CN104876824A - 一种从咖啡豆中分离纯化绿原酸的工艺 - Google Patents
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Abstract
一种从咖啡豆中分离纯化绿原酸的工艺,其分离纯化过程包括以下步骤:粉碎;提取、浓缩:吸附分离;上中性氧化铝脱色纯化;活性炭脱色;浓缩结晶;离心、重结晶;离心;干燥;粉碎过筛得绿原酸成品。本发明具有操作简便、绿色环保且利于工业化生产的优点。
Description
技术领域:
本发明属于生物提取领域,涉及一种从咖啡豆中分离纯化绿原酸的工艺。
背景技术:
咖啡豆来源于茜草科植物小果咖啡、中果咖啡及大果咖啡的种子。在咖啡豆提取物中含有较多的绿原酸,因此经常地被作为一种有效的绿原酸的来源进行使用。
绿原酸异名咖啡鞣酸,化学名3-咖啡酰奎尼酸,英文名Chlorogenic acid,CAS号:327-97-9,分子式:C16H18O9,分子量:354.3087,密度:1.65g\cm3,熔点:205-209℃。绿原酸被誉为“植物黄金”,是众多厂家追逐生产的对象。绿原酸是一种重要的生物活性物质,具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用,现代科学对绿原酸生物活性的研究已深入到食品、保健、医药和日用化工等多个领域。绿原酸的主要来源是从天然植物中提取,国内一直是以金银花、杜仲等植物原料,国外主要是以咖啡豆等为原料。
目前对绿原酸的提取方法主要有:
1、水提醇沉法:利用绿原酸易溶于热水的特性,用水作溶剂加热提取,然后用高浓度醇沉淀蛋白质、多糖等杂质,该法简单、经济,但醇沉过程会吸附夹带部分绿原酸,从而造成损失。
2、石硫醇法:将石灰乳加入水提液中,其与绿原酸形成不溶性钙盐,然后过滤,将沉淀悬浮在醇中加入硫酸分解。该法操作简单,但得到的绿原酸纯度不高,且收率低。
3、铅盐沉淀法:在醇沉液中加入乙酸铅溶液,使得绿原酸以铅盐的形式沉淀下来。该法得率较低,且使用有毒金属铅,会给环境带来严重污染。
4、超声波法:利用超声波能击碎细胞壁,使细胞内组分迅速渗透到溶液中,从而达到分离的目的。该法综合成本低,污染小,但目前仅限于实验室规模提取。
5、酶法:纤维素是植物细胞壁的组成部分,利用纤维素酶酶解作用,可以破坏植物细胞壁,从而有利于细胞内绿原酸溶出。该法反应条件温和,绿原酸得率高,但增加了生产成本。
6、萃取分离法:该法选用乙酸乙酯做萃取剂,利用绿原酸与杂质在其中溶解度不同达到分离杂质的目的。该法操作简单,成本低,但产量较低。
7、聚酰胺柱层析法:该法适合酚类、醌类、黄酮类化合物的分离,该法纯化度高,但操作麻烦、得率低、耗时长。
8、超滤膜分离法:采用此法可除去水提液中多糖、蛋白质等大分子,而绿原酸等小分子可透过膜的提取分离方法。该法污染相对较小,绿原酸得率较高,但该法对提取液预处理要求较高,且膜清洗较为困难。
因此,总的来说,以上常用的提取绿原酸的方法,自身都存在着一些缺陷,如:能耗高、提取时间长、提取率低、产品纯度低等。在以上研究的基础上,取长补短,从咖啡豆中提取纯化绿原酸,建立一种易于产业化、清洁环保的绿色工艺是非常有必要的。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术中存在的缺点,提供一种制取高含量绿原酸的工艺,具有操作简便、绿色环保且利于工业化生产的优点。
从咖啡豆中分离纯化绿原酸的工艺,其分离纯化过程包括以下步骤:
1、粉碎:首先将咖啡豆粉碎过10目筛,得到咖啡豆粗粉;
2、提取、浓缩:咖啡豆粗粉用10~95%乙醇回流提取三次,合并提取液,浓缩至咖啡豆投料量的2-4倍;
3、吸附分离:向浓缩液中加入水,搅拌均匀,离心,取滤液上大孔吸附树脂,先用水洗,去除水溶性杂质,再用40~80%乙醇解吸;
4、上中性氧化铝脱色纯化:将解吸液过中性氧化铝,得脱色纯化液;
5、活性炭脱色、浓缩结晶:向脱色纯化液中加入活性炭,回流搅拌脱色2~4小时,冷却过滤,滤液减压浓缩至小体积,结晶12~24小时;
6、离心、重结晶:将结晶粗品离心,沉淀粗品用乙酸乙酯重结晶2~3次;
7、离心:将重结晶好的物料用布氏漏斗过滤,得绿原酸精品湿品沉淀;
8、干燥:将绿原酸精品湿品沉淀放入烘箱干燥,干燥温度为70~80℃;
9、粉碎过筛:将干燥的绿原酸精品粉碎,过80目筛,得绿原酸成品。
附图说明
图1为绿原酸样品HPLC图谱。
具体实施方式
实施例1
将咖啡豆粉碎过10目筛,取咖啡豆粗粉100g以800ml,700ml,600ml,20%乙醇回流提取3次,回流提取时间分别为2小时,1.5小时,1小时,合并3次提取液,在-(0.01~0.06MPa)下浓缩,浓缩至280ml,向浓缩液中加入水,搅拌均匀,离心,取滤液上大孔吸附树脂,先用水洗,再用45%乙醇解吸。将解吸液过100g中性氧化铝,得脱色纯化液;向脱色纯化液中加入活性炭,回流搅拌脱色2.5小时,冷却过滤,滤液减压浓缩至小体积,结晶14小时。将结晶粗品离心,沉淀粗品用乙酸乙酯重结晶2次。将重结晶好的物料用布氏漏斗过滤,得绿原酸精品湿品沉淀。将沉淀放入烘箱干燥,干燥温度为75℃。将干燥的绿原酸精品粉碎,过80目筛,得绿原酸成品。HPLC分析含量为98.03%。
实施例2
将咖啡豆粉碎过10目筛,取咖啡豆粗粉100g以800ml,700ml,600ml,40%乙醇回流提取3次,回流提取时间分别为2小时,1.5小时,1小时,合并3次提取液,在-(0.01~0.06MPa)下浓缩,浓缩至350ml,向浓缩液中加入水,搅拌均匀,离心,取滤液上大孔吸附树脂,先用水洗,再用55%乙醇解吸。将解吸液过100g中性氧化铝,过完后,得脱色纯化液;向脱色纯化液中加入活性炭,回流搅拌脱色3.0小时,冷却过滤,滤液减压浓缩至小体积,结晶16小时。将结晶粗品离心,沉淀粗品用乙酸乙酯重结晶2次。将重结晶好的物料用布氏漏斗过滤,得绿原酸精品湿品沉淀。将沉淀放入烘箱干燥,干燥温度为75℃。将干燥的绿原酸精品粉碎,过80目筛,得绿原酸成品。HPLC分析含量为98.16%。
实施例3
将咖啡豆粉碎过10目筛,取咖啡豆粗粉100g以800ml,700ml,600ml,55%乙醇回流提取3次,回流提取时间分别为2小时,1.5小时,1小时,合并3次提取液,在-(0.01~0.06MPa)下浓缩,浓缩至300ml,向浓缩液中加入水,搅拌均匀,离心,取滤液上大孔吸附树脂,先用水洗,再用65%乙醇解吸。将解吸液过100g中性氧化铝,得脱色纯化液;向脱色纯化液中加入活性炭,回流搅拌脱色3.5小时,冷却过滤,滤液减压浓缩至小体积,结晶18小时。将结晶粗品离心,沉淀粗品用乙酸乙酯重结晶3次。将重结晶好的物料用布氏漏斗过滤,,得绿原酸精品湿品沉淀。将沉淀放入烘箱干燥,干燥温度为75℃。将干燥的绿原酸精品粉碎,过80目筛,得绿原酸成品。HPLC分析含量为98.21%。
实施例4
将咖啡豆粉碎过10目筛,取咖啡豆粗粉100g以800ml,700ml,600ml,75%乙醇回流提取3次,回流提取时间分别为2小时,1.5小时,1小时,合并3次提取液,在-(0.01~0.06MPa)下浓缩,浓缩至400ml,向浓缩液中水,搅拌均匀,离心,取滤液上大孔吸附树脂,先用水洗,再用75%乙醇解吸。将解吸液过100g中性氧化铝,得脱色纯化液;向脱色纯化液中加入活性炭,回流搅拌脱色4.5小时,冷却过滤,滤液减压浓缩至小体积,结晶22小时。将结晶粗品离心,沉淀粗品用乙酸乙酯重结晶3次。将重结晶好的物料用布氏漏斗过滤,得绿原酸精品湿品沉淀。将沉淀放入烘箱干燥,干燥温度为75℃。将干燥的绿原酸精品粉碎,过80目筛,得绿原酸成品。HPLC分析含量为98.65%。
绿原酸样品HPLC图谱如图1。
Claims (1)
1.一种从咖啡豆中分离纯化绿原酸的工艺,其具体工艺步骤为:
(1)粉碎:首先将咖啡豆粉碎过10目筛,得到咖啡豆粗粉;
(2)提取、浓缩:咖啡豆粗粉用10~95%乙醇回流提取三次,合并提取液,浓缩至咖啡豆投料量的2-4倍;
(3)吸附分离:向浓缩液中加入水,搅拌均匀,离心,取滤液上大孔吸附树脂,先用水洗,去除水溶性杂质,再用40~80%乙醇解吸;
(4)上中性氧化铝脱色纯化:将解吸液过中性氧化铝,得脱色纯化液;
(5)活性炭脱色、浓缩结晶:向脱色纯化液中加入活性炭,回流搅拌脱色2~4小时,冷却过滤,滤液减压浓缩至小体积,结晶12~24小时;
(6)离心、重结晶:将结晶粗品离心,沉淀粗品用乙酸乙酯重结晶2~3次;
(7)离心:将重结晶好的物料用布氏漏斗过滤,得绿原酸精品湿品沉淀;
(8)干燥:将绿原酸精品湿品沉淀放入烘箱干燥,干燥温度为70~80℃;
(9)粉碎过筛:将干燥的绿原酸精品粉碎,过80目筛,得绿原酸成品。
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