Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

CN105884906B - 一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法 - Google Patents

一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105884906B
CN105884906B CN201610367604.9A CN201610367604A CN105884906B CN 105884906 B CN105884906 B CN 105884906B CN 201610367604 A CN201610367604 A CN 201610367604A CN 105884906 B CN105884906 B CN 105884906B
Authority
CN
China
Prior art keywords
fusion protein
rhepo
20mmol
flow rate
elution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610367604.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105884906A (zh
Inventor
叶学君
吴思恒
余燕
郜富权
兰万军
陈静山
张桂涛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Taili Biomedical Technology Co.,Ltd.
Original Assignee
Guangzhou Taili Biomedical Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Taili Biomedical Technology Co ltd filed Critical Guangzhou Taili Biomedical Technology Co ltd
Priority to CN201610367604.9A priority Critical patent/CN105884906B/zh
Publication of CN105884906A publication Critical patent/CN105884906A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105884906B publication Critical patent/CN105884906B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/505—Erythropoietin [EPO]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，包括如下步骤：(1)通过培养CHO工程细胞获得rhEPO‑Fc融合蛋白的细胞培养液；(2)将步骤(1)得到的CHO细胞培养液经深层过滤后采用Mabselect SuRe亲和层析进行纯化；(3)将步骤(2)粗纯化得到的rhEPO‑Fc融合蛋白液采用Capto adhere复合型阴离子交换层析进行进一步纯化，得到高纯度的rhEPO‑Fc融合蛋白液。本发明通过Mabselect SuRe‑Capto adhere两步纯化工艺纯化rhEPO‑Fc融合蛋白，得到高纯度的rhEPO‑Fc，样品经临床前药理毒理学研究，其半衰期比EPO延长了近5倍，而且安全、有效。

Description

一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法
技术领域
本发明涉及生物制药领域，更具体地说，涉及一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法。
背景技术
重组人红细胞生成素(rhEPO)主要用于治疗贫血，是全球最早的重组蛋白药物之一，也是迄今技术成熟、疗效确切和全球销售额最高的基因工程药物。但由于EPO半衰期短，需要频繁给药，给病患者增加了的经济负担，同时也降低了用药的依从性。
开发长效化药物，减少病人用药次数，成为近年来全球制药机构的方向之一，国、内外多家公司也都致力于开发长效EPO。其中，安进公司和罗氏公司相继于2003年、2007年成功开发长效EPO(Aranesp和Mircera)，并在短短几年迅速挤占了第一代rhEPO产品的部分市场，有逐步取代传统EPO的趋势。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术的上述缺陷，提供一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，将人EPO基因与裂解活性最低的人IgG2 Fc片段偶联，融合基因插入到载体构建成人EPO-Fc表达载体，通过转染技术筛选出稳定、高效表达重组人红细胞生成素(Fc)融合蛋白的工程细胞株。细胞经大量扩增、分泌表达EPO-Fc，上清经本发明的Mabselect SuRe-Capto adhere两步纯化后得到高纯度的rhEPO-Fc，样品经临床前药理毒理学研究，rhEPO-Fc的半衰期比EPO延长了近5倍，而且安全、有效。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，包括如下步骤：
(1)利用基因工程手段，将裂解活性最弱的人IgG2的Fc片段基因连接到人促红细胞生成素(hEPO)基因的3＇端，利用脂质体将含有hEPO-Fc重组基因的质粒转染CHO细胞；该CHO细胞经培养，在培养液中分泌表达rhEPO-Fc融合蛋白；CHO细胞培养生产工艺是：一次扩增培养，共收获四次含rhEPO-Fc融合蛋白无血清培养液；
(2)将步骤(1)得到的CHO细胞培养液经深层过滤后，采用Mabselect SuRe亲和层析进行纯化，然后用0.5mol/L Na2HPO4调整蛋白溶液的pH到中性，得到粗纯化的rhEPO-Fc融合蛋白液；重复步骤(2)四次；
(3)将四次通过步骤(2)得到的粗纯化的rhEPO-Fc融合蛋白液混合后采用Captoadhere复合型阴离子交换层析进行进一步纯化，得到高纯度的rhEPO-Fc融合蛋白液。
本发明所述的长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，其中，所述步骤(1)具体步骤参见中国专利专利号为ZL200610072229.1，专利名称：长效人促红细胞生成素融合蛋白及其制备和纯化方法。
本发明所述的长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，其中，所述步骤(2)Mabselect SuRe亲和层析具体包括如下步骤：
2.1平衡：20mmol/L PB+0.1～1mol/L NaCl，pH6～8，平衡至pH和电导率监控显示和平衡缓冲液的一致，流速2～4cm/min；
2.2上样：上样前紫外吸收值调零，样品为步骤(1)得到的rhEPO-Fc融合蛋白液经深层过滤后，直接上样；
2.3淋洗1：20mmol/L PB+0.1～1mol/L NaCl，pH6～8淋洗至pH和电导率监控显示和淋洗1缓冲液的一致，流速2～4cm/min；
2.4淋洗2：20mmol/L PB，pH6～8淋洗至pH和电导率监控显示和淋洗2缓冲液的一致，流速2～4cm/min；
2.5洗脱：以醋酸缓冲液为洗脱液进行洗脱，流速2～4cm/min；
2.6再生：20mmol/L醋酸缓冲液，pH3.0；
2.7调pH：洗脱下来的样品用0.5mol/LNa2HPO4调pH至中性，用滤器过滤后保存；
2.8根据细胞培养上清的送样次数，重复步骤2.1-2.7过程。
本发明所述的长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，其中，所述步骤2.2上样时，Mabselect SuRe的上样量不超过12mg/ml填料。
本发明所述的长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，其中，所述步骤2.5洗脱时，洗脱条件为以20mmol/L醋酸缓冲液为洗脱液，pH为3.6～5.0。
本发明所述的长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，其中，所述步骤(3)Capto adhere复合型阴离子交换层析具体包括如下步骤：
3.1平衡：20mmol/LPB+500mmol/LNaCl，pH6～8，预平衡后，再用20mmol/L PB，pH6～8，平衡至pH和电导率监控显示和平衡缓冲液的一致，流速2～4cm/min；
3.2上样：样品为步骤(2)经Mabselect SuRe洗脱样混合稀释后得到的rhEPO-Fc融合蛋白液，流速2～4cm/min上样；
3.3淋洗：20mmol/L PB，pH6～8，淋洗至pH和电导率监控显示和淋洗缓冲液的一致，流速2～4cm/min；
3.4洗脱：以PB+NaCl为洗脱液，pH6～8，流速2～4cm/min，收集洗脱液，即得纯化的rhEPO-Fc融合蛋白液；
3.5再生：20mmol/LPB+500mmol/LNaCl，pH6～8，流速2～4cm/min。
本发明所述的长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，其中，所述步骤3.2上样时，Capto adhere上样量为8.2～23.35mg/ml填料。
本发明所述的长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，其中，所述步骤3.4洗脱中以20mmol/LPB+80～360mmol/L NaCl为洗脱液进行洗脱。
实施本发明的长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，具有以下有益效果：
(1)通过Mabselect SuRe-Capto adhere两步纯化工艺纯化rhEPO-Fc融合蛋白，得到高纯度的EPO-Fc，样品经临床前药理毒理学研究，EPO-Fc的半衰期比EPO延长了近5倍，而且安全、有效。
(2)本发明还分别对两步层析进行实验设计，通过合理筛选实验条件来安排实验，研究了上样量、洗脱条件对目的蛋白的纯度和得率的影响，并通过对实验数据的分析，找出总体较优的纯化条件。
(3)通过实验数据分析，初步确定MabselectSuRe的上样量不超过12mg/ml填料，洗脱条件为20mmol/L醋酸缓冲液，pH4.0；Capto adhere的上样量为8.2～23.35mg/ml填料，洗脱的NaCl浓度为300mmol/L。对此条件进行验证，同时验证用SuRe-adhere两步纯化工艺纯化rhEPO-Fc项目的可行性。
(4)Mabselect SuRe配基是一个同型的四聚体配基，其只含有ProteinA的B结构域，这消除了不同结构域与Fc段亲和的差异性，使得洗脱条件更加均一和温和。而且其还去掉了对碱敏感的氨基酸，是目前唯一耐碱的ProteinA亲和介质，碱洗可以降低产品被内毒素污染和批间交叉污染的风险，清洗效果更好，有利于延长介质使用寿命，同时也大大降低了CIP/SIP的成本。所以Mabselect SuRe是一种很适合将来放大生产的改进型Protein A填料。
(5)Capto adhere用于生产规模下单克隆抗体的蛋白A后纯化，复合模式配基提供了不同于传统离子交换剂的选择性。Capto adhere能够在一次纯化作用中除去诸如DNA、寄主细胞蛋白(HCP)、脱落的A蛋白、二聚物和较大聚集体以及病毒等杂质。
附图说明
下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，附图中：
图1是实施例1中第一次Mabselect SuRe层析图谱；
图2是实施例1中第一次Mabselect SuRe的HPLC纯度测定图谱；
图3是实施例1中第二次Mabselect SuRe层析图谱；
图4是实施例1中第二次Mabselect SuRe的HPLC纯度测定图谱；
图5是实施例1中第三次Mabselect SuRe层析图谱；
图6是实施例1中第三次Mabselect SuRe的HPLC纯度测定图谱；
图7是实施例1中第四次Mabselect SuRe层析图谱；
图8是实施例1中第四次Mabselect SuRe的HPLC纯度测定图谱；
图9是实施例1中Capto adhere复合型阴离子交换层析图谱；
图10是实施例1中Capto adhere的HPLC纯度测定图谱。
具体实施方式
下面，结合附图以及具体实施方式，对本发明做进一步描述：
实施例1一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，包括如下步骤：
(1)利用基因工程手段，将裂解活性最弱的人IgG2的Fc片段基因连接到人促红细胞生成素(hEPO)基因的3’端，利用脂质体将含有hEPO-Fc重组基因的质粒转染CHO细胞；该CHO细胞经培养，在培养液中分泌表达rhEPO-Fc融合蛋白；CHO细胞培养生产工艺是：一次扩增培养，共收获四次含rhEPO-Fc融合蛋白无血清培养液；所述步骤(1)具体步骤参见中国专利专利号为ZL200610072229.1，专利名称：长效人促红细胞生成素融合蛋白及其制备和纯化方法。
(2)将步骤(1)得到的CHO细胞培养液经深层过滤后，采用Mabselect SuRe亲和层析进行纯化，然后用0.5mol/L Na2HPO4调整蛋白溶液的pH到中性，得到粗纯化的rhEPO-Fc融合蛋白液；
所述步骤(2)Mabselect SuRe亲和层析具体包括如下步骤：
2.1平衡：20mmol/L PB+150mol/L NaCl，pH7.3，平衡至基线，流速2.5cm/min；
2.2上样：上样前紫外吸收值调零，样品为步骤(1)得到的rhEPO-Fc融合蛋白液经深层过滤后，直接上样；Mabselect SuRe的上样量不超过12mg/ml填料。
2.3淋洗1：20mmol/L PB+150mol/L NaCl，pH7.3淋洗至基线，流速2.5cm/min；
2.4淋洗2：20mmol/L PB，pH7.3淋洗至基线，流速2.5cm/min；
2.5洗脱：以醋酸缓冲液为洗脱液进行洗脱，流速2cm/min；洗脱条件为以20mmol/L醋酸缓冲液为洗脱液，pH为4.0；
2.6再生：20mmol/L醋酸缓冲液，pH3.0；
2.7调pH：洗脱下来的样品用0.5mol/LNa2HPO4调pH至7.0，用滤器过滤后保存；
2.8根据细胞培养上清的送样次数，重复步骤2.1-2.7过程，共重复四次。
(3)将四次通过步骤(2)得到的粗纯化的rhEPO-Fc融合蛋白液混合后采用Captoadhere复合型阴离子交换层析进行进一步纯化，得到高纯度的rhEPO-Fc融合蛋白液。
所述步骤(3)Capto adhere复合型阴离子交换层析，具体包括如下步骤：
3.1平衡：20mmol/LPB+500mmol/LNaCl，pH7.0，预平衡至基线,再用20mmol/L PB，pH7.0，平衡至基线，流速2.5cm/min；
3.2上样：样品为步骤(2)经Mabselect SuRe洗脱样混合稀释后得到的rhEPO-Fc融合蛋白液，上样；上样量为8.2-23.35mg/ml填料。
3.3淋洗：20mmol/L PB，pH7.0，淋洗至基线，流速2.5cm/min；
3.4洗脱：以20mmol/LPB+300mmol/L NaCl,pH7.0为洗脱液进行洗脱，流速2.5cm/min，收集洗脱液，即得纯化的rhEPO-Fc融合蛋白液；
3.5再生：20mmol/LPB+500mmol/LNaCl，pH7.0，流速2.5cm/min。
其中，Mabselect SuRe亲和层析的过程及实验数据如下：
1.1四次亲和层析均用同一Mabselect SuRe层析柱。平衡、上样、淋洗步骤的流速均为2.5cm/min，洗脱流速为2cm/min。纯化过程参数如表1所示：
表1：四次Mabselect SuRe纯化过程
Figure BDA0001002532920000091
1.2四次Mabselect SuRe层析图谱和HPLC纯度测定图谱如1-8图所示。
Capto adhere复合型阴离子交换层析的过程及实验数据如下：
缓冲液：Buffer A：20mmol/L PB，pH7.0
Buffer B：20mmol/LPB+500mmol/L NaCl，pH7.0
2.1预平衡：层析柱用Buffer B预平衡228ml，流速2.5cm/min。
2.2平衡：层析柱用Buffer A平衡447ml，流速2.5cm/min。
2.3上样：样品是Mabselect SuRe四亚批混合均匀，为了使得上样液的电导和pH与平衡液的相接近，故用超纯水将混合样品稀释后上样。
2.4淋洗：用Buffer A淋洗432ml，流速2.5cm/min。
2.5洗脱：2.5cm/min，A泵是Buffer A，B泵是Buffer B。60％B洗脱得到的吸收峰170ml。
2.6 100％B再生：2.5cm/min，收集吸收峰42ml。
2.7层析图谱和HPLC纯度测定图谱如图9-10所示。
实施例1的实验结果与分析
1.Mabselect SuRe中间品实验数据如表2所示：
表2：Mabselect SuRe数据汇总
Figure BDA0001002532920000101
结果分析：表2显示，每亚批的纯度都在89％以上，得率都是在85％以上。
2.Capto adhere实验数据如表3所示：
表3：Capto adhere数据汇总
Figure BDA0001002532920000102
结果分析：表3显示，通过Capto adhere进一步纯化出来的样品纯度可以达到98.5％，得率是70％。
3.讨论
按照本发明确定的SuRe-adhere两步纯化工艺条件，纯化CHO细胞表达的rhEPO-Fc蛋白，总收率可以达到70％，目的蛋白纯度可以达到98.5％。证实了SuRe-adhere两步层析工艺纯化rhEPO-Fc项目有效、简便、可行。所以最后rhEPO-Fc项目纯化工艺流程如下：
Figure BDA0001002532920000111
对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及形变，而所有的这些改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)利用基因工程手段，将裂解活性最弱的人IgG2的Fc片段基因连接到人促红细胞生成素(hEPO)基因的3＇端，利用脂质体将含有hEPO-Fc重组基因的质粒转染CHO细胞；该CHO细胞经培养，在培养液中分泌表达rhEPO-Fc融合蛋白；CHO细胞培养生产工艺是：一次扩增培养，共收获四次含rhEPO-Fc融合蛋白无血清培养液；
(2)将步骤(1)得到的CHO细胞培养液经深层过滤后，采用Mabselect SuRe亲和层析进行纯化，然后用0.5mol/L Na2HPO4调整蛋白溶液的pH到中性，得到粗纯化的rhEPO-Fc融合蛋白液；重复步骤(2)四次；
所述步骤(2)Mabselect SuRe亲和层析具体包括如下步骤：
2.1平衡：20mmol/L PB+0.1～1mol/L NaCl，pH6～8，平衡至pH和电导率监控显示和平衡缓冲液的一致，流速2～4cm/min；
2.2上样：上样前紫外吸收值调零，样品为步骤(1)得到的rhEPO-Fc融合蛋白液经深层过滤后，直接上样；其中，上样量不超过12mg/ml填料；
2.3淋洗1：20mmol/L PB+0.1～1mol/L NaCl，pH6～8淋洗至pH和电导率监控显示和淋洗1缓冲液的一致，流速2～4cm/min；
2.4淋洗2：20mmol/L PB，pH6～8淋洗至pH和电导率监控显示和淋洗2缓冲液的一致，流速2～4cm/min；
2.5洗脱：以醋酸缓冲液为洗脱液进行洗脱，流速2～4cm/min；其中，洗脱条件为以20mmol/L醋酸缓冲液为洗脱液，pH为3.6～5.0；
2.6再生：20mmol/L醋酸缓冲液，pH3.0；
2.7调pH：洗脱下来的样品用0.5mol/LNa2HPO4调pH至中性，用滤器过滤后保存；
2.8根据细胞培养上清的送样次数，重复步骤2.1-2.7过程；
(3)将四次通过步骤(2)得到的粗纯化rhEPO-Fc融合蛋白液混合后采用Capto adhere复合型阴离子交换层析进行进一步纯化，得到高纯度的rhEPO-Fc融合蛋白液；
所述步骤(3)Capto adhere复合型阴离子交换层析具体包括如下步骤：
3.1平衡：20mmol/LPB+500mmol/LNaCl，pH6～8，预平衡后，再用20mmol/L PB，pH6～8，平衡至pH和电导率监控显示和平衡缓冲液的一致，流速2～4cm/min；
3.2上样：样品为步骤(2)经Mabselect SuRe洗脱样混合稀释后得到的rhEPO-Fc融合蛋白液，流速2～4cm/min上样；
3.3淋洗：20mmol/L PB，pH6～8，淋洗至pH和电导率监控显示和淋洗缓冲液的一致，流速2～4cm/min；
3.4洗脱：以PB+NaCl为洗脱液，pH6～8，流速2～4cm/min，收集洗脱液，即得纯化的rhEPO-Fc融合蛋白液；其中，洗脱中以20mmol/LPB+80～360mmol/L NaCl为洗脱液进行洗脱；
3.5再生：20mmol/LPB+500mmol/LNaCl，pH6～8，流速2～4cm/min；
所述步骤3.2上样时，Capto adhere上样量为8.2～23.35mg/ml填料。
2.根据权利要求1所述的长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，其特征在于，所述步骤(1)具体步骤参见中国专利专利号为ZL200610072229.1，专利名称：长效人促红细胞生成素融合蛋白及其制备和纯化方法。
CN201610367604.9A 2016-05-27 2016-05-27 一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法 Active CN105884906B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610367604.9A CN105884906B (zh) 2016-05-27 2016-05-27 一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610367604.9A CN105884906B (zh) 2016-05-27 2016-05-27 一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105884906A CN105884906A (zh) 2016-08-24
CN105884906B true CN105884906B (zh) 2021-11-19

Family

ID=56709112

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610367604.9A Active CN105884906B (zh) 2016-05-27 2016-05-27 一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105884906B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107937425A (zh) * 2017-12-27 2018-04-20 北京四环生物制药有限公司 长效重组人促红素的生产方法
CN109678969B (zh) * 2018-12-29 2020-02-07 北京东方百泰生物科技有限公司 一种CTLA4-Ig融合蛋白的纯化方法
CN116143901B (zh) * 2022-11-28 2024-08-02 景泽生物医药(合肥)股份有限公司 一种促卵泡激素的纯化方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK1699821T3 (da) * 2003-12-31 2012-07-16 Merck Patent Gmbh Fc-ERYTHROPOIETIN-FUSIONSPROTEIN MED FORBEDREDE FARMAKOKINETIKKER
CN100436482C (zh) * 2006-04-14 2008-11-26 东莞太力生物工程有限公司 长效人促红细胞生成素融合蛋白及其制备和纯化方法
CN101318991A (zh) * 2008-07-04 2008-12-10 陈志南 一种采用复合层析介质纯化Fc融合蛋白的方法
CN102380090A (zh) * 2010-08-31 2012-03-21 健能隆医药技术（上海）有限公司 G-csf二聚体在治疗嗜中性粒细胞减少症中的应用
CN102875674B (zh) * 2011-10-27 2015-02-04 成都蓉生药业有限责任公司 一种抗破伤风毒素抗体及其制备方法和用途
CN102911250B (zh) * 2012-09-29 2014-04-16 浙江海正药业股份有限公司 酸性重组蛋白药物的纯化方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN105884906A (zh) 2016-08-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102272851B1 (ko) 항체를 정제하기 위한 연속 다단계 공정
Sommerfeld et al. Challenges in biotechnology production—generic processes and process optimization for monoclonal antibodies
Chollangi et al. Development of robust antibody purification by optimizing protein‐A chromatography in combination with precipitation methodologies
Schwartz et al. Comparison of hydrophobic charge induction chromatography with affinity chromatography on protein A for harvest and purification of antibodies
TWI659965B (zh) 治療性蛋白質藥物物質之整合連續製造
EP2695889A1 (en) Protein purification by ion exchange
CN105175548B (zh) 重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白的纯化方法
CN106536565A (zh) 一种用于纯化TNFR‑Fc融合蛋白的方法
CN105884906B (zh) 一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法
CN112210002B (zh) 重组人血清白蛋白的纯化方法
Surabattula et al. An optimized process for expression, scale-up and purification of recombinant erythropoietin produced in Chinese hamster ovary cell culture
CN103497248B (zh) 一种从细胞培养上清中分离纯化抗体的方法
US20130116413A1 (en) Purification of proteins
CN109369806A (zh) 苏金单抗制品中半胱氨酸化变异体的去除方法
Zhou et al. Implementation of advanced technologies in commercial monoclonal antibody production
KR102154952B1 (ko) 아달리무맙의 Non-Protein A 정제방법
CN106380519A (zh) 一种单克隆抗体的纯化方法
CN109593133B (zh) 一种抗人神经生长因子抗体的电荷异构体分离方法
CN107188952A (zh) 一种重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法
CN105579572B (zh) 用于净化高密度粗细胞培养收获物的方法
WO2011156369A2 (en) Purification of modified cytokines
KR101847169B1 (ko) 지속형 에리트로포이에틴 함유 조성물
JP7512891B2 (ja) ポリペプチドの分離方法、ポリペプチドの製造方法及びポリペプチドの精製装置
CN102443055B (zh) 一种重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的纯化工艺
Ding et al. Antibody purification process development and manufacturing

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Ye Xuejun

Inventor after: Wu Siheng

Inventor after: Yu Yan

Inventor after: Gao Fuquan

Inventor after: Lan Wanjun

Inventor after: Chen Jingshan

Inventor after: Zhang Guitao

Inventor before: Ye Xuejun

Inventor before: Wu Siheng

Inventor before: Yu Yan

Inventor before: Gao Fuquan

TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20210924

Address after: 511400 808, floor 8, building 9 (Building 8), No. 6, Nanjiang Second Road, Zhujiang street, Nansha District, Guangzhou City, Guangdong Province (office only)

Applicant after: Guangzhou Taili Biomedical Technology Co.,Ltd.

Address before: 523581, Changping Town, Guangdong City, Dongguan Province

Applicant before: Dongguan Taili Biological Engineering Co.,Ltd.

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant