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CN107389941A - 一种肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒及其使用方法 - Google Patents

一种肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒及其使用方法 Download PDF

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CN107389941A
CN107389941A CN201710862340.9A CN201710862340A CN107389941A CN 107389941 A CN107389941 A CN 107389941A CN 201710862340 A CN201710862340 A CN 201710862340A CN 107389941 A CN107389941 A CN 107389941A
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rifle
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CN201710862340.9A
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王登瞻
胡星海
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Suzhou Sym Bio Lifescience Co Ltd
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Suzhou Sym Bio Lifescience Co Ltd
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens

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Abstract

本发明公开了一种肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒及其使用方法，该试剂盒具有若干并排设置的孔位，部分所述孔位包含的试剂有CK‑MB磁微粒试剂、CK‑MB标记反应物、样本稀释液、校准品、磁珠清洗液以及预激发液，各试剂采用热封膜技术分别密封储存于相应孔位内。本发明试剂盒采用化学发光仪器进行检测，化学发光仪器的低成本化、简单化及试剂的POCT化，将使得肌酸激酶同工酶的定量检测变得容易。

Description

一种肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒及其使 用方法
技术领域
本发明涉及一种化学发光定量检测试剂盒，尤其涉及一种肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒及其使用方法。
背景技术
CK-MB是肌酸激酶(CK，一种肌肉代谢的主酶)的三个异构体之一(另两个是CK-BB和CK-MM)。CK-MB分子量为84000，它由两个亚单位组成：M亚单位表示肌肉，B亚单位表示大脑。当发生急性心肌梗死(AMI)时，CK-MB即出现于血循环中并说明心肌层受到了损伤。CK-MB快速升高达到最高值(12小时内)，之后会下降到正常水平(36-72小时)。CK-MB升高的幅度、下降的幅度可以揭示心肌损伤的时间，有助于进行非侵入性再灌注及心肌梗死面积的评估。
该产品基于磁微粒化学发光技术，使用专利的磁棒提取技术，配合新波STBS全自动化学发光免疫分析仪使用，预期用于定量检测人血清、血浆中的肌酸激酶同工酶的含量。
目前临床常用检测肌酸激酶同工酶的方法有胶体金法、微流控和化学发光法等。其中，胶体金法操作方法灵活简便快速，但灵敏度偏低，特异性较差；另外微流控技术由于流道控制复杂，单测试的成本偏高，在目前状态下比较难普及。化学发光法灵敏度高，集合顺磁微粒达到快速反应的目的。但是一般化学发光机器由于有复杂的液路清洗系统，机器一般比较庞大，即使通过优化设计使变小，但是同时使得机器的日常维护变得困难。
发明内容
本发明为解决现有技术中的上述问题，提出一种肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒及其使用方法。
本发明针对现有肌酸激酶同工酶的定量检测需要灵敏度高(最低检测不高于0.3ng/ml)，特异性高，加样到出报告时间短的问题，提供一种肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒及其检测方法，可采用化学发光仪器进行检测，化学发光仪器的低成本化、简单化及试剂的POCT化，将使得肌酸激酶同工酶的定量检测变得容易。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明的第一个方面是提供一种肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒，包括由若干并排设置的孔位组成的试剂条，所述试剂条包含的试剂有CK-MB磁微粒试剂、CK-MB标记反应物。
进一步地，在所述肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒上，所述CK-MB磁微粒试剂是含有标记有抗CK-MB单克隆抗体的磁性微球。
进一步地，在所述肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒上，所述CK-MB标记反应物是含有吖啶酯标记的抗CK-MB单克隆抗体。
进一步地，在所述肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒上，所述试剂条上的一孔位内设有磁棒套。
进一步地，在所述肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒上，所述试剂盒还包含校准品、磁珠清洗液以及预激发液。
进一步地，在所述肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒上，所述磁珠清洗液是含有吐温、防腐剂的Tris-HCl缓冲液。
进一步地，在所述肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒上，所述预激发液是含有双氧水、硝酸溶液。
进一步地，在所述肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒上，所述校准品是含有一定量的CK-MB抗原的BSA蛋白溶液。
进一步地，在所述肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒上，所述试剂条上的0号位设有磁棒套；3号位设有CK-MB磁微粒试剂；5、7、8、9号位设有磁珠清洗液；6号位设有CK-MB标记反应物；10号位设有预激发液。
本发明的第二个方面是提供一种所述试剂盒进行肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测的使用法，检测时，将试剂条置放于孵育仓内，所述孵育仓设置于输送带上，所述输送带连接水平位移电机，所述输送带的末端设有分析读数模块；并采用可相对磁棒套上下移动的上吸式磁珠转移枪实现所述试剂条上取磁棒套、吸取磁珠、磁珠洗脱、磁珠混匀、磁棒套打脱动作；
所述上吸式磁珠转移枪，包括可与所述磁棒套过盈连接的提取枪枪头、位于所述提取枪枪头轴心线上用于吸附磁珠的磁棒，所述磁棒由提取电机驱动并相对所述提取枪枪头上下移动，所述提取电机安装于所述转移枪顶端，且所述提取电机通过电机轴与所述磁棒连接；
步骤1，选择项目：根据样本选择CK-MB项目，把试剂条插入仪器反应通道中，点击开始；
步骤2，扫码：仪器扫描试剂条封口铝膜表面的二维码，确认批号、校准曲线等信息是否与软件中的主曲线相匹配；
步骤3，戳孔：试剂条运行到戳孔位，戳孔模块进行戳孔。
步骤4，取磁棒套：试剂条运行到磁棒套位，仪器取磁棒套。
步骤5，加样：加样枪取到tip头，吸取50uL样本，加入到试剂条4号孔中；
步骤6，磁珠提取：磁棒套加磁，提取3号孔中的磁珠；
步骤7，第一步孵育：把磁珠提取至4号孔，进行第一步反应；
步骤8，磁珠提取：第一步孵育完成后，磁棒套加磁，提取4号孔中的磁珠；
步骤9，磁珠清洗：把磁珠提取至5号孔进行第一次清洗；
步骤10，第二步孵育：把磁珠提取至6号标记工作液孔，进行第二步反应；
步骤11，磁珠清洗：把磁珠提取至7、8、9号孔进行三次清洗；
步骤12，检测：把磁珠提取至10号预激发液孔，试剂条运行至读数位，读数模块遮光罩落下，加激发液至10号孔中，同时光电倍增管收集发光信号；
步骤13，计算结果：软件根据每批试剂对应的校准曲线，把相对发光强度代入曲线中，计算出样本对应的浓度。
进一步地，在所述试剂盒的使用方法中，所述提取枪枪头可与所述磁棒套的内壁或其外壁过盈连接。
进一步地，在所述试剂盒的使用方法中，所述提取枪由设置于基板上的纵向位移电机驱动进行上下移动。
进一步优选地，在所述试剂盒的使用方法中，所述纵向位移电机的输出轴上设有螺杆，所述螺杆上设有螺母，所述螺母与所述提取枪固定连接。
本发明采用上述技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
1)采用上吸式磁珠转移枪转移磁珠技术，将磁棒深入到液体内部快速提取磁珠；采用一次性磁棒套，防止磁珠污染磁棒，同时使得磁珠洗脱变得容易；
2)采用包含除激发液之外的全部反应液，避免仪器复杂的液路系统，使得仪器小型化同时变得易于维护，同时节约了成本；
3)采用瞬时化学发光技术，超过普通的光激发光，保证了测试的高灵敏度，节约了时间；单条单测试的检测方式，实现了项目POCT化；
4)采用0.5-1nm的磁珠使得反应迅速，从样本上机到报告结果，总时间在15分钟内；
5)各试剂采用热封膜技术分别密封储存于相应孔位内，有效防止了试剂串孔，解决了运输问题；
6)线性范围：本发明试剂盒检测范围为0.3-300ng/ml；线性：取线性范围上限(约300ng/ml)的样本进行稀释，计算线性回归相关系数为R＝0.992；
7)HOOK效应：浓度≤10000ng/ml的样本无钩状效应；
8)方法学对比：共183例临床样本，用本试剂盒和已上市试剂盒同时进行测试，两者的结果进行相关系数统计，相关系数R＝0.99。
附图说明
图1为本发明试剂条的结构示意图；
图2为本发明上吸式磁珠转移枪的结构示意图；
图3为本发明上吸式磁珠转移枪的截面结构示意图；
图4为本发明上吸式磁珠转移枪在吸取磁珠时磁棒和磁棒套的位置状态图；
图5为本发明上吸式磁珠转移枪在洗脱磁珠时磁棒和磁棒套的位置状态图；
图6为本发明使用理论浓度与测定浓度的直线线性回归图；
图7为采用本发明试剂盒用与参比试剂同时对样本进行检测时的相关性图；
其中，各附图标记为：
1-水平位移电机，2-输送带，3-孵育仓，4-试剂条，5-磁棒套，6-纵向位移电机，7-基板，8-螺杆，9-螺母，10-提取电机，11-转移枪，12-提取枪枪头，13-分析读数模块，14-电机轴，15-磁棒，16-磁珠。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。
实施例1
如图1所示，本实施例提供了一种肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒，具有若干并排设置的孔位，部分孔位包含的试剂有CK-MB磁微粒试剂、CK-MB标记反应物，该试剂盒还包括校准品、磁珠清洗液以及预激发液，各试剂采用热封膜技术分别密封储存于相应孔位内，有效防止了试剂串孔，解决了运输问题。
试剂条上的一孔位内设有用于与专用上吸式磁珠转移枪配套使用的磁棒套，在于采用该试剂盒进行肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测时，用上吸式磁珠转移枪转移磁珠技术，将磁棒深入到液体内部快速提取磁珠；该试剂盒上的磁棒套采用一次性磁棒套，防止磁珠污染磁棒，同时使得磁珠洗脱变得容易。
此外，在本实施例肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒中，CK-MB磁微粒试剂是含有标记有抗CK-MB单克隆抗体的磁性微球；CK-MB标记反应物是含有吖啶酯标记的抗CK-MB单克隆抗体；磁珠清洗液是含有吐温、防腐剂的Tris-HCl缓冲液；预激发液是含有双氧水、硝酸溶液；校准品是含有一定量的CK-MB抗原的BSA蛋白溶液。
作为本实施例的优选技术方案，在该肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒中，所述试剂条上的0号位设有磁棒套；3号位设有CK-MB磁微粒试剂；5、7、8、9号位设有磁珠清洗液；6号位设有CK-MB标记反应物；10号位设有预激发液。
实施例2
本实施例提供了一种肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤1，肌酸激酶同工酶定标品的配制：
将肌酸激酶同工酶抗原用2％BSA配制成定标品液并冻干，以企业标准品进行赋值，浓度分别为10，60ng/mL；
步骤2，生物素标记的肌酸激酶同工酶抗体的制备
取1mg肌酸激酶同工酶抗体，用PB缓冲液在4℃透析不少于16-24h；将透析后的抗体加入0.05mg生物素，再加入PB缓冲液，混匀后于恒温培养箱25±1℃，静置反应120±10min；使用PB缓冲液于4℃透析生物素化抗体16-24h；
步骤3，CK-MB磁珠/吖啶值标记保存液配制
室温条件下，向一定体积的纯化水中加入Tris、氯化钠和HCl，完全溶解后加入Tween-20和％NaN3，最后加入BSA至完全溶解，待所有成分完全溶解后，纯化水定容至1L；
步骤4，磁珠清洗液配制
室温条件下，向一定体积的纯化水中加入1.212g Tris、9.0g氯化钠、0.4mL HCl、0.2mL Tween-20、5.0mL 20％NaN3等，纯化水定容至1L；
步骤5，生物素化抗体包被磁珠制备
吸取20mg链霉亲和素磁珠，用不低于磁珠2倍体积的磁珠清洗液清洗两遍，然后用CK-MB磁珠保存液把磁珠复溶至不低于5mg/mL。把磁珠和上述生物素化抗体混合，磁珠置于恒温振荡箱37±2℃，100rmp/min摇匀反应16-24h。把反应后的磁珠取下，用不低于2倍反应体积的磁珠清洗液清洗4遍，将磁珠液用CK-MB磁珠/吖啶值标记保存液稀释至目标浓度，2-8℃保存待用；
步骤6，肌酸激酶同工酶抗体-吖啶酯结合物的制备
取1mg CK-MB标记抗体，用PB缓冲液于4℃透析16-24h。把透析好的抗体用PB缓冲液将抗体稀释到1.5mg/ml，取目标使用量的吖啶酯，把抗体与吖啶酯混匀后置于恒温培养箱25±2℃，静置反应120±10min；使用G-50层析柱进行纯化，纯化好的吖啶酯标记抗体用CK-MB吖啶值标记保存液稀释至目标浓度，2-8℃保存待用；
步骤7，预激发液配制
室温条件下，向一定体积的纯化水中加入44mlH2O2和0.55mL浓硝酸，混合均匀后检测pH值为2±0.1，纯化水定容至1L；
步骤8，组装：采用热封膜技术，将上述试剂组装成盒，避光储存于2～8℃。
对本实施例制得的试剂盒进行检查，主要包括如下方面：
(1)物理检查：试剂条肉眼观察应清洁，试剂条各孔内无明显杂质，封膜良好；
(2)准确性：测定内部质控品L、M、H，测定值应在允许范围内；
(3)线性：剂量-反应曲线在0.3-300ng/mL浓度范围内相关系数r绝对值不低于0.99；
(4)分析灵敏度：试剂盒分析灵敏度不高于0.3ng/mL；
(5)精密度：批内差：同一批次测试条平行测定精密性参考品CV(n＝10)，要求精密度(CV％)不高于8％；批间差：三个不同批次各平行测定精密性参考品CV(n＝3*10)，要求精密度(CV％)不高于10％；
(6)稳定性：37℃放置7天，测定值应符合上述各项要求。
实施例3
本实施例提供了一种肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒的使用方法，如图2所示，检测时将肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂条4置放于孵育仓3内，孵育仓3设置于输送带2上，输送带2连接水平位移电机1，输送带2的末端设有分析读数模块13；并采用可相对磁棒套5上下移动的上吸式磁珠转移枪实现试剂盒的取磁棒套、吸取磁珠、磁珠洗脱、磁珠混匀、磁棒套打脱动作；具体包括如下步骤：
步骤1，选择项目：根据样本选择CK-MB项目，把试剂条插入仪器反应通道中，点击开始；
步骤2，扫码：仪器扫描试剂条封口铝膜表面的二维码，确认批号、校准曲线等信息是否与软件中的主曲线相匹配；
步骤3，戳孔：试剂条运行到戳孔位，戳孔模块进行戳孔；
步骤4，取磁棒套：试剂条运行到0号磁棒套位，通过转移枪取磁棒套；
步骤5，加样：加样枪取到tip头，吸取50uL样本，加入到试剂条4号孔中；
步骤6，磁珠提取：磁棒套加磁，提取3号孔中的磁珠；
步骤7，第一步孵育：把磁珠提取至4号孔，进行第一步反应；
步骤8，磁珠提取：第一步孵育完成后，磁棒套加磁，提取4号孔中的磁珠；
步骤9，磁珠清洗：把磁珠提取至5号孔进行第一次清洗；
步骤10，第二步孵育：把磁珠提取至6号标记工作液孔，进行第二步反应；
步骤11，磁珠清洗：把磁珠提取至7、8、9号孔进行三次清洗；
步骤12，检测：把磁珠提取至10号预激发液孔，试剂条运行至读数位，读数模块遮光罩落下，加激发液至10号孔中，同时光电倍增管收集发光信号；
步骤13，计算结果：软件根据每批试剂对应的校准曲线，把相对发光强度代入曲线中，计算出样本对应的浓度。
实施例4
如图2所示，本实施例提供一种采用试剂盒进行肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测的上吸式磁珠转移枪，包括可与磁棒套5过盈连接的提取枪枪头12、位于提取枪枪头12轴心线上用于吸附磁珠16的磁棒15，采用本实施例的上吸式磁珠转移枪进行磁珠转移时，通过提取枪枪头12提取磁棒套5，然后通过磁棒15的相对位移使得磁棒套5带磁性或失去磁性，继而通过磁棒套5吸附磁珠16进行转移。
如图3所示，提取电机10安装于转移枪11顶端，且提取电机10通过电机轴14与磁棒15连接，磁棒15装设在电机轴14的下端，通过提取电机10控制电机轴14的上下移动，继而带动其下端的磁棒15上下移动，远离或靠近磁棒套5的底部，使得磁棒套5的底部带磁性或失去磁性，用于磁珠16的转移。
在本实施例的上吸式磁珠转移枪上，提取枪枪头12可与磁棒套5的内壁或其外壁过盈连接。具体地，提取枪枪头12随转移枪11整体向下移动，提取枪枪头12呈筒状，可设计提取枪枪头12的内径略小于磁棒套5的外径，使提取枪枪头12过盈包紧在磁棒套5的外壁上，在包紧过程中，由于受提取枪枪头12向下的力作用，磁棒套5发生一定的形变；或设计提取枪枪头12的外径略大于磁棒套5的内径，使提取枪枪头12过盈紧贴在磁棒套5的内壁上，在贴合的过程中，由于受提取枪枪头12向下的力作用，磁棒套5在挤压过程中发生一定的形变。
如图2所示，孵育仓3设置于输送带2上，输送带2连接水平位移电机1，由水平位移电机1驱动输送带2运行，继而带动其上的孵育仓3移动至相应位置，输送带2的末端还设有用于对磁珠混均后的试剂进行检测分析的分析读数模块13。
请继续参阅如图2所示的上吸式磁珠转移枪，转移枪11由设置于基板7上的纵向位移电机6驱动进行上下移动，基板7固定在输送带2上方位置，纵向位移电机6固定安装在基板7，并与转移枪11连接，用于驱动转移枪11整体进行上下移动。优选地，纵向位移电机6的输出轴上设有螺杆8，螺杆8上设有螺母9，螺母9与转移枪11固定连接，即纵向位移电机6通过螺杆8带动螺杆8上的转移枪11进行上下移动。
实施例5
本实施例提供了一种采用上吸式磁珠转移枪对试剂盒内的磁珠进行转移的方法，具体包括如下步骤：
步骤1：取磁棒套
将磁棒套5移动到转移枪11的正下方，使转移枪11向下运动，12提取枪枪头探入5磁棒套内；在转移枪11的挤压下，磁棒套5与提取枪枪头12过盈连接在一起；再使11提取枪向上移动，同时提取枪枪头12带着磁棒套5向上移动，取出磁棒套5；
步骤2：吸取磁珠
取好磁棒套5后，将试剂条4上的将要吸取磁珠的小孔移动到转移枪11的正下方，由提取电机10带动磁棒15向下移动到磁棒套5的底部，使磁棒套5的底部带有磁性；然后使转移枪11向下移动，将磁棒套5的底部探入到含有磁珠16的液体中，再使转移枪11上下缓慢移动，磁棒15会将磁珠吸到磁棒套5的底部；最后，使转移枪11向上移动，同时提取枪枪头12带着磁棒套5向上移动，磁珠16也随磁棒套5移出至液体外；吸取磁珠时，磁棒15和磁棒套5的位置状态如图4所示：
步骤4：洗脱磁珠
吸取磁珠16后，将试剂条4上的将要接受磁珠16的小孔移动到转移枪11的正下方，使转移枪11向下移动，将吸附有磁珠16的磁棒套5探入到要接受磁珠16的液体中，由提取电机10驱动磁棒15向上移动，使磁棒套5的底部失去磁性；然后使转移枪11上下小幅度较快速运动，将磁珠16洗脱到液体中；洗脱磁珠时，磁棒15和磁棒套5的位置状态如图5所示：
步骤4：磁珠混匀
洗脱磁珠16后，将试剂条4上的将要混匀磁珠16的小孔运行到转移枪11的正下方，该将要混匀磁珠16的小孔是指孵育过程中的小孔，在磁棒套5底部无磁性的状态下，使转移枪11向下运动，将磁棒套5的底部探入到将要混匀磁珠16的液体中，使转移枪11上下小幅度较快速运动，将液体中的磁珠16混匀保持悬浮状态；
步骤5：磁棒套打脱
当不再需要磁棒套5时，将试剂条4上的磁棒套放置孔移动到转移枪11的正下方，由提取电机10驱动磁棒15向下运动，直到将磁棒套5从提取枪枪头12上顶脱，使得磁棒套5掉落到试剂条4上的磁棒套放置孔内。
在本实施例试剂盒的磁珠转移方法中，步骤4磁珠混匀时，磁棒15和磁棒套5的位置状态为磁棒15的下端远离磁棒套5的底部，使磁棒套5底部失去磁性，即同步骤3洗脱磁珠时磁棒15和磁棒套5的位置状态相同。
采用本发明试剂盒进行肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测时，采用上吸式磁珠转移枪转移磁珠技术，将磁棒深入到液体内部快速提取磁珠；采用一次性磁棒套，防止磁珠污染磁棒，同时使得磁珠洗脱变得容易；采用包含除激发液之外的全部反应液的试剂盒，避免仪器复杂的液路系统，使得仪器小型化同时变得易于维护，同时节约了成本；检测采用瞬时化学发光技术，超过普通的光激发光，保证了测试的高灵敏度，节约了时间；单条单测试的检测方式，实现了项目POCT化；试剂盒采用0.5-1nm的磁珠使得反应迅速，从样本上机到报告结果，总时间在15分钟内；各试剂采用热封膜技术分别密封储存于相应孔位内，有效防止了试剂串孔，解决了运输问题；
实施例6性能测试：
1、检测灵敏度
1.1、空白检测限
方法：空白检测限，即LOB，是指空白样本中可能检测到的最高结果。把空白样本连续检测3天，每天检测20个，共60个空白样本数据，用人源校准品做校准曲线计算浓度，按照从小到大排列，选择第95百分位数就是空白检测限。检测数据如下表1-2所示：
表1空白样本检测(RLU)
表2空白样本检测-计算浓度并从小到大排序
结果分析：选择第95百分位数＝60×95％＝57，第57位数的结果为0.03ng/ml，则LOB不高于0.08ng/ml。
1.2分析灵敏度
方法：分析灵敏度是指检测方法可检测出的最低被测量浓度，也称最低检测限或最小检出浓度。选取以上检测的60个空白样本数据，计算发光值的平均值与标准偏差SD。计算从校准品曲线中得出其对应浓度值即为最低检测限。
结果分析：计算计算浓度0.045ng/ml，则LOD不高于0.1ng/ml。
1.3功能灵敏度
方法：选择低于参考值范围(0.3ng/ml)的样本，浓度值约为0.4ng/ml，用样本稀释液稀释浓度梯度，分别检测不同浓度梯度的精密性，一般认为CV刚好超过10％的浓度值为功能灵敏度。
检测结果：
表3功能灵敏度的确认
结果分析：可以看出，直到稀释浓度为0.1ng/ml时，CV仍然小于10％，所以认为功能灵敏度为不高于0.2ng/ml。
2、线性范围验证
方法：使用阴性人血清梯度稀释已定值的高浓度样本，稀释浓度覆盖0.3-300ng/ml，上限下限各20％以上，用CK-MB试剂检测稀释样本；使用理论浓度与测定浓度做直线线性回归，线性相关系数r≥0.975，直线回归斜率在1±0.05范围内。
检测数据：
表4线性范围
理论浓度与测定浓度的直线线性回归线关系，如图6所示。
结果分析：在0.14-368ng/ml范围内，斜率与r值能够满足要求，故线性范围满足0.3-300ng/ml。
3、方法学比对
方法：收取183份肝素锂血浆样本，用本试剂与参比试剂Beckman Dxi800CK-MB同时对其进行检测，观察与参比试剂的分段符合率及相关性。
检测结果：
其中小于6.3ng/ml的符合率为96.7％，大于6.3ng/ml的符合率为95.7％，总符合率为96.2％。
如图7所示，与Beckman Dxi800 CK-MB检测结果做相关性拟合，相关系数为0.99，大于0.95。
本发明试剂盒检测范围为0.3-300ng/ml；线性：取线性范围上限(约300ng/ml)的样本进行稀释，计算线性回归相关系数为R＝0.99；方法学对比：共183例临床样本，用本试剂盒和已上市试剂盒同时进行测试，两者的结果进行相关系数统计，相关系数R＝0.99。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (13)

1.一种肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测试剂盒，其特征在于，包括由若干并排设置的孔位组成的试剂条，所述试剂条包含的试剂有CK-MB磁微粒试剂、CK-MB标记反应物。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述CK-MB磁微粒试剂是含有标记有抗CK-MB单克隆抗体的磁性微球。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述CK-MB标记反应物是含有吖啶酯标记的抗CK-MB单克隆抗体。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂条上的一孔位内设有磁棒套。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含校准品、磁珠清洗液以及预激发液。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述磁珠清洗液是含有吐温、防腐剂的Tris-HCl缓冲液。
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述预激发液是含有双氧水、硝酸溶液。
8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品是含有一定量的CK-MB抗原的BSA蛋白溶液。
9.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂条上的0号位设有磁棒套；3号位设有CK-MB磁微粒试剂；5、7、8、9号位设有磁珠清洗液；6号位设有CK-MB标记反应物；10号位设有预激发液。
10.一种如权利要求1-9任一项所述试剂盒进行肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光定量检测的使用方法，其特征在于，检测时，将试剂条(4)置放于孵育仓(3)内，所述孵育仓(3)设置于输送带(2)上，所述输送带(2)连接水平位移电机(1)，所述输送带(2)的末端设有分析读数模块(13)；并采用可相对磁棒套(5)上下移动的上吸式磁珠转移枪实现所述试剂条上取磁棒套、吸取磁珠、磁珠洗脱、磁珠混匀、磁棒套打脱动作；
所述上吸式磁珠转移枪，包括可与所述磁棒套(5)过盈连接的提取枪枪头(12)、位于所述提取枪枪头(12)轴心线上用于吸附磁珠(16)的磁棒(15)，所述磁棒(15)由提取电机(10)驱动并相对所述提取枪枪头(12)上下移动，所述提取电机(10)安装于所述转移枪(11)顶端，且所述提取电机(10)通过电机轴(14)与所述磁棒(15)连接；
具体检测方法包括如下步骤：
步骤1，选择项目：根据样本选择CK-MB项目，把试剂条插入仪器反应通道中，点击开始；
步骤2，扫码：仪器扫描试剂条封口铝膜表面的二维码，确认批号、校准曲线等信息是否与软件中的主曲线相匹配；
步骤3，戳孔：试剂条运行到戳孔位，戳孔模块进行戳孔；
步骤4，取磁棒套：试剂条运行到0号磁棒套位，通过转移枪取磁棒套5；
步骤5，加样：加样枪取到tip头，吸取50uL样本，加入到试剂条4号孔中；
步骤6，磁珠提取：磁棒套加磁，提取3号孔中的磁珠；
步骤7，第一步孵育：把磁珠提取至4号孔，进行第一步反应；
步骤8，磁珠提取：第一步孵育完成后，磁棒套加磁，提取4号孔中的磁珠；
步骤9，磁珠清洗：把磁珠提取至5号孔进行第一次清洗；
步骤10，第二步孵育：把磁珠提取至6号标记工作液孔，进行第二步反应；
步骤11，磁珠清洗：把磁珠提取至7、8、9号孔进行三次清洗；
步骤12，检测：把磁珠提取至10号预激发液孔，试剂条运行至读数位，读数模块遮光罩落下，加激发液至10号孔中，同时光电倍增管收集发光信号；
步骤13，计算结果：软件根据每批试剂对应的校准曲线，把相对发光强度代入曲线中，计算出样本对应的浓度。
11.根据权利要求10所述试剂盒的使用方法，其特征在于，所述提取枪枪头(12)可与所述磁棒套(5)的内壁或其外壁过盈连接。
12.根据权利要求10所述试剂盒的使用方法，其特征在于，所述转移枪(11)由设置于基板(7)上的纵向位移电机(6)驱动进行上下移动。
13.根据权利要求12所述试剂盒的使用方法，其特征在于，所述纵向位移电机(6)的输出轴上设有螺杆(8)，所述螺杆(8)上设有螺母(9)，所述螺母(9)与所述转移枪(11)固定连接。
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