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CN106045679A - 一种花生专用的有机复合生物肥的制备方法 - Google Patents

一种花生专用的有机复合生物肥的制备方法 Download PDF

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CN106045679A CN201610374545.8A CN201610374545A CN106045679A CN 106045679 A CN106045679 A CN 106045679A CN 201610374545 A CN201610374545 A CN 201610374545A CN 106045679 A CN106045679 A CN 106045679A
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崔国臣
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DALIAN SANKE BIO-ENGINEERING Co Ltd
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Abstract

本发明公开了一种花生专用的有机复合生物肥，其通过将粉碎的秸秆和牛粪作为固体有机物料，再添加5‰比例的具有特定腐熟功效的有机物料腐熟剂并加适量的水，与有机物料混合后，保持含水量为60％左右，自然室外温度下发酵5‑10天腐熟形成初肥。再添加适当比例的各类营养元素与发酵物料混合均匀后，添加4‰比例的花生专用的促生长复合菌剂均匀混合后获得的生物肥料。本发明解决了单纯施用化肥、普通有机肥、农家肥以及纯微生物菌肥所存在的种种弊端，并充分结合了花生各个时期的生长特点及对养分的需求，注意调节其营养生长与生殖生长的矛盾，是一种尤其适用于花生生长、高效、优质的有机复合生物肥。在花生生产种植方面具有较大的应用前景。

Description

一种花生专用的有机复合生物肥的制备方法
技术领域
本发明涉及一种有机复合生物肥及其制备方法，尤其适用于花生，属于农业生物有机肥制备的技术领域。
背景技术
目前我国化肥年使用量在一亿三千万吨左右，广大农民一直以来都是使用化肥，然而长期使用化肥产生的弊端随之而来，土地板结、化学元素残留、环境污染等等一系列问题浮出水面。化肥已经不能满足可持续发展的需要，更不能成为绿色农业的支柱，各国都在寻找对策。生物有机肥就此而诞生，成为化肥的第二次革命。生物有机肥是指特定功能微生物与主要以动植物残体(如畜禽粪便、农作物秸秆等)为来源并经无害化处理、腐熟的有机物料复合而成的一类兼具微生物肥料和有机肥效应的肥料。
而花生大多种植在山丘砂砾土、平原冲积砂土和南方红黄壤，这些土壤质地偏砂，结果不良，肥力较底，单纯施用化肥已不能够满足花生的营养需求，应增施生物有机菌肥培土改土，才能获得优质高产。花生是豆科作物，它有根瘤，花生根瘤菌具有很强的固氮能力。实验表明，花生在生长过程中要注重调节氮、磷、钾的适宜比例，且南北方存在一定的差异。此外，花生是喜钙作物，对钙的吸收量特别大。
发明内容
本发明所述的花生专用的有机复合生物肥是指利用微生物技术，选配具有特定腐熟功能的菌种制成菌剂，用此菌剂将固体有机物料发酵成初肥，再按适宜的比例添加大量元素、微量元素等，再配以花生专用促生长复合菌剂所制成的肥料。本发明产品充分利用了具有腐熟功能菌种的特性，将各类废弃的固体有机物料发酵腐熟成肥料，变废为宝，节省资源，大大减少了环境污染；又添加花生专用的促生长菌剂，此促生长复合菌剂是经查阅大量的资料，进行研究总结，根据实际要求选择几种针对花生有特殊功效的有益微生物，然后通过实际反复实验，最后确定各微生物的最佳比例，保证花生各阶段的营养需求。通过各菌种之间的相互作用，起到刺激植物生长、缓解土地板结、改良土壤生态环境、防病抗病等作用，从而达到增产、高产的目的。本发明解决了单纯施用化肥、普通有机肥、农家肥以及纯微生物菌肥所存在的种种弊端。
本发明产品所选用腐熟菌剂，其采用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CICC10088，米曲霉(Aspergillus niger)CICC2436，白腐菌(Phanerochaetechrysosporium)ACCC30414、里氏木霉(Trichoderma reesei)ACCC30449、嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)CICC10207等具有特殊腐熟功效的菌种，按适当的比例复合发酵而成的微生物菌剂。所选用各菌种均能够产生纤维素酶、木质素酶、半纤维素酶、蜡质素酶、果胶酶等多种生物酶，通过中温菌和耐高温菌的协同作用，快速将各类废弃的有机物料发酵腐熟成肥料，变废为宝，节省资源，大大减少了环境污染。
本发明所选用花生专用的促生长复合菌剂，其含有大量的对花生生长发育有特殊功效的有益微生物，其采用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ACCC 01183、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)CGMCC1.937、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)ACCC 10010、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CICC10037、胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)CGMCC 1.153等菌种发酵液混合后作为混合菌剂，经再次发酵而制备的微生物复合菌剂。本发明选取各菌种是经查阅大量的文献资料，进行研究总结，根据实际要求选择几种针对花生生长发育有特殊功效的有益微生物，然后通过实际反复实验，最后确定各微生物的最佳比例，从而保证花生各阶段的营养需求。
具体的本发明所述花生专用的有机复合生物肥的制备方法，该方法包括如下步骤：
(一)有机物料腐熟剂的制备
将菌种数量分别达到108个/mL以上的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CICC10088，米曲霉(Aspergillus niger)CICC2436，白腐菌(Phanerochaetechrysosporium)ACCC30414，里氏木霉(Trichoderma reesei)ACCC30449，嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)CICC10207的菌种发酵液按1.5～2.0：0.8～1.3：1.5～2.0：0.8～1.3：0.8～1.3的比例混合均匀后，接种于盛有复合菌剂培养基A的发酵罐中，接种量为复合菌剂培养基A总体积的5％，30℃下培养4～7天，使发酵液中总菌数达到108个/mL，即得到有机物料腐熟剂；
所述复合菌剂培养基A配方为：玉米面0.5～1.5g/L、玉米秸秆粉15～17g/L、麸皮0.2～0.4g/L、豆饼粉0.2～0.4g/L、Vogel’s母液4mL/100mL，pH值6.0～8.0；
步骤(一)的具体制备过程为：
1.菌种活化：将所述各菌种接于斜面培养基上；枯草芽孢杆菌28～32℃，pH为7.2～7.4，培养时间为1～3天；米曲霉培养温度25～28℃，pH为6.0～6.5，培养时间为4～7天；白腐菌培养温度25～28℃，培养时间为4～7天；嗜热脂肪地芽孢杆菌培养温度55～60℃，pH7.0-7.2，培养2-3天；
2.一级菌种培养：将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基pH为6.0～8.0，锥形瓶放入摇床振荡培养，温度为30℃，振荡24～48h；采用血球计数板计数，菌液中菌种数量分别达到108个/mL；
3.二级发酵：将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的1000mL锥形瓶中，培养基pH6.0～8.0，放入摇床振荡，温度为30℃，振荡48～72h；从而获得菌种数量分别达到108个/mL以上的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CICC10088，米曲霉(Aspergillus niger)CICC2436，白腐菌(Phanerochaete chrysosporium)ACCC30414，里氏木霉(Trichodermareesei)ACCC30449，嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)CICC10207。
所述斜面培养基配方为：
1.枯草芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10g，NaCl5.0g，琼脂20.0-20.5g，pH7.2-7.4，牛肉浸液的制备：瘦牛肉洗净，切碎，称取550g浸泡于1375mL水中，浸泡一夜，过滤，过滤分装后0.6kgf/cm2 40min备用。
2.米曲霉采用的斜面培养基配方为：5 0Be麦芽汁琼脂，5 0Be麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH。
3.白腐菌的斜面培养基配方为：PDA培养基，取去皮的马铃薯200克,切成小块,加水1000毫升煮沸30分钟滤去马铃薯块,将滤液补足至1000毫升,加葡萄糖20克,琼脂15克,溶化后分装,15磅灭菌30分钟；自然pH。
4.里氏木霉的斜面培养基配方：同白腐菌。
所述液体培养基为斜面培养基不加琼脂即可。
5.嗜热脂肪地芽孢杆菌斜面培养基配方：营养肉汁琼脂：蛋白胨10.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.0。
(二)混拌、发酵
将步骤(一)制备好的有机物料腐熟剂按发酵有机物料总质量的5‰比例混合，再兑入适量的水，使总水分控制在60％左右，在发酵池经过5-10天发酵，即制得初肥；
所述发酵具体为：将混合搅拌均匀的发酵有机物料放进发酵设施，压实填满排去空气，发酵池顶部覆盖一层塑料薄膜，上盖密封发酵、适时翻垛，翻堆时补充水分，将总水分控制在60％左右，原料手握成团，指缝有水但不滴，而松手即散为好。
在优选的技术方案中，步骤(二)的发酵时间是指：一般夏天4-5天，春秋6-7天，冬季10天。
(三)深加工
将初肥进行粉碎、烘干，按初肥质量百分比，具体添加如下营养元素：
氮3.0-5.0％、磷2.5-3.5％、钾1.0-3.0％；钙5.0-10.0％；腐植酸类肥料5.0～10.0％；
优选情况下，添加营养元素的比例为：
a.大量元素(氮、磷、钾)的添加比例：氮4.0％、磷3.2％、钾2.0％
b.中量元素(钙)的添加比例：钙6.0％。
c.腐殖酸的添加比例：10.0％。
(四)花生专用促生长复合菌剂的制备
将菌种数量分别达到108个/mL以上的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ACCC01183、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)CGMCC1.937、巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)ACCC10010、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CICC10037、胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1.153的菌种发酵液，按(20～30％)：(10～20％)：(10～20％)：(5～10％)：(30～40％)的比例混合均匀后作为混合菌剂，接种于盛有复合菌剂培养基B的发酵罐中，接种量为复合菌剂培养基B总体积的5％，复合菌剂培养基B的pH 6.5～7.5，30℃下培养4～7天，使发酵液中总菌数达到6～10×108个/mL，即得到花生专用微生物复合菌剂，pH为6.8，总有效活菌数为9×108个/mL；
所述复合菌剂培养基B的配方为：玉米粉15～18g/100mL、豆粨粉5～8g/100mL、酵母膏0.1～0.2g/100mL、KH2PO4 0.2～2g/100mL、K2HPO4 0.5～2g/100mL、MgSO4·7H2O 0.001～0.02g/100mL、NaCl 0.5～0.8g/100mL、(NH4)2SO4 0.001～0.01g/100mL，其余为蒸馏水；
所述步骤(四)的具体过程如下：
1.接种：将所述各菌种(胶质芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌)分别接于斜面培养基上；胶质芽孢杆菌(钾细菌)培养温度25～35℃，pH为7.5～8.0，培养时间为5天；短小芽孢杆菌培养温度为25～30℃，pH7.0-7.2，培养时间为3天；地衣芽孢杆菌培养温度25～30℃，pH为7.0～8.0，培养时间为5天；巨大芽孢杆菌为27～37℃，pH为6.5～7.5，培养时间为4天；枯草芽孢杆菌培养温度27～37℃，pH为6.5～7.5，培养时间为4天；
2.一级菌种培养：将所述步骤1制备的菌种分别按接种环一环的量接种于盛有相应液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基pH为6.5～7.5，锥形瓶放入摇床振荡，温度为30℃，振荡24～48h；采用血球计数板计数，菌液中菌种数量分别达到108个/mL；
3.二级发酵：将所述步骤2制备的菌种分别按5％接种于盛有液体培养基的1000mL锥形瓶中，培养基pH 6.5～7.5，放入摇床振荡，温度为30℃，振荡48～72h；使菌种数量分别达到108个/mL以上，从而制得菌种数量分别达到108个/mL以上的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)ACCC 01183、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)CGMCC1.937、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)ACCC 10010、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CICC10037、胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1.153的菌种发酵液。
所述花生微生物复合菌剂制备过程中用到的斜面培养基配方为：
1.胶质芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为：KH2PO4 0.06g、MgSO4·7H2O 0.05g、
CaSO4·5H2O 0.004g、蛋白胨5g、玉米浆(50％干重)2.5g、乳糖15g、NaCl 4g、蒸馏水1000mL、琼脂25g、pH 7.1；
2.地衣芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为：
蛋白胨10.0g，牛肉浸取物3.0g，氯化钠5.0g，、琼脂15g、蒸馏水1000mL、pH 7.0；
3.巨大芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为：牛肉膏3g、蛋白胨5g、琼脂15g、NaCl5g、蒸馏水1000mL、pH 7.0；
4.枯草芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为：牛肉膏10g、蛋白胨10g、NaCl 5g、葡萄糖10g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH 7.0；
5.短小芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为：蛋白胨10.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.0。
所述液体培养基配方为斜面培养基不加琼脂制得。
(五)按步骤(三)深加工所获得的发酵物料总质量的3～5‰比例添加步骤(四)获得的花生专用的促生长复合菌剂获得终产品，将物料混合均匀后，经造粒机造粒或成粉，检测合格后，包装入库。
对于上述技术方案，在优选的情况下，步骤(一)所述复合菌剂培养基A配方为：玉米面0.5g/L、玉米秸秆粉15g/L、麸皮0.25g/L、豆饼粉0.25g/L、Vogel’s母液4mL/100mL，pH8.5。
对于上述技术方案，在优选的情况下，步骤(一)所述枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)CICC10088，米曲霉(Aspergillus niger)CICC2436，白腐菌(Phanerochaetechrysosporium)ACCC30414，里氏木霉(Trichoderma reesei)ACCC30449，嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)CICC10207的菌种发酵液按2：1：2：1:1的比例混合均匀。
对于上述技术方案，在优选的情况下，步骤(二)所述发酵有机物料为粉碎的玉米秸秆与动物粪便按0.5～1.5：0.2～1.0质量比混合，所述动物粪便通常为鸡粪或牛粪。
对于上述技术方案，在优选的情况下，步骤(三)所述复合菌剂培养基B的配方为：玉米粉16g/100mL、豆粨粉7g/100mL、酵母膏0.1g/100mL、KH2PO4 1g/100mL、K2HPO4 1g/100mL、MgSO4·7H2O 0.01g/100mL、NaCl 0.6g/100mL、(NH4)2SO4 0.01g/100mL，其余为蒸馏水。
本发明的技术方案是经过近几年的不懈努力，结合花生各个时期的生长特点及对养分的需求，注意调节其营养生长与生殖生长的矛盾，最终研制出一种高效优质的生物有机肥。其综合运用了微生物技术、化肥工业和农业技术等最新成果，优先制备了一种高效的富含有机质、N·P·K营养元素和某些微量元素、植物生长调节剂等物质有机结合起来，由特定工艺最终形成了以有机质为主体的营养合理、N·P·K比例适当的颗粒状营养源。该种肥料不仅具有高利用率、肥效期长的优点，而且具有改良土壤、提高农作物品质，增强作物抗逆性，增加产量，减少污染，刺激作物生长发育等特点，省时省工，具有良好的社会效益和经济效益。
有益效果
本发明所述的花生专用的生物有机肥是选用具有特定具有腐熟功能的菌种制成菌剂，用此菌剂将有机固体物料发酵腐熟成初肥，再按适宜的比例添加大量元素(氮、磷、钾)、中量元素(钙)、腐殖酸等，再配以功效相应的促进花生生长的菌剂所制成的肥料。腐熟剂中含有大量的枯草芽孢杆菌、米曲霉、里氏木霉、白腐菌、嗜热脂肪地芽孢杆菌，能够产生纤维素酶、木质素酶、半纤维素酶、蜡质素酶、果胶酶等多种生物酶，通过中温菌和耐高温菌的协同作用，快速将各类废弃的固体有机物料发酵腐熟成肥料，变废为宝，节省资源，大大减少了环境污染；又添加各类营养元素及花生专用的促生长复合菌剂，通过对花生有特殊功效的有益微生物枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、产朊假丝酵母、大豆根瘤菌、胶质芽孢杆菌、植物乳杆菌各菌种之间的相互作用，起到刺激植物生长、缓解土地板结、改良土壤生态环境、增加土壤的腐殖质及有益微生物菌群、防病抗病等作用，从而达到增产、高产的目的。
具体实施方式
本发明的下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例中所用的生物材料均可以由商业途径获得。
实施例一：花生专用有机复合生物肥的制备
本发明花生专用的有机复合生物肥产品是指利用微生物技术，选配具有特定腐熟功能的菌种制成菌剂，用此菌剂将有机固体物料发酵腐熟成初肥，再配以各种营养元素及花生专用的促生长复合菌剂所制成的生物肥料。其具体实施方式如下：
(一)有机物料腐熟剂的制备
采用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CICC10088，米曲霉(Aspergillusniger)CICC2436，白腐菌(Phanerochaete chrysosporium)ACCC30414，里氏木霉(Trichoderma reesei)ACCC30449，嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)CICC10207等具有高效腐熟作用的菌种按适当的比例复合发酵而成的腐熟菌剂。
1.菌种活化：将所述各菌种接于斜面培养基上；枯草芽孢杆菌28～32℃，pH为7.2～7.4，培养时间为1～3天；米曲霉培养温度25～28℃，pH为6.0～6.5，培养时间为4～7天；白腐菌培养温度25～28℃，培养时间为4～7天；嗜热脂肪地芽孢杆菌培养温度55～60℃，pH7.0-7.2，培养2-3天；
2.一级菌种培养：将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基pH为6.0～8.0，锥形瓶放入摇床振荡培养，温度为30℃，振荡24～48h；采用血球计数板计数，菌液中菌种数量分别达到108个/mL；
3.二级发酵：将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的1000mL锥形瓶中，培养基pH6.0～8.0，放入摇床振荡，温度为30℃，振荡48～72h；使菌种数量分别达到108个/mL以上，将各菌种按所述菌种的质量百分比混合；
4.三级发酵：分别将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CICC10088，米曲霉(Aspergillus niger)CICC2436，白腐菌(Phanerochaete chrysosporium)ACCC30414,里氏木霉(Trichoderma reesei)ACCC30449，嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)CICC10207的菌种发酵液按2：1：2：1：1的比例混合均匀后，接种于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂培养基pH 6.0～8.0，接种量为5％，30℃下培养4～7天，使发酵液中菌数达到108个/mL，即得到有机物料秸秆腐熟剂。
所述斜面培养基配方为：
1.枯草芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为：普通琼脂：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10g，NaCl5.0g，琼脂20.0-20.5g，pH7.2-7.4，牛肉浸液的制备：瘦牛肉洗净，切碎，称取550g浸泡于1375mL水中，浸泡一夜，过滤，过滤分装后0.6kgf/cm240min备用。
2.米曲霉采用的斜面培养基配方为：5°Be麦芽汁琼脂，5°Be麦芽汁1.0L，琼脂15.0g，自然pH。
3.白腐菌的斜面培养基配方为：PDA培养基，取去皮的马铃薯200克，切成小块，加水1000毫升煮沸30分钟滤去马铃薯块，将滤液补足至1000毫升，加葡萄糖20克，琼脂15克，溶化后分装，15磅灭菌30分钟。自然pH。
4.里氏木霉的斜面培养基配方为：同白腐菌配方。
5.嗜热脂肪地芽孢杆菌斜面培养基配方：营养肉汁琼脂：蛋白胨10.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.0。
所述液体培养基为斜面培养基不加琼脂即可。
所述复合菌剂培养基配方为：玉米面0.5g/L、玉米秸秆粉15g/L、麸皮0.25g/L、豆饼粉0.25g/L、Vogel’s母液4mL/100mL，pH值8.5。
(二)混拌、发酵
准备500kg粉碎的玉米秸秆与200kg牛粪作为发酵的原始有机物料，将制备好的有机物料腐熟剂按发酵有机物料总质量的5‰兑入适量的水中，与有机物料均匀混拌，原料手握成团，指缝有水但不滴，而松手即散为好(总水分在60％左右)。将混合搅拌均匀的发酵有机物料放进发酵设施，压实填满排去空气，发酵池顶部覆盖一层塑料薄膜，上盖密封发酵、适时翻垛，翻堆时补充水分，将总水分控制在60％左右。经过10天发酵，即制得初肥。
(三)各类营养元素的添加
物料发酵完成后，按肥剂型要求进行粉碎、烘干，而后添加各类营养元素，包括大量元素(氮、磷、钾)、中量元素(钙)，按发酵物料质量计算，具体添加比例如下：
a.大量元素(氮、磷、钾)的添加比例：氮4.0％、磷3.2％、钾2.0％。
b.中量元素(钙)的添加比例：钙6.0％。
c.腐殖酸铵的添加比例：10％。
(四)花生专用促生长复合菌剂制备及添加
采用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ACCC 01183、短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)CGMCC1.937、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)ACCC 10010、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CICC10037、胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)CGMCC1.153等具有特殊功效的菌种发酵液混合后作为混合菌剂，经再次发酵而制备的微生物复合菌剂。
所述的花生微生物复合菌剂制备步骤如下：
1.接种：将所述各菌种(胶质芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌)分别接于斜面培养基上；胶质芽孢杆菌(钾细菌)培养温度25～35℃，pH为7.5～8.0，培养时间为5天；短小芽孢杆菌培养温度为25～30℃，pH7.0-7.2，培养时间为3天；地衣芽孢杆菌培养温度25～30℃，pH为7.0～8.0，培养时间为5天；巨大芽孢杆菌为27～37℃，pH为6.5～7.5，培养时间为4天；枯草芽孢杆菌培养温度27～37℃，pH为6.5～7.5，培养时间为4天；
2.一级菌种培养：将所述步骤1制备的菌种分别按接种环一环的量接种于盛有相应液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基pH为6.5～7.5，锥形瓶放入摇床振荡，温度为30℃，振荡24～48h；采用血球计数板计数，菌液中菌种数量分别达到108个/mL；
3.二级发酵：将所述步骤2制备的菌种分别按5％接种于盛有液体培养基的1000mL锥形瓶中，培养基pH 6.5～7.5，放入摇床振荡，温度为30℃，振荡48～72h；使菌种数量分别达到108个/mL以上，从而制得胶质芽孢杆菌(钾细菌)发酵液、褐色球形固氮菌发酵液、巨大芽孢杆菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液。
将各菌种按质量百分比混合后进行再次发酵：胶质芽孢杆菌(钾细菌)发酵液35％、巨大芽孢杆菌发酵液25％、地衣芽孢杆菌发酵液10％、枯草芽孢杆菌发酵液30％。
4.三级发酵：将所述步骤3制备的混合后的菌液接种于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂培养基pH 6.5～7.5，接种量为复合菌剂培养基总质量的5％，30℃下培养4～7天，使发酵液中菌数达到6～10×108个/mL，即得到花生专用微生物复合菌剂，pH为5.0，菌数含量均达到109个/mL。
所述斜面培养基配方为：
1.胶质芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为：KH2PO4 0.06g、MgSO4·7H2O 0.05g、
CaSO4·5H2O 0.004g、蛋白胨5g、玉米浆(50％干重)2.5g、乳糖15g、NaCl 4g、蒸馏水1000mL、琼脂25g、pH 7.1；
2.地衣芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为：蛋白胨10.0g，牛肉浸取物3.0g，氯化钠5.0g，、琼脂15g、蒸馏水1000mL、pH 7.0；
3.巨大芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为：牛肉膏3g、蛋白胨5g、琼脂15g、NaCl5g、蒸馏水1000mL、pH 7.0；
4.枯草芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为：牛肉膏10g、蛋白胨10g、NaCl 5g、葡萄糖10g,琼脂15g，蒸馏水1000mL,pH 7.0；
5.短小芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为：蛋白胨10.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.0。
所述液体培养基配方为斜面培养基不加琼脂制得。
所述复合菌剂培养基配方为：玉米粉2～20g/100mL、豆粨粉1～10g/100mL、酵母膏0.05～0.2g/100mL、KH2PO4 0.2～2g/100mL、K2HPO4 0.5～2g/100mL、MgSO4·7H2O 0.001～0.02g/100mL、NaCl 0.5～0.8g/100mL、(NH4)2SO4 0.001～0.01g/100mL，其余为蒸馏水。
按发酵物料总质量的4‰比例添加花生专用的促生长复合菌剂，再次混合均匀。
(五)造粒或成粉，检测、包装、入库
将物料混合均匀后，经造粒机造粒或成粉，检测合格后，包装入库。
实施例二：花生专用有机复合生物肥在花生上的应用效果
采用本发明制备的花生专用有机复合生物肥在花生种植中应用的效果试验：
1.试验目的
花生专用有机复合生物肥是大连三科生物工程有限公司最新研制的针对花生生长有特殊功效的生物肥料，为明确其对花生生长发育的影响，2015年4-9月份我公司针对花生进行了田间小区试验。
2.试验条件：试验地点为大连市金州区，地块具有代表性。地势平坦，肥力中等，前茬作物为花生。
3.试验材料与方法
供试品种：花生(花育22号)
试验方法：试验设置为两组，采用随机排列，分别三次重复，每个试验小区面积66.7平方米。
所述的两组处理：
①对照组，常规施肥；②试验组，严格按照有机复合生物肥产品使用说明施用。
经实际调查，2015年花生生育期自然条件较好，无特殊恶劣天气，有利于花生的生长。
4.调查记录方法
记录花生成熟期在各个小区随机连续挑选10株，测主茎高、侧枝长、总分枝数，单株双饱果数、百果数和小区产量等生产指标。
5.结果与分析
5.1不同施肥处理对花生营养性状的影响
花生出苗后，到第四片真叶出现之前，各个处理的花生长势基本相同；真叶出现以后，试验组的花生长势明显好于对照，直至果实成熟时。数据结果见表1：
表1.不同施肥处理对花生营养性状的影响
从表1可以看出，试验组花生各项性状明显优于对照组，叶片深绿色，株型好，既不徒长又有足量的有效分枝，处理组的侧枝长和有效分枝数42.3cm和8.9条，比对照组多6.9cm和0.9条，收获期观察，处理组的主茎绿色叶片明显多于对照组，这为果实膨大需求充足的光合作用产物提供了保障。
5.2不同施肥处理对花生产量性状的影响
表2.不同施肥处理对花生产量性状的影响
从表2可以看到，处理组花生单株双饱果数比对照组高出3.5个，百果重增加了24.7g，出仁率高了4.6％，表明施用花生专用有机复合生物肥能够提高花生的产量和品质。
5.3不同处理对花生果实产量经济学性状的影响
表3.不同施肥处理对花生果实产量经济学性状的影响
处理 产量(kg/亩) 增产量(kg/亩) 净增产率(％) 净增产(元/亩)
对照组 409 83 20.2 332
处理组 492 -- -- --
从表3可以看出，施用花生专用有机复合生物肥花生产量明显增加，比对照组增产83kg/亩，增产率为20.2％，按花生价格4元/kg算,每亩净增收332元,经济效益极其可观。
6.结论
花生专用有机复合生物肥在花生上的应用效果显著，在花生营养性状、生长性状及产量性状方面都表现出明显的优势，大大提高了经济效益。整个生长期长势整齐，叶色浓绿厚实。因此，花生专用有机复合生物肥在花生上的试验效果证明，该产品可在花生生产中扩大示范面积，并进行大面积推广使用。

Claims (6)

1.一种花生专用的有机复合生物肥，其特征在于，
(一)有机物料腐熟剂的制备
将菌种数量分别达到108个/mL以上的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CICC10088，米曲霉(Aspergillus niger)CICC2436，白腐菌(Phanerochaete chrysosporium)ACCC30414、里氏木霉(Trichoderma reesei)ACCC30449，嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)CICC10207的菌种发酵液按1.5～2.0：0.8～1.3：1.5～2.0：0.8～1.3:0.8～1.3的体积比混合均匀后，接种于盛有复合菌剂培养基A的发酵罐中，接种量为复合菌剂培养基A总体积的5％，30℃下培养4～7天，使发酵液中总菌数达到108个/mL，即得到有机物料腐熟剂；
所述复合菌剂培养基A配方为：玉米面0.5～1.5g/L、玉米秸秆粉15～17g/L、麸皮0.2～0.4g/L、豆饼粉0.2～0.4g/L、Vogel’s母液4mL/100mL，pH值6.0～8.0；
(二)混拌、发酵
将步骤(一)制备好的有机物料腐熟剂按发酵有机物料总质量的5‰比例混合，再兑入适量的水，使总水分控制在60％左右，在发酵池经过5-10天发酵，即制得初肥；
(三)深加工
将初肥进行粉碎、烘干，按初肥质量百分比，具体添加如下营养元素：
氮3.0-5.0％、磷2.5-3.5％、钾1.0-3.0％；钙5.0-10.0％；腐植酸类肥料5.0～10.0％；
(四)花生专用促生长复合菌剂的制备
将菌种数量分别达到108个/mL以上的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ACCC 01183、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)CGMCC1.937、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)ACCC10010、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CICC10037、胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)CGMCC 1.153的菌种发酵液，按(20～30％)：(10～20％)：(10～20％)：(5～10％)：(30～40％)的比例混合均匀后作为混合菌剂，接种于盛有复合菌剂培养基B的发酵罐中，接种量为复合菌剂培养基B总体积的5％，复合菌剂培养基B的pH 6.5～7.5，30℃下培养4～7天，使发酵液中总菌数达到6～10×108个/mL，即得到花生专用微生物复合菌剂，pH为6.8，总有效活菌数为9×108个/mL；
所述复合菌剂培养基B的配方为：玉米粉15～18g/100mL、豆粨粉5～8g/100mL、酵母膏0.1～0.2g/100mL、KH2PO4 0.2～2g/100mL、K2HPO4 0.5～2g/100mL、MgSO4·7H2O 0.001～0.02g/100mL、NaCl 0.5～0.8g/100mL、(NH4)2SO4 0.001～0.01g/100mL，其余为蒸馏水；
(五)按步骤(三)深加工所获得的发酵物料总质量的3～5‰比例添加步骤(四)获得的花生专用的促生长复合菌剂获得终产品。
2.根据权利要求1所述的花生专用的有机复合生物肥的制备方法，其特征在于，步骤(一)所述复合菌剂培养基A配方为：玉米面0.5g/L、玉米秸秆粉15g/L、麸皮0.25g/L、豆饼粉0.25g/L、Vogel’s母液4mL/100mL，pH 7.2。
3.根据权利要求1所述的花生专用的有机复合生物肥的制备方法，其特征在于，步骤(一)所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CICC10088，米曲霉(Aspergillus niger)CICC2436，白腐菌(Phanerochaete chrysosporium)ACCC30414，里氏木霉(Trichodermareesei)ACCC30449，嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)CICC10207的菌种发酵液按2：1：2：1:1的比例混合均匀。
4.根据权利要求1所述的花生专用的有机复合生物肥的制备方法，其特征在于，步骤(二)所述发酵有机物料为粉碎的玉米秸秆与动物粪便按0.5～1.5:0.2～1.0质量比混合。
5.根据权利要求1所述的花生专用的有机复合生物肥的制备方法，其特征在于，步骤(三)所述营养元素为氮4.0％、磷3.2％、钾2.0％；钙6.0％；腐植酸类肥料10.0％，腐植酸类肥料为腐植酸铵或者腐植酸钾。
6.根据权利要求1所述的花生专用的有机复合生物肥的制备方法，其特征在于，步骤(三)所述复合菌剂培养基B的配方为：玉米粉16g/100mL、豆粨粉7g/100mL、酵母膏0.1g/100mL、KH2PO4 1g/100mL、K2HPO4 1g/100mL、MgSO4·7H2O 0.01g/100mL、NaCl 0.6g/100mL、(NH4)2SO4 0.01g/100mL，其余为蒸馏水。
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