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CN107173222A - 一种野生白芨组织培养快速繁殖方法 - Google Patents

一种野生白芨组织培养快速繁殖方法 Download PDF

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CN107173222A CN201710188126.XA CN201710188126A CN107173222A CN 107173222 A CN107173222 A CN 107173222A CN 201710188126 A CN201710188126 A CN 201710188126A CN 107173222 A CN107173222 A CN 107173222A
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Abstract

本发明提供一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，涉及植物培育繁殖技术领域，本发明的野生白芨组织培养快速繁殖方法包括如下步骤：(一)种子培养阶段、(二)移栽大田阶段；其中，种子培养阶段包括1)外植体的消毒、2)培养基的准备、3)播种、4)培养室培养和5)大棚炼苗；移栽大田阶段包括：(1)整地、(2)播种、(3)施肥管理、(4)病虫害防治。本发明野生白芨组织培养快速繁殖方法从种子的培养到移栽大田后的培育，都进行严格把关，各个步骤紧密结合，相互作用，提高了野生白芨的成活率，适用于大规模种植。

Description

一种野生白芨组织培养快速繁殖方法
【技术领域】
本发明涉及植物培育繁殖技术领域，具体涉及一种野生白芨组织培养快速繁殖方法。
【背景技术】
白芨是多年生兰科植物，茎块根状白色，大个开紫色花。主要应用于止血消炎，消肿生肌，外伤出血，补肺止血，烫伤，痔疮，美容祛斑等，具有多种药用价值以及观赏价值，白芨是一种濒危野生兰科药用植物，野生白芨日趋枯竭，
白芨的种子细小，似粉末状，没有胚乳，发育不完全的胚，种子萌芽的条件苛刻，不易发芽，很难进行种子繁殖；而采用分株繁殖时，繁殖率低，繁殖速度慢，因此提供一种能够将白芨种子作为种源，缩短其育苗时间，提高出芽存活率以及植株移栽后的成活率的培育方法迫在眉睫。
【发明内容】
有鉴于此，本发明的目的在于，提供一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，在种子培养过程中实现白芨种子的快速萌发，缩短白芨种子的培养时间，在短时间内培育出大量健壮试管苗，在移栽大田后，从施肥到防虫，均考虑环保绿色，施肥过程中不添加化肥，而采用天然安全的有机肥料，防虫过程则进行针对性的治疗，同时以防御为主，各个步骤紧密结合，相互作用，提高了野生白芨的成活率。
为了解决上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案：
一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，具体包括如下步骤：
(一)种子培养阶段
1)外植体的消毒：首先用流水冲洗白芨蒴果26-32min，再用洗衣粉水刷洗蒴果表面，接着用蒸馏水冲洗2-3遍，然后置于超净工作台上先用75％酒精消毒2-3min，再用3％的新洁灭浸泡3-5min，期间不停的摇动，使其消毒彻底，然后放在无菌接种盘自然风干后用无菌手术刀切开一头备用；
2)培养基的准备：以VW培养基为基础培养基，在每升基质中添加：土豆液55-65g、6-BA0.4-0.6mg、蔗糖15-25g、NAA 0.04-0.06mg、琼脂3.5-4.0g以及8-12g纯净水，其制备方法是将上述原料混合搅拌均匀后，将PH值调节至5.6-5.8，装入培养皿器，在120-123℃高温下蒸汽灭菌15-20分钟后进行冷却，得到培养基备用；
3)播种：取经高温灭菌的培养皿器，在超净工作台里按照无菌操作的要求打开培养皿器口盖，用镊子夹取经步骤1)处理的白芨蒴果，将切开的一头对准培养皿器，将镊子伸进瓶口，用镊子尖后部在皿器口壁轻轻敲击，使种子均匀撒落培养基上，盖好培养皿器口，拿出超净工作台备用；
4)培养室培养：对培养室内进行消毒后采用荧光灯进行光照，控制培养室温度为22-28℃，湿度为60-75％，光照度为1500-1800Lux，25天开始萌发，45天后小苗过密并且培养皿器内营养耗尽，45天后更换培养皿器进行分瓶，每个培养皿器内放30-35株小苗，分瓶后再经过45-50天培养即可出瓶炼苗；
5)大棚炼苗：用镊子将小苗从培养皿器中取出，用自来水将小苗根部的培养基洗净，然后种植到培养土苗盘里并喷淋定根水，待叶面干后，喷施800-1000倍液的农用链霉毒，7-15天后喷施20-30倍的沼气液，在大棚内培育3-5个月后进行移栽；
(二)移栽大田阶段
(1)播种：经大棚炼苗后，弃去黄化和发育不良的种苗，整理出健康种苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗时使其根自然展开，覆土过根茎，同时保证枝干与主根的结合部分露出土外，覆土完成后将土压实，并浇灌定根水；
(2)施肥管理：移栽大田2个月后进行初次施肥，初次施肥7-10天后对叶面喷施营养液进行追肥；所用肥料为农家肥与生态肥按照比例为1-3:2-5混合，施肥时间为每年4-8月份，每年施肥4-6次，施肥结合中耕除草进行；每1-2月用营养液进行叶面喷施一次；所述营养液是将20-30重量份的腐殖土与10-18重量份的草木灰混合后浸泡在60-80重量份的水中，浸泡2天后将其过滤，取液体加入10-15重量份的沼液混合搅拌均匀即可；
所述农家肥为家禽粪便；所述生态肥通过将20-40重量份的茶渣置于容器中，掺拌10-20重量份的花生饼、10-15重量份的稻壳和10-20重量份的新鲜土质，再浇入10-30重量份的水，然后进行堆沤，待茶渣、稻壳和花生饼腐烂后变成腐烂质土后得到的。
优选地，所述移栽大田阶段还包括整地的步骤，具体为：在种植前1-2个月经深翻耕后添加土壤调节剂将土壤pH值调节为5.7-6.6，将碎土耙平，施埋基底肥，按畦面宽40-60cm，挖沟面高20-30cm，宽25-30cm起畦，整平畦面；按行距20-30cm、株距20-25cm挖穴，穴长×深×宽等于10cm×15cm×10cm，并在每个穴内施埋基底肥。
优选地，所述移栽大田阶段还包括病虫害防治的步骤，具体为：在病穴施用生物农药，或者将病株拔出，每隔1-2周喷施消毒液一次；
所述消毒液由砂仁汁、番茄叶汁、桂皮汁、生姜汁、大蒜汁与水按照质量比(1-2.5)：(2-3.5)：(1.5-2.5)：(3-4)：(2-3.5)：(30-55)配制而成；所述消毒液的喷施量为：每次每亩喷洒150-200kg。
优选地，所述病虫害防治过程中，当发现黑斑病时，向患病植株喷洒70％甲基托布津湿性粉剂900-1100倍液。
优选地，所述基底肥是由30-50重量份的厩肥、16-32重量份的麸皮、40-50重量份的农作物秸秆和21-33重量份的人畜粪便混合均匀后在温度为30-40℃，湿度为60-70％的条件下发酵8-12天得到基底肥的具体施加方式为：在穴底部施加一层2-3cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆盖一层2-3cm厚的泥土，依次交替2-3次；基底肥的用量为每亩施加350-550kg。
优选地，所述土豆液主要经过如下处理得到：a.将土豆切丝放入锅中，加入土豆质量3-4倍的水，加热至沸腾后维持20-30分钟；b.加入土豆和水总质量0.2-0.4倍的离子液体，在90-120℃、80-120r/min的条件下，搅拌处理60-120min，去渣留液，即可得到土豆液。
优选地，所述离子液体为胍盐类离子液体、咪唑类离子液体、季铵盐类离子液体和噻唑类离子液体中的一种。
本发明的野生白芨在移栽大田3-5年后可进行采收。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
1、本发明的一种野生白芨组织培养快速繁殖方法在种子培养过程中，在传统的培养基的配方上改进，添加一些能够在野生白芨在生根壮苗期间所需的因子，以VW培养基为基础培养基，添加土豆液、6-BA、蔗糖、NAA和琼脂等母液配方，为白芨生长所需能量供给得到满足，提供生根的良好条件，调节体内养分的平衡，快速促进壮苗生根，使得生根率达到98％以上，且壮苗生根后的植株平均根数达到4-5条。
2、本发明的野生白芨组织培养快速繁殖方法在移栽大田阶段，在种苗定植前先对种植地进行预处理，通过对地块进行深松处理，然后开设种植穴，由于土壤养分含量低，直接播种肥效迟缓，因此在种植穴中加入基底肥，基底肥具有改良土壤肥效的作用，为种子生长提高提出养分，基底肥的施加方式为埋在种植穴内，并在其表面覆盖营养土，能够使养分更集中，施肥效果更佳；定植后采用农家肥与生态肥进行配合施肥，对环境无污染，同时向植株叶面喷洒营养液，促进生长，另外，病虫害的防治采用消毒液进行定期喷施，预防虫害的发生，消毒液均由绿色安全的原料配制得到，对白芨的成品性状无影响。
本发明野生白芨组织培养快速繁殖方法从种子的培养到移栽大田后的培育，都进行严格把关，在种子培养过程中实现白芨种子的快速萌发，缩短白芨种子的培养时间，在短时间内培育出大量健壮试管苗，在移栽大田后，从施肥到防虫，均考虑环保绿色，施肥过程中不添加化肥，而采用天然安全的有机肥料，防虫过程则进行针对性的治疗，同时以防御为主，各个步骤紧密结合，相互作用，提高了野生白芨的成活率，适用于大规模种植，值得推广。
【具体实施方式】
下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不可以以任何方式限制本发明。
实施例1
本实施例提供一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，具体包括如下步骤：
(一)种子培养阶段
1)外植体的消毒：首先用流水冲洗白芨蒴果26min，再用洗衣粉水刷洗蒴果表面，接着用蒸馏水冲洗2遍，然后置于超净工作台上先用75％酒精消毒2min，再用3％的新洁灭浸泡3min，期间不停的摇动，使其消毒彻底，然后放在无菌接种盘自然风干后用无菌手术刀切开一头备用；
2)培养基的准备：以VW培养基为基础培养基，在每升基质中添加：土豆液55g、6-BA0.4mg、蔗糖15g、NAA 0.04mg、琼脂3.5g以及8g纯净水，其制备方法是将上述原料混合搅拌均匀后，将PH值调节至5.6，装入培养皿器，在120℃高温下蒸汽灭菌15分钟后进行冷却，得到培养基备用；其中，土豆液主要经过如下处理得到：a.将土豆切丝放入锅中，加入土豆质量3倍的水，加热至沸腾后维持20分钟；b.加入土豆和水总质量0.2倍的离子液体，在90℃、80r/min的条件下，搅拌处理60min，去渣留液，即可得到土豆液；离子液体为胍盐类离子液体；
3)播种：取经高温灭菌的培养皿器，在超净工作台里按照无菌操作的要求打开培养皿器口盖，用镊子夹取经步骤1)处理的白芨蒴果，将切开的一头对准培养皿器，将镊子伸进瓶口，用镊子尖后部在皿器口壁轻轻敲击，使种子均匀撒落培养基上，盖好培养皿器口，拿出超净工作台备用；
4)培养室培养：对培养室内进行消毒后采用荧光灯进行光照，控制培养室温度为22℃，湿度为60％，光照度为1500Lux，25天开始萌发，45天后小苗过密并且培养皿器内营养耗尽，45天后更换培养皿器进行分瓶，每个培养皿器内放30株小苗，分瓶后再经过45天培养即可出瓶炼苗；
5)大棚炼苗：用镊子将小苗从培养皿器中取出，用自来水将小苗根部的培养基洗净，然后种植到培养土苗盘里并喷淋定根水，待叶面干后，喷施800倍液的农用链霉毒，7天后喷施20倍的沼气液，在大棚内培育3个月后进行移栽；
(二)移栽大田阶段
(1)整地：在种植前1个月经深翻耕后添加土壤调节剂将土壤pH值调节为5.7，将碎土耙平，施埋基底肥，按畦面宽40cm，挖沟面高20cm，宽25cm起畦，整平畦面；按行距20cm、株距20cm挖穴，穴长×深×宽等于10cm×15cm×10cm，并在每个穴内施埋基底肥；其中，基底肥是由30重量份的厩肥、16重量份的麸皮、40重量份的农作物秸秆和21重量份的人畜粪便混合均匀后在温度为30℃，湿度为60％的条件下发酵8天得到基底肥的具体施加方式为：在穴底部施加一层2cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆盖一层2cm厚的泥土，依次交替2次；基底肥的用量为每亩施加350kg；
(2)播种：经大棚炼苗后，弃去黄化和发育不良的种苗，整理出健康种苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗时使其根自然展开，覆土过根茎，同时保证枝干与主根的结合部分露出土外，覆土完成后将土压实，并浇灌定根水；
(3)施肥管理：移栽大田2个月后进行初次施肥，初次施肥7天后对叶面喷施营养液进行追肥；所用肥料为农家肥与生态肥按照比例为1:2混合，施肥时间为每年4-8月份，每年施肥4次，施肥结合中耕除草进行；每月用营养液进行叶面喷施一次；所述营养液是将20-30重量份的腐殖土与10重量份的草木灰混合后浸泡在60重量份的水中，浸泡2天后将其过滤，取液体加入10重量份的沼液混合搅拌均匀即可；
所述农家肥为家禽粪便；所述生态肥通过将20重量份的茶渣置于容器中，掺拌10重量份的花生饼、10重量份的稻壳和10重量份的新鲜土质，再浇入10重量份的水，然后进行堆沤，待茶渣、稻壳和花生饼腐烂后变成腐烂质土后得到的；
(4)病虫害防治：在病穴施用生物农药，或者将病株拔出，每隔1周喷施消毒液一次；其中，消毒液由砂仁汁、番茄叶汁、桂皮汁、生姜汁、大蒜汁与水按照质量比1：2：1.5：3：2：30配制而成；所述消毒液的喷施量为：每次每亩喷洒150kg。
本实施例所培养的野生白芨在移栽大田3年后可进行采收。
实施例2
本实施例提供一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，具体包括如下步骤：
(一)种子培养阶段
1)外植体的消毒：首先用流水冲洗白芨蒴果29min，再用洗衣粉水刷洗蒴果表面，接着用蒸馏水冲洗3遍，然后置于超净工作台上先用75％酒精消毒3min，再用3％的新洁灭浸泡4min，期间不停的摇动，使其消毒彻底，然后放在无菌接种盘自然风干后用无菌手术刀切开一头备用；
2)培养基的准备：以VW培养基为基础培养基，在每升基质中添加：土豆液60g、6-BA0.5mg、蔗糖20g、NAA 0.05mg、琼脂3.8g以及10g纯净水，其制备方法是将上述原料混合搅拌均匀后，将PH值调节至5.7，装入培养皿器，在122℃高温下蒸汽灭菌17分钟后进行冷却，得到培养基备用；其中，土豆液主要经过如下处理得到：a.将土豆切丝放入锅中，加入土豆质量4倍的水，加热至沸腾后维持25分钟；b.加入土豆和水总质量0.3倍的离子液体，在115℃、100r/min的条件下，搅拌处理95min，去渣留液，即可得到土豆液；离子液体为胍盐类离子液体；
3)播种：取经高温灭菌的培养皿器，在超净工作台里按照无菌操作的要求打开培养皿器口盖，用镊子夹取经步骤1)处理的白芨蒴果，将切开的一头对准培养皿器，将镊子伸进瓶口，用镊子尖后部在皿器口壁轻轻敲击，使种子均匀撒落培养基上，盖好培养皿器口，拿出超净工作台备用；
4)培养室培养：对培养室内进行消毒后采用荧光灯进行光照，控制培养室温度为25℃，湿度为68％，光照度为1650Lux，25天开始萌发，45天后小苗过密并且培养皿器内营养耗尽，45天后更换培养皿器进行分瓶，每个培养皿器内放32株小苗，分瓶后再经过48天培养即可出瓶炼苗；
5)大棚炼苗：用镊子将小苗从培养皿器中取出，用自来水将小苗根部的培养基洗净，然后种植到培养土苗盘里并喷淋定根水，待叶面干后，喷施900倍液的农用链霉毒，12天后喷施25倍的沼气液，在大棚内培育4个月后进行移栽；
(二)移栽大田阶段
(1)整地：在种植前1个月经深翻耕后添加土壤调节剂将土壤pH值调节为6.2，将碎土耙平，施埋基底肥，按畦面宽50cm，挖沟面高25cm，宽28cm起畦，整平畦面；按行距25cm、株距22cm挖穴，穴长×深×宽等于10cm×15cm×10cm，并在每个穴内施埋基底肥；其中，基底肥是由40重量份的厩肥、25重量份的麸皮、45重量份的农作物秸秆和28重量份的人畜粪便混合均匀后在温度为35℃，湿度为65％的条件下发酵10天得到基底肥的具体施加方式为：在穴底部施加一层2cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆盖一层3cm厚的泥土，依次交替3次；基底肥的用量为每亩施加400kg；
(2)播种：经大棚炼苗后，弃去黄化和发育不良的种苗，整理出健康种苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗时使其根自然展开，覆土过根茎，同时保证枝干与主根的结合部分露出土外，覆土完成后将土压实，并浇灌定根水；
(3)施肥管理：移栽大田2个月后进行初次施肥，初次施肥9天后对叶面喷施营养液进行追肥；所用肥料为农家肥与生态肥按照比例为2:3混合，施肥时间为每年4-8月份，每年施肥5次，施肥结合中耕除草进行；每1月用营养液进行叶面喷施一次；所述营养液是将25重量份的腐殖土与15重量份的草木灰混合后浸泡在70重量份的水中，浸泡2天后将其过滤，取液体加入12重量份的沼液混合搅拌均匀即可；
所述农家肥为家禽粪便；所述生态肥通过将30重量份的茶渣置于容器中，掺拌15重量份的花生饼、12重量份的稻壳和15重量份的新鲜土质，再浇入20重量份的水，然后进行堆沤，待茶渣、稻壳和花生饼腐烂后变成腐烂质土后得到的；
(4)病虫害防治：在病穴施用生物农药，或者将病株拔出，每隔1周喷施消毒液一次；其中，消毒液由砂仁汁、番茄叶汁、桂皮汁、生姜汁、大蒜汁与水按照质量比1.8：2.8：2：3.5：2.8：42配制而成；所述消毒液的喷施量为：每次每亩喷洒170kg。
本实施例所培养的野生白芨在移栽大田4年后可进行采收。
实施例3
本实施例提供一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，具体包括如下步骤：
(一)种子培养阶段
1)外植体的消毒：首先用流水冲洗白芨蒴果32min，再用洗衣粉水刷洗蒴果表面，接着用蒸馏水冲洗3遍，然后置于超净工作台上先用75％酒精消毒3min，再用3％的新洁灭浸泡5min，期间不停的摇动，使其消毒彻底，然后放在无菌接种盘自然风干后用无菌手术刀切开一头备用；
2)培养基的准备：以VW培养基为基础培养基，在每升基质中添加：土豆液65g、6-BA0.6mg、蔗糖25g、NAA 0.06mg、琼脂4.0g以及12g纯净水，其制备方法是将上述原料混合搅拌均匀后，将PH值调节至5.8，装入培养皿器，在123℃高温下蒸汽灭菌20分钟后进行冷却，得到培养基备用；其中，土豆液主要经过如下处理得到：a.将土豆切丝放入锅中，加入土豆质量4倍的水，加热至沸腾后维持30分钟；b.加入土豆和水总质量0.4倍的离子液体，在120℃、120r/min的条件下，搅拌处理120min，去渣留液，即可得到土豆液；离子液体为胍盐类离子液体；
3)播种：取经高温灭菌的培养皿器，在超净工作台里按照无菌操作的要求打开培养皿器口盖，用镊子夹取经步骤1)处理的白芨蒴果，将切开的一头对准培养皿器，将镊子伸进瓶口，用镊子尖后部在皿器口壁轻轻敲击，使种子均匀撒落培养基上，盖好培养皿器口，拿出超净工作台备用；
4)培养室培养：对培养室内进行消毒后采用荧光灯进行光照，控制培养室温度为28℃，湿度为75％，光照度为1800Lux，25天开始萌发，45天后小苗过密并且培养皿器内营养耗尽，45天后更换培养皿器进行分瓶，每个培养皿器内放35株小苗，分瓶后再经过50天培养即可出瓶炼苗；
5)大棚炼苗：用镊子将小苗从培养皿器中取出，用自来水将小苗根部的培养基洗净，然后种植到培养土苗盘里并喷淋定根水，待叶面干后，喷施1000倍液的农用链霉毒，15天后喷施30倍的沼气液，在大棚内培育5个月后进行移栽；
(二)移栽大田阶段
(1)整地：在种植前2个月经深翻耕后添加土壤调节剂将土壤pH值调节为6.6，将碎土耙平，施埋基底肥，按畦面宽60cm，挖沟面高30cm，宽30cm起畦，整平畦面；按行距30cm、株距25cm挖穴，穴长×深×宽等于10cm×15cm×10cm，并在每个穴内施埋基底肥；其中，基底肥是由50重量份的厩肥、32重量份的麸皮、50重量份的农作物秸秆和33重量份的人畜粪便混合均匀后在温度为40℃，湿度为70％的条件下发酵12天得到基底肥的具体施加方式为：在穴底部施加一层3cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆盖一层3cm厚的泥土，依次交替3次；基底肥的用量为每亩施加550kg；
(2)播种：经大棚炼苗后，弃去黄化和发育不良的种苗，整理出健康种苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗时使其根自然展开，覆土过根茎，同时保证枝干与主根的结合部分露出土外，覆土完成后将土压实，并浇灌定根水；
(3)施肥管理：移栽大田2个月后进行初次施肥，初次施肥10天后对叶面喷施营养液进行追肥；所用肥料为农家肥与生态肥按照比例为3:5混合，施肥时间为每年4-8月份，每年施肥6次，施肥结合中耕除草进行；每2月用营养液进行叶面喷施一次；所述营养液是将30重量份的腐殖土与18重量份的草木灰混合后浸泡在80重量份的水中，浸泡2天后将其过滤，取液体加入15重量份的沼液混合搅拌均匀即可；
所述农家肥为家禽粪便；所述生态肥通过将40重量份的茶渣置于容器中，掺拌20重量份的花生饼、15重量份的稻壳和20重量份的新鲜土质，再浇入30重量份的水，然后进行堆沤，待茶渣、稻壳和花生饼腐烂后变成腐烂质土后得到的；
(4)病虫害防治：在病穴施用生物农药，或者将病株拔出，每隔2周喷施消毒液一次；其中，消毒液由砂仁汁、番茄叶汁、桂皮汁、生姜汁、大蒜汁与水按照质量比2.5：3.5：2.5：4：3.5：55配制而成；所述消毒液的喷施量为：每次每亩喷洒200kg。
本实施例所培养的野生白芨在移栽大田5年后可进行采收。
效果验证
为了进一步说明本发明野生白芨组织培养快速繁殖方法的应用价值，实施人选择无病害，无残缺，大小相近的白芨蒴果，分为以下四组做对比试验：
第一组：实施例1所述的培养繁殖方法；
第二组：实施例2所述的培养繁殖方法；
第三组：实施例3所述的培养繁殖方法；
第四组：常规种植法。
S1：观察上述四组在种子培养阶段的组培苗情况，记录各组的生根率、生根数、球茎大小、叶长、叶宽及出甁综合状态，结果见表1；
表1四组白芨组培苗情况表
S2：进行移栽大田阶段的观察，在移栽大田两个月后统计移栽成活率，并将结果记录如表2所示：
表2四组白芨移栽苗生长情况表
由上述两表得知：采用本发明的培育法培育得到的白芨，不仅在种子培养阶段得到高品质的种苗，且在移栽大田阶段具有良好的长势，各个步骤紧密结合，相互作用，提高了野生白芨的成活率，适用于大规模种植，值得推广。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (8)

1.一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
(一)种子培养阶段
1)外植体的消毒：首先用流水冲洗白芨蒴果26-32min，再用洗衣粉水刷洗蒴果表面，接着用蒸馏水冲洗2-3遍，然后置于超净工作台上先用75％酒精消毒2-3min，再用3％的新洁灭浸泡3-5min，期间不停的摇动，使其消毒彻底，然后放在无菌接种盘自然风干后用无菌手术刀切开一头备用；
2)培养基的准备：以VW培养基为基础培养基，在每升基质中添加：土豆液55-65g、6-BA0.4-0.6mg、蔗糖15-25g、NAA 0.04-0.06mg、琼脂3.5-4.0g以及8-12g纯净水，其制备方法是将上述原料混合搅拌均匀后，将PH值调节至5.6-5.8，装入培养皿器，在120-123℃高温下蒸汽灭菌15-20分钟后进行冷却，得到培养基备用；
3)播种：取经高温灭菌的培养皿器，在超净工作台里按照无菌操作的要求打开培养皿器口盖，用镊子夹取经步骤1)处理的白芨蒴果，将切开的一头对准培养皿器，将镊子伸进瓶口，用镊子尖后部在皿器口壁轻轻敲击，使种子均匀撒落培养基上，盖好培养皿器口，拿出超净工作台备用；
4)培养室培养：对培养室内进行消毒后采用荧光灯进行光照，控制培养室温度为22-28℃，湿度为60-75％，光照度为1500-1800Lux，25天开始萌发，45天后小苗过密并且培养皿器内营养耗尽，45天后更换培养皿器进行分瓶，每个培养皿器内放30-35株小苗，分瓶后再经过45-50天培养即可出瓶炼苗；
5)大棚炼苗：用镊子将小苗从培养皿器中取出，用自来水将小苗根部的培养基洗净，然后种植到培养土苗盘里并喷淋定根水，待叶面干后，喷施800-1000倍液的农用链霉毒，7-15天后喷施20-30倍的沼气液，在大棚内培育3-5个月后进行移栽；
(二)移栽大田阶段
(1)播种：经大棚炼苗后，弃去黄化和发育不良的种苗，整理出健康种苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗时使其根自然展开，覆土过根茎，同时保证枝干与主根的结合部分露出土外，覆土完成后将土压实，并浇灌定根水；
(2)施肥管理：移栽大田2个月后进行初次施肥，初次施肥7-10天后对叶面喷施营养液进行追肥；所用肥料为农家肥与生态肥按照比例为1-3:2-5混合，施肥时间为每年4-8月份，每年施肥4-6次，施肥结合中耕除草进行；每1-2月用营养液进行叶面喷施一次；所述营养液是将20-30重量份的腐殖土与10-18重量份的草木灰混合后浸泡在60-80重量份的水中，浸泡2天后将其过滤，取液体加入10-15重量份的沼液混合搅拌均匀即可；
所述农家肥为家禽粪便；所述生态肥通过将20-40重量份的茶渣置于容器中，掺拌10-20重量份的花生饼、10-15重量份的稻壳和10-20重量份的新鲜土质，再浇入10-30重量份的水，然后进行堆沤，待茶渣、稻壳和花生饼腐烂后变成腐烂质土后得到的。
2.根据权利要求1所述的一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述移栽大田阶段还包括整地的步骤，具体为：在种植前1-2个月经深翻耕后添加土壤调节剂将土壤pH值调节为5.7-6.6，将碎土耙平，施埋基底肥，按畦面宽40-60cm，挖沟面高20-30cm，宽25-30cm起畦，整平畦面；按行距20-30cm、株距20-25cm挖穴，穴长×深×宽等于10cm×15cm×10cm，并在每个穴内施埋基底肥。
3.根据权利要求1所述的一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述移栽大田阶段还包括病虫害防治的步骤，具体为：在病穴施用生物农药，或者将病株拔出，每隔1-2周喷施消毒液一次；
所述消毒液由砂仁汁、番茄叶汁、桂皮汁、生姜汁、大蒜汁与水按照质量比(1-2.5)：(2-3.5)：(1.5-2.5)：(3-4)：(2-3.5)：(30-55)配制而成；所述消毒液的喷施量为：每次每亩喷洒150-200kg。
4.根据权利要求3所述的一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述病虫害防治过程中，当发现黑斑病时，向患病植株喷洒70％甲基托布津湿性粉剂900-1100倍液。
5.根据权利要求1所述的一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述基底肥是由30-50重量份的厩肥、16-32重量份的麸皮、40-50重量份的农作物秸秆和21-33重量份的人畜粪便混合均匀后在温度为30-40℃，湿度为60-70％的条件下发酵8-12天得到基底肥的具体施加方式为：在穴底部施加一层2-3cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆盖一层2-3cm厚的泥土，依次交替2-3次；基底肥的用量为每亩施加350-550kg。
6.根据权利要求1所述的一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述土豆液主要经过如下处理得到：a.将土豆切丝放入锅中，加入土豆质量3-4倍的水，加热至沸腾后维持20-30分钟；b.加入土豆和水总质量0.2-0.4倍的离子液体，在90-120℃、80-120r/min的条件下，搅拌处理60-120min，去渣留液，即可得到土豆液。
7.根据权利要求5所述的一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述离子液体为胍盐类离子液体、咪唑类离子液体、季铵盐类离子液体和噻唑类离子液体中的一种。
8.根据权利要求1-7任一项所述的一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述野生白芨在移栽大田3-5年后进行采收。
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