CN104784687A - 重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物免疫领域，本发明公开了重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，所述的用途为重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE在制备免疫佐剂或疫苗中的用途；尤其是免疫佐剂用于预防或治疗肿瘤或感染性疾病的用途。本发明提供了以绿脓杆菌PAO1株为模型菌株，证明重组表达的FlgE单体，可以刺激人角膜上皮细胞或小鼠肺组织发生炎性反应，并能表现出显著的佐剂效应，为其应用于免疫佐剂奠定了基础。

Description

重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途

技术领域

本发明属于生物免疫领域，涉及重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途。

背景技术

虽然人、畜、禽在免疫学结构方面存在差异，但针对抗原发生免疫反应的生物模式方面存在很多共同点，在人类疾病防控领域普遍应用的免疫佐剂，在禽、畜体内同样发挥作用。  作为人类整体，其健康质量的提升、平均寿命的延长，很大部分得益于对各种可致流行病的病原体的抵抗；而后者则依赖于针对各种病原体的疫苗的研发和免疫方法的建立。目前在某些地区，病原体感染仍是威胁人类健康的重大杀手，如引起爱滋病的HIV感染、人畜共患的SARS、禽流感、埃博拉病毒感染等，以及并非致命的感染如疟疾等。同时，对于一些非感染性疾病，若其发病机制与免疫失功相关，如肿瘤，则也可应用疫苗接种途径，诱导机体产生针对特定抗原（如肿瘤相关抗原）的免疫力，从而达到预防或治疗疾病的目的。

 除增强人类自身健康状况外，为人类提供足够并健康的畜、禽制品，也是提升人类整体生活质量的保障手段之一。因此，研发适用于畜、禽生产的疫苗以促进养殖业的健康发展，同样具有重大意义。

    决定疫苗成败的三个主要因素包括特异性抗原、佐剂和免疫途径，其中后两者常为领域内公共待解决的问题，因此具有更重大的研究意义。即便针对同一种抗原，采用不同的佐剂或应用不同的免疫途径，都可能引起不同的免疫防治效果。目前公共卫生防治领域常用的免疫途径仍为皮下粘膜或肌肉注射。随着生物医学技术的发展，近二十年在经粘膜免疫途径方面开展了大量工作，被认为最终将取代传统免疫途径。与其对应的则是寻找新型的免疫佐剂。目前被公认较有前景的粘膜免疫佐剂（也适合传统免疫途径）主要包括霍乱毒素、大肠杆菌热敏感肠毒素和人工合成的非甲基化的CpG类寡核苷酸。

    在相当长的时间里，铝剂（以氢氧化铝为主，还有硫酸铝、氧化铝凝胶等）是唯一被批准在美国使用的免疫佐剂。随后，在欧洲和加拿大上市的MF59，为角鲨烯squalene纳米油剂，用于流感；在防治16/18型乳头状瘤病毒引起的宫颈癌疫苗Cervarix中，使用的是氢氧化铝与单磷酸脂质A(MPL)的混合物（AS04）。2013年，为应对严重的禽流感威胁，美国FDA紧急批准在H5N1疫苗中使用的佐剂AS03,是维生素E、角鲨烯和polysorbate （聚山梨醇酯，又称吐温80）的混合物；只是该疫苗未公开售用，但在卫生官员认为需要时可以使用。目前世界上有上百种基于各种机制、具有各种结构、针对不同使用目的的佐剂候选制品，处于研发的不同阶段。在我国，国家食品药品监督管理局于二〇〇五年十月十四日发布的“多肽疫苗生产及质控技术指导原则”中也明确阐明：“传统佐剂是在矿物胶基础上制成-氢氧化铝、磷酸铝或磷酸钙，到目前为止批准使用的佐剂鲜为他类”。为此，研发基于我国自主创新发现的新型免疫佐剂，具有重要的意义。

    一种良好的佐剂能增强机体对特异性抗原的免疫应答，但本身不引起不需要的作用。目前使用或在研的多数佐剂，作用机制主要包括两种方式：通过物理方法延长疫苗抗原的作用时间，或通过刺激先天性免疫系统而放大机体针对抗原产生的特异性免疫反应。比如动物实验中应用最多的不完全弗氏佐剂即通过其内油脂类物质保护抗原不被迅速稀释降解，而完全弗氏佐剂中的菌体则刺激机体的免疫系统。虽然完全弗氏佐剂也可引起针对其内菌体抗原的特异性免疫反应，但因为该佐剂内的细菌实为致病菌，所以针对其产生的特异性抗体或细胞免疫效应细胞并不对宿主产生不良效果。现在已知弗氏佐剂中的菌体发挥作用的主要机制是其各种结构成分如脂多糖、蛋白多糖、胞内DNA等病原体相关模式分子（Pathogen-Associated MolecμLar Pattern）对宿主细胞上Toll样受体的激活，引起后续免疫刺激效应。近些年研究较多的基于CpG免疫刺激现象的佐剂，通过激活Toll 样受体9而活化抗原提呈细胞和B细胞，从而增强对抗原的反应。毒素类佐剂则通过刺激粘膜局部的炎性反应，放大对抗原的免疫反应。目前基于CpG免疫刺激现象的佐剂研发比较引人注目，主要由于以下原因：CpG免疫刺激现象较为明显；CpG类寡核苷酸容易制备；当CpG寡核苷酸长度控制在一定范围内时，其免疫原性十分微弱；除了其核心部位的CpG序列不能变更外，其侧翼序列可有很多的变通方法，因此较易以新的序列研发自己的产品。

    在来源于细菌的佐剂候选制剂中，基于鞭毛成分者也值得关注。首先，曾有文献表明完整鞭毛具有佐剂效应（Ruiz AM, et al. Immunoprotection of mice against Trypanosoma cruzi with a lyophilized flagellar fraction of the parasite plus adjuvant. Immunol Lett 1986; 12:1-4）。至1997年Toll样受体系列被发现（Medzhitov R, et al. A human homologue of the Drosophila Toll protein signals activation of adaptive immunity. Nature 1997; 388:394-397）后，于2001年证实鞭毛的佐剂效应是通过鞭毛体的主要部分（即鞭毛纤维）所含鞭毛蛋白FliC作用于Toll样受体5（TLR5）而实现的（Hayashi F, et al. The innate immune response to bacterial flagellin is mediated by Toll-like receptor 5. Nature 2001; 410:1099-1103）。目前国内外均有部分专利对FliC相关制剂的佐剂性应用进行保护。以“鞭毛蛋白 and 佐剂”搜索国家专利局的专利公布公告数据库，返回四条记录（图2），申请人分别来自中国和法国，专利对鞭毛蛋白在人或禽疫苗中的应用进行保护。必须指出的是，目前已有的国内外所有应用鞭毛蛋白作为佐剂或者其他方面应用的专利（比如肿瘤治疗等）中所指的“鞭毛蛋白”，无一例外均指由基因FliC编码的flagellin type B，因其对应于鞭毛体纤维部分，因此传统被称为filament C（FliC），与本专利所保护的FlgE是由不同基因编码的不同蛋白（表1）。采用Pubmed的BLAST程序和SimGene的CLUSTALW2程序分别对二者进行同源比较，显示FliC和FlgE在蛋白序列方面同源性极低。

表1. 绿脓杆菌PAO1菌株中，“鞭毛蛋白”与“鞭毛钩蛋白”的对比

鞭毛钩蛋白，英文全称为flagellar hook protein FlgE，大约120个FlgE单体聚合后构成鞭毛的钩部。以往研究均围绕该蛋白对鞭毛结构的影响，比如FlgE的部分突变可以使得鞭毛变短甚至完全缺失，说明FlgE单体或多聚体鞭毛钩对鞭毛的整体结构或生物学性质有重要影响，但对鞭毛钩本身的免疫相关活性，鲜有关注，经检索文献发现，相关领域仅有一篇文献，表明在Lyme病人中存在可与FlgE发生结合的抗体（Jwang B，et al. The hook protein of Borrelia burgdorferi, encoded by the flgE gene, is serologically recognized in Lyme disease. Clin Diagn Lab Immunol 1995; 2:609-615）。

细菌鞭毛为细菌运动提供动力和掌握方向，主要由基底部、鞭毛钩、鞭毛体构成（图1），其中基座复合体提供旋转动力，鞭毛钩通过弯曲将基座的轴型运动转换为鞭毛体的螺旋推动力。鞭毛体和鞭毛钩分别是由单体分子FliC和FlgE多聚而成。目前关于细菌鞭毛免疫生物学的研究集中在鞭毛体或其单体分子FliC上。已知FliC通过活化细胞TLR5而发挥免疫刺激作用，因此具有佐剂活性。而对鞭毛钩，仅有若干研究表明其组成分子FlgE若发生变异，将影响鞭毛体的延伸和功能。

发明内容

要解决的技术问题：本发明的目的在于公开重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，提供以绿脓杆菌PAO1株为模型菌株，证明无论重组表达的FlgE单体，还是从细菌制备的鞭毛钩，都可以刺激人角膜上皮细胞或小鼠肺组织发生炎性反应，为其佐剂效应奠定基础。

技术方案：针对上述问题，本发明公开了重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，所述的用途为重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE在制备免疫佐剂或疫苗中的用途。

进一步的，所述的重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，所述的免疫佐剂为用于预防或治疗肿瘤或感染性疾病的免疫佐剂。

进一步的，所述的重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，所述的疫苗为用于预防肿瘤或感染性疾病的疫苗。

进一步的，所述的重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，所述的疫苗为禽类或畜类疫苗。

更进一步的，所述的重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，所述的感染性疾病包括病毒感染性疾病、细菌感染性疾病或寄生虫感染性疾病。

更进一步的，所述的重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，所述的感染性疾病包括肺炎、脑膜炎、肠炎、禽流感或艾滋病。

更进一步的，所述的重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，所述的肿瘤包括基底细胞癌、移行细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、恶性血管外皮瘤、恶性血管外皮瘤、B细胞性恶性淋巴瘤 、T细胞性恶性淋巴瘤或造釉细胞癌。

有益效果：本项目组则以绿脓杆菌鞭毛钩蛋白为例，研究其可能的免疫学特性，并首次发现（详见实施例）：FlgE具有很强的非特异性免疫刺激活性。应用重组的FlgE蛋白单体，处理体外培养的永生化人角膜上皮细胞系HCEC，应用全基因表达谱芯片发现细胞中表达上调的分子通路与炎症和免疫反应性相关，应用定量PCR方法对部分因子（如IL1、IL6、IL8等炎性因子）的表达量变化进行验证。应用小鼠原代肺组织培养体系，加入重组FlgE单体或者从绿脓杆菌纯化的鞭毛钩蛋白复合物，也可检测到炎性因子的表达量上升。这些结果提示FlgE具有促进炎症和免疫反应的能力，具有佐剂的潜质。进一步，应用卵白蛋白OVA免疫小鼠，若加入重组FlgE，则可明显增加小鼠对OVA的反应性，提示FlgE在动物体内确实具有佐剂效应。在作用机制方面，FliC主要通过活化TLR5发挥作用，但在HCEC培养体系中加入抗TLR5的抗体，不能完全阻断FlgE的活性，说明FlgE发挥免疫刺激作用并非完全依赖TLR5。另一方面，虽然FlgE作为蛋白也可引起机体针对FlgE的特异性免疫反应，但因为迄今未见与该蛋白同源的宿主蛋白，所以可以合理推断，针对FlgE产生的抗体不会带来任何副作用。相反地，因为绿脓杆菌是普遍存在于环境和动物体内的机会致病菌，使用FlgE作为佐剂时产生的针对FlgE的特异性免疫反应反而可以帮助清除体内潜伏的绿脓杆菌。同时，该分子在蛋白序列上与其他绿脓杆菌菌株FlgE高度同源（同源比例均在90%以上），但与非绿脓杆菌细菌（注：在blast时设定Exclude pseudomonas物种）FlgE的同源性较低（均低于62%），比如与大肠杆菌FlgE的同源性仅为38%，所以FlgE发挥佐剂效应的同时，诱导的FlgE特异性免疫反应的作用范围将局限在绿脓杆菌本身，不会影响到其他悉生菌群。因此可以合理预测针对FlgE产生的特异性免疫反应不会作用于机体内其他细菌，因此不会破坏其他菌群间的平衡。

附图说明

图1为重组FlgE纯化各步骤之后蛋白条带情况。

图2为FlgE吸入对小鼠肺部的致炎作用。

图3为FlgE对小鼠抗OVA细胞免疫反应的佐剂作用。

图4为FlgE免疫小鼠后产生抗FlgE抗体。

具体实施方式

FlgE的重组表达及纯化（小规模制备）

根据绿脓杆菌FlgE编码基因序列，设计并合成分别带有NdeI和HindIII酶切位点的扩增全长FlgE编码序列的上下游引物，上游引物序列为GGAATTCCATATGAGTTTCAACATCGGCCTG，下游引物序列为TCCCAAGCTTGCGCAGGTTGATGATGGTCT。利用以上引物对提取的绿脓杆菌基因组DNA进行扩增，PCR程序为：94℃ 变性45秒，58℃ 退火1分钟，72℃ 延伸1分钟，循环25次；72℃ ,10分钟，其产物经琼脂糖凝胶电泳分离、纯化后用NdeI和HindIII酶切后回收，与经过同样酶切的表达载体PET24a进行连接反应；将连接产物转化入大肠杆菌JM109感受态细胞，接种于含Kan（终浓度50μg/mL）的LB琼脂平板，过夜培养后挑选有Kan抗性克隆，摇菌扩增后提取质粒进行酶切鉴定，确定为阳性转化子后对重组质粒进行测序验证，确保插入的目的基因及连接区序列正确，命名为pET24a-FlgE。将其转化入大肠杆菌表达菌株BL21，挑取单个菌落接种至5mL的LB液体培养基中（含50μg/mL浓度的Kan抗生素）放入恒温摇床中,转速225r/min、37℃孵育16-18h。然后取部分菌液以1:100比例转接至100mL液体培养基中,继续在摇床中以225r/min,30 ℃孵育，监测OD值，达0.6-0.9时加入诱导剂IPTG( 终浓度1mmol/ L) ；之后于225r/min转速、16℃的条件下诱导20小时。收集菌液，于4℃、1811g、离心20min后弃上清，菌体用PBS洗涤一次后加入15mL结合缓冲液（20mM磷酸钠、500mM氯化钠、30mM咪唑、PH7.4）和5μL的溶菌酶（终浓度为0.03mg/mL）室温放置15分钟。然后采用超声法(20﹪的功率， 每2s超声期间间歇2s，总时间为10-15min) 破碎菌体，以4℃、1811g、离心20min，收集裂菌后的上清（含有表达蛋白）, 用0.45μm的滤膜过滤以除去细胞碎片或其它固形物质，滤过液用连于AKTA Explorer的His-Trap FF crude层析柱（柱床体积1mL）进行纯化。简言之，先用至少5个柱床体积的平衡缓冲液平衡层析柱，待系统基线平衡稳定后，紫外归零。用注射器将粗制鞭毛蛋白液注入2mL上样环，上样流速1mL/min。待出现上样峰后，用结合缓冲液洗去杂蛋白，待基线平衡稳定后用含20mM磷酸钠、500mM氯化钠、500mM咪唑、PH7.4的洗脱缓冲液梯度洗脱，流速1mL/min， 0～100%的梯度在10个柱床体积内完成。在UV检测下收集蛋白峰，以1mL/份收集入1.5mL的EP管中。收集洗脱下的蛋白峰，以类似步骤通过His-Trap Desalting脱盐柱，通过PBS缓冲液置换咪唑等盐类物质，进而除去盐类物质，将蛋白溶解在PBS缓冲液中，收集蛋白峰。然后将样品经内毒素去除试剂盒（Toxin Eraser TM Endotoxin Removal Kit）去除内毒素。每一步骤之间取适量蛋白液经12﹪SDS-PAGE进行鉴定。最后用BCA法测定纯化后的FlgE蛋白浓度，并用显色基质鲎试剂盒、依据试剂盒说明书通过标准曲线对比法，测定蛋白样品中脂多糖的残量浓度。经过上述步骤，每100mL培养菌最后可得纯化FlgE蛋白6mg，蛋白电泳显示产物条带单一。经去除内毒素试剂盒处理，用鲎试剂的方法检测蛋白溶液中内毒素含量为0.74EU/mg蛋白，适用于后续功能研究（见图1）。

FlgE蛋白的氨基酸序列如SEQ ID  NO:1所示。

 FlgE刺激人角膜上皮细胞的固有免疫反应

     人角膜上皮细胞系HCEC于DMEM/F12培养液（含10﹪FBS）传代培养。收获对数生长期细胞加入24孔板，每孔含500μL和细胞1.5×10⁴个。待细胞长满至80﹪-90﹪融合，换无血清培养液继续培养4小时。加入25μL FlgE，使其终浓度为20μg/mL。每个样本设三个复孔，设置空白对照和PBS对照。培养4小时后，弃上清，每孔加入100μL Trizol，静止5min，收集样品，提取样品RNA，用于表达谱芯片检测。采用Agilent SurePrint G3 Human Gene Expression 8x60K (Cat# G2543-60015. Agilent)芯片，芯片杂交和数据采集、分析由Agilent专业服务公司协助进行。

主要结果：该芯片共含42545数据点，经FlgE（20μg/mL）处理4小时后，26229个点被判定为“表达”（在3张芯片的两张或三张芯片中均被检测到），其中377条基因表达上调至对照的1.5倍，332条下降至正常的0.667以下。经Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery (DAVID, v6.7)分析，上调的基因富集在16条KEGG通路中（表2），上调显著的基因和通路多数与固有免疫反应相关，其中IL-6在7条KEGG通路中富集，IL-1b则在4条通路中富集；下调的基因则仅有Leukocyte Transendothelial Migration通路被富集。其中变化最强烈的基因均与炎症和固有免疫反应有关（表3）。说明FlgE作用于HCEC所引起的反应主要与固有免疫反应和炎性反应相关。

表2. 上调基因所富集的通路

表3 上调超过三倍的基因列表；没有基因下调超过3倍

*这些基因在阵列中设置两个或两个以上的探针，包括所有适用的数据。

FlgE刺激小鼠肺脏的固有免疫反应

应用野生型C57Bl/6小鼠，用FlgE（5μg/mL剂量）、LPS（5μg/mL剂量作为阳性对照）或溶剂PBS（作为阴性对照）分别滴鼻，24小时后处死小鼠。取肺，用PBS灌洗，制备肺浸液，采用ELISA方法检测其内IL1b、IL6、CXCL1浓度；随后将肺切成小块，部分固定后常规制备石蜡切片并进行HE染色，部分用于提取RNA应用荧光定量PCR检测IL1b、IL6和CXCL1（引物序列：mIL1b F: CAACCAACAAGTGATATTCTCCATG, R: GATCCACACTCTCCAGCTGCA, P: CTGTGTAATGAAAGACGGCACACCCACC; mIL-6 F: TCGGAGGCTTAATTACACATGTTC，R: CAAGTGCATCATCGTTGTTCATAC，P: CAGAATTGCCATTGCACAACTCTTTTCTCA；mCXCL1 F: CCGAAGTCATAGCCACACTC，R: TTTTCTGAACCAAGGGAGCTT，P: AAGGCAAGCCTCGCGACCAT）。

主要结果：组织切片显示FlgE处理，可以显著诱导肺内炎性细胞浸润，但程度远低于同等质量的LPS（图2A），对切片进行髓过氧化物酶显色反应，表明肺内髓系粒细胞增多（图2B）；肺组织RT-PCR（图2C）和肺浸液ELISA（图2D）表明FlgE滴鼻处理的小鼠肺部IL1b、IL6和CXCL1表达水平显著上升。这些结果提示重组绿脓杆菌FlgE可以显著促进肺脏等气管内固有免疫反应应答。

FlgE的佐剂活性

（1）细胞免疫反应：应用OVA特异的TCR转基因鼠模型，检测FlgE对小鼠抗OVA细胞免疫的佐剂效果。从CD45.1×OT-II F1小鼠,取脾脏、皮肤引流淋巴结经无菌制备单细胞悬液，常规应用eflour450标记后，经CD16/32封闭，应用CD4标记抗体标记，经MACS磁珠分选CD4+ T细胞，然后用FACS AriaII分选CD4+TCR/alpha2+ TCR/BETA5+CD62L+CD25- 静息T细胞。经尾静脉回输给C57BL/6受体鼠（每只回输1.6×10⁶ T细胞）。一天后分组，经尾根部皮下注射，对小鼠进行免疫：PBS组，100μL PBS/鼠；单纯OVA组，10μg OVA/鼠；OVA+CpG组，10μg OVA+50μg CpG/鼠；OVA+FlgE组，10μg OVA+50μg FlgE/鼠。免疫后第三天，取腹股沟引流淋巴结拍照，制备淋巴结单细胞悬液，计数后用CD16/32封闭，用抗体标记（CD4-Percpcy5.5，CD45.1-FITC），上机行FACS检测。

主要结果：C57Bl/6鼠接受OT-II细胞并经OVA冲击后，淋巴细胞增殖并导致淋巴结肿大（图3 A），特异性T细胞所占比例增高（图3 B），eFlour450检测显示淋巴细胞增殖（图3C）；在上述各指标中，FlgE均表现为进一步的促进作用，表现为显著的佐剂效应，但同质量的FlgE的作用强度低于同质量剂量的CpG。

FlgE的特异性免疫学活性

    采用6-8周龄C57Bl/6雌性小鼠，以FlgE或固定灭活的绿脓杆菌进行免疫。具体方法为：FlgE组：取2mg/mL的FlgE 50uL即100μg与等量氢氧化铝佐剂混匀，左右足趾皮下注射各25μL，腹股沟皮下注射50μL，共计100μL/只。PAO1组：PAO 1绿脓杆菌菌株常规在液体培养基中扩菌、收菌，以终浓度0.4%的甲醛于37℃孵育24小时灭活，调整菌液浓度约为1×108CFU/mL，100ul/只，免疫方法同FlgE组。第一次免疫2周后，再次免疫。第二次免疫10天后取血清，以ELISA测定其内抗FlgE抗体滴度。ELISA步骤为：首先以1 μg/mL FlgE （溶于CBS缓冲液）包被酶标板， 4℃过夜。弃去包被液，用1%BSA于室温放置2小时封闭其余未结合位点。将抗血清自1:3000浓度开始，以1:3做倍比稀释后，加入板中于室温孵育60分钟，PBST洗板5次后，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗，1:3000稀释，37℃孵育45分钟后洗板，加入TMB显色30分钟，终止反应后在450nm处读板。结果可见应用FlgE免疫小鼠后可以诱导高滴度的抗FlgE抗体，而应用灭活的绿脓杆菌全菌仅能诱导较低低度的抗FlgE抗体（图4）。

Claims (7)

1.重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，其特征在于：所述的用途为重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE在制备免疫佐剂或疫苗中的用途。

2.根据权利要求1所述的重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，其特征在于：所述的免疫佐剂为用于预防或治疗肿瘤、感染性疾病的免疫佐剂。

3.根据权利要求1所述的重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，其特征在于：所述的疫苗为用于预防肿瘤或感染性疾病的疫苗。

4.根据权利要求3所述的重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，其特征在于：所述的疫苗为禽类或畜类疫苗。

5.根据权利要求2或3所述的重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，其特征在于：所述的感染性疾病包括病毒感染性疾病、细菌感染性疾病或寄生虫感染性疾病。

6.根据权利要求2或3所述的重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，其特征在于：所述的感染性疾病包括肺炎、脑膜炎、肠炎、禽流感或艾滋病。

7.根据权利要求2或3所述的重组绿脓杆菌鞭毛钩蛋白FlgE的用途，其特征在于：所述的肿瘤包括基底细胞癌、移行细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、恶性血管外皮瘤、恶性血管外皮瘤、B细胞性恶性淋巴瘤 、T细胞性恶性淋巴瘤或造釉细胞癌。