CN104971380A - 一种脱细胞基质修复凝胶及其制备新方法 - Google Patents
一种脱细胞基质修复凝胶及其制备新方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104971380A CN104971380A CN201410145791.7A CN201410145791A CN104971380A CN 104971380 A CN104971380 A CN 104971380A CN 201410145791 A CN201410145791 A CN 201410145791A CN 104971380 A CN104971380 A CN 104971380A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- acellular matrix
- preparation
- pbs buffer
- gel
- buffer solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 title claims abstract description 65
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 42
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims abstract description 32
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims abstract description 25
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 32
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 21
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 19
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 14
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 12
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 12
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 11
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 11
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 claims description 11
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 claims description 10
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 claims description 10
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 9
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 8
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 7
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 claims description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 7
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 7
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 6
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 claims description 6
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 claims description 6
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 5
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 5
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 4
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 3
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 3
- 229920000191 poly(N-vinyl pyrrolidone) Polymers 0.000 claims description 3
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims description 3
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical group [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 claims description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 claims description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims description 2
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000188 diaphragm Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003709 heart valve Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002418 meninge Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims description 2
- 210000003516 pericardium Anatomy 0.000 claims description 2
- -1 peroxide acetate Chemical class 0.000 claims description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000037816 tissue injury Diseases 0.000 claims description 2
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 claims description 2
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 1
- 125000002081 peroxide group Chemical group 0.000 claims 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 abstract description 16
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 abstract description 16
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 abstract description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000012620 biological material Substances 0.000 abstract description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 2
- 210000003497 sciatic nerve Anatomy 0.000 description 9
- KFSLWBXXFJQRDL-UHFFFAOYSA-N Peracetic acid Chemical compound CC(=O)OO KFSLWBXXFJQRDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 8
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 6
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 6
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 5
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 5
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 5
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 5
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 5
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 5
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283898 Ovis Species 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 2
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 2
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 2
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 206010048768 Dermatosis Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 206010019909 Hernia Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000001621 Mucoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010093825 Mucoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N benzyl N-[2-hydroxy-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]carbamate Chemical compound OC1=C(NC(=O)OCC2=CC=CC=C2)C=CC(=C1)N1CCOCC1=O FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229940045110 chitosan Drugs 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229960005188 collagen Drugs 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001951 dura mater Anatomy 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000004531 microgranule Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical group 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 229940051841 polyoxyethylene ether Drugs 0.000 description 1
- 229920000056 polyoxyethylene ether Polymers 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明涉及生物材料领域，尤其涉及一种脱细胞基质修复凝胶及其制备新方法。本发明公开了一种脱细胞基质修复凝胶及其制备方法，该方法将取自哺乳动物的组织器官通过脱细胞处理和凝胶化处理，制备获得一种脱细胞基质修复凝胶。本发明提供的脱细胞基质修复凝胶消除了异种及异体组织的免疫原性，最大限度的保留了组织细胞外基质成分的活性，能够特异性修复人体受损组织器官，并且适用性强，适用于各种不规则形状修复区域和体内不同部位环境需要，具有巨大的临床价值。
Description
技术领域
本发明涉及组织基质材料制备，尤其涉及一种脱细胞基质修复凝胶及其制备的新方法，属于生物材料领域。
背景技术
组织器官的修复与重建是指组织、器官损伤后由临近健康细胞通过再生来修补恢复的过程，由于组织自发愈合过程固有的缺陷，一旦组织和器官出现缺损或功能障碍时，就会造成一定程度上的再生障碍或者是永久性缺损。因此组织器官的修复与重建一直是生物、医学等相关领域的焦点。伴随着对组织再生修复机制及组织工程学研究的开展和深入，寻找及研制各种有应用价值的可吸收并能促进再生的生物物质，已经成为该领域的一个热点。
细胞外基质（extracellular matrix，ECM）是由动物细胞合成并分泌到细胞外、分布在细胞表面或细胞之间的大分子，主要成分包括胶原纤维、糖蛋白、黏蛋白等，其他成分有氨基葡聚糖（透明质酸、硫酸软骨素）等糖类，还有一些脂质和生长因子。这些物质构成复杂的网架结构，支持并连接组织结构，调节组织的发生和细胞的生理活动，在细胞迁移、分化和增殖方面有着重要的作用。由于细胞外基质可以来源于不同的组织器官，因此不同组织器官的脱细胞基质在成分和三维超微结构上也存在差异，研究证实，源自相同组织器官的细胞外基质在修复相同组织器官的损伤时效果更好，Wang等比较了人脂肪脱细胞基质和脱细胞小肠黏膜上皮微粒的体内成脂能力，结果表明人脂肪脱细胞基质更能有效诱导脂肪组织的形成。
异种或异体细胞抗原由于被宿主认为是外来体，因此引发了宿主的炎性反应和免疫介导的排斥反应。然而细胞外基质是结构蛋白和功能蛋白的复合物，该组分常常在不同物种间保守，并能被异种受体耐受。许多动物组织器官和人体具有相似的细胞外基质成分和结构，通过脱细胞技术获得的ECM生物支架已被广泛应用与人体组织重建，如心脏膜瓣、皮肤、肌腱和硬脑膜等，其三维结构与体内细胞生长的天然环境接近，不仅可以起着支架材料的作用，而且包含多种生长因子，在组织修复和重建中有重要促进作用。
目前制备细胞外基质的脱细胞方法有很多，主要包括物理法、化学法和生物处理法，但是每种脱细胞方法均会改变ECM成分，引起不同程度超微结构的损害，这些改变会影响人体对植入基质材料的反应。因此研究通过温和的脱细胞方法得到细胞外基质，最大限度的保留组织ECM的成分和天然结构，是非常有必要的。
目前国内外研究大多是将细胞外基质用于组织工程支架，通过植入人体代替受损组织器官，为组织器官细胞再生提供支架，并随着自体组织的修复逐渐降解吸收。然而这种传统的细胞外基质支架对于损伤较小、受损区域不规则或无需替代的受损组织则不适用，因此国内外学者已开始尝试改变脱细胞基质的使用形态以满足多种组织或器官修复的需要，申请号为200910191251.1的专利公开了一种用于组织修复的颗粒状生物材料及制备方法，通过将脱细胞基质和胶原、硫酸软骨素、透明质酸、壳聚糖、聚乳酸、聚羟基乙酸、藻酸盐中任一种或至少两种组合而制备的膜片状生物材料冻干，再在设定参数下常温切割成长条，最后切割成粒径范围在60μm-6000μm的颗粒状，采用注射、喷洒、播撒、填塞方法直接用于组织或器官修复，但是颗粒状材料黏附性差，粒径不均造成吸收不平衡，修复效果不理想；申请号为200980135089.X的专利公开了一种制造脱细胞基质胶的方法，通过将脱细胞基质加入水、生理缓冲液或盐水中在70～100℃下温育10分钟至48小时，形成脱细胞基质胶，用于制备包括组织工程和疝修复在内的医学应用的强化脱细胞基质，但是该方法由于温育温度高，使得脱细胞基质的活性成分如生长因子等被严重破坏，使用效果大大降低。
理想的组织器官修复材料应尽可能模拟人体组织所处的生理环境，为组织再生提供细胞生长空间，能够诱导组织细胞再生分化，促进损伤组织的再生修复，并且能满足不同部位不规则形状的修复需要。
发明内容
本发明针对现有脱细胞基质修复材料的局限性，提供了一种脱细胞基质修复凝胶及其制备方法，通过脱细胞处理和凝胶化处理，将取自哺乳动物的组织器官制备成脱细胞基质修复凝胶，消除了异种（体）组织的免疫原性，最大限度的保留了组织细胞外基质成分的活性，能够特异性修复人体受损组织器官，诱导组织再生，并且适用性强，能满足不同组织各种不规则形状修复区域的需要。
本发明制备脱细胞基质修复凝胶的策略为：首先对动物组织器官进行预处理，清除血迹和污垢，经病毒灭活后剪成碎块，以利于细胞脱除，然后用去垢剂除去细胞膜脂质成分，增加细胞的通透性，再用胰蛋白酶处理，脱除细胞，再经核酸酶降解细胞中各类DNA和RNA成分，经清洗除掉各种去垢剂后得到脱细胞基质，脱细胞基质再经消化和恒温孵育得到脱细胞基质修复凝胶。
进一步的，本发明制备脱细胞基质修复凝胶的具体步骤如下：
1）预处理：用PBS缓冲液清洗除去新鲜动物组织器官上的血迹和污垢；
2）病毒灭活：将前一步骤预处理后的动物组织器官用病毒灭活试剂浸泡进行病毒灭活，所述病毒灭活试剂为过氧乙酸水溶液；
3）剪碎：将前一步骤病毒灭活处理后的动物组织器官剪碎；
4）脱除细胞膜脂质成分：用含去垢剂的PBS缓冲溶液脱除细胞膜脂质成分，脱除处理后采用PBS缓冲液清洗；
5）脱细胞：用含胰蛋白酶和EDTA的PBS缓冲溶液脱除细胞，脱除处理后采用PBS缓冲液清洗；
6）核酸酶处理：用含核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶的PBS混合溶液脱除残留的细胞核成分，酶脱除反应结束后采用PBS缓冲液清洗，得到组织脱细胞基质；
7）消化：将前一步骤的组织脱细胞基质置于消化液中振荡进行消化处理，所述消化液为蛋白酶溶液；
8）恒温孵育：消化反应结束后加入PBS缓冲液进行恒温孵育，即可得到脱细胞基质凝胶。
本发明所提供的由细胞外基质制备凝胶的方法简单，条件温和，对细胞外基质中的营养因子和生长因子破坏小，修复效果好；同时本发明还提供了一种温和的组织脱细胞方法，能够快速有效的脱除细胞，并且最大限度的保留细胞外基质成分的活性。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：
进一步的，步骤1）所述动物组织器官来源于哺乳动物的组织器官。
所述哺乳动物选自人、猪、牛、羊和兔；所述组织器官选自皮肤、脑膜、膈膜、羊膜、心包膜、心脏瓣膜、小肠粘膜下层、肌肉、血管、肌腱、韧带、软骨、食道、胃、神经和膀胱。
进一步，步骤2）所述病毒灭活试剂为质量浓度0.1%～1%的过氧乙酸水溶液。
进一步，步骤2）所述病毒灭活试剂浸泡的时间为0.5～2h。
进一步，步骤3）动物组织器官剪碎后获得的碎片或碎块的粒径范围为0.1～1cm。
进一步，步骤4）所述的含去垢剂的PBS缓冲溶液，去垢剂的浓度为0.1～2wt%；去垢剂的种类选自曲拉通X-100、脱氧胆酸钠、平平加，以及十二烷基磺酸钠中的任一种。
更进一步，步骤4）所述细胞膜脂质成分的脱除方法为：室温下振荡处理0.5～2h。
进一步，步骤5）所述的含胰蛋白酶和EDTA的PBS缓冲溶液，胰蛋白酶的浓度为0.1～1wt%，EDTA的浓度为0.1～1wt%。
更进一步，步骤5）所述脱除细胞处理的条件为：室温振荡处理1～4h。
进一步，步骤6）所述的含核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶的PBS混合溶液，核糖核酸酶的浓度为5～50μg/ml，脱氧核糖核酸酶的浓度为50～500μg/ml。
更进一步，步骤6）所述脱除细胞核成分处理的反应条件为室温振荡1-2h。
进一步，步骤7）所述消化液为0.1～0.5wt%的蛋白酶溶液，所述蛋白酶的种类选自胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶，以及组织蛋白酶中的任一种。
消化液的pH值为上述蛋白酶的最适pH值，可通过市售商品酶的说明书获知。通过调节pH的方法终止消化反应，之后将pH值调至人体体液pH值（pH值7.35～7.45），再进行后续孵育步骤。
更进一步，步骤7）消化处理的时间为24～48h。
进一步，步骤8）所述恒温孵育的时间为24～48h，孵育温度为37±1℃。
本发明第二方面公开了一种脱细胞基质修复凝胶，采用上述方法制备获得。
本发明提供的脱细胞基质修复凝胶由哺乳动物的组织器官经脱细胞和凝胶化处理得到，用于人体受损组织器官的特异性修复。
本发明第三方面公开了前述脱细胞基质修复凝胶的制备方法，以及脱细胞基质修复凝胶在特异性修复人体受损组织器官中的应用。
本发明所述特异性修复，指用源自相同组织器官的脱细胞基质凝胶修复相同的受损组织。
本发明第四方面公开了前述脱细胞基质修复凝胶的制备方法，以及脱细胞基质修复凝胶在制备组织损伤修复制剂中的应用。
本发明的有益效果如下：
1.本发明提供的脱细胞基质修复凝胶及其制备方法最大限度的保留了细胞外基质的有效成分的生物活性（包括各种生长因子），安全性高，适用性强，修复人体受损组织器官具有特异性，能够诱导组织再生修复。
2.本发明提供的脱细胞方法温和有效，通过将动物组织剪碎有利于去垢剂、胰蛋白酶和核酸酶渗透到组织内部，缩短了脱细胞时间，并且能在更温和的条件下彻底脱除细胞成分，对细胞外基质的成分和超微结构的破坏程度小。
本发明所用原料取自异种（体）动物组织器官，来源广泛，制备方法工艺简单，产品使用方便。
附图说明
图1为制备的组织脱细胞基质修复凝胶；
图2为注有神经脱细胞基质凝胶的神经导管；
图3为用注有神经脱细胞基质凝胶的神经导管修复8mm大鼠坐骨神经缺损；
图4为术后三个月新生神经横切片，可见大量新生神经轴突；
图5为术后三个月新生神经纵切片，可见大量新生神经轴突；
图6为皮肤二度烫伤照片；
图7为真皮脱细胞基质修复凝胶涂覆治疗后2个月照片，可见皮肤已完好修复。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
实施例1牛坐骨神经脱细胞基质修复凝胶的制备
1.脱细胞基质修复凝胶的制备
取牛坐骨神经20g，PBS缓冲液清洗除去血迹和污垢，用200ml0.1%的过氧乙酸溶液浸泡0.5h灭菌，之后将坐骨神经剪成0.1cm左右的小段，置于200ml浓度为2%的曲拉通X-100PBS缓冲溶液中，振荡处理0.5h，然后用100ml含0.1%胰蛋白酶和1%EDTA的PBS缓冲溶液进行脱细胞处理，振荡4h，之后用200ml含5μg/ml核糖核酸酶和50μg/ml脱氧核糖核酸酶的PBS缓冲溶液脱除残留核酸得到牛坐骨神经脱细胞基质5g，然后用50ml含0.5%胃蛋白酶的0.01M盐酸溶液进行消化，振荡24h后加入5ml的0.1M氢氧化钠溶液和50ml PBS缓冲液，调节pH至7.4，37℃下孵育48h得到牛坐骨神经脱细胞基质修复凝胶。
2.效果实验
用前述制备的牛坐骨神经脱细胞基质修复凝胶注入神经导管（如图2所示），用大鼠做了动物评估实验，以注入牛坐骨神经脱细胞基质修复凝胶的神经导管桥接大鼠坐骨神经8mm缺损（如图3所示）。
术后三个月进行组织切片观察，结果表明神经导管内有大量新生神经轴突，大鼠坐骨神经功能恢复良好，实验结果参见附图4-5。
实施例2猪真皮脱细胞基质修复凝胶的制备
1.脱细胞基质修复凝胶的制备
取猪真皮约100g，PBS缓冲液清洗除去血迹和污垢，用200ml1%的过氧乙酸溶液浸泡2h灭菌，之后将真皮剪成1cm见方的小片，置于500ml浓度为0.1%的脱氧胆酸钠PBS缓冲溶液中，振荡处理2h，然后用500ml含1%胰蛋白酶和0.1%EDTA的PBS缓冲溶液进行脱细胞处理，振荡1h，之后用200ml含50μg/ml核糖核酸酶和500μg/ml脱氧核糖核酸酶的PBS缓冲溶液脱除残留核酸得到猪真皮脱细胞基质32g，然后用200ml含0.1%木瓜蛋白酶的PBS溶液进行消化，振荡48h后调节pH至2使消化终止，加入300ml PBS缓冲液，调pH至7.4，37℃下孵育24h得到猪真皮脱细胞基质修复凝胶。
2.效果实验
用本实施例所制备的猪真皮脱细胞基质修复凝胶涂敷治疗人体皮肤二度烫伤（附图6），2个月后可见皮肤修复完全，并且不留疤痕，具体参见附图（附图7）。可见猪真皮来源的脱细胞基质修复凝胶对病患皮肤疾病或损伤的治疗确实有效。
实施例3牛肌腱脱细胞基质修复凝胶的制备
取牛肌腱20g，PBS缓冲液清洗除去血迹和污垢，用50ml0.5%的过氧乙酸溶液浸泡1h灭菌，之后将肌腱剪成0.5cm左右的小块，置于50ml浓度为0.5%的脂肪醇聚氧乙烯醚（平平加）PBS缓冲溶液中，振荡处理1h，然后用60ml含0.1%胰蛋白酶和0.1%EDTA的PBS缓冲溶液进行脱细胞处理，振荡3h，之后用40ml含10μg/ml核糖核酸酶和50μg/ml脱氧核糖核酸酶的PBS缓冲溶液脱除残留核酸得到牛肌腱脱细胞基质5g，然后用50ml含0.1%胃蛋白酶的0.01M盐酸溶液进行消化，振荡24h后加入5ml的0.1M氢氧化钠溶液和50ml PBS缓冲液，调节pH至7.4，37℃下孵育24h得到牛肌腱脱细胞基质修复凝胶，可以将其涂于受损的肌腱或肌腱缝合口，特异性修复损伤肌腱。
实施例4羊血管脱细胞基质修复凝胶的制备
取羊血管5g，PBS缓冲液清洗除去血迹和污垢，用20ml1%的过氧乙酸溶液浸泡2h灭菌，之后将血管剪成0.2cm长的小段，置于50ml浓度为0.5%的十二烷基磺酸钠PBS缓冲溶液中，振荡处理1.5h，然后用50ml含0.2%胰蛋白酶和0.1%EDTA的PBS缓冲溶液进行脱细胞处理，振荡2h，之后用30ml含5μg/ml核糖核酸酶和50μg/ml脱氧核糖核酸酶的PBS缓冲溶液脱除残留核酸得到羊血管脱细胞基质2g，然后用10ml含0.1%胰蛋白酶的PBS溶液进行消化，振荡30h后调节pH至2终止消化，加入9ml PBS缓冲液，调节pH至7.4，37℃下孵育48h得到羊血管脱细胞基质修复凝胶，可以将其涂于受损的血管或血管缝合口，特异性促进血管修复。
Claims (10)
1.一种制备脱细胞基质修复凝胶的方法，具体步骤如下：
1）预处理：用PBS缓冲液清洗除去新鲜动物组织器官上的血迹和污垢；
2）病毒灭活：将前一步骤预处理后的动物组织器官用病毒灭活试剂浸泡进行病毒灭活，所述病毒灭活试剂为过氧乙酸水溶液；
3）剪碎：将前一步骤病毒灭活处理后的动物组织器官剪碎；
4）脱除细胞膜脂质成分：用含去垢剂的PBS缓冲溶液脱除细胞膜脂质成分，脱除处理后采用PBS缓冲液清洗；
5）脱细胞：用含胰蛋白酶和EDTA的PBS缓冲溶液脱除细胞，脱除处理后采用PBS缓冲液清洗；
6）核酸酶处理：用含核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶的PBS混合溶液脱除残留的细胞核成分，酶脱除反应结束后采用PBS缓冲液清洗，得到组织脱细胞基质；
7）消化：将前一步骤的组织脱细胞基质置于消化液中振荡进行消化处理，所述消化液为蛋白酶溶液；
8）恒温孵育：消化反应结束后加入PBS缓冲液进行恒温孵育，即可得到脱细胞基质凝胶。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1）所述动物组织器官来源于哺乳动物的组织器官。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述哺乳动物选自人、猪、牛、羊和兔；所述组织器官选自皮肤、脑膜、膈膜、羊膜、心包膜、心脏瓣膜、小肠粘膜下层、肌肉、血管、肌腱、韧带、软骨、食道、胃、神经和膀胱。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2）所述病毒灭活试剂为质量浓度0.1%～1%的过氧乙酸水溶液。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4）所述的含去垢剂的PBS缓冲溶液，去垢剂的浓度为0.1～2wt%；去垢剂的种类选自曲拉通X-100、脱氧胆酸钠、平平加，以及十二烷基磺酸钠中的任一种。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤5）所述的含胰蛋白酶和EDTA的PBS缓冲溶液，胰蛋白酶的浓度为0.1～1wt%，EDTA的浓度为0.1～1wt%。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤6）所述的含核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶的PBS混合溶液，核糖核酸酶的浓度为5～50μg/ml，脱氧核糖核酸酶的浓度为50～500μg/ml。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤7）所述消化液为0.1～0.5wt%的蛋白酶溶液，所述蛋白酶的种类选自胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶，以及组织蛋白酶中的任一种。
9.一种脱细胞基质修复凝胶，采用权利要求1-8任一权利要求所述方法制备获得。
10.权利要求1-8任一权利要求所述制备方法，以及权利要求9所述脱细胞基质修复凝胶在制备组织损伤修复制剂中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410145791.7A CN104971380B (zh) | 2014-04-11 | 2014-04-11 | 一种脱细胞基质修复凝胶及其制备新方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410145791.7A CN104971380B (zh) | 2014-04-11 | 2014-04-11 | 一种脱细胞基质修复凝胶及其制备新方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104971380A true CN104971380A (zh) | 2015-10-14 |
| CN104971380B CN104971380B (zh) | 2017-12-15 |
Family
ID=54268695
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410145791.7A Active CN104971380B (zh) | 2014-04-11 | 2014-04-11 | 一种脱细胞基质修复凝胶及其制备新方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104971380B (zh) |
Cited By (65)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105169483A (zh) * | 2015-10-20 | 2015-12-23 | 中山大学 | 一种脱细胞基质凝胶的制备方法及其脱细胞基质凝胶 |
| CN105316280A (zh) * | 2015-10-19 | 2016-02-10 | 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 | 用于前列腺细胞培养的前列腺细胞外基质凝胶 |
| CN105521523A (zh) * | 2015-11-20 | 2016-04-27 | 金艺鹏 | 一种犬羊膜的制备及保存方法 |
| CN105709276A (zh) * | 2016-01-28 | 2016-06-29 | 成都清科生物科技有限公司 | 一种绒毛膜脱细胞液以及脱细胞方法 |
| CN105727372A (zh) * | 2016-02-25 | 2016-07-06 | 烟台隽秀生物科技有限公司 | 一种温敏性宫腔修复凝胶及其制备方法 |
| CN105879119A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-08-24 | 东华大学 | 一种复合脱细胞基质水凝胶及其制备方法 |
| CN105879118A (zh) * | 2016-05-09 | 2016-08-24 | 拜欧迪赛尔（北京）生物科技有限公司 | 一种生物工程脱细胞软骨的制备方法 |
| CN105944142A (zh) * | 2016-05-09 | 2016-09-21 | 拜欧迪赛尔（北京）生物科技有限公司 | 一种新型的脱细胞肌腱或韧带支架的制备方法 |
| CN105944143A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-09-21 | 东华大学 | 基于脱细胞基质-细胞-三维纤维网络的仿生组织及其制备方法 |
| CN106075597A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-11-09 | 东华大学 | 基于膀胱脱细胞基质‑细胞‑三维纤维网络的仿生组织及其制备 |
| CN106310369A (zh) * | 2016-09-29 | 2017-01-11 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种组合物、含有该组合物的3d敷料及其制备方法 |
| CN106390202A (zh) * | 2016-10-21 | 2017-02-15 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 一种用于去除组织细胞的试剂盒和去细胞方法 |
| CN106730010A (zh) * | 2017-01-03 | 2017-05-31 | 广州新诚生物科技有限公司 | 去细胞神经水凝胶用于制备周围神经损伤修复组合物的用途 |
| CN106822999A (zh) * | 2017-03-03 | 2017-06-13 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种乳房修补片及其制备和应用方法 |
| CN106854636A (zh) * | 2015-12-09 | 2017-06-16 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种鹿茸组织细胞外基质的制备方法 |
| CN107007882A (zh) * | 2017-03-03 | 2017-08-04 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种神经修复材料、制备方法和应用 |
| CN107007870A (zh) * | 2017-03-03 | 2017-08-04 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种生物止血材料、制备方法及其应用 |
| CN107050529A (zh) * | 2017-03-03 | 2017-08-18 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种宫腔内置物、制备方法及其应用 |
| CN107050520A (zh) * | 2017-03-03 | 2017-08-18 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 复合生物补片及其制备方法 |
| CN107224617A (zh) * | 2017-05-24 | 2017-10-03 | 中国人民解放军第三军医大学 | 一种以脾脏细胞外基质为原料的水凝胶及其制备方法 |
| CN107233621A (zh) * | 2017-06-02 | 2017-10-10 | 广州新诚生物科技有限公司 | 天然软组织去细胞基质的制备方法 |
| CN107397978A (zh) * | 2016-05-20 | 2017-11-28 | 北京纳通科技集团有限公司 | 动物膀胱脱细胞基质的制备方法、所得的基质及应用 |
| CN107496459A (zh) * | 2017-08-31 | 2017-12-22 | 周菁 | 一种肺基质水凝胶的制备方法及应用及药物 |
| CN107737373A (zh) * | 2017-12-07 | 2018-02-27 | 山东隽秀生物科技股份有限公司 | 一种肌腱修复材料的制备方法 |
| CN107988158A (zh) * | 2017-11-27 | 2018-05-04 | 大连理工大学 | 一种三维肿瘤模型脱细胞多孔支架、构建方法及其应用 |
| CN108096169A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-06-01 | 广州昕生医学材料有限公司 | 一种私密修复凝胶 |
| CN108245708A (zh) * | 2016-12-28 | 2018-07-06 | 四川大学华西医院 | 一种诱导肌腱组织再生的生物活性支架及其制备方法和用途 |
| WO2018157456A1 (zh) * | 2017-03-03 | 2018-09-07 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种生物组织基质材料、制备方法及在耳科修复材料中的应用 |
| WO2018157851A1 (zh) * | 2017-03-03 | 2018-09-07 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种引导骨再生的骨膜修补片、制备方法和应用 |
| CN108660106A (zh) * | 2017-03-30 | 2018-10-16 | 南方医科大学珠江医院 | 肝细胞特异性培养基质凝胶及其制备方法 |
| CN108699522A (zh) * | 2016-01-13 | 2018-10-23 | 高等教育联邦系统-匹兹堡大学 | 血管细胞外基质水凝胶 |
| CN108812639A (zh) * | 2018-07-05 | 2018-11-16 | 广州昕生医学材料有限公司 | 一种细胞外基质冻干粉 |
| CN108992709A (zh) * | 2018-07-27 | 2018-12-14 | 山东省眼科研究所 | 一种脱细胞神经基质材料及其制备方法和应用 |
| CN109481737A (zh) * | 2017-09-12 | 2019-03-19 | 中国人民解放军第三军医大学第附属医院 | 一种仿生双层敷料及其制备方法 |
| WO2019056252A1 (zh) * | 2017-09-21 | 2019-03-28 | 卓阮医疗科技（苏州）有限公司 | 一种高生物活性的细胞外基质材料及其制备方法和应用 |
| CN109529120A (zh) * | 2018-11-30 | 2019-03-29 | 广州新诚生物科技有限公司 | 一种小肠黏膜下层基质修复凝胶的制备方法 |
| CN109550082A (zh) * | 2018-11-30 | 2019-04-02 | 广州新诚生物科技有限公司 | 一种脱细胞基质凝胶的制备方法 |
| CN109908403A (zh) * | 2019-01-08 | 2019-06-21 | 王伟 | 一种脱细胞神经支架及其制备方法 |
| CN109939262A (zh) * | 2019-03-19 | 2019-06-28 | 皖南医学院第一附属医院（皖南医学院弋矶山医院） | 一种bFGF水凝胶的制备方法及其应用 |
| CN109946449A (zh) * | 2019-03-29 | 2019-06-28 | 南通大学附属医院 | 一种组织特异性侵袭试剂盒的制备方法 |
| CN110072566A (zh) * | 2016-10-09 | 2019-07-30 | 刘英芹 | 骨与软组织同步再生诱导剂及其制备方法和用途 |
| CN110585484A (zh) * | 2019-10-12 | 2019-12-20 | 上海白衣缘生物工程有限公司 | 一种骨组织用复合骨粉及其制备方法和应用 |
| CN110652611A (zh) * | 2019-11-08 | 2020-01-07 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 京尼平交联的纤维环脱细胞基质水凝胶及其制备方法 |
| CN111068096A (zh) * | 2019-12-24 | 2020-04-28 | 华侨大学 | 一种dECM基促伤口修复敷料的制备方法 |
| CN111068117A (zh) * | 2018-10-18 | 2020-04-28 | 鲁峰 | 脂肪萃取液、脂肪脱细胞基质及其制备方法、应用 |
| CN111407785A (zh) * | 2020-04-15 | 2020-07-14 | 山东隽秀生物科技股份有限公司 | 一种用于治疗股骨头坏死的复合脱细胞基质注射液及使用方法 |
| CN111407929A (zh) * | 2020-03-20 | 2020-07-14 | 山东隽秀生物科技股份有限公司 | 一种新型人工皮肤及其制备方法 |
| CN111500663A (zh) * | 2020-04-12 | 2020-08-07 | 江苏安泰康健康科技有限公司 | 一种水凝胶、制备方法及其三维细胞培养方法 |
| CN111790007A (zh) * | 2020-06-16 | 2020-10-20 | 台州学院 | 一种温敏型鹿茸软骨基质水凝胶材料的制备方法及应用 |
| CN111840642A (zh) * | 2020-07-15 | 2020-10-30 | 四川大学 | 一种软骨脱细胞基质复合支架的制备方法及其应用 |
| WO2020258453A1 (zh) * | 2019-06-27 | 2020-12-30 | 浙江大学医学院附属邵逸夫医院 | 天然组织来源的脱细胞骨膜基质凝胶材料的制备方法 |
| CN113082295A (zh) * | 2021-04-02 | 2021-07-09 | 大连理工大学 | 一种基于皮肤源脱细胞基质衍生支架及其构建方法 |
| CN113425915A (zh) * | 2021-05-28 | 2021-09-24 | 宁波市第一医院 | 一种抗凝材料及其制备方法和应用 |
| CN113429475A (zh) * | 2020-03-23 | 2021-09-24 | 成都中科奥格生物科技有限公司 | 一种胶原材料及其制备方法和用途 |
| CN113713173A (zh) * | 2021-07-20 | 2021-11-30 | 中南大学湘雅二医院 | 去除同种或异种生物材料的免疫原性的方法 |
| CN114133426A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-03-04 | 南宁东恒华道生物科技有限责任公司 | 一种猪膀胱脱细胞外基质蛋白肽的提取方法及应用 |
| CN114225097A (zh) * | 2021-11-12 | 2022-03-25 | 暨南大学 | 一种负载抗菌肽的可自愈水凝胶创面敷料及其制备方法 |
| CN114540267A (zh) * | 2022-01-27 | 2022-05-27 | 广东省农业科学院动物科学研究所 | 一种关于仔猪肠黏膜的不同浓度胶原蛋白网络体外制备方法 |
| US11413375B2 (en) | 2014-03-21 | 2022-08-16 | University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education | Methods for preparation of a terminally sterilized hydrogel derived from extracellular matrix |
| CN115737935A (zh) * | 2022-10-18 | 2023-03-07 | 南开大学 | 可注射细胞外基质复合多孔微球体系及制备方法 |
| WO2023116891A1 (zh) * | 2021-12-24 | 2023-06-29 | 北京瑞健高科生物科技有限公司 | 封装细胞的间质材料及其制备方法和应用 |
| WO2023115912A1 (zh) * | 2021-12-24 | 2023-06-29 | 杭州华迈医疗科技有限公司 | 一种脱细胞基质生物材料的制备方法 |
| CN116492510A (zh) * | 2023-06-27 | 2023-07-28 | 圣至润合(北京)生物科技有限公司 | 一种基于脱细胞基质微球的组织填充修复材料及其制备方法 |
| CN117258047A (zh) * | 2023-10-12 | 2023-12-22 | 成都世联康健生物科技有限公司 | 一种猪牙髓组织脱细胞外基质水凝胶及其制备方法和应用 |
| CN118121768A (zh) * | 2024-05-07 | 2024-06-04 | 北京思尔根生物科技有限公司 | 一种高强度细胞外基质凝胶及其制备方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1943796A (zh) * | 2006-10-20 | 2007-04-11 | 关志广 | 辐照交联多孔网状脱细胞羊膜水凝胶敷料的制作方法 |
| CN102143765A (zh) * | 2008-09-05 | 2011-08-03 | 伊西康公司 | 无细胞基质胶 |
| CN102170920A (zh) * | 2008-09-05 | 2011-08-31 | 伊西康公司 | 制造脱细胞基质胶的方法 |
| CN102227225A (zh) * | 2008-09-30 | 2011-10-26 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于组织修复的使用细胞外基质的组合物和方法 |
| CN103127550A (zh) * | 2013-02-26 | 2013-06-05 | 中国人民解放军第二军医大学 | 骨骼肌全器官脱细胞基质、制备方法及其衍生出的医疗产品 |
| CN103705542A (zh) * | 2013-12-04 | 2014-04-09 | 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 | 一种脱细胞血管基质凝胶及其制备方法和应用 |
-
2014
- 2014-04-11 CN CN201410145791.7A patent/CN104971380B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1943796A (zh) * | 2006-10-20 | 2007-04-11 | 关志广 | 辐照交联多孔网状脱细胞羊膜水凝胶敷料的制作方法 |
| CN102143765A (zh) * | 2008-09-05 | 2011-08-03 | 伊西康公司 | 无细胞基质胶 |
| CN102170920A (zh) * | 2008-09-05 | 2011-08-31 | 伊西康公司 | 制造脱细胞基质胶的方法 |
| CN102227225A (zh) * | 2008-09-30 | 2011-10-26 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于组织修复的使用细胞外基质的组合物和方法 |
| CN106178118A (zh) * | 2008-09-30 | 2016-12-07 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于组织修复的使用细胞外基质的组合物和方法 |
| CN103127550A (zh) * | 2013-02-26 | 2013-06-05 | 中国人民解放军第二军医大学 | 骨骼肌全器官脱细胞基质、制备方法及其衍生出的医疗产品 |
| CN103705542A (zh) * | 2013-12-04 | 2014-04-09 | 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 | 一种脱细胞血管基质凝胶及其制备方法和应用 |
Cited By (90)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US12005158B2 (en) | 2014-03-21 | 2024-06-11 | University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education | Methods for preparation of a terminally sterilized hydrogel derived from extracellular matrix |
| US11413375B2 (en) | 2014-03-21 | 2022-08-16 | University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education | Methods for preparation of a terminally sterilized hydrogel derived from extracellular matrix |
| CN105316280A (zh) * | 2015-10-19 | 2016-02-10 | 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 | 用于前列腺细胞培养的前列腺细胞外基质凝胶 |
| CN105169483B (zh) * | 2015-10-20 | 2018-10-12 | 中山大学 | 一种脱细胞基质凝胶的制备方法及其脱细胞基质凝胶 |
| CN105169483A (zh) * | 2015-10-20 | 2015-12-23 | 中山大学 | 一种脱细胞基质凝胶的制备方法及其脱细胞基质凝胶 |
| CN105521523A (zh) * | 2015-11-20 | 2016-04-27 | 金艺鹏 | 一种犬羊膜的制备及保存方法 |
| CN106854636B (zh) * | 2015-12-09 | 2021-01-26 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种鹿茸组织细胞外基质的制备方法 |
| CN106854636A (zh) * | 2015-12-09 | 2017-06-16 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种鹿茸组织细胞外基质的制备方法 |
| US11406736B2 (en) | 2016-01-13 | 2022-08-09 | University of Pittsburgh—Of the Commonwealth Systems of Higher Education | Vascular extracellular matrix hydrogel |
| CN108699522A (zh) * | 2016-01-13 | 2018-10-23 | 高等教育联邦系统-匹兹堡大学 | 血管细胞外基质水凝胶 |
| CN105709276A (zh) * | 2016-01-28 | 2016-06-29 | 成都清科生物科技有限公司 | 一种绒毛膜脱细胞液以及脱细胞方法 |
| CN105727372A (zh) * | 2016-02-25 | 2016-07-06 | 烟台隽秀生物科技有限公司 | 一种温敏性宫腔修复凝胶及其制备方法 |
| CN105879118A (zh) * | 2016-05-09 | 2016-08-24 | 拜欧迪赛尔（北京）生物科技有限公司 | 一种生物工程脱细胞软骨的制备方法 |
| CN105879118B (zh) * | 2016-05-09 | 2018-03-02 | 拜欧迪赛尔（北京）生物科技有限公司 | 一种生物工程脱细胞软骨的制备方法 |
| CN105944142B (zh) * | 2016-05-09 | 2018-07-13 | 拜欧迪赛尔（北京）生物科技有限公司 | 一种脱细胞肌腱或韧带支架的制备方法 |
| CN105944142A (zh) * | 2016-05-09 | 2016-09-21 | 拜欧迪赛尔（北京）生物科技有限公司 | 一种新型的脱细胞肌腱或韧带支架的制备方法 |
| CN107397978A (zh) * | 2016-05-20 | 2017-11-28 | 北京纳通科技集团有限公司 | 动物膀胱脱细胞基质的制备方法、所得的基质及应用 |
| CN106075597B (zh) * | 2016-06-06 | 2019-08-20 | 东华大学 | 基于膀胱脱细胞基质-细胞-三维纤维网络的仿生组织及其制备 |
| CN105879119A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-08-24 | 东华大学 | 一种复合脱细胞基质水凝胶及其制备方法 |
| CN105879119B (zh) * | 2016-06-06 | 2019-06-11 | 东华大学 | 一种复合脱细胞基质水凝胶及其制备方法 |
| CN105944143A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-09-21 | 东华大学 | 基于脱细胞基质-细胞-三维纤维网络的仿生组织及其制备方法 |
| CN105944143B (zh) * | 2016-06-06 | 2019-08-16 | 东华大学 | 基于脱细胞基质-细胞-三维纤维网络的仿生组织及其制备方法 |
| CN106075597A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-11-09 | 东华大学 | 基于膀胱脱细胞基质‑细胞‑三维纤维网络的仿生组织及其制备 |
| CN106310369A (zh) * | 2016-09-29 | 2017-01-11 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种组合物、含有该组合物的3d敷料及其制备方法 |
| CN110072566A (zh) * | 2016-10-09 | 2019-07-30 | 刘英芹 | 骨与软组织同步再生诱导剂及其制备方法和用途 |
| CN106390202A (zh) * | 2016-10-21 | 2017-02-15 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 一种用于去除组织细胞的试剂盒和去细胞方法 |
| CN108245708B (zh) * | 2016-12-28 | 2021-04-23 | 四川大学华西医院 | 一种诱导肌腱组织再生的生物活性支架及其制备方法和用途 |
| CN108245708A (zh) * | 2016-12-28 | 2018-07-06 | 四川大学华西医院 | 一种诱导肌腱组织再生的生物活性支架及其制备方法和用途 |
| CN106730010A (zh) * | 2017-01-03 | 2017-05-31 | 广州新诚生物科技有限公司 | 去细胞神经水凝胶用于制备周围神经损伤修复组合物的用途 |
| WO2018157847A1 (zh) * | 2017-03-03 | 2018-09-07 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种神经修复材料、制备方法和应用 |
| CN107050529A (zh) * | 2017-03-03 | 2017-08-18 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种宫腔内置物、制备方法及其应用 |
| WO2018157851A1 (zh) * | 2017-03-03 | 2018-09-07 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种引导骨再生的骨膜修补片、制备方法和应用 |
| WO2018157456A1 (zh) * | 2017-03-03 | 2018-09-07 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种生物组织基质材料、制备方法及在耳科修复材料中的应用 |
| CN106822999A (zh) * | 2017-03-03 | 2017-06-13 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种乳房修补片及其制备和应用方法 |
| US11529437B2 (en) | 2017-03-03 | 2022-12-20 | Beijing Biosis Healing Biological Technology Co., Ltd. | Biological tissue matrix material, preparation method therefor and use thereof in otological repair material |
| CN107007870A (zh) * | 2017-03-03 | 2017-08-04 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种生物止血材料、制备方法及其应用 |
| CN107007870B (zh) * | 2017-03-03 | 2019-11-19 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种生物止血材料、制备方法及其应用 |
| CN107007882A (zh) * | 2017-03-03 | 2017-08-04 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种神经修复材料、制备方法和应用 |
| CN107050520A (zh) * | 2017-03-03 | 2017-08-18 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 复合生物补片及其制备方法 |
| CN107050520B (zh) * | 2017-03-03 | 2020-05-05 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 复合生物补片及其制备方法 |
| EP3572103A4 (en) * | 2017-03-03 | 2020-03-04 | Beijing Biosis Healing Biological Technology Co., Ltd. | MATRIX MATERIAL FROM BIOLOGICAL TISSUE, MANUFACTURING PROCESS THEREFOR AND USE THEREOF IN OTOLOGICAL REPAIR MATERIAL |
| CN107007882B (zh) * | 2017-03-03 | 2020-01-21 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种神经修复材料、制备方法和应用 |
| WO2018157848A1 (zh) * | 2017-03-03 | 2018-09-07 | 北京博辉瑞进生物科技有限公司 | 一种宫腔内置物、制备方法及其应用 |
| CN108660106A (zh) * | 2017-03-30 | 2018-10-16 | 南方医科大学珠江医院 | 肝细胞特异性培养基质凝胶及其制备方法 |
| CN107224617B (zh) * | 2017-05-24 | 2020-01-03 | 中国人民解放军第三军医大学 | 一种以脾脏细胞外基质为原料的水凝胶及其制备方法 |
| CN107224617A (zh) * | 2017-05-24 | 2017-10-03 | 中国人民解放军第三军医大学 | 一种以脾脏细胞外基质为原料的水凝胶及其制备方法 |
| CN107233621A (zh) * | 2017-06-02 | 2017-10-10 | 广州新诚生物科技有限公司 | 天然软组织去细胞基质的制备方法 |
| CN107496459A (zh) * | 2017-08-31 | 2017-12-22 | 周菁 | 一种肺基质水凝胶的制备方法及应用及药物 |
| CN109481737B (zh) * | 2017-09-12 | 2021-07-06 | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 | 一种仿生双层敷料及其制备方法 |
| CN109481737A (zh) * | 2017-09-12 | 2019-03-19 | 中国人民解放军第三军医大学第附属医院 | 一种仿生双层敷料及其制备方法 |
| WO2019056252A1 (zh) * | 2017-09-21 | 2019-03-28 | 卓阮医疗科技（苏州）有限公司 | 一种高生物活性的细胞外基质材料及其制备方法和应用 |
| CN107988158B (zh) * | 2017-11-27 | 2020-11-13 | 大连理工大学 | 一种三维肿瘤模型脱细胞多孔支架、构建方法及其应用 |
| CN107988158A (zh) * | 2017-11-27 | 2018-05-04 | 大连理工大学 | 一种三维肿瘤模型脱细胞多孔支架、构建方法及其应用 |
| CN107737373A (zh) * | 2017-12-07 | 2018-02-27 | 山东隽秀生物科技股份有限公司 | 一种肌腱修复材料的制备方法 |
| CN108096169A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-06-01 | 广州昕生医学材料有限公司 | 一种私密修复凝胶 |
| CN108096169B (zh) * | 2017-12-27 | 2020-10-27 | 广州昕生医学材料有限公司 | 一种私密修复凝胶 |
| CN108812639A (zh) * | 2018-07-05 | 2018-11-16 | 广州昕生医学材料有限公司 | 一种细胞外基质冻干粉 |
| CN108992709A (zh) * | 2018-07-27 | 2018-12-14 | 山东省眼科研究所 | 一种脱细胞神经基质材料及其制备方法和应用 |
| CN111068117A (zh) * | 2018-10-18 | 2020-04-28 | 鲁峰 | 脂肪萃取液、脂肪脱细胞基质及其制备方法、应用 |
| CN109550082A (zh) * | 2018-11-30 | 2019-04-02 | 广州新诚生物科技有限公司 | 一种脱细胞基质凝胶的制备方法 |
| CN109529120A (zh) * | 2018-11-30 | 2019-03-29 | 广州新诚生物科技有限公司 | 一种小肠黏膜下层基质修复凝胶的制备方法 |
| CN109908403A (zh) * | 2019-01-08 | 2019-06-21 | 王伟 | 一种脱细胞神经支架及其制备方法 |
| CN109939262A (zh) * | 2019-03-19 | 2019-06-28 | 皖南医学院第一附属医院（皖南医学院弋矶山医院） | 一种bFGF水凝胶的制备方法及其应用 |
| CN109946449A (zh) * | 2019-03-29 | 2019-06-28 | 南通大学附属医院 | 一种组织特异性侵袭试剂盒的制备方法 |
| WO2020258453A1 (zh) * | 2019-06-27 | 2020-12-30 | 浙江大学医学院附属邵逸夫医院 | 天然组织来源的脱细胞骨膜基质凝胶材料的制备方法 |
| CN110585484A (zh) * | 2019-10-12 | 2019-12-20 | 上海白衣缘生物工程有限公司 | 一种骨组织用复合骨粉及其制备方法和应用 |
| CN110652611A (zh) * | 2019-11-08 | 2020-01-07 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 京尼平交联的纤维环脱细胞基质水凝胶及其制备方法 |
| CN111068096A (zh) * | 2019-12-24 | 2020-04-28 | 华侨大学 | 一种dECM基促伤口修复敷料的制备方法 |
| CN111407929A (zh) * | 2020-03-20 | 2020-07-14 | 山东隽秀生物科技股份有限公司 | 一种新型人工皮肤及其制备方法 |
| CN113429475A (zh) * | 2020-03-23 | 2021-09-24 | 成都中科奥格生物科技有限公司 | 一种胶原材料及其制备方法和用途 |
| CN111500663A (zh) * | 2020-04-12 | 2020-08-07 | 江苏安泰康健康科技有限公司 | 一种水凝胶、制备方法及其三维细胞培养方法 |
| CN111407785A (zh) * | 2020-04-15 | 2020-07-14 | 山东隽秀生物科技股份有限公司 | 一种用于治疗股骨头坏死的复合脱细胞基质注射液及使用方法 |
| CN111790007A (zh) * | 2020-06-16 | 2020-10-20 | 台州学院 | 一种温敏型鹿茸软骨基质水凝胶材料的制备方法及应用 |
| CN111840642A (zh) * | 2020-07-15 | 2020-10-30 | 四川大学 | 一种软骨脱细胞基质复合支架的制备方法及其应用 |
| CN113082295B (zh) * | 2021-04-02 | 2022-06-14 | 大连理工大学 | 一种基于皮肤源脱细胞基质衍生支架及其构建方法 |
| CN113082295A (zh) * | 2021-04-02 | 2021-07-09 | 大连理工大学 | 一种基于皮肤源脱细胞基质衍生支架及其构建方法 |
| CN113425915A (zh) * | 2021-05-28 | 2021-09-24 | 宁波市第一医院 | 一种抗凝材料及其制备方法和应用 |
| CN113425915B (zh) * | 2021-05-28 | 2022-08-09 | 宁波市第一医院 | 一种抗凝材料及其制备方法和应用 |
| CN113713173A (zh) * | 2021-07-20 | 2021-11-30 | 中南大学湘雅二医院 | 去除同种或异种生物材料的免疫原性的方法 |
| CN114225097B (zh) * | 2021-11-12 | 2023-02-03 | 暨南大学 | 一种负载抗菌肽的可自愈水凝胶创面敷料及其制备方法 |
| CN114225097A (zh) * | 2021-11-12 | 2022-03-25 | 暨南大学 | 一种负载抗菌肽的可自愈水凝胶创面敷料及其制备方法 |
| CN114133426A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-03-04 | 南宁东恒华道生物科技有限责任公司 | 一种猪膀胱脱细胞外基质蛋白肽的提取方法及应用 |
| WO2023116891A1 (zh) * | 2021-12-24 | 2023-06-29 | 北京瑞健高科生物科技有限公司 | 封装细胞的间质材料及其制备方法和应用 |
| WO2023115912A1 (zh) * | 2021-12-24 | 2023-06-29 | 杭州华迈医疗科技有限公司 | 一种脱细胞基质生物材料的制备方法 |
| CN114540267A (zh) * | 2022-01-27 | 2022-05-27 | 广东省农业科学院动物科学研究所 | 一种关于仔猪肠黏膜的不同浓度胶原蛋白网络体外制备方法 |
| CN115737935A (zh) * | 2022-10-18 | 2023-03-07 | 南开大学 | 可注射细胞外基质复合多孔微球体系及制备方法 |
| CN116492510A (zh) * | 2023-06-27 | 2023-07-28 | 圣至润合(北京)生物科技有限公司 | 一种基于脱细胞基质微球的组织填充修复材料及其制备方法 |
| CN116492510B (zh) * | 2023-06-27 | 2023-09-19 | 圣至润合(北京)生物科技有限公司 | 一种基于脱细胞基质微球的组织填充修复材料及其制备方法 |
| CN117258047A (zh) * | 2023-10-12 | 2023-12-22 | 成都世联康健生物科技有限公司 | 一种猪牙髓组织脱细胞外基质水凝胶及其制备方法和应用 |
| CN118121768A (zh) * | 2024-05-07 | 2024-06-04 | 北京思尔根生物科技有限公司 | 一种高强度细胞外基质凝胶及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104971380B (zh) | 2017-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104971380A (zh) | 一种脱细胞基质修复凝胶及其制备新方法 | |
| US10314861B2 (en) | Flowable tissue matrices | |
| KR102285086B1 (ko) | 조직 생성물의 효소처리방법 | |
| CN106456837B (zh) | 最终消毒的来自细胞外基质的水凝胶的制备方法 | |
| US9238793B2 (en) | Method for enzymatic treatment of tissue products | |
| US20160199540A1 (en) | Method for preparing an animal decellularized tissue matrix material and a decellularized tissue matrix material prepared thereby | |
| Giraldo-Gomez et al. | Fast cyclical-decellularized trachea as a natural 3D scaffold for organ engineering | |
| CN101773687B (zh) | 一种复合软组织补片的制备方法 | |
| CN102933705A (zh) | 去细胞化的脂肪组织 | |
| CN104055795B (zh) | 一种可注射植入剂及其制备方法 | |
| JP6515304B2 (ja) | 粒子状脱細胞化組織の製造方法 | |
| CN106492288A (zh) | 可注射的脱细胞脂肪基质微粒及其在植入剂中的应用 | |
| CN104740685A (zh) | 一种神经修复膜及其制备方法 | |
| US20160030487A1 (en) | Methods for selection of age-appropriate tissues | |
| RU2681530C2 (ru) | Способ ферментативной обработки тканевых продуктов | |
| CN109550082A (zh) | 一种脱细胞基质凝胶的制备方法 | |
| AU2021220753A1 (en) | Method for producing decellularized biomaterial, decellularized biomaterial and use thereof | |
| RU2721604C1 (ru) | Способ получения остеопластических биоматериалов из костной ткани | |
| Kumaresan et al. | Development of Human Umbilical cord based scaffold for tissue engineering application | |
| JP6097000B2 (ja) | 組織工学のための３次元構造体を得る方法 | |
| Chen et al. | Decellularization of fish tissues for tissue engineering and regenerative medicine applications | |
| CN110960731A (zh) | 一种医用外科生物补片的制备方法 | |
| Den Hondt et al. | Abstract P20: Tracheal Allotransplantation: The Next Step |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 629 room 3, building 32, No. 264000, Zhujianglu Road, Yantai Development Zone, Shandong, China Applicant after: SHANDONG JUNXIU BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Address before: 629 room 3, building 32, No. 264000, Zhujianglu Road, Yantai Development Zone, Shandong, China Applicant before: YANTAI JUANXIU BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY CO.,LTD. |
|
| COR | Change of bibliographic data | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 3 No. 264000 workshop E, Pioneer Park, 32 Zhujianglu Road Development Zone, Shandong, Yantai Province, 539 Applicant after: SHANDONG JUNXIU BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Address before: 629 room 3, building 32, No. 264000, Zhujianglu Road, Yantai Development Zone, Shandong, China Applicant before: YANTAI JUANXIU BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY CO.,LTD. |
|
| COR | Change of bibliographic data | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: No. 7 Gao'an Street, Economic and Technological Development Zone, Yantai City, Shandong Province, 264000 Patentee after: SHANDONG JUNXIU BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Address before: No.539, Zone E, No.3 workshop, overseas students entrepreneurship Park, No.32 Zhujiang Road, Yantai Development Zone, Shandong Province, 264000 Patentee before: SHANDONG JUNXIU BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. |
|
| CP02 | Change in the address of a patent holder |