CN105974016B - 一种同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，采用高效液相色谱串联质谱技术检测经预处理的校正标样和经预处理的血浆样品，利用内标法定量，以福沙匹坦和阿瑞匹坦校正标样的浓度为X轴，福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标的峰面积比值为Y轴，建立标准曲线方程，将血浆样品中福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标峰面积的比值代入标准曲线方程中，计算福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度。本发明方法快速、准确、灵敏度高、特异性强、操作简便，适合于同时测定血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度。

Description

一种同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，涉及体内药物的分析测定方法，具体涉及同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法。

背景技术

阿瑞匹坦(Aprepitant)口服制剂是美国FDA批准的首个P物质/NK-1受体拮抗剂。在临床上，阿瑞匹坦与其他止吐药联用可以预防抗癌药及化疗药引起的急性和延迟性恶心、呕吐。但是，对于有严重呕吐症状的病人来说，连续服用阿瑞匹坦制剂难以实现。福沙匹坦双葡甲胺(Fosaprepitant dimeglumine)是阿瑞匹坦(Aprepitant)水溶性的前体药物，静滴后能在体内能迅速转化为阿瑞匹坦。因此，同时测定体内福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度，评价这两个化合物在机体内的药代动力学过程，对于福沙匹坦制剂的研发、评价其质量有至关重要的作用。

由于福沙匹坦和阿瑞匹坦性质差异大，且福沙匹坦中特殊的磷酸基团结构，目前测定生物样品中这两种化合物的方法为：分别用不同的方法提取分离并测定。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，采用高效液相色谱串联质谱技术检测经预处理的校正标样和经预处理的血浆样品，利用内标法定量，以福沙匹坦和阿瑞匹坦校正标样的浓度为X轴，福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标的峰面积比值为Y轴，建立标准曲线方程，将血浆样品中福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标峰面积的比值代入标准曲线方程中，计算福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度，具体色谱条件为：

(1)高效液相色谱条件：

流动相A：10mM乙酸铵和0.02g/100mL EDTA水溶液；

流动相B：乙腈；

色谱柱：Waters XTerra MS C18，2.1×50mm，3.5μm；

采用梯度洗脱方式，见表1；

柱温：30℃；

进样量5μL；

表1流动相梯度洗脱参数

表2福沙匹坦、阿瑞匹坦和内标的质谱参数

(2)质谱条件：采用ESI离子源、正离子MRM模式检测，离子源参数如下：CAD：4；CUR：10；GS1：60；GS2：50；IS：5000；TEM：600；主要化合物其他相关参数见表2。

其中，所述的血浆为人或动物的血浆。

其中，所述的经预处理的血浆样品按照如下方法制备得到：取血浆样品100μL，加入甲醇和稀释液各10μL，加入内标0.999μg·mL^-1格列苯脲30μL，加入乙腈300μL，涡旋1min混匀，12000rmp 10min，4℃离心，吸取上清液，即得。

其中，校正标样按如下方法制备得到：

精密称取10.89mg福沙匹坦双葡甲胺对照品至10mL容量瓶中，加入稀释液定容至刻度，混匀得到0.666mg·mL^-1福沙匹坦标准曲线储备液；精密量取适量储备液以稀释液稀释至浓度为100μg·mL^-1福沙匹坦溶液；再以稀释液依次稀释，配成浓度分别为0.200μg·mL^-1、0.400μg·mL^-1、1.00μg·mL^-1、2.50μg·mL^-1、5.00μg·mL^-1、20.0μg·mL^-1和50.0μg·mL^-1的福沙匹坦标准曲线工作液，于-20℃冰箱中保存备用；

精密称取12.16mg阿瑞匹坦对照品至10mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，混匀得到1.216mg·mL^-1阿瑞匹坦标准曲线储备液，于-20℃冰箱中保存备用；精密量取适量储备液以甲醇稀释至浓度为50.0μg·mL^-1阿瑞匹坦溶液；再以甲醇液依次稀释，配成浓度分别为0.100μg·mL^-1、0.200μg·mL^-1、0.400μg·mL^-1、1.00μg·mL^-1、2.50μg·mL^-1、10.0μg·mL^-1和20.0μg·mL^-1的阿瑞匹坦标准曲线工作液，于-20℃冰箱中保存备用；

分别精密吸取10μL各浓度的福沙匹坦和阿瑞匹坦标准曲线工作液置于1.5mL EP管中，向其中分别加入100μL空白血浆，涡旋混匀，即得含福沙匹坦和阿瑞匹坦浓度分别为0.0200μg·mL^-1和0.0100μg·mL^-1、0.0400μg·mL^-1和0.0200μg·mL^-1、0.100μg·mL^-1和0.0400μg·mL^-1、0.250μg·mL^-1和0.100μg·mL^-1、0.500μg·mL^-1和0.250μg·mL^-1、2.00μg·mL^-1和1.00μg·mL^-1、5.00μg·mL^-1和2.00μg·mL^-1、10.0μg·mL^-1和5.00μg·mL^-1的校正标样。其中10.0μg·mL^-1和5.00μg·mL^-1的校正标样是由100μg·mL^-1福沙匹坦溶液和50.0μg·mL^-1阿瑞匹坦溶液配制而成。

其中，所述的稀释液按如下方法制备得到：取磷酸二氢铵5.76g，加1000mL水使溶解，用氨水调节pH值至9.0得磷酸盐缓冲液，再按照8∶2的体积比将磷酸盐缓冲液与乙腈混合，即得稀释液。

有益效果：本发明建立了一种同时测定血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦浓度的方法，快速、准确、灵敏度高、操作简便。通过该方法测定人静脉滴注福沙匹坦双葡甲胺后血浆中各时点的福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度，计算药代动力学参数，评价福沙匹坦和阿瑞匹坦在人体内的药代动力学特征，为福沙匹坦双葡甲胺的药物研制提供合理的依据。

附图说明

图1为血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的LC-MS/MS色谱图其中A为空白血浆；B为校正标样最低定量限样品(福沙匹坦：0.02μg·mL^-1，阿瑞匹坦：0.01μg·mL^-1)；C为校正标样BQ-4样品(福沙匹坦：0.5μg·mL^-1，阿瑞匹坦：0.25μg·mL^-1)；D为实际血浆样品；其中1代表福沙匹坦；2代表阿瑞匹坦；3代表内标格列苯脲。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1：人血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦浓度的同时测定。

一、实验材料与仪器

材料：福沙匹坦双葡甲胺对照品：江苏豪森药业股份有限公司，批号：RS20140413，含量：99.8％。阿瑞匹坦对照品：江苏豪森药业股份有限公司，批号：RS20140830，含量：99.8％。格列苯脲(内标)对照品：中国药品生物制品检定所，批号：100135-200404，供含量测定用。乙腈：Merck Company，HPLC级。甲醇：Merck Company，HPLC级。氨水：上海久亿化学试剂有限公司，分析纯。乙酸铵：ROE Scientific Inc.，HPLC级。EDTA：东京化成工业株式会社。磷酸二氢铵：成都市科龙化工试剂厂，分析纯。水由Millipore Milli-Q Advantage A10超纯水机制备。

仪器：API 4000 LC-MS/MS液质联用仪，含：(1)Pump Agilent 1260G1312A；(2)Column Oven Agilent 1260G1316A；(3)Auto Sampler Agilent 1260G1367E；(4)Massspectrometer API4000；(5)Value Valco 2-Position，由Analyst 1.6 Software控制。WH-2微型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂)。CPA225D电子天平(德国赛多利斯公司)。Millipore Drict-Q5纯水机(法国Millipore公司)。Biofuge PrimoR冷冻高速离心机(德国Heraeus公司)。

二、液质条件

1.液相色谱条件

色谱柱：Waters XTerra MS C18，2.1×50mm，3.5μm；保护柱：Agilent ZORAX SB-C18，2.1×12.5mm，5μm；流动相：乙腈：水(10mM乙酸铵和0.02g/100mL EDTA)，梯度洗脱，见表1；柱温：30℃；进样量5μL。

2.质谱条件

采用AB公司API 4000 MS/MS质谱仪进行化合物检测。采用ESI离子源、正离子MRM模式检测，离子源参数如下：CAD：4；CUR：10；GS1：60；GS2：50；IS：5000；TEM：600；主要化合物其他相关参数见表2。

三、实验过程：

1.福沙匹坦和阿瑞匹坦标准溶液的配制：

精密称取10.89mg福沙匹坦双葡甲胺对照品至10mL容量瓶中，加入稀释液定容至刻度，混匀得到0.666mg·mL^-1福沙匹坦标准曲线储备液；精密量取适量储备液以稀释液稀释至浓度为100μg·mL^-1福沙匹坦溶液；再以稀释液依次稀释，配成浓度分别为0.200μg·mL^-1、0.400μg·mL^-1、1.00μg·mL^-1、2.50μg·mL^-1、5.00μg·mL^-1、20.0μg·mL^-1和50.0μg·mL^-1的福沙匹坦标准曲线工作液，于-20℃冰箱中保存备用。

精密称取12.16mg阿瑞匹坦对照品至10mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，混匀得到1.216mg·mL^-1阿瑞匹坦标准曲线储备液，于-20℃冰箱中保存备用；精密量取适量储备液以甲醇稀释至浓度为50.0μg·mL^-1阿瑞匹坦溶液；再以甲醇液依次稀释，配成浓度分别为0.100μg·mL^-1、0.200μg·mL^-1、0.400μg·mL^-1、1.00μg·mL^-1、2.50μg·mL^-1、10.0μg·mL^-1和20.0μg·mL^-1的阿瑞匹坦标准曲线工作液，于-20℃冰箱中保存备用。

2.福沙匹坦和阿瑞匹坦质控溶液的配制：

精密称取10.37mg福沙匹坦双葡甲胺对照品至10mL容量瓶中，加入稀释液定容至刻度，混匀得到0.634mg·mL^-1福沙匹坦质控储备液。精密量取适量质控储备液以稀释液稀释至浓度为80、8和0.5μg·mL^-1福沙匹坦溶液，分别得高、中和低浓度的福沙匹坦质控工作液，于-20℃冰箱中保存备用。

精密称取10.65mg阿瑞匹坦对照品至10mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，混匀得到1.065mg·mL^-1阿瑞匹坦质控储备液。精密量取适量质控储备液以甲醇稀释至浓度为40、2和0.25μg·mL^-1阿瑞匹坦溶液，分别得高、中和低浓度的阿瑞匹坦质控工作液，于-20℃冰箱中保存备用。

3.内标格列苯脲工作液的配制：

精确称取9.99mg格列苯脲对照品至10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀得到999μg·mL^-1的内标储备液，于4℃冰箱中保存备用。以乙腈为溶剂，取1mL储备液定容于1000mL容量瓶中制得内标工作液，于4℃冰箱中保存备用。

4.血浆样品的采集：

2名健康受试者静脉滴注福沙匹坦双葡甲胺0.15g，30min滴完，于滴注前及滴注后5min、10min、15min、30min、40min、1h、1.5h、2h、4h、6h、8h、12h、18h、24h、36h、48h、72h于输液对侧前臂静脉取血4mL。采集血样置EDTA化试管中，3500rpm离心10min，分离血浆于1.5mL离心管中，-20℃冷冻并转入-80℃保存备用。

5.样品的前处理和测定：

(1)空白血浆样本的处理和测定

自-80℃低温冰箱中取出空白血浆样品，室温解冻后，涡旋振荡30s充分混匀，12000rpm4℃超速离心10min。精密吸取离心后血浆中层100μL于1.5mL EP管中，加入甲醇和稀释液各10μL，加入乙腈330μL，涡旋1min混匀，12000rpm10min，4℃离心，吸取上清液5μL进行LC-MS/MS分析。

(2)实际血浆样本的处理和测定

自-80℃低温冰箱中取出受试者的含药血浆样品，室温解冻后，涡旋振荡30s充分混匀，12000rpm 10min，4℃，超速离心。精密吸取离心后血浆中层100μL于1.5mL EP管中，加入甲醇和稀释液各10μL，加入内标格列苯脲(0.999μg·mL^-1)30μL，加入乙腈300μL，涡旋1min混匀，12000rmp 10min，4℃离心，吸取上清液5μL进行LC-MS/MS分析。

(3)血浆校正标样的制备和测定

分别精密吸取10μL各浓度的福沙匹坦和阿瑞匹坦标准曲线工作液置于1.5mL EP管中，向其中分别加入100μL空白血浆，涡旋混匀，即得含福沙匹坦浓度为0.02、0.04、0.1、0.25、0.5、2、5和10μg·mL^-1和阿瑞匹坦浓度为0.01、0.02、0.04、0.1、0.25、1、2和5μg·mL^-1的血浆校正标样，按“实际血浆样本的处理和测定”项处理和测定。

(4)血浆质控样本的制备和测定

分别精密吸取10μL各浓度的福沙匹坦和阿瑞匹坦质控工作液置于1.5mL EP管中，向其中分别加入100μL空白血浆，涡旋混匀，即得含福沙匹坦浓度为0.05、0.8和8μg·mL^-1和阿瑞匹坦浓度为0.025、0.2和4μg·mL^-1的血浆质控样品，按“实际血浆样本的处理和测定”项处理和测定。

6.方法验证

(1)专属性：

取人空白血浆室温解冻后，涡旋振荡30s充分混匀，12000rpm 4℃超速离心10min。精密吸取离心后血浆中层100μL于1.5mL EP管中，加入甲醇和稀释液各10μL，加入乙腈330μL，涡旋1min混匀，12000rpm10min，4℃离心，吸取上清液5μL进行LC-MS/MS分析。

结果显示，在选定的LC-MS/MS条件下(如图1所示)，福沙匹坦、阿瑞匹坦和内标的保留时间分别为4.6min、5.6min和5.0min左右，空白血浆无杂质峰影响测定的准确度，本测定方法可以用于福沙匹坦和阿瑞匹坦血浆浓度的测定。

(2)最低定量限和线性范围

分别精密吸取10μL各浓度的福沙匹坦和阿瑞匹坦标准曲线工作液置于1.5mL EP管中，向其中分别加入100μL空白血浆，涡旋混匀，即得含福沙匹坦浓度为0.0200、0.0400、0.100、0.250、0.500、2.00、5.00和10.0μg·mL^-1和阿瑞匹坦浓度为0.0100、0.0200、0.0400、0.100、0.250、1.00、2.00和5.00μg·mL^-1的血浆校正标样，加入内标格列苯脲(0.999μg·mL^-1)30μL，加入乙腈300μL，涡旋1min混匀，12000rmp 10min，4℃离心，吸取上清液5μL进行LC-MS/MS分析。记录福沙匹坦、阿瑞匹坦和内标峰面积。以福沙匹坦或阿瑞匹坦浓度C为X轴，以样品峰面积与内标的峰面积比值f为Y轴进行权重回归(权重系数为1/C²)，计算r值。结果显示，血浆中福沙匹坦浓度在0.0200-10.0μg·mL^-1范围内、阿瑞匹坦浓度在0.0100-5.00μg·mL^-1范围内，浓度与峰面积的比值具有良好的线性关系，福沙匹坦的r值均在0.9967～0.9987之间，阿瑞匹坦的r值均在0.9974～0.9991之间。本方法中福沙匹坦和阿瑞匹坦的LLOQ分别为20ng·mL^-1和10ng·mL^-1。

(3)准确度和精密度

按血浆标准曲线方法制备含福沙匹坦和阿瑞匹坦浓度分别为0.0500、0.800和8.00μg.mL^-1以及0.0250、0.200和4.00μg·mL^-1的血浆质控样本，每个浓度制备5个样本，并测定3批，每批随行一条标准曲线。记录色谱图及福沙匹坦、阿瑞匹坦和内标峰面积。计算样品和内标峰面积的比值f，将f值代入随行标准曲线求得实测浓度及其准确度。结果如表3显示，福沙匹坦低、中、高3个浓度质控样本实测浓度的批内准确度为90.26％～103.9％、RSD为2.75％～4.17％，批间准确度为99.83％～102.0％、RSD为3.91％～7.50％；阿瑞匹坦低、中、高3个浓度质控样本实测浓度的批内准确度为89.47％～112.2％、RSD为1.29％～4.94％，批间准确度为92.64％～111.2％、RSD为1.65％～5.24％，即方法的批内、批间精密度和准确度均在可接受范围内。

表3福沙匹坦和阿瑞匹坦在血浆中的精密度和准确度

(4)回收率

按“血浆质控样本的制备和测定”项配制处理并测定福沙匹坦和阿瑞匹坦低、中、高3种浓度的血浆质控样本，每个浓度平行3个样本。记录福沙匹坦峰面积A_S1、阿瑞匹坦峰面积A_S2和内标峰面积A_IS。

按“空白血浆样本的处理和测定”项处理空白血浆用于配置未经提取含药血浆样品：空白血浆和乙腈按照1∶3的比例涡旋1min混匀，12000rpm 10min，4℃离心，吸取上清液400μL于1.5mL EP管中，分别精密吸取福沙匹坦和阿瑞匹坦低、中、高质控工作液各10μL，向其中分别依次加入内标工作液30μL、涡旋混匀，吸取5μL进样分析。每个浓度平行3个样本。记录福沙匹坦峰面积A_s1’、阿瑞匹坦峰面积A_S2’和内标峰面积A_IS’。

福沙匹坦和阿瑞匹坦的提取回收率RE₁＝A_S1/A_S1’×100％和RE₂＝A_S2/A_S2’×100％

结果显示：福沙匹坦低、中、高3个浓度血浆质控样本的平均提取回收率分别为82.54％、97.85％和90.13％，阿瑞匹坦低、中、高3个浓度血浆质控样本的平均提取回收率分别为93.36％、107.8％和103.8％。结果表明，该方法中福沙匹坦、阿瑞匹坦和内标的提取回收率精密且可重现。

6.测定结果

2名健康受试者静脉滴注福沙匹坦双葡甲胺0.15g后血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度见表4。

表4 2名健康受试者静脉滴注福沙匹坦双葡甲胺0.15g后血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度

N.D表示低于LLOQ。

四、讨论

本研究采用蛋白沉淀法提取了血浆中的福沙匹坦和阿瑞匹坦。目前，从生物样品中分离阿瑞匹坦和福沙匹坦的方法分别主要为液液提取法(LLE)和固相萃取法(SPE)，但是由于这两个化合物极性相差大，以往的方法不能同时将这两个化合物提取出来。本发明采用蛋白沉淀法，不仅较LLE和SPE操作更简单，而且能获得稳定且较高的提取回收率。同时，使用高效液相色谱串联质谱技术同时测定了血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度，保证了检测方法的灵敏度。

其次，由于福沙匹坦中特殊的磷酸基团结构，使得福沙匹坦在色谱分离时易与色谱柱中的基团发生特异性结合而难以洗脱，无法检测。本发明在流动相中加入EDTA成功解决了这一问题。同时，采用梯度洗脱的方法，使得两个极性相差较大的化合物能在较短的分析时间内同时测定，且峰形良好。

总之，该方法快速、准确、灵敏度高、操作简便。通过该方法同时测定血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度，计算药代动力学参数，能为福沙匹坦双葡甲胺的药物研制提供合理的药代动力学依据。

Claims (5)

1.一种同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，采用高效液相色谱串联质谱技术检测经预处理的校正标样和经预处理的血浆样品，利用内标法定量，以福沙匹坦和阿瑞匹坦校正标样的浓度为X轴，福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标的峰面积比值为Y轴，建立标准曲线方程，将血浆样品中福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标峰面积的比值代入标准曲线方程中，计算福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度，具体色谱条件为：

(1)高效液相色谱条件：

流动相A：10mM乙酸铵和0.02g/100mL EDTA水溶液；

流动相B：乙腈；

色谱柱：Waters XTerra MS C18，2.1×50mm，3.5μm；

采用梯度洗脱方式，见表1；

柱温：30℃；

进样量5μL；

表1 流动相梯度洗脱参数

表2 福沙匹坦、阿瑞匹坦和内标的质谱参数

(2)质谱条件：采用ESI离子源、正离子MRM模式检测，离子源参数如下：CAD：4；CUR：10；GS1：60；GS2：50；IS：5000；TEM：600；主要化合物其他相关参数见表2。

2.根据权利要求1所述的同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，所述的血浆为人或动物的血浆。

3.根据权利要求1所述的同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，所述的经预处理的血浆样品按照如下方法制备得到：取血浆样品10OμL，加入甲醇和稀释液各10μL，加入内标0.999μg·mL^-1格列苯脲30μL，加入乙腈300μL，涡旋1min混匀，12000rmp10min，4℃离心，吸取上清液，即得。

4.根据权利要求1所述的同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，校正标样按如下方法制备得到：

精密称取10.89mg福沙匹坦双葡甲胺对照品至10mL容量瓶中，加入稀释液定容至刻度，混匀得到0.666mg·mL^-1福沙匹坦标准曲线储备液；精密量取适量储备液以稀释液稀释至浓度为100μg·mL^-1福沙匹坦溶液；再以稀释液依次稀释，配成浓度分别为0.200μg·mL^-1、0.400μg·mL^-1、1.00μg·mL^-1、2.50μg·mL^-1、5.00μg·mL^-1、20.0μg·mL^-1和50.0μg·mL^-1的福沙匹坦标准曲线工作液，于-20℃冰箱中保存备用；

精密称取12.16mg阿瑞匹坦对照品至10mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，混匀得到1.216mg·mL^-1阿瑞匹坦标准曲线储备液，于-20℃冰箱中保存备用；精密量取适量储备液以甲醇稀释至浓度为50.0μg·mL^-1阿瑞匹坦溶液；再以甲醇液依次稀释，配成浓度分别为0.100μg·mL^-1、0.200μg·mL^-1、0.400μg·mL^-1、1.00μg·mL^-1、2.50μg·mL^-1、10.0μg·mL^-1和20.0μg·mL^-1的阿瑞匹坦标准曲线工作液，于-20℃冰箱中保存备用；

分别精密吸取10μL各浓度的福沙匹坦和阿瑞匹坦标准曲线工作液置于1.5mL EP管中，向其中分别加入100μL空白血浆，涡旋混匀，即得含福沙匹坦和阿瑞匹坦浓度分别为0.0200μg·mL^-1和0.0100μg·mL^-1、0.0400μg·mL^-1和0.0200μg·mL^-1、0.100μg·mL^-1和0.0400μg·mL^-1、0.250μg·mL^-1和0.100μg·mL^-1、0.500μg·mL^-1和0.250μg·mL^-1、2.00μg·mL^-1和1.00μg·mL^-1、5.00μg·mL^-1和2.00μg·mL^-1、10.0μg·mL^-1和5.00μg·mL^-1的校正标样。

5.根据权利要求4所述的同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，所述的稀释液按如下方法制备得到：取磷酸二氢铵5.76g，加1000mL水使溶解，用氨水调节pH值至9.0得磷酸盐缓冲液，再按照8∶2的体积比将磷酸盐缓冲液与乙腈混合，即得稀释液。