Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

CN108137691B - 特异性针对人类t-细胞免疫球蛋白和itim结构域(tigit)的抗体 - Google Patents

特异性针对人类t-细胞免疫球蛋白和itim结构域(tigit)的抗体 Download PDF

Info

Publication number
CN108137691B
CN108137691B CN201680051019.6A CN201680051019A CN108137691B CN 108137691 B CN108137691 B CN 108137691B CN 201680051019 A CN201680051019 A CN 201680051019A CN 108137691 B CN108137691 B CN 108137691B
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
seq
cancer
tigit
sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201680051019.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108137691A (zh
Inventor
奥夫尔·曼德尔波姆
诺亚·S·卡伊楠
平沙斯·楚克尔曼
斯提潘·约尼奇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Rijeka Faculty Of Medicine, University of
Yissum Research Development Co of Hebrew University of Jerusalem
Original Assignee
Rijeka Faculty Of Medicine, University of
Yissum Research Development Co of Hebrew University of Jerusalem
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rijeka Faculty Of Medicine, University of, Yissum Research Development Co of Hebrew University of Jerusalem filed Critical Rijeka Faculty Of Medicine, University of
Publication of CN108137691A publication Critical patent/CN108137691A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108137691B publication Critical patent/CN108137691B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本公开涉及结合人类T‑细胞免疫球蛋白和ITIM结构域(TIGIT)的分离的单克隆抗体。所述抗体的特征在于它们的CDR序列。还公开了人源化和双特异性抗TIGIT抗体。所选择并要求保护的抗体显示出优越的效应细胞杀灭活性，对TIGIT表现出高亲和性且因此阻止TIGIT受体的抑制效应，并因此适合用作抗癌药剂。

Description

特异性针对人类T-细胞免疫球蛋白和ITIM结构域(TIGIT)的 抗体
技术领域
本发明属于免疫治疗领域，并涉及结合人类TIGIT蛋白的单克隆抗体及其片段、编码这些抗体的多核苷酸序列和生产这些抗体的杂交瘤细胞。本发明还涉及包含这些抗体的治疗和诊断组合物，以及使用这些单克隆抗体治疗和诊断疾病、特别是癌症的方法。
背景技术
癌症免疫疗法通过例如使用特异性针对肿瘤细胞上的抗原的抗体、使用与抗原呈递细胞(APC)融合的癌细胞进行治疗或通过抗肿瘤T细胞的特异性活化，而用于产生和增强抗肿瘤免疫应答。
先天免疫系统的自然杀伤(NK)细胞在肿瘤的免疫监督中发挥重要作用(Smyth等，Nat Immunol.2001.Apr；2(4):293-9)。NK细胞直接和间接地杀死I类MHC缺陷的细胞、肿瘤、病毒、寄生虫和细菌。NK细胞的活性受到由抑制性和激活性NK细胞受体发出的信号的平衡的控制。存在几种识别各种不同配体的激活性NK细胞受体，所述配体可以是胁迫诱导的自体分子、病毒组分或肿瘤蛋白(Koch等，Trends in immunology 2013,34,182-191.；Seidel等，Cellular and molecular life sciences,2012)。然而，NK细胞通过激活性受体识别并消除肿瘤的准确机制尚未被充分了解，这部分是因为几种激活性NK细胞受体的肿瘤配体是未知的。相反，被抑制性NK细胞受体识别的配体的身份已被明确确定。NK细胞表达大量类型的抑制性受体(Gardiner C.M.,International journal of immunogenetics 2008,35,1-8.；Gonen-Gross等，PloS one 2010,5,e8941；Lankry等，Methods in molecular biology2010,612,249-273)。大多数这些抑制性受体属于KIR(杀伤细胞抑制性受体)家族，识别经典和非经典的I类主要组织相容性复合物(MHC)蛋白两者。KIR随机表达在NK细胞表面上，因此在给定的个体中NK细胞表达所选KIR。NK细胞还表达不识别I类MHC蛋白的其他抑制性受体，例如CEACAM1、CD300a和TIGIT(T-细胞免疫球蛋白和ITIM结构域)。
人类TIGIT蛋白表达在所有NK细胞以及其他免疫细胞例如CD8+调节性T(Treg)细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞上(Stanietsky等，PNAS.2009,106,17858-17863)。它识别两种非常明确确定的配体：脊髓灰质炎病毒受体(PVR，CD155)和连接蛋白(Nectin)2(PVRL2/CD112)，它们在正常上皮细胞上表达，并且在各种不同的肿瘤细胞上过表达。这些配体的识别导致发送由TIGIT的细胞质尾部中存在的以下两个基序所介导的抑制性信号：免疫受体尾部酪氨酸(ITT)样基序和免疫优势的基于酪氨酸的抑制性(ITIM)基序(Liu等，Celldeath and differentiation 2013.,20,456-464；Stanietsky等，European journal ofimmunology,2013.43,2138-2150)。TIGIT通过它的ITIM结构域来抑制NK细胞毒性，引起肿瘤细胞的免疫逃避机制。
NK细胞上的TIGIT表达也充当结合厌氧革兰氏阴性细菌具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum)(F.nucleatum)的Fap2蛋白的受体。F.Necleatum与TIGIT之间的相互作用引起NK细胞毒性活性降低。梭杆菌通常在具有肠道炎症和癌症的患者中富集。已提出，具核梭杆菌与TIGIT的结合促进肿瘤逃避NK相关的细胞毒性(Gur等，Immunity.2015February 17；42(2):344–355)，为肿瘤内发现的细菌、特别是具核梭杆菌如何促进肿瘤增殖并增强肿瘤进展提供了解释(Jobin,Cancer discovery.2013；3:384–387；Sears和Garrett，Cell Host Microbe.2014；15:317–328)。
最近，已显示TIGIT和PD-1在黑素瘤患者中损害肿瘤抗原特异性CD8+T细胞(Chauvin等，J Clin Invest.2015；125(5):2046–2058)。此外，在大量小鼠和人类实体肿瘤(包括肺癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌和肾癌)中使用基因表达分析，已报道了CD8+肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)表达TIGIT。升高的TIGIT表达似乎与CD8和PD-1表达相关。在小鼠肿瘤和3种人类肿瘤样品(包括非小细胞肺癌和结肠癌)中观察到TIGIT在CD8+TIL上的表达(Johnston RJ等，Cancer Cell.2014；26(6):923–937)。
已提出，在急性髓性白血病(AML)中TIGIT对功能性T-细胞损伤有贡献，并且与不良的临床结果有关。最近由Kong等人发表的研究(Clin Cancer Res；22(12)；3057-66)表明，阻断TIGIT以恢复T-细胞功能和抗肿瘤免疫力可能代表了一种新的有效的白血病治疗方案。
WO 2004/024068描述了在晚些时候被鉴定为TIGIT的PRO52254分子的激动剂和拮抗剂，其用于治疗自体免疫疾病和癌症，但没有公开实际抗体。
WO 2006/124667公开了通过阻断TIGIT与其配体PVR结合的单克隆抗体来调节蛋白zB7R1(TIGIT)。没有提供结合亲和性。
WO 2009/126688公开了TIGIT及其配体PVR作为调节免疫应答的靶点，并提出了将这些蛋白的激动剂和拮抗剂用于免疫相关疾病和炎性疾病的诊断和治疗。
WO 2015/009856公开了程序性死亡1多肽(PD-1)拮抗剂和抗TIGIT抗体的组合，其用于治疗癌症和慢性感染。
WO 2016/028656公开了抗TIGIT抗体以及这些抗体在诸如癌症和传染病的疾病的治疗中的用途。
对于提供能够单独地或与其他药剂相组合，通过抑制人类TIGIT的抑制活性而使免疫系统的细胞攻击肿瘤细胞的其他并且更加有效、特异、安全和/或稳定的药剂，存在着未满足的需求。
发明内容
本发明提供了识别免疫细胞抑制性受体“T-细胞免疫球蛋白和ITIM结构域”(TIGIT)并抑制它对淋巴细胞例如自然杀伤(NK)细胞和T-细胞的抑制活性的药剂。这些药剂是例如抗体及其片段，特征在于具有独特的成组CDR序列，对人类TIGIT的超常的高亲和性和高特异性，并且作为独立的疗法和与其他抗TIGIT抗体和/或其他抗癌药剂相组合，可用于癌症免疫疗法中，用于对抗肿瘤免疫逃避。
与例如小鼠TIGIT相比，本发明的某些单克隆抗体(mAb)表现出对人类TIGIT的绝对特异性，并且对人类TIGIT蛋白的亲和性高于天然配体PVR(CD155)对人类TIGIT的亲和性。这使得这些优越的mAb成为用于癌症免疫疗法的有价值的候选者，能够以较低剂量给药并具有较少副作用。
本发明的某些单克隆抗体不仅能够干扰人类TIGIT与其主要配体PVR(CD155)的结合，而且能够至少在某种程度上抑制TIGIT与它的其他配体例如CD112和CD113中的至少一者的结合。
本文描述的某些抗TIGIT单克隆抗体当与其他抗癌药剂例如其他免疫调节蛋白或受体抑制剂组合时具有协同效应。非限制性实例是特异性针对细胞毒性T-淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4，也被称为CD152)的mAb和表皮生长因子受体抑制剂(EGFR)。
一方面，本发明提供了一种分离的抗体或其至少包含抗原结合部分的片段，所述分离的抗体或其至少包含抗原结合部分的片段以至少10-8M的亲和性识别人类TIGIT，并抑制它与至少一种配体的相互作用。
根据某些实施方式，所述分离的抗体是单克隆抗体(mAb)或其片段。
根据某些实施方式，所述分离的单克隆抗体或片段包含被命名为VSIG9#1(或Vsig9.01)的单克隆抗体的互补决定区(CDR)序列，即SEQ ID NO：7中所示的重链可变区中包含的三个CDR序列和SEQ ID NO：8中所示的轻链可变区中包含的三个CDR序列。CDR序列的确定可以按照本领域中已知的任何方法来进行，包括但不限于被称为KABAT、Chothia和IMGT的方法。所选的一组CDR可以包括通过超过一种的方法鉴定的序列，即例如某些CDR序列可以使用KABAT来确定，并且另一些CDR可以使用序列IMGT来确定。
根据某些特定实施方式，所述分离的单克隆抗体或片段包括包含选自GYTFTSYGIS(SEQ ID NO：1)和TSYGIS(SEQ ID NO：11)的序列的重链CDR1(HCCDR1)序列，包含序列EIYPRSGNTYYNEKFKG(SEQ ID NO：2)的重链CDR2(HCCDR2)，包含序列KGPYYTKNEDY(SEQ IDNO：3)的重链CDR3(HCCDR3)，包含序列RASEHIYYSLA(SEQ ID NO：4)的轻链CDR1(LCCDR1)，包含序列NANSLED(SEQ ID NO：5)的轻链CDR2(LCCDR2)和包含序列KQAYDVPRT(SEQ ID NO：6)的轻链CDR3(LCCDR3)，及其在高变区(HVR)序列中包含不超过5％的氨基酸替换、缺失和/或插入的类似物。
根据某些特定实施方式，所述分离的单克隆抗体或片段包含具有序列GYTFTSYGIS(SEQ ID NO：1)的重链CDR1(HCCDR1)序列，具有序列EIYPRSGNTYYNEKFKG(SEQ ID NO：2)的重链CDR2(HCCDR2)，具有序列KGPYYTKNEDY(SEQ ID NO：3)的重链CDR3(HCCDR3)，具有序列RASEHIYYSLA(SEQ ID NO：4)的轻链CDR1(LCCDR1)，具有序列NANSLED(SEQ ID NO：5)的轻链CDR2(LCCDR2)和具有序列KQAYDVPRT(SEQ ID NO：6)的轻链CDR3(LCCDR3)，及其在高变区(HVR)序列中包含不超过5％的氨基酸替换、缺失和/或插入的类似物。
根据某些实施方式，所述分离的单克隆抗体或其片段包含具有下述序列的重链可变区：QVQLQESGAELARPGASVKLSCKASGYTFTSYGISWVKQRTGQGLEWIGEIYPRSGNTYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYFCARKGPYYTKNEDYWGQGTILTVSS(SEQ ID NO：7)，或其与所述重链可变区序列具有至少90％序列同一性的类似物或衍生物。
根据某些实施方式，所述分离的单克隆抗体或其片段包含具有下述序列的轻链可变区：DIQMTQSPASLAASVGETVTITCRASEHIYYSLAWYQQKQGKSPQLLIYNANSLEDGVPSRFSGSGSGTQYSMKINSMQPEDTATYFCKQAYDVPRTFGGGTKLEIKRADAAPTVS(SEQ ID NO：8)，或其与所述轻链可变区序列具有至少90％序列同一性的类似物。
根据特定实施方式，所述分离的单克隆抗体或其片段包含具有下述序列的重链可变区：QVQLQESGAELARPGASVKLSCKASGYTFTSYGISWVKQRTGQGLEWIGEIYPRSGNTYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYFCARKGPYYTKNEDYWGQGTILTVSS(SEQ ID NO：7)，和具有下述序列的轻链可变区：DIQMTQSPASLAASVGETVTITCRASEHIYYSLAWYQQKQGKSPQLLIYNANSLEDGVPSRFSGSGSGTQYSMKINSMQPEDTATYFCKQAYDVPRTFGGGTKLEIKRADAAPTVS(SEQ ID NO：8)，或其与所述轻链和/或重链序列具有至少90％序列同一性的类似物。
本发明还涵盖了能够以高亲和性结合人类TIGIT蛋白内与mAb VSIG9#1结合的表位的抗体或抗体片段。
根据其他实施方式，所述分离的单克隆抗体包含被命名为#4(或258-cs1#4)的单克隆抗体的互补决定区(CDR)序列，即SEQ ID NO：18中所示的重链可变区中包含的三个CDR序列和SEQ ID NO：19中所示的轻链可变区中包含的三个CDR序列。
根据某些特定实施方式，所述分离的单克隆抗体包括包含序列IYCIH(SEQ ID NO：12)的重链CDR1(HCCDR1)，包含序列EISPSNGRTIYNEKFKN(SEQ ID NO：13)的重链CDR2(HCCDR2)，包含序列SDGYDGYYFDY(SEQ ID NO：14)的重链CDR3(HCCDR3)，包含序列RASQEISGYLN(SEQ ID NO：15)的轻链CDR1(LCCDR1)，包含序列AASTLDS(SEQ ID NO：16)的轻链CDR2(LCCDR2)和包含序列LQYASYPRT(SEQ ID NO：17)的轻链CDR3(LCCDR3)，及其在高变区(HVR)序列中包含不超过5％的氨基酸替换、缺失和/或插入的类似物。
根据某些特定实施方式，所述分离的单克隆抗体包含具有序列IYCIH(SEQ ID NO：12)的重链CDR1(HCCDR1)，具有序列EISPSNGRTIYNEKFKN(SEQ ID NO：13)的重链CDR2(HCCDR2)，具有序列SDGYDGYYFDY(SEQ ID NO：14)的重链CDR3(HCCDR3)，具有序列RASQEISGYLN(SEQ ID NO：15)的轻链CDR1(LCCDR1)，具有序列AASTLDS(SEQ ID NO：16)的轻链CDR2(LCCDR2)和具有序列LQYASYPRT(SEQ ID NO：17)的轻链CDR3(LCCDR3)，及其类似物和衍生物。
根据某些实施方式，所述分离的单克隆抗体或其片段包含具有下述序列的重链可变区：QVQLLQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTIYCIHWVKQRPGQGLEWIGEISPSNGRTIYNEKFKNKATLTIDKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYCCAISDGYDGYYFDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO：18)，或其与所述重链序列具有至少90％序列同一性的类似物或衍生物。
根据某些实施方式，所述分离的单克隆抗体或其片段包含具有下述序列的轻链可变区：DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQEISGYLNWLQQKPDGTIKRLIYAASTLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISRLESEDFADYYCLQYASYPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：19)，或其与所述轻链序列具有至少90％序列同一性的类似物或衍生物。
本发明还涵盖了能够以高亲和性结合人类TIGIT蛋白内与mAb#4结合的表位的抗体或抗体片段。
上面描述的分离的mAb抗体和抗体片段的类似物和衍生物也在本发明的范围之内。具体来说，包含选自SEQ ID NO：7、8、18和19的序列中所示的至少一个可变区的分离的mAb或其片段的类似物也在本发明的范围之内。
根据某些实施方式，所述抗体或抗体片段类似物与参比抗体序列的高变区具有至少95％的序列同一性，或者与参比抗体的重链或轻链可变区具有至少90％的序列同一性。
根据某些实施方式，所述分离的抗体或其片段的类似物或衍生物与参比抗体序列的可变区具有至少91、92、93、94、95、96、97、98或99％的序列同一性。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
另一方面，本发明提供了一种识别TIGIT的单克隆抗体或抗体片段，其包含含有轻链的三个CDR和重链的三个CDR的抗原结合结构域(ABD)，其中所述CDR与下述抗体的ABD的CDR具有至少90％的序列同一性或相似性：(i)包含SEQ ID NO：7的重链可变区和SEQ IDNO：8的轻链可变区的单克隆小鼠抗体(在本文中被鉴定为VSIG9#1或Vsig9.01克隆)；或(ii)包含SEQ ID NO：18的重链可变区和SEQ ID NO：19的轻链可变区的单克隆小鼠抗体(在本文中被鉴定为#4或258-CS1#4克隆)。根据某些实施方式，所述CDR与VSIG9#1或258-CS1#4的CDR具有至少91％、至少92％、至少93％或至少94％的序列同一性或相似性。根据其他实施方式，所述ABD与VSIG9#1或258-CS1#4具有至少95％、至少96％、或至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性或相似性。
根据某些实施方式，本发明的抗体或抗体片段包含SEQ ID NO：7中所示的重链可变区或与所述序列具有至少95％序列相似性的类似物。根据其他实施方式，本发明的抗体或抗体片段包含SEQ ID NO：18中所示的重链可变区或与所述序列具有至少95％序列相似性的类似物。
根据某些实施方式，所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO：8中所示的轻链可变区或与所述序列具有至少95％序列相似性的类似物。根据其他实施方式，所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO：19中所示的轻链可变区或与所述序列具有至少95％序列相似性的类似物。
根据某些实施方式，所述抗体或抗体片段包含重链和轻链，其中(i)所述重链包含SEQ ID NO：7并且所述轻链包含SEQ ID NO：8；或者(ii)所述重链包含SEQ ID NO：18并且所述轻链包含SEQ ID NO：19。与所述重链或轻链具有至少95％序列相似性的抗体或片段类似物也被包括在内。
根据某些实施方式，所述类似物与上述抗体轻链或重链可变区具有至少96、97、98或99％的序列同一性。根据某些实施方式，所述类似物包含对高变区的一个或多个CDR序列(即SEQ ID No：1-6和12-17中所示的任一个CDR序列)的不超过一个氨基酸替换、缺失或添加。根据某些实施方式，所述氨基酸替换是保守替换。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
根据某些实施方式，所述抗体或抗体片段包含具有上面定义的轻链和重链区的高变区(HVR)，其中1、2、3、4或5个氨基酸被替换、缺失和/或添加。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。根据特定实施方式，所述抗体或抗体片段包含具有选自SEQ ID NO：1-6和12-17的一组CDR序列的高变区，其中不超过一个氨基酸被替换、缺失或添加到至少一个CDR序列。根据某些实施方式，所述氨基酸替换是保守替换。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
根据某些实施方式，所述抗体或抗体片段能够识别在T-细胞上表达的TIGIT蛋白。
根据某些实施方式，所述抗体或抗体片段能够识别在树突状或NK细胞上表达的人类TIGIT蛋白。
根据某些实施方式，所述抗体或抗体片段能够识别在调节性T细胞(Treg)上表达的人类TIGIT蛋白。
根据某些实施方式，所述抗体或抗体片段能够识别在CD8+肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)上表达的人类TIGIT蛋白。
根据某些实施方式，所述抗体或抗体片段能够抑制人类TIGIT结合到在T-细胞上表达的配体。
根据某些实施方式，所述抗体或抗体片段能够抑制人类TIGIT结合到在树突状或NK细胞上表达的配体。
根据其他实施方式，所述抗体或抗体片段能够抑制人类TIGIT结合到在肿瘤细胞上表达的配体。
根据某些实施方式，所述抗体或抗体片段能够抑制人类TIGIT与选自下列的配体的结合：PVR(CD155)，PVRL2(CD112/连接蛋白2)，PVRL3(CD113)及其任何组合。
根据某些实施方式，所述分离的抗体或其片段以至少约50nM的解离常数(Kd)结合到人类TIGIT蛋白。根据某些实施方式，所述分离的抗体或其片段以至少1nM的结合亲和性结合到人类TIGIT蛋白。因此，根据某些实施方式，本发明的抗体或抗体片段对人类TIGIT具有至少约5x10-8M的亲和性。根据其他实施方式，抗体或抗体片段以10-8M、5x10-9M、10-9M、5x10-10M、10-10M、5x10-11M、10-11M或甚至更高的亲和性结合到人类TIGIT。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
根据特定实施方式，所述mAb选自：非人类抗体，人源化抗体，人类抗体，嵌合抗体，双特异性抗体和至少包含抗体的抗原结合部分的抗体片段。根据特定实施方式，所述抗体片段选自：Fab，Fab'，F(ab')2，Fd，Fd'，Fv，dAb，分离的CDR区，单链抗体(scab)，“双体抗体”，和“线性抗体”。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
根据某些实施方式，所述抗体是能够结合到两个不同表位或抗原的双特异性抗体或双特异性抗体片段。
根据某些实施方式，双特异性mAb或双特异性mAb片段包含两个不同的高变区(HVR)，其各自包含一组不同的CDR序列。
根据某些实施方式，所述双特异性mAb或片段包含两种不同的抗TIGIT抗体的结合结构域。这些实施方式的双特异性mAb或片段的每个HVR能够结合到人类TIGIT蛋白的不同表位。
根据某些实施方式，双特异性mAb或片段的一个HVR包含单克隆抗体VSIG9#1的在SEQ ID NO：7中所示的重链序列和SEQ ID NO：8中所示的轻链序列中包含的CDR；并且第二个HVR包含单克隆抗体#4(或258-cs1#4)的在SEQ ID NO：18中所示的重链序列和SEQ IDNO：19中所示的轻链序列中包含的CDR。
根据某些实施方式，双特异性mAb或其片段的一个HVR包含下述CDR：SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6；并且第二个HVR包含下述CDR：SEQ ID NO：12，SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17。
根据其他实施方式，本发明的双特异性抗体或双特异性抗体片段的一个HVR结合人类TIGIT，并且第二个HVR结合另一种蛋白，例如参与免疫调节的蛋白或肿瘤抗原。根据某些特定实施方式，所述双特异性抗体的第二个HVR结合检验点(checkpoint)分子。
根据某些实施方式，所述抗体或抗体片段包含选自小鼠IgG2a、小鼠IgG2b、小鼠IgG3、人类IgG1、人类IgG2、人类IgG3和人类IgG4的构架序列。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
根据其他实施方式，所述抗体是人源化抗体，或者所述抗体片段是人源化抗体的片段。
根据某些实施方式，所述人源化抗体或抗体片段包含选自人类IgG1、人类IgG2、人类IgG3和人类IgG4的构架序列。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
根据其他实施方式，提供了一种抗体偶联物，其包含识别TIGIT并抑制与它的配体结合的至少一种抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含下述互补决定区(CDR)序列：(i)具有选自GYTFTSYGIS(SEQ ID NO：1)和TSYGIS(SEQ ID NO：11)的序列的重链CDR1，具有序列EIYPRSGNTYYNEKFKG(SEQ ID NO：2)的重链CDR2，具有序列KGPYYTKNEDY(SEQ IDNO：3)的重链CDR3，具有序列RASEHIYYSLA(SEQ ID NO：4)的轻链CDR1，具有序列NANSLED(SEQ ID NO：5)的轻链CDR2，以及具有序列KQAYDVPRT(SEQ ID NO：6)的轻链CDR3；或(ii)具有序列IYCIH(SEQ ID NO：12)的重链CDR1，具有序列EISPSNGRTIYNEKFKN(SEQ ID NO：13)的重链CDR2，具有序列SDGYDGYYFDY(SEQ ID NO：14)的重链CDR3，具有序列RASQEISGYLN(SEQID NO：15)的轻链CDR1，具有序列AASTLDS(SEQ ID NO：16)的轻链CDR2，以及具有序列LQYASYPRT(SEQ ID NO：17)的轻链CDR3。
根据某些实施方式，所述偶联物包含载体蛋白。
根据本发明的另一方面，提供了编码对TIGIT具有高亲和性和特异性的单克隆抗体的多核苷酸序列，以及携带这些多核苷酸序列的载体和宿主细胞。
根据某些实施方式，所述多核苷酸序列编码能够结合到人类TIGIT蛋白内与下述抗体结合的表位的抗体或抗体片段或链：(i)具有SEQ ID NO：7的重链可变区和SEQ ID NO：8的轻链可变区的小鼠单克隆抗体(在本文中被鉴定为VSIG9#1)；或(ii)具有SEQ ID NO：18的重链可变区和SEQ ID NO：19的轻链可变区的小鼠单克隆抗体(在本文中被鉴定为258-CS1#4)。
根据某些实施方式，所述多核苷酸序列编码包含SEQ ID NO：7中所示的序列的抗体或抗体片段或链。根据某些实施方式，所述多核苷酸序列编码包含SEQ ID NO：8中所示的序列的抗体或抗体片段或链。
根据其他实施方式，所述多核苷酸序列编码包含SEQ ID NO：18中所示的序列的抗体或抗体片段或链。根据其他实施方式，所述多核苷酸序列编码包含SEQ ID NO：19中所示的序列的抗体或抗体片段或链。
根据某些实施方式，本发明的多核苷酸序列编码包含下述6个CDR序列的抗体或抗体片段或链：(i)选自GYTFTSYGIS(SEQ ID NO：1)和TSYGIS(SEQ ID NO：11)的重链CDR1序列，具有序列EIYPRSGNTYYNEKFKG(SEQ ID NO：2)的重链CDR2，具有序列KGPYYTKNEDY(SEQID NO：3)的重链CDR3，具有序列RASEHIYYSLA(SEQ ID NO：4)的轻链CDR1，具有序列NANSLED(SEQ ID NO：5)的轻链CDR2，以及具有序列KQAYDVPRT(SEQ ID NO：6)的轻链CDR3；或(ii)具有序列IYCIH(SEQ ID NO：12)的重链CDR1，具有序列EISPSNGRTIYNEKFKN(SEQ ID NO：13)的重链CDR2，具有序列SDGYDGYYFDY(SEQ ID NO：14)的重链CDR3，具有序列RASQEISGYLN(SEQID NO：15)的轻链CDR1，具有序列AASTLDS(SEQ ID NO：16)的轻链CDR2，以及具有序列LQYASYPRT(SEQ ID NO：17)的轻链CDR3。
根据某些实施方式，上文定义的多核苷酸序列编码选自下述的分子：抗体或至少包含抗原结合部分的抗体片段，包含所述抗体或抗体片段的抗体偶联物，以及双特异性抗体。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
根据某些实施方式，提供了一种多核苷酸序列，其包含SEQ ID NO：9中所示的单克隆抗体重链可变区的序列或其具有至少90％序列同一性的变体：
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGAGCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGCTATGGTATAAGCTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTATCCCAGAAGTGGTAATACTTACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCGTACATGGAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGAAAGGGACCCTACTATACTAAGAACGAGGACTACTGGGGCCAAGGCACCATTCTCACAGTCTCCTCA(SEQ ID NO：9)。
根据某些实施方式，提供了一种多核苷酸序列，其包含SEQ ID NO：20中所示的单克隆抗体重链可变区的序列或其具有至少90％序列同一性的变体：
CAGGTCCAACTGCTGCAGCCTGGGGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCATCTACTGTATACACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTAGTCCTAGCAACGGTCGTACTATCTACAATGAGAAGTTCAAGAACAAGGCCACACTGACTATAGACAAATCCTCCACCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTGCTGTGCAATATCGGATGGTTACGACGGATACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA(SEQ ID NO：20)。
根据某些实施方式，提供了一种多核苷酸序列，其包含SEQ ID NO：10中所示的单克隆抗体轻链可变区的序列或其具有至少90％序列同一性的变体：
GACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTGGCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGAGCACATTTACTACAGTTTAGCATGGTATCAGCAGAAGCAAGGGAAATCTCCTCAGCTCCTGATCTATAATGCAAACAGCTTGGAAGATGGTGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACACAATATTCTATGAAGATCAACAGCATGCAGCCTGAAGATACCGCAACTTATTTCTGTAAACAGGCTTATGACGTTCCTCGGACCTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAACGGG CTGATGCTGCACCAACTGTATCC(SEQ ID NO：10)。
根据某些实施方式，提供了一种多核苷酸序列，其包含SEQ ID NO：21中所示的单克隆抗体轻链可变区的序列或其具有至少90％序列同一性的变体：
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCTTATCTGCCTCTCTGGGAGAAAGAGTCAGTCTCACTTGTCGGGCAAGTCAGGAAATTAGTGGTTACTTAAACTGGCTTCAGCAGAAACCAGATGGAACTATTAAACGCCTGATCTACGCCGCATCCACTTTAGATTCTGGTGTCCCAAAAAGGTTCAGTGGCAGTAGGTCTGGGTCAGATTATTCTCTCACCATCAGCAGACTTGAGTCTGAAGATTTTGCAGACTATTACTGTCTACAATATGCTAGTTATCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA(SEQ ID NO：21)。
根据某些实施方式，本发明提供了一种多肽，其包含由上面所公开的至少一种多核苷酸序列编码的至少一个序列。
另一方面，本发明提供了一种核酸构建物，其包含编码本发明的至少一种抗体链或其片段的核酸分子。根据某些实施方式，所述核酸构建物是质粒。
根据某些实施方式，所述质粒包含SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：20中所示的多核苷酸序列。
根据其他实施方式，所述质粒包含SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：21中所示的多核苷酸序列。
另一方面，本发明提供了一种杂交瘤细胞，其能够生产包含上面定义的特定CDR序列和/或特定重链和轻链可变区的抗体或抗体片段。
根据某些实施方式，提供了一种杂交瘤细胞，其包含上文公开的至少一种多核苷酸序列。
根据某些实施方式，所述杂交瘤能够生产包含下述6个互补决定区(CDR)序列的单克隆抗体：(i)选自GYTFTSYGIS(SEQ ID NO：1)和TSYGIS(SEQ ID NO：11)的重链CDR1序列，具有序列EIYPRSGNTYYNEKFKG(SEQ ID NO：2)的重链CDR2，具有序列KGPYYTKNEDY(SEQ IDNO：3)的重链CDR3，具有序列RASEHIYYSLA(SEQ ID NO：4)的轻链CDR1，具有序列NANSLED(SEQ ID NO：5)的轻链CDR2，以及具有序列KQAYDVPRT(SEQ ID NO：6)的轻链CDR3；或(ii)具有序列IYCIH(SEQ ID NO：12)的重链CDR1，具有序列EISPSNGRTIYNEKFKN(SEQ ID NO：13)的重链CDR2，具有序列SDGYDGYYFDY(SEQ ID NO：14)的重链CDR3，具有序列RASQEISGYLN(SEQID NO：15)的轻链CDR1，具有序列AASTLDS(SEQ ID NO：16)的轻链CDR2，以及具有序列LQYASYPRT(SEQ ID NO：17)的轻链CDR3。
本发明的抗体或其片段可以被附连到细胞毒性组成部分、放射活性组成部分或可识别性组成部分。
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含以高亲和性和特异性识别TIGIT并抑制它与它的配体之一相互作用的至少一种抗体、抗体片段或其偶联物作为活性成分，以及任选地至少一种可药用赋形剂、稀释剂、盐或载体。
根据某些实施方式，所述药物组合物包含能够结合到人类TIGIT蛋白内与选自下列的小鼠单克隆抗体结合的表位的单克隆抗体或其片段：(i)具有SEQ ID NO：7的重链可变区和SEQ ID NO：8的轻链可变区的抗体(在本文中被鉴定为VSIG9#1或Vsig9.01)；以及(ii)具有SEQ ID NO：18的重链可变区和SEQ ID NO：19的轻链可变区的抗体(在本文中被鉴定为#4或258-CS1#4)。
根据某些实施方式，所述单克隆抗体或其抗体片段包含6个CDR：(i)选自GYTFTSYGIS(SEQ ID NO：1)和TSYGIS(SEQ ID NO：11)的重链CDR1序列，具有序列EIYPRSGNTYYNEKFKG(SEQ ID NO：2)的重链CDR2，具有序列KGPYYTKNEDY(SEQ ID NO：3)的重链CDR3，具有序列RASEHIYYSLA(SEQ ID NO：4)的轻链CDR1，具有序列NANSLED(SEQ ID NO：5)的轻链CDR2，以及具有序列KQAYDVPRT(SEQ ID NO：6)的轻链CDR3；或(ii)具有序列IYCIH(SEQ ID NO：12)的重链CDR1，具有序列EISPSNGRTIYNEKFKN(SEQ ID NO：13)的重链CDR2，具有序列SDGYDGYYFDY(SEQ ID NO：14)的重链CDR3，具有序列RASQEISGYLN(SEQ ID NO：15)的轻链CDR1，具有序列AASTLDS(SEQ ID NO：16)的轻链CDR2，以及具有序列LQYASYPRT(SEQ IDNO：17)的轻链CDR3。
根据某些实施方式，所述药物组合物包含一种单克隆抗体或其片段，所述单克隆抗体或其片段包含具有下述序列的重链可变区：
(i)
QVQLQESGAELARPGASVKLSCKASGYTFTSYGISWVKQRTGQGLEWIGEIYPRSGNTYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYFCARKGPYYTKNEDYWGQGTILTVSS(SEQ ID NO：7)；
或(ii)
QVQLLQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTIYCIHWVKQRPGQGLEWIGEISPSNGRTIYNEKFKNKATLTIDKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYCCAISDGYDGYYFDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO：18)。
根据某些实施方式，所述药物组合物包含一种单克隆抗体或其片段，所述单克隆抗体或其片段包含具有下述序列的轻链可变区：
(i)
DIQMTQSPASLAASVGETVTITCRASEHIYYSLAWYQQKQGKSPQLLIYNANSLEDGVPSRFSGSGSGTQYSMKINSMQPEDTATYFCKQAYDVPRT FGGGTKLEIKRADAAPTVS(SEQ ID NO：8)；
或(ii)
DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQEISGYLNWLQQKPDGTIKRLIYAASTLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISRLESEDFADYYCLQYASYPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：19)。
根据特定实施方式，所述药物组合物包含一种单克隆抗体或其片段，所述单克隆抗体或其片段包含具有下述序列的重链可变区：
QVQLQESGAELARPGASVKLSCKASGYTFTSYGISWVKQRTGQGLEWIGEIYPRSGNTYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYFCARKGPYYTKNEDYWGQGTILTVSS(SEQ ID NO：7)，
和具有下述序列的轻链可变区：
DIQMTQSPASLAASVGETVTITCRASEHIYYSLAWYQQKQGKSPQLLIYNANSLEDGVPSRFSGSGSGTQYSMKINSMQPEDTATYFCKQAYDVPRT FGGGTKLEIKRADAAPTVS(SEQ ID NO：8)。
根据另外的特定实施方式，所述药物组合物包含一种单克隆抗体或其片段，所述单克隆抗体或其片段包含具有下述序列的重链可变区：
QVQLLQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTIYCIHWVKQRPGQGLEWIGEISPSNGRTIYNEKFKNKATLTIDKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYCCAISDGYDGYYFDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO：18)，
和具有下述序列的轻链可变区：
DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQEISGYLNWLQQKPDGTIKRLIYAASTLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISRLESEDFADYYCLQYASYPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：19)。
根据某些实施方式，所述药物组合物包含至少一种双特异性抗体，所述双特异性抗体包含两个不同的HVR区，其中至少一个所述HVR以高亲和性和选择性结合人类TIGIT。
根据某些实施方式，第二个HVR结合人类TIGIT上的另一个表位或结合不同的抗原。
根据某些实施方式，一个HVR包含被命名为VSIG9#1(或Vsig9.01)的抗体的CDR序列，第二个HVR包含被命名为258-cs1#4(也被命名为#4)的抗体的CDR序列。
根据某些实施方式，一个HVR包含被命名为VSIG9#1的抗体的6个CDR序列或被命名为258-cs1#4的抗体的6个CDR，第二个HVR包含能够结合人类TIGIT或不同抗原的6个不同的CDR。
根据某些实施方式，所述药物组合物包含识别人类TIGIT的至少两种抗体或抗体片段的组合，其中至少一种所述抗体对人类TIGIT具有高亲和性和选择性。根据某些实施方式，对人类TIGIT具有高亲和性和选择性的所述至少一种抗体或抗体片段包含被命名为VSIG9#1(或Vsig9.01)或258-cs1#4(也被命名为#4)的抗体的CDR序列。
根据某些特定实施方式，一种单克隆抗体或抗体片段包含被命名为VSIG9#1的抗体的CDR序列，第二种抗体或抗体片段包含被命名为258-cs1#4(或#4)的抗体的CDR序列。
根据其他实施方式，所述组合物包含一种本发明的特异性结合TIGIT的mAb或片段，以及一种特异性结合不同抗原例如细胞受体、肿瘤抗原或免疫调节剂的mAb或片段。
还提供了包含本发明的至少一种抗体、抗体片段或抗体偶联物的药物组合物，其用于通过抑制TIGIT配体与NK细胞的结合来恢复NK细胞毒性。
根据某些实施方式，本发明的药物组合物用于癌症免疫疗法中或用于增强免疫应答。
另一方面，本发明提供了一种通过使用上文定义的单克隆抗体或抗体片段来抑制人类TIGIT与至少一种配体的结合的方法。
根据某些实施方式，所述抗体或抗体片段能够抑制TIGIT与选自PVR(CD155)、PVRL2(CD112)、PVRL3(CD113)及其任何组合的配体的结合。
根据某些实施方式，提供了一种通过抑制TIGIT与NK细胞上表达的至少一种配体的结合来恢复NK细胞毒性的方法，所述方法包括向需要的对象给药包含以高亲和性和特异性识别人类TIGIT的至少一种抗体、抗体片段或抗体偶联物的药物组合物。
根据某些实施方式，所述抗体、抗体片段或抗体偶联物能够抑制人类TIGIT结合到在T-细胞上表达的配体。
根据某些实施方式，所述抗体、抗体片段或抗体偶联物能够抑制人类TIGIT结合到在树突状或NK细胞上表达的配体。
根据其他实施方式，所述抗体、抗体片段或抗体偶联物能够抑制人类TIGIT结合到在肿瘤细胞上表达的配体。
另一方面，本发明提供了用于在需要的对象中增强免疫应答的方法，所述方法包括向所述对象给药治疗有效量的上文定义的单克隆抗体、抗体片段或抗体偶联物。
另一方面，本发明提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括向需要的对象给药包含以高亲和性和特异性识别人类TIGIT并且能够抑制所述人类TIGIT与它的配体结合的至少一种抗体、抗体片段或其偶联物的药物组合物。
根据某些实施方式，所述癌症选自肺癌、甲状腺癌、乳腺癌、结肠癌、黑素瘤、前列腺癌、肝癌、膀胱癌、肾癌、宫颈癌、胰腺癌、白血病、淋巴瘤、髓样癌、卵巢癌、子宫癌、肉瘤、胆管癌、非小细胞肺癌和子宫内膜细胞癌。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
根据某些实施方式，所述癌症选自黑素瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌、结肠癌和肝癌。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
根据某些特定实施方式，所述癌症是黑素瘤。
根据某些实施方式，所述癌症是实体癌。根据某些特定实施方式，所述实体癌选自黑素瘤(皮肤)、肺癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌和肾癌。
根据某些实施方式，所述癌症是白血病。根据某些特定实施方式，所述癌症是急性髓性白血病(AML)。
根据某些实施方式，给药的药物组合物中的抗体选自：(i)包含SEQ ID NO：7中所示的重链可变区中所包含的CDR序列和SEQ ID NO：8中所示的轻链可变区中所包含的CDR序列的单克隆抗体；或(ii)包含SEQ ID NO：18中所示的重链可变区中所包含的CDR序列和SEQID NO：19中所示的轻链可变区中所包含的CDR序列的单克隆抗体.
根据某些特定实施方式，给药的药物组合物中的单克隆抗体包含：具有序列GYTFTSYGIS(SEQ ID NO：1)的重链CDR1，具有序列EIYPRSGNTYYNEKFKG(SEQ ID NO：2)的重链CDR2，具有序列KGPYYTKNEDY(SEQ ID NO：3)的重链CDR3，具有序列RASEHIYYSLA(SEQ IDNO：4)的轻链CDR1，具有序列NANSLED(SEQ ID NO：5)的轻链CDR2，以及具有序列KQAYDVPRT(SEQ ID NO：6)的轻链CDR3。
根据其他特定实施方式，给药的药物组合物中的单克隆抗体包含：具有序列IYCIH(SEQ ID NO：12)的重链CDR1，具有序列EISPSNGRTIYNEKFKN(SEQ ID NO：13)的重链CDR2，具有序列SDGYDGYYFDY(SEQ ID NO：14)的重链CDR3，具有序列RASQEISGYLN(SEQ ID NO：15)的轻链CDR1，具有序列AASTLDS(SEQ ID NO：16)的轻链CDR2，以及具有序列LQYASYPRT(SEQ IDNO：17)的轻链CDR3。
根据某些实施方式，所述治疗癌症的方法包括给药或进行至少一种其他抗癌疗法。根据某些实施方式，所述其他抗癌疗法是手术、化学疗法、放射疗法或免疫疗法。
根据某些实施方式，所述治疗癌症的方法包括给药以高亲和性和特异性识别人类TIGIT的单克隆抗体和另外的抗癌药剂。根据某些实施方式，所述另外的抗癌药剂选自免疫调节剂、活化的淋巴细胞、激酶抑制剂和化学治疗剂。
根据某些实施方式，所述另外的免疫调节剂是结合人类TIGIT上与以下表位不同的表位的抗体、抗体片段或抗体偶联物：与命名为VSIG9#1(或Vsig9.01)的单克隆抗体结合的表位。
根据其他实施方式，所述另外的免疫调节剂是结合除人类TIGIT之外的抗原的抗体、抗体片段或抗体偶联物。
根据某些实施方式，所述另外的免疫调节剂是针对免疫检验点分子的抗体。根据某些实施方式，所述另外的免疫调节剂是针对选自下述的免疫检验点分子的抗体：人类程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)，PD-L1和PD-L2，癌胚抗原相关细胞粘附分子1(CEACAM1)，淋巴细胞活化基因3(LAG3)，CD137，OX40(也被称为CD134)，杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)及其任何组合。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
根据某些实施方式，所述治疗癌症的方法包括给药包含本发明的识别人类TIGIT的单克隆抗体和抗PD-1抗体的药物组合物。
根据某些实施方式，所述治疗癌症的方法包括给药包含本发明的识别人类TIGIT的单克隆抗体和抗CTLA-4抗体的药物组合物。
根据某些实施方式，所述治疗癌症的方法包括给药所述药物组合物作为包含给药至少一种另外的抗癌药剂的治疗方案的一部分。
根据某些实施方式，所述抗癌药剂选自：爱必妥，阿糖孢苷，氟达拉滨，氟脲嘧啶，巯基嘌呤，甲氨蝶呤，硫鸟嘌呤，吉西他滨，长春新碱，长春花碱，长春瑞滨，卡莫司汀，洛莫司汀，苯丁酸氮芥，环磷酰胺，顺铂，卡铂，异环磷酰胺，甲氮芥(mechlorethamine)，美法仑，噻替派，达卡巴嗪，博来霉素，放线菌素D，道诺霉素，多柔比星，伊达比星，丝裂霉素，米托蒽醌，普卡霉素，依托泊苷，替尼泊苷及其组合。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
根据某些实施方式，所述抗癌药剂是表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂。根据某些实施方式，所述EGFR抑制剂选自西妥昔单抗(爱必妥
Figure BDA0001586946570000241
)、帕尼单抗
Figure BDA0001586946570000242
和耐昔妥珠单抗(necitumumab)
Figure BDA0001586946570000243
根据某些实施方式，所述EGFR抑制剂是西妥昔单抗(爱必妥
Figure BDA0001586946570000244
)。
因此，本发明提供了一种通过给药包含识别TIGIT并抑制TIGIT与它的配体结合的至少一种抗体、偶联物或其片段的药物组合物来提高或刺激免疫应答的方法。
另一方面，本发明还包括一种确定或定量TIGIT的表达的方法，所述方法包括将生物样品与抗体或抗体片段相接触，并测量复合体形成的水平，其中所述抗体或抗体片段包含选自下述的互补决定区(CDR)：(i)具有序列GYTFTSYGIS(SEQ ID NO：1)的重链CDR1，具有序列EIYPRSGNTYYNEKFKG(SEQ ID NO：2)的重链CDR2，具有序列KGPYYTKNEDYV(SEQ ID NO：3)的重链CDR3，具有序列RASEHIYYSLA(SEQ ID NO：4)的轻链CDR1，具有序列NANSLED(SEQID NO：5)的轻链CDR2，以及具有序列KQAYDVPRT(SEQ ID NO：6)的轻链CDR3；和(ii)具有序列IYCIH(SEQ ID NO：12)的重链CDR1，具有序列EISPSNGRTIYNEKFKN(SEQ ID NO：13)的重链CDR2，具有序列SDGYDGYYFDY(SEQ ID NO：14)的重链CDR3，具有序列RASQEISGYLN(SEQ IDNO：15)的轻链CDR1，具有序列AASTLDS(SEQ ID NO：16)的轻链CDR2，以及具有序列LQYASYPRT(SEQ ID NO：17)的轻链CDR3。
根据某些实施方式，确定和定量方法可以在体外或离体进行，或者可用于诊断与TIGIT的表达相关的病症。本发明的抗体也可用于配置筛选方法。例如，酶联免疫吸附测定法(ELISA)或放射免疫测定法(RIA)可以被构造成使用所述抗体和本领域中已知的方法测量分泌的或细胞结合的多肽的水平。
根据一个实施方式，提供了一种用于检测或定量TIGIT的存在的方法，所述方法包括下述步骤：
i.将样品与特异性针对TIGIT的抗体或其至少包含抗原结合部分的抗体片段进行温育；
ii.使用可检测的探针检测结合的TIGIT。
根据某些实施方式，所述方法还包括下述步骤：
iii.将(ii)的量与从含有已知量的TIGIT的参比样品获得的标准曲线进行比较；并且
iv.从所述标准曲线计算所述样品中TIGIT的量。
根据某些特定实施方式，所述样品是体液。
根据某些实施方式，所述方法在体外或离体进行。
还提供了一种用于测量生物样品中TIGIT的表达的试剂盒，其包含包括选自下述的互补决定区(CDR)的至少一种抗体或抗体片段：(i)具有序列GYTFTSYGIS(SEQ ID NO：1)的重链CDR1，具有序列EIYPRSGNTYYNEKFKG(SEQ ID NO：2)的重链CDR2，具有序列KGPYYTKNEDY(SEQ ID NO：3)的重链CDR3，具有序列RASEHIYYSLA(SEQ ID NO：4)的轻链CDR1，具有序列NANSLED(SEQ ID NO：5)的轻链CDR2，以及具有序列KQAYDVPRT(SEQ ID NO：6)的轻链CDR3；和(ii)具有序列IYCIH(SEQ ID NO：12)的重链CDR1，具有序列EISPSNGRTIYNEKFKN(SEQ ID NO：13)的重链CDR2，具有序列SDGYDGYYFDY(SEQ ID NO：14)的重链CDR3，具有序列RASQEISGYLN(SEQ ID NO：15)的轻链CDR1，具有序列AASTLDS(SEQ IDNO：16)的轻链CDR2，以及具有序列LQYASYPRT(SEQ ID NO：17)的轻链CDR3。
在某些实施方式中，本发明提供了一种对免疫相关疾病或增殖疾病进行诊断、评估其严重性或对其分级的方法，所述方法包括使用本发明的抗体或其片段或偶联物确定来自于对象的样品中TIGIT的表达或活性，并将所述TIGIT的表达或活性与TIGIT表达或活性的参比量进行比较。所述参比量可以从取自正常对象、取自同一对象在不同疾病阶段的样品获得，或者从大量对象群体的临床数据确定。
本发明的抗体、抗体片段或其偶联物可用于利用与人类TIGIT蛋白的结合的任何诊断、治疗或预防方法中，只要它们能够特异性结合到所述蛋白并抑制它与至少一种配体的结合即可。
本发明的其他实施方式和完整的适用性范围将从后文中给出的详细描述变得显而易见。然而，应该理解，所述详细描述和具体实施例尽管指示了本发明的优选实施方式，但仅仅是为了说明而给出，因为对于本领域技术人员来说，在本发明的精神和范围之内的各种不同改变和修改将从该详细描述变得显而易见。
附图简述
图1A-1C.TIGIT在效应免疫细胞上的表达。
图1A.2*105个YTS细胞(左侧)或过表达TIGIT的YTS细胞(右侧)的FACS柱状图。左侧灰色实心曲线代表使用对照小鼠IgG(mIgG)的染色。右侧空心曲线代表使用所指示的两种抗人类TIGIT mAb(VSIG9#1和258-CS1#4)的染色。
图1B.在两个健康供体(所指示的I和II)的NK细胞上TIGIT表达的FACS柱状图。左侧灰色实心曲线代表使用对照mIgG的染色。右侧空心曲线代表使用抗TIGIT抗体(克隆VSIG9#1)的染色。
图1C.在来自于两位黑素瘤患者的CD8+TIL细胞(TIL-I和TIL-II)上TIGIT表达的FACS柱状图。左侧灰色实心曲线代表使用对照mIgG的染色。右侧空心曲线代表使用抗TIGIT抗体(克隆VSIG9#1)的染色。
图2A-2B.通过mAb VSIG9#1抑制TIGIT结合：
图2A.与hTIGIT-Fc(1)、hTIGIT-Fc和对照mIgG(2)或hTIGIT-Fc和指定浓度的抗TIGIT mAb VSIG9#1(3和4)温育的HepG2细胞(表达高水平的PVR、连接蛋白-2和连接蛋白-3)的FACS柱状图。
图2B.由各个图所指示的HepG2细胞表达的TIGIT配体的FACS柱状图(空心柱状图)。灰色实心柱状图代表仅使用对照mIgG的染色。
图3A-3D.TIGIT的阻断导致杀灭活性提高。
图3A.对与YTS-TIGIT细胞(以1:10的比率)并与对照mIgG(左侧条)或抗TIGIT抗体-VSIG9#1(右侧条)温育的35S标记的721.221-PVR细胞测量特异性杀灭活性。*p<0.005。
图3B.对与来自于健康供体的NK细胞(以1:10的比率)并与对照mIgG(左侧条)或抗TIGIT mAb VSIG9#1(右侧条)温育的35S标记的MDA-MB-231乳腺癌细胞测量特异性杀灭活性。**p<0.002。
图3C.对与来自于健康供体的NK细胞(以1:10的比率)并与对照mIgG(右侧条)、抗TIGIT抗体VSIG9#1(左侧条)或抗TIGIT抗体258-CS1#4(中央条)温育的35S标记的Mel 562细胞测量特异性杀灭活性。**p<0.05。
图3D.对与抗EGFR mAb(爱必妥
Figure BDA0001586946570000281
)温育并添加到与对照mAb(左侧条)或与抗体VSIG9#1(右侧条)预温育的NK细胞(分别以效应细胞：靶细胞10:1的比率)的35S标记的HepG2细胞测量抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性。**p<0.0007。
图4A-4B.抗体258-CS1#4和VSIG9#1阻断TIGIT结合到PVR。将表达TIGIT配体PVR的HepG2细胞与TIGIT-Fc或者与mAbVSIG9#1(图4A)或mAb 258-CS1#4(图4B)预温育之后的TIGIT-Fc温育，并使用FACS测量结合。
图5A-5B.使用Biacore进行的mAb 258-cs1#4(#4)(图5A)和VSIG9#1(图5B)与装载有来自于两种商业来源的人类TIGIT的生物传感器的结合动力学分析。
图6A-6B.与商品化抗体MBSA43(eBioscience Cat#12-9500-42)相比，抗体VSIG9#1显著更强地结合到TIGIT细胞。
图6A.VSIG9#1和商品化抗体MBSA43结合到TIGIT的FACS柱状图。将YTS-TIGIT细胞(75*103)用连续稀释液中250nM至65fM的浓度范围下的抗TIGIT抗体VSIG9#1(黑色空心柱状图)或MBSA43(灰色空心柱状图)染色。背景-mIgG的染色(灰色实心柱状图)。每张图代表所注明的特定抗体浓度。每张图的Y-轴是细胞计数，X-轴是荧光强度(FL1-H)。
图6B.图6A中描述的结合的图形分析。在注明的点处获得最大强度的一半(MBSA43灰色虚线，mAb VSIG#9#1黑色虚线)。
图7A和7B.正如通过FACS分析所测量的，与商品化抗体MBSA43相比，VSIG#9抗体在阻止PVR-TIGIT相互作用方面显著更强。
图7A.YTS-TIGIT细胞染色的柱状图。将75*103个YTS-TIGIT细胞与2.5pmole PVR-Fc(灰色空心柱状图)在2倍连续稀释液中27至0.014pmole抗体浓度范围下的VSIG9#1(黑色空心柱状图)或MBSA43(灰色虚线柱状图)存在下进行温育。结合的PVR通过抗Alexa
Figure BDA0001586946570000291
488小鼠抗人类IgG抗体(BioLegend)来检测。
图7B.YTS-TIGIT细胞染色的柱状图。将75*103个YTS-TIGIT细胞与2.5pmole PVR-Fc在2倍连续稀释液中27至0.014pmole浓度范围下的VSIG9#1(黑色空心柱状图)或MBSA43(灰色虚线柱状图)存在下进行温育。结合的抗TIGIT抗体通过Alexa
Figure BDA0001586946570000292
647山羊抗小鼠IgG抗体(BioLegend)来检测。
图7A和7B中的每张图代表所注明的特定抗体浓度。每张图的Y-轴是细胞计数，X-轴是荧光强度(FL1-H/FL-4)。图中的数字指示平均荧光强度(MFI)。
图8.mAb VSIG9#1(Vsig9.01)对TIGIT的阻断单独地或与抗PD-1抗体和抗CTLA4抗体相组合地诱导了T细胞增殖。将来自于健康供体的PBMC用5(6)-羧基荧光素N-羟基琥珀酰亚胺基酯(CFSE)标记并用抗CD3抗体活化，然后与过表达hCD80的MDA-MB-231细胞在4μg/ml所注明的mAb存在下温育5-9天。增殖通过CFSE稀释来测量。示出了来自于至少5个不同实验的代表性数据。*p<0.04**<0.015***<0.0004。
图9.在AML细胞中抗TIGIT VSIG9#1mAb与抗PD-1抗体和抗CTLA-4抗体协同增效以增加CD8T细胞。将从AML患者获得的骨髓抽吸物分离的免疫细胞与4μg/ml抗TIGIT抗体、抗PD-1抗体和/或抗CTLA-4抗体共同培养12天，然后确定CD8T细胞的量。
发明详述
本发明提供了特异性针对人类TIGIT蛋白的单克隆抗体，某些所述mAb对这种蛋白具有超常的高亲和性，某些所述mAb具有双重特异性，并且可以结合所述蛋白的不同结构域。本发明还提供了所述mAb的生产和作为治疗剂的用途。具体来说，本发明的mAb可以单独地或与其他药剂相组合，用于恢复和增强NK和其他细胞的抗肿瘤杀灭活性并用作诊断试剂。
当在本文中使用时，术语“抗原”是指能够引发抗体形成并被抗体特异性结合的分子或分子的一部分。抗原可能具有一个或超过一个表位。上面提到的特异性结合意指所述抗原将以高度选择性的方式与其对应的抗体反应并且不与可以被其他抗原唤起的众多其他抗体反应。根据本发明的某些实施方式，抗原是具有选自下述登记号的TIGIT蛋白：NP_776160.2，Q495A1.1，AAI01290.1，AAI01291.1，AAI01292.1，ACD74757.1，EAW79602.1和AIC53385.1，或任何所述TIGIT蛋白的片段。
根据某些实施方式，本发明的单克隆抗体特异性针对人类TIGIT。根据其他实施方式，本发明的mAb结合人类TIGIT和至少一种来自于其他物种例如小鼠、猴、狗等的TIGIT。根据某些特定实施方式，mAb结合人类TIGIT并结合猴物种的至少一种TIGIT。
当在本文中使用时，术语“抗原决定簇”或“表位”是指与特定抗体特异性反应的抗原分子的区域。使用本领域中已知的方法，源自于表位的肽序列可以单独地或与载体组成部分联合，用于对动物进行免疫接种并生产另外的多克隆或单克隆抗体。源自于表位的分离的肽可用于诊断方法中以检测抗体。
抗体或免疫球蛋白包含通过二硫键连接在一起的两条重链以及两条轻链，每条轻链以“Y”型构造通过二硫键连接到相应的重链。抗体的蛋白水解消化产生Fv(可变片段)和Fc(结晶片段)结构域。抗原结合结构域Fab包括多肽序列可变的区域。术语F(ab')2表示通过二硫键连接在一起的两条Fab'臂。抗体的中心轴被称为Fc片段。每条重链在一个末端具有可变结构域(VH)，后面跟有多个恒定结构域(CH)。每条轻链在一个末端具有可变结构域(VL)，在另一个末端具有恒定结构域(CL)，所述轻链可变结构域与重链的可变结构域对齐，并且所述轻链恒定结构域与重链的第一个恒定结构域(CH1)对齐。每对轻链和重链的可变结构域形成抗原结合位点。轻链和重链上的结构域具有相同的总体结构，并且每个结构域包含4个序列相对保守的构架区，它们通过3个被称为互补决定区(CDR 1-3)的高变结构域相连。这些结构域对抗原结合位点的特异性和亲和性有贡献。
CDR确定–从给定的重链或轻链可变序列进行CDR鉴定，通常使用本领域中已知的几种方法之一来进行。例如，这种确定按照Kabat(Wu T.T和Kabat E.A.，J Exp Med,1970；132:211–50)和IMGT(Lefranc M-P等，Dev Comp Immunol,2003,27:55-77)来进行。
当使用术语“具有某种序列的CDR”或类似的术语时，它包括其中所述CDR包含所述指定序列的选项，也包括其中所述CDR由所述指定序列构成的选项。
抗体的抗原特异性是基于高变区，即一起形成抗原结合位点的轻链和重链两者的独特CDR序列。
重链的同种型(γ、α、δ、ε或μ)决定免疫球蛋白类别(分别为IgG、IgA、IgD、IgE或IgM)。轻链是所有抗体类别中存在的两种同种型(κ或λ)之一。
术语“抗体”以最广泛的意义使用，并包括单克隆抗体(包括全长或完整的单克隆抗体)、多克隆抗体、多价抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和长得足以表现出所需生物学活性(即结合人类TIGIT)的抗体片段。
本发明的抗体包括完整抗体例如多克隆抗体或单克隆抗体(mAb)，及其蛋白水解片段例如Fab或F(ab')2片段。单链抗体也落于本发明的范围之内。
“抗体片段”只包含完整抗体的一部分，通常包括完整抗体的抗原结合位点并因此保留结合抗原的能力。本定义所涵盖的抗体片段的实例包括(i)Fab片段，其具有VL、CL、VH和CH1结构域；(ii)Fab'片段，其是在CH1结构域的C-端处具有一个或多个半胱氨酸残基的Fab片段；(iii)Fd片段，其具有VH和CH1结构域；(iv)Fd'片段，其具有VH和CHI结构域并在CH1结构域的C-端处具有一个或多个半胱氨酸残基；(v)Fv片段，其具有抗体单臂的VL和VH结构域；(vi)dAb片段(Ward等，Nature 1989,341,544-546)，其由VH结构域构成；(vii)分离的CDR区；(viii)F(ab')2片段，其是包括在铰链区处通过二硫桥相连的两个Fab'片段的二价片段；(ix)单链抗体分子(例如单链Fv；scFv)(Bird等，Science 1988,242,423-426；和Huston等，PNAS(USA)1988,85,5879-5883)；(x)具有两个抗原结合位点的“双体抗体”，其在同一多肽链中包含连接到轻链可变结构域(VL)的重链可变结构域(VH)(参见例如EP 404,097；WO 93/11161；和Hollinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1993,90,6444-6448)；(xi)“线性抗体”，其包含一对串联的Fd区段(VH-CH1-VH-CH1)，所述区段与互补的轻链多肽一起形成一对抗原结合区(Zapata等，Protein Eng.,1995,8,1057-1062；和美国专利号5,641,870)。
抗体片段
已开发了用于生产抗体片段的各种不同技术。传统上，这些片段通过完整抗体的蛋白水解消化来衍生(参见例如Morimoto等，Journal of Biochemical and BiophysicalMethods 24:107-117(1992)和Brennan等，Science,229:81(1985))。然而，这些片段现在可以由重组宿主细胞直接生产。例如，可以从上面讨论的抗体噬菌体文库分离抗体片段。或者，Fab'-SH片段可以直接从大肠埃希氏杆菌(E.coli)回收并化学偶联以形成F(ab')2片段(Carter等，Bio/Technology 10:163-167(1992))。根据另一种方法，F(ab')2片段可以从重组宿主细胞培养物直接分离。对于熟练的从业人员来说，用于生产抗体片段的其他技术是显而易见的。在其他实施方式中，选择的抗体是单链Fv片段(scFv)。
单链抗体可以是具有抗原结合能力并包含与免疫球蛋白轻链和重链的可变区同源或类似的氨基酸序列的单链复合多肽，即连接的VH-VL或单链Fv(scFv)。用于生产单链抗体的技术(美国专利号4,946,778)可以被改造成生产针对TIGIT的单链抗体。
当在本文中使用时，术语“单克隆抗体”是指从一群基本上均质的抗体获得的抗体，即，除了可能以少量存在的可能的天然存在的突变之外，构成所述群体的各个抗体是一致的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原。此外，与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物相反，每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。修饰语“单克隆”不应被解释为要求通过任何特定方法生产所述抗体。mAb可以通过本领域技术人员已知的方法来获得。例如，按照本发明使用的单克隆抗体可以通过首先由Kohler等，Nature 1975,256,495描述的杂交瘤方法来制造，或者可以通过重组DNA方法(参见例如美国专利号4,816,567)来制造。也可以使用例如在Clackson等，Nature 1991,352,624-628或Marks等，J.Mol.Biol.,1991,222:581-597中描述的技术，从噬菌体抗体文库分离单克隆抗体。
Fields等，2013,8(6):1125-48中描述了通过功能性可变重链(VH)和可变轻链(VL)基因的快速鉴定和克隆来设计并开发源自于单克隆抗体的重组单价抗原结合分子，以及被优化用于在重组细菌中表达的合成DNA序列的设计和克隆。
本发明的mAb可以是任何免疫球蛋白类别，包括IgG、IgM、IgE、IgA。生产mAb的杂交瘤可以在体外或体内培养。高滴度的mAb可以通过体内生产来获得，其中将来自于个体杂交瘤的细胞腹膜内注射到原始的接触过抗原的Balb/c小鼠，以产生含有高浓度的所需mAb的腹水。使用本领域技术人员公知的柱层析方法，可以这些腹水或从培养上清液纯化同种型IgM或IgG的mAb。
除了在体内产生抗体的常规方法之外，抗体可以在体外使用噬菌体展示技术来产生。这种重组抗体的生产与常规抗体生产相比快得多，并且它们可以针对大量抗原来产生。此外，当使用常规方法时，许多抗原被证明是非免疫原性或极其有毒的，因此不可用于在动物中产生抗体。此外，重组抗体的亲和成熟(即提高亲和性和特异性)是非常简单且相对快的。最后，可以在一个选择程序中产生针对特定抗原的大量不同抗体。为了产生重组mAb，人们可以使用全都都基于展示文库的各种不同方法来产生具有不同抗原识别位点的抗体的大的合并物。这种文库可以以几种方式制造：人们可以通过将合成的CDR区克隆在H链种系基因的合并物中来产生合成库，由此产生大的抗体库，从所述抗体库可以选择具有各种不同特异性的重组抗体片段。人们可以使用人类淋巴细胞合并物作为起始材料来构建抗体文库。可以构建未接触抗原的人类IgM抗体库，并由此产生具有高度多样性的人类文库。这种方法已被成功地广泛用于选择针对不同抗原的大量抗体。在例如《免疫学现代方法》(Current Protocols in Immunology)，Colligan等(主编)，John Wiley&Sons,Inc.(1992-2000)，第17章，第17.1节中提供了用于噬菌体文库构建和重组抗体的选择的流程。
非人类抗体可以通过本领域中已知的任何方法进行人源化。在一种方法中，将非人类CDR插入到人类抗体或共有抗体FR序列中。然后可以在所述抗体构架中引入其他变化以调节亲和性或免疫原性。
例如，Queen等人的美国专利号5,585,089公开了一种人源化免疫球蛋白及其制备方法，其中所述人源化免疫球蛋白包含来自于供体免疫球蛋白的CDR和来自于人类受体免疫球蛋白H和L链的VH和VL区FR，其中所述人源化免疫球蛋白在Kabat和Chothia CDR之外包含来自于供体免疫球蛋白FR的氨基酸，并且其中所述供体氨基酸替代了受体免疫球蛋白H或L链构架中的相应氨基酸。
此外，转基因小鼠或其他生物体例如其他哺乳动物也可用于表达人源化抗体。
Winter的美国专利号5,225,539也公开了改变的抗体或其抗原结合片段及其制备方法，其中所述抗体或抗原结合片段的V结构域具有第一免疫球蛋白H或L链V结构域的FR和第二免疫球蛋白VH或VL结构域的CDR，其中所述第二免疫球蛋白VH或VL结构域在抗原结合特异性、抗原结合亲和性、稳定性、物种、类别或亚类方面不同于所述第一免疫球蛋白VH或VL结构域。
还涵盖了与本发明的抗体的高变区特异性免疫反应的抗独特型抗体。
或者，可以利用噬菌体展示技术，从被筛查为具有抗VEGF抗体的人类的淋巴细胞的PCR扩增的v-基因库或者从文库选择对人类TIGIT具有结合活性的抗体基因(McCafferty等，(1990),Nature 348,552-554；Marks等，(1992)Biotechnology 10,779-783)。这些抗体的亲和性也可以通过例如链穿梭来提高(Clackson等，(1991)Nature 352:628)。
上述抗体可用于分离或鉴定表达所述多肽的克隆，以例如通过亲和层析纯化所述多肽。
本发明提供了一种单克隆抗体或抗体片段，其包含抗原结合结构域(ABD)，所述ABD包含轻链的三个CDR和重链的三个CDR，其中所述ABD与包含下述的单克隆小鼠抗体的ABD具有至少90％的序列同一性或相似性：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO：7的可变重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：8的可变轻链(在本文中被鉴定为VSIG9#1)；或包含氨基酸序列SEQ ID NO：18的可变重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO：19的可变轻链(在本文中被称为258-CS1#4(或#4))。这种抗体可能具有与VSIG9#1或258-CS1#4的相应ABD具有至少93％、至少94％、至少95％、至少96、至少97、至少98、至少99％的序列同一性或相似性或100％序列同一性的ABD结构域。
序列同一性是两个不同序列之间完全匹配的氨基酸或核苷酸的量。序列相似性允许将保守氨基酸替换确定为一致的氨基酸。
本发明还提供了本发明的抗体分子的保守氨基酸变体。也可以制造保留了被编码的蛋白质的总体分子结构的本发明的变体。考虑到构成所公开的蛋白质产物的个体氨基酸的性质，专业技术人员将会认识到一些合理的替换。氨基酸替换，即“保守替换”，可以在例如所涉及的残基的极性、电荷、溶解性、疏水性、亲水性和/或两亲性性质的相似性的基础上做出。当在本文中使用时，术语“抗体类似物”是指从另一种抗体通过一个或多个保守氨基酸替换产生的抗体。
当在本文中使用时，术语“抗体变体”是指包含本发明的抗体的任何分子。例如，其中所述抗体或其抗原结合片段被连接到另一个化学实体的融合蛋白被认为是抗体变体。
所述抗体序列的类似物和变体也在本申请的范围之内。它们包括但不限于序列内的氨基酸的保守和非保守替换、插入和缺失。这些修饰和得到的抗体类似物或变体在本发明的范围之内，只要它们提供或甚至提高所述抗体与人类TIGIT的结合即可。
本领域技术人员已知的氨基酸的保守替换在本发明的范围之内。保守氨基酸替换包括将一个氨基酸用具有相同类型的官能团或侧链例如脂族、芳香族、带正电荷、带负电荷的官能团或侧链的另一个氨基酸代替。这些替换可以提高口服生物利用度、在胰岛中的穿透、向特定β细胞群体的靶向、免疫原性等。专业技术人员将会认识到，在被编码的序列中改变、添加或缺失了单个氨基酸或少量百分率的氨基酸的对肽、多肽或蛋白质序列所做的各个替换、缺失或添加是“保守修饰的变体”，其中所述改变引起氨基酸被化学相似的氨基酸替换。提供了功能上相似的氨基酸的保守替换表在本领域中是公知的。例如，根据本领域中已知的一张表，下述6组各自含有彼此是保守替换的氨基酸：
1)丙氨酸(A)，丝氨酸(S)，苏氨酸(T)；
2)天冬氨酸(D)，谷氨酸(E)；
3)天冬酰胺(N)，谷氨酰胺(Q)；
4)精氨酸(R)，赖氨酸(K)；
5)异亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，甲硫氨酸(M)，缬氨酸(V)；以及
6)苯丙氨酸(F)，酪氨酸(Y)，色氨酸(W)。
当在本文中使用时，术语“人类抗体”是指具有对应于由人类产生的抗体的氨基酸序列的氨基酸序列和/或使用本文中公开的制造人类抗体的任何技术制造的抗体。这种人类抗体的定义具体地排除了包含非人类抗原结合残基的人源化抗体。人类抗体可以使用本领域中已知的各种不同技术来生产。
当在本文中使用时，术语“具有抗体的抗原结合部分的分子”和“抗原结合片段”打算不仅包括任何同种型和通过任何动物细胞系或微生物产生的完整免疫球蛋白分子，而且包括其结合抗原的反应性部分，包括但不限于Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、其重链和/或轻链的可变部分、Fab微型抗体(参见例如WO 93/15210、美国专利申请08/256,790、WO96/13583、美国专利申请08/817,788、WO 96/37621、美国专利申请08/999,554)、双聚体型双特异性微型抗体(参见Muller等，FEBS Lett.1998Jul 31；432(1-2):45-9)和合并有这些反应性部分的单链抗体，以及其中已物理插入这些抗体反应性部分的任何其他类型的分子。这些分子可以通过任何已知技术来提供，包括但不限于酶切割、肽合成或重组技术。
当在本文中使用时，术语“非完全人源化单克隆抗体”是指一种单克隆抗体，其具有的重链和/或轻链可变结构域中在CDR两侧和/或与CDR直接相邻的氨基酸序列不完全是人类的，即与从天然人类抗体获得的任何已知的同源或对应序列不一致。
人源化和人类抗体
人源化抗体通常具有嫁接有非人类CDR的人类FR。因此，人源化抗体具有从非人类来源引入到其中的一个或多个氨基酸序列。这些非人类氨基酸残基通常被称为“输入”残基，其通常从“输入”可变结构域获取。人源化基本上可以遵照Winter及其合作者的方法(Jones等，Nature,321:522-525(1986)；Riechmann等，Nature,332:323-327(1988)；Verhoeyen等，Science,239:1534-1536(1988))，通过用啮齿动物的一个或多个CDR序列替换人类抗体的相应序列来进行。因此，这种“人源化”抗体是嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中基本上小于完整的人类V结构域已被来自于非人类物种的相应序列替换。在实践中，人源化抗体通常是其中一些CDR残基和可能地一些FR残基被来自于啮齿动物抗体中的类似位点的残基替换的人类抗体。
在制造人源化抗体中使用的人类VH和VL结构域的选择对于降低免疫原性来说是非常重要的。根据所谓的“最佳拟合”方法，针对已知人类结构域序列的整个文库筛选啮齿动物抗体的V结构域的序列。然后将最接近于啮齿动物序列的人类序列接受为用于人源化抗体的人类FR(Sims等，J.Immunol.,151:2296(1993)；Chothia等，J.Mol.Biol.,196:901(1987))。另一种方法使用源自于H或L链的特定亚组的所有人类抗体的共有序列的特定FR。同一个FR可用于几个不同的人源化抗体(Carter等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；Presta等，J.Immunol.,151:2623(1993))。
使被人源化的抗体保留对抗原的高特异性和亲和性以及其他有利的生物学性质，也是重要的。为了实现这一目标，按照优选方法，通过使用亲本和人源化序列的三维模型来分析亲本序列和各种不同的概念性人源化产物的过程来制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型对于本领域技术人员来说是通常可用且熟悉的。说明和展示所选候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构的计算机程序是可用的。对这些展示的检查允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影响所述候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。通过这种方式，可以从接受者和输入序列选择并合并FR残基，以便获得所需的抗体特性例如对靶抗原的提高的亲和性。一般来说，CDR残基直接并且最实质上参与影响抗原结合。
或者，现在可以生产转基因动物(例如小鼠)，其在免疫接种后能够在不存在内源免疫球蛋白生产的情况下生产完整的人类抗体库。例如，已描述在嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合缺失导致内源抗体生产的完全抑制。人类种系免疫球蛋白基因阵列在这种种系突变小鼠中的转移，将导致在抗原激惹后生产人类抗体。参见例如Jakobovits等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:2551(1993)；Jakobovits等，Nature,362:255-258(1993)；Bruggermann等，Year in Immuno.,7:33(1993)；和Duchosal等，Nature355:258(1992)。人类抗体也可以从噬菌体展示文库衍生(Hoogenboom等，J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marks等，J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)；Vaughan等，Nature Biotech14:309(1996))。
药理学
在制药和药物制剂中，活性药剂优选地与一种或多种可药用载体和任选地任何其他治疗性成分一起使用。所述载体在与所述制剂的其他成分相容并且对其接受者不过分有害的意义上必须是可药用的。所述活性药剂以有效地实现如上所述的所需药理效果的量，并且以适合于实现所需每日剂量的量提供。
通常，本发明的抗体及其包含抗体的抗原结合部分或包含另一种多肽(包括肽模拟物)的片段和偶联物，将被悬浮在用于治疗用途的无菌盐水溶液中。或者，可以对所述药物组合物进行配制以控制活性成分(包含抗体的抗原结合部分的分子)的释放或延长它在患者系统中的存在。大量适合的药物递送系统是已知的，并包括例如可植入药物释放系统、水凝胶、羟甲基纤维素、微胶囊、脂质体、微乳液、微球等。受控释放制剂可以通过使用聚合物来复合或吸附本发明的分子而制备。例如，生物相容性聚合物包括聚乙烯-乙酸乙烯酯共聚物基质和硬脂酸二聚体与癸二酸的聚酸酐共聚物基质。本发明的分子(即抗体或抗体片段)从这种基质释放的速率取决于所述分子的分子量、所述基质内所述分子的量和被分散粒子的尺寸。
本发明的药物组合物可以通过任何适合的手段给药，例如口服、表面、鼻内、皮下、肌肉内、静脉内、动脉内、关节内、病灶内或肠胃外给药。通常，静脉内(i.v.)给药被用于递送抗体。
对于本领域普通技术人员来说，显然本发明的分子的治疗有效量尤其取决于给药日程安排、给药的分子的单元剂量、所述分子是否与其他治疗剂相组合给药、患者的免疫状态和健康、给药的分子的治疗活性和治疗医师的判断。当在本文中使用时，“治疗有效量”是指在一段时间内减轻与所治疗障碍相关的一种或多种症状所需的分子的量。
术语“治疗有效量”是指在哺乳动物中有效治疗疾病或障碍的药物的量。在癌症的情况下，药物的治疗有效量可以减少癌细胞的数目，减小肿瘤尺寸，抑制(即在某种程度上减缓并优选地停止)癌细胞浸润到周围器官中，抑制(即在某种程度上减缓并优选地停止)肿瘤转移，在某种程度上抑制肿瘤生长，和/或在某种程度上缓解与所述障碍相关的一种或多种症状。在所述药物可以阻止现有癌细胞的生长和/或杀死它们的程度上，所述药物可以是细胞抑制性和/或细胞毒性的。对于癌症疗法来说，体内功效可以例如通过评估存活持续时间、疾病进展时间(TTP)、响应率(RR)、响应持续时间和/或生存质量来度量。
适合于通过本发明治疗的癌症包括但不限于恶性上皮肿瘤(carcinoma)、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴系恶性肿瘤。这些癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌和肺的鳞状细胞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌和各种不同类型的头颈癌，以及B-细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞(SL)NHL、中级/滤泡性NHL、中级弥散性NHL、高级成免疫细胞NHL、高级成淋巴细胞NHL、高级小无裂细胞NHL、巨块病NHL、套细胞淋巴瘤、AIDS相关的淋巴瘤和华氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's Macroglobulinemia))、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性成淋巴细胞白血病(ALL)、毛细胞白血病、慢性成髓细胞性白血病和移植后淋巴增生障碍(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤病(phakomatoses)相关的异常血管增生、水肿(例如与脑肿瘤相关的水肿)和梅格斯综合征(Meigs'syndrome)。优选地，所述癌症选自乳腺癌、结肠直肠癌、直肠癌、非小细胞肺癌、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、肾细胞癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、软组织肉瘤、卡波斯肉瘤、类癌恶性上皮肿瘤、头颈癌、黑素瘤、卵巢癌、间皮瘤和多发性骨髓瘤。适合于本发明的治疗的癌症包括转移癌症。
作为活性成分的本发明的分子被溶解、分散或混合在公知的可药用并且与所述活性成分相容的赋形剂中。适合的赋形剂是例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水(PBS)、右旋糖、甘油、乙醇等及其组合。其他适合的载体对于本领域技术人员来说是公知的。此外，如果需要，所述组合物可以含有少量辅助物质例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂。
本发明的药物组合物可以与抗肿瘤组合物一起给药。
当在本文中使用时，术语“治疗”是指治疗性治疗和预防性措施两者。需要治疗的对象包括已经患有所述障碍的对象以及将要在其中预防所述障碍的对象。
术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物中通常以不受调控的细胞生长为特征的生理状况。癌症的实例包括但不限于恶性上皮肿瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病。这些癌症的更具体的实例包括黑素瘤、肺癌、甲状腺癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、肝癌、膀胱癌、肾癌、宫颈癌、胰腺癌、白血病、淋巴瘤、髓样癌、卵巢癌、子宫癌、肉瘤、胆管癌或子宫内膜癌。
根据某些实施方式，所述治疗癌症的方法包括给药所述药物组合物作为包含给药至少一种其他抗癌药剂的治疗方案的一部分。
根据某些实施方式，所述抗癌药剂选自抗代谢物、有丝分裂抑制剂、紫杉烷、拓扑异构酶抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、天冬酰胺酶、烷化剂、抗肿瘤抗生素及其组合。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
根据某些实施方式，所述抗代谢物选自阿糖孢苷、氟达拉滨、氟脲嘧啶、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、硫鸟嘌呤、吉西他滨和羟基脲。根据某些实施方式，所述有丝分裂抑制剂选自长春新碱、长春花碱和长春瑞滨。根据某些实施方式，所述拓扑异构酶抑制剂选自拓扑替康和伊立替康。根据某些实施方式，所述烷化剂选自白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、顺铂、卡铂、异环磷酰胺、甲氮芥、美法仑、噻替派、达卡巴嗪和丙卡巴肼。根据某些实施方式，所述抗肿瘤抗生素选自博来霉素、放线菌素D、道诺霉素、多柔比星、伊达比星、丝裂霉素、米托蒽醌和普卡霉素。根据某些实施方式，所述拓扑异构酶II抑制剂选自依托泊苷和替尼泊苷。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
根据某些特定实施方式，所述抗癌药剂选自贝伐单抗、卡铂、环磷酰胺、盐酸多柔比星、盐酸吉西他滨、盐酸拓扑替康、噻替派及其组合。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
本发明的单克隆抗体可以用作具有至少一种抗癌药剂的组合疗法的一部分。根据某些实施方式，所述另外的抗癌药剂是免疫调节剂、活化的淋巴细胞、激酶抑制剂或化学治疗剂。
根据某些实施方式，所述抗癌药剂是免疫调节剂，不论是激动剂还是拮抗剂，例如针对检验点分子的抗体。
检验点免疫疗法阻断已被证明是癌症治疗的激动人心的新途径。免疫检验点途径由大量共同刺激性和抑制性分子构成，它们一起工作以便在生理条件下维持自我耐受并保护组织免于被免疫系统损坏。肿瘤利用某些检验点途径以便避开免疫系统。因此，这些途径的抑制已作为有希望的抗癌治疗策略出现。
抗细胞毒性T淋巴细胞4(CTLA-4)抗体易普利单抗(ipilimumab)(在2011年被批准)是对癌症患者的治疗显示出益处的第一种免疫治疗剂。所述抗体干扰在抗原向T细胞呈递期间的抑制性信号。抗程序性细胞死亡1(PD-1)抗体帕姆单抗(在2014年批准)阻断由T细胞表达的PD-1受体的负免疫调控信号传导。在2014年提交管理批准的另一种抗PD-1药剂用于治疗非小细胞肺癌(NSCLC)。积极的研究目前正在探索许多其他免疫检查点，其中包括CEACAM1、淋巴细胞活化基因3(LAG3)、CD137、OX40(也被称为CD134)和杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)。
根据某些特定实施方式，所述免疫调节剂选自：抑制CTLA-4的抗体，抗人类程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)、PD-L1和PD-L2抗体，活化的细胞毒性淋巴细胞，淋巴细胞活化剂，针对CEACAM的抗体和RAF/MEK途径抑制剂。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。根据某些特定实施方式，所述另外的免疫调节剂选自针对PD-1的mAb、针对PD-L1的mAb、针对PD-L2的mAb、针对CEACAM1的mAb、针对CTLA-4的mAb、白介素2(IL-2)或淋巴因子活化的杀伤细胞(LAK)。
根据其他实施方式，所述抗癌药剂是化学治疗剂。可以与本发明的抗体一起给药或分开给药的化学治疗剂，可以包含本领域中已知的任何这种表现出抗癌活性的药剂，包括但不限于：米托蒽醌；拓扑异构酶抑制剂；纺锤体毒药长春花：长春花碱，长春新碱，长春瑞滨(紫杉酚)，紫杉醇，多西他赛；烷化剂：甲氮芥，苯丁酸氮芥，环磷酰胺，美法仑，异环磷酰胺；甲氨蝶呤；6-巯基嘌呤；5-氟脲嘧啶，阿糖孢苷，吉西他滨；鬼臼毒素：依托泊苷，伊立替康，拓扑替康，达卡巴嗪；抗生素：多柔比星(阿霉素)，博来霉素，丝裂霉素；亚硝基脲：卡莫司汀(BCNU)，洛莫司汀，表柔比星，伊达比星，道诺霉素；无机离子：顺铂，卡铂；干扰素，天冬酰胺酶；激素：他莫昔芬，亮丙瑞林，氟他胺，和醋酸甲地孕酮。
根据某些实施方式，所述化学治疗剂选自烷化剂、抗代谢物、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物和相关抑制剂、长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、L-天冬酰胺酶、拓扑异构酶抑制剂、干扰素、铂配位络合物、蒽二酮取代的脲、甲基肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、肾上腺皮质类固醇、孕激素、雌激素、抗雌激素、雄激素、抗雄激素和促性腺激素释放激素类似物。根据另一个实施方式，所述化学治疗剂选自5-氟脲嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸(LV)、伊立替康、奥沙利铂、卡培他滨、紫杉醇和多西他赛。可以使用一种或多种化学治疗剂。
在某些实施方式中，本发明的药物组合物用于治疗癌症或用于增强免疫应答。
术语“增强免疫应答”是指提高免疫系统的应答性并延长其记忆。本发明的药物组合物可用于在疫苗接种后刺激免疫系统。因此，在一个实施方式中，所述药物组合物可用于改善疫苗接种。
在某些实施方式中，所述癌症选自肺癌、甲状腺癌、乳腺癌、结肠癌、黑素瘤、前列腺癌、肝癌、膀胱癌、肾癌、宫颈癌、胰腺癌、白血病、淋巴瘤、髓样癌、卵巢癌、子宫癌、肉瘤、胆管癌和子宫内膜细胞癌。每种可能性代表本发明的独立的实施方式。
根据某些实施方式，包含本发明的至少一种抗体或其片段的药物组合物和包含另外的免疫调节剂或激酶抑制剂的药物组合物，通过分开给药用于癌症的治疗。
另一方面，本发明提供了一种在需要的对象中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述对象给药治疗有效量的本发明的单克隆抗体或抗体片段。
术语“治疗”是指采取步骤以获得有益或所需的结果，包括临床结果。有益或所需的临床结果包括但不限于与肌营养不良症相关的一种或多种症状的缓解或改善，该损伤的延迟或减缓，该损伤的改善、缓和或稳定化，以及其他有益结果。
当在本文中使用时，术语“有效量”是指所述单克隆抗体或抗体片段当给药到对象时具有目标治疗效果的足够的量。实现治疗最终结果所需的有效量可能取决于多种因素，包括例如肿瘤的具体类型和患者病症的严重性，以及所述组合是否进一步与辐射共同给药。在本发明的情形中，活性药剂的有效量(剂量)应该足以在对象中随时间产生有益的治疗响应，包括但不限于肿瘤生长的抑制、肿瘤生长速率的降低、肿瘤和转移瘤生长的阻止和存活率提高。
本文中描述的组合物的毒性和治疗功效可以在细胞培养物或实验动物中通过标准的制药程序，例如通过确定主题化合物的IC50(提供50％抑制的浓度)和最大耐受剂量来确定。从这些细胞培养物测定法和动物研究获得的数据可用于配制大量在人类中使用的剂量。所述剂量可以随着尤其是所使用的剂型、所选的给药方案、用于治疗的药剂的组成和利用的给药途径等相关因素而变。准确的制剂、给药途径和剂量可以由各个医师根据患者的状况来选择。取决于待治疗的病症的严重性和响应性，给药也可以是缓释组合物的单次给药，其中治疗过程持续几天至几周或直至实现治愈或获得疾病状态的减少。待给药的组合物的量当然将取决于待治疗的对象、病痛的严重性、给药方式、处方医师的判断和所有其他相关因素。
术语向对象“给药”物质、化合物或药剂，可以使用本领域技术人员已知的各种不同方法之一来进行。例如，化合物或药剂可以肠内或肠胃外给药。肠内是指通过胃肠道给药，包括经口、舌下或直肠给药。肠胃外给药包括静脉内、真皮内、肌肉内、腹膜内、皮下、眼内、舌下、鼻内、通过吸入、脊柱内、脑内和透皮(通过吸收，例如通过皮肤导管)给药。化合物或药剂也可以适合地通过可重复装填或生物可降解的聚合物装置或其他装置例如贴片和泵，或通过制剂来导入，它们提供所述化合物或药剂的延长、缓慢或受控释放。给药也可以进行例如一次、多次和/或在一个或多个长的时间段内。在某些实施方式中，给药包括直接给药(包括自己给药)以及间接给药(包括开药的行动)两者。例如，当在本文中使用时，命令患者自己给药药物或由他人给药所述药物和/或为患者提供药物处方的医生，正将所述药物给药到所述患者。
抗体一般在约0.1至约20mg/kg患者体重，通常约0.5至约10mg/kg，常常约1至约5mg/kg的范围内给药。就此而言，优选地使用循环半衰期为至少12小时、优选地至少4天、更优选地长达21天的抗体。嵌合和人源化抗体预期分别具有长达4天和长达14-21天的循环半衰期。在某些情况下，给药大的负载剂量然后在治疗期间定期(例如每周)给药维持剂量，可能是有利的。抗体也可以通过缓释递送系统、泵和用于连续输注的其他已知递送系统来递送。
术语“约”意味着对特定值应该假定的可接受的误差范围，例如最多5％或10％。
提出下面的实施例是为了更充分说明本发明的某些实施方式。然而，它们绝不应该被解释为限制本发明的广阔范围。
实施例
实验程序
由于配体结合到所有人类NK细胞上和各种不同T细胞上存在的TIGIT蛋白，各种不同肿瘤的NK细胞细胞毒性被抑制。产生抗hTIGITmAb并测试它们拮抗由配体与hTIGIT的相互作用造成的杀灭抑制的能力。
使用了下述细胞系：人类EBV转化的721.221细胞，人类NK肿瘤细胞系YTS ECO，MEL562黑素瘤细胞，MDA-MB-231乳腺癌细胞和HepG2人类肝细胞。各种不同的YTS ECO转染子的产生：YTS hTIGIT以前已被描述(Stanietsky等，2009)。所有细胞都生长在增补有10％FCS的RPMI培养基中。
对于杀灭测定法来说，将靶细胞在添加到无甲硫氨酸培养基(Sigma)的35S-甲硫氨酸存在下生长过夜。在与效应细胞(NK细胞)温育之前，将细胞洗涤，计数，并将5000个细胞/孔铺板。使用0.5μgmAb的阻断抗体。对于每种靶来说，使用没有与效应细胞温育的细胞来计算自发35S释放，并通过向靶细胞施加100μl 0.1M NaOH来计算最大[35S]释放。在与效应细胞温育5小时(在37℃下)后，通过β-计数器MicroBeta 2(PerkinElmer)测量[35S]释放的量。
使用Biacore的KD确定
使用表面等离子体共振(SPR)生物传感器BiacoreTM T100(GE Healthcare)来确定抗体与TIGIT之间的Koff、Kon和KD。
实施例1.特异性针对TIGIT的单克隆抗体的生产
按照一个实施例，通过用TIGIT-Fc融合蛋白免疫接种来产生针对人类TIGIT的单克隆抗体。人类TIGIT的编码序列通过克隆，作为与IgG1的Fc片段的融合物而产生。将产生的重组融合蛋白注射到小鼠，并测试杂交瘤上清液对表达TIGIT的YTS NK细胞系转染子的特异性识别。
遵照
Figure BDA0001586946570000481
试剂(Ambion，目录号15596-026)的技术手册从得到的杂交瘤细胞提取总RNA，并通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。遵照PrimeScriptTM第一链cDNA合成试剂盒(Takara，目录号6110A)的技术手册，使用同种型特异性反义引物或通用引物将总RNA反转录成cDNA。按照cDNA末端快速扩增(RACE)的标准操作程序扩增VH、VL、CH和CL的抗体片段。使用标准的分子克隆程序，将扩增的抗体片段分别克隆在标准的克隆载体中。
进行菌落PCR筛选以鉴定具有正确尺寸的插入片段的克隆。对于每种抗体片段来说，对不少于5个具有正确尺寸的插入片段的单菌落进行测序。
结果
产生的两种特异性针对人类TIGIT的示例性单克隆抗体被命名为#4(或258-cs1#4)和VSIG9#1(或Vsig9.01)。正如图1A中证实的，这些mAb识别转染有人类TIGIT的YTS细胞。
将所述样品的分离的总RNA与DNA标志物Marker III(TIAGEN，目录号MD103)一起在1.5％琼脂糖/GelRedTM凝胶上运行。
将每种样品的4微升PCR产物与DNA Marker III一起在1.5％琼脂糖/GelRedTM凝胶上运行。将PCR产物纯化并储存在-20℃下直至进一步使用。
对不同克隆的VH、VL进行测序。下面列出的可变区的序列是由被命名为VSIG9#1和258-cs1.04的两个杂交瘤克隆产生的抗体的可变区序列。每条氨基酸链中的CDR序列带有下划线。
抗体VSIG9#1重链：DNA序列
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGAGCTGAGCTGGCGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACAAGCTATGGTATAAGCTGGGTGAAGCAGAGAACTGGACAGGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTATCCCAGAAGTGGTAATACTTACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCGTACATGGAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGAAAGGGACCCTACTATACTAAGAACGAGGACTACTGGGGCCAAGGCACCATTCTCACAGTCTCCTCA(SEQ ID NO：9)
抗体VSIG9#1重链：氨基酸序列
QVQLQESGAELARPGASVKLSCKASGYTFTSYGISWVKQRTGQGLEWIGEIYPRSGNTYYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYFCARKGPYYTKNEDYWGQGTILTVSS(SEQ ID NO：7)。
抗体VSIG9#1轻链：DNA序列
GACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTGGCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGAGCACATTTACTACAGTTTAGCATGGTATCAGCAGAAGCAAGGGAAATCTCCTCAGCTCCTGATCTATAATGCAAACAGCTTGGAAGATGGTGTCCCATCGAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACACAATATTCTATGAAGATCAACAGCATGCAGCCTGAAGATACCGCAACTTATTTCTGTAAACAGGCTTATGACGTTCCTCGGACCTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAACGGG CTGATGCTGCACCAACTGTATCC(SEQ ID NO：10)。
抗体VSIG9#1轻链：氨基酸序列
DIQMTQSPASLAASVGETVTITCRASEHIYYSLAWYQQKQGKSPQLLIYNANSLEDGVPSRFSGSGSGTQYSMKINSMQPEDTATYFCKQAYDVPRTFGGGTKLEIKRADAAPTVS(SEQ ID NO：8)
抗体258-cs1.04(也被称为#4)
抗体258-cs1.04重链：DNA序列
CAGGTCCAACTGCTGCAGCCTGGGGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCATCTACTGTATACACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTAGTCCTAGCAACGGTCGTACTATCTACAATGAGAAGTTCAAGAACAAGGCCACACTGACTATAGACAAATCCTCCACCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTGCTGTGCAATATCGGATGGTTACGACGGATACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA(SEQ ID NO：20)。
抗体258-cs1.04重链：氨基酸序列
QVQLLQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTIYCIHWVKQRPGQGLEWIGEISPSNGRTIYNEKFKNKATLTIDKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYCCAISDGYDGYYFDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO：18)。
抗体258-cs1.04轻链：DNA序列
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCTTATCTGCCTCTCTGGGAGAAAGAGTCAGTCTCACTTGTCGGGCAAGTCAGGAAATTAGTGGTTACTTAAACTGGCTTCAGCAGAAACCAGATGGAACTATTAAACGCCTGATCTACGCCGCATCCACTTTAGATTCTGGTGTCCCAAAAAGGTTCAGTGGCAGTAGGTCTGGGTCAGATTATTCTCTCACCATCAGCAGACTTGAGTCTGAAGATTTTGCAGACTATTACTGTCTACAATATGCTAGTTATCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA(SEQ ID NO：21)。
抗体258-cs1.04轻链：氨基酸序列
DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQEISGYLNWLQQKPDGTIKRLIYAASTLDSGVPKRFSGSRSGSDYSLTISRLESEDFADYYCLQYASYPRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：19)。
表1列出了两种抗人类TIGIT mAb的CDR和可变区氨基酸序列和可变区序列。
表1.
Figure BDA0001586946570000521
实施例2.TIGIT在效应免疫细胞上的广泛表达。
为了检查mAb对TIGIT的识别，将2*105个过表达TIGIT的YTS细胞(如以前由Stanietsky等，同上，所述)与0.2微克抗TIGIT mAb克隆VSIG9#1或#4在冰上温育30min。在FACS缓冲液中洗涤两轮之后，添加山羊抗小鼠IgG(H+L)第二抗体-Alexa
Figure BDA0001586946570000522
647偶联物(BioLegend)，在冰上继续温育30min。如图1A中所示，所述mAb识别过表达TIGIT的YTS细胞上的TIGIT蛋白(右侧曲线)，但是不识别YTS细胞上的TIGIT蛋白。mIgG被用作对照。接下来，在来自于两个健康供体的活化的NK细胞上检查VSIG9#1。如图1B中所示，所述mAb识别所述NK细胞(FACS柱状图中的右侧曲线)。mIgG被用作对照(左侧曲线)。
接下来，在从黑素瘤患者获得的两个CD8+T细胞群体(TIL-I和TIL-II)上检查VSIG9#1。如图1C中所示，所述mAb识别T-细胞(FACS柱状图中的右侧曲线)。mIgG被用作对照(左侧曲线)。总的来说，图1A-1C显示了TIGIT在免疫细胞上的广泛表达，并证实了VSIG9#1mAb可以结合到免疫细胞。
实施例3.抗TIGIT抗体VSIG9#1阻断TIGIT-Fc结合到肿瘤细胞。
为了检查VSIG9#1对TIGIT-Fc结合到肿瘤细胞的影响，将2.5*105个HepG2细胞(其表达高水平的PVR、连接蛋白-2和连接蛋白-3)与25微克/孔的hTIGIT-Fc在不含mAb(图2A，箭头1)、含有mIgG(图2A，箭头2)或含有所注明的浓度的抗TIGIT抗体VSIG9#1(图2A，箭头3和4)的情况下，在冰上温育30min，使用Alexa
Figure BDA0001586946570000532
647抗人类IgG抗体(BioLegend)来进行检测。在图2B中证实了TIGIT配体PVR、连接蛋白-2和连接蛋白-3在HepG2细胞上的表达。
结果证实所述mAb可以阻止TIGIT结合到肿瘤细胞，表明所述抗体能够阻止免疫应答的抑制。
实施例4.VSIG9#1mAb增强杀灭活性。
为了检查抗TIGIT mAb对效应细胞的杀灭活性的影响，将YTS-TIGIT NK细胞与35S标记的721.221-PVR细胞在存在2.5微克/ml的对照mIgG(左侧条)或抗TIGIT抗体VSIG9#1(右侧条)的情况下温育(*p<0.02)。特异性杀灭如以前所述来计算(Stanietsky等，同上)。在5小时后检查杀灭百分率。如图3A中所示，抗TIGIT mAb VSIG9#1增强杀灭活性。接下来，对于用35S标记并在对照mIgG(左侧条)或VSIG9#1(右侧条)存在下与来自于健康供体的NK细胞温育的MDA-MB-231人类乳腺肿瘤细胞，检查特异性杀灭活性。在5小时后测量杀灭百分率(**p<0.002)。如图3B中所示，VSIG9#1增强杀灭效果。也使用MEL562黑素瘤细胞检查了两种抗体的特异性杀灭活性。如图3C中所示，与对照抗体mIgG(右侧条)相比，两种mAb 258-CS1#4(中央条)和VSIG9#1(左侧条)显著增强(**p<0.05)这些细胞的杀灭效果。最后，在用35S标记的人类肝细胞HepG2细胞上检查VSIG9#1的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，将所述细胞与抗EGFR mAb(爱必妥
Figure BDA0001586946570000531
)温育，并分别以10:1的效应细胞：靶细胞比例添加到与对照mAb(左侧条)或与VSIG9#1(右侧条)预温育的NK细胞。(***p<0.0007)。如图3D中所示，VSIG9#1能够增强杀灭效果。
结果证实，所试验的抗人类mAb VSIG9#1和258-CS1#4能够在各种不同条件下增强对不同靶细胞的杀灭效果。所述mAb阻止TIGIT受体的抑制效应，并因此适合用作抗癌药剂。
实施例5.抗体#4和VSIG9#1阻断TIGIT结合到PVR。
为了检查mAb 258-CS1#4和VSIG9#1阻断TIGIT与其配体的相互作用的能力，将表达PVR、连接蛋白-2和连接蛋白-3的HepG2细胞与TIGIT-Fc或者与mAb VSIG-9#1(图4A)或mAb 258-CS1#4(图4B)预温育之后的TIGIT-Fc温育。结果显示，TIGIT-Fc与VSIG-9#1的预温育完全阻断了TIGIT-Fc结合(图4A)，而与mAB 258-CS1#4的预温育部分阻断了TIGIT-Fc结合(图4B)。
实施例6.抗体258-CS1#4和VSIG-9#1对TIGIT表现出高且超常的亲和性
使用Biacore进行所述mAb与来自于两个来源的人类TIGIT的全结合动力学分析。图5A和5B中示出的结果表明，所述两种mAb对人类TIGIT表现出高的亲和性。尽管被命名为258-CS1#4(#4)的mAb具有约1x10-7M(9.96x10-8M和1.07x10-7M的平均值)的平均Kd，但mAbVSIG-9#1以极高的亲和性结合人类TIGIT，Kd为4.5x10-10M(5.13-10M和3.87-10M的平均值)。
进一步证实了mAb VSIG-9#1特异性针对人类TIGIT并且不结合小鼠TIGIT。
实施例7.抗体VSIG9#1与商品化抗体MBSA43相比对TIGIT表现出更高的亲和性。
比较了抗体VSIG9#1和MBSA43对TIGIT的结合亲和性。在通过FACS确定后，将75x103个表达TIGIT的YTS细胞用250nM至65fM的连续稀释浓度下的两种抗体染色。如图6A和6B中所示，VSIG#9在低至62.5fM的浓度下染色细胞，而MBSA43仅在高于1950fM(1.95pM)的浓度下染色细胞，并且在最后4个稀释度下不显示出染色。在高达250pM的浓度下观察到两种抗体之间的明显的染色差异。VSIG9#1抗体与MBSA43抗体相比的优越性也被示出在图6B中。
实施例8.VSIG9#1的阻断活性高于商品化抗体MBSA43的阻断活性。
为了检查抗TIGIT抗体对PVR-TIGIT结合的阻断效果，用PVR-Fc进行了表达TIGIT的YTS细胞的染色测定。在两倍连续稀释液中27至0.014pmole浓度范围的VSIG9#1或MBSA43存在下，将75x103个YTS-TIGIT细胞与2.5pmole PVR-Fc温育。
如图7A(结合的PVR的检测)和7B(结合的抗TIGIT mAb的检测)中所示，与MBSA43相比，VSIG9#1的PVR-TIGIT阻断活性显著更高。
实施例7和8的结果证实，与MBSA43相比，VSIG9#1对人类TIGIT具有显著更高的亲和性，并且它在一定浓度范围内阻止高亲和性配体(PVR)的结合方面显著更好。
实施例9.抗TIGIT mAb与其他检验点分子抑制剂的协同增效活性
检查了mAb VSIG9#1(Vsig9.01)单独地或与其他免疫调节剂相组合，通过阻断TIGIT来诱导T细胞增殖的功效。将来自于健康供体的PBMC用5(6)-羧基荧光素N-羟基琥珀酰亚胺基酯(CFSE)标记并用抗CD3抗体活化，然后与过表达hCD80的MDA-MB-231细胞在单独或组合的4μg/ml mAb VSIG9#1、抗PD-1抗体(Keytruda)和抗CTLA4抗体(普利单抗(pilimumab))存在下温育5-9天。通过CFSE稀释来测量增殖。
图8中示出的从至少5个不同实验收集的数据，指示了抗TIGITmAb与抗PD-1抗体或抗CTLA4抗体之间的协同增效作用，这由VSIG9#1与其他检验点抗体的组合的显著提高的T-细胞增殖所证实(*p<0.04**<0.015***<0.0004)。
实施例10.人源化抗TIGIT抗体在人类肿瘤的小鼠模型中的体内效果
在体内研究了所述抗体的抗肿瘤功效。为了估算本文中描述的抗体在人类癌症的抑制中的功效，在合并了人类来源的肿瘤和淋巴细胞两者的模型中研究了所述抗体。将hPBL植入重症联合免疫缺陷小鼠(SCID)以恢复免疫功能。将小鼠用人类癌细胞激惹并用浓度逐渐增加的抗人类TIGIT抗体处理，所述抗体在肿瘤激惹后几天以单个或多个血管内剂量进行给药。
按照Paine-Murrieta GD,Cancer Chemother Pharmacol.1997；40(3):209-14来进行SCID小鼠中使用肿瘤细胞系的类似模型。
实施例11.人源化抗TIGIT抗体对SCID小鼠中人类黑素瘤(SK-28)的抑制
为了估算抗TIGIT抗体在人类癌症的抑制中的功效，在合并了人类来源的肿瘤和淋巴细胞两者的模型中研究了所述修饰的抗体。将hPBL植入重症联合免疫缺陷小鼠(SCID)以恢复免疫功能。将小鼠用人类黑素瘤细胞(SK-28)激惹并用浓度逐渐增加的抗体处理，所述抗体在肿瘤接种后第11天以单个i.v.剂量进行给药。
类似地，使用由Hardy等，Proc Natl Acad Sci U S A.1997May 27；94(11):5756–5760所描述的模型。
实施例12.在裸小鼠中使用抗TIGIT mAb对人类结肠直肠癌肝转移进行免疫疗法
LIM6和HM7是人类CRC细胞系LS174T的两个亚克隆，它们因其高的粘蛋白合成和转移潜力而被选出。将肿瘤细胞注入到麻醉的裸小鼠的暴露出的脾脏中。几分钟后，摘除脾脏并闭合切口。10天后给药低剂量的本发明的抗TIGIT抗体，并在肿瘤接种后35天将小鼠处死。将肝脏称重，对转移结节的数目进行计数，并对肝组织进行处理以用于组织学和免疫组织化学研究。
Yung等，Ocul Oncol Pathol.2015Apr；1(3):151–160描述了可用于测试本发明的抗体和片段的其他转移模型。
实施例13.抗TIGIT抗体对AML细胞具有协同增效效果
从AML患者获得骨髓抽吸物，在Ficoll分离后将免疫细胞和母细胞与各种不同的抗体(4μg/ml)共培养12天，在12天后，确定T细胞的量。
正如图9中所证实的，在存在抗TIGIT VSIG9#1mAb的情况下观察到CD8T细胞的量的显著增加。有趣的是，TIGIT的阻断与PD-1和CTLA-4的阻断具有协同增效效果。
上面特定实施方式的描述充分揭示了本发明的总体性质，使得其他人可以通过使用现有知识，在不需过多实验并且不背离一般化概念的情况下，容易地修改和/或改编这些具体实施方式以适应于各种不同应用，因此，这些改编和修改应该并且打算被涵盖在所公开的实施方式的等同性意义和范围之内。应该理解，本文中使用的短语或术语是出于描述而不是限制的目的。
序列表
<110> 耶路撒冷希伯来大学伊萨姆研究发展有限公司
里耶卡医学大学
<120> 特异性针对人类T-细胞免疫球蛋白和ITIM结构域（TIGIT）的抗体
<130> YISSUM/0124 PCT
<150> 62/213140
<151> 2015-09-02
<150> 62/314427
<151> 2016-03-29
<160> 21
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 1
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Gly Ile Ser
1 5 10
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 2
Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 3
Lys Gly Pro Tyr Tyr Thr Lys Asn Glu Asp Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 4
Arg Ala Ser Glu His Ile Tyr Tyr Ser Leu Ala
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 5
Asn Ala Asn Ser Leu Glu Asp
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 6
Lys Gln Ala Tyr Asp Val Pro Arg Thr
1 5
<210> 7
<211> 120
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 7
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Gly Pro Tyr Tyr Thr Lys Asn Glu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ile Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 8
<211> 116
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu His Ile Tyr Tyr Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Asn Ser Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Met Lys Ile Asn Ser Met Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Lys Gln Ala Tyr Asp Val Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro Thr Val Ser
115
<210> 9
<211> 360
<212> DNA
<213> Mus Musculus
<400> 9
caggtgcagc tgcaggagtc tggagctgag ctggcgaggc ctggggcttc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcaca agctatggta taagctgggt gaagcagaga 120
actggacagg gccttgagtg gattggagag atttatccca gaagtggtaa tacttactac 180
aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actgcagaca aatcctccag cacagcgtac 240
atggagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct atttctgtgc aagaaaggga 300
ccctactata ctaagaacga ggactactgg ggccaaggca ccattctcac agtctcctca 360
<210> 10
<211> 348
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 10
gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctggctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60
atcacatgtc gagcaagtga gcacatttac tacagtttag catggtatca gcagaagcaa 120
gggaaatctc ctcagctcct gatctataat gcaaacagct tggaagatgg tgtcccatcg 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacacaa tattctatga agatcaacag catgcagcct 240
gaagataccg caacttattt ctgtaaacag gcttatgacg ttcctcggac cttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatcc 348
<210> 11
<211> 6
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 11
Thr Ser Tyr Gly Ile Ser
1 5
<210> 12
<211> 5
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 12
Ile Tyr Cys Ile His
1 5
<210> 13
<211> 17
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 13
Glu Ile Ser Pro Ser Asn Gly Arg Thr Ile Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asn
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 14
Ser Asp Gly Tyr Asp Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 15
<211> 11
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 15
Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Gly Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 16
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 16
Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser
1 5
<210> 17
<211> 9
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 17
Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Arg Thr
1 5
<210> 18
<211> 120
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 18
Gln Val Gln Leu Leu Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ile Tyr
20 25 30
Cys Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Ser Pro Ser Asn Gly Arg Thr Ile Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Ile Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Cys Cys
85 90 95
Ala Ile Ser Asp Gly Tyr Asp Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 19
<211> 107
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 19
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Gly Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Leu Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 20
<211> 360
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 20
caggtccaac tgctgcagcc tggggctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc atctactgta tacactgggt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggagag attagtccta gcaacggtcg tactatctac 180
aatgagaagt tcaagaacaa ggccacactg actatagaca aatcctccac cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attgctgtgc aatatcggat 300
ggttacgacg gatactactt tgactactgg ggccaaggca ccactctcac agtctcctca 360
<210> 21
<211> 321
<212> DNA
<213> Mus musculus
<400> 21
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ttatctgcct ctctgggaga aagagtcagt 60
ctcacttgtc gggcaagtca ggaaattagt ggttacttaa actggcttca gcagaaacca 120
gatggaacta ttaaacgcct gatctacgcc gcatccactt tagattctgg tgtcccaaaa 180
aggttcagtg gcagtaggtc tgggtcagat tattctctca ccatcagcag acttgagtct 240
gaagattttg cagactatta ctgtctacaa tatgctagtt atcctcggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa a 321

Claims (22)

1.一种结合人类T-细胞免疫球蛋白和ITIM结构域(TIGIT)的分离的单克隆抗体或其至少包含抗原结合部分的功能性抗体片段，其中所述分离的单克隆抗体或抗体片段包含
三个重链(HC)互补决定区(CDR)和三个轻链(LC)CDR，其中HC CDR1是序列GYTFTSYGIS(SEQ ID NO：1)，HC CDR2是序列EIYPRSGNTYYNEKFKG(SEQ ID NO：2)，HC CDR3是序列KGPYYTKNEDY(SEQ ID NO：3)，LC CDR1是RASEHIYYSLA(SEQ ID NO：4)，LC CDR2是NANSLED(SEQ ID NO：5)，和LC CDR3是KQAYDVPRT(SEQ ID NO：6)；所述功能性抗体片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fd'、Fv、dAb、分离的CDR区、单链抗体、双体抗体和线性抗体。
2.权利要求1所述的分离的单克隆抗体或抗体片段，其包含重链和轻链，其中所述重链包含SEQ ID NO：7并且所述轻链包含SEQ ID NO：8。
3.权利要求1或2所述的分离的单克隆抗体或抗体片段，其中所述单克隆抗体具有低于10-9M的解离常数(Kd)。
4.权利要求1或2所述的单克隆抗体或抗体片段，其中所述单克隆抗体或抗体片段结合所述人类TIGIT蛋白内与具有包含氨基酸序列SEQ ID NO：7的重链和包含氨基酸序列SEQIDNO：8的轻链的单克隆小鼠抗体结合的表位。
5.权利要求1或2所述的分离的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体选自：双特异性抗体，人源化抗体，或抗体偶联物。
6.权利要求1或2所述的分离的单克隆抗体，其能够抑制TIGIT与选自PVR(CD155)、PVRL2(CD112)、PVRL3(CD113)及其任何组合的至少一种配体的结合。
7.权利要求1或2所述的单克隆抗体，其被附连到细胞毒性组成部分、放射活性组成部分或可识别性组成部分。
8.一种多核苷酸，其包含：(1)单克隆抗体重链可变区的编码序列，所述编码序列在SEQID NO：9中示出，以及(2)单克隆抗体轻链可变区的编码序列，所述编码序列在SEQ ID NO：10中示出。
9.一种杂交瘤细胞，其包含权利要求8所述的多核苷酸。
10.一种杂交瘤细胞，其能够生产权利要求1至7中任一项所述的单克隆抗体。
11.一种药物组合物，其包含至少一种根据权利要求1至7中任一项所述的分离的单克隆抗体或抗体片段作为活性成分，以及可药用赋形剂、稀释剂、盐或载体。
12.根据权利要求1至7中任一项所述的分离的单克隆抗体或抗体片段在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述癌症选自肺癌、甲状腺癌、乳腺癌、结肠癌、黑素瘤、前列腺癌、肝癌、膀胱癌、肾癌、宫颈癌、胰腺癌、白血病、淋巴瘤、髓样癌、卵巢癌、子宫癌、肉瘤、胆管癌、非小细胞肺癌和子宫内膜细胞癌。
13.权利要求12所述的用途，其中所述药物还包括另外的免疫调节剂、活化的淋巴细胞、激酶抑制剂、化学治疗剂或任何其他抗癌药剂。
14.权利要求13所述的用途，其中所述另外的免疫调节剂是针对免疫检验点分子的抗体。
15.权利要求14所述的用途，其中所述免疫检验点分子选自PD-1、CTLA-4、PDL-1、CEACAM1、淋巴细胞活化基因3(LAG3)、CD137、OX40(也被称为CD134)、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)及其任何组合。
16.权利要求13所述的用途，其中所述抗癌药剂是表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂。
17.权利要求16所述的用途，其中所述EGFR抑制剂选自西妥昔单抗、帕尼单抗和耐昔妥珠单抗。
18.权利要求12或13所述的用途，其中所述癌症选自黑素瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌、结肠癌和肝癌。
19.权利要求12或13所述的用途，其中所述癌症是白血病。
20.一种确定或定量TIGIT的表达的非诊断性体外方法，所述方法包括将生物样品与权利要求1至7中任一项所述的单克隆抗体或抗体片段相接触，并测量复合体形成的水平。
21.权利要求20所述的方法，其包括下述步骤：
i.将样品与所述单克隆抗体或抗体片段温育；
ii.使用可检测的探针检测结合的TIGIT；
iii.将(ii)的量与从含有已知量的TIGIT的参比样品获得的标准曲线进行比较；并且
iv.从所述标准曲线计算所述样品中TIGIT的量。
22.一种用于测量生物样品中TIGIT的表达的试剂盒，其包含至少一种根据权利要求1至7中任一项所述的单克隆抗体或抗体片段。
CN201680051019.6A 2015-09-02 2016-09-01 特异性针对人类t-细胞免疫球蛋白和itim结构域(tigit)的抗体 Active CN108137691B (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562213140P 2015-09-02 2015-09-02
US62/213,140 2015-09-02
US201662314427P 2016-03-29 2016-03-29
US62/314,427 2016-03-29
PCT/IL2016/050952 WO2017037707A1 (en) 2015-09-02 2016-09-01 Antibodies specific to human t-cell immunoglobulin and itim domain (tigit)

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108137691A CN108137691A (zh) 2018-06-08
CN108137691B true CN108137691B (zh) 2021-10-19

Family

ID=57068160

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680051019.6A Active CN108137691B (zh) 2015-09-02 2016-09-01 特异性针对人类t-细胞免疫球蛋白和itim结构域(tigit)的抗体

Country Status (7)

Country Link
US (2) US10946095B2 (zh)
EP (1) EP3344658B1 (zh)
JP (1) JP6861418B2 (zh)
CN (1) CN108137691B (zh)
CA (1) CA2997130A1 (zh)
ES (1) ES2924071T3 (zh)
WO (1) WO2017037707A1 (zh)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
TWI715587B (zh) 2015-05-28 2021-01-11 美商安可美德藥物股份有限公司 Ｔｉｇｉｔ結合劑和彼之用途
RU2020124191A (ru) 2015-10-01 2020-08-27 Потенза Терапевтикс, Инк. Анти-tigit антиген-связывающие белки и способы их применения
US9567399B1 (en) 2016-06-20 2017-02-14 Kymab Limited Antibodies and immunocytokines
SG11201810509PA (en) 2016-06-20 2018-12-28 Kymab Ltd Anti-pd-l1 antibodies
JP7198752B2 (ja) 2016-08-09 2023-01-04 カイマブ・リミテッド 抗ｉｃｏｓ抗体
US11779604B2 (en) 2016-11-03 2023-10-10 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods
BR112019010943A8 (pt) 2016-11-30 2023-02-07 Oncomed Pharm Inc Usos de um anticorpo que se liga especificamente ao domínio extracelular de tigit humano para a inibição do crescimento do tumor, composição que compreende o dito anticorpo, polinucleotídeo, vetor e célula
JOP20190203A1 (ar) * 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها
JP2020517699A (ja) 2017-04-26 2020-06-18 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ ジスルフィド結合の還元を最小限にする抗体製造法
MA50957A (fr) 2017-05-01 2020-10-14 Agenus Inc Anticorps anti-tigit et leurs méthodes d'utilisation
US11225523B2 (en) 2017-06-01 2022-01-18 Compugen Ltd. Triple combination antibody therapies
WO2018229163A1 (en) 2017-06-14 2018-12-20 King's College London Methods of activating v delta 2 negative gamma delta t cells
GB201709808D0 (en) 2017-06-20 2017-08-02 Kymab Ltd Antibodies
WO2019062832A1 (zh) * 2017-09-29 2019-04-04 江苏恒瑞医药股份有限公司 Tigit抗体、其抗原结合片段及医药用途
EP3728314A1 (en) 2017-12-19 2020-10-28 Kymab Limited Bispecific antibody for icos and pd-l1
JP7369127B2 (ja) 2017-12-28 2023-10-25 ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド Ｔｉｇｉｔに対する単一ドメイン抗体及びその変異体
CA3084518A1 (en) 2018-01-15 2019-07-18 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against pd-1
JP7156607B2 (ja) * 2018-02-06 2022-10-19 アイ－エムエービー バイオファーマ （ハンジョウ） カンパニー リミテッド Ｉｇおよびｉｔｉｍドメインを持つｔ細胞免疫受容体（ｔｉｇｉｔ）に対する抗体およびその使用
WO2019215728A1 (en) 2018-05-09 2019-11-14 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Antibodies specific to human nectin4
CN110737397B (zh) * 2018-07-20 2023-08-11 伊姆西Ip控股有限责任公司 用于管理存储系统的方法、设备和计算机程序产品
EP3838289A4 (en) * 2018-07-25 2022-08-03 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. ANTI-TIGIT ANTIBODIES AND USES THEREOF
EP3841123A2 (en) 2018-08-23 2021-06-30 Seagen Inc. Anti-tigit antibodies
US20230071889A1 (en) 2018-12-21 2023-03-09 Ose Immunotherapeutics Bifunctional anti-pd-1/il-7 molecule
WO2020144697A1 (en) * 2019-01-13 2020-07-16 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Antibodies specific to human nectin-2
WO2020165374A1 (en) 2019-02-14 2020-08-20 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecule comprising il-15ra
CN111744013B (zh) * 2019-03-29 2022-07-26 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗tigit抗体联合pd-1抑制剂治疗疾病的方法和药物组合
WO2021008523A1 (zh) * 2019-07-15 2021-01-21 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗tigit抗体及其应用
TW202124452A (zh) * 2019-11-14 2021-07-01 中國大陸商上海藥明生物技術有限公司 抗tigit的新型抗體
AU2020406083A1 (en) 2019-12-17 2022-06-16 Boehringer Ingelheim International Gmbh Bifunctional molecules comprising an IL-7 variant
CN110818795B (zh) * 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法
CA3176497A1 (en) 2020-05-07 2021-11-11 Fatima MECHTA-GRIGORIOU Antxr1 as a biomarker of immunosuppressive fibroblast populations and its use for predicting response to immunotherapy
CN111995681B (zh) * 2020-05-09 2022-03-08 华博生物医药技术（上海）有限公司 抗tigit的抗体、其制备方法和应用
JP2023531200A (ja) 2020-06-18 2023-07-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｔｉｇｉｔ抗体及びｐｄ－１軸結合アンタゴニストを用いた治療
TW202216778A (zh) 2020-07-15 2022-05-01 美商安進公司 Ｔｉｇｉｔ及ｃｄ１１２ｒ阻斷
WO2022044010A1 (en) 2020-08-26 2022-03-03 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Anti-t-cell immunoglobulin and itim domain (tigit) antibodies for the treatment of fungal infections
WO2022105872A1 (zh) * 2020-11-23 2022-05-27 广东菲鹏制药股份有限公司 抗tigit抗体或其抗原结合片段
WO2022112198A1 (en) 2020-11-24 2022-06-02 Worldwide Innovative Network Method to select the optimal immune checkpoint therapies
WO2022148781A1 (en) 2021-01-05 2022-07-14 Institut Curie Combination of mcoln activators and immune checkpoint inhibitors
EP4291580A1 (en) 2021-02-11 2023-12-20 Nectin Therapeutics Ltd. Antibodies against cd112r and uses thereof
IL307419A (en) 2021-04-09 2023-12-01 Ose Immunotherapeutics A new scaffold for bifunctional molecules with improved properties
EP4320156A1 (en) 2021-04-09 2024-02-14 Ose Immunotherapeutics Scaffold for bifunctioanl molecules comprising pd-1 or cd28 and sirp binding domains
AR125753A1 (es) 2021-05-04 2023-08-09 Agenus Inc Anticuerpos anti-tigit, anticuerpos anti-cd96 y métodos de uso de estos
JP7550494B2 (ja) 2021-05-10 2024-09-13 メディマブバイオ インコーポレイテッド 抗ｔｉｇｉｔ抗体およびその用途
EP4377350A2 (en) 2021-07-28 2024-06-05 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating cancer
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
EP4413363A1 (en) * 2021-10-08 2024-08-14 Arbele Limited Compositions and methods for detecting cadherin-17 protein
WO2023178192A1 (en) 2022-03-15 2023-09-21 Compugen Ltd. Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
WO2024003360A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Institut Curie Biomarkers and uses thereof for the treatment of neuroblastoma
WO2024028386A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Ose Immunotherapeutics Multifunctional molecule directed against cd28
WO2024200823A1 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticle targeted at activated immune cells for the expression of immune cell enhancing molecule and use thereof
WO2024200826A1 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticle targeted at activated immune cells for the expression of immune cell inhibiting molecule and use thereof

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009126688A2 (en) * 2008-04-09 2009-10-15 Genentech, Inc. Novel compositions and methods for the treatment of immune related diseases
CN103073644A (zh) * 2012-12-31 2013-05-01 中国科学技术大学 特异性抗小鼠tigit的单克隆抗体及其制备方法、鉴定及应用
CN103492417A (zh) * 2010-10-08 2014-01-01 北卡罗来纳大学夏洛特分校 肿瘤特异的抗体和其用途
WO2015009856A2 (en) * 2013-07-16 2015-01-22 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and tigit inhibitors

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
WO1993011161A1 (en) 1991-11-25 1993-06-10 Enzon, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
RU2128709C1 (ru) 1992-01-23 1999-04-10 Мерк Патент Гмбх Способ получения димерного одноцепочечного слитого белка (варианты)
US5869337A (en) 1993-02-12 1999-02-09 President And Fellows Of Harvard College Regulated transcription of targeted genes and other biological events
JP3659261B2 (ja) 1994-10-20 2005-06-15 モルフォシス・アクチェンゲゼルシャフト 組換体タンパク質の多機能性複合体への標的化ヘテロ結合
GB9421405D0 (en) 1994-10-21 1994-12-07 Dow Chemical Co Low voc laminating formulations
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
WO1996037621A2 (en) 1995-05-23 1996-11-28 Morphosys Gesellschaft Für Proteinoptimierung Mbh Multimeric proteins
PT941344E (pt) 1996-11-27 2004-10-29 Genentech Inc Anticorpos anti-cd11a humanizados
WO1999063063A1 (en) 1998-06-03 1999-12-09 Northwestern University Cellular proteins which mediate herpesvirus entry
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
CA2497334A1 (en) 2002-09-11 2004-03-25 Genentech, Inc. Novel compositions and methods for the treatment of immune related diseases
EP1539228B1 (en) 2002-09-11 2010-12-29 Genentech, Inc. Novel composition and methods for the treatment of immune related diseases
AU2003289899A1 (en) 2002-12-05 2004-06-23 Ludwig-Maximilians-Uni Versitat Genetic switches for the detection of fusion proteins
EP1481993A1 (en) 2003-05-28 2004-12-01 Xerion Pharmaceuticals AG Modulation of the poliovirus receptor function
PE20050928A1 (es) 2003-11-21 2005-11-08 Schering Corp Combinaciones terapeuticas de anticuerpo anti-igfr1
EP2343318A3 (en) 2003-11-28 2013-02-27 MedImmune Limited Antibodies binding to a C-terminal fragment of apolipoprotein E
GT200500283A (es) 2004-10-08 2006-05-08 Inmunoterapia de desordenes autoinmunes
CA2607291A1 (en) 2005-05-12 2006-11-23 Steven D. Levin Compositions and methods for modulating immune responses
EP1931308A2 (en) 2005-09-27 2008-06-18 Efrat Biopolymers Ltd. Gelling hydrophobic injectable polymer compositions
US9017684B2 (en) * 2006-10-12 2015-04-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Diagnosis and treatment of cancer using anti-EREG antibody
JP5142265B2 (ja) 2007-05-28 2013-02-13 独立行政法人産業技術総合研究所 抗モータリン抗体のパラトープ及びエピトープ
WO2008146854A1 (ja) * 2007-05-28 2008-12-04 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology 抗モータリン抗体のパラトープ及びエピトープ
MX2009013503A (es) 2007-06-12 2010-01-27 Genentech Inc Anticuerpo monoclonal anti-amiloide-beta.
EP2388323B1 (en) * 2008-01-11 2016-04-13 Gene Techno Science Co., Ltd. Humanized anti-9 integrin antibodies and the uses thereof
JP2010014691A (ja) 2008-06-20 2010-01-21 Igaku Seibutsugaku Kenkyusho:Kk 腹水中のメソテリン及び／又は巨核球増強因子を検出するための方法、キット、試薬及び装置
US8256790B2 (en) 2010-05-26 2012-09-04 William Olen Fortner Adjustable receiver hitch system
CN104011925A (zh) 2011-12-27 2014-08-27 株式会社Lg化学 锂二次电池及其制备方法
GB201300049D0 (en) 2013-01-03 2013-02-20 Transimmune Ag Method for obtaining immuno-stimulatory dendritic cells
GB201300052D0 (en) 2013-01-03 2013-02-20 Transimmune Ag Method for obtaining immuno-suppressive dendritic cells
AP2017009765A0 (en) 2014-08-19 2017-02-28 Merck Sharp & Dohme Anti-tigit antibodies
EP3189133A4 (en) 2014-09-04 2018-04-11 Agency for Science, Technology and Research A method to up-regulate cancer stem cell markers for the generation of antigen specific cytotoxic effector t cells
EP3268012A4 (en) 2015-03-12 2018-10-31 Health Research, Inc. Enrichment of cd16+ monocytes to improve dendritic cell vaccine quality
TWI715587B (zh) 2015-05-28 2021-01-11 美商安可美德藥物股份有限公司 Ｔｉｇｉｔ結合劑和彼之用途
IL243461A0 (en) 2016-01-05 2016-02-29 Amir Avraham Surgical sutures for skin filling

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009126688A2 (en) * 2008-04-09 2009-10-15 Genentech, Inc. Novel compositions and methods for the treatment of immune related diseases
CN103492417A (zh) * 2010-10-08 2014-01-01 北卡罗来纳大学夏洛特分校 肿瘤特异的抗体和其用途
CN103073644A (zh) * 2012-12-31 2013-05-01 中国科学技术大学 特异性抗小鼠tigit的单克隆抗体及其制备方法、鉴定及应用
WO2015009856A2 (en) * 2013-07-16 2015-01-22 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and tigit inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
EP3344658B1 (en) 2022-05-11
US12121579B2 (en) 2024-10-22
JP2018532383A (ja) 2018-11-08
ES2924071T3 (es) 2022-10-04
US10946095B2 (en) 2021-03-16
CN108137691A (zh) 2018-06-08
CA2997130A1 (en) 2017-03-09
WO2017037707A1 (en) 2017-03-09
JP6861418B2 (ja) 2021-04-28
US20180185480A1 (en) 2018-07-05
EP3344658A1 (en) 2018-07-11
US20210220472A1 (en) 2021-07-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108137691B (zh) 特异性针对人类t-细胞免疫球蛋白和itim结构域(tigit)的抗体
US20240018257A1 (en) Antibodies specific to human poliovirus receptor (pvr)
KR20210009308A (ko) 인간 넥틴4에 특이적인 항체
CN113301954B (zh) 特异性针对人类连接蛋白-2的抗体
KR20230159823A (ko) Cd112r에 대한 항체 및 이의 용도
EP4055052A1 (en) Methods of treating cancer with anti-pd-1 antibodies
RU2825839C2 (ru) Антитела, специфичные к нектину-4 человека

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant