Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

CN106589202A - 一种溶菌酶固定化载体及其制备方法 - Google Patents

一种溶菌酶固定化载体及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106589202A
CN106589202A CN201611103997.9A CN201611103997A CN106589202A CN 106589202 A CN106589202 A CN 106589202A CN 201611103997 A CN201611103997 A CN 201611103997A CN 106589202 A CN106589202 A CN 106589202A
Authority
CN
China
Prior art keywords
parts
resin
water phase
carrier
lysozyme
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201611103997.9A
Other languages
English (en)
Inventor
黄晖
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN201611103997.9A priority Critical patent/CN106589202A/zh
Publication of CN106589202A publication Critical patent/CN106589202A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F212/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by an aromatic carbocyclic ring
    • C08F212/34—Monomers containing two or more unsaturated aliphatic radicals
    • C08F212/36—Divinylbenzene
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J9/00—Working-up of macromolecular substances to porous or cellular articles or materials; After-treatment thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2462—Lysozyme (3.2.1.17)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01017—Lysozyme (3.2.1.17)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2325/00—Characterised by the use of homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by an aromatic carbocyclic ring; Derivatives of such polymers
    • C08J2325/02—Homopolymers or copolymers of hydrocarbons

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种溶菌酶固定化载体及其制备方法，属于酶固定化技术领域。本发明采用环境友好技术悬浮聚合工艺，以丙烯酸甲酯为主要原料，以二乙烯基苯为交联剂，通过添加第三单体苯乙烯调节树脂结构以增加载体的机械强度，在复合致孔剂存在下制备了大孔酶载体基体树脂，再经过水解制备弱酸性大孔阳离子交换树脂而得到酶载体。最后通过树脂、戊二醛及溶菌酶的相互反应制备出固化化溶菌酶。用该载体制备的固定化溶菌酶活性在3000‑5000u/g之间。

Description

一种溶菌酶固定化载体及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种酶固定化载体及其制备方法，更具体地说，本发明涉及一种溶菌酶固定化载体及其制备方法，属于酶固定化技术领域。
背景技术
液态酶固定化后具有诸多优点：可增加酶的稳定性从而延长酶的使用寿命；在酶催化反应结束后可方便将酶与反应产物及反应液通过过滤手段得到分离，既降低了操作成本，又避免了酶对催化产物的污染；可实现酶催化的柱操作，提高酶催化效率等。吸附法固定化酶以其操作简单，成本较低而被广泛采用，但吸附法制备固定化酶不如共价键结合法得到的固定化酶牢固，容易脱落。尤其在流动分析过程中，固定化酶很容易被流体冲刷下来。
现有技术造成酶活性较低。
发明内容
本发明旨在解决现有技术的问题，提供一种溶菌酶固定化载体，能够使得酶活性提高。
为了实现上述发明目的，其具体的技术方案如下：
一种溶菌酶固定化载体，其特征在于：包括以下按照重量份数计的原料：
油相：
丙烯酸甲酯 35-40份
二乙烯基苯 45-50份
苯乙烯 5-10份
二甲苯 50-60份
正丁醇 50-60份
偶氮二异丁腈 1-3份；
水相：
聚乙烯醇 5-10份
明胶 5-10份
氯化钠 100-200份
硫酸钙 15份
去离子水 1000份。
一种溶菌酶固定化载体的制备方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：
A、按照配方要求准确称取油相原料于容器中充分混合均匀，备用；按照水相配方要求，将各组分加入一具搅拌、冷凝管及加料口三口瓶内；将体系温度升至45-55℃，开动搅拌直至水相各组分充分混合溶解；将上述配制好的油相混合物倒入水相三口瓶内；
B、保持反应器中搅拌的速度为150-200转/分钟，使油相形成均匀的珠体分散在预先配制好的水相中；升温至75-80℃，直至珠体定型；
C、将聚合反应体系温度升到85℃，保温3-4个小时；将聚合反应体系升温至90℃，保温2-3个小时；将聚合反应体系升温至95℃，保温1-2个小时；将反应体系降温至20-30℃，滤出树脂珠体；采用乙醇对树脂进行淋洗，除去树脂的杂质风干即得到酶载体基体树脂，备用；用30%NaOH溶液250ml，于75-80℃水解反应6-8h；滤出，后处理即得酶载体。
本发明带来的有益技术效果：
本发明采用环境友好技术悬浮聚合工艺，以丙烯酸甲酯为主要原料，以二乙烯基苯为交联剂，通过添加第三单体苯乙烯调节树脂结构以增加载体的机械强度，在复合致孔剂存在下制备了大孔酶载体基体树脂，再经过水解制备弱酸性大孔阳离子交换树脂而得到酶载体。最后通过树脂、戊二醛及溶菌酶的相互反应制备出固化化溶菌酶。用该载体制备的固定化溶菌酶活性在3000-5000u/g之间。
具体实施方式
实施例1
一种溶菌酶固定化载体，其特征在于：包括以下按照重量份数计的原料：
油相：
丙烯酸甲酯 35份
二乙烯基苯 45份
苯乙烯 5份
二甲苯 50份
正丁醇 50份
偶氮二异丁腈 1份；
水相：
聚乙烯醇 5份
明胶 5份
氯化钠 100份
硫酸钙 15份
去离子水 1000份。
实施例2
一种溶菌酶固定化载体，其特征在于：包括以下按照重量份数计的原料：
油相：
丙烯酸甲酯 40份
二乙烯基苯 50份
苯乙烯 10份
二甲苯 60份
正丁醇 60份
偶氮二异丁腈 3份；
水相：
聚乙烯醇 10份
明胶 10份
氯化钠 200份
硫酸钙 15份
去离子水 1000份。
实施例3
一种溶菌酶固定化载体，其特征在于：包括以下按照重量份数计的原料：
油相：
丙烯酸甲酯 37份
二乙烯基苯 47份
苯乙烯 7份
二甲苯 55份
正丁醇 55份
偶氮二异丁腈 2份；
水相：
聚乙烯醇 7份
明胶 7份
氯化钠 150份
硫酸钙 15份
去离子水 1000份。
实施例4
一种溶菌酶固定化载体的制备方法，包括以下工艺步骤：
A、按照配方要求准确称取油相原料于容器中充分混合均匀，备用；按照水相配方要求，将各组分加入一具搅拌、冷凝管及加料口三口瓶内；将体系温度升至45℃，开动搅拌直至水相各组分充分混合溶解；将上述配制好的油相混合物倒入水相三口瓶内；
B、保持反应器中搅拌的速度为150转/分钟，使油相形成均匀的珠体分散在预先配制好的水相中；升温至75℃，直至珠体定型；
C、将聚合反应体系温度升到85℃，保温3个小时；将聚合反应体系升温至90℃，保温2个小时；将聚合反应体系升温至95℃，保温1个小时；将反应体系降温至20℃，滤出树脂珠体；采用乙醇对树脂进行淋洗，除去树脂的杂质风干即得到酶载体基体树脂，备用；用30%NaOH溶液250ml，于75℃水解反应6h；滤出，后处理即得酶载体。
实施例5
一种溶菌酶固定化载体的制备方法，包括以下工艺步骤：
A、按照配方要求准确称取油相原料于容器中充分混合均匀，备用；按照水相配方要求，将各组分加入一具搅拌、冷凝管及加料口三口瓶内；将体系温度升至55℃，开动搅拌直至水相各组分充分混合溶解；将上述配制好的油相混合物倒入水相三口瓶内；
B、保持反应器中搅拌的速度为200转/分钟，使油相形成均匀的珠体分散在预先配制好的水相中；升温至80℃，直至珠体定型；
C、将聚合反应体系温度升到85℃，保温4个小时；将聚合反应体系升温至90℃，保温3个小时；将聚合反应体系升温至95℃，保温2个小时；将反应体系降温至30℃，滤出树脂珠体；采用乙醇对树脂进行淋洗，除去树脂的杂质风干即得到酶载体基体树脂，备用；用30%NaOH溶液250ml，于80℃水解反应8h；滤出，后处理即得酶载体。
实施例6
一种溶菌酶固定化载体的制备方法，包括以下工艺步骤：
A、按照配方要求准确称取油相原料于容器中充分混合均匀，备用；按照水相配方要求，将各组分加入一具搅拌、冷凝管及加料口三口瓶内；将体系温度升至48℃，开动搅拌直至水相各组分充分混合溶解；将上述配制好的油相混合物倒入水相三口瓶内；
B、保持反应器中搅拌的速度为170转/分钟，使油相形成均匀的珠体分散在预先配制好的水相中；升温至77℃，直至珠体定型；
C、将聚合反应体系温度升到85℃，保温3.5个小时；将聚合反应体系升温至90℃，保温2.5个小时；将聚合反应体系升温至95℃，保温1.5个小时；将反应体系降温至25℃，滤出树脂珠体；采用乙醇对树脂进行淋洗，除去树脂的杂质风干即得到酶载体基体树脂，备用；用30%NaOH溶液250ml，于77℃水解反应7h；滤出，后处理即得酶载体。

Claims (2)

1.一种溶菌酶固定化载体，其特征在于：包括以下按照重量份数计的原料：
油相：
丙烯酸甲酯 35-40份
二乙烯基苯 45-50份
苯乙烯 5-10份
二甲苯 50-60份
正丁醇 50-60份
偶氮二异丁腈 1-3份；
水相：
聚乙烯醇 5-10份
明胶 5-10份
氯化钠 100-200份
硫酸钙 15份
去离子水 1000份。
2.根据权利要求1所述的一种溶菌酶固定化载体的制备方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：
A、按照配方要求准确称取油相原料于容器中充分混合均匀，备用；按照水相配方要求，将各组分加入一具搅拌、冷凝管及加料口三口瓶内；将体系温度升至45-55℃，开动搅拌直至水相各组分充分混合溶解；将上述配制好的油相混合物倒入水相三口瓶内；
B、保持反应器中搅拌的速度为150-200转/分钟，使油相形成均匀的珠体分散在预先配制好的水相中；升温至75-80℃，直至珠体定型；
C、将聚合反应体系温度升到85℃，保温3-4个小时；将聚合反应体系升温至90℃，保温2-3个小时；将聚合反应体系升温至95℃，保温1-2个小时；将反应体系降温至20-30℃，滤出树脂珠体；采用乙醇对树脂进行淋洗，除去树脂的杂质风干即得到酶载体基体树脂，备用；用30%NaOH溶液250ml，于75-80℃水解反应6-8h；滤出，后处理即得酶载体。
CN201611103997.9A 2016-12-05 2016-12-05 一种溶菌酶固定化载体及其制备方法 Pending CN106589202A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611103997.9A CN106589202A (zh) 2016-12-05 2016-12-05 一种溶菌酶固定化载体及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611103997.9A CN106589202A (zh) 2016-12-05 2016-12-05 一种溶菌酶固定化载体及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106589202A true CN106589202A (zh) 2017-04-26

Family

ID=58596946

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201611103997.9A Pending CN106589202A (zh) 2016-12-05 2016-12-05 一种溶菌酶固定化载体及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106589202A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106810635A (zh) * 2017-01-19 2017-06-09 中蓝晨光化工研究设计院有限公司 一种氨基酰化酶固定化载体及其制备方法
RU2684639C1 (ru) * 2018-06-07 2019-04-11 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный технический университет имени Н.Э. Баумана (национальный исследовательский университет)" (МГТУ им. Н.Э. Баумана) Способ удаления эндотоксинов из биологических жидкостей с помощью ковалентно иммобилизованного лизоцима в качестве лиганда
RU2694883C1 (ru) * 2018-06-07 2019-07-17 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный технический университет имени Н.Э. Баумана (национальный исследовательский университет)" (МГТУ им. Н.Э. Баумана) Способ ковалентной иммобилизации лизоцима для последующего применения иммобилизованного лизоцима для снижения бактериальной обсемененности биологических жидкостей
RU2734538C1 (ru) * 2019-12-11 2020-10-20 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный технический университет имени Н.Э. Баумана (национальный исследовательский университет)" (МГТУ им. Н.Э. Баумана) Способ сорбционного удаления целых патогенных бактериальных клеток из раствора с помощью автоклавированного иммобилизованного лизоцима
CN113046343A (zh) * 2019-12-28 2021-06-29 常州天地人和生物科技有限公司 一种溶菌酶亲和填料制备及应用方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1278534A (zh) * 2000-06-13 2001-01-03 复旦大学 荧光标记的高分子微球及其制备方法
CN1281038A (zh) * 1999-07-16 2001-01-24 中国科学院化工冶金研究所 以多元共聚物为骨架的多孔型微珠状固定化酶载体及制法
CN102443088A (zh) * 2011-09-22 2012-05-09 中国科学院过程工程研究所 一种尺寸均一的小粒径超大孔聚合物微球及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1281038A (zh) * 1999-07-16 2001-01-24 中国科学院化工冶金研究所 以多元共聚物为骨架的多孔型微珠状固定化酶载体及制法
CN1278534A (zh) * 2000-06-13 2001-01-03 复旦大学 荧光标记的高分子微球及其制备方法
CN102443088A (zh) * 2011-09-22 2012-05-09 中国科学院过程工程研究所 一种尺寸均一的小粒径超大孔聚合物微球及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
徐小冰: "GMA-ST共聚物的制备及其固定化米曲霉β-半乳糖苷酶的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106810635A (zh) * 2017-01-19 2017-06-09 中蓝晨光化工研究设计院有限公司 一种氨基酰化酶固定化载体及其制备方法
RU2684639C1 (ru) * 2018-06-07 2019-04-11 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный технический университет имени Н.Э. Баумана (национальный исследовательский университет)" (МГТУ им. Н.Э. Баумана) Способ удаления эндотоксинов из биологических жидкостей с помощью ковалентно иммобилизованного лизоцима в качестве лиганда
RU2694883C1 (ru) * 2018-06-07 2019-07-17 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный технический университет имени Н.Э. Баумана (национальный исследовательский университет)" (МГТУ им. Н.Э. Баумана) Способ ковалентной иммобилизации лизоцима для последующего применения иммобилизованного лизоцима для снижения бактериальной обсемененности биологических жидкостей
RU2734538C1 (ru) * 2019-12-11 2020-10-20 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный технический университет имени Н.Э. Баумана (национальный исследовательский университет)" (МГТУ им. Н.Э. Баумана) Способ сорбционного удаления целых патогенных бактериальных клеток из раствора с помощью автоклавированного иммобилизованного лизоцима
CN113046343A (zh) * 2019-12-28 2021-06-29 常州天地人和生物科技有限公司 一种溶菌酶亲和填料制备及应用方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106589202A (zh) 一种溶菌酶固定化载体及其制备方法
CN108816287B (zh) Uio-66原位固载羧基功能化离子液体复合材料及其制备和应用
CN101773852B (zh) 一种负载型离子液体催化剂、其制备方法及其应用
US20120237606A1 (en) Hollow particulate body
CN102872913B (zh) 一种具有催化性能的磺酸型聚苯乙烯微球的制备方法
CN110256698B (zh) 一种纤维素溶剂及其制备方法和用途
CN102943069A (zh) 共固定化葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶微球及其在生产葡萄糖酸或其盐中的应用
CN105131168A (zh) 一种大孔甲基丙烯酸羟乙酯树脂及其制备方法
CN104356258B (zh) 稀土元素改性脱醛树脂的制备方法及其在乙二醇精制中的应用
CN108236968B (zh) 一种含介孔/大孔的氧化铝载体及其制备方法
CN101284225A (zh) 一种波聚合技术制备疏水性聚合物整体柱材料的方法
CN105457610A (zh) 一种乙二醇脱醛吸附剂的制备
CN110483678B (zh) 一种用于山梨醇脱水制备异山梨醇的催化剂及其制备方法和应用
CN104086692B (zh) 一种作为固体催化剂基体的特大孔强酸树脂及其制备方法
CN104788609A (zh) 一种高交联单分散含有环氧基团的聚合物微球及其制备方法
CN103709010B (zh) 一种由环己烯、羧酸和水反应合成环己醇方法
CN113198535A (zh) 一种陶瓷表面负载型催化填料的制备方法
CN101759807B (zh) 应用酸性阳离子交换树脂制备纳米晶体纤维素i的方法
CN101445573A (zh) 单分散性聚苯乙烯白球的制备方法
CN111925469B (zh) 一种高纯水制备专用树脂的方法
CN106632860A (zh) 一种葡聚糖基晶胶微球分离介质及其制备方法
CN109694440A (zh) 一种新型大孔弱酸阳离子交换树脂及其制备方法
CN106244574A (zh) 一种氨基酰化酶固定化载体及其制备方法
CN106632804A (zh) 绿色阳离子交换树脂制备方法
CN104497205A (zh) 一种用于纯化蛋白质的分离介质及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20170426

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication