、玉竹4份、茯苓3份、甘草1份、木瓜1份、薏苡仁1份。

（2）葛根25份、枸杞子15份、黄精15份、山药5份、大枣6份、牡蛎2份、阿胶4份、玉竹2份、茯苓2份、甘草3份、木瓜3份、薏苡仁2份。

（3）葛根24份、枸杞子12份、黄精12份、山药4份、大枣4份、牡蛎2份、阿胶2份、玉竹2份、茯苓1份、甘草2份、木瓜2份、薏苡仁1份。

本发明可以加入辅料制成不同的剂型，优选颗粒剂、片剂、胶囊剂等，所用的辅料为一般药学上可接受的辅料。

本发明还可应用到不同食品中。

本发明还提供了一种增加骨密度的多功能食品组合物的制备方法，包括以下步骤：

S1 .将所述各组分原料除杂、净化、晾干后备用；

S2 .将葛根、黄精、山药、玉竹、茯苓、甘草、薏苡仁于100 ℃蒸锅中蒸45～60 min，蒸熟后在80℃的烘箱中烘干5-6 h，再粉碎，过120目筛，得到细粉混合物A；

S3 .枸杞子、大枣、阿胶、木瓜在80℃的烘箱中烘干4-5 h，再粉碎，过120目筛，得到细粉混合物B；

S4 .牡蛎直接粉碎，过120目筛，得到细粉混合物C；

S5 .将步骤S2的混合物A、步骤S3的混合B与步骤S4的混合物C均匀混合后，制得所需剂型。

所述增加骨密度的多功能食品组合物作为制备增加骨密度、辅助降血脂、辅助改善记忆或护肝利胆的保健品中的用途。

本发明各组分功效如下：

葛根，本品为豆科葛属植物野葛Pueraria lobate (Willd.) Ohwi的干燥根。味甘、辛，凉。归脾、胃、肺经。解肌退热，生津止渴，透疹，升阳止泻，通经活络，解酒毒。

枸杞子，为茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实。味甘，性平。归肝、肾经。中药枸杞子始载于《神农本草经》，并列为上品，久服坚筋骨, 主治肝肾不足、精血虚损、耳鸣和人遗精。

黄精，为百合科植物滇黄精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl、黄精Polygonatum sibiricum Red. 或多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根茎。味甘、性平，具有补中益气、润心肺、补肾益精、强筋骨、安五脏、止寒热、填精髓等功效。

山药，为薯蓣科植物山药Dioscorea opposite Thumb.干燥根茎。味甘，性平。归肺经、脾经、肾经。山药又称薯蓣、土薯、山薯蓣、怀山药、淮山、白山药，是《中华本草》收载的草药，具有滋养强壮，补益脾胃，益肺滋肾，敛虚汗，止泻之功效。

大枣，本品为鼠李科植物物枣Ziziphus jujuba Mill.的干燥成熟果实。味甘，性温，补中益气，养血安神。用于脾虚食少，乏力便溏，妇人脏躁。

牡蛎，为牡蟠科动物长牡蝠Ostrea gigas Thimberg、大连湾牡蛎 Ostrea talienwhanensis Crosse 或近江牡賴Ostrearivularis Gould 的贝壳。味咸，性微寒。归肝、胆、肾经，重镇安神，潜阳补阴，软坚散结，用于惊悸失眠，眩晕耳鸣，瘰癖痰核，癥瘕痞坱。

阿胶，马科动物驴Equus asinm L.的干燥皮或鲜皮经煎煮、浓缩制成的固体胶，性甘，平。归肺、肝、肾经。补血滋阴，润燥，止血。用于血虚萎黄，眩晕心悸，肌痿无力，心烦不眠，虚风内动，肺燥咳嗽，劳嗽咯血，吐血尿血，便血崩漏，妊娠胎漏。

玉竹，为百合科植物玉竹Polygonatum odoratum (MilL ) Druce的干燥根茎。性甘，微寒。归肺、胃经。养阴润燥，生津止渴。用于肺胃阴伤，燥热咳嗽，咽干口渴，内热消渴。

茯苓，为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos (Schw.)Wolf的干燥菌核。性甘、淡，平。归心、肺、脾、肾经。利水渗湿，健脾宁心。用于水肿尿少，痰饮眩悸，脾虚食少，便溏泄泻，心神不安，惊悸失眠，利水渗湿，健脾化痰，宁心安神；补脾，运化营养物质入血，补血不足，助消化；运化水液，消除痰湿之邪，性平寒热均可。

甘草, 为豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat. 或光果甘草Glycyrrhiza glabra L. 的干燥根和根茎。性甘、平，归心、肺、脾、胃经，补脾益气，淸热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多,脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒,缓解药物毒性、烈性。

木瓜，为蓄薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa (Sweet) Nakai的干燥近成熟果实。性酸，温。归肝、脾经。舒筋活络，和胃化湿。用于湿痹拘挛，腰膝关节酸重疼痛,暑湿吐泻,转筋挛痛，脚气水肿。

薏苡仁，为禾本科植物薏苡Coix lacryma-jobi L.var.mayuen(Roman.) Stapf的干燥成熟种仁。甘、淡，凉。归脾、胃、肺经。利水渗湿，健脾止泻，除痹，排脓，解毒散结。用于水肿，脚气，小便不利，脾虚泄泻，湿痹拘挛，肺痈，肠痈，赘疣，癌肿。

本发明与现有技术相比，具有如下优点：

本发明作为一种组合物的保健品，具有增加骨密度、辅助降血脂、辅助改善记忆、护肝利胆的功能；本发明保健食品全部是以药食两用的药材为原料制成的，其中葛根为野葛富含大量的异黄酮类成分，牡蛎为牡蛎壳，富含碳酸钙。

本发明的组方原则：本发明中葛根、枸杞子、黄精、山药和大枣为主要成分，按照传统的补肾壮骨中医理论、现代的植物异黄酮理论以及中药系统药理学大数据分析得到治疗骨质疏松的组方，并通过现代生物化学的手段进行验证，具有非常显著的作用。在现有技术中没有利用本配方治疗骨质疏松的相关报道。配方中的各药物成分协同起效，滋补肝肾，活血通络，强筋壮骨，又利用植物异黄酮代替体内缺少的雌激素，双管齐下，可以促进钙在骨骼中积累，增加骨密度；对肝肾不足，瘀血阻络所致骨质疏松症，绝经后骨质疏松症具有很好的防治作用，同时辅助降血脂、改善记忆、护肝利胆。葛根中含有的异黄酮类成分具有雌激素样作用，对绝经后骨质疏松症有治疗作用。黄精具有补肾阳、强筋骨功效，通过补肾促进骨折的愈合，防止骨质疏松，减少骨的病变。枸杞子能益精填髓，滋阴补血，修复骨质结构，增加骨质密度，提高体内钙、磷含量，调节骨代谢，调整骨质成分构成比例的平衡。大枣和阿胶有具补血益气之功效。山药、茯苓和薏苡仁具有滋养强壮，助消化，敛虚汗，补脾虚之功效。玉竹和甘草具有补脾益气, 清热解毒, 调和诸药的功效。木瓜有舒筋、活络、健脾开胃、舒肝止痛、祛风除湿之功效，富含大量的氨基酸和维生素。牡蛎，含碳酸钙量高达94%，副作用小，生物利用度较高，是中国营养学会首推补钙剂，可以降低老年的骨质疏松。本发明补肾健脾治其本，活血通络治其标，标本兼顾，即脾健肾精充足，络通而气血旺，致精血充沛，则筋骨强健。

本发明的原药材均为药食两用，对动物进行抗骨质疏松试验取得显著疗效，与临床应用的雌激素类药物相比，有着相似的药效，肝肾等不良反应显著降低。同时辅助降血脂、改善记忆。

附图说明

图1为本发明中几味主药成分-靶点图。

图2为本发明中几味主药成分和靶点韦恩图。

图3为本发明对去卵巢大鼠血清CTX， BALP，TRACP5b骨代谢生化指的影响。

图4为本发明对去卵巢大鼠骨质量（g）/体积（ml）和骨密度(g/cm²)的影响。

图5为骨小梁三维和二维结构图。

图6本发明对体重和子宫指数的影响。

图7为子宫形态的变化。

图8为本发明对体重和血清中甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、总胆固醇（TC）浓度的影响。

图9为水迷宫获得性训练实验结果。

图10为水迷空间探索实验结果。

图11为本发明对（肝功）血清中白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）和直接胆红素（D-BIL）浓度的影响。

图12为本发明对肝脏器指数、肾脏指数、脾脏指数的影响。

图13为本发明对（肾功）血清中尿素氮（UREA）、尿酸（UA）、肌酐（CRA）浓度的影响。

图14为本发明对空腹血糖浓度的影响。

图15为本发明对全血中WBC（白细胞计数）、lym（淋巴细胞计数）、Gran（中性粒细胞）和Momo（单核细胞计数）浓度的影响

图16为本发明对全血中RBC（红细胞计数）、HGB（血红蛋白）和PTL（血小板计数）浓度的影响。

其中，D：低剂量，Z：中剂量，G：高剂量；M:造模组；JXCF：己烯雌酚；JSS+Z: 假手术+中剂量；JSS：假手术组。

具体实施方式

以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1

按照质量份数：葛根20份、枸杞子20份、黄精10份、山药6份、大枣5份、牡蛎3份、阿胶2份、玉竹4份、茯苓3份、甘草1份、木瓜1份、薏苡仁1份，分别称取适量各原料；然后按照如下方法制备实施例1的保健食品：

S1 .将所述各组分原料除杂、净化、晾干后备用；

S4 .牡蛎直接粉碎，过120目筛，得到细粉混合物C；

S5 .将步骤S2的混合物A、步骤S3的混合B与步骤S4的混合物C均匀混合后，得到本发明功能食品组合物。

实施例2

按照质量份数：葛根25份、枸杞子15份、黄精15份、山药5份、大枣6份、牡蛎2份、阿胶4份、玉竹2份、茯苓2份、甘草3份、木瓜3份、薏苡仁2份，分别称取适量各原料；然后按照与实施例1相同的制备方法制备实施例2的保健食品。

实施例3

葛根24份、枸杞子12份、黄精12份、山药4份、大枣4份、牡蛎2份、阿胶2份、玉竹2份、茯苓1份、甘草2份、木瓜2份、薏苡仁1份，分别称取适量各原料；然后按照与实施例1相同的制备方法制备实施例3的保健食品。

实施例4

粉葛24份、枸杞子12份、黄精12份、山药4份、大枣4份、牡蛎2份、阿胶2份、玉竹2份、茯苓1份、甘草2份、木瓜2份、薏苡仁1份，分别称取适量各原料；然后按照如下方法制备实施例4的保健食品：

S1 .将所述各组分原料除杂、净化、晾干后备用；

S2 .将粉葛、黄精、山药、玉竹、茯苓、甘草、薏苡仁于100 ℃蒸锅中蒸45～60 min，蒸熟后在80℃的烘箱中烘干5-6 h，再粉碎，过120目筛，得到细粉混合物A；

S4 .牡蛎直接粉碎，过120目筛，得到细粉混合物C；

实施例5

葛根24份、桑葚12份、黄精12份、山药4份、大枣4份、牡蛎2份、阿胶2份、玉竹2份、茯苓1份、甘草2份、木瓜2份、薏苡仁1份，分别称取适量各原料；然后按照如下方法制备实施例5的保健食品：

S1 .将所述各组分原料除杂、净化、晾干后备用；

S3 .桑葚、大枣、阿胶、木瓜在80℃的烘箱中烘干4-5 h，再粉碎，过120目筛，得到细粉混合物B；

S4 .牡蛎直接粉碎，过120目筛，得到细粉混合物C；

实施例6

葛根24份、枸杞子12份、覆盆子12份、山药4份、大枣4份、牡蛎2份、阿胶2份、玉竹2份、茯苓1份、甘草2份、木瓜2份、薏苡仁1份，分别称取适量各原料；然后按照如下方法制备实施例6的保健食品：

S1 .将所述各组分原料除杂、净化、晾干后备用；

S2 .将葛根、山药、玉竹、茯苓、甘草、薏苡仁于100 ℃蒸锅中蒸45～60 min，蒸熟后在80℃的烘箱中烘干5-6 h，再粉碎，过120目筛，得到细粉混合物A；

S3 .枸杞子、覆盆子、大枣、阿胶、木瓜在80℃的烘箱中烘干4-5 h，再粉碎，过120目筛，得到细粉混合物B；

S4 .牡蛎直接粉碎，过120目筛，得到细粉混合物C；

实施例7

葛根24份、枸杞子12份、黄精12份、白芷4份、大枣4份、牡蛎2份、阿胶2份、玉竹2份、茯苓1份、甘草2份、木瓜2份、薏苡仁1份，分别称取适量各原料；然后按照如下方法制备实施例7的保健食品：

S1 .将所述各组分原料除杂、净化、晾干后备用；

S2 .将葛根、黄精、白芷、玉竹、茯苓、甘草、薏苡仁于100 ℃蒸锅中蒸45～60 min，蒸熟后在80℃的烘箱中烘干5-6 h，再粉碎，过120目筛，得到细粉混合物A；

S4 .牡蛎直接粉碎，过120目筛，得到细粉混合物C；

实施例8

葛根24份、枸杞子12份、黄精12份、茯苓4份、龙眼肉4份、牡蛎2份、阿胶2份、玉竹2份、茯苓1份、甘草2份、木瓜2份、薏苡仁1份，分别称取适量各原料；然后按照如下方法制备实施例8的保健食品：

S1 .将所述各组分原料除杂、净化、晾干后备用；

S2 .将葛根、黄精、茯苓、玉竹、茯苓、甘草、薏苡仁于100 ℃蒸锅中蒸45～60 min，蒸熟后在80℃的烘箱中烘干5-6 h，再粉碎，过120目筛，得到细粉混合物A；

S3 .枸杞子、龙眼肉、阿胶、木瓜在80℃的烘箱中烘干4-5 h，再粉碎，过120目筛，得到细粉混合物B；

S4 .牡蛎直接粉碎，过120目筛，得到细粉混合物C；

实验例9 方剂的筛选实验。

1.通过文献检索及利用网络药理学大数据分析进行组方

网络药理学是在系统生物学、蛋白组学、基因组学的基础上发展的新学科，基于对“药物-靶标-基因-疾病表型”相互作用网络的理解，通过网络的分析观察药物对疾病的干预和影响，使药物开发与疾病的实际情况更加接近，提高药物开发的成功率。中药是一个含有丰富成分的复杂体系, 应用网络药理学角度对中药系统进行研究，分析分子-分子、分子-靶标，靶标-疾病间的相互作用，为本发明组合物的开发和优化提供了理论支撑。

首先利用文献挖掘从古代方剂和国产保健食品数据库检索抗骨质疏松应用频次较多的中药材，从中选取药食两用的单味药：葛根、枸杞子、黄精、山药、大枣、牡蛎、阿胶、玉竹、茯苓、甘草、木瓜、薏苡仁。

通过以下数据库搜集各原料药的成分（OB>20%, DL>0.18），建立成分-靶点的网络图，图中点的大小反应该元素的重要性。将富含成分较多的几味主药的成分和靶点分别汇集到一起制作韦恩图，如图1，2所示。不同单味药材所含成分几乎没有交叉，而不同药材所含成分涉及的靶点有很多共同靶点，说明每一味药材都对组方有贡献，不同的成分共同作用于同一靶点，同一成分也作用于不同靶点，体现了中药复方多成分-多靶点共同作用。

Tcm SP 数据库（http://sm.nwsuaf.edu.cn/lsp/tcmsp.php）；

TCMID 数据库（http://www.megabionet.org/tcmid/）；

TCM Database@Taiwan 数据库（http://tcm.cmu.edu.tw/）；

TTD 数据库（http://bidd.nus.edu.sg/group/TTD/ttd.asp）

选出与骨质疏松密切相关的四个靶点，通过药材-成分-靶点的网络，结合文献对各药材中关于抗骨质疏松活性成分的报道，确定葛根、枸杞子和黄精为君药，山药和大枣为臣药，牡蛎、阿胶、玉竹、茯苓、甘草、木瓜、薏苡仁为佐药。核心的靶点为雌激素受体，研究结果如表1。

通过网络药理学的预测和传统中医理论组方，确定了组方中的几味君药和臣药为葛根、枸杞子、黄精、山药、大枣，然后按不同的配比进行组方的优选，即实施例1-3,；对组方中的几味主药进行拆方替换成相同药性的单味药材，验证组方的合理性，粉葛替代葛根即实施例4，桑葚替代枸杞即实施例5，覆盆子替代黄精即实施例6，白芷替代茯苓即实施例7，龙眼肉替代大枣即实施例8。然后进行去势大鼠的灌胃给药，三个月后测量大鼠的骨密度。

2. 动物实验

【造模】

大鼠腹腔注射30mg/kg 戊巴比妥钠溶液麻醉，腹位固定后于腹中线距离阴道口3—4cm处去毛，分别用碘酒和酒精消毒，待稍干后切开皮肤和腹肌约2—3cm，切口视野可见白色脂肪，拨开脂肪层找到子宫后，轻轻将一侧子宫角拉出，在其末端可见被脂肪团包裹的卵巢。分离脂肪团，便可见粉红色或黄色的卵巢，以止血钳夹住卵巢，然后将卵巢下输卵管用线结扎，剪出卵巢，顺势将子宫角送回腹腔中，同法剪除另一侧卵巢。腹肌和皮肤分层缝合后，再次消毒。最后经后肢肌肉注射2万U青霉素。

【动物分组与给药】

大鼠经适应性饲养后分组，按照发明组合物实施例1-7配置混悬液（按大鼠体重每kg等计量的生药材给药），实验动物按体重随机分组为切除卵巢+实施例1、切除卵巢+实施例2、切除卵巢+实施例3、切除卵巢+实施例4、切除卵巢+实施例5、切除卵巢+实施例6、切除卵巢+实施例7、切除卵巢+实施例8、切除卵巢组+溶剂组、假手术组。每组动物10只。每周称取体重，并按新体重调整灌胃剂量，给药3个月，各组大鼠自由饮水、摄食。

【数据分析】

所有实验数据以平均数±标准差表示，用SPSS16.0进行t检验分析。

2.1 测定指标。

骨骼标本：采血后脱颈处死大鼠，完整分离大鼠的左右两侧股骨，剔除所有附着的肌肉和结缔组织，一只以10%甲醛溶液固定，进行病理学检查；一只用生理盐水浸泡的纱布包裹，保存于-80℃保存，分别测定股骨的湿重、干重、体积、骨密度。

用双能X射线骨密度仪测定股骨中点的骨密度。将待测骨放置于测量台上与骨密度仪探测头移动方向垂直；移动待测骨，令其待测点标记线与探测头移动轨迹于测量台上的垂直投影重合。开始测量股骨中点骨密度。

2.2 实验结果。

不同组大鼠股骨分别称取湿重和体积，并采集干重，计算湿重、干重和体积比值以及测定骨密度，结果如表2所示。模型组湿重体积、干重体积比值均下降，虽然下降不显著，但是造模组体重增加得很多，体重标准化之后造模组的比值显著低于其他各组，与空白对照组比较具有非常显著的统计学差异（P<0.01），同时股骨中点骨密度降低，提示去卵巢后大鼠股骨的骨密度明显降低；实施例1、2、3不同程度地提高了骨密度，其中实施例3改善的最为明显；实施例4、5、6、7、8与造模组相比无显著性差异，提示更换主药中的任何一味药重新组方改善骨密度的药效都不如本发明组方好，证实了组方的合理性。

实验例2 本发明抗骨质疏松、辅助降血脂、辅助改善记忆及护肝利胆的药效学评价。

1.动物实验。

【造模】

与实验例1相同的造模方法。

【动物分组与给药】

大鼠经适应性饲养后分组，按照发明组合物（实施例3）配置成低、中、高三种混悬液，实验动物按体重随机分组为切除卵巢+低剂量、切除卵巢+中剂量、切除卵巢+高剂量、切除卵巢组+溶剂组、切除卵巢+阳性对照组（己烯雌酚）、假手术组+中剂量、假手术组。每组动物10只。每周称取体重，并按新体重调整灌胃剂量，给药3个月，各组大鼠自由饮水、摄食。

【数据分析】

2. 本发明抗骨质疏松的作用。

2.1 测定指标

骨代谢生化指标：大鼠酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP5b），骨源性碱性磷酸酶（BALP），I性胶原羧基末端肽（CTx）。

骨骼标本：采血后脱颈处死大鼠，完整分离大鼠的左右两侧股骨，剔除所有辐照的肌肉和结缔组织，一只以10%甲醛溶液固定，进行病理学检查；一只用生理盐水浸泡的纱布包裹，保存于-80℃保存，分别测定股骨的湿重、干重、体积、骨密度、骨小梁3D结构。

子宫标本：充分暴露并剥离取出子宫，电子天平称重，计算子宫指数。子宫指数=（子宫重量÷体重）×100%

2.2 实验结果

2.2.1 对血清CTx， BALP，TRACP5b骨代谢生化指标的检测。

酶联免疫吸附剂测定血清中的大鼠酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP5b），骨源性碱性磷酸酶（BALP），I性胶原羧基末端肽（CTx）水平，CTx、 BALP和TRACP5b含量显著升高与骨质疏松症有关。结果如表3,图3所示。模型组大鼠血清中三种成分的含量，与假手术对照组比较具有显著性差异，提示造模成功；本发明各组不同程度降低了血清中三种成分的含量，作用较阳性药己烯雌酚组稍差，提示本发明对绝经后的骨质疏松有治疗作用；假手术组给本发明组合物后三种成分的含量也略有下降，说明本发明对正常机体也有改善骨质疏松的作用。

2.2.2 对去卵巢大鼠股骨质量、体积比值和骨密度的影响。

不同组大鼠股骨分别称取湿重和体积，并采集干重，计算湿重、干重和体积比值，结果如表4,图4所示。模型组湿重体积、干重体积比值均下降，虽然下降不显著，但是造模组体重增加得很多，体重标准化之后造模组的比值显著低于其他各组，与空白对照组比较具有非常显著的统计学差异（P<0.01），提示去卵巢后明显降低大鼠股骨的骨密度；己烯雌酚组明显改善造模造成的上述病理性改变，但副作用很大；本发明不同程度改善造模引起的骨质疏松，提高了骨密度；与假手术组相比，假手术组给本发明组合物后骨密度也有一定提升，提示本发明也可改善正常机体的骨密度。

用双能X射线骨密度仪测定股骨中点的骨密度。造模组骨密度显著低于假手术空白对照组，提示去卵巢后骨密度显著下降，造模成功；本发明各组不用程度提高了骨密度，提示本发明有抗骨质疏松的作用。

2.2.3 对去卵巢大鼠骨组织病理学的影响

通过Micro-CT对大鼠左侧股骨进行扫描，病理诊断结果如图5所示。

假手术组：该组股骨骨小梁排列密集，互相连接呈网状结构，骨小梁密度大，间距小。

模型组：去卵巢后骨小梁明显变细，数量明显减少，断裂增多，骨小梁密度明显减小，髓腔扩大，皮质骨变薄。与空白组比较骨小梁髓腔间距增大，造模成功。

己烯雌酚组：与模型组比较骨小梁变得规则，数目增多，断裂减少，髓腔间隙变小，但骨小梁密度仍小于空白组。

假手术+中剂量：给本发明组合物后，骨小梁数量增多，密度明显增高，髓腔间隙变小，皮质骨变厚，提示本发明对正常机体的骨质有改善。

本发明低、中、高剂量组：与造模组相比，本发明各组不同程度地改善了骨小梁的密度，其中实低剂量组病理改变接近造模组，中剂量组稍高于造模组，高剂量组骨小梁密度显著高于造模组，提示本发明可以有效提高骨小梁密度，对骨质疏松有治疗作用。

2.2.3 对去卵巢大鼠体重及子宫指数的影响

连续给药三个月后，分别观察各组大鼠体重，结果如表5，图6所示。本发明对造模引起的大鼠体重增加有明显的降低作用，其中本发明高剂量组与模型组有非常显著的统计学差异，低剂量和中剂量作用也较明显，但总体作用较己烯雌酚组较差；与造模组相比假手术组和己烯雌酚组子宫指数有显著性差异，提示：造模后子宫没有激素的支持就会萎缩，造模成功；本发明组合物具有雌激素样作用会改善子宫萎缩，提示本发明有子宫保护作用；但阳性药会过度作用于子宫引起子宫肿大（如图7所示），子宫增生，可能导致子宫癌、宫颈癌等。

3. 本发明辅助降血脂的作用。

3.1 测定指标：给药三个月后，仰卧位固定大鼠，取静脉血，3000r/min 离心15min，分离血清，分别测定血脂四项（HDL-C，LDL-C,TG,TC）。

3.2 实验结果

结果如表6，图8所示，甘油三酯（TG）无显著性差异；高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、总胆固醇（TC）与造模组相比本发明、阳性药组显著降低，结合3个月大鼠体重的变化，提示：本发明有辅助降脂作用。

4. 本发明辅助改善记忆的作用。

4.1 Morris水迷宫实验：

4.1.1 获得性训练将水池分为4个象限，平台置于其中一个象限区的中央。

（1）将大鼠头朝池壁放入水中，放入位置从二四象限的中点作为起始位置。记录大鼠找到水下平台的时间（s）和潜伏距离。在前几次的训练中，如果这个时间超过60s，则引导大鼠到平台。让大鼠在平台停留10s

（2）将动物移开、擦干。每只动物每天训练2次，两次训练之间间隔20min，连续训练5d。

4.1.2 空间探索训练是在最后一次获得性训练结束后的第二天，将平台撤除，开始 60 s的探索训练。将大鼠由原先平台象限的对侧放入水中。记录动物在目标象限（原先放平台象限）所花的时间和进入该象限的次数，以此作为空间记忆的检测指标。

4.2 实验结果

造模组和其他各组在获得性训练中有显著性差异，如图9所示，但表现为行为不稳定，进步速度稍慢，达到平台之前的潜伏期和潜伏距离较长，提示：本发明有辅助改善记忆的作用。

在移走平台的空间探索实验中测试经过原平台次数，与造模组相比其他各组均有显著的差别，如图10所示，单位时间经过平台的次数较多，提示：本发明有辅助改善记忆的作用。

5. 本发明护肝利胆的作用。

5.1 血生化指标：给药三个月后，仰卧位固定大鼠，取静脉血，3000r/min 离心15min，分离血清，肾功三项（UREA，UA，CRA），肝功五项（ALB，TP，ALT，ALP，D-BIL）

脏器标本：充分暴露并剥离取出肝脏、肾脏、脾脏，电子天平称重，计算脏器指数脏器指数=（脏器重量÷体重）×100%

5.2 实验结果

5.2.1 肝功五项

结果如表7，图11所示，总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）含量各组均无明显差异，阳性药略高；谷丙转氨酶（ALT）与正常组比造模组显著降低，可能与肝萎缩有关，本发明各组可以不同程度地将其改善至正常值，提示本发明有护肝作用；而阳性药转氨酶显著高于正常组，提示己烯雌酚引起干细胞损伤。碱性磷酸酶（ALP）和直接胆红素（D-BIL）的含量阳性药显著高于各组，提示：己烯雌酚可能引起胆道阻塞或肝硬化。当胆红素、转氨酶、碱性磷酸酶均升高，伴有肝增大提示为阳性药所致肝损伤，引起胆於伴炎症。

结果如表8，图12所示，肝脏指数中与造模组相比，正常组有显著性增高，说明摘除卵巢后大鼠肝萎缩；本发明也显著增高，将造模引起的肝萎缩恢复接近至正常水平，提示本发明有护肝作用，与正常组相比阳性药的肝指数显著增大，结合前面的肝功生化指标检测提示阳性药有很大的肝毒性。

5.2.2 肾功三项

结果如表9，图13所示。尿素氮（UREA）、尿酸（UA）、肌酐（CRA）各组均无显著性差异，本发明各组可以改善去势大鼠尿素氮高的现象到正常水平，有肾保护作用。但阳性药尿素氮和肌酐均偏高，提示：肾小球的滤过率下降，容易引起肾衰。

6. 本发明对空腹血糖和血常规的影响

6.1 实验内容

血常规：给药三个月后，仰卧位固定大鼠，取静脉血1ml到装有抗凝剂的离心管中，用全自动动物血液细胞分析仪进行测定血常规分析。

空腹血糖的测定：将大鼠禁食4h后，尾静脉取血，用血糖测试仪测试血糖值。

6.2 实验结果

6.2.1 测定空腹血糖

结果如表10，图14所示，空腹血糖值无显著性差异，提示本发明不会引起血糖升高。

6.2.2 血常规

6.2.2.1 白细胞的数值都在正常范围内，组间差异较大，可能与大鼠个体差异有关，提示：本发明对白细胞无影响，结果如表11，图15所示。

6.2.2.2 各组红细胞计数和血红蛋白无显著性差异，除阳性药组都在正常范围内，仅阳性药组略低于正常值下限，提示：本发明对红细胞无影响，阳性药可能引起轻度贫血，结果如表12，图16所示。

6.2.2.3 各组血小板计数均无显著性差异，只有阳性药数值略低，提示：本发明对血小板无影响，阳性药容易引起血小板生成减少如再生障碍性贫血。

Claims

1.一种增加骨密度的多功能食品组合物，其特征在于，该多功能食品组合物由如下重量份数的组分组成：葛根20～25份、枸杞子12～20份、黄精10～15份、山药4～6份、大枣4～6份、牡蛎2～3份、阿胶2～4份、玉竹2～4份、茯苓1～3份、甘草1～3份、木瓜1～3份、薏苡仁1～2份。

2.根据权利要求1所述的一种增加骨密度的多功能食品组合物，其特征在于，该多功能食品组合物由如下重量份数的组分组成：葛根20份、枸杞子20份、黄精10份、山药6份、大枣5份、牡蛎3份、阿胶2份、玉竹4份、茯苓3份、甘草1份、木瓜1份、薏苡仁1份。

3.根据权利要求1所述的一种增加骨密度的多功能食品组合物，其特征在于，该多功能食品组合物由如下重量份数的组分组成：葛根25份、枸杞子15份、黄精15份、山药5份、大枣6份、牡蛎2份、阿胶4份、玉竹2份、茯苓2份、甘草3份、木瓜3份、薏苡仁2份。

4.根据权利要求1所述的一种增加骨密度的多功能食品组合物，其特征在于，该多功能食品组合物由如下重量份数的组分组成：葛根24份、枸杞子12份、黄精12份、山药4份、大枣4份、牡蛎2份、阿胶2份、玉竹2份、茯苓1份、甘草2份、木瓜2份、薏苡仁1份。

5.根据权利要求1所述的一种增加骨密度的多功能食品组合物，其特征在于，该多功能食品组合物可以加入辅料制成不同的剂型。

6.根据权利要求1所述的一种增加骨密度的多功能食品组合物，其特征在于，该多功能食品组合物的剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂等，所用的辅料为一般药学上可接受的辅料。

7.根据权利要求1所述的一种增加骨密度的多功能食品组合物，其特征在于，该多功能食品组合物可应用到不同食品中。

8.一种增加骨密度的多功能食品组合物的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：

S1 .将所述各组分原料除杂、净化、晾干后备用；

S4 .牡蛎直接粉碎，过120目筛，得到细粉混合物C；

9.根据权利要求1所述的一种增加骨密度的多功能食品组合物，其特征在于，所述多功能食品组合物作为制备增加骨密度、辅助降血脂、辅助改善记忆或护肝利胆的保健品中的用途。