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CN106748257A - 一种固氮微生物复混肥及制备方法 - Google Patents

一种固氮微生物复混肥及制备方法 Download PDF

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CN106748257A
CN106748257A CN201710034290.5A CN201710034290A CN106748257A CN 106748257 A CN106748257 A CN 106748257A CN 201710034290 A CN201710034290 A CN 201710034290A CN 106748257 A CN106748257 A CN 106748257A
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Shandong Lifeng Biotechnology Co Ltd
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Abstract

本发明属于农业肥料技术领域，具体公开了一种固氮微生物复混肥及制备方法。本发明包括多肽尿素、磷肥、多肽螯合钾、复合微生物菌剂、多肽化合物、土壤改良剂、中微量元素化合物和营养剂；复合微生物菌剂中含有固氮菌、解磷解钾菌、光合细菌、益生菌和吸附物。本发明制备方法包括制备复合微生物菌剂发酵液，将发酵液与吸附物混匀，依次制成复合微生物菌剂和微生物包膜复合剂；将微生物包膜复合剂、腐植酸包膜有机肥、多肽包膜无机肥混匀，在电场和磁场作用下，添加中微量元素，喷洒骨胶，制成固氮微生物复混肥颗粒。本发明复混肥具有调节营养，刺激作物生长，改善农产品质量，增产增效，防治病虫害，增加土壤肥力，疏松并改善土壤质量等作用。

Description

一种固氮微生物复混肥及制备方法
技术领域
本发明属于农业肥料技术领域，具体涉及一种固氮微生物复混肥及制备方法。
背景技术
现在农业生产中，肥料提供了植物所需的多种营养元素，对于改善土壤性质、提高土壤肥力、增加作物产量、提高作物品质，起到了重要作用。
目前，市场上的化肥种类繁多，有些肥料盲目追求作物所需的高含量氮磷钾肥，或是施肥不合理、施肥方法不当，导致了肥料利用率较低，肥效下降，作物营养缺失、品质退化，土壤酸碱平衡失调，土壤板结或水分流失严重，对生态环境影响恶劣。
复混肥是复混肥料的简称，是指含有多种植物所需元素或养分的肥料。一般含有大量元素、中量元素和微量元素；大量元素包括：氮(N)、磷(P)、钾(K)，也称为总养分；中量元素包括：钙(Ca)、镁(Mg)、硫(S)等，也称为次要养分；微量元素包括：硼(B)、锰(Mn)、铁(Fe)、锌(Zn)、铜(Cu)、钼(Mo)或钴(Co)等，也称为微量养分。复混肥料至少含有氮、磷、钾三种养分其中两种养分，多是通过物理掺混方法制成。
现在的复混肥料存在着如下缺陷：一是复混肥通过物理混合而成，生产工艺相对简单，容易造成养分不均，土壤改善效果较差；二是复混肥料养分浓度偏低，氮肥、磷肥、钾肥等总养分一般不超过30％；三是物理混合的复混肥料养分释放不均衡，造成作物养分吸收过程中的浪费和缺乏，利用率较低。
为了解决上述技术问题，现在技术对肥料进行了改进：
中国专利CN 101417897A公开了一种微生物有机复合肥，其主要组分为鸡粪、玉米轩粉、煤泥、微生物发酵菌剂、尿素、硫酸钾、钙镁磷钾肥、腐殖酸和棒土，其优点是在微生物有机复合肥的原料中加入了煤泥来提高肥料中有机质的含量；用钙镁磷钾肥来代替过磷酸钙等磷肥，可以增加作物生长需要的一些微量元素，促进作物生长。但是该种肥料除了提高一定的有机质含量和增加了有限的微量元素外，缺乏其他的有益功能，该种肥料不能为作物创造良性的生态环境，不能抑制病虫害、杀死病原菌，不能有效提高作物的抵抗力和免疫力，且所含微量元素种类不多、量少、肥效不高，使用时需要多次施加肥料，浪费人力且易污染环境。
中国专利CN 1303740A公开了一种多元素复混肥，虽然该复混肥中含有多种微量元素，对作物促生长有一定效果，但效果不明显，肥效时间短，一定程度上制约了作物后期产量和质量的提高，这类肥料不能满足作物生长的需要，作物抗病能力差，病虫害多，不抗冻害，不抗倒伏，影响了作物的产量和质量。
现有的微生物肥料，大多是单一性的微生物肥料，如固氮菌肥、磷菌肥、钾菌肥等，这些生物肥料往往只能解决作物生长需要的单一营养素，而且使用量较大，成本过高。目前，市场上迫切需要的是一种可以克服上述缺陷，满足作物营养需要，大大改善和提高农产品的品质的高效复混肥料。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足之处，提供了一种固氮微生物复混肥及制备方法；本发明复混肥料中含有多种营养物质，可以充分满足作物对氮、磷、钾等元素的需求，解决作物营养不均衡，影响品质和产量的问题；可缓解土壤的盐碱化、沙漠化程度，有利于肥沃土地，可以改善作物的品质，提高作物的产量；而且，本发明复混肥中含有多种微生物菌群，可固定氮素，活化土壤中作物难以利用的磷、钾等中微量元素，提高无机肥料的利用率，减少无机肥料的使用量；本发明复混肥中微生物在生长代谢过程中，还可促进作物生长，同时对土壤中的病原微生物和有害微生物起到抑制和拮抗的作用，提高作物的抗逆性。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：
本发明提供了一种固氮微生物复混肥的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备复合微生物菌剂培养基
参照NY411-2000附录A3标准，制备固氮芽孢杆菌培养基；
参照NY413-2000附录B1标准，制备胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌培养基；
参照NY412-2000附录D2标准，制备巨大芽孢杆菌培养基；
参照NY/T 2131-2012 4.5/4.6标准，制备枯草芽孢杆菌培养基；
然后将固氮芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌的菌种分别接入试管斜面的培养基内，将试管斜面菌种置入恒温箱内培养，再将斜面菌种置于冰箱内，在低温下保存；
(2)制备复合微生物菌剂悬浮液
将上述的固氮芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌培养基进行灭菌处理，再接种上述试管斜面菌种，将接种后的接种瓶置入恒温箱内培养；将培养好的菌种瓶在无菌的条件下，分别加入无菌水，制备成菌种悬浮液，再将菌种悬浮液分别置入无菌减压瓶内，封口，即分别制成固氮芽孢杆菌悬浮液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌悬浮液、巨大芽孢杆菌悬浮液、枯草芽孢杆菌悬浮液；
(3)制备复合微生物菌剂培养液
固氮芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：柠檬酸钠0.2％、果糖0.5％、钼酸钠0.0002％、富硒蝇蛆粉0.03％、轻质碳酸钙0.005％、壳聚糖0.3％、活性酵母0.02％、甲壳素0.03％、多肽螯合镁0.02％、氯化钠0.05％、草木灰0.01％、多肽L-天冬氨酸钾0.01％、海藻泥0.3％，其余为无菌水；
胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：葡萄糖2％、壳聚糖0.1％、氯化钠0.02％、多肽L-天冬氨酸钾0.01％、腐植酸尿素铁0.005％、钼酸钠0.003％、多肽L-天冬氨酸钾0.3％、多肽螯合镁0.02％、甲壳素0.03％、轻质碳酸钙0.2％、海藻泥0.1％、磷酸铵0.1％、褐煤0.03％、活性酵母0.03％，其余为无菌水；
巨大芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：甲壳素0.03％、木糖醇0.01％、活性酵母0.02％、多肽L-天冬氨酸钾0.02％、轻质碳酸钙0.2％、多肽螯合镁0.1％、麦芽糖1.5％、多肽螯合锌0.03％、氯化钠0.02％、腐植酸尿素铁0.004％、海藻泥0.1％，其余为无菌水；
枯草芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：草炭0.005％、甲壳素0.03％、富硒蝇蛆粉0.05％、红土粉0.01％、富硒酵母0.02％、钼酸钠0.003％、多肽L-天冬氨酸钾0.02％、轻质碳酸钙0.2％、多肽螯合镁0.1％、蔗糖2％、多肽螯合锌0.03％、氯化钠0.02％、腐植酸尿素铁0.004％、褐藻0.1％，其余为无菌水；
上述发酵培养液按其组分含量分别混合后，将pH值调为7.1-7.3；
将上述发酵培养液分别置入到种子罐内灭菌处理；
(4)制备复合微生物菌剂种子液
将步骤(2)中固氮芽孢杆菌悬浮液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌悬浮液、巨大芽孢杆菌悬浮液、枯草芽孢杆菌悬浮液在无菌条件下分别接入对应的种子罐内，通过循环装置保持种子罐内的发酵培养液恒温流动培养，在培养时，向种子罐内通入无菌空气，无菌空气的通风量与发酵培养液的体积比为O.7：1，培养后，即制成固氮芽孢杆菌种子液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌种子液、巨大芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液；
(5)制备复合微生物菌剂发酵液
将固氮芽孢杆菌发酵培养液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌发酵培养液、巨大芽孢杆菌发酵培养液和枯草芽孢杆菌发酵培养液分别置入发酵罐中，再将对应的种子液在无菌条件下分别置入其对应的发酵罐中，通过循环装置使发酵罐培养液恒温发酵培养，在培养过程中，通入无菌空气，无菌空气的通风量与发酵培养液的体积比为O.7：1；当抽样菌体大于95％形成芽抱后，结束发酵，即制成固氮芽孢杆菌发酵液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌发酵液、巨大芽孢杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液，按1：0.7：0.7：0.6的体积比混合后，搅匀，即制成复合菌发酵液；
(6)制备吸附物
将凹凸棒土和腐殖土按1：1的重量比混合，搅匀，即制成吸附物；
(7)制备复合微生物菌剂
将上述复合微生物菌发酵液与吸附物按1:12的重量比喷淋混匀，低温烘干，制成复合微生物菌剂；制成的复合微生物菌剂含水量小于8wt.％；
(8)制备微生物包膜复合剂
将pH为6-8的黄腐酸溶液与复合微生物菌剂按1:10的重量比喷淋混匀，低温烘干，制成微生物包膜复合剂；
(9)制备腐植酸包膜有机肥
将60-80目的黄腐酸颗粒与凹凸棒土、米糠/麦麸按5:1:1的重量比混匀，喷淋混匀，低温烘干，制成腐植酸包膜有机肥；制成的有机肥含水量小于8wt.％；
(10)制备多肽包膜无机肥
将多肽尿素、磷肥、多肽螯合钾按2：1：1的比例混匀制成无机肥，其中，多肽尿素中氮含量大于55wt.％，磷肥中磷含量大于55wt.％，多肽螯合钾中钾含量大于55％；将含量30％分子量小于1000的活性多肽、含量为40％的氯化聚2-羟丙基-1，1-N-二甲基铵溶液和含量为10％的30wt.％甲基异噻唑啉酮按0.1:5:2.5的比例混匀，制成多肽包膜剂，将多肽包膜剂与无机肥按5:1的比例混匀，低温烘干，制成多肽包膜无机肥；
(11)制备固氮微生物复混肥
将步骤(8)、(9)、(10)中微生物包膜复合剂、腐植酸包膜有机肥、多肽包膜无机肥按1.5：1：1比例混匀，分别在电场和磁场作用下，添加1-10wt.％中微量元素混匀，作用后，喷淋造粒，低温烘干，筛分，并在外层喷洒一层0.2wt.％的骨胶，制成固氮微生物复混肥颗粒；制成的固氮微生物复混肥颗粒含水量小于8wt.％，粒径在3-5mm。
进一步地，所述步骤(1)和步骤(2)中，恒温箱温度为27℃，培养时间为60小时；所述步骤(1)中低温保存温度为2-4℃；所述步骤(4)中，27℃培养10小时，所述步骤(5)中，恒温发酵培养温度为27℃，时间为20个小时；所述步骤(7)-步骤(11)中，低温烘干温度为40-60℃；所述步骤(11)中，所述电场为100-200KV/m的静电场，所述磁场为0.1-0.5T的稳恒磁场，作用时间为0.2-2h。
进一步地，所述步骤(8)混匀中还可加入益生菌和/光合细菌；益生菌包含酪酸梭菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、放线菌、酵母菌中的一种或几种的混合物；光合细菌包含荚膜红假单胞菌、球形红假单胞菌、沼泽红假单胞菌、嗜硫红假单胞菌、深红红螺菌、黄褐红螺菌中的一种或几种的混合物。
进一步地，所述中微量元素元素包含钙、镁、硫、硼、锰、铁、锌、铜、钼、氯、硒或稀土元素化合物中的一种或几种的混合物。
进一步地，所述步骤(11)中，添加中微量元素时，还可加入氨基酸和维生素；所述氨基酸包含天冬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、亮氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸、丙氨酸、组氨酸、胱氨酸、精氨酸、缬氨酸、脯氨酸和蛋氨酸中的一种或几种的混合物；所述维生素包含维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、叶酸和维生素C中的一种或几种的混合物。
一种如上所述方法制得的固氮微生物复混肥在肥料中的应用。
本发明还提供了一种固氮微生物复混肥，包括如下成份：
多肽尿素10-15份、磷肥5-10份、多肽螯合钾5-10份、复合微生物菌剂15-30份、多肽化合物0.5-3份、土壤改良剂20-30份、中微量元素化合物1-10份、营养剂1-5份；
其中，复合微生物菌剂中含有固氮菌、解磷解钾菌、光合细菌、益生菌和吸附物。
进一步地，所述固氮菌为固氮芽孢杆菌。
进一步地，所述解磷解钾菌为胶冻样芽孢杆菌/环状芽胞杆菌和巨大芽孢杆菌。
进一步地，所述光合细菌包含荚膜红假单胞菌、球形红假单胞菌、沼泽红假单胞菌、嗜硫红假单胞菌、深红红螺菌、黄褐红螺菌中的一种或几种的混合物；优选荚膜红假单胞菌或黄褐红螺菌。
进一步地，所述益生菌包含酪酸梭菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、放线菌、酵母菌中的一种或几种的混合物。
进一步地，所述放线菌优选诺卡氏放线菌。
进一步地，所述复合微生物菌剂还含有腐植酸。
进一步地，所述腐植酸为黄腐酸。
进一步地，所述复合微生物菌剂还含有杆菌。
进一步地，所述杆菌包含枯草芽孢杆菌/地衣芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌和大柴旦盐杆菌中的一种或几种的混合物。
进一步地，所述复合微生物菌剂还含有绿色木霉菌。
进一步地，所述复合微生物菌剂中活菌数至少为1000万个/毫升。
进一步地，所述吸附物为禽畜粪便、糖、红土粉、花生麸/豆饼麸/米糠/麦麸、草木灰、草炭、褐煤、轻质碳酸钙、富硒蝇蛆粉、甲壳素或海藻泥中的一种或几种的混合物。
进一步地，所述糖为葡萄糖、果糖、壳聚糖、蔗糖、白糖或麦芽糖中的一种或几种的混合物。
进一步地，所述多肽尿素中缩二脲含量小于0.3％。
进一步地，所述磷肥中含磷量大于55wt.％。
进一步地，所述磷肥优选酪蛋白磷酸肽或卵黄高磷蛋白。
进一步地，所述多肽螯合钾优选多肽L-天冬氨酸钾。
进一步地，所述多肽化合物为分子量小于1000的活性多肽。
进一步地，所述土壤改良剂为凹凸棒土或膨润土。
进一步地，所述营养剂包含氨基酸和维生素；所述氨基酸包含天冬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、亮氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸、丙氨酸、组氨酸、胱氨酸、精氨酸、缬氨酸、脯氨酸和蛋氨酸中的一种或几种的混合物；所述维生素包含维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、叶酸和维生素C中的一种或几种的混合物。
进一步地，所述中微量元素化合物包含钙、镁、硫、硼、锰、铁、锌、铜、钼、氯、硒或稀土元素化合物中的一种或几种的混合物。
进一步地，所述钙、锰、镁、锌、铁、铜为多肽螯合物。
进一步地，所述钙、锰、镁、锌、铁、铜为腐植酸盐。
进一步地，所述铁为腐植酸尿素铁。
一种如上所述的复合微生物菌剂和固氮微生物复混肥在肥料中的应用。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1.本发明所采用的固氮菌增加了土壤中氮素来源，并通过微生物来改善土壤的土质，减少了对氮肥的使用量，降低了成本；适用于各种作物，特别是对禾本科作物和蔬菜中的叶菜类效果明显。
2.本发明解磷解钾菌的使用，充分利用了现有土壤中所含的磷钾成分，在降低磷肥钾肥的使用量的同时，又保证了作物对于磷钾元素的需求，既降低了成本，同时也保证了肥料的质量。
3.本发明多种复合微生物菌剂，起到了调节营养、改善土质、杀灭病虫害的多种作用：巨大芽孢杆菌可以很好的降解土壤中的有机磷，具有解磷固钾的作用，也可用于水体的净化；胶冻样芽孢杆菌在土壤中繁殖生长，产生有机酸、荚膜多糖等代谢产物，可以分解破坏硅铝酸盐的晶格结构、难溶性磷化合物等，分解释放出可溶的磷钾元素及钙、硫、镁、铁、锌、钼、锰等中微量元素，既增进了土壤肥力，又为作物提供了可吸收利用的营养元素，同时产生赤霉素、细胞激动素、微生物酶、细菌多糖等生理活性物质，促进作物营养吸收和生长代谢；诺卡氏放线菌施入土壤中后可有效预防多种土传病害，有效抑制根线虫的卵块孵化，驱避成虫，对根线虫病有很好的防治效果，另外，诺卡氏防线菌还可以分解腈类化合物，用于水体的净化；枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌可以抑制致病菌的生长繁殖，用于水环境的净化；胶质芽孢杆菌对土壤中含钾的铝硅酸盐和磷石灰进行分解，释放出钾、磷及其他灰分元素，平衡氮、磷、钾的吸收，解除肥害，改善作物的营养；苏云金芽孢杆菌可用于植物保护，杀灭害虫；多粘类芽孢杆菌具有固定分子态氮的能力，对植物青枯病、黄萎病、枯萎病、腐烂病等多种植物病害具有防治作用，还具有促进作物生长，增产的作用。
4.本发明通过益生菌、维生素、氨基酸等的添加，进一步补充了土壤中所缺失的营养成分，进一步改善了土壤质量，提高了作物品质，增加了作物抗自然灾害能力。
5.本发明通过复合包膜技术，解决了微生物与无机肥相溶性不好的问题，增加了肥料的利用率，进而降低了肥料的使用量，减少了资源的浪费，减轻了农民的负担。
6.本发明通过电场和磁场效应，可以提高中微量元素的相溶性，减少其添加量，提高其产率，降低企业生产成本，达到节能减排的目的。
7.本发明腐植酸能与氮、磷、钾等元素结合制成的腐植酸类肥料，具有增效、改良土壤、刺激作物生长、改善农产品质量等作用，腐植酸镁、腐植酸锌、腐植酸尿素铁在补充土壤缺镁、缺锌、缺铁上有良好的效果，腐植酸和除草、除莠等农药混用，可以提高药效、抑制残毒；同时，腐植酸包膜还可降低肥料的用量，降低农民的生产成本。
8.本发明能防治土壤传染病害，降低作物病/虫害的发生，增强抗病/虫害的能力，不仅直接限制有害微生物的生长、繁殖；而且微生物大量生长繁殖，占据病原细菌的生存空间，促进失衡的土壤微生物系得到改善和恢复。
9.本发明可以保持土壤水分，改善土壤水环境，增加土壤肥力，保持肥料的持续稳定缓慢释放，疏松并改善土壤质量，促进作物生长，增加作物抗病抗旱抗寒能力，提高作物产量和品质，改善和净化土壤环境。
附图说明
图1示例性地示出了本发明制备方法的流程示意图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明做进一步详细描述，但本发明的技术方案包含但不限于下述实施例的内容。
本发明提供了一种固氮微生物复混肥的制备方法，如图1所示，包括如下步骤：
(1)制备复合微生物菌剂培养基
参照NY411-2000附录A3标准，制备固氮芽孢杆菌培养基；
参照NY413-2000附录B1标准，制备胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌培养基；
参照NY412-2000附录D2标准，制备巨大芽孢杆菌培养基；
参照NY/T 2131-20124.5/4.6标准，制备枯草芽孢杆菌培养基；
然后将固氮芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌的菌种分别接入试管斜面的培养基内，将试管斜面菌种置入27℃恒温箱内培养60小时，再将斜面菌种置于冰箱内，在2-4℃低温下保存；
(2)制备复合微生物菌剂悬浮液
将上述的固氮芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌培养基进行灭菌处理，再接种上述试管斜面菌种，将接种后的接种瓶置入27℃恒温箱内培养60小时；将培养好的菌种瓶在无菌的条件下，分别加入无菌水，制备成菌种悬浮液，再将菌种悬浮液分别置入无菌减压瓶内，封口，即分别制成固氮芽孢杆菌悬浮液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌悬浮液、巨大芽孢杆菌悬浮液、枯草芽孢杆菌悬浮液；
(3)制备复合微生物菌剂培养液
固氮芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：柠檬酸钠0.2％、果糖0.5％、钼酸钠0.0002％、富硒蝇蛆粉0.03％、轻质碳酸钙0.005％、壳聚糖0.3％、活性酵母0.02％、甲壳素0.03％、多肽螯合镁0.02％、氯化钠0.05％、草木灰0.01％、多肽L-天冬氨酸钾0.01％、海藻泥0.3％，其余为无菌水；
胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：葡萄糖2％、壳聚糖0.1％、氯化钠0.02％、多肽L-天冬氨酸钾0.01％、腐植酸尿素铁0.005％、钼酸钠0.003％、多肽L-天冬氨酸钾0.3％、多肽螯合镁0.02％、甲壳素0.03％、轻质碳酸钙0.2％、海藻泥0.1％、磷酸铵0.1％、褐煤0.03％、活性酵母0.03％，其余为无菌水；
巨大芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：甲壳素0.03％、木糖醇0.01％、活性酵母0.02％、多肽L-天冬氨酸钾0.02％、轻质碳酸钙0.2％、多肽螯合镁0.1％、麦芽糖1.5％、多肽螯合锌0.03％、氯化钠0.02％、腐植酸尿素铁0.004％、海藻泥0.1％，其余为无菌水；
枯草芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：草炭0.005％、甲壳素0.03％、富硒蝇蛆粉0.05％、红土粉0.01％、富硒酵母0.02％、钼酸钠0.003％、多肽L-天冬氨酸钾0.02％、轻质碳酸钙0.2％、多肽螯合镁0.1％、蔗糖2％、多肽螯合锌0.03％、氯化钠0.02％、腐植酸尿素铁0.004％、褐藻0.1％，其余为无菌水；
上述发酵培养液按其组分含量分别混合后，将pH值调为7.1-7.3；
将上述发酵培养液分别置入到种子罐内灭菌处理；
(4)制备复合微生物菌剂种子液
将步骤(2)中固氮芽孢杆菌悬浮液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌悬浮液、巨大芽孢杆菌悬浮液、枯草芽孢杆菌悬浮液在无菌条件下分别接入对应的种子罐内，通过循环装置保持种子罐内的发酵培养液27℃恒温流动培养10小时，在培养时，向种子罐内通入无菌空气，无菌空气的通风量与发酵培养液的体积比为O.7：1，培养后，即制成固氮芽孢杆菌种子液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌种子液、巨大芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液；
(5)制备复合微生物菌剂发酵液
将固氮芽孢杆菌发酵培养液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌发酵培养液、巨大芽孢杆菌发酵培养液和枯草芽孢杆菌发酵培养液分别置入发酵罐中，再将对应的种子液在无菌条件下分别置入其对应的发酵罐中，通过循环装置使发酵罐培养液27℃恒温发酵培养20个小时，在培养过程中，通入无菌空气，无菌空气的通风量与发酵培养液的体积比为O.7：1；当抽样菌体大于95％形成芽抱后，结束发酵，即制成固氮芽孢杆菌发酵液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌发酵液、巨大芽孢杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液，按1：0.7：0.7：0.6的体积比混合后，搅匀，即制成复合菌发酵液；
(6)制备吸附物
将凹凸棒土和腐殖土按1：1的重量比混合，搅匀，即制成吸附物；
(7)制备复合微生物菌剂
将上述复合微生物菌发酵液与吸附物按1:12的重量比喷淋混匀，40-60℃低温烘干，制成复合微生物菌剂；制成的复合微生物菌剂含水量小于8wt.％；
(8)制备微生物包膜复合剂
将pH为6-8的黄腐酸溶液与复合微生物菌剂按1:10的重量比喷淋混匀，40-60℃低温烘干，制成微生物包膜复合剂；
(9)制备腐植酸包膜有机肥
将60-80目的黄腐酸颗粒与凹凸棒土、米糠/麦麸按5:1:1的重量比混匀，喷淋混匀，40-60℃低温烘干，制成腐植酸包膜有机肥；制成的有机肥含水量小于8wt.％；
(10)制备多肽包膜无机肥
将多肽尿素、磷肥、多肽螯合钾按2：1：1的比例混匀制成无机肥，其中，多肽尿素中氮含量大于55wt.％，磷肥中磷含量大于55wt.％，多肽螯合钾中钾含量大于55％；将含量30％分子量小于1000的活性多肽、含量为40％的氯化聚2-羟丙基-1，1-N-二甲基铵溶液和含量为10％的30wt.％甲基异噻唑啉酮按0.1:5:2.5的比例混匀，制成多肽包膜剂，将多肽包膜剂与无机肥按5:1的比例混匀，40-60℃低温烘干，制成多肽包膜无机肥；
(11)制备固氮微生物复混肥
将步骤(8)、(9)、(10)中微生物包膜复合剂、腐植酸包膜有机肥、多肽包膜无机肥按1.5：1：1比例混匀，在100-200KV/m的静电场和0.1-0.5T的稳恒磁场下分别作用1小时和0.5小时，添加1-10wt.％中微量元素混匀，作用后，喷淋造粒，40-60℃低温烘干，筛分，并在外层喷洒一层0.2wt.％的骨胶，制成固氮微生物复混肥颗粒；制成的固氮微生物复混肥颗粒含水量小于8wt.％，粒径在3-5mm。
优选地，所述步骤(8)混匀中还可加入益生菌和/光合细菌；益生菌包含酪酸梭菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、放线菌、酵母菌中的一种或几种的混合物；光合细菌包含荚膜红假单胞菌、球形红假单胞菌、沼泽红假单胞菌、嗜硫红假单胞菌、深红红螺菌、黄褐红螺菌中的一种或几种的混合物。
更加优选地，所述中微量元素元素包含钙、镁、硫、硼、锰、铁、锌、铜、钼、氯、硒或稀土元素化合物中的一种或几种的混合物。
更加优选地，所述步骤(11)中，添加中微量元素时，还可加入氨基酸和维生素；所述氨基酸包含天冬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、亮氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸、丙氨酸、组氨酸、胱氨酸、精氨酸、缬氨酸、脯氨酸和蛋氨酸中的一种或几种的混合物；所述维生素包含维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、叶酸和维生素C中的一种或几种的混合物。
一种如上所述方法制得的固氮微生物复混肥在肥料中的应用。
本发明还提供了一种固氮微生物复混肥，包括如下成份：
多肽尿素10-15份、磷肥5-10份、多肽螯合钾5-10份、复合微生物菌剂15-30份、多肽化合物0.5-3份、土壤改良剂20-30份、中微量元素化合物1-10份、营养剂1-5份；
其中，复合微生物菌剂中含有固氮芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌/环状芽胞杆菌和巨大芽孢杆菌、光合细菌、益生菌、腐植酸和吸附物；
其中，所述复合微生物菌剂中活菌数至少为1000万个/毫升。
优选地，所述光合细菌包含荚膜红假单胞菌、球形红假单胞菌、沼泽红假单胞菌、嗜硫红假单胞菌、深红红螺菌、黄褐红螺菌中的一种或几种的混合物；优选荚膜红假单胞菌或黄褐红螺菌。
更加优选地，所述益生菌包含酪酸梭菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、诺卡氏放线菌、酵母菌中的一种或几种的混合物。
更加优选地，所述腐植酸为黄腐酸。
更加优选地，所述复合微生物菌剂还含有杆菌或绿色木霉菌；所述杆菌包含枯草芽孢杆菌/地衣芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌和大柴旦盐杆菌中的一种或几种的混合物。
更加优选地，所述吸附物为禽畜粪便、糖、红土粉、花生麸/豆饼麸/米糠/麦麸、草木灰、草炭、褐煤、轻质碳酸钙、富硒蝇蛆粉、甲壳素或海藻泥中的一种或几种的混合物。
更加优选地，所述糖为葡萄糖、果糖、壳聚糖、蔗糖、白糖或麦芽糖中的一种或几种的混合物。
更加优选地，所述多肽尿素中缩二脲含量小于0.3％。
更加优选地，所述磷肥中含磷量大于55wt.％；所述磷肥优选酪蛋白磷酸肽或卵黄高磷蛋白。
更加优选地，所述多肽螯合钾优选多肽L-天冬氨酸钾。
更加优选地，所述多肽化合物为分子量小于1000的活性多肽。
更加优选地，所述土壤改良剂为凹凸棒土或膨润土。
更加优选地，所述营养剂包含氨基酸和维生素；所述氨基酸包含天冬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、亮氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸、丙氨酸、组氨酸、胱氨酸、精氨酸、缬氨酸、脯氨酸和蛋氨酸中的一种或几种的混合物；所述维生素包含维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、叶酸和维生素C中的一种或几种的混合物。
更加优选地，所述中微量元素化合物包含钙、镁、硫、硼、锰、铁、锌、铜、钼、氯、硒或稀土元素化合物中的一种或几种的混合物；所述钙、锰、镁、锌、铁、铜为多肽螯合物或腐植酸盐；铁优选腐植酸尿素铁。
一种如上所述的复合微生物菌剂和固氮微生物复混肥在肥料中的应用。
实施例1
一种固氮微生物复混肥，包括如下成份：
所述复合微生物菌剂中含有固氮芽孢杆菌1份、胶冻样芽孢杆菌0.7份、巨大芽孢杆菌0.7份、荚膜红假单胞菌0.4份、黄褐红螺菌0.2份、酪酸梭菌0.4份、乳酸杆菌0.3份、双歧杆菌0.4份、诺卡氏放线菌0.5份、酵母菌0.5份、黄腐酸1.2份、枯草芽孢杆菌0.7份、苏云金芽孢杆菌0.5份、多粘类芽孢杆菌0.6份、大柴旦盐杆菌0.2份、禽畜粪便1.5份、糖2份、花生麸1.2份、草炭1.5份、富硒蝇蛆粉1.5份、甲壳素1.5份、海藻泥2.5份；
其中，所述复合微生物菌剂中活菌数至少为1000万个/毫升；
所述糖优选葡萄糖或麦芽糖；所述活性多肽优选分子量小于1000；所述氨基酸优选2：1：1：0.8：1：0.6：0.7的天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酸、胱氨酸和缬氨酸；所述维生素优选1：1：1：1：0.8：1.2的维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、叶酸和维生素C；所述中微量元素化合物优选1：1：1：0.8：0.7：1：0.3：0.4：0.2：0.6：0.3多肽螯合钙、腐植酸镁、腐植酸尿素铁、多肽螯合锌、多肽螯合铜、硫酸盐、硼酸、硫酸锰、钼酸、氯化铵、硒；所述多肽尿素中缩二脲含量小于0.3％。
实施例2
一种固氮微生物复混肥的制备方法，包括：
参照NY411-2000附录A3标准，制备固氮芽孢杆菌培养基；
参照NY413-2000附录B1标准，制备胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌培养基；
参照NY412-2000附录D2标准，制备巨大芽孢杆菌培养基；
参照NY/T 2131-2012 4.5/4.6标准，制备枯草芽孢杆菌培养基；
然后将固氮芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌的菌种分别接入试管斜面的培养基内，将试管斜面菌种置入27℃恒温箱内培养60小时，再将斜面菌种置于冰箱内，在2-4℃低温下保存；
将上述的固氮芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌培养基进行灭菌处理，再接种上述试管斜面菌种，将接种后的接种瓶置入27℃恒温箱内培养60小时；将培养好的菌种瓶在无菌的条件下，分别加入无菌水，制备成菌种悬浮液，再将菌种悬浮液分别置入无菌减压瓶内，封口，即分别制成固氮芽孢杆菌悬浮液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌悬浮液、巨大芽孢杆菌悬浮液、枯草芽孢杆菌悬浮液；
固氮芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：柠檬酸钠0.2％、果糖0.5％、钼酸钠0.0002％、富硒蝇蛆粉0.03％、轻质碳酸钙0.005％、壳聚糖0.3％、活性酵母0.02％、甲壳素0.03％、多肽螯合镁0.02％、氯化钠0.05％、草木灰0.01％、多肽L-天冬氨酸钾0.01％、海藻泥0.3％，其余为无菌水；
胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：葡萄糖2％、壳聚糖0.1％、氯化钠0.02％、多肽L-天冬氨酸钾0.01％、腐植酸尿素铁0.005％、钼酸钠0.003％、多肽L-天冬氨酸钾0.3％、多肽螯合镁0.02％、甲壳素0.03％、轻质碳酸钙0.2％、海藻泥0.1％、磷酸铵0.1％、褐煤0.03％、活性酵母0.03％，其余为无菌水；
巨大芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：甲壳素0.03％、木糖醇0.01％、活性酵母0.02％、多肽L-天冬氨酸钾0.02％、轻质碳酸钙0.2％、多肽螯合镁0.1％、麦芽糖1.5％、多肽螯合锌0.03％、氯化钠0.02％、腐植酸尿素铁0.004％、海藻泥0.1％，其余为无菌水；
枯草芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：草炭0.005％、甲壳素0.03％、富硒蝇蛆粉0.05％、红土粉0.01％、富硒酵母0.02％、钼酸钠0.003％、多肽L-天冬氨酸钾0.02％、轻质碳酸钙0.2％、多肽螯合镁0.1％、蔗糖2％、多肽螯合锌0.03％、氯化钠0.02％、腐植酸尿素铁0.004％、褐藻0.1％，其余为无菌水；
上述发酵培养液按其组分含量分别混合后，将pH值调为7.1；
将上述发酵培养液分别置入到种子罐内灭菌处理；
将上述步骤中固氮芽孢杆菌悬浮液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌悬浮液、巨大芽孢杆菌悬浮液、枯草芽孢杆菌悬浮液在无菌条件下分别接入对应的种子罐内，通过循环装置保持种子罐内的发酵培养液27℃恒温流动培养10小时，在培养时，向种子罐内通入无菌空气，无菌空气的通风量与发酵培养液的体积比为O.7：1，培养后，即制成固氮芽孢杆菌种子液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌种子液、巨大芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液；
将固氮芽孢杆菌发酵培养液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌发酵培养液、巨大芽孢杆菌发酵培养液和枯草芽孢杆菌发酵培养液分别置入发酵罐中，再将对应的种子液在无菌条件下分别置入其对应的发酵罐中，通过循环装置使发酵罐培养液27℃恒温发酵培养20个小时，在培养过程中，通入无菌空气，无菌空气的通风量与发酵培养液的体积比为O.7：1；当抽样菌体大于95％形成芽抱后，结束发酵，即制成固氮芽孢杆菌发酵液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌发酵液、巨大芽孢杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液，按1：0.7：0.7：0.6的体积比混合后，搅匀，即制成复合菌发酵液；
将凹凸棒土和腐殖土按1：1的重量比混合，搅匀，即制成吸附物；
将上述复合微生物菌发酵液与吸附物按1:12的重量比喷淋混匀，50℃低温烘干，制成复合微生物菌剂；制成的复合微生物菌剂含水量小于8wt.％；
将pH为6-8的黄腐酸溶液与复合微生物菌剂按1:10的重量比喷淋混匀，50℃低温烘干，制成微生物包膜复合剂；
将60-80目的黄腐酸颗粒与凹凸棒土、米糠/麦麸按5:1:1的重量比混匀，喷淋混匀，50℃低温烘干，制成腐植酸包膜有机肥；制成的有机肥含水量小于8wt.％；
将多肽尿素、酪蛋白磷酸肽、多肽螯合钾按2：1：1的比例混匀制成无机肥，其中，多肽尿素中氮含量大于55wt.％，磷肥中磷含量大于55wt.％，多肽螯合钾中钾含量大于55％；将含量30％分子量小于1000的活性多肽、含量为40％的氯化聚2-羟丙基-1，1-N-二甲基铵溶液和含量为10％的30wt.％甲基异噻唑啉酮按0.1:5:2.5的比例混匀，制成多肽包膜剂，将多肽包膜剂与无机肥按5:1的比例混匀，60℃低温烘干，制成多肽包膜无机肥；
将上述步骤中微生物包膜复合剂、腐植酸包膜有机肥、多肽包膜无机肥按1.5：1：1比例混匀，在100KV/m的静电场和0.3T的稳恒磁场下分别作用1小时和0.5小时，添加7wt.％中微量元素混匀，作用后，喷淋造粒，60℃低温烘干，筛分，并在外层喷洒一层0.2wt.％的骨胶，制成固氮微生物复混肥颗粒；制成的固氮微生物复混肥颗粒含水量小于8wt.％，粒径在4±0.5mm。
实施例3
一种固氮微生物复混肥的制备方法，包括：
参照NY411-2000附录A3标准，制备固氮芽孢杆菌培养基；
参照NY413-2000附录B1标准，制备胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌培养基；
参照NY412-2000附录D2标准，制备巨大芽孢杆菌培养基；
参照NY/T 2131-2012 4.5/4.6标准，制备枯草芽孢杆菌培养基；
然后将固氮芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌的菌种分别接入试管斜面的培养基内，将试管斜面菌种置入27℃恒温箱内培养60小时，再将斜面菌种置于冰箱内，在4℃低温下保存；
将上述的固氮芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌培养基进行灭菌处理，再接种上述试管斜面菌种，将接种后的接种瓶置入27℃恒温箱内培养60小时；将培养好的菌种瓶在无菌的条件下，分别加入无菌水，制备成菌种悬浮液，再将菌种悬浮液分别置入无菌减压瓶内，封口，即分别制成固氮芽孢杆菌悬浮液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌悬浮液、巨大芽孢杆菌悬浮液、枯草芽孢杆菌悬浮液；
固氮芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：碳酸钙0.007％、木糖醇0.4％、活性酵母0.02％、氯化钠0.3％、葡萄糖0.7％、钼酸钠0.0002％、富硒蝇蛆粉0.03％、甲壳素0.03％、黑腐酸镁0.02％、氯化钠0.05％、草炭0.02％、多肽L-天冬氨酸钾0.02％、海藻泥0.4％，其余为无菌水；
胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：多肽L-天冬氨酸钾0.01％、腐植酸尿素铁0.005％、麦芽糖2.5％、壳聚糖0.1％、氯化铵0.03％、轻质碳酸钙0.2％、海藻泥0.1％、钼酸钠0.003％、多肽L-天冬氨酸钾0.3％、多肽螯合镁0.02％、甲壳素0.03％、磷酸铵0.1％、草木灰0.03％、禽畜粪便0.02％、活性酵母0.03％，其余为无菌水；
巨大芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：多肽L-天冬氨酸钾0.02％、碳酸钙0.3％、多肽螯合镁0.1％、果糖2％、多肽螯合锌0.03％、氯化钠0.03％、甲壳素0.04％、木糖醇0.01％、活性酵母0.03％、腐植酸尿素铁0.005％、褐藻0.2％，其余为无菌水；
枯草芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：多肽L-天冬氨酸钾0.02％、腐植酸尿素铁0.004％、草炭0.006％、甲壳素0.03％、富硒蝇蛆粉0.06％、氯化钠0.03％、海藻泥0.2％、富硒酵母0.03％、黄腐酸镁0.1％、红土粉0.01％、钼酸钠0.003％、轻质碳酸钙0.2％、蔗糖2％、黑腐酸锌0.03％，其余为无菌水；
上述发酵培养液按其组分含量分别混合后，将pH值调为7.2；
将上述发酵培养液分别置入到种子罐内灭菌处理；
将上述步骤中固氮芽孢杆菌悬浮液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌悬浮液、巨大芽孢杆菌悬浮液、枯草芽孢杆菌悬浮液在无菌条件下分别接入对应的种子罐内，通过循环装置保持种子罐内的发酵培养液27℃恒温流动培养10小时，在培养时，向种子罐内通入无菌空气，无菌空气的通风量与发酵培养液的体积比为O.7：1，培养后，即制成固氮芽孢杆菌种子液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌种子液、巨大芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液；
将固氮芽孢杆菌发酵培养液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌发酵培养液、巨大芽孢杆菌发酵培养液和枯草芽孢杆菌发酵培养液分别置入发酵罐中，再将对应的种子液在无菌条件下分别置入其对应的发酵罐中，通过循环装置使发酵罐培养液27℃恒温发酵培养20个小时，在培养过程中，通入无菌空气，无菌空气的通风量与发酵培养液的体积比为O.7：1；当抽样菌体大于95％形成芽抱后，结束发酵，即制成固氮芽孢杆菌发酵液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌发酵液、巨大芽孢杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液，按1：0.7：0.7：0.6的体积比混合后，搅匀，即制成复合菌发酵液；
将凹凸棒土和腐殖土按1：1的重量比混合，搅匀，即制成吸附物；
将上述复合微生物菌发酵液与吸附物按1:12的重量比喷淋混匀，40℃低温烘干，制成复合微生物菌剂；制成的复合微生物菌剂含水量小于8wt.％；
将pH为6-7的黄腐酸溶液与复合微生物菌剂按1:10的重量比喷淋混匀，加入益生菌和光合细菌；益生菌为酪酸梭菌、嗜酸乳杆菌、詹氏乳杆菌、双歧杆菌、放线菌和酵母菌；光合细菌为荚膜红假单胞菌、沼泽红假单胞菌和黄褐红螺菌；
40℃低温烘干，制成微生物包膜复合剂；将60目的黄腐酸颗粒与凹凸棒土、米糠/麦麸按5:1:1的重量比混匀，喷淋混匀，40℃低温烘干，制成腐植酸包膜有机肥；制成的有机肥含水量小于8wt.％；
将多肽尿素、卵黄高磷蛋白、多肽螯合钾按2：1：1的比例混匀制成无机肥，其中，多肽尿素中氮含量大于55wt.％，磷肥中磷含量大于55wt.％，多肽螯合钾中钾含量大于55％；将含量30％分子量小于1000的活性多肽、含量为40％的氯化聚2-羟丙基-1，1-N-二甲基铵溶液和含量为10％的30wt.％甲基异噻唑啉酮按0.1:5:2.5的比例混匀，制成多肽包膜剂，将多肽包膜剂与无机肥按5:1的比例混匀，40℃低温烘干，制成多肽包膜无机肥；
将上述步骤中微生物包膜复合剂、腐植酸包膜有机肥、多肽包膜无机肥按1.5：1：1比例混匀，在200KV/m的静电场和0.5T的稳恒磁场下分别作用1小时和0.5小时，添加8wt.％中微量元素钙、镁、硫、硼、锰、铁、锌、铜、钼、氯、硒、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、叶酸、维生素C、天冬氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸、丙氨酸、胱氨酸、精氨酸和缬氨酸混匀，作用后，喷淋造粒，60℃低温烘干，筛分，并在外层喷洒一层0.2wt.％的骨胶，制成固氮微生物复混肥颗粒；制成的固氮微生物复混肥颗粒含水量小于7wt.％，粒径在5±0.5mm。
实施例4
将实施例2制成的固氮微生物复混肥与常规化肥进行比较，在大田试验中，以70％作为底肥，30％作为追加肥，加水10-20倍稀释，固氮微生物复混肥的施用量为20公斤/亩，常规化肥按等价量比投入计算，作物成熟后，小麦和玉米均增产20％以上，油菜和水稻均增产15％以上，西红柿增产25％以上；作物的产品品质比较，蛋白质、糖分、维生素、氨基酸等均有不同程度的增幅，作物的自然原味浓烈，外形美，口感好，作物收益比增加20％以上。而且，作物成熟后，对于土壤的肥力降低较少，可通过1-3个月的自然润养期自行恢复肥力，不需额外补充肥料；对施用该固氮微生物复混肥的周遭水质进行检测，未检测到明显增加的污染有害物质，水质良性指标呈小幅上升趋势。
本发明上述实施例中的复混肥绿色环保，无污染；具有调节营养，刺激作物生长，改善农产品质量，增产增效，防治病虫害，抑制有害微生物生长繁殖，保持土壤水分，净化水环境，增加土壤肥力，保持肥料的持续稳定缓慢释放，疏松并改善土壤质量及土壤环境等多种作用。本发明适用广泛，可用于工业化生产。
其中，卵黄高磷蛋白(phosvitin)，约25kDa的磷脂蛋白，占卵黄总蛋白质的7％，其含磷量约10％，是所有磷蛋白中含磷量最高的蛋白质。其磷含量占卵黄总磷量的60％，磷以磷酸化丝氨酸的形式存在，是鸟卵黄中的主要组分，与卵黄脂磷蛋白共存。两者的前体为卵黄原蛋白。卵黄高磷蛋白是脊椎动物卵黄主要成分的一种磷蛋白质，其氨基酸残基中，近半数是丝氨酸，且几乎全被磷酸化。
其中，酪蛋白磷酸肽(Casein Phosphopeptides,CPP)，是用胰酶或胰蛋白酶水解的酪蛋白，经过精制、纯化制成，其核心结构为：—Ser(P)－Ser(P)－Ser(P)－Glu－Glu－(Ser：丝氨酸，Glu：谷氨酸，P：磷酸基)。这一结构中的磷酸丝氨酸残基(－Ser(P)－)成簇存在，在肠道PH弱碱性环境下带负电荷，可阻止消化酶的进一步作用，使CPP不会被进一步水解而在肠中稳定存在。CPP是以牛乳酪蛋白为原料，通过生物技术由牛乳酪蛋白水解制得的具有生物活性的多肽，可用于各种营养、保健食品中，能有效促进人体对钙、铁、锌、镁等矿物营养素的吸收和利用。
对于本领域的普通技术人员而言，具体实施例只是对本发明进行了示例性描述，本发明具体实现方式不受上述方式的限制。本发明可以有各种更改和变化，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种固氮微生物复混肥的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)制备复合微生物菌剂培养基
参照NY411-2000附录A3标准，制备固氮芽孢杆菌培养基；
参照NY413-2000附录B1标准，制备胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌培养基；
参照NY412-2000附录D2标准，制备巨大芽孢杆菌培养基；
参照NY/T 2131-2012 4.5/4.6标准，制备枯草芽孢杆菌培养基；
然后将固氮芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌的菌种分别接入试管斜面的培养基内，将试管斜面菌种置入恒温箱内培养，再将斜面菌种置于冰箱内，在低温下保存；
(2)制备复合微生物菌剂悬浮液
将上述的固氮芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌培养基进行灭菌处理，再接种上述试管斜面菌种，将接种后的接种瓶置入恒温箱内培养；将培养好的菌种瓶在无菌的条件下，分别加入无菌水，制备成菌种悬浮液，再将菌种悬浮液分别置入无菌减压瓶内，封口，即分别制成固氮芽孢杆菌悬浮液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌悬浮液、巨大芽孢杆菌悬浮液、枯草芽孢杆菌悬浮液；
(3)制备复合微生物菌剂培养液
固氮芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：柠檬酸钠0.2％、果糖0.5％、钼酸钠0.0002％、富硒蝇蛆粉0.03％、轻质碳酸钙0.005％、壳聚糖0.3％、活性酵母0.02％、甲壳素0.03％、多肽螯合镁0.02％、氯化钠0.05％、草木灰0.01％、多肽L-天冬氨酸钾0.01％、海藻泥0.3％，其余为无菌水；
胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：葡萄糖2％、壳聚糖0.1％、氯化钠0.02％、多肽L-天冬氨酸钾0.01％、腐植酸尿素铁0.005％、钼酸钠0.003％、多肽L-天冬氨酸钾0.3％、多肽螯合镁0.02％、甲壳素0.03％、轻质碳酸钙0.2％、海藻泥0.1％、磷酸铵0.1％、褐煤0.03％、活性酵母0.03％，其余为无菌水；
巨大芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：甲壳素0.03％、木糖醇0.01％、活性酵母0.02％、多肽L-天冬氨酸钾0.02％、轻质碳酸钙0.2％、多肽螯合镁0.1％、麦芽糖1.5％、多肽螯合锌0.03％、氯化钠0.02％、腐植酸尿素铁0.004％、海藻泥0.1％，其余为无菌水；
枯草芽孢杆菌发酵培养液的组合物及其配制比例按重量计，分别为：草炭0.005％、甲壳素0.03％、富硒蝇蛆粉0.05％、红土粉0.01％、富硒酵母0.02％、钼酸钠0.003％、多肽L-天冬氨酸钾0.02％、轻质碳酸钙0.2％、多肽螯合镁0.1％、蔗糖2％、多肽螯合锌0.03％、氯化钠0.02％、腐植酸尿素铁0.004％、褐藻0.1％，其余为无菌水；
上述发酵培养液按其组分含量分别混合后，将pH值调为7.1-7.3；
将上述发酵培养液分别置入到种子罐内灭菌处理；
(4)制备复合微生物菌剂种子液
将步骤(2)中固氮芽孢杆菌悬浮液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌悬浮液、巨大芽孢杆菌悬浮液、枯草芽孢杆菌悬浮液在无菌条件下分别接入对应的种子罐内，通过循环装置保持种子罐内的发酵培养液恒温流动培养，在培养时，向种子罐内通入无菌空气，无菌空气的通风量与发酵培养液的体积比为O.7：1，培养后，即制成固氮芽孢杆菌种子液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌种子液、巨大芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液；
(5)制备复合微生物菌剂发酵液
将固氮芽孢杆菌发酵培养液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌发酵培养液、巨大芽孢杆菌发酵培养液和枯草芽孢杆菌发酵培养液分别置入发酵罐中，再将对应的种子液在无菌条件下分别置入其对应的发酵罐中，通过循环装置使发酵罐培养液恒温发酵培养，在培养过程中，通入无菌空气，无菌空气的通风量与发酵培养液的体积比为O.7：1；当抽样菌体大于95％形成芽抱后，结束发酵，即制成固氮芽孢杆菌发酵液、胶冻样芽孢杆菌/环状芽孢杆菌发酵液、巨大芽孢杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液，按1：0.7：0.7：0.6的体积比混合后，搅匀，即制成复合菌发酵液；
(6)制备吸附物
将凹凸棒土和腐殖土按1：1的重量比混合，搅匀，即制成吸附物；
(7)制备复合微生物菌剂
将上述复合微生物菌发酵液与吸附物按1:12的重量比喷淋混匀，低温烘干，制成复合微生物菌剂；制成的复合微生物菌剂含水量小于8wt.％；
(8)制备微生物包膜复合剂
将pH为6-8的黄腐酸溶液与复合微生物菌剂按1:10的重量比喷淋混匀，低温烘干，制成微生物包膜复合剂；
(9)制备腐植酸包膜有机肥
将60-80目的黄腐酸颗粒与凹凸棒土、米糠/麦麸按5:1:1的重量比混匀，喷淋混匀，低温烘干，制成腐植酸包膜有机肥；制成的有机肥含水量小于8wt.％；
(10)制备多肽包膜无机肥
将多肽尿素、磷肥、多肽螯合钾按2：1：1的比例混匀制成无机肥，其中，多肽尿素中氮含量大于55wt.％，磷肥中磷含量大于55wt.％，多肽螯合钾中钾含量大于55％；将含量30％分子量小于1000的活性多肽、含量为40％的氯化聚2-羟丙基-1，1-N-二甲基铵溶液和含量为10％的30wt.％甲基异噻唑啉酮按0.1:5:2.5的比例混匀，制成多肽包膜剂，将多肽包膜剂与无机肥按5:1的比例混匀，低温烘干，制成多肽包膜无机肥；
(11)制备固氮微生物复混肥
将步骤(8)、(9)、(10)中微生物包膜复合剂、腐植酸包膜有机肥、多肽包膜无机肥按1.5：1：1比例混匀，分别在电场和磁场作用下，添加1-10wt.％中微量元素混匀，作用后，喷淋造粒，低温烘干，筛分，并在外层喷洒一层0.2wt.％的骨胶，制成固氮微生物复混肥颗粒；制成的固氮微生物复混肥颗粒含水量小于8wt.％，粒径在3-5mm。
2.根据权利要求1所述的固氮微生物复混肥的制备方法，其特征在于，
所述步骤(1)和步骤(2)中，恒温箱温度为27℃，培养时间为60小时；所述步骤(1)中低温保存温度为2-4℃；所述步骤(4)中，27℃培养10小时，所述步骤(5)中，恒温发酵培养温度为27℃，时间为20个小时；所述步骤(7)-步骤(11)中，低温烘干温度为40-60℃；所述步骤(11)中，所述电场为100-200KV/m的静电场，所述磁场为0.1-0.5T的稳恒磁场，作用时间为0.2-2h。
3.根据权利要求1所述的固氮微生物复混肥的制备方法，其特征在于，
所述步骤(8)混匀中还可加入益生菌和/光合细菌；益生菌包含酪酸梭菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、放线菌、酵母菌中的一种或几种的混合物；光合细菌包含荚膜红假单胞菌、球形红假单胞菌、沼泽红假单胞菌、嗜硫红假单胞菌、深红红螺菌、黄褐红螺菌中的一种或几种的混合物。
4.根据权利要求1所述的固氮微生物复混肥的制备方法，其特征在于，
所述中微量元素元素包含钙、镁、硫、硼、锰、铁、锌、铜、钼、氯、硒或稀土元素化合物中的一种或几种的混合物。
5.根据权利要求1所述的固氮微生物复混肥的制备方法，其特征在于，
所述步骤(11)中，添加中微量元素时，还可加入氨基酸和维生素；所述氨基酸包含天冬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、亮氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸、丙氨酸、组氨酸、胱氨酸、精氨酸、缬氨酸、脯氨酸和蛋氨酸中的一种或几种的混合物；所述维生素包含维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、叶酸和维生素C中的一种或几种的混合物。
6.一种固氮微生物复混肥，其特征在于，包括如下成份：
多肽尿素10-15份、磷肥5-10份、多肽螯合钾5-10份、复合微生物菌剂15-30份、多肽化合物0.5-3份、土壤改良剂20-30份、中微量元素化合物1-10份、营养剂1-5份；
其中，复合微生物菌剂中含有固氮菌、解磷解钾菌、光合细菌、益生菌和吸附物。
7.根据权利要求6所述的固氮微生物复混肥，其特征在于，
所述固氮菌为固氮芽孢杆菌；
所述解磷解钾菌为胶冻样芽孢杆菌/环状芽胞杆菌和巨大芽孢杆菌；
所述光合细菌包含荚膜红假单胞菌、球形红假单胞菌、沼泽红假单胞菌、嗜硫红假单胞菌、深红红螺菌、黄褐红螺菌中的一种或几种的混合物；优选荚膜红假单胞菌或黄褐红螺菌；
所述益生菌包含酪酸梭菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、放线菌、酵母菌中的一种或几种的混合物；所述放线菌优选诺卡氏放线菌；
所述复合微生物菌剂还含有腐植酸；所述腐植酸优选黄腐酸；
所述复合微生物菌剂还含有杆菌；所述杆菌包含枯草芽孢杆菌/地衣芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌和大柴旦盐杆菌中的一种或几种的混合物；
所述复合微生物菌剂还含有绿色木霉菌；
所述复合微生物菌剂中活菌数至少为1000万个/毫升；
所述吸附物为禽畜粪便、糖、红土粉、花生麸/豆饼麸/米糠/麦麸、草木灰、草炭、褐煤、轻质碳酸钙、富硒蝇蛆粉、甲壳素或海藻泥中的一种或几种的混合物；所述糖为葡萄糖、果糖、壳聚糖、蔗糖、白糖或麦芽糖中的一种或几种的混合物。
8.根据权利要求6所述的固氮微生物复混肥，其特征在于，
所述磷肥优选酪蛋白磷酸肽或卵黄高磷蛋白；
所述多肽螯合钾优选多肽L-天冬氨酸钾；
所述多肽化合物为分子量小于1000的活性多肽；
所述土壤改良剂为凹凸棒土或膨润土。
9.根据权利要求6所述的固氮微生物复混肥，其特征在于，
所述中微量元素化合物包含钙、镁、硫、硼、锰、铁、锌、铜、钼、氯、硒或稀土元素化合物中的一种或几种的混合物；
所述钙、锰、镁、锌、铁、铜为多肽螯合物或腐植酸盐；所述铁优选腐植酸尿素铁。
10.一种如权利要求6-9任一项所述的复合微生物菌剂和固氮微生物复混肥在肥料中的应用。
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