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CN105377261B - 取代的吲哚‑5‑酚衍生物和它们的治疗应用 - Google Patents

取代的吲哚‑5‑酚衍生物和它们的治疗应用 Download PDF

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Abstract

本发明一般涉及化合物用于治疗多种障碍、疾病和病理学病症的用途，并且更具体地涉及取代的吲哚‑5‑酚衍生物调节蛋白激酶和治疗蛋白激酶介导的疾病的用途。

Description

取代的吲哚-5-酚衍生物和它们的治疗应用
优先权
本申请要求享有美国临时专利申请61/852，309(2013年3月15日提交)的权利，通过引用其全部将其引入本文。
发明领域
本发明一般涉及化合物在治疗多种障碍、疾病和病理学病症中的用途，并且更具体地涉及取代的吲哚-5-酚衍生物用于调节蛋白激酶和治疗蛋白激酶介导的疾病中的用途。
发明背景
蛋白激酶组成结构上相关的酶的大家族，所述酶负责控制细胞内多种信号传导过程。具有类似的250-300氨基酸催化结构域的蛋白激酶催化靶蛋白底物的磷酸化。
可以通过在磷酸化中的底物将激酶分类为不同家族(例如，蛋白-酪氨酸、蛋白-丝氨酸/苏氨酸、脂质等)。酪氨酸磷酸化在调节例如细胞增殖、迁移、分化和存活的多种生物过程中为中心事件。受体和非受体酪氨酸激酶的几种家族通过催化将磷酸盐从ATP转移至特定的细胞蛋白质靶点的酪氨酸残基来控制这些事件。已经确定序列基序，其一般相当于这些激酶家族中的每一个[Hanks等，FASEB J.，(1995)，9，576-596；Knighton等，Science，(1991)，253，407-414；Garcia-Bustos等，EMBO J.，(1994)，13:2352-2361)。蛋白激酶家族中的示例激酶包括但是不限定于：abl、Akt、bcr-abl、Blk、Brk、Btk、c-kit、c-Met、c-src、c-fms、CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、CDK10、cRaf1、CSF1R、CSK、EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4、Erk、Fak、fes、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、FGFR5、 Fgr、flt-1、Fps、Frk、Fyn、Hck、IGF-1R、INS-R、Jak、KDR、Lck、Lyn、MEK、p38、PDGFR、PIK、PKC、PYK2、ros、Tie、Tie-2、TRK、Yes和Zap70。
研究表明蛋白激酶在调节和维持多种多样的细胞过程和细胞功能中起中心作用。例如，激酶活性作为调节细胞增殖、激活和/或分化的分子的开关起作用。在很多疾病状态中已经观察到不受控制的或过度的激酶活性，所述疾病状态包括良性和恶性的增殖障碍以及由免疫系统的不适当的激活(自身免疫性障碍)、同种异体移植排斥和移植物抗宿主病产生的疾病。
已经报道很多疾病与由蛋白激酶介导的事件所导致的细胞性应答有关。这些疾病包括自身免疫性疾病、炎性疾病、骨疾病、代谢疾病、神经系统和神经变性疾病、癌症、心血管疾病、过敏症和哮喘症、阿尔茨海默病和激素相关的疾病。另外，内皮细胞特异性受体PTKs，例如VEGF-2和Tie-2，介导血管生成过程并参与支持癌症的发展和包括不受控制的血管化的其他疾病。因此，在药物化学中已经有实质上的努力来寻找作为治疗剂有效的蛋白激酶抑制剂。
很多癌症特征在于导致癌细胞不受控制的增长和增殖的细胞的发信号途径的中断。受体酪氨酸激酶(RTKs)在这些将胞外的分子信号传送至细胞的细胞质和/或细胞核中的发信号途径中起关键性的作用。RTKs为跨膜蛋白，其一般包含胞外的配体结合结构域、跨膜结构域和催化胞质酪氨酸激酶结构域。配体结合至胞外的部分被认为促进二聚作用，导致反式-磷酸化作用和激活胞内酪氨酸激酶结构域(Schlessinger等Neuron 1992；9:383-391)。
考虑到缺乏当前可用的用于与蛋白激酶有关的绝大多数病症的治疗选择，对抑制这些蛋白质靶点的治疗剂仍然有巨大需要。
发明概述
因此，本发明的主题为提供包含如式(I)描述的取代的吲哚-5-酚衍生物、其药学可接受的制剂的抗肿瘤剂，制备新型化合物和组合物 (使用该化合物)的方法。化合物和包含(I)的化合物的组合物具有治疗多种疾病的效用。
本文所述的组合疗法可以通过以下提供：制备式(I)的取代的吲哚-5-酚衍生物的和其他治疗剂(作为单独的药学制剂)，然后，同时、半同时、单独或经过定期间隔将其向患者施用。
本发明提供使用某些化合物例如激酶抑制剂来治疗许多疾病、障碍和病理的方法，例如癌症和血管障碍，例如心肌梗死(MI)、中风、或缺血。本发明所述的三嗪化合物除阻断其他受体和非受体激酶的活性之外，还可以阻断一些或许多Aurora激酶家族成员的酶的活性。该化合物可以有益于治疗以下疾病：其中，障碍影响细胞活动性、细胞粘着和细胞周期发展，另外，具有相关的含氧量低病症的疾病、骨质疏松症，以及产生于或有关血管内渗透性增加、炎性反应或呼吸性窘迫、肿瘤生长、肿瘤侵袭、肿瘤血管生成、肿瘤转移和细胞凋亡的病症。
附图简述
图1描述NTW-3475(本文中也被称为化合物81)在广泛的疾病中对广泛的激酶的激酶抑制活性。
图2描述NTW-3475对广泛的突变体激酶的激酶抑制活性。
图3描述NTW-3475的体外抗增殖活性。
图4描述经NTW-3475治疗的急性骨髓性白血病(AML)的异种移植研究中的动物的体重变化(体重变化为总体毒性的标志)。
图5描述NTW-3475在AML研究中的肿瘤体积曲线，其显示抗肿瘤活性。
图6描述NTW-3475的相对抗肿瘤活性，所述相对肿瘤活性根据NTW-3475治疗的动物的肿瘤体积/仅给予阴性对照剂的AML肿瘤体积。
图7描述使用NTW-3475治疗慢性髓性白血病(CML)的异种移植研究中的动物的体重变化。
图8描述胰腺癌的异种移植研究中经NTW-3475治疗的和对照小鼠 的肿瘤体积曲线对(v.)时间。
图9描述使用NTW-3475的异种移植中的动物的体重变化(总体毒性的标志)。
图10描述NTW-3475的相对抗增殖活性，所述相对抗增殖活性根据经NTW-3475治疗的动物中的肿瘤体积/经NTW-3475或对照剂治疗的肿瘤体积。
图11描述NTW-3475的相对抗增殖活性，所述抗增殖活性根据经NTW-3475治疗的动物中的肿瘤体积/经对照剂治疗的动物中的肿瘤体积。
图12描述NTW-3475在其用于甲状腺癌的研究中的重量曲线。
图13描述NTW-3475治疗的甲状腺癌异种移植模型的肿瘤体积对时间曲线。
图14描述在使用异种移植模型的子宫内膜癌的研究中，单独接受NTW-3475治疗或与纳米粒白蛋白结合紫杉醇的组合治疗期间的动物的体重变化。
图15描述NTW-3475在子宫内膜癌研究中与或不与一起施用的肿瘤体积曲线。
图16描述NTW-3475和)的相对抗增殖活性，所述相对抗增殖活性根据来自子宫内膜癌模型研究中的治疗的动物中的肿瘤体积/给予对照剂的小鼠中的肿瘤体积。
图17描述使用异种移植模型的胰腺癌的NTW-3475和纳米粒、白蛋白结合紫杉醇的肿瘤体积曲线。
图18描述接受胰腺癌的-NTW-3475组合疗法期间(使用异种移植模型)对动物体重(总体毒性的标志)的影响。
图19描述NTW-3475和的组合疗法的％T/C(使用胰腺癌的异种移植模型)。
图20总结NTW-3475的体外活性。
图21总结NTW-3475的体内(异种移植)药理学性质。
图22描述NTW-3456(在本文中也被称为化合物87)在广泛的癌症 中对广泛的激酶的激酶抑制活性。
图23描述NTW-3456对广泛的突变体激酶的激酶抑制活性。
图24描述NTW-3456对突变体abl激酶的激酶抑制活性。
图25描述NTW-3456的体外抗增殖活性。
图26描述NTW-3456的示例抗增殖和磷酸化作用的抑制活性。
图27描述使用NTW-3456的AML异种移植中的动物的体重变化(总体毒素的标志)。
图28描述NTW-3456治疗的动物的肿瘤体积曲线，其显示在AML模型系统中的抗肿瘤活性。
图29描述NTW-3456的抗肿瘤活性，所述抗肿瘤活性根据治疗的动物中的肿瘤体积/未治疗的动物中的肿瘤体积。
图30描述使用NTW-3456的AML异种移植中的动物的体重变化(总体毒性的标志)。
图31描述NTW-3456治疗的动物的肿瘤体积曲线，其显示在AML模型系统中的抗肿瘤活性。
图32描述NTW-3456的肿瘤活性，所述肿瘤活性根据治疗的动物中的肿瘤体积/未治疗的动物中的肿瘤体积。(图27-29和30-32为单独的实验)。
图33证明患有MV4-11人急性骨髓性白血病的SCID小鼠单次口服给予50mg/kgNTW-3456之后的PK和pFlt3抑制之间的相关性。
图34描述NTW-3456治疗的动物和对照动物的肿瘤体积曲线，其显示在CML模型系统中的抗肿瘤活性。
图35描述NTW-3456的肿瘤活性，所述肿瘤活性根据CML模型系统中的治疗的动物中的肿瘤体积/对照动物中的肿瘤体积。
图36描述甲状腺癌模型系统中接受NTW-3456期间的动物体重(总体毒性的标志)的重量时间过程。
图37描述NTW-3456治疗的动物和对照动物的肿瘤体积曲线，其显示在甲状腺癌模型系统中的抗肿瘤活性。
图38描述NTW-3456的肿瘤活性，所述肿瘤活性根据甲状腺癌模 型系统中治疗的动物中的肿瘤体积/对照动物中的肿瘤体积。
图39描述NTW-3456在子宫内膜癌模型系统中的重量时间过程(总体毒性的标志)。
图40描述NTW-3456治疗的动物的肿瘤体积曲线，其显示在子宫内膜癌模型系统中的抗肿瘤活性。
图41描述NTW-3456的肿瘤活性，所述肿瘤活性根据子宫内膜癌模型系统中治疗的动物中的肿瘤体积/对照动物中的肿瘤体积。
图42描述胰腺癌模型系统中接受NTW-3456期间的动物体重的重量时间过程(总体毒性的标志)。
图43描述NTW-3456治疗的动物的肿瘤体积曲线，其显示在胰腺癌模型系统中的抗肿瘤活性。
图44描述NTW-3456的肿瘤活性，所述肿瘤活性根据胰腺癌模型系统中治疗的动物中的肿瘤体积/对照动物中的肿瘤体积。
图45描述MiaPaCa-2胰腺癌模型系统中接受NTW-3456单一或与 的一起二元药物疗法期间的包括动物体重的重量时间过程(总体毒性的标志)。
图46描述NTW-3456单一或与Abraxane一起的二元药物疗法治疗的动物和对照动物的肿瘤体积曲线，其显示在MiaPaCa-2胰腺癌模型系统中的抗肿瘤活性。
图47描述NTW-3456单独或与一起的抗肿瘤活性，所述抗肿瘤活性根据MiaPaCa-2胰腺癌模型系统中治疗动物中的肿瘤体积/对照动物中的肿瘤体积。
图48描述Panc-1胰腺癌模型系统中的NTW-3456单一或与 一起的二元药物疗法的重量时间过程(总体毒性的标志)。
图49描述对照动物、NTW-3456单一或与一起的二元药物疗法治疗的动物的肿瘤体积曲线，其显示在Panc-1胰腺癌模型系统中的抗肿瘤活性。
图50总结NTW-3456的体内药理学性质。
图51显示NTW-3456对于MiaPaCa-2细胞和BxPC3细胞中的信号 转导效应。
图52显示NTW-3475在MiaPaCa-2细胞和BxPC3细胞中的信号转导效应。
图53总结NTW-3456和NTW-3475的抑制活性。
图54描述NTW-3456对于K562细胞生长的抑制活性。
图55描述NTW-3456对于K562细胞中在pCrl抑制上的抑制活性。
图56描述NTW-3456在K562细胞中在半胱天冬酶3/7诱导上的抑制活性。
图57总结NTW-3456的抑制活性。
图58显示BaF3细胞中对于FGFR1-FGFR-4抑制的NTW-3456剂量响应曲线。
图59总结NTW-3456对于成纤维细胞生长因子受体的抑制活性。
图60描述化合物10和11抑制K562人慢性髓性白血病异种移植(IP)中的肿瘤生长。
图61描述化合物10和11在K562人慢性髓性白血病异种移植(IP)中的体重变化。
图62描述化合物10抑制K562人慢性髓性白血病异种移植(PO)中的肿瘤生长。
图63描述化合物10在K562人慢性髓性白血病异种移植(PO)中的体重变化。
图64描述化合物53抑制K562人慢性髓性白血病异种移植(PO)中的肿瘤生长。
图65描述化合物10抑制TT人甲状腺癌异种移植(PO)中的肿瘤生长。
图66描述化合物10在裸鼠中TT人甲状腺癌异种移植(PO)模型中的肿瘤生长中的体重变化。
图67描述化合物53抑制裸鼠中的TT人甲状腺癌异种移植(PO)中的肿瘤生长。
图68描述化合物53在裸鼠中TT人甲状腺癌异种移植模型(PO) 中的肿瘤生长中的体重变化。
图69描述化合物88抑制TT人甲状腺癌异种移植中的肿瘤生长。
图70描述化合物11抑制MV-4-11人急性骨髓性白血病(AML)异种移植模型(IP)中的肿瘤生长。
图71描述化合物68和化合物82抑制MV-4-11人急性骨髓性白血病(AML)异种移植模型中的肿瘤生长。
图72描述化合物抑制裸鼠(CM-X01303)中MiaPaCa-2人胰腺癌异种移植(IP)中的肿瘤生长。
图73描述化合物对裸鼠中MiaPaCa-2人胰腺癌异种移植(IP)的肿瘤生长的体重变化。
图74描述化合物68和82作为单一剂和它们与Abraxane的组合在裸鼠中MiaPaCa-2人胰腺癌异种移植中的功效。
图75描述化合物53在裸鼠中U251人CNS癌异种移植中的功效。
图76描述化合物53在裸鼠中SC LOX IMVI人黑色素瘤癌异种移植中的功效。
发明详述
本发明涉及具有通式(I)的化合物
或其药学可接受的盐，其中:
Z1、Z2、Z3和Z4独立地为N或如下所述；
R选自:
(i)氢、氨基、烷基氨基；
(ii)C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基；
(iii)K-Ar。
Ar表示杂芳基或芳基，所述杂芳基或芳基的每个被0至4个取代基取代，所述取代基独立选自:
(1)卤素、羟基、氨基、酰胺、氰基、-COOH、-SO2NH2、氧代、硝基和烷氧基羰基；和
(2)C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C10环烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷酰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、单-和二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺酰基、单-和二-(C1-C6烷基)磺酰氨基以及单-和二-(C1-C6烷基)氨基羰基；苯基C0-C4烷基和(4-至7-元杂环)C0-C4烷基，前述基团的每个都被0至4个二级取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、氰基、氧代、亚氨基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基和C1-C4卤代烷基。
K选自
a)O、S、SO、SO2；
b)(CH2)m、m＝0-3，-O(CH2)p、p＝1-3，-S(CH2)p、p＝1-3，-N(CH2)p、p＝1-3，-(CH2)pO、p＝1-3；
c)NR1
R1表示氢、烷基、环烷基、烯基、炔基、烷硫基、芳基、芳基烷基。
(iv)式(Ia)的基团:
其中:
R2表示氢、C1-C4烷基、氧代；
当R3为氢时，X为CH；或X-R3为O；或X为N，R3表示以下的基团：氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C10芳基或杂芳基、(C3-C7环烷基)C1-C4烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C2-C6 烷酰基、C1-C6烷氧基羰基、C2-C6烷酰基氧基、单-和二-(C3-C8环烷基)氨基C0-C4烷基、(4-至7-元杂环)C0-C4烷基、C1-C6烷基磺酰基、单-和二-(C1-C6烷基)磺酰氨基，以及单-和二-(C1-C6烷基)氨基羰基，前述基团的每个都被0至4个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、氰基、氨基、-COOH和氧代。
R11和R12独立选自氢、F、Cl、Br、CN、C1-C4烷基、C1-C6烷氧基。
R13、R14和R15独立选自氢、C1-C4烷基、C2-C6烯基、CF3、CF2H、CFH2、C2-C6炔基、C3-C10芳基或杂芳基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C2-C6烷酰基、C1-C6烷氧基羰基、C2-C6烷酰基氧基。
环A选自以下基团:
Rx和Ry-独立选自T-R4、或Rx和-Ry与它们的插入原子一起形成稠合的、不饱和或部分不饱和的、具有0-3个环杂原子的5-7元环，所述杂原子选自氧、硫，或氮，其中由Rx和Ry形成的所述稠合的环上的任何可取代的碳被氧代或T-R4取代，以及由Rx和Ry形成的所述环上的任何可取代的氮被R5取代；
T为价键或C1-4亚烷基链；
R4选自-R6、-卤素、-OR6、-C(＝O)R6、-CO2R6、-COCOR6、-COCH2COR6、-NO2、-CN、-S(O)R6、-S(O)2R6、-SR6、-N(R5)2、-CON(R7)2、-SO2N(R7)2、-OC(＝O)R6、-N(R7)COR6、-N(R7)CO2(任选取代的C1-6脂族基)、-N(R5)N(R5)2、-C＝NN(R5)2、-C＝N-OR6、-N(R7)CON(R7)2、-N(R7)SO2N(R7)2、-N(R4)SO2R6，或-OC(＝O)N(R7)2；
每个R6独立选自氢或选自以下的任选取代的基团：C1-6脂族基、C6-10芳基、具有5-10个环原子的杂芳基环，或具有5-10个环原子的杂环基环；
每个R5独立选自-R7、-COR7、-CO2(C1-6脂族基)、-CON(R7)2，或-SO2R7，或在相同氮上的两个R5一起形成5-8环的杂环基或杂芳基环；
每个R7独立选自氢或任选取代的C1-6脂族基基团，或在相同氮上的两个R7与氮一起形成5-8元的杂环基或杂芳基环；
R8选自-R6、卤素、-OR6、-C(＝O)R6、-CO2R6、-COCOR6、-NO2、-CN、-S(O)R6、-SO2R6、-SR6、-N(R4)2、-CON(R5)2、-SO2N(R5)2、-OC(＝O)R6、-N(R5)COR6、-N-(R5)CO2(任选取代的C1-6脂族基)、-N(R5)N(R5)2、-C＝NN(R5)2、-C＝N-OR6、-N(R5)CON(R5)2、-N(R5)SO2N(R5)2、-N(R5)SO2R6，或-OC(＝O)N(R5)2。
在二环的环系统包含环A的前提下，Rx和Ry(分别在位置Z3和Z4)可以一起形成稠合的环。或者，在二环的环系统包含环A的前提下，R和Z2也可以一起形成稠合的环。优选的Rx/Ry和R/Z2环包括具有0-2个杂原子的5-、6-，或7-元不饱和的或部分不饱和的环，其中所述Rx/Ry和R/Z2环任选被取代。环A系统的示例如下通过从化合物I-1至I-26所示，其中Z1至Z4为氮或C(R8)。
优选的二环的环A系统包括I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-14、I-15、I-16、I-17、I-19、I-23和I-24，更优选I-1、I-2、I-3、I-5、I-8、I-14、I-15、I-16、I-17、I-19、I-23和I-24，以及最优选I-1、I-14、I-16和I-19。
在单环的环A系统中，当优选的Rx基团存在时，其包括氢、烷基-或二烷基氨基、乙酰氨基，或C1-4脂族基基团例如甲基、乙基、环丙基、异丙基或叔丁基。当优选的Ry基团存在时，其包括T-R4，其中T为价键或亚甲基和R4为-R6、-N(R5)2，或-OR6。优选的Ry的示例包括2-吡啶基、4-吡啶基、哌啶基、甲基、乙基、环丙基、异丙基、叔-丁基、烷基-或二烷基氨基、乙酰氨基、任选取代的苯基(例如苯基或卤素取代的苯基和甲氧基甲基)。
在二环的环A系统中，当Rx和Ry一起时形成的环可以为取代的或未取代的。合适取代基包括-R6、卤素、-OR6、-C(＝O)R6、-CO2R6、-COCOR6、-NO2、-CN、-S(O)R6、-SO2R6、-SR6、-N(R5)2、-CON(R5)2、-SO2N(R5)2、-OC(＝O)R6、-N(R4)COR6、-N(R5)CO2(任选取代的C1-6脂族基)、
-N(R5)N(R5)2、-C＝NN(R5)2、-C＝N-OR6、-N(R5)CON(R5)2、-N(R5)SO2N(R5)2、-N(R5)SO2R6或-OC(＝O)N(R5)2，其中R和R5如上定义。优选的Rx/Ry环取代基包括-卤素、-R6、-OR6、-COR6、-CO2R6、-CON(R5)2、-CN，或-N(R5)2其中R6为氢或任选取代的C1-6脂族基基团。
对治疗激酶介导的疾病特别有用的实施方式涉及式IIa、IIb和IIc的化合物:
或其药学可接受的衍生物或前药，其中；
R选自:
(i)氢、氨基、烷基氨基；
(ii)C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基；
(iii)K-Ar。
Ar表示杂芳基或芳基，所述杂芳基或芳基的每个都被0至4个取代基取代，所述取代基选自:
(1)卤素、羟基、氨基、酰胺、氰基、-COOH、-SO2NH2、氧代、硝基和烷氧基羰基；和
(2)C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C10环烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷酰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、单-和二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺酰基、单-和二-(C1-C6烷基)磺酰氨基以及单-和二-(C1-C6烷基)氨基羰基；苯基C0-C4烷基和(4-至7-元的杂环)
C0-C4烷基，前述基团的每个都被0至4个二级取代基取代，所述二级取代基独立选自卤素、羟基、氰基、氧代、亚氨基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基和C1-C4卤代烷基。
K选自
a)O、S、SO、SO2；
b)(CH2)m、m＝0-3，-O(CH2)p、p＝1-3，-S(CH2)p、p＝1-3，-N(CH2)p、p＝1-3，-(CH2)pO、p＝1-3；
c)NR1
R1表示氢、烷基、环烷基、烯基、炔基、烷硫基、芳基、芳基烷基。
(iv)式(Ia)的基团:
其中:
R2表示氢、C1-C4烷基、氧代；
当R3为氢时，X为CH；或X-R3为O；或X为N，R3表示以下基团：氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C10芳基或杂芳基、(C3-C7环烷基)C1-C4烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C2-C6烷酰基、C1-C6烷氧基羰基、C2-C6烷酰基氧基、单-和二-(C3-C8环烷基)氨基C0-C4烷基、(4-至7-元杂环)C0-C4烷基、C1-C6烷基磺酰基、单-和二-(C1-C6烷基)磺酰氨基和单-和二-(C1-C6烷基)氨基羰基，前述基团的每个都被0至4个取代基取代，所述取代基选自卤素、羟基、氰基、氨基、-COOH和氧代。
Het选自任何杂环，其被0至4个取代基取代，所述取代基独立选自：
(i)C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基；
(ii)卤素、羟基、氨基、酰胺、氰基、-COOH、-SO2NH2、氧代、硝基和烷氧基羰基，
(iii)芳基。
吲哚上的取代基如下:
R11和R12独立选自:氢、F、Cl、Br、CN、C1-C4烷基、C1-C6烷氧基。
R13、R14和R15独立选自氢、C1-C4烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C10芳基或杂芳基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C2-C6烷酰基、C1-C6烷氧基羰基、C2-C6烷酰基氧基。
以下列出优选的式(I)的R基团:
优选的式(II)的Het基团在以下列出，其中取代基可以为此处定义的特定取代基，或者可以为一个或多个如上定义的取代基:
R’选自
(i)氢；
(ii)C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基；
(iii)芳基，其可以具有1-4个光学上的取代基；
(iii)-C(＝O)R6、(以下描述R6)。
以下列出优选取代的式(I)的吲哚基团:
本发明的实施方式包括:
在另一实施方式中提供制备本发明的化合物的方法。本发明的化合物一般可以使用4，6-二氯-2-甲基磺酰基嘧啶、或2，4，6-三氯嘧啶、或4，6-二氯-2-(甲基硫代)嘧啶作为起始物质来制备。化合物(I)可以包含许多立体异构体、几何异构体、互变异构体等。本发明包括全部可能的异构体和它们的混合物，并且不特别限定混合比例。
本发明的式(IIa、IIb和IIc)的嘧啶衍生物化合物可以从商购可得的前体使用已公认的方法合成。例如，类似于任何以下方案中显示的反应途径可以与合成有机化学领域已知的、或与此相关的本领域技术人员理解的变化一起使用。以下方案中的每个变化是指与本文提供的化合物的记载一致的任何组。
在随后的方案中，术语”还原”是指将硝基官能度还原成氨基官能度的过程、或将酯官能度转化成醇的过程。硝基基团的还原可以通过有机合成领域技术人员熟知的许多方法进行，所述方法包括，但是不限定于，催化的氢化、经SnCI2的还原和经二氯化钛的还原。在随后的方案中，术语“水解”是指底物或反应物与水的反应。更具体地说，“水解”是指酯或亚硝酸酯官能度至羧酸的转化。该过程可以通过多种有机合成领域技术人员熟知的酸或碱催化。
式(IIa、IIb和IIc)的化合物可以通过使用已知的化学反应和程序制备。提出以下总的制备方法与更详细的实施例(在描述工作实施例的实验部分提出)一起帮助本领域技术人员合成抑制剂。
如式(III)定义的丙烯基-吡唑胺不是商购可得的。它可以通过一些较早记载的方法(参见，例如，美国临时申请号61/555738)制备。
式(IV)定义的取代的吲哚-5-酚的前体可以从供应商处购买，或使用已公认的方法从商购可得的前体合成。(WO 2004/009542，第33-38页；Journal of MedicinalChemistry，2006，第49卷，第7号，第2143-2146页；Org.Lett.第10卷，第12号，2008，第2369-2372页；WO 00/47212，第245-250页；WO 2009036055 A1，第57页)。
特别的，以前没有报道过如式(IVa)定义的前体4-7-二氟吲哚-5-酚，并且其可以用同样的方法制备。
例如，如流程1所说明，可以从商购可得的起始物质通过几个步骤制备前体(IV)。也可以使用许多合成途径来制备该化合物。
流程1
本发明的式(IIa，IIb和IIc)的化合物的制备可以通过本领域已知的方法进行。
如流程2所示，嘧啶衍生物(IIa)可以通过以下合成：将2，4，6-三氯嘧啶、或4，6-二氯-2-(甲基磺酰基)嘧啶与一系列的取代的吲哚-5-酚反应以产生化合物b的二氯嘧啶中间体，所述中间体可以与WH反应来产生化合物c的高级单氯中间体。可以通过增加温度来实现RH置换最后的氯，以提供最终的化合物(IIa)。该反应可以分步地或以一锅法完成。备选的顺序也可以用来制备嘧啶衍生物。同理，也可以合成化合物IIb和IIc。
流程2
反应优选在惰性溶剂的存在下进行。在使用的溶剂对反应或者涉及的反应物没有副作用，并且使用的溶剂可以至少某种程度地溶解所述反应物，则对使用的溶剂的本质没有特别的限制。合适溶剂的示例包括:脂肪族烃类，例如己烷、庚烷、轻石油和石油醚；芳香烃类，例如苯、甲苯和二甲苯；卤代烃类，特别是芳香和脂肪烃类，例如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、氯苯以及二氯苯；酯类，例如甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯和碳酸二乙酯；醚类，例如乙醚、二异丙醚、四氢呋喃、二噁烷、二甲氧基乙烷和二乙二醇二甲基醚；酮类，例如丙酮、甲基乙基酮、甲基异丁基酮、异佛尔酮和环己酮；硝基化合物，其可以为硝基烷类或芳硝基化合物(nitroaranes)，例 如硝基乙烷和硝基苯；腈类，例如乙腈和异丁腈；酰胺类，其可以为脂肪酸酰胺类，例如甲酰胺、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺和六甲基磷酸三酰胺；和亚砜类，例如二甲基亚砜和环丁砜。
反应可以在广泛范围的温度下进行，并且精确的反应温度对本发明不是关键的。总的来说，申请人发现反应在-50℃至100℃的温度下方便地进行。
本发明提供物质的组合物，其为一种或多种活性药物和药学可接受的载体的制剂。在这方面，本发明提供施用于哺乳动物受试者的组合物，其可以包含式I的化合物、或其药学可接受的盐。
本发明化合物的药学可接受的盐包括从药学可接受的无机和有机酸和碱得到的那些药学可接受的盐。合适酸的盐的示例包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、葡庚酸盐(glucoheptanoate)、甘油磷酸盐、羟乙酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、palmoate、pectinate、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐(3-phenyl propionate)、硫酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一酸盐。其他酸，例如草酸，当它们自身不为药学可接受的形式时，可以在盐的制备中使用，所述盐作为中间体用于得到本发明的化合物和它们药学可接受的酸加成盐。
从适当的碱得到的盐包括碱金属(例如，钠和钾)盐、碱土金属(例如，镁)盐、铵盐和N+(C1-4烷基)4盐。本发明也设想本文公开的任何化合物的包含碱性氮的基团的季铵化作用。也可以通过该季铵化作用得到水溶或油溶的或可分散的产物。
本发明的组合物可以口服地、肠胃外地施用，通过吸入喷雾、局部地、经鼻地、颊部地、阴道地或经由植入型储库施用。本文所用的 术语“肠胃外的”包括皮下的、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜腔内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或灌输技术。组合物优选口服、腹膜内或静脉内施用。
本发明药学上可接受组合物可以以任何口服接受的剂型口服施用，所述剂型包括但是不限定于，胶囊剂、片剂、药片、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂、咀嚼胶剂、水混悬剂或溶液剂
口服的组合物可以包括额外的成分例如:粘合剂例如微晶纤维素、黄蓍树胶或明胶；赋形剂例如淀粉或乳糖，崩解剂例如海藻酸、玉米淀粉等；润滑剂例如硬脂酸镁；助流剂例如胶体二氧化硅；和甜味剂例如蔗糖或糖精，或矫味剂例如薄荷、水杨酸甲酯、或柑橘调味料。当单位剂型为胶囊时，其可以额外地包含液体载体例如脂肪油。其他单位剂型可以包含许多其它物质，所述物质改变剂量单元的物理形式，例如，包衣。因此，片剂或者丸剂可以用糖、虫胶、或其他肠溶包衣剂包衣。在活性成分之外，糖浆剂还可以包含作为甜味剂的蔗糖和一些防腐剂、染料和着色剂和香料。用于制备这些许多组合物的物质应该在使用的量为药学上或兽医学上纯的和无毒的。
为了肠胃外治疗的施用，可以将活性成分并入溶液剂或混悬剂中。该溶液剂或混悬剂也可以包含以下成分:无菌的稀释剂例如注射用水、盐水溶液、不挥发油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成的溶剂；抗菌剂例如苯甲醇或羟苯甲酸甲酯；抗氧化剂例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂例如乙二胺四乙酸；缓冲剂例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐以及用于调节张度的试剂例如氯化钠或右旋糖。可以将肠胃外的制剂封闭在安瓿瓶、一次性注射器或由玻璃或塑料所制成的多剂量小瓶中。
适于注射使用的药物形式包括无菌溶液剂、分散剂、乳剂和无菌粉剂。最终形式在生产和储存的条件下应该为稳定的。另外，最终的药物形式应该防止污染，因此，其应该能够抑制微生物例如细菌或真菌的生长。可以施用单次静脉内的或腹膜内的剂量。或者，可以使用缓释长期的灌输或多重短期的每日灌输，典型地持续1至8天。可以 使用间隔天的给药或每几天一次的给药。
可以通过将所需要量的化合物掺入一种或多种适当的溶剂中来制备无菌的、可注射的溶液剂，可以按照需要将以上列出的或本领域技术人员已知的其他成分加入至所述溶剂中。可以通过将所需要量的化合物与许多其他所需要的成分一起掺入适当的溶剂中来制备无菌的可注射的溶液剂。然后可以接着进行例如过滤的灭菌程序。典型地，可以通过将化合物掺入无菌载体中制备分散剂，所述无菌载体也包含分散介质和如上指出的所需要的其他成分。在无菌粉剂的情况中，优选办法包括真空干燥或冻干所述无菌粉剂(加入任何所需要的成分)。
合适的药物载体包括无菌水；盐水、右旋糖；水中或盐水中的右旋糖；蓖麻油和环氧乙烷的缩合产物，每摩尔蓖麻油合并约30至约35摩尔的环氧乙烷；液体酸；低级链烯醇；油例如玉米油；花生油、芝麻油等，与乳化剂例如脂肪酸的甘油单酯或甘油二酯、或磷脂，例如，卵磷脂等一起；二醇类；聚亚烷基二醇；含水介质，在混悬剂存在下，例如，羧甲基纤维素钠；藻酸钠；聚乙烯吡咯烷酮；等，单独，或与合适的分散剂例如卵磷脂一起；聚氧乙烯硬脂酸酯等。该载体也可以包括与渗透促进剂一起的辅料(例如保存稳定剂、润湿剂、乳化剂等)。在所有情况中，所记录的最终形式必须为无菌的，并且也应该能够容易地通过注射装置例如空心针。可以通过合适选择溶剂或赋形剂实现合适的粘性。此外，可以使用分子的或粒子的包衣(例如卵磷脂)、合适选择分散剂中粒子大小、或使用具有表面活性剂性质的物质。
本发明提供包含三嗪衍生物的组合物，以及用于体内递送纳米粒形式的三嗪衍生物(适合任何以上所述的施用途径)的方法。
美国专利号5916596、6506405和6537579教导从生物相容的聚合物(例如白蛋白)制备纳米粒。因此，本发明提供用于从水包油乳剂，在高剪力(例如声处理、高压均浆或等)的条件下，通过溶剂蒸发技术形成纳米粒的方法。
或者，本发明的药学可接受的组合物可以以用于直肠给药的栓剂形式施用。这些可以通过将药剂与合适的不刺激的赋形剂混合来制备， 所述赋形剂在室温下为固体，但是在直肠温度下为液体，所以其将在直肠中熔化释放药物。该物质包括可可脂、蜂蜡或聚乙二醇。
特别当治疗靶标包括通过局部应用可以容易地接近的区域或器官时，本发明药学可接受的组合物也可以局部地施用，所述治疗靶标包括眼、皮肤或低位肠道的疾病。容易制备用于这些区域或器官的每个的合适的局部制剂。
可以以直肠的栓剂制剂(参见上文)或合适的灌肠剂制剂进行低位肠道的局部应用。也可以使用局部的-经皮的贴剂。
对于局部应用，药学可接受的组合物可以配制为包含混悬的或溶解在一种或多种载体中的活性成分的合适的软膏剂。用于本发明的化合物局部应用的载体包括但是不限定于，矿物油、液体石蜡、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，药学可接受的组合物可以制备为合适的洗剂或乳膏剂的形式，所述组合物包括混悬于或溶于一种或多种药学可接受的载体的活性成分。合适的载体包括，但是不限定于，矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨酯60、十六烷基酯蜡、棕榈油、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
对于眼科使用，药学可接受的组合物可以配制在等渗的、pH调节的无菌盐水中的微粒化混悬剂，或者，优选在等渗的、pH调节的无菌盐水中的溶液剂，所述混悬剂或溶液剂含有或不含有防腐剂，例如苯扎氯铵。或者，对于眼科使用，药学可接受的组合物可以配制为例如凡士林的软膏剂。
药学可接受的组合物也可以通过鼻气雾剂或吸入剂施用。该组合物可以根据药物制剂领域熟知的技术制备，并且可以配制为在盐水中的溶液剂，使用苯甲醇或其他合适的防腐剂、吸收促进剂来增强生物使用度，氟碳化合物和/或其他常规增溶剂或分散剂。
最优选地，将本发明药学可接受的组合物配制用于口服给药。
根据本发明，本发明的化合物可以用于治疗与细胞增殖或增殖过度有关的疾病，例如癌症，其包括但是不限定于鼻腔、鼻旁窦、鼻咽、口腔、口咽、喉、下咽、唾液腺的肿瘤和副神经节瘤。本发明的化合 物也可以用于治疗肝和胆系的癌症(特别是肝细胞癌)，肠癌，特别是结肠直肠癌，卵巢癌，小细胞和非小细胞肺癌、乳腺癌、肉瘤(包括纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、胚胎成横纹肌细胞肉瘤(embryonal rhabdomysocarcoma)、平滑肌肉瘤(leiomysosarcoma)、神经纤维肉瘤、骨肉瘤、滑膜肉瘤、脂肪肉瘤和软组织腺泡状肉瘤)、中枢神经系统的肿瘤(特别是脑癌)，以及淋巴瘤(包括霍奇金淋巴瘤、淋巴浆细胞样淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、粘膜相关淋巴样组织淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤、B-谱系大细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤和T-细胞渐变性大细胞淋巴瘤)。
本发明的化合物和方法，当单独或与其他药剂(例如，如下所述的化疗剂或蛋白质治疗剂)组合施用时，也用于治疗许多障碍，所述障碍包括但是不限定于，例如:中风、心血管病、心肌梗死、充血性心力衰竭、心肌病、心肌炎、缺血性心脏病、冠脉疾病、心源性休克、血管性休克、肺动脉高血压、肺水肿(包括心源性肺水肿)、胸腔积液、风湿样关节炎、糖尿病视网膜病变、色素性视网膜炎和视网膜病变，包括糖尿病视网膜病变和早产儿视网膜病、炎性疾病、再狭窄、哮喘症、急性或成人呼吸窘迫综合症(ARDS)、狼疮、血管渗漏，免于局部缺血的或再灌注损伤(例如在器官移植和移植耐受诱导过程中招致的局部缺血的或再灌注损伤)；血管成形术之后的局部缺血的或再灌注损伤；关节炎(例如风湿样关节炎、牛皮癣关节炎或骨关节炎)；多发性硬化；炎症性肠病，包括溃疡性结肠炎和克罗恩病；狼疮(全身性红斑狼疮)；移植物抗宿主疾病；T-细胞介导的超敏反应疾病，包括接触性超敏反应、迟发型超敏反应和谷蛋白敏感性肠病(乳糜泻)；1型糖尿病；银屑病；接触性皮炎(包括有毒常春藤导致的接触性皮炎)；桥本甲状腺炎；干燥综合征；自身免疫性甲状腺功能亢进症，例如格雷夫斯病；阿狄森病(肾上腺的自身免疫性疾病)；自身免疫性多腺病(也被称为自身免疫性多内分泌腺综合征)；自身免疫性脱发；恶性贫血；白癜风；自身免疫性垂体功能减退症；格-巴二氏综合征；其他自身免疫性疾病；癌症，包括那些激酶(例如Src-家族激酶)激活或过度表达的癌症，例如结肠 癌和胸腺瘤，或激酶活性促进肿瘤生长或存活的癌症；肾小球肾炎、血清病；荨麻疹；过敏性病例如呼吸系统的过敏(哮喘症、花粉热、变应性鼻炎)或皮肤过敏；蕈样真菌病；急性炎性反应(例如急性或成人呼吸窘迫综合症和缺血性再灌输损伤)；皮肌炎；斑秃；慢性光化性皮炎；湿疹；贝切特病；掌跖脓疱症(Pustulosis palmoplanteris)；坏疽性脓皮症(Pyoderma gangrenum)；赛杂瑞综合征；特应性皮炎；全身性硬化；硬斑病；外周肢体缺血和缺血性肢体病；骨病例如骨质疏松症、骨软化、甲状旁腺功能亢进、佩吉特病和肾性骨营养障碍；血管渗漏综合症，包括由化疗或例如IL-2的免疫调节剂诱导的血管渗漏综合症；脊髓和脑的损伤或创伤；青光眼；视网膜疾病，包括黄斑变性；玻璃体视网膜的疾病；胰腺炎；血管炎病(vasculatides)，包括脉管炎、川崎病、闭塞性血栓性脉管炎、韦格纳肉芽肿病和贝切特病；硬皮病；先兆子痫；地中海贫血；卡波济氏肉瘤；希-林二氏病等。
根据本发明，本发明的化合物可以用于治疗与不期望的细胞性增殖或增殖过度有关的疾病，包括确定患有所述疾病或病症的哺乳动物和对所述患病的哺乳动物施用包含式1的化合物的组合物，其中所述疾病或病症与激酶有关。
根据本发明，本发明的化合物可以用于治疗与不期望的细胞性增殖或增殖过度有关的疾病，包括确定患有所述疾病或病症的哺乳动物和对所述患病的哺乳动物施用包含式1的化合物的组合物，其中所述疾病或病症与酪氨酸激酶有关。
根据本发明，本发明的化合物可以用于治疗与不期望的细胞性增殖或增殖过度有关的疾病，包括确定患有所述疾病或病症的哺乳动物和对所述患病的哺乳动物施用包含式1的化合物的组合物，其中所述疾病或病症与激酶有关，所述激酶为丝氨酸激酶或苏氨酸激酶。
根据本发明，本发明的化合物可以用于治疗与不期望的细胞性增殖或增殖过度有关的疾病，包括确定患有所述疾病或病症的哺乳动物和对所述患病的哺乳动物施用包含式1的化合物的组合物，其中所述疾病或病症与激酶有关，所述激酶为Src家族的激酶。
本发明也提供用于治疗患有以上疾病和病症的哺乳动物的方法。本发明的化合物(其可以与载体物质组合来制备单一剂型的组合物)的量将根据治疗的宿主、施用的特别方式改变。组合物应当优选地这样配制：可以向接受这些组合物的患者施用剂量在0.01-100mg/kg体重/日之间的抑制剂。
在一方面，本发明的化合物与化疗剂、抗炎剂、抗组胺药、化疗剂、免疫调节剂、治疗的抗体或蛋白激酶抑制剂，例如酪氨酸激酶抑制剂，组合施用于需要该治疗的受试者。
所述方法包括向患病的哺乳动物施用一种或多种发明的化合物。所述方法可以另外包括施用第二种活性剂或更多的活性剂，例如细胞毒素剂，包括烷化剂、肿瘤坏死因子、嵌入剂(intercalators)、微管蛋白抑制剂和拓扑异构酶抑制剂。所述第二种活性剂可以在相同的组合物或第二种组合物中共-施用。合适的第二种活性剂的示例包括，但是不限定于，细胞毒类药物例如阿西维辛；阿柔比星；盐酸阿考达唑；AcrQnine；阿多来新；阿地白介素；六甲蜜胺；安波霉素；乙酸阿美蒽醌；氨基格鲁米特；安吖啶；阿那曲唑；安曲霉素；门冬酰胺酶；曲林菌素；阿扎胞苷；阿扎替派；阿佐霉素；巴马司他；苯佐替派；比卡鲁胺；盐酸比生群；二甲磺酸双萘法德；比泽来新；硫酸博来霉素；布喹那钠；溴匹立明；白消安；放线菌素C；卡芦睾酮；卡醋胺；卡贝替姆；卡铂；卡莫斯汀；盐酸卡柔比星；卡泽来新；西地芬戈；苯丁酸氮芥；西罗霉素；顺铂；克拉立滨；甲磺酸克立那托；环磷酰胺；阿糖胞苷；达卡巴嗪；放线菌素D；盐酸柔红霉素；地西他滨；右奥马铂；地扎呱宁；甲磺酸地扎呱宁；地吖醌；多西他赛；多柔比星；盐酸多柔比星；屈洛昔芬；柠檬酸屈洛昔芬；丙酸甲雄烷酮；达佐霉素；依达曲沙；盐酸依氟鸟氨酸(Eflomithine Hydrochloride)；依沙芦星；恩洛铂；恩普氨酯；依匹哌啶；盐酸表柔比星；厄布洛唑；盐酸伊索比星；雌莫司汀；雌雌莫司汀磷酸钠；依他硝唑；乙碘油131；依托泊苷；磷酸依托泊苷；氯苯乙嘧胺；盐酸法罗唑啉；法扎拉滨；芬维A胺；氟尿苷；磷酸氟达拉滨；氟脲嘧啶；氟西他滨；磷喹酮；福司曲星钠；吉西他滨；盐酸吉西他滨；金Au198；羟基尿素；盐酸伊达 比星；异环磷酰胺；依莫福新；干扰素α-2a；干扰素α-2b；干扰素α-n1；干扰素α-n3；干扰素β-1a；干扰素γ-Ib；异丙铂；盐酸依立替康；醋酸兰瑞肽；来曲唑；醋酸亮丙瑞林；盐酸利阿唑；洛美曲索钠；洛莫司汀；盐酸洛索蒽醌；马索罗酚；美坦辛；盐酸氮芥；醋酸甲地孕酮；美仑孕酮乙酸盐；美法仑；美诺立尔；疏嘌呤；甲氨蝶呤；甲氨蝶呤钠；氯苯氨啶；美妥替哌；米丁度胺；米托克星；丝裂红素；米托洁林；米托马星；丝裂霉素；米托司陪；米托坦；盐酸米托蒽醌；霉酚酸；诺考达唑；诺拉霉素；奥马铂；奥昔舒仑；紫杉醇；培门冬酶；培利霉素；奈莫司汀；硫酸培洛霉素；培磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；盐酸吡罗蒽醌；普卡霉素；普洛美坦；卟吩姆钠；泊非霉素；波尼莫司汀；盐酸丙卡巴肼；嘌罗霉素；盐酸嘌呤霉素；吡唑霉素；利波腺苷；罗谷亚胺；Safmgol；盐酸沙芬戈；司莫司汀；辛曲秦；磷乙酰天冬氨酸钠；司帕霉素；盐酸螺旋锗；螺莫司汀；螺铂；链黑霉素；链佐星；氯化锶Sr 89；磺氯苯脲；他利霉素；紫杉烷；紫杉烷类(二萜)化合物；替可加兰钠；替加氟；盐酸替洛蒽醌；替莫泊芬；替尼泊苷；替罗昔隆；睾内酯；硫咪嘌呤；硫鸟嘌呤；赛替派；噻唑羧胺核苷；替拉扎明；盐酸托泊替康；枸橼酸托瑞米芬；醋酸曲托龙；磷酸曲西立滨；三甲曲沙；葡糖醛酸三甲曲沙(Trimetrexate Glucuronate)；曲普瑞林；盐酸妥布氯唑；尿嘧啶氮芥；乌瑞替派；伐普肽；维替泊芬；硫酸长春碱；硫酸长春新碱；长春地辛；硫酸长春地辛；硫酸长春匹定；硫酸长春甘酯；硫酸环氧长春碱；酒石酸长春瑞滨；硫酸异长春碱；硫酸长春利定；伏罗唑；泽尼铂；净司他丁；和盐酸佐柔比星。
根据本发明，为了实现在治疗非肿瘤的障碍，例如心脏病、中风和神经变性的疾病中的高选择性活性，化合物和组合物可以在亚-细胞毒素的水平与其他药剂组合使用(Whitesell等，Curr Cancer Drug Targets(2003)，3(5)，349-58)。
可以与本发明的化合物组合施用的典型的治疗剂包括EGFR抑制剂、例如吉非替尼、埃罗替尼和西妥昔单抗。Her2抑制剂包括卡纽替尼、EKB-569和GW-572016。也包括Src抑制剂、达沙替尼，以及康士得(比卡鲁胺)，他莫昔芬、MEK-1激酶抑制剂、MARK激酶抑制剂、PI3 抑制剂和PDGF抑制剂，例如伊马替尼，Hsp90抑制剂，例如17-AAG和17-DMAG。也包括抗血管生成剂的和抗血管剂，其通过阻断血液流向实体瘤剥夺营养致使癌细胞休眠。也可以使用致使雄激素依赖的癌不增生的去势。也包括IGF1R抑制剂，非受体和受体酪氨酸激酶的抑制剂和整联蛋白的抑制剂。
本发明的药物组合物和方法可以另外组合其他蛋白质治疗剂例如细胞因子、免疫调节剂和抗体。本文使用的术语“细胞因子”包括趋化因子、白细胞介素、淋巴因子、单核因子、集落刺激因子，以及受体相关的蛋白质和其功能片段。本文使用术语“功能片段”指具有通过确定功能测定确认的生物功能或活性的多肽或肽。所述细胞因子包括内皮的单核细胞激活多肽II(EMAP-II)、粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)、粒细胞-CSF(G-CSF)、巨噬细胞-CSF(M-CSF)、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-12和IL-13，干扰素等，并且所述细胞因子在细胞或细胞机制中与特别的生物的、形态学的、或表型改变有关。
用于组合疗法的其他治疗剂包括环孢菌素(例如，环孢菌素A)、CTLA4-Ig，抗体例如ICAM-3、抗-IL-2受体(抗-Tac)、抗-CD45RB、抗-CD2、抗-CD3(OKT-3)、抗-CD4、抗-CD80、抗-CD86，阻断CD40和gp39之间相互作用的剂，例如对CD40和gpn39特异的抗体(即，CD154)，从CD40和gp39构成的融合蛋白(CD40Ig和CD8gp39)，抑制剂，例如NF-κB功能的核转位抑制剂，例如脱氧精胍菌素(DSG)，胆固醇生物合成抑制剂例如HM:G C还原酶抑制剂(伐他汀和辛伐他汀)，非胆固醇类抗炎的药物(NSAID)例如布洛芬和环加氧酶抑制剂例如罗非昔布，类固醇例如泼尼松或地赛米松、金化合物，抗增殖剂例如甲氨蝶呤、FK506(他罗利姆、普乐可复)、麦考酚酸吗乙酯，细胞毒素药物例如硫唑嘌呤和环磷酰胺，TNF-a抑制剂例如替尼达普、抗-TNF抗体或可溶解的TNF受体和纳巴霉素(西罗莫司或雷帕鸣)或其衍生物。
当其他治疗剂与本发明化合物组合使用时，它们可以以例如 Physician DeskReference(PDR)中记录的或如本领域技术人员另外确定的量使用。
实施方式
实施方式(1)提出式(I)的化合物
或其药学可接受的衍生物或前药，
或其药学可接受的衍生物或前药，其中；
R选自:
(i)氢、氨基、烷基氨基；
(ii)C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基；
(iii)K-Ar。
Ar表示杂芳基或芳基，所述杂芳基或芳基的每个都被0至4个取代基取代，所述取代基独立选自:
(1)卤素、羟基、氨基、酰胺、氰基、-COOH、-SO2NH2、氧代、硝基和烷氧基羰基；和
(2)C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C10环烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷酰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、单-和二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺酰基、单-和二-(C1-C6烷基)磺酰氨基以及单-和二-(C1-C6烷基)氨基羰基；苯基C0-C4烷基和(4-至7-元杂环)C0-C4烷基，前述基团的每个都被0至4个二级取代基取代，所述二级取代基独立选自卤素、羟基、氰基、氧代、亚氨基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基和C1-C4卤代烷基。
K选自
a)O、S、SO、SO2；
b)(CH2)m、m＝0-3，-O(CH2)p、p＝1-3，-S(CH2)p、p＝1-3，-N(CH2)p、 p＝1-3，-(CH2)pO、p＝1-3；
c)NR1
R1表示氢、烷基、环烷基、烯基、炔基、烷硫基、芳基、芳基烷基。
(iv)式(Ia)的基团:
其中:
R2表示氢、C1-C4烷基、氧代；
当R3为氢时，X为CH；或X-R3为O；或X为N，R3表示以下基团：氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C10芳基或杂芳基、(C3-C7环烷基)C1-C4烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C2-C6烷酰基、C1-C6烷氧基羰基、C2-C6烷酰基氧基、单-和二-(C3-C8环烷基)氨基C0-C4烷基、(4-至7-元杂环)C0-C4烷基、C1-C6烷基磺酰基、单-和二-(C1-C6烷基)磺酰氨基，以及单-和二-(C1-C6烷基)氨基羰基，前述基团的每个都被0至4个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、氰基、氨基、-COOH和氧代。
Het选自任何杂环，其被0至4个取代基取代，所述取代基独立选自:
(i)C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基；
(ii)卤素、羟基、氨基、酰胺、氰基、-COOH、-SO2NH2、氧代、硝基和烷氧基羰基，
(iii)芳基。
R11和R12独立选自:氢、F、Cl、Br、CN、C1-C4烷基、C1-C6烷氧基。
R13、R14和R15独立选自氢、C1-C4烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C10芳基或杂芳基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C2-C6烷酰基、C1-C6烷氧基羰基、C2-C6烷酰基氧基。
实施方式(2)提出用于制备实施方式(1)的化合物或它药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体的方法。
实施方式(3)提出药物组合物，其包含至一种实施方式(1)的化合物或它药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
实施方式(4)提出根据实施方式(3)的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
实施方式(5)提出下式的化合物:
实施方式(6)提出用于制备实施方式(5)的化合物或它的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体的方法。
实施方式(7)提出药物组合物，其包含实施方式(5)的化合物或它的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
实施方式(8)提出根据实施方式(7)的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
实施方式(9)提出下式的化合物:
实施方式(10)提出用于制备实施方式(9)的化合物或它的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体的方法。
实施方式(11)提出药物组合物，其包含实施方式(9)的化合物或它的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对 映异构体，以及药学可接受的载体。
实施方式(12)提出根据实施方式(11)的组合物，其另外地包含额外的治疗剂。
实施方式(13)提出下式的化合物:
实施方式(14)提出用于制备实施方式(13)的化合物或它的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体的方法。
实施方式(15)提出药物组合物，其包含实施方式(13)的化合物或它的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
实施方式(16)提出根据实施方式(15)的组合物，其进一步地包含额外的治疗剂。
实施方式(17)提出下式的化合物:
实施方式(18)提出用于制备实施方式(17)的化合物或它的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体的方法。
实施方式(19)提出药物组合物，其包含实施方式(17)的化合物或它的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
实施方式(20)提出根据实施方式(19)的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
实施方式(21)提出下式的化合物:
实施方式(22)提出用于制备实施方式(21)的化合物或它的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体的方法。
实施方式(23)提出药物组合物，其包含实施方式(21)的化合物或它的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
实施方式(24)提出根据实施方式(23)的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
实施方式(25)提出下式的化合物:
实施方式(26)提出用于制备实施方式(25)的化合物或它的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体的方法。
实施方式(27)提出药物组合物，其包含实施方式(25)的化合物或其药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
实施方式(28)提出根据实施方式(27)的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
实施方式(29)提出具有下式的化合物:
实施方式(30)提出用于制备实施方式(29)的化合物或它的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体的方法。
实施方式(31)提出药物组合物，其包含实施方式(29)的化合物或它的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
实施方式(32)提出根据实施方式(31)的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
实施方式(33)提出下式的化合物:
实施方式(34)提出用于制备实施方式(33)的化合物或它的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体的方法。
实施方式(35)提出药物组合物，其包含实施方式(33)的化合物或它的药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
实施方式(36)提出根据实施方式(35)的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
实施方式(37)提出抑制激酶活性的方法，其包括将激酶与与实施方式(1)、(5)、(9)、(13)、(17)、(21)、(25)、(29)、或(33)任一项的化合物接触，由此抑制激酶活性。
实施方式(38)提出用于治疗癌症的方法，其包括将肿瘤细胞系与实施方式(1)、(5)、(9)、(13)、(17)、(21)、(25)、(29)、或(33)任一项的化合物接触，由此降低肿瘤系的生长活性。
实施方式(39)提出实施方式(38)的方法，其中导致净肿瘤的增长减少50％的药物组合物的浓度为0.01.至1.9μM。
实施方式(40)提出实施方式(38)的方法，其中肿瘤细胞系为白血 病、非-小细胞肺癌、结肠癌、CNS癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、前列腺癌和乳腺癌的细胞系。
实施方式(41)提出实施方式(40)的方法，其中白血病为慢性髓性白血病(CML)异种移植。
实施方式(42)提出实施方式(1)、(5)、(9)、(13)、(17)、(21)、(25)、(29)、或(33)任一项的化合物在癌症治疗中的用途。
实施方式(43)提出实施方式(1)、(5)、(9)、(13)、(17)、(21)、(25)、(29)、或(33)任一项的化合物在制备用于癌症治疗的药物中的用途。
实施例
本发明另外包括药物组合物，其包含一种或多种本文公开的化合物，所述化合物以药学可接受的盐、水合物、溶剂化物、晶体形式和其单独的立体异构体(例如，非对映异构体、对映异构体)的形式存在，并且联合药学可接受的载体。这些包括，但是不限定于，其中将本发明的化合物配制为中性或盐形式的组合物。
“药学可接受的盐”包括酸加成盐(经蛋白质的游离氨基基团形成)其经无机酸(例如氢氯酸或磷酸)，或有机酸(例如乙酸、草酸、酒石酸、苦杏仁酸等)形成。经游离羧基基团形成的盐也可以由无机碱(例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙、氢氧化铁)和有机碱(例如异丙胺、三甲胺、组氨酸和普鲁卡因等)得到。
“盐”为两种可电离的成分的化学组合(例如，当溶解于水中时)，两种成分相对彼此一种为酸性和另一种为碱性。如果以盐的形式存在，药物可以为酸性的或碱性的成分。
“药学可接受的盐”包括化合物的任何盐形式，其中盐对动物摄入是安全的(例如，口服时对人无毒)。可以根据本发明使用的示例的该盐包括但是不限定于，2-羟基乙烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、3-羟基-2-萘甲酸盐、3-苯基丙酸盐、乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、安索酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐(benzenesulfonate)、苯甲酸盐、苯磺酸盐 (besylate)、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、依地酸钙、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、樟磺酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、clavulariate、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、依地酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐、乙磺酸盐(esylate、ethanesulfonate)、finnarate、葡庚糖酸盐、葡糖庚酸盐(gluco heptanoate)、葡糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、乙醇酰对氨基苯胂酸盐(glycollylarsanilate)、半硫酸盐(hemisulfate)、庚酸盐、六氟磷酸盐、己酸盐、己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)、海巴明(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、羟基萘甲酸盐、碘化物、异硫代硫酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、月桂磺酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐(mesylate、methanesulfonate)、溴甲烷、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸盐(naphthylate)、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、N-甲基葡萄糖胺铵盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、磷酸盐、phosphateldiphosphate、苦味酸盐、新戊酸盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、对-甲苯磺酸盐、糖二酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、次醋酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺基水杨酸盐(sulfosaliculate)、suramate、单宁酸盐、酒石酸盐、9-氯茶碱盐、硫代氰酸盐、甲苯磺酸盐、三乙基碘、十一酸盐和戊酸盐等(也参见S.M.Berge等，Pharmaceutical Salts，J.Pharm.Scis.，1977，66:1-18；P.L.Gould，Salt selection for basic drugs，Int'lJ.Pharms.1986，33:201-17)。
“溶剂化物”为这样的成分，其在化合物从溶液中结晶的过程中，将溶剂分子存留在形成的晶格中。
“水合物”为溶剂化物，其中溶剂为水。
“晶体”形式为固体成分，其中构成该成分的分子填充在重复晶格结构中。当由相同分子构成的成分可能具有多于一种晶格模式时，不同的成分被称为“多晶型物”。
“非对映异构体”为这样的立体异构体，所述立体异构体不作为 物体和镜像相关，但是仍然在关于一个四面的、sp3杂化碳的三维空间的排列中不同。
“对映异构体”为彼此为镜像但是非重叠(不相同)的两个立体异构体的一个。
“药学可接受的载体”为无毒并且促进药物功能的任何赋形剂(也参见，Rowe RC等，Handbook of Pharmaceutical Excipients，第五版，2006)。
提供以下实施例进一步来说明本发明，但是当然，不应当以任何限制本发明范围的方式构成以下实施例。
所有实验都在无水条件下(即，干燥溶剂)在氩气气氛中进行，除非该处有说明，所有实验使用烘干的装置并使用标准技术处理空气敏感的物质。使碳酸氢钠(NaHCO3)和氯化钠(盐水)的水溶液饱和。
在Merck Kiesel胶60F254板上进行分析薄层色谱法(TLC)，通过紫外线和/或茴香醛、高锰酸钾或磷钼酸蘸液显影。
NMR谱:在400MHz记录1H核磁共振谱。数据如下描述:化学位移，多重峰(s＝单峰，d＝二重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，qn＝五重峰，dd＝双二重峰，m＝多重峰，bs＝宽单峰)，偶合常数(J/Hz)和积分。直接从谱图计算和取得偶合常数，并且没有修正偶合常数
低分辨质谱:使用电喷雾(ES+)电离。引用质子化的母离子(M+H)或母钠离子(M+Na)或最高质量的碎片。除非另有说明，经过5分钟从于水中的10％ACN上升至100％CAN组成分析梯度。
使用高效液相色谱法(HPLC)分析三嗪衍生物的纯度。使用装备有SPD-M10A磷光体二极管矩阵检测器的岛津系统在Phenomenex Synergi极性-RP、4u、80A、150x 4.6mm柱上进行HPLC。流动相A为水，流动相B为乙腈，梯度为60分钟内20％至80％B，以A/B(80:20)再平衡10分钟。在220和54nm进行UV测定。
实施例1
将250mL烧瓶注入叔丁醇钾(5.75g、51.26mmol)和四氢呋喃(50mL)。将产生的悬浮液冷却至5-10℃，然后加入乙酰乙酸乙酯(6.67g、51.26mmol)。控制加入速度，使得反应器内部的温度不超过15℃。产生的混合物变为均质的和浅黄色的。完成加入后，将反应混合物冷却至0℃，然后加入于四氢呋喃(20mL)中2，3，4，6-四氟硝基苯(5.00g、25.63mol)。完成加入后，将产生的棕色反应混合物在约0℃(冰浴)搅拌30分钟。将1N HCl缓慢加入，棕色溶液最后变为澄清的黄色溶液。水相的pH为6。将混合物用乙酸乙酯萃取(3次)，将合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤并真空浓缩以产生橘黄色油。
将以上获得的油注入250L圆底烧瓶中，并溶解于冰醋酸(25mL)中。然后加入硫酸(浓、15mL)，除轻度放热之外，还观察到剧烈的气体生成。开始搅拌，并将反应混合物在70℃加热7小时，然后TLC分析表明100％的转化。将反应混合物冷却至15℃至20℃之间，并加入乙酸乙酯(200mL)，然后加入水(100mL)。缓慢加入于水中的饱和NaOH溶液来调节pH约至7。将混合物用乙酸乙酯萃取(3x 100mL)。将合并的有机萃取物用盐水洗涤。减压浓缩棕色的有机萃取物，以产生粗制的化合物，为棕色油。
将粗制产物通过柱色谱法(硅胶，于己烷中的0-30％的乙酸乙酯)纯化以产生期望的化合物3.00g(50％产率，1)。其他成分为异构体(副产物，1.00g，16％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.01(ddd，J＝17.3Hz，J＝10.4Hz，J＝6.7Hz，1H)，4.15(d，J＝1.7Hz，2H)，2.24(s，3H)。
实施例2
将化合物1(2.82g，12.10mmol)和碳酸钾(1.83g，13.30mmol)于甲醇(50mL)中的混合物在35℃加热1.5小时。检查TLC，并且起始物质被消耗。然后将反应混合物冷却，并真空浓缩除去大多数的甲醇。将残余物用乙酸乙酯(100mL)和水稀释。将混合物用2N HCl中和至pH 4～5。将反应物用乙酸乙酯/己烷(95/5，3X100ml)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤、干燥(Na2SO4)并浓缩以产生黄色固体(2)2.90g(98％产率)，其无需纯化在下一步反应直接使用。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.47(dd，J＝12.7Hz，J＝7.4Hz，1H)，4.07(d，J＝1.96Hz，2H)，3.95(s，3H)，2.20(s，3H)。
实施例3
方法1:将吡啶鎓氯化物(5当量)和来自之前步骤的1-(25-二氟-3-甲氧基-6-硝基苯基)-丙-2-酮(化合物2)的混合物在175℃搅拌120分钟。将反应冷却至室温，用IN HCl和乙酸乙酯稀释并过滤。将滤液用盐水(2x)洗涤，干燥并真空浓缩以产生1-(2-氟-3-羟基-6硝基苯基)-丙-2-酮的化合物3，为粉红色固体，其无需纯化即用于下一步。
方法2:将化合物1(33.0g，141.5mmol)、NaOAc(134.8g，7.5当量)和二甲基甲酰胺(450mL)的混合物在65℃搅拌12小时。减压蒸发溶剂。将粗制的残余物溶解于水(800mL)和EtOAc(200mL)中。将混合物用EtOAc(2x400mL)萃取。将有机层进一步用盐水(1x150mL)洗涤，通过Na2SO4干燥并浓缩以产生化合物3(40g)。无需进一步纯化在下一步中使用粗制的残余物。
实施例4
将化合物2(2.80g，11.42mmol)于二噁烷(17ml)中的溶液在 室温逐滴加入至连二硫酸钠(15.91g，91.36mmol)于水(150mL)中的溶液中。加入后，将混合物在室温搅拌直至TLC分析表明起始物质无剩余(过夜)。当反应完成时，通过过滤将形成的白色固体收集并用水(3x15ml)洗涤。将固体真空干燥过夜以产生期望的产物4(820mg，36％产率)，为白色固体。无需进一步纯化将化合物直接用于下一步反应。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.41(br，1H)，6.82(dd，J＝12.1Hz，J＝6.2Hz，1H)，6.17(s，1H)，3.77(s，3H)，2.34(s，3H)；ESI-MS:理论值(C10H9F2NO)197，实测值198(MH+)。
实施例5
方法1:将三溴化硼(1N于DCM中，6.00mL，6.00mmol)的溶液在-78℃加入至化合物4(350mg，1.78mmol)于二氯己烷(25ml)中的冷溶液中。将混合物缓慢升温至室温，并搅拌约1小时。TLC分析表明反应完成。将混合物倒入至冰中，加入饱和NaHCO3。将混合物用DCM萃取(3X)。将有机层用盐水洗涤、干燥(Na2SO4)并浓缩以产生棕色固体的化合物5(281mg，86％产率)，其无需进一步的纯化直接用于下一步反应。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.25(s，1H)，9.05(s，1H)，6.47(dd，J＝11.7Hz，J＝6.4Hz，1H)，6.10(s，1H)，2.32(s，3H)。
方法2:将化合物3(9.09g，39.33mmol)加入至圆底烧瓶中。加入水(200mL)，并在室温搅拌黄色悬浮液。将连二硫酸钠(53g，304.42mmol)以几份加入，并将反应混合物在室温搅拌直至TLC分析表明不剩余起始物质。当反应完成时，将反应混合物冷却至0℃，并通过真空过滤收集黄褐色的固体产物。将湿的产物真空干燥以产生4，7-二氟-2-甲基-lH-吲哚-5-酚(3.80g)的化合物5，其如方法1通过1H NMR表征。
实施例6
将3-氨基-5-环丙基吡唑(3.5g，28.2mmol)和DIPEA(4.9mL，28.2mmol)于DMF(5.0mL)中的溶液在室温加入至4，4-二氯-2-甲基磺酰基嘧啶(5.0g，25.6mmol)于DMF(20.0mL)中的溶液中。加入碘化钠(4.2g，28.2mmol)，并将反应在60℃搅拌过夜。然后加入水，并通过过滤收集固体。将滤液用EtOAc萃取两次。将合并的有机溶剂经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。残余物提供化合物6(6.2mg，96％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.14(bs，1H，NH)，10.16(bs，1H，NH)，3.31(s，1H)，2.46(s，3H，CH3)，1.88-1.84(m，1H，CH)，0.92-0.64(m，4H，Ar-H)。
实施例7
将臭氧(33.7g，54.8mmol)于水(140.0mL)中的溶液按份经过20分钟在0℃加入至6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-(甲基硫代)嘧啶-4-胺(6.0g，23.8mmol)于MeOH(160.0mL)中的溶液中。将反应在该温度搅拌30分钟在室温过夜。然后过滤混合物，并将固体再悬浮于水中的饱和NaHCO3中。将混合物过滤，并将固体用水和乙醚洗涤。固体提供化合物7(5.6g，75％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.33(bs，1H，NH)，10.93(bs，1H，NH)，3.34(s，3H，CH3)，1.93-1.89(m，1H，CH)，0.96-0.68(m，4H，Ar-H)。
实施例8
将4，6-二氯-2-甲基磺酰基嘧啶(6.87g，30.27mmol)和2-甲基-4-氟-1-H-吲哚-5-酚(5.00g，30.27mmol)于THF(100mL)中的溶液经干冰/异丙醇冷却至-70℃。将叔丁醇钾(4.25g，37.84mmole)于THF(50mL)中的悬浮液逐滴加入至反应混合物中。将混合物的温度控制在-50℃以下。加入后，将反应在-70℃搅拌1.5小时，然后经过1.5小时的时间升温至室温。检查TLC，并且两种起始物质都消耗。加入于水中的饱和氯化铵，并将混合物用乙酸乙酯/己烷(80/20)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤、经硫酸钠干燥并浓缩。将粗制产物在硅胶垫上用于己烷中的20％乙酸乙酯洗脱。将收集的级分浓缩以产生期望的产物(QW660)(7.51g，79％产率)，为淡黄色。无需进一步纯化将该物体用于下一步反应。
实施例9
方法1(来自7)将4-氯-2-甲基-1H-吲哚-5-酚(0.46g，2.80mmol)和KOtBu(0.32g，2.20mmol)在室温加入至6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-胺(0.8g，2.55mmol)于tBuOH(50mL)的溶液中。将反应在50℃搅拌过夜。冷却后，将反应用DCM稀释，并用饱和NaHCO3洗涤。将水相用DCM/异丙醇(4:1)萃取两次。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。将产生的粗制产物通过Teledyne-Isco快速系统(通过使用CH2Cl2/MeOH，于二氯甲烷中的0至5％的甲醇)纯化以提供化合物9(0.86g，85％)，为浅黄色固体。
方法2(来自8):将加入5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-胺(3.45g，28.03mmol)、碘化钠(3.60g，24.03mmol)和DIPEA(4.20ml，24.03mmol)的化合物8(5.00g，16.02mmol)于DMF(50mL)中的溶液在65℃搅拌48小时。检查TLC，并且起始物质被消耗。将混合物倒入 水中(500ml)，并用冰冷却。将固体通过过滤收集，通过水和己烷洗涤。将片溶解于二氯甲烷/甲醇中。将溶液浓缩至最少量的溶剂。将固体通过过滤收集、通过甲醇洗涤以产生浅黄色固体(9)(4.50g，71％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.98(bs，1H，NH)，11.32(bs，H，NH)，10.32(bs，1H，NH)，7.15-5.16(m，5H，Ar-H)，2.40(s，3H，CH3)，1.39(m，1H，CH)，0.65-0.07(m，4H，Ar-H)；ESI-MS:理论值(C19H16ClFN6O)398，实测值399[M+H]+。
实施例10
将6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-4-胺(100mg，0.25mmol)和1-甲基哌嗪(0.70mL，6.25mmol)于异丙醇(2mL)中的溶液在密封管中加热至90℃过夜。冷却后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，并用饱和NaHCO3洗涤。将水相用二氯甲烷/异丙醇混合物(4:1)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。将产生的粗制产物用Teledyne-Isco快速系统(使用CH2Cl2/MeOH，于二氯甲烷中的0至10％的甲醇)纯化以提供化合物10(63mg，54％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.73(bs，1H，NH)，11.21(bs，H，NH)，9.21(bs，1H，NH)，7.09-6.08(m，4H，Ar-H)，5.25(bs，1H，Ar-H)，3.42(m，4H，2CH2)，2.39(s，3H，CH3)，2.35(m，4H，2CH2)，2.20(s，3H，CH3)，1.49(m，1H，CH)，0.69-0.13(m，4H，Ar-H)；ESI-MS:理论值(C24H27FN8O)462，实测值463[M-H]+.HPLC:保留时间:13.47分钟。纯度:100％。
实施例11
将6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-酚)氧基)嘧啶-4-胺(100mg，0.25mmol)和哌嗪(538mg，6.25mmol)于异丙醇(2mL)中的溶液在密封管中加热至90℃过夜。冷却后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，并用饱和NaHCO3洗涤。用二氯己烷/异丙醇混合物(4:1)萃取有机相。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。将产生的粗制产物通过快速系统(通过使用CH2Cl2/MeOH、于二氯甲烷中的0至20％的甲醇)纯化，以提供化合物11(24mg，22％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.73(bs，1H，NH)，11.21(bs，H，NH)，9.19(bs，1H，NH)，7.09-6.01(m，4H，Ar-H)，5.26(bs，1H，Ar-H)，3.55(bs，1H，CH)，3.42(m，4H，2CH2)，2.74(bs，4H，2CH2)，2.39(s，3H，CH3)，1.49(m，1H，CH)，0.69-0.12(m，4H，Ar-H)；ESI-MS:理论值(C23H25FN8O)448，实测值449[M+H]+。HPLC:保留时间:12.60分钟。纯度:99％。
实施例12-44
按照实施例10中相同的程序，化合物12-44也可以从化合物9中制备，并且通过LC-MS表征。
实施例45
将1-氟-2-碘乙烷(0.02mL，0.22mmol)和K2CO3(76mg，055mmol)加入至N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺(50mg，0.11mmol)于异丙醇(1mL)中的溶液，并在密封管中加热至75℃过夜。冷却后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，并用饱和NaHCO3洗涤。用二氯甲烷萃取水相。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并真空浓缩。将产生的粗制产物通 过Teledyne-Isco快速系统(通过使用CH2Cl2/MeOH，于二氯甲烷中的0至10％的甲醇)纯化，以提供化合物45(20mg，36％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.72(bs，1H，NH)，11.21(bs，H，NH)，9.21(bs，1H，NH)，7.10-6.04(m，4H，Ar-H)，5.25(bs，1H，Ar-H)，4.63-2.38(m，15H)，1.51(m，1H，CH)，0.69-0.11(m，4H，Ar-H)；ESI-MS:理论值(C25H28F2N8O)494，实测值495[M+H]+。HPLC:保留时间:15.02分钟。纯度:86％。
实施例46
将2M Na2CO3(0.276mL，0.552mmol)的水溶液在氩气下加入至6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-4-胺(0.100g，0.143mmol)、1-N-boc-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼戊环-2-基)-3，6-二氢-2H-吡啶(0.058g，0.188mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(0.026g，0.025mmol)于二甲氧基乙烷(2mL)的溶液中。将混合物用氩气流脱气3分钟，然后将其在密封管中加热至90℃24小时。将冷却的混合物用1NNaOH淬灭，并用二氯甲烷/异丙醇(8:2)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(用CH2Cl2:MeOH(9:1)洗脱)纯化以产生化合物46(0.036g，53％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d):δ11.85(bs，1H)，11.24(s，1H)，9.92(bs，1H)，7.10(d，1H，J＝8.4Hz)，6.86(m，1H)，6.76(bs，1H)，6.53(bs，1H)，6.18(s，1H)，5.25(bs，1H)，4.02(m，2H)，3.50(m，2H)，2.38(bs，5H)，1.41(bs，10H)，0.65(m，2H)，-0.02(m，2H)。MS(ESI):理论值C29H32FN7O3:545，实测值546(M+H)
实施例47
将化合物46(0.035g，0.062mmol)用于二氯甲烷(5mL)的20％三氟甲基乙酸溶解并搅拌3小时。然后将混合物用1N NaOH水溶液中和，并用二氯甲烷/异丙醇(8:2)混合物萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩以产生化合物47(0.038g，59％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d):δ11.84(bs，1H)，11.23(s，1H)，9.84(bs，1H)，7.09(d，1H，J＝8.4Hz)，6.86(m，1H)，6.80(bs，1H)，6.51(bs，1H)，6.18(s，1H)，5.27(bs，1H)，3.37(m，2H)，2.87(m，2H)，2.38(s，3H)，2.24(m，2H)，1.44(m，1H)，1.22(m，1H)，1.02(d，1H，J＝6.0Hz)，0.65(m，2H)，0.01(m，2H).MS(ESI):理论值C24H24FN7O:445，实测值446(M+H)。
实施例48
将N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-6-(1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-4-胺(0.040g，0.090mmol)、1-溴-2-氟乙烷(0.031g，0.180mmol)和K2CO3(0.062g，0.449mmol)用THF/CH3CN(4mL/4mL)的溶剂混合物溶解。将密封管在75℃搅拌20小时，并在冷却后将溶剂除去至最少。将粗制物在DCM/异丙醇(8:2)和水之间分配。将有机层用饱和NaHCO3洗涤、经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(用CH2Cl2:MeOH(9:1)洗脱)纯化，以产生化合物48(0.036g，83％)， 为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d):δ11.83(bs，1H)，11.24(s，1H)，9.87(bs，1H)，7.10(d，1H，J＝8.4Hz)，6.86(m，1H)，6.75(bs，1H)，6.18(s，1H)，5.24(bs，1H)，4.63(m，1H)，4.53(m，1H)，3.46(m，1H)，3.40(m，1H)，3.21(m，2H)，2.78(m，1H)，2.71(m，3H)，2.37(m，5H)，1.43(m，1H)，0.65(m，2H)，-0.03(m，2H).MS(ESI):理论值C26H27F2N7O:491，实测值492(M+H)。
实施例49
将甲醛(37％于水中，0.911g，0.112mmol)加入至N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-6-(1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-4-胺(0.025g，0.056mmol)于四氢呋喃(10mL)中的溶液中，并搅拌10分钟。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.024g，0.112mmol)，并继续20小时。将混合物用饱和NaHCO3淬灭，并用二氯甲烷/异丙醇(8:2)混合物萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(用CH2Cl2:MeOH(8:2)洗脱)纯化，以产生化合物50(0.025g，96％)，为浅黄色固体。1HNMR(400MHz，DMSO-d):δ11.82(bs，1H)，11.23(s，1H)，9.85(bs，1H)，7.09(d，1H，J＝8.4Hz)，6.84(m，1H)，6.75(m，1H)，6.18(s，1H)，5.23(m，1H)，4.06(m，1H)，3.15(m，3H)，3.05(m，2H)，2.55(m 2H)，2.37(m，5H)，2.27(s，3H).MS(ESI):理论值C25H26FN7O:459，实测值460(M+H)。
实施例50
将(E)-5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-胺(271mg，2.20mmol)和DIPEA(0.42mL，2.40mmol)于DMF(2.0mL)中的溶液在室温下加入至4，6-二氯-2-甲基硫烷基-嘧啶(390mg，2.00mmol)于DMF(3.0mL)中的悬浮液中,然后加入碘化钠(330mg，2.20mmol)。加入后，将混合物在50℃搅拌过夜。检查TLC，并且起始物质消耗。将混合物倒入水(～50mL)中，并通过过滤收集固体，用水和己烷洗涤。在真空管干燥后获得期望的产物(50)(286mg，51％产率)，为黄色固体。无需纯化将产物直接用于下一步反应。
实施例51
将噁烷(1500mg，2.44mmol)的悬浮液在0℃加入至化合物50(280mg，1.00mmol)于甲醇(6mL)中的冷溶液中。加入后，将混合物在0℃搅拌0.5小时，然后在室温搅拌1小时。检查TLC，并且起始物质被消耗。将水加入至反应混合物中。将混合物用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤、经硫酸钠干燥并浓缩。将粗制产物经柱(于DCM中的0-5％甲醇)纯化。浓缩收集的级分，以产生期望的产物(51)(30mg，9.5％产率)，为米黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.55(br，1H)，10.98(br，1H)，8.00-6.00(m，4H)，3.38(s，3H)，1.90(br，3H)；ESI-MS:理论值(C11H12ClN5O2S)313，实测值314(MH+)。
实施例52
方法1:将叔-BuOK(79mg，0.70mmol)在室温下加入至6-氯-N-(5丙烯基-1H-吡唑-3-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-胺(51)(200mg，0.63mmol)和2-甲基-4-氟-1-H-吲哚-5-酚(110mg，0.67mmol) 于叔-BuOH(15.0mL)中的悬浮液中。加入后，将混合物在55℃搅拌16小时。检查TLC，并且起始物质消耗。加入水至反应混合物中。将混合物用二氯甲烷/异丙醇(90/10)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤、经硫酸钠干燥并浓缩。将粗制产物经柱(于DCM中的0-10％甲醇)纯化。浓缩收集的级分，以产生期望的产物(52)(163mg，64％产率)，为粉红色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.15(br，1H)，11.35(br，1H)，10.35(br，1H)，7.14(d，J＝8.8Hz，1H)，6.90(t，J＝8.0Hz，1H)，6.40(br，1H)，6.22(s，1H)，5.70-5.10(m，3H)，2.40(s，3H)，1.78(br，3H)；ESI-MS:理论值(C19H16ClFN6O)398，实测值399(MH+)。
方法2:将化合物8(5.00g，16.02mmol)、(E)-5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-胺(3.45g，28.03mmol)、碘化钠(3.60g，24.03mmol)和DIPEA(4.20ml，24.03mmol)于DMF(50mL)的溶液在65℃搅拌48小时。检查TLC，并且起始物质被消耗。将混合物倒入至水(500ml)中，并用冰冷却。将固体通过过滤收集，用水和己烷洗涤。将片溶解于二氯甲烷/甲醇中。将溶液浓缩至最少量的溶剂。将固体通过过滤收集，用甲醇洗涤以产生固体(52)(3.88g，61％产率)。回收母液。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.15(br，1H)，11.35(br，1H)，10.35(br，1H)，7.14(d，J＝8.8Hz，1H)，6.90(t，J＝8.0Hz，1H)，6.40(br，1H)，6.22(s，1H)，5.70-5.10(m，3H)，2.40(s，3H)，1.78(br，3H)；ESI-MS:理论值(C19H16ClFN6O)398，实测值399(MH+)。
实施例53
将化合物52(1.50g，3.76mmol)、1-甲基哌嗪(2.83g，28.21mmol)和DIPEA(1.64ml，9.40mmol)于异丙醇(20.0mL)和乙腈(5.0mL)中的溶液在85℃搅拌2天。检查TLC，并且起始物质被消耗。 将反应混合物浓缩，并加入水。将混合物用DCM/异丙醇(10/1)萃取三次。将合并的有机层用碳酸氢钠、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将粗制产物通过从MeOH(～10mL)中结晶纯化。将浅黄色的固体通过过滤收集，用冷的MeOH(1x)洗涤以产生化合物53(1.10g，63％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.80(br，1H)，11.19(br，1H)，9.30(br，1H)，7.03(d，J＝8.8Hz，1H)，6.78(t，J＝8.0Hz，1H)，6.14(s，1H)，5.80-5.60(m，2H)，5.47(s，1H)，5.20(br，1H)，3.40(br，4H)，2.43(3H，与溶剂峰一起观察到)，2.34(s，3H)，2.27(br，4H)，1.65(d，J＝6.0Hz，3H)；ESI-MS:理论值(C24H27FN8O)462，实测值463(MH+)。
实施例54-73
按照实施例53中相同的程序，化合物54-73也可以从化合物52制备，并通过LC-MS表征。
化合物68的制备和表征
将52(500mg，1.25mmol)、哌嗪(540mg，6.27mmol)于异丙醇(12.0mL)和乙腈(5.0mL)中的溶液在85℃搅拌3天。检查TLC，并且起始物质被消耗。加入稀释的碳酸氢钠，并将反应物用DCM萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤、经硫酸钠干燥并浓缩。将粗制产物经柱(于DCM中的5-20％甲醇)纯化。将收集的级分浓缩以产生期望的68(350mg，62％)，为米黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.90(br，1H)，11.24(br，1H)，9.30(br，1H)，7.03(d，J＝8.8Hz，1H)，6.78(t，J＝8.0Hz，1H6.14(s，1H)，5.80-5.00(m，4H)，3.40(m，4H)，2.71(m，4H)，2.39(s，3H)，1.68(d，J＝6.8Hz，3H)；ESI-MS:理论值(C23H25FN8O)448，实测值449(MH+)。
实施例74
将化合物68(50mg，0.11mmol)、1-氟-2-碘乙烷(40.72mg，0.23mmol)和碳酸钾(77mg，0.56mmol)于乙腈/THF(3.0mL/3.0mL)中的溶液在75℃搅拌3天。检查TLC，并且起始物质被消耗。除去溶剂并加入水。将混合物用DCM/异丙醇(9/1)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤、经硫酸钠干燥并浓缩。将粗制产物经柱(于DCM中的0-10％甲烷)纯化。将收集的级分浓缩以产生期望的产物，(74)(25mg，45％产率)，为米黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.80(br，1H)，11.24(br，1H)，9.30(br，1H)，7.09(d，J＝8.8Hz，1H)，6.83(t，J＝8.0Hz，1H)，6.19(s，1H)，5.80-5.00(m，4H)，4.49(m，2H)，3.40(br，4H)，2.69(m，2H)，2.38(m，4H)，1.68(d，J＝6.8Hz，3H)，1.10(s，3H)；ESI-MS:理论值(C25H28F2N8O)494，实测值495(MH+)。
实施例75
将2M Na2CO3的水溶液(0.206mL，0.414mmol)在氩气下加入至(E)-6-氯-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-N-(5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(0.075g，0.188mmol)、1-N-boc-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼戊环-2-基)-3，6-二氢-2H-吡啶(0.093g，0.301mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(0.019g，0.019mmol)于二甲氧基乙烷(4mL)中的溶液中。将混合物用氩气流脱气3分钟，然后将其在密封管中加热至90℃24小时。将冷却的混合物用1N NaOH淬灭，并用二氯甲烷/异丙醇(8:2)萃取。将合并 的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。然后将残余物用在二氯甲烷(5mL)中的20％三氟甲基乙酸溶解，并搅拌3小时。将反应用1N NaOH水溶液中和，并用二氯甲烷/异丙醇(8:2)的混合物萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩以产生化合物75(0.036g，44％)为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d):δ12.02(bs，1H)，11.29(s，1H)，9.98(bs，1H)，7.11(d，1H，J＝8.4Hz)，6.87(m，1H)，6.83(bs，1H)，6.52(bs，1H)，6.20(s，1H)，5.66(m，1H)，5.56(bs，1H)，5.25(m，1H)，3.50(s，1H)，3.43(m，2H)，2.92(m，2H)，2.41(s，3H)，2.28(m，2H)，1.69(dd，3H，J＝5.2，1.2Hz).MS(ESI):理论值C24H24FN7O:445，实测值446(M+H)。
实施例76
将5-((4，6-二氯嘧啶-2-基)氧基)-4-氟-2-甲基-1H-吲哚(0.5g，1.60mmol)，5-甲基噻唑2-胺(0.22g，1.92mmol)，碘化钠(0.29g，1.92mmol)和DIPEA(0.39mL，1.92mmol)于DMF(16.0mL)中的溶液在70℃搅拌过夜。将混合物缓慢加入至冰水(10.0mL)中。将混合物用冰浴冷却，并通过过滤收集固体，用水和己烷洗涤以提供化合物76，为浅白色固体(0.59g，95％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.34(bs，1H)，9.81(bs，H)，8.70(bs，1H)，7.22(m，1H)，7.14(m，1H)，6.97(m，1H)，6.25(m，1H)，2.40(s，3H)，2.02(s，3H)；ESI-MS:理论值(C17H13ClFN5OS)389，实测值390[M-H]+。
实施例77
将N-(6-氯-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-4-基)5-甲基噻唑-2-胺(0.1g，0.26mmol)、1-甲基哌嗪(32mg，1.25mmol)、Pd(OAc)2(8.2mg，0.036mmol)和K2CO3(0.57g，4.10mmol)于THF(1.5mL)和DMF(1.0mL)中的混合物在微波中在60℃加热1.5小时。将反应混合物冷却，并加入水。将产生的混合物用EtOAc萃取，并将合并的萃取物用盐水洗涤,经无水Na2SO4干燥，然后减压浓缩。将产生的粗制产物通过Teledyne-Isco快速系统(通过使用CH2Cl2/MeOH，于二氯甲烷中的0至20％的甲醇)纯化以提供化合物77，为浅棕色固体(20mg，17％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.27(bs，1H)，9.48(bs，H)，7.35(bs，1H)，7.15-7.00(m，2H)，6.85(m，1H)，6.22(m，1H)，3.45(m，4H)，2.41(s，3H)，2.32(m，4H)，2.18(s，3H)，1.95(s，3H)；MS(ESI):理论值C22H24FN7OS:453，实测值454(M-H)+。
实施例78
按照与实施例77中相同的程序，化合物78也可以从化合物76制备，并通过LC-MS441(M-H)+表征。
实施例79
将4，6-二氯-2-甲基磺酰基嘧啶(3.72g，16.38mmol)和2-甲基-4，7-二-氟-1-H-吲哚-5-酚(3.00g，16.38mmol)于THF(100mL)中的溶液用干冰/丙酮冷却至-78℃。将叔丁醇钾(2.30g，20.47mmole)于THF(50mL)中的悬浮液逐滴加入至反应混合物中。将混合物的温度控制在低于-50℃。加入后，将反应在-78℃搅拌1小时，然后经过1小时的时间升温至室温。检查TLC，并且两种起始物质都被消耗。加入水中的饱和氯化铵，并将混合物用乙酸乙酯/己烷(80/20)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将粗制产物在硅胶垫上用在己烷中的15％的乙酸乙酯洗脱。浓缩收集的级分以产生期望的产物，为浅黄色固体(79)(4.20g，78％产率)。无需进一步的纯化将固体直接用于下一步反应。
实施例80
将4，7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-酚(0.45g，2.45mmol)和KOtBu(0.28g，2.45mmol)在室温加入至6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-胺(0.7g，2.23mmol)于叔-BuOH(50mL)的溶液中。将反应在50℃搅拌两天。冷却后，将反应用DCM稀释，并用饱和NaHCO3洗涤。将水相用DCM/异丙醇(4:1)萃取两次。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。将产生的粗制产物通过Teledyne-Isco快速系统(通过使用CH2Cl2/MeOH，于二氯甲烷中的0至5％的甲醇洗脱)纯化以提供化合物80，为浅黄色固体(0.49g，53％)。
化合物80也可以按照如实验53(方法2)中所记载的相同的程序，通过化合物79与3-环丙基-1H-吡唑-5-胺的反应制备。
实施例81
将6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4，7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-4-胺(80mg，0.20mmol)和1-甲基哌嗪(0.56mL，5.00mmol)于异丙醇(1mL)中的溶液在密封管中加热至90℃过夜。冷却后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，并用饱和NaHCO3洗涤。将水相用二氯甲烷/异丙醇混合物(4:1)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。将产生的粗制产物通过Teledyne-Isco快速系统(通过使用CH2Cl2/MeOH，于二氯甲烷中的0至10％的甲醇洗脱)纯化以提供化合物81(本文中也被称为“NTW-3475”)(33mg，36％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.76(bs，1H，NH)，11.70(bs，H，NH)，9.26(bs，1H，NH)，6.86-5.97(m，3H，Ar-H)，5.26(bs，1H，Ar-H)，3.43(m，4H，2CH2)，2.40(s，3H，CH3)，2.35(m，4H，2CH2)，2.20(s，3H，CH3)，1.49(m，1H，CH)，0.71-0.09(m，4H，Ar-H)；ESI-MS:理论值(C24H26F2N8O)480，实测值481[M-H]+.HPLC:保留时间:14.84分钟。纯度:100％。
实施例82-85
按照与实施例81中相同的程序，化合物82-85也可以从化合物80制备并通过LC-MS表征。
化合物82的制备和表征
将6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4，7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-4-胺(化合物80)(80mg，0.20mmol)和哌嗪(431mg，5.00mmol)于异丙醇(1mL)中的溶液在密封管中加热至90℃过夜。冷却后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，并用饱和NaHCO3洗涤。将水相用二氯甲烷/异丙醇混合物(4:1)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。将产生的粗制产物通过Teledyne-Isco快速系统(通过使用CH2Cl2/MeOH，于二氯甲烷中的0至20％的甲醇洗脱)纯化，以提供化合物82(46mg，51％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.75(bs，1H，NH)，11.68 (bs，H，NH)，9.24(bs，1H，NH)，6.85-5.99(m，3H，Ar-H)，5.26(bs，1H，Ar-H)，3.37(m，4H，2CH2)，2.75(m，4H，2CH2)，2.40(s，3H，CH3)，1.49(m，1H，CH)，0.70-0.10(m，4H，Ar-H)；ESI-MS:理论值(C23H24F2N8O)466，实测值467[M+H]+。HPLC:保留时间:13.91分钟。纯度:100％。
实施例86
将化合物79(4.20g，12.72mmol)、(E)-5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-胺(2.82g，22.90mmol)、碘化钠(2.86g，19.08mmol)和DIPEA(3.33ml，19.08mmol)于DMF(35mL)中的溶液在65℃搅拌48小时。检查TLC，并且起始物质被消耗。将混合物用冰冷却，并通过过滤收集固体，用水和己烷洗涤。将片溶解于二氯甲烷/甲醇中。将溶液浓缩至最少量的溶剂。通过过滤收集固体，用甲醇洗涤以产生黄色固体(1.90g)。通过柱纯化母液。收集期望的部分，浓缩并过滤以产生浅黄色固体(0.82g)。将合并的固体(86)(2.72g，51％)用于下一步反应。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.15(br，1H)，11.80(br，1H)，10.40(br，1H)，6.95(dd，J＝10.8Hz，J＝5.6Hz，1H)，6.40(br，1H)，6.22(s，1H)，5.70-5.10(m，3H)，2.40(s，3H)，1.78(br，3H)；ESI-MS:理论值(C19H15ClF2N6O)416，实测值417(MH+)。
或者，化合物86也可以用先前记载的相同方案通过6-氯-N-(5丙烯基-1H-吡唑-3-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-胺和2-甲基-4，7-二-氟-1-H-吲哚-5-酚的反应制备。
实施例87
将86(45mg，0.11mmol)、1-甲基哌嗪(270mg，2.70mmol)和DIPEA(0.10ml，0.54mmol)于异丙醇(3.0mL)和乙腈(1.0mL)中的溶液在85℃搅拌3日。检查TLC，并且起始物质被消耗。加入稀释的碳酸氢钠，并将混合物用DCM萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将粗制产物经柱(于DCM中的0-15％甲醇)纯化。将收集的级分浓缩以产生期望的产物(化合物87，本文也被称为“NTW-3456”)(33mg，66％产率)，为米黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.90(br，1H)，11.71(br，1H)，9.30(br，1H)，6.85(dd，J＝10.8Hz，J＝5.6Hz，1H)，6.29(s，1H)，5.80-5.00(m，4H)，3.40(br，4H)，2.40(m，7H)，2.18(s，3H)，1.68(d，J＝6.8Hz，3H)；ESI-MS:理论值(C24H26F2N8O)480，实测值481(MH+)。
实施例88-99
按照与实施例87中相同的程序，化合物88-99也可以从化合物86制备并通过LC-MS表征。
化合物90的制备和表征
将86(45mg，0.11mmol)、哌嗪(232mg，2.70mmol)和DIPEA(0.10ml，0.54mmol)于异丙醇(3.0mL)和乙腈(1.0mL)中的溶液在85℃搅拌3日。检查TLC，并且起始物质被消耗。加入稀释的碳酸氢钠，并用DCM萃取混合物三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将粗制产物经柱(于DCM中的0-20％甲醇)纯化。将收集的级分浓缩以产生期望的产物(90)(21mg，43％)，为米黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.90(br，1H)，11.67(br，1H)，9.30(br，1H)，6.79(dd，J＝10.8Hz，J＝5.6Hz，1H)，6.25(s，1H)，5.80-5.00(m，4H)，3.59(m，4H)，2.80(m，4H)，2.34(s，3H)，1.68(d，J＝6.8Hz，3H)；ESI-MS:理论值(C23H24F2N8O)466，实测值467(MH+)。
实施例100
将2M Na2CO3(0.197mL，0.396mmol)的水溶液在氩气下加入至(E)-6-氯-2-((4，7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-N-(5-(丙1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(0.075g，0.179mmol)、 1-N-boc-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼戊环-2-基)-3，6-二氢-2H-吡啶(0.089g，0.287mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(0.018g，0.018mmol)于二甲氧基乙烷(4mL)中的溶液中。将混合物用氩气流脱气3分钟，然后将其在密封管中加热至90℃持续24小时。将冷却的混合物用1N NaOH淬灭并用二氯甲烷/异丙醇(8:2)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并真空浓缩。然后将残余物用在二氯甲烷(5mL)中的20％三氟甲基乙酸溶解，并搅拌3小时。将反应用1N NaOH的水溶液中和，并用二氯甲烷/异丙醇(8:2)混合物萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩以产生化合物100(0.041g，49％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d):δ12.08(bs，1H)，11.77(s，1H)，10.04(bs，1H)，6.89(q，1H，J＝5.6Hz)，6.84(m，1H)，6.52(bs，1H)，6.32(s，1H)，5.70(m，1H)，5.59(bs，1H)，5.26(m，1H)，3.49(s，1H)，3.45(m，2H)，2.94(m，2H)，2.42(s，3H)，2.30(m，2H)，1.71(dd，3H，J＝5.2，1.2Hz).MS(ESI):理论值C24H23F2N7O:463，实测值464(M+H)。
实施例101
将甲醛(37％于水中，0.012g，0.142mmol)加入至(E)-2-((4，7-二氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-N-(5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-基)-6-(1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-4-胺(0.022g，0.048mmol)于四氢呋喃(10mL)的溶液中，并搅拌10分钟。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.030g，0.142mmol)并继续20小时。将混合物用饱和NaHCO3淬灭，并用二氯甲烷/异丙醇(8:2)混合物萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(CH2Cl2:MeOH(8:2))纯化以产生化合物101(0.020g，87％)，为浅黄 色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d):δ12.08(bs，1H)，11.77(s，1H)，10.03(bs，1H)，7.09(m，1H)，6.79(m，1H)，6.52(m，1H)，6.32(s，1H)，5.67(m，1H)，5.57(m，1H)，5.24(m，1H)，3.06(m，2H)，2.56(m，2H)，2.42(s，3H)，2.40(m，2H0，2.28(s，3H)，1.71(dd，3H，J＝6.8，1.2Hz).MS(ESI):理论值C25H25F2N7O:477，实测值478(M+H)。
实施例102
将叔-BuOK(33mg，2.92mmol)在室温加入至6-氯-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-胺(700mg，2.43mmol)和2-甲基-4，7-二-氟-1-H-吲哚-5-酚(499mg，2.72mmol)于叔-BuOH(50.0mL)中的悬物液中。加入后，将混合物在55℃搅拌16小时。检查TLC，并且起始物质被消耗。加入水至反应混合物中。将混合物用二氯甲烷/异丙醇(90/10)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将粗制产物经柱(于DCM中的0-10％甲烷)纯化。将收集的级分浓缩，以产生期望的产物(102)(435mg，46％产率)，为粉红色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.80(br，1H)，11.77(br，1H)，10.30(br，1H)，6.95(dd，J＝10.8Hz，J＝5.6Hz，1H)，6.40(br，1H)，6.32(s，1H)，5.25(br，1H)，2.40(s，3H)，1.78(s，3H)；ESI-MS:理论值(C17H13ClF2N6O)390，实测值391(MH+)。
实施例103
将化合物102(50mg，0.13mmol)、1-乙基哌嗪(365mg，3.20mmol)和DIPEA(0.11ml，0.64mmol)于异丙醇(2.5mL)的溶液在 85℃搅拌3日。检查TLC，并且起始物质被消耗。加入稀释的碳酸氢钠，并将混合物用DCM萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将粗制产物经柱(于DCM中的0-15％甲醇)纯化。将收集的级分浓缩以产生期望的产物(103)(45mg，75％产率)，为米黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.65(br，2H)，9.20(br，1H)，6.82(dd，J＝10.8Hz，J＝5.6Hz，1H)，6.27(s，1H)，6.07(br，1H)，5.35(s，1H)，3.40(br，4H)，2.31(m，9H)，1.95(s，3H)，1.00(t，J＝7.2Hz，3H)；ESI-MS:理论值(C23H26F2N8O)468，实测值469(MH+)。
实施例104-109
按照与实施例103中相同的程序，化合物104-109也可以从化合物102制备并通过LC-MS表征。
实施例110
将4，6-二氯-2-甲基磺酰基嘧啶(938mg，4.13mmol)和2-甲基-4-氯-1-H-吲哚-5-酚(750mg，4.13mmol)于THF(20mL)中的溶液用干冰/丙酮冷却至-78℃。将叔丁醇钾(510mg，4.54mmol)于THF(10mL)中的悬浮液逐滴加入至反应混合物中。将混合物的温度控制在低于-50℃。加入后，将反应在-78℃搅拌1小时，然后通过1.5小时的时间升温至室温。检查TCL，并且起始物质被消耗。加入于水中的饱和氯化铵，并将混合物用乙酸乙酯/己烷(95/5)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将粗制产物在硅胶垫上用己烷中的20％乙酸乙酯洗脱。将收集的级分浓缩以产生期望的产物(110)(900mg，66％产率)，为浅黄色固体。无需进一步的纯化将固体用于下一步的反应。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.42(s，1H)，7.75(s，1H)，7.30(d，J＝8.4Hz，1H)，7.00(d，J＝8.4Hz，1H)，6.21(s，1H)，2.41(s，3H)；ESI-MS:理论值(C13H8Cl 3N3O)326，实测值327(MH+)。
实施例111
将5-((4，6-二氯嘧啶-2-基)氧基)-4-氯-2-甲基-1H-吲哚(0.85g，2.59mmol)、(E)-5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-胺(0.48g，3.89 mmol)、碘化钠(0.58g，3.89mmol)和DIPEA(0.68mL，3.89mmol)于DMF(10.0mL)中的溶液在70℃搅拌2日。将混合物缓慢加至水(200.0mL)中。将混合物用冰浴冷却，并通过过滤收集固体，用水和己烷洗涤。将固体溶解于CH2Cl2/MeOH中并浓缩。将产生的粗制物通过Teledyne-Isco快速系统(通过使用CH2Cl2/MeOH，于二氯甲烷中的0至5％的甲醇洗脱)纯化，以提供化合物111(0.75g，70％),为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.13(bs，1H，NH)，11.42(bs，H，NH)，10.38(bs，1H，NH)，7.32-5.17(m，7H，5Ar-H，2CH)，2.44(s，3H，CH3)，1.71(d，3H，CH3)；ESI-MS:理论值(C19H16Cl2N6O)415，实测值416[M+H]+。
实施例112
将(E)-6-氯-2-((4-氯-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-N-(5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(50mg，0.12mmol)和1-甲基哌嗪(0.067mL，0.60mmol)于异丙醇(1.0mL)中的溶液加热至85℃过夜。冷却后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，并用水洗涤。用二氯甲烷萃取水相。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并浓缩。将产生的粗制产物通过Teledyne-Isco快速系统(通过使用CH2Cl2/MeOH，于二氯甲烷中的0至10％的甲醇)纯化，以提供化合物112(25mg，43％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.88(bs，1H，NH)，11.31(bs，H，NH)，9.32(bs，1H，NH)，7.27-5.34(m，7H，5Ar-H，2CH)，3.44(m，4H，2CH2)，2.43-2.35(m，7H，2CH2，CH3)，2.21(s，3H，CH3)，1.71(d，3H，CH3)；ESI-MS:理论值(C24H27ClN8O)478，实测值479[M+H]+。HPLC:保留时间:15.70分钟。纯度:92％。
实施例113-116
按照与实施例112中相同的程序，化合物113-116也可以由化合 物111制备并通过LC-MS表征。
实施例117
将5-((4，6-二氯嘧啶-2-基)氧基)-4-氟-2-甲基-1H-吲哚(化合物8，6.00g，19.2mmol)和碘甲烷(5.46g，38.5mmol)于DMF(28mL)中的溶液缓慢加入至冷的(0℃)氢化钠(60％，1.54g，38.5mmol)于DMF(20mL)中的悬浮液中。将反应混合物在0℃搅拌2小时。检查TLC，并且起始物质被消耗。将混合物按份倒入冷水中，并将容器放入冰浴中。将白色固体通过过滤收集，用水洗涤并用己烷研磨。在真空管中进一步干燥后，获得6.03g白色固体(117)(96％产率)。无 需进行进一步的纯化。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.76(s，1H)，7.26(d，J＝8.8Hz，1H)，7.03(t，J＝8.0Hz，1H)6.34(s，1H)，3.69(s，3H)，2.41(s，3H)；ESI-MS:理论值(C14H10Cl2FN3O)325，实测值326(MH+)。
实施例118
将5-((4，6-二氯嘧啶-2-基)氧基)-4-氟-1，2-二甲基-1H-吲哚(化合物117，2.68g，8.22mmol)，(E)-5-(丙-1-烯-1-基)-1H-吡唑-3-胺(1.77g，14.38mmol)、碘化钠(1.85g，12.33mmol)和DIPEA(2.15ml，12.33mmol)于DMF(80mL)中的溶液在65℃搅拌24小时。检查TLC，并且起始物质被消耗。将混合物倒入水(500mL)中，并用冰冷却。将固体通过过滤收集，用水和己烷洗涤。将片溶解于二氯甲烷/甲醇中。将溶液浓缩至最少量的溶剂。将固体通过过滤收集，用甲醇洗涤以产生黄色固体(118)(2.27g，67％产率)。回收母液。 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.15(br，1H)，10.35(br，1H)，7.14(m，1H)，6.90(m，1H)，6.40(br，1H)，6.22(s，1H)，5.70-5.10(m，3H)，3.80(br，3H)2.40(s，3H)，1.78(br，3H)；ESI-MS:理论值(C20H18ClFN6O)412，实测值413(MH+)。
实施例119
按照与实施例120中相同的程序，在相同的条件下，化合物119和3-环丙基吡唑-5-胺的反应产生化合物119。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.15(br，1H)，10.35(br，1H)，7.14(m，1H)，7.00(m，1H)，6.50(br，1H)，6.22(s，1H)， 5.00(br，1H)，3.80(s，3H)2.40(s，3H)，1.50(br，1H)，1.20(br，2H)，0.80(br，2H)；ESI-MS:理论值(C20H18ClFN6O)412，实测值413(MH+)。
实施例120
将化合物118(150mg，0.36mmol)、1-甲基哌嗪(181mg，1.81mmol)和DIPEA(0.13ml、0.73mmol)于DMSO(3.5mL)中的溶液在75℃搅拌3日。检查TLC，并且起始物质被消耗。将反应混合物倒入稀释的于水中的碳酸氢钠(～1％)中，并用冰浴冷却。将固体通过过滤收集，用水和己烷洗涤，以产生浅棕色固体161mg。将粗制产物用MeOH研磨，过滤并用MeOH洗涤以产生化合物120(82mg，47％产率),为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.92(br，1H)，9.31(br，1H)，7.20(d，J＝8.8Hz，1H)，6.92(t，J＝8.0Hz，1H)，6.28(s，1H)，5.80-5.60(m，4H)，3.70(s，3H)，3.42(br，4H)，2.42(s，3H)，2.34(m，4H)，2.19(s，3H)，1.67(d，J＝6.0Hz，3H)；ESI-MS:理论值(C25H29FN8O)476，实测值477(MH+)。
实施例121
用与实施例120中记载的相同程序，从化合物118制备化合物121。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.92(br，1H)，9.38(br，1H)，7.23(d，J＝8.8Hz，1H)，6.92(t，J＝8.0Hz，1H)，6.28(s，1H)，5.80-5.60(m，4H)，3.70(s，3H)，3.60(br，4H)，3.40(m，4H)，2.42(s，3H)，1.67(d，J＝6.0Hz，3H)；ESI-MS:理论值(C24H26FN7O2)463，实测值464(MH+)。
实施例122
用与实施例120中记载的相同程序，从化合物119制备化合物122。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.92(br，1H)，9.31(br，1H)，7.30(d，J＝8.8Hz，1H)，6.92(t，J＝8.0Hz，1H)，6.28(s，1H)，6.00(br，1H)，5.15(br，1H)，3.78(s，3H)，3.70(br，4H)，2.80(m，4H)，2.57-2.42(s，s，6H)，1.80(br，1H)，0.85(br，2H)，0.00(br，2H)；ESI-MS:理论值(C25H29FN8O)476，实测值477(MH+)。
实施例123
用与实施例120中记载的相同程序，从化合物119制备化合物123。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.92(br，1H)，9.31(br，1H)，7.22(d，J＝8.8Hz，1H)，6.92(t，J＝8.0Hz，1H)，6.27(s，1H)，5.90(br，1H)，5.15(br，1H)，3.68(s，3H)，3.60(br，4H)，3.40(m，4H)，2.39(s，3H)，1.60(br，1H)，0.85(br，2H)，0.00(br，2H)；ESI-MS:理论值C24H26FN7O2)463，实测值464(MH+)。
实施例124
将碘化钠(0.106g，0.705mmol)在氩气气氛下加入至5-((4，6-二氯嘧啶-2-基)氧基)-4-氟-2-甲基-1H-吲哚(0.109g，0.349mmol)、5-环丙基-N-甲基-1H-吡唑-3-胺(0.088g，0.641mmol)和二 异丙基乙基胺(0.124g，0.961mmol)于无水二甲基甲酰胺(9mL)中的溶液中。将混合物在85℃加热过夜(16小时)。冷却后，真空除去溶剂，然后再溶解于二氯甲烷/异丙醇(8:2)混合物(50mL)中，并用饱和NaHCO3洗涤。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(CH2Cl2:MeOH(95:5))纯化，以产生化合物124(0.110g，77％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d):δ12.37(bs，1H)，11.27(s，1H)，7.93(s，2H)，7.09(d，1H，J＝8.4Hz)，6.89(m，1H)，6.68(s，1H)，6.21(s，1H)，5.77(bs，1H)，3.24(s，3H)，2.37(s，3H)，1.67(m，1H)，0.83(m，2H)，0.51(m，2H)。MS(ESI):理论值C20H18ClFN6O:412，实测值413(M+H)。
实施例125
将6-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)-N-甲基嘧啶-4-胺(0.105g，0.255mmol)、1-甲基哌嗪(0.102g，1.021mmol)和DIPEA(0.099g，0.765mmol)于异丙醇(1.0mL)的溶液在密封管中加热至80℃2日。将冷却的混合物用二氯甲烷/异丙醇(8:2)萃取，并用饱和NaHCO3洗涤。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(CH2Cl2:MeOH(95:5))纯化，以产生化合物125(0.083g，68％)，为米黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d):δ11.62(s，1H)，10.81(s，1H)，6.70(d，1H，J＝8.4Hz)，6.47(m，1H)，5.81(s，1H)，5.499s，1H)，5.259s，1H)，3.04(m，4H)，2.84(s，3H)，2.00(s，3H)，1.93(m，4H)，1.81(s，3H)，1.16(m，1H)，0.38(m，2H)，0.006(m，2H)。MS(ESI):理论值C25H29FN8O:476，实测值478(M+H)。
实施例126
将碘化钠(0.106g，0.705mmol)在氩气气氛下加入至5-((4，6-二氯嘧啶-2-基)氧基)-4-氟-2-甲基-1H-吲哚(0.109g，0.349mmol)、5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-胺(0.088g，0.641mmol)和二异丙基乙基胺(0.124g，0.961mmol)于无水二甲基甲酰胺(9mL)的溶液中。将混合物加热至85℃过夜(16小时)。冷却后，将溶剂真空除去，然后再溶解于二氯甲烷/异丙醇(8:2)混合物(50mL)中，并用饱和NaHCO3洗涤。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(CH2Cl2:MeOH(9:1))纯化，以产生化合物126(0.255g，97％)，为米黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d):δ11.32(s，1H)，10.31(bs，1H)，7.12(d，1H，J＝8.4Hz)，6.89(m，1H)，6.48(bs，1H)，6.20(s，1H)，5.13(bs，1H)，3.59(bs，3H)，2.39(s，3H)，1.53(m，1H)，0.61(m，2H)，-0.26(m，2H)。MS(ESI):理论值C20H18ClFN6O:412，实测值413(M+H)。
实施例127
将6-氯-N-(5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-((4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基)氧基)嘧啶-4-胺(0.100g，0.242mmol)、1-甲基哌嗪(0.097g，0.969mmol)和DIPEA(0.094g，0.727mmol)于异丙醇(1.0mL)的溶液在密封管中加热至80℃2日。将冷却的混合物用二氯甲烷/异丙醇(8:2)萃取，并用饱和NaHCO3洗涤。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法 (CH2Cl2:MeOH(95:5))纯化，以产生化合物127(0.106g，92％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d):δ11.32(s，1H)，9.35(s，1H)，7.18(d，1H，J＝8.4Hz)，6.93(m，1H)，6.28(s，1H)，5.98(bs，1H)，5.27(s，1H)，3.68(s，1H)，3.52(m，4H)，3.26(dd，3H，J＝5.2，0.4Hz)，2.49(s，3H)，2.44(m，4H0，2.30(s，3H)，1.64(m，1H)，0.72(m，2H)，0.00(m，2H)。MS(ESI):理论值C25H29FN8O:476，实测值478(M+H)。
实施例128
该实施例在c-Src激酶、Aurora-A激酶、Flt3激酶、Ret激酶和TrkA激酶测定中测试本发明代表性化合物的抑制的性质(参见，Daniele Fancelli等，J.Med.Chem.，2006，49(24)，第72477251页)。使用KinaseProfiler服务测定方法(微孔)(KinaseProfilerTMService Assay Protocols(Millipore))测试本发明新型化合物的激酶抑制活性。为此，缓冲组合物为:20mM MOPS、1mM EDTA、0.01％Brij-35、5％甘油、0.1％β-疏基乙醇、1mg/mLBSA。测试化合物最初以期望的浓度溶解于DMSO中，然后连续稀释至激酶测定缓冲液。将25μL的最终反应体积的Aurora-A(h)(5-10mU)用8mM MOPS pH 7.0、0.2mM EDTA、200μMLRRASLG(Kemptide)、10mM醋酸镁和[γ33P-ATP]温育。通过加入MgATP混合物开始反应。在室温温育40分钟后，通过加入5μL的3％磷酸溶液停止反应。然后将10μL反应体系点至P30过滤垫上，并在50mM磷酸中洗涤三次持续五分钟，和在甲醇中洗涤一次，然后干燥并闪烁计数。将包含基质但是不包含激酶的孔和包含磷酸肽对照物的孔分别设置为0％和100％磷酸化值。
Kinase Hotspot SM激酶测定也用于测试化合物的IC50或抑制百分数(ReactionBiology Corp。)。通过在最佳的激酶浓度(激酶EC50)的化合物的滴定测定抑制的IC50值。
表1显示本发明化合物在1μM的浓度对abl激酶、Aurora-A激酶、c-Src激酶、Flt3激酶、KDR激酶和Ret激酶抑制的代表性数据。
表1
这些结果表明本发明的很多实施方式对广泛的激酶具有极好的激酶抑制的性质。
实施例129
实施例81(化合物81)(本文中也被称为化合物”NTW-3475”)中公开的本发明的实施方式证明了所述化合物NTW-3475对实施例128中所有激酶的强抑制，并且选择该化合物用于进一步的测试。
使用NCI-60DTP人肿瘤细胞系组来进一步评估NTW-3475的生物化学性质(参见Shoemaker:The NCI60 human tumour cell line anticancer drug screen，NatureReviews Cancer 6，第813-823页(2006年10月1日))。
测试NTW-3475对广泛激酶的激酶活性效应并在表2中显示:
表2
NTW-3475显示对广泛酶的强的激酶抑制(表2和图1-2)，所述广泛酶包括突变体激酶，其中测试认为对癌细胞的它们的变形(它们从这些癌细胞中分离)关键的突变体，特别是抑制剂未知的突变体abl激酶(图2)。
实施例130
也使用来自NCI 60癌细胞系组的细胞系测试NTW-3475的抗增殖 的潜力。
癌筛选组的人肿瘤细胞系在包含5％胎牛血清和2mM L-谷氨酰胺的RPMI 1640培养基中生长。对于典型的筛选实验，将细胞接种入96孔微升板中，每孔100μL，根据单独细胞系的倍增时间，板密度范围为5000至40000细胞/孔。细胞接种后，将微升板在37℃、5％CO2、95％空气和100％相对湿度温育24小时，然后加入实验性药物。
24小时后，将每一细胞系的两个板用TCA固定在原位，以表示在加入药物时(Tz)每一细胞系的细胞群的测量。将实验性药物以期望的最终最大测试浓度的400倍在二甲基亚砜中溶解，并在使用前冷冻储存。加入药物时，解冻一等分的冷冻浓缩物，并用包含50μg/ml庆大霉素的完全培养基将其稀释至期望的最终最大测试浓度的两倍。制备另外四个10倍或对数的连续稀释物以提供总的5种药物浓度(加上对照)。将这些不同药物稀释物的100μl等分加入至已经包含100μl培养基的合适微升孔中，产生需要的最终药物浓度。
加入药物后，将板温育在37℃、5％CO2、95％空气和100％相对湿度温育另外48小时。对于贴壁细胞，通过加入冷的TCA终止该测定。通过徐缓加入50μl的冷的50％(w/v)TCA(最终浓度，10％TCA)将细胞原位固定，并在4℃温育60分钟。丢弃上层清液，用自来水洗涤板5次并风干。将磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B)(SRB)溶液(100μl)(于1％乙酸中的0.4％(w/v))加入至各孔，并且将板在室温温育10分钟。染色后，通过用1％乙酸洗涤5次除去非结合的染料，并风干板。将结合染色剂(Bound stain)随后用10mM氨基丁三醇(trizmabase)溶解，并用自动板读数器在515nm波长读取吸光度。对于悬浮细胞，除了通过将沉积在孔底的细胞固定(通过徐缓加入50μl的80％TCA(最终浓度，16％TCA))来终止测定，方法是相同的。使用七个吸光度测量[计时零点，(Tz)，对照生长，(C)，和在五种浓度水平的药物存在下的测试生长(Ti)]，计算在每种药物浓度水平的增长百分比。如下计算生长抑制百分比:
[(Ti-Tz)/(C-Tz)]x 100对于Ti>/＝Tz时的浓度
[(Ti-Tz)/Tz]x 100对于Ti<Tz时的浓度。
计算每种实验试剂的三种剂量响应参数。从[(Ti-Tz)/(C-Tz)]x100＝50计算50％的生长抑制(GI50)，其为导致在药物温育期间对照细胞中净蛋白质增长(通过SRB染色测定)减少50％的药物浓度。
如图3所示，NTW-3475在所研究的16种细胞系的至少13种中证明强的抗增殖活性(通过对照百分比显示)。在一系列的细胞系包括来自于慢性髓性白血病、急性骨髓性白血病、甲状腺癌、子宫内膜癌、胃癌、乳腺癌和胰腺癌的细胞系中看出该抗增殖效应。
实施例131
该实施例使用白血病的SCID小鼠异种移植模型和子宫内膜癌、胰腺癌和甲状腺癌的裸鼠异种移植模型评估NTW-3475的抗肿瘤活性。在鼠科的异种移植中也研究NTW-3475组合疗法。
第一项研究的目的为评估新型多激酶抑制剂NTW-3475对雌性SCID小鼠中的人MV411人急性骨髓性白血病(AML)异种移植模型的抗肿瘤活性。
将四或六只动物随机分配至每个研究组。每只动物的左和右胁腹区域皮下注射0.1ml的1.0×108MV411细胞/mL。
每只测试或对照动物接受介质阴性对照或25、50mg/kg的NTW-3475的两周期的治疗方案，每周期五天治疗、两天停止。用数字手持式测径器在首次给药前每周两次(一旦肿瘤出现)测定肿瘤生长，然后每周两到三次测量肿瘤生长直至安乐死。肿瘤细胞注射前、给药前、每周两次到三次肿瘤生长测量时，以及安乐死前称重动物。
图4(随时间的肿瘤重量)、图5(随时间的肿瘤体积)和图6(第22天的T/C)显示结果。所述结果表明NTW-3475对AML有强抗肿瘤效应(带有最少的体重减轻)。
第二项研究的目的为评估新型多激酶抑制剂NTW-3475在雌性SCID小鼠中的人K562慢性髓性白血病(CML)异种移植模型中的抗肿瘤活性。
将四到六只动物随机分配至每个研究组。对每只动物称重，然后 在其左和右胁腹区域皮下注射0.1ml的8.0×107K562细胞/mL。
每只测试或对照动物接受两周期的治疗方案，每周期五天治疗、两天停止。首次给药前用数字手持式测径器每周两次(一旦肿瘤出现)测量肿瘤生长，然后每周两到三次测量肿瘤生长直至安乐死。肿瘤细胞注射前、给药前、每周两次到三次肿瘤生长测量时，以及安乐死前称重动物。图7和8显示结果。结果显示NTW-3475在该模型系统中对CML具有强抗肿瘤效应。
第三项研究的目的为评估新型多激酶抑制剂NTW-3475在无胸腺的裸Faxn1小鼠中的人MIAPaCa-2胰腺癌异种移植中的抗肿瘤活性。
将四只动物随机分配至每个研究组。对每只动物称重，然后在其左和右胁腹区域皮下注射0.1ml的5.0×107MIAPaCa-2细胞/mL。
每只测试或对照动物接受两周期的治疗方案(使用阴性对照介质、20mg/kg或25、50mg/kg的NTW-3475的阳性对照Abraxane),每周期五天治疗、两天停止。首次给药前用数字手持式测径器每周两次(一旦肿瘤出现)测量肿瘤生长，然后每周两到三次测量肿瘤生长直至安乐死。图9、10和11中显示结果，其表明NTW-3475在该模型系统中对胰腺癌细胞具有强抗肿瘤效应。
类似地测试NTW-3475，并且其显示在TT人甲状腺癌异种移植中具有抗肿瘤效应(图12和13)。
类似地测试NTW-3475，并且其显示在AN3人子宫内膜癌异种移植中具有抗肿瘤效应(图14、15和16)。
类似地单独测试NTW-3475和测试其与Abraxane的组合，所述组合显示在MIAPaCa-2异种移植中具有抗肿瘤效应(图17、18和19)。
总的来说，激酶、增殖和异种移植的研究表明NTW-3475显示了高的细胞的潜能和靶向作用(图20)，NTW-3475在异种移植模型系统中对AML、CML、甲状腺癌、子宫内膜癌和某种胰腺癌为体内活性的(图21)。
实施例132
实施例87(化合物87)(本文中也被称为化合物”NTW-3456”)中公开的本发明的实施方式证明所述化合物NTW-3456对实施例128中所 有激酶的强抑制，并且选择化合物NTW-3456用于进一步测试。
设计第一项研究来评估NTW-3456对激酶活性的效应。图22-24中显示NTW-3456对广泛激酶的活性，所述激酶包括被认为在致瘤性转化中起大作用的的突变体激酶(图23和24)。另外，NTW-3456抑制abl突变体中的激酶活性，FDA以前没有批准过对所述abl突变体的抑制剂。特别的，NTW-3456抑制2T315I突变体，在NTW-3456之前未知所述2T315I突变体的激酶抑制剂。
实施例133
使用60NCI癌症细胞系(用于测试NTW-3475)的方法测试NTW-3456对体外增殖的效应。
将NCI-60DTP人肿瘤细胞系组用于进一步评估NTW-3475的生物化学性质(参见Shoemaker:The NCI60 human tumour cell line anticancer drug screen，NatureReviews Cancer 6，第813 823页(2006年10月1日))。测试NTW-3456对广泛激酶的激酶活性的效应，并在图25中显示。总的来说，NTW-3456抑制磷酸化和增殖。已经知晓NTW-3456对AML、CML、甲状腺癌、子宫内膜癌、胃癌、乳腺癌和某种胰腺癌细胞系的抗增殖活性(图26)。
实施例134
该实施例研究NTW-3456在异种移植模型系统中对AML、CML、甲状腺癌、子宫内膜癌、胰腺癌的抗肿瘤活性。
图27-32描述在使用MV411细胞的AML的SCID小鼠/异种移植模型中，许多浓度的NTW-3456对肿瘤生长的结果。在该模型系统中，NTW-3456证明显著的抗肿瘤活性，特别是在较高剂量(图29和32)。本发明特征在于此处的pFLT3激酶的抑制和生长对照之间的相关性。
给予携带已确定的MV4-11肿瘤异种移植(肿瘤体积大约150mm3)的小鼠口服剂量50mg/kg的NTW-3456。在给药后的0、1、2、8、16、24小时，将三只小鼠安乐死。收集血样，并用离心机制备用于LCMS测定的血浆。将肿瘤采集，在裂解缓冲液中均质化，用抗-FLT3抗体免疫沉淀(图33)。
曲线(实心点)为口服施用50mg/kg的NTW-3456后，其血浆浓度-时间性质的图。顶端曲线(实心三角)显示在指示时间口服施用50mg/kg的NTW-3456后，NTW-3456抑制MV4-11肿瘤的FLT3磷酸化(pFLT3)。
NTW-3456抑制体内FLT3磷酸化，并且它为时间依赖的。24小时后，NTW-3456(7nM，在血浆中)仍然抑制超过60％的MV4-11肿瘤的FLT3磷酸化。
图34和35描述许多浓度的NTW-3456对使用K562细胞的CML的SCID小鼠/异种移植模型的结果。在该模型系统中，NTW-3456证明了显著的抗肿瘤活性，特别是在较高剂量(图34)。
图36-38描述许多浓度的NTW-3456对甲状腺癌的裸鼠/异种移植的TT细胞模型的结果。在该模型系统中，NTW-3456证明了显著的抗肿瘤活性，特别是在较高剂量(图38)。
图39-41描述许多浓度的NTW-3456对子宫内膜癌的AN3裸鼠/异种移植模型的结果。在该模型系统中，NTW-3456证明了显著的抗肿瘤活性，特别是在较高剂量(图41)。
图42-44描述许多浓度的NTW-3456对胰腺癌的裸鼠/异种移植MIAPaCa-2模型的结果。在该模型系统中，NTW-3456在该胰腺癌的模型中证明了一些抗肿瘤活性。
图45和46描述许多浓度的NTW-3456(有或无Abraxane)对胰腺癌的MiaPaCa-2模型的结果。在该模型系统中，NTW-3456证明了显著抗肿瘤活性，特别是与Abraxane组合使用时(图47)。
图48和49描述许多浓度的NTW-3456(有或无Abraxane)对胰腺癌的Panc-1模型的效果。在该模型系统中，NTW-3456证明了显著的抗肿瘤活性，特别是与Abraxane组合使用时。
图50总结NTW-3456在鼠科异体移植中的抗肿瘤活性。总的来说，这些实例证明了所观察到的NTW-3456的高特异性的活性。
实施例135
该实施例研究NTW-3456和NTW-3475细胞的生物化学性质。
图51和52显示NTE-3456、尼洛替尼、Ponatinnib、Suntinib和伊马替尼抑制MiaPaCa-2和BaFC3细胞中的增殖和pERK和pAKt发信号的剂量响应曲线。图53总结该数据。
图54显示NTE-3456、尼洛替尼、Ponatinnib、Suntinib和伊马替尼抑制K562细胞中体外生长的剂量响应曲线。图55显示NTE-3456、尼洛替尼、Ponatinnib、Suntinib和伊马替尼抑制K562细胞中的p-Crl激酶活性的剂量响应曲线。图56显示NTE-3456、尼洛替尼、Ponatinnib、Suntinib和伊马替尼诱导K562细胞中的Caspse 3/7活性的剂量响应曲线。图57总结该数据。
图58显示NTW-3456从FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4抑制BaF3细胞中的激酶活性的剂量响应曲线。图59说明驱动的BaF3细胞的FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4的NTW-3456IC50水平。总的来说，NTW-3475(图38)和NTW-3456(图39)抑制MIaPaca-2和BxPC3细胞中的增殖、pERK途径发信号是类似的。另外，这些结果表明生长抑制和发信号抑制之间的相关性。
实施例136
测试了化合物10和11对于广泛的激酶的激酶活性效应，并在表3中显示。
表3:化合物10和11的激酶性质。
实施例137
公开的化合物对广泛激酶显示强的激酶抑制(表4和5)。
表4：所选激酶抑制的代表性IC50数据。
化合物53对广泛激酶显示强的激酶抑制(表5)，所述广泛激酶包括突变体激酶、特别是抑制剂未知的突变体abl激酶，其中测试了认为对癌细胞的它们的变形(它们从这些癌细胞中分离)关键的突变体。
表5化合物53的激酶抑制的总结。
激酶 IC50(nM)
Aurora-A 4.0
cSrc 2.0
Flt3 13.0
VEGFR1 3.0
VEGFR2 16.0
VEGFR3 2.0
FGFR1 0.5
FGFR2 2.0
FGFR3 1.0
FGFR4 13.0
Ret 2.0
Ret(V804L突变体) 10.0
Ret(V804M突变体) 6.0
Abl 0.6
Abl(T315I) 0.5
Abl(H396P) <0.1
Abl(M351T) 0.7
Abl(Q252H) 0.5
Abl(Y253F) 0.5
实施例138
也使用来自NCI 60癌细胞系组的细胞系测试化合物53的抗增殖潜力。
将NCI-60DTP人肿瘤细胞系组用于进一步评估化合物53的生物化学性质(参见Shoemaker:The NCI60 human tumour cell line anticancer drug screen，NatureReviews Cancer 6，第813 823页(2006年10月1日))。
将癌筛选组的人肿瘤细胞系在包含5％胎牛血清和2mM L-谷氨酰 胺的RPMI 1640培养基中生长。对于典型的筛选实验，将细胞接种入96孔微升板中，每孔100μL，根据单独细胞系的倍增时间，板密度范围为从5000至40000细胞/孔。细胞接种后，将微升板在37℃、5％CO2、95％空气和100％相对湿度温育24小时，然后加入实验性药物。
24小时后，将每一细胞系的两个板用TCA原位固定，以表示在加入药物时(Tz)每一细胞系的细胞群的测量。将实验性药物在期望的最终最大测试浓度400倍的二甲基亚砜中溶解，并在使用前冷冻储存。加入药物时，解冻一等分的冷冻浓缩物并用包含50μg/ml庆大霉素的完全培养基稀释至期望的最终最大测试浓度的两倍。制备另外四个10倍或对数的连续稀释物以提供总的5种药物浓度(加上对照)。将这些不同药物稀释物的100μl等分加入至已经包含100μl培养基的合适的微升孔中，产生需要的最终药物浓度。
加入药物后，将板在37℃、5％CO2、95％空气和100％相对湿度温育另外48小时。对于贴壁细胞，通过加入冷的TCA终止测定。通过徐缓加入50μl冷的50％(w/v)TCA(最终浓度，10％TCA)将细胞原位固定，并在4℃温育60分钟。丢弃上层清液，用自来水洗涤板5次，并风干。将Sulforhod胺B(SRB)溶液(100μl)(0.4％(w/v)于1％乙酸中)加入至各孔，并且将板在室温温育10分钟。染色后，通过用1％乙酸洗涤5次除去非结合的染料，并风干板。将结合染色剂随后用10mM氨基丁三醇溶解，并用自动板读数器在515nm波长读取吸光度。对于悬浮细胞，除了通过将沉积在孔底的细胞(通过徐缓加入50μl的80％TCA(最终浓度，16％TCA))固定来终止测定之外，方法是相同的。使用七个吸光度测量[计时起点，(Tz)，对照生长，(C)，和在五种浓度水平的药物存在下的测试生长(Ti)]计算在每种药物浓度水平的增长百分比。如下计算生长抑制百分比:
[(Ti-Tz)/(C-Tz)]x 100对于Ti>/＝Tz时的浓度
[(Ti-Tz)/Tz]x 100对于Ti<Tz时的浓度。
计算每种实验试剂的三种剂量响应参数。从[(Ti-Tz)/(C-Tz)]x 100＝50计算50％(GI50)的生长抑制，其为导致在药物温育期间对照细胞中的净蛋白质增长减少50％(通过SRB染色测定)的药物浓度。
如表6中所示，化合物53证明生长抑制(GI50)的范围为0.01至1.89μM。
表6化合物53的体外测试结果。
化合物53证明了强抗增殖的活性，并且在一些系列的细胞系包括白血病、肺癌、结肠癌、CNS癌、肾癌和乳腺癌中观察到该抗增殖的效应。
实施例139
该实施例说明本发明所选化合物抑制增殖细胞生长。为此，将细胞在新鲜的依斯考夫生长培养基中以0.4e6细胞/ml的密度接种，并在对数期中生长24小时。然后将细胞在它们新鲜的各自生长培养基中以0.1e6细胞/ml再悬浮，并以36ul/孔置入384孔的黑色、清澈底的微板中。最初将测试化合物和对照物以期望的浓度溶解于DMSO中，然后连续稀释至测定缓冲液。将这些溶液加入，并将细胞在37℃温育72小时。在Beckman FX上加入CellTiterBlue(Promega目录号G7572)。将板放回37℃的CO2温育器中4小时，然后在Victor板读数器上确定荧光。用微软Excel处理数据，并使用Prism(GraphPad Software，圣地亚哥，加利福利亚)产生GI50值。
表7显示K562、TT、KU812、MV4.11、RS4.11、AN3.CA和Kato III增殖的细胞生长抑制的代表性GI50数据。
实施例140
该实施例说明化合物10和11在雌性SCID小鼠中的人K562慢性髓性白血病(CML)异种移植模型中的抗肿瘤活性。
将四到六只动物随机分配至每个研究组。每只动物称重，然后在其左和右胁腹区域皮下注射0.1ml的8.0×107K562细胞/mL。
每只测试或对照动物接受两周期的治疗方案，每周期五天治疗、两天停止。首次给药前用数字手持式测径器每周两次(一旦肿瘤出现)测量肿瘤生长，然后每周两到三次测量肿瘤生长直至安乐死。肿瘤细胞注射前、给药前、每周两次到三次肿瘤生长测量时，以及安乐死前称重动物。结果如图60－63所示。结果显示化合物10和11在该模型系统中对CML具有强抗肿瘤效应，并且没有体重减轻。
适当时，适当组中的每只动物将接受75或100mg/kg的特定量的测试物，并且通过口服灌胃的给药体积为标明的10ml/kg。给药方案将为每日一次持续十日(qd×10，5天进行和2天停止，持续2个周期)。
类似地测试化合物53，该化合物显示在小鼠的K562人慢性髓性白血病异种移植模型中具有抗肿瘤效应(图64)。
实施例141
该实施例使用SCID小鼠异种移植模型评估化合物10、53和88对TT人甲状腺癌异种移植的抗肿瘤活性(图65至69)。
测试化合物10，该化合物显示在TT人甲状腺癌异种移植中具有抗肿瘤效应(图65和66)。在适当时，适当组中的每只动物将接受50或100mg/kg的特定量的化合物10，并且通过口服灌胃的给药体积为 标明的10ml/kg。给药方案将为每日一次持续三十日。
在适当时，适当组中的每只动物将接受50或100mg/kg的特定量的化合物53，并且通过口服灌胃的给药体积为标明的10ml/kg。给药方案将为每日一次持续三十日。
在适当时，适当组中的每只动物将接受50mg/kg的特定量的化合物88，并且通过口服灌胃的给药体积为标明的10ml/kg。给药方案将为每日一次持续三十日。
实施例142
第一项研究的目的为评估新型多激酶抑制剂化合物11、68和82对雌性SCID小鼠中的人MV411人急性骨髓性白血病(AML)异种移植模型的抗肿瘤活性。
将四或六只动物随机分配至每个研究组。每只动物的左和右胁腹区域皮下注射0.1ml的1.0×108MV411细胞/mL。
每只测试或对照动物接受介质阴性对照或25、50mg/kg的化合物的两周期的治疗方案，每周期五天治疗、两天停止。用数字手持式测径器在首次给药前每周两次(一旦肿瘤出现)测量肿瘤生长，然后每周两到三次测量肿瘤生长直至安乐死。肿瘤细胞注射前、给药前、每周两次到三次肿瘤生长测量时，以及安乐死前称重动物。
结果在图70-71中显示。结果表明化合物11、68和82对AML具有强抗肿瘤效应，带有最少的体重减轻。
实施例143
第三项研究的目的为评估新型多激酶抑制剂化合物10、11、12、53、68、82、83、88和90在无胸腺的裸Faxn1小鼠中的人MIAPaCa-2胰腺癌异种移植的抗肿瘤活性。
将四只动物随机分配至每个研究组。称重每只动物，并然后在其左和右胁腹区域皮下注射0.1ml的5.0×107MIAPaCa-2细胞/mL。
每只测试或对照动物接受具有阴性对照介质或40mg/kg的化合物10、11、12、53、68、82、83、88和90的三周期的治疗方案，每周期五天治疗、两天停止。用数字手持式测径器在首次给药前每周两次 (一旦肿瘤出现)测量肿瘤生长，然后每周两到三次测量肿瘤生长直至安乐死。
图72、73和74中显示结果，其表明化合物10、11、12、53、68、82、83、88和90对该模型系统中的胰腺癌细胞具有强抗肿瘤效应。化合物68和82与Abraxane的组合显示显著的抗肿瘤功效。
实施例144
使用裸鼠中的U251人CNS肿瘤异种移植模型已经研究了化合物53的体内抗肿瘤功效(图16)。这是皮下的早期阶段实验(定义为中值肿瘤分期大小小于200mg)。化合物53或介质对照以不同的剂量通过腹膜内的注射施用许多天。当使用Q2Dx3的给药方案时，化合物53在60mg/kg的剂量显示显著的抗肿瘤活性，在第30天的治疗/对照(T/C)值为40％。化合物53在该剂量耐受良好，带有3.4％的最大体重减轻。
实施例145
使用裸鼠中的SC LOX IMVI黑色素瘤异种移植模型已经研究了化合物53的体内抗肿瘤功效(图76)。这是皮下的早期阶段实验(定义为中值肿瘤分期大小小于200mg)。化合物53或介质对照以不同的剂量通过腹膜内的注射施用许多天。当使用QDx4的给药方案时，化合物53在50mg/kg的剂量显示显著的抗肿瘤活性，在第13天的治疗/对照(T/C)值为21％。化合物53在该剂量耐受良好，带有10.3％的最大体重减轻。
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本文描述本发明的优选实施方式，其包括发明人已知最好的进行本发明的方式。当本领域的普通技术人员阅读上述说明书时，那些优选实施方式的变化形式可以成为显而易见的。发明人期望技术人员适当地使用该变化形式，并且发明人希望能够以除本文明确描述的内容之外的其他方式实行本发明。因此，本发明包括适用法律允许的权利要求中所叙述主题的所有修改和等同体。另外，本发明包括以上所述要素在其所有可能变化形式中的任何组合，除非本文另有标明或与文中清楚地矛盾。

Claims (41)

1.式(I)的化合物
或其药学可接受的盐和其单独的非对映异构体，其中：
R选自:
(i)氢、氨基、烷基氨基；
(ii)C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基；
(iii)K-Ar；
Ar表示杂芳基或芳基，所述杂芳基或芳基的每个被0至4个取代基取代，所述取代基独立选自:
(1)卤素、羟基、氨基、酰胺、氰基、-COOH、-SO2NH2、氧代、硝基和烷氧基羰基；和
(2)C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C10环烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C2-C6烷酰基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、单-和二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺酰基、单-和二-(C1-C6烷基)磺酰氨基以及单-和二-(C1-C6烷基)氨基羰基；苯基C0-C4烷基和(4-至7-元杂环)C0-C4烷基，前述基团的每个都被0至4个二级取代基取代，所述二级取代基独立选自卤素、羟基、氰基、氧代、亚氨基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基和C1-C4卤代烷基；
K选自
a)O、S、SO、SO2；
b)(CH2)m，m＝0-3，-O(CH2)p，p＝1-3，-S(CH2)p，p＝1-3，-N(CH2)p，p＝1-3，-(CH2)pO，p＝1-3；
c)NR1
R1表示氢、烷基、环烷基、烯基、炔基、烷硫基、芳基、芳基烷基；
(iv)式(Ia)的基团:
其中:
R2表示氢、C1-C4烷基、氧代；
当R3为氢时，X为CH；或X-R3为O；或X为N，R3表示以下基团：氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C10芳基或杂芳基、(C3-C7环烷基)C1-C4烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C2-C6烷酰基、C1-C6烷氧基羰基、C2-C6烷酰基氧基、单-和二-(C3-C8环烷基)氨基C0-C4烷基、(4-至7-元杂环)C0-C4烷基、C1-C6烷基磺酰基、单-和二-(C1-C6烷基)磺酰氨基，以及单-和二-(C1-C6烷基)氨基羰基，前述基团的每个被0至4个取代基取代，所述取代基独立选自卤素、羟基、氰基、氨基、-COOH和氧代；
Het为吡唑，其被独立选自以下的0至4个取代基取代:
(i)C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基；
(ii)卤素、羟基、氨基、酰胺、氰基、-COOH、-SO2NH2、氧代、硝基和烷氧基羰基；
(iii)芳基；
R11和R12独立选自:氢、F和Cl；
R13、R14和R15独立选自氢、C1-C4烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C10芳基或杂芳基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C2-C6烷酰基、C1-C6烷氧基羰基或C2-C6烷酰基氧基。
2.药物组合物，其包含至少一种权利要求1的化合物或它的药学可接受的盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
3.根据权利要求2的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
4.下式的化合物:
5.药物组合物,其包含权利要求4的化合物或它的药学可接受的盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
6.根据权利要求5的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
7.下式的化合物:
8.药物组合物，其包含权利要求7的化合物或它的药学可接受的盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
9.根据权利要求8的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
10.下式的化合物:
11.药物组合物，其包含权利要求10的化合物或它的药学可接受的盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
12.根据权利要求11的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
13.下式的化合物:
14.药物组合物，其包含权利要求13的化合物或它的药学可接受的盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
15.根据权利要求14的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
16.下式的化合物:
17.药物组合物，其包含权利要求16的化合物或它的药学可接受的盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
18.根据权利要求17的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
19.下式的化合物:
20.药物组合物，其包含权利要求19的化合物或它的药学可接受的盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
21.根据权利要求20的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
22.下式的化合物:
23.药物组合物，其包含权利要求22的化合物或它的药学可接受的盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
24.根据权利要求23的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
25.下式的化合物:
26.药物组合物，其包含权利要求25的化合物或它的药学可接受的盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
27.根据权利要求26的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
28.下式的化合物:
29.药物组合物，其包含权利要求28的化合物或它的药学可接受的盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
30.权利要求29的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
31.下式的化合物:
32.药物组合物，其包含权利要求31的化合物或它的药学可接受的盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
33.根据权利要求32的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
34.下式的化合物:
35.药物组合物，其包含权利要求34的化合物或它的药学可接受的盐和其单独的非对映异构体，以及药学可接受的载体。
36.根据权利要求35的组合物，其另外包含额外的治疗剂。
37.权利要求1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31或34任一项的化合物在制备用于抑制激酶活性的药物中的用途。
38.权利要求1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31或34任一项的化合物在制备用于癌症治疗的药物中的用途。
39.权利要求38的用途，其中导致在异种移植模型中，净肿瘤体积的增长减少50％的药物组合物的浓度为0.01至1.9μM。
40.权利要求38的用途，其中癌症为白血病、肺癌、结肠癌、CNS癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、前列腺癌或乳腺癌。
41.权利要求40的用途，其中白血病为慢性髓性白血病(CML)。
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