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CN105685472A - 一种微贮添加剂、其制备方法及应用 - Google Patents

一种微贮添加剂、其制备方法及应用 Download PDF

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CN105685472A
CN105685472A CN201610048525.1A CN201610048525A CN105685472A CN 105685472 A CN105685472 A CN 105685472A CN 201610048525 A CN201610048525 A CN 201610048525A CN 105685472 A CN105685472 A CN 105685472A
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曾蜀斌
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Hei Zuan Aurora New Energy Technology Co Ltd Of Heilongjiang Province
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Abstract

本发明涉及一种饲料添加剂，具体涉及一种微贮添加剂、其制备方法及应用，所述微贮添加剂的制备方法包括如下步骤：将地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母和沼泽红假单胞菌剂按单位质量活菌数比例为：(500-600)：(500-600)：(10000-75000)：(10000-73000)：(10000-75000)：(10000-73000)：(10000-73000)：(10000-65000)：(10000-60000)：(10000-75000)：(10000-75000)：(50-70)：1混合，制备得到微贮添加剂。本发明通过菌种间协同作用对秸秆进行发酵处理，可以快速提高秸秆发酵水平，弥补单一菌种分泌酶类及合成物质的不足，提高了发酵品质，同时产生的多种有机酸及菌体蛋白，能够提高秸秆的适口性，提高畜禽的采食量，显著提高畜禽的生产性能。

Description

一种微贮添加剂、其制备方法及应用
技术领域
本发明涉及饲料领域，主要涉及一种饲料添加剂，具体涉及一种微贮添加剂、其制备方法及应用。
背景技术
秸杆微贮饲料是近年来发展迅速的一种秸杆加工新技术，它利用微生物在秸杆中密封发酵使秸杆变成带有酸、香、酒味的粗饲料，是节能环保高效的农牧业产品。微贮饲料因其具有成本低、效益高、适口性好、采食量高、饲料来源广、不受季节限制而得到了广泛应用。
我国每年约产生秸秆近6亿吨，其中约有70％的秸秆作为生活能源的形式消耗，经处理后喂家畜的不足8％，另一部分以肥料的形式还田，造成环境污染和能源损失。随着畜牧业的不断发展，我国牧草饲料年供应缺口达2.8亿吨，每年有6亿吨秸秆资源亟待处理，而目前大量秸杆的不良处置，如焚烧，严重影响到空气质量和引发大量的交通事故；如直接填埋在田地里面，长期后会破坏土壤结构，减少土壤肥力并影响到农作物的生长。
秸秆的消化率低，一般只有35-50％，其中的能量只有60％能被动物利用。秸秆细胞壁中木质素与半纤维素之间结合的乙酰基团是影响微生物酶消化的主要原因。而目前多采用添加多种菌种制备秸秆作物，1989年美国饲料公定协会(AAFCO，1990)公布了可以用作饲料添加剂、对人畜均无副作用的微生物，共有43种，其中乳酸菌28种(包括乳杆菌12种、双歧杆菌6种、链球菌6种、片球菌3种、明串珠菌1种)、芽孢杆菌5种、拟杆菌4种、曲霉2种、酵母菌2种等。
CN102178126A公开了一种秸秆微贮添加剂，采用乳酸菌、啤酒酵母、枯草芽孢杆菌、放线菌、固氮菌、霉菌菌种按75300～10000∶73000～10000∶600～500∶70～50∶15～10∶1的配比发酵制得。CN101263864A公开了一种秸秆微贮添加剂，所述秸秆微贮添加剂由产朊假丝酵母、酿酒酵母、植物乳杆菌、乳酸片球菌按重量比配制而成。而这两个专利中的菌种过于单一，菌种分泌酶类单一，合成物质不足，且发酵所需时间过长不利于秸秆饲料的制备。
发明内容
针对现有技术的缺陷和不足，本发明提供了一种微贮添加剂、其制备方法及应用，该添加剂通过多种菌种之间的协同作用，提高了秸秆粗纤维、干物质和蛋白质的利用效率，同时产生了多种有机酸及菌体蛋白。
为达上述目的，本发明采取以下技术方案：
一方面，本发明提供一种微贮添加剂的制备方法，包括如下步骤：
将地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母和沼泽红假单胞菌剂按单位质量活菌数比例为：(500-600)：(500-600)：(10000-75000)：(10000-73000)：(10000-75000)：(10000-73000)：(10000-73000)：(10000-65000)：(10000-60000)：(10000-75000)：(10000-75000)：(50-70)：1混合，制备得到微贮添加剂。
本发明中，采用13种菌混合，通过菌种间协同作用对秸秆进行发酵处理，可以快速提高秸秆发酵水平，弥补单一菌种分泌酶类及合成物质的不足，提高了发酵品质，同时产生的多种有机酸及菌体蛋白，能够提高秸秆的适口性，提高畜禽的采食量，显著提高畜禽的生产性能。
优选地，所述的秸秆微贮添加剂的制备包括以下步骤：
(1)菌种活化；
(2)种子液制备；
(3)培养基配制及接种；
(4)发酵；
(5)菌体收集及菌剂制备；
(6)微贮添加剂的制备。
优选地，步骤(1)所述的菌种活化包括如下步骤：将保藏的地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母和沼泽红假单胞菌，分别置于灭菌的1％红糖水中活化2h，芽孢菌再转接入已灭菌的普通肉汤培养基、乳酸菌转入MRS、酵母菌转入YPD斜面培养基中，置于28-35℃，待菌落长出后分别接入已灭菌的普通肉汤MRS、YPD培养基中，在与对应斜面培养基相同温度的摇床中培养24-48h。
优选地，步骤(2)所述的种子液制备包括如下步骤：将已灭菌的500mL与试管培养基成分相同的13个锥形瓶培养基，摇瓶于32-34℃空白培养48h，检查确认无杂菌后包扎，用紫外线照1h备用；将普通肉汤培养基、MRS、YPD长出的菌落、挑单菌落于与其相对应的己灭菌的13个培养基锥形瓶中，置于28-35℃下摇瓶培养24-48h，镜检无杂菌后制成种子液。
优选地，步骤(3)所述的培养基配制及接种包括如下步骤：
(a)将发酵罐和所用设备121℃灭菌30min，维持罐压0.1MPa；
(b)配置培养基：将毛尖蘑菇菌、松茸蘑菇菌、灰树花蘑菇菌、鸡腿蘑、白蘑菇菌和黄蘑菇菌按2:2:1:3:1:1的比例制成蘑菇菌粉放入蜂蜜、红糖，高温消毒，加入井水消毒，降温后分别接菌发酵，再加入淀粉酶、麦芽糖酶和木聚糖酶，反应72小时产生自组互控菌群及产生生物酶。
本发明中，在培养基中加入蘑菇菌粉，与其他培养基相比，更有利于对这几种菌的扩繁，使得扩繁效果更佳，加入这三种酶类，便于产生更多的酶，加快发酵速度。
优选地，所述步骤(b)中蘑菇菌粉、蜂蜜和红糖的比例为70:3:125。
优选地，所述步骤(b)中的消毒温度为150-200℃，例如可以是150℃、160℃、170℃、180℃、190℃或200℃，优选为160-180℃，进一步优选为160℃。
优选地，所述淀粉酶、麦芽糖酶和木聚糖酶的比例为1：1：1。
优选地，所述淀粉酶、麦芽糖酶和木聚糖酶的总酶量与蜂蜜的比为1:1。
优选地，步骤(4)所述发酵的参数为：
所述地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌的培养温度为33-36℃，起始pH为7.0-7.2，通气量为1-3V/V/min，搅拌转速为280-320r/min，罐压为0.12-0.14MPa，培养时间45-50h；
所述两歧双歧杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、戊糖片球菌和沼泽红假单胞菌的培养温度为25-30℃，起始pH为6.2-6.4，通气量为1-3V/V/min，搅拌转速为180-220r/min，罐压为0.12-0.14MPa，培养时间18-28h；
所述乳酸肠球菌、乳酸乳杆菌和乳酸片球菌的培养温度为33-36℃，起始pH为5.8-6.4，不通气，搅拌转速为120-200r/min，罐压为0.12-0.14MPa，培养时间15-20h；
所述嗜酸乳杆菌的培养温度为25-30℃，起始pH为6.0-6.4，通气量为1-3V/V/min，搅拌转速为180-220r/min，罐压为0.12-0.14MPa，培养时间15-23h；
所述产朊假丝酵母和酿酒酵母的培养温度为25-30℃，起始pH为4.6-5.0，通气量为1-3V/V/min，搅拌转速为380-420r/min，罐压为0.3-0.4MPa，培养时间45-50h。
本发明中，各菌的具体发酵参数如下：
优选地，步骤(5)所述菌体收集包括如下步骤：将以上放罐后的发酵液置于20℃冷激处理3h，6000rpm离心5min，去上清收集菌泥。
优选地，步骤(5)所述菌剂制备包括如下步骤：按蔗糖10％、脱脂牛乳10％、谷氨酸钠5％配比制备冻干保护剂；向菌泥中加入与弃去上清液等体积的保护剂，使菌体重悬，于-70℃预冻1.5h，再冷冻干燥，干燥完毕后将产品密封于胶袋中于-20℃备用。
优选地，步骤(6)所述的微贮添加剂的制备包括以下步骤：
(a)冻干剂单位质量活菌数测定：取出保存的冷冻干燥剂若干克，迅速加入4℃预冷的无菌蒸馏水于22℃振荡l0min，使菌体重悬，倍比稀释后活菌计数，确定冻干剂活菌数活菌计算公式：
W＝m/(n×V0/V1)
W＝单位质量活菌数，cfu/g；
m＝样品质量，g；
n＝菌落平均数，cfu；
V0＝菌落总体积，mL；
V1＝涂布用量，mL；
(b)根据每种菌剂单位质量活菌数按地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母和沼泽红假单胞菌的配比为(500-600)：(500-600)：(10000-75000)：(10000-73000)：(10000-75000)：(10000-73000)：(10000-73000)：(10000-65000)：(10000-60000)：(10000-75000)：(10000-75000)：(50-70)：1均匀混合，密封低温保藏，定期测定活菌数绘制活性曲线；其中所述配比单位为cfu。
第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的制备方法制备得到的微贮添加剂。
第三方面，本发明提供一种如第一方面所述的制备方法制备得到的微贮添加剂在制备秸秆饲料方面的应用。
优选地，所述制备秸秆饲料包括以下步骤：将微贮添加剂、麸皮、骨粉、豆粕和玉米粉加入秸秆中，25-35℃发酵3天，得到秸秆饲料。
优选地，所述微贮添加剂、麸皮、骨粉、豆粕、玉米粉和秸秆的比例为1:8:6:6:10:170。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
(1)本发明通过菌种间协同作用对秸秆进行发酵处理，可以快速提高秸秆发酵水平，弥补单一菌种分泌酶类及合成物质的不足，提高了发酵品质，同时产生的多种有机酸及菌体蛋白，能够提高秸秆的适口性，提高畜禽的采食量，显著提高畜禽的生产性能，同时解决了秸秆从田间运输难的问题，是一种安全环保、成本低廉的添加剂；
(2)本发明中的菌种来源优势，无毒安全，通过配比科学、能够提高秸秆处理性能，酶类的加入迅速将任何带有木素、纤维素的植物在25-35℃72小时发酵，粮食作物24小时发酵；
(3)本发明秸秆加入添加剂，25-35℃发酵3天，可使pH降到3.7，粗蛋白提高近6％，纤维素降低达15％，水分含量接近50％，腐败率低，色泽微黄，质地松软，气味醇香浓郁，且制备工艺简单实用；
(4)本发明微贮添加剂环保安全，在一定程度上解决了抗生素导致机体菌群失调、抗菌株产生、降低动物免疫等问题；
(5)本发明解决了微生物菌群最快扩繁速度减少设备投资10倍，发酵速度提高10倍，更主要的是在家畜肠道内产生的作用是其他任何生物菌群不可比拟的。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合本发明的优选实施例来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。
实施例1
所述的秸秆微贮添加剂的制备包括以下步骤：
(1)菌种活化
将保藏的地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母和沼泽红假单胞菌，分别置于灭菌的1％糖水中活化2h，芽孢菌再转接入已灭菌的普通肉汤培养基、乳酸菌转入MRS、酵母菌转入YPD斜面培养基中，置于28-35℃，待菌落长出后分别接入已灭菌的普通肉汤MRS、YPD培养基中，在与对应斜面培养基相同温度的摇床中培养24-48h；
(2)种子液制备
将已灭菌的500mL与试管培养基成分相同的13个锥形瓶培养基，摇瓶于32-34℃空白培养48h，检查确认无杂菌后包扎，用紫外线照1h备用；将普通肉汤培养基、MRS、YPD长出的菌落、挑单菌落于与其相对应的己灭菌的13个培养基锥形瓶中，置于28-35℃下摇瓶培养24-48h，镜检无杂菌后制成种子液；
(3)培养基配制及接种
(a)将发酵罐和所用设备121℃灭菌30min，维持罐压0.1MPa；
(b)配置培养基：将毛尖蘑菇菌、松茸蘑菇菌、灰树花蘑菇菌、鸡腿蘑、白蘑菇菌和黄蘑菇菌按2:2:1:3:1:1的比例制成蘑菇菌粉70kg放入蜂蜜3kg、红糖125kg，160℃高温消毒，加入井水160℃消毒，降温35℃后接菌，再加入淀粉酶1kg、麦芽糖酶1kg和木聚糖酶1kg，反应72小时产生自组互控菌群及产生生物酶；
(4)发酵
(5)菌体收集及菌剂制备
将以上放罐后的发酵液置于20℃冷激处理3h，6000rm1min离心5min，去上清收集菌泥；所述菌剂制备包括如下步骤：按蔗糖10％、脱脂牛乳10％、谷氨酸钠5％配比制备冻干保护剂；向菌泥中加入与弃去上清液等体积的保护剂，使菌体重悬，于-70℃预冻1.5h，再冷冻干燥，干燥完毕后将产品密封于胶袋中于-20℃备用；
(6)微贮添加剂的制备
(a)冻干剂单位质量活菌数测定：取出保存的冷冻干燥剂若干克，迅速加入4℃预冷的无菌蒸馏水于22℃振荡l0min，使菌体重悬，倍比稀释后活菌计数，确定冻干剂活菌数活菌计算公式：
W＝m/(n×V0/V1)
W＝单位质量活菌数，cfu/g；
m＝样品质量，g；
n＝菌落平均数，cfu；
V0＝菌落总体积，mL；
V1＝涂布用量，mL；
(b)根据每种菌剂单位质量活菌数按地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母和沼泽红假单胞菌的配比为600：600：75000：73000：75000：73000：73000：65000：60000：75000：75000：70：1均匀混合，密封低温保藏，定期测定活菌数绘制活性曲线；其中所述配比单位为cfu。
(7)将制备得到的微贮添加剂加入到玉米秸秆进行发酵，微贮3天后秸秆发酵效果明显，发酵基质有所收缩，色泽由微黄色变为金黄褐色，有酒曲醇香味，即甜、香、酸味。质地松散湿润，一捏成团，一触即散，将微贮后的秸秆进行检测，结果如表1所示。
表1检测结果
微贮玉米秸秆饲料中的粗蛋白和有机酸含量上升，纤维含量明显下降，使pH值下降到4.5以下，抑制了腐败菌的生长繁殖，玉米秸秆得到了软化，不仅改变了玉米秸秆的组织结构和适口性，贮存时间可延长10-15天。
实施例2
所述的秸秆微贮添加剂的制备包括以下步骤：
(1)菌种活化；
(2)种子液制备；
(3)培养基配制及接种；
(4)发酵；
(5)菌体收集及菌剂制备；其中，步骤(1)-(5)同实施例1；
(6)微贮添加剂的制备，包括以下步骤：
(a)冻干剂单位质量活菌数测定：取出保存的冷冻干燥剂若干克，迅速加入4℃预冷的无菌蒸馏水于22℃振荡l0min，使菌体重悬，倍比稀释后活菌计数，确定冻干剂活菌数活菌计算公式：
W＝m/(n×V0/V1)
W＝单位质量活菌数，cfu/g；
m＝样品质量，g；
n＝菌落平均数，cfu；
V0＝菌落总体积，mL；
V1＝涂布用量，mL；
(b)根据每种菌剂单位质量活菌数按地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母和沼泽红假单胞菌的配比为550：600：20000：30000：50000：60000：70000：10000：30000：40000：75000：60：1均匀混合，密封低温保藏，定期测定活菌数绘制活性曲线；其中所述配比单位为cfu。
(7)将制备得到的微贮添加剂加入到玉米秸秆进行发酵，微贮3天后秸秆发酵效果明显，发酵基质有所收缩，色泽由微黄色变为金黄褐色，有酒曲醇香味，即甜、香、酸味。质地松散湿润，一捏成团，一触即散，将微贮后的秸秆进行检测，结果如表2所示。
表2检测结果
微贮玉米秸秆饲料中的粗蛋白和有机酸含量上升，纤维含量明显下降，使pH值下降到3.8以下，抑制了腐败菌的生长繁殖，玉米秸秆得到了软化，不仅改变了玉米秸秆的组织结构和适口性，贮存时间延长了10-15天。
实施例3
制备得到的微贮添加剂的应用：
(1)准备菌液
取3～5克活干菌于500mL1％红糖水中活化1～2h，向复活的菌液中加入0.9％的生理盐水补至1000L均匀混合，备用。菌液当天用完，不可隔夜使用。菌液与处理秸秆用量见表3。
表3菌液配合比例
秸秆 秸秆重量(kg) 菌剂用量(g) 食盐用量(kg) 自来水用量(L)
黄玉米秸秆 1000 4 8 800
(2)秸秆的收集与预处理
收集成熟的黄玉米秸秆，弃去霉变、虫害严重的，风干后除去泥沙、石子、金属等颗粒杂物；用揉搓机将其切成5～8cm长的小段备用。
(3)发酵贮藏
将切好的秸秆喷洒菌液后，用自动打包机打包成包状，密闭严实即可贮存，发酵温度25～35℃。用这种方法贮存的秸秆，机械化程度强，生产效率高，饲料运输方便，便于生产销售。
(4)贮藏管理
每天检查秸秆有无鼠害，是否漏气，雨水渗入及有无霉变情况。
如发现局部漏气发生霉变要及时除去霉变部分重新洒上食盐密封好，雨水较多时要加强排水防止雨水渗入。
(5)饲喂
打包的的秸秆要重新揉碎后方可饲喂，第一次饲喂时应控制用量，从少到多与原来饲喂的草料混合，或者与精料补充料混合制成TMR日粮。
(6)结果
微贮3天后秸秆发酵效果明显，发酵基质有所收缩，色泽由微黄色变为金黄褐色，有酒曲醇香味，即甜、香、酸味。质地松散湿润，一捏成团，一触即散，将微贮后的秸秆进行检测，结果如表4所示。
表4检测结果
微贮玉米秸秆饲料中的粗蛋白和有机酸含量上升，使pH值下降到4.0以下，抑制了腐败菌的生长繁殖，玉米秸秆得到了软化，不仅改变了玉米秸秆的组织结构和适口性，而且能够贮存较长时间。
本发明对筛选的酵母菌、乳酸菌、芽孢杆菌等50种微生物进行反复组合筛选，优化最佳配方，确定了以纤维分解菌和改善肠道微生态环境菌群的最佳组合。该配方能有效分解纤维素、木质素、半纤维素，为肠道有益微生物厌氧发酵提供可溶性碳水化合物；不仅提高了秸秆的营养成分含量，而且有效改善了营养结构，提高了适口性，同时秸秆饲料中大量益生菌进入动物肠道，可在一定程度上调整动物消化道内环境，维持正常微生态平衡；同时降低了畜舍有害气体含量，改善了畜舍环境。
本发明利用微贮技术处理玉米秸秆生产微贮饲料，操作简单，玉米资源广泛，投资资金少，可以变废为宝，节省饲粮，实现生态、循环农业。大力推广微贮饲料，能带来良好的经济和社会效益。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种微贮添加剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母和沼泽红假单胞菌剂按单位质量活菌数比例为：(500-600)：(500-600)：(10000-75000)：(10000-73000)：(10000-75000)：(10000-73000)：(10000-73000)：(10000-65000)：(10000-60000)：(10000-75000)：(10000-75000)：(50-70)：1混合，制备得到微贮添加剂。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的微贮添加剂的制备包括以下步骤：
(1)菌种活化；
(2)种子液制备；
(3)培养基配制及接种；
(4)发酵；
(5)菌体收集及菌剂制备；
(6)微贮添加剂的制备。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的菌种活化包括如下步骤：将保藏的地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母和沼泽红假单胞菌，分别置于灭菌的1％红糖水中活化2h，芽孢菌再转接入已灭菌的普通肉汤培养基、乳酸菌转入MRS、酵母菌转入YPD斜面培养基中，置于28-35℃，待菌落长出后分别接入已灭菌的普通肉汤MRS、YPD培养基中，在与对应斜面培养基相同温度的摇床中培养24-48h；
优选地，步骤(2)所述的种子液制备包括如下步骤：将已灭菌的500mL与试管培养基成分相同的13个锥形瓶培养基，摇瓶于32-34℃空白培养48h，检查确认无杂菌后包扎，用紫外线照1h备用；将普通肉汤培养基、MRS、YPD长出的菌落、挑单菌落于与其相对应的己灭菌的13个培养基锥形瓶中，置于28-35℃下摇瓶培养24-48h，镜检无杂菌后制成种子液。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的培养基配制及接种包括如下步骤：
(a)将发酵罐和所用设备121℃灭菌30min，维持罐压0.1MPa；
(b)配置培养基：将毛尖蘑菇菌、松茸蘑菇菌、灰树花蘑菇菌、鸡腿蘑、白蘑菇菌和黄蘑菇菌按2:2:1:3:1:1的比例制成蘑菇菌粉放入蜂蜜、红糖，高温消毒，加入井水消毒，降温后分别接菌发酵，再加入淀粉酶、麦芽糖酶和木聚糖酶，反应72小时产生自组互控菌群及产生生物酶；
优选地，所述步骤(b)中蘑菇菌粉、蜂蜜和红糖的比例为70:3:125；
优选地，所述步骤(b)中的消毒温度为150-200℃，优选为160-180℃，进一步优选为160℃；
优选地，所述淀粉酶、麦芽糖酶和木聚糖酶的比例为1：1：1；
优选地，所述淀粉酶、麦芽糖酶和木聚糖酶的总酶量与蜂蜜的比为1:1。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述发酵的参数为：
所述地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌的培养温度为33-36℃，起始pH为7.0-7.2，通气量为1-3V/V/min，搅拌转速为280-320r/min，罐压为0.12-0.14MPa，培养时间45-50h；
所述两歧双歧杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、戊糖片球菌和沼泽红假单胞菌的培养温度为25-30℃，起始pH为6.2-6.4，通气量为1-3V/V/min，搅拌转速为180-220r/min，罐压为0.12-0.14MPa，培养时间18-28h；
所述乳酸肠球菌、乳酸乳杆菌和乳酸片球菌的培养温度为33-36℃，起始pH为5.8-6.4，不通气，搅拌转速为120-200r/min，罐压为0.12-0.14MPa，培养时间15-20h；
所述嗜酸乳杆菌的培养温度为25-30℃，起始pH为6.0-6.4，通气量为1-3V/V/min，搅拌转速为180-220r/min，罐压为0.12-0.14MPa，培养时间15-23h；
所述产朊假丝酵母和酿酒酵母的培养温度为25-30℃，起始pH为4.6-5.0，通气量为1-3V/V/min，搅拌转速为380-420r/min，罐压为0.3-0.4MPa，培养时间45-50h。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)所述菌体收集包括如下步骤：将以上放罐后的发酵液置于20℃冷激处理3h，6000rpm离心5min，去上清收集菌泥；
优选地，步骤(5)所述菌剂制备包括如下步骤：按蔗糖10％、脱脂牛乳10％、谷氨酸钠5％配比制备冻干保护剂；向菌泥中加入与弃去上清液等体积的保护剂，使菌体重悬，于-70℃预冻1.5h，再冷冻干燥，干燥完毕后将产品密封于胶袋中于-20℃备用。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(6)所述的微贮添加剂的制备包括以下步骤：
(a)冻干剂单位质量活菌数测定：取出保存的冷冻干燥剂若干克，迅速加入4℃预冷的无菌蒸馏水于22℃振荡l0min，使菌体重悬，倍比稀释后活菌计数，确定冻干剂活菌数；
(b)根据每种菌剂单位质量活菌数按地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母和沼泽红假单胞菌的配比为(500-600)：(500-600)：(10000-75000)：(10000-73000)：(10000-75000)：(10000-73000)：(10000-73000)：(10000-65000)：(10000-60000)：(10000-75000)：(10000-75000)：(50-70)：1均匀混合，密封低温保藏，定期测定活菌数绘制活性曲线；其中所述配比单位为cfu。
8.一种如权利要求1-7中任一项所述的制备方法制备得到的微贮添加剂。
9.一种如权利要求1-7中任一项所述的制备方法制备得到的微贮添加剂在制备秸秆饲料方面的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述制备秸秆饲料包括以下步骤：将微贮添加剂、麸皮、骨粉、豆粕和玉米粉加入秸秆中，25-35℃发酵3天，得到秸秆饲料。
优选地，所述微贮添加剂、麸皮、骨粉、豆粕、玉米粉和秸秆的比例为1:8:6:6:10:170。
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