CN104206170A - 一种富集dnj成分的灵芝的培养方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种富集DNJ成分的灵芝的培养方法，是利用富含DNJ成分的桑枝条、桑根、桑叶粉和蚕沙等做主要培养基料，通过改进培养方法，利用生物转化，把桑树特有的DNJ成分富集到灵芝子实体中。用这种方法培养的灵芝，原料来源充足，而且技术简易、成本低、见效快；在保留灵芝原有药用成分的基础上，其子实体中DNJ含量高达0.6%以上，远远高出桑树各器官的DNJ含量。用这种方法培养的灵芝产品在抑制血糖、改善糖尿病病人体质，减少和替代对胰岛素的依赖方面意义重大，为开发无副作用的降糖保健品方面提供了素材，同时也为提取DNJ药用成分的医药企业提供含量丰富的原料。

Description

一种富集DNJ成分的灵芝的培养方法

技术领域

本发明涉及一种灵芝的培养方法，具体是一种富集DNJ成分的灵芝的培养方法。 

背景技术

DNJ是1-脱氧野尻霉素的简称，是从桑树上发现的一种天然生物碱，是一种强效的糖代谢酶抑制剂，具有明显的降糖作用，被称为植物胰岛素；桑树中的DNJ主要分布在桑树的叶、根和枝中；据相关文献记载，桑叶、桑根和桑树枝条干物质中DNJ含量分别为0.11%、0.14%和0.176%，在此外在蚕沙中也含有DNJ成分在1.13%左右。灵芝是一种名贵的中药材，含有多种对人体有益的营养和药用成分，但用普通杂木做培养基料采用传统的方法培养的灵芝，几乎检测不到DNJ的含量，降糖作用不明显；本项发明是利用桑枝条、桑根、桑叶粉和蚕沙等做主要培养基料，利用生物转化，把桑树特有的DNJ成分富集到灵芝子实体中，利用这种方法生产的灵芝，在保留原有有效成分的基础上，通过高效液相色谱仪进行DNJ测定，其含量高达0.6459%。 

发明内容

本发明提供的是 “一种富集DNJ成分的灵芝的培养方法” 

本发明公开了一种富集DNJ成分的灵芝的培养方法，是利用富含DNJ成分的桑枝条、桑根、桑叶粉和蚕沙等做主要培养基料，通过改进培养方法，利用生物转化，把桑树特有的DNJ成分富集到灵芝子实体中，利用这种方法生产的灵芝，在保留原有有效成分的基础上，通过高效液相色谱仪进行DNJ测定，其含量高达0.6459%。

为了达到上述目的，本发明采取的技术方案是： 

一种富集DNJ成分的灵芝的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

其培养基质由下列重量份的原料组成：桑枝屑65-75、桑根屑10-20,、蚕沙1-10、桑叶粉1-10、麸皮1-10、棉籽粕1-5、蔗糖1-5、石膏粉1-5、石灰粉0.1-1、碳酸钙0.1-1；

（1）备料粉碎：选干燥无霉变的桑枝条、桑树根、桑叶、蚕沙经粉碎后备用，其它辅料要求新鲜、无霉变；

（2）主料预湿：对制菌棒用的桑枝屑、桑根屑提前按比例混匀，加水预湿；

（3）拌料装袋：预湿后的桑枝屑、桑根屑与蚕沙、桑叶粉、麸皮、棉籽粕、石膏粉、石灰粉、碳酸钙按配方比例充分混合均匀，蔗糖放入容器中加水溶解，然后逐渐加入进行搅拌，然后加水，边加边搅拌，含水量要求达到55%左右；将拌好的培养基料装入菌袋，扎紧袋口，制成菌棒；

（4）灭菌：将制好的菌棒在100℃常压下灭菌12-15小时，灭菌结束后等温度自然下降至60℃左右方可出锅，将料棒移入经清扫、消毒后的冷却场地降至自然温度； 

（5）接种：接种前对接种室经过严格清扫、消毒，接种箱和接种用具进行彻底清洗，接种箱和接种用具消毒选用气雾消毒剂4～8g熏蒸消毒30分钟左右；接种用具、菌棒外表处理及接种者双手应采用75%的酒精或0.2%高锰酸钾溶液擦洗消毒；消毒结束后就可以对菌棒进行打穴接种，及时在接好种的菌棒外进行套袋封口；接种完毕后，及时清理接种箱内残留物，进行通风换气； 

（6）菌丝体培养管理：将接好种的菌棒移入已经严格杀虫、消毒的培菌室内井字形堆放，堆高6-8层，进行菌丝体培养；接种后第8-10天温度控制在25℃左右，18-20天后室温控制在23℃左右，要经常检查注意堆温，堆温升高，要加大通风，当白色菌丝体围绕接种孔生长到直径12cm-15cm时，去掉外层套袋以增氧通气，促进生长；35-40天后，室温控制在20-22℃，菌丝体长满袋后见有白色突起芝蕾时可以在菌棒两端剪口，促进子实体发育，然后就可以移入出芝棚，进行排场；

（7）子实体阶段的管理：选择有水源、地势高、无污染的地方搭建芝棚，并严格杀虫、消毒后，菌棒就可移入出芝棚进行排场；排场时将菌棒平放在地面，菌棒间距3-5cm，填满富含腐殖质的菜园土，上覆1-2cm的细沙土，每天早晚各1-2个小时，利用微喷管间断喷雾状水，保持棚内相对湿度在85-95%左右，7天左右就可见灵芝子实体幼体芝蕾长出，用消毒的剪刀剪去过多的芝蕾，每棒保留芝蕾2-4个，灵芝子实体成熟后就可采收干制；采收第1潮后，停水5-7天，待因采摘子实体造成的伤口愈合后，然后再间断喷水，保持相对湿度85%以上，进入下一潮子实体的生长发育阶段的管理，以后均按此管理。

所述的富集DNJ成分的灵芝培养的方法，其特征在于，其培养基料由下列重量份的原料组成：桑枝屑72、桑根屑14、蚕沙3、桑叶粉3、麸皮2、棉籽粕2、蔗糖1、石膏粉1、石灰粉1、碳酸钙0.5。 

所述的的富集DNJ成分的灵芝培养的方法,其特征在于步奏（1）选干燥无霉变的带皮桑枝条、桑树根经粉碎后成大小为0.2-0.5厘米左右的桑枝屑和桑根屑，桑叶干燥后粉碎成5-10目的桑叶粉，蚕沙经过筛选晒干粉碎后备用。 

所述的的富集DNJ成分的灵芝培养的方法,其特征在于步奏（2）桑枝屑、桑根屑提前2天按比例混匀加水40%左右搅拌均匀后堆放，让料充分吸水预湿。 

所述的的富集DNJ成分的灵芝培养的方法, 其特征在于步奏（6）所述将接好种的菌棒移入已经严格杀虫、消毒的培菌室内井字形堆放，消毒采用含二氧化氯400mg/L水溶液对墙面、地面、空间和用具进行喷洒，或用含2000mg/L浓度的二氧化氯，按40ml/m³用量熏蒸并密封24小时。 

所述的的一种富集DNJ成分的灵芝的培养方法, 其特征在于培养基料中还包含有0.1-0.5重量份的含有铁、铜、锰、锌、钙、镁等元素的螯合态复合微肥。 

本发明具有以下意义： 

1.本项发明是利用桑树器官中DNJ含量比较高的营养器官如桑枝条、桑树根和桑叶粉、也包括桑叶被蚕体消化后的聚集多种营养成分的蚕沙等做主要培养料培养的灵芝，在保留灵芝原有药用成分的基础上，通过生物转化，把桑树特有的DNJ成分富集到灵芝子实体中，通过高效液相色谱仪测定，灵芝子实体中DNJ含量高达0.6459%，而桑叶、桑根和桑枝条干物质中DNJ含量分别为0.11%、0.14%和0.176%，蚕沙中DNJ成分在0.113%，说明用这种方法培养的灵芝子实体可以富集培养料中的DNJ的成分；用这种方法培养的灵芝产品在抑制血糖、改善糖尿病病人体质，减少和替代对胰岛素的依赖方面意义重大，为开发无副作用的降糖保健品方面提供了素材，同时也为提取DNJ药用成分的医药企业提供含量丰富的原料；

2.本发明的培养基料主要来源于养蚕业的副产品，具有原料来源充足，来源广泛、价格低廉的特点，用这种方法培养灵芝，可以有效地保护有限的森林资源，防止乱砍乱伐，解决了菌林矛盾。由于培养技术方法简单、成本低、见效快，为蚕农和食用菌种植户可以带来很大的经济效益；

3.本发明的培养基料配方组合了灵芝的生长发育所必需的营养成分，增加了含有铁、铜、锰、锌、钙、镁等元素的螯合态复合微肥，不仅营养更加全面，而且有效调节了灵芝的生长发育，用此配方生产的灵芝，菌丝生长快而且粗壮，同比其它配方提前10天左右菌丝发满袋，灵芝子实体菌盖大肉厚，含有丰富的微量元素丰富，产量较常规方法提高10%左右。 

 具体实施方式  

下面结合实施例对本发明作进一步的描述：

一种富集DNJ成分的灵芝培养的方法培养基料配方由下列重量份的原料组成：

桑枝屑72、桑根屑14、蚕沙3、桑叶粉3、麸皮2、棉籽粕2、蔗糖1、石膏粉1、石灰粉1、碳酸钙0.5、（含有铁、铜、锰、锌、钙、镁等元素）螯合态复合微肥0.5；

一种富集DNJ成分的灵芝培养的方法的工艺流程依次包括以下步骤：

（1）备料粉碎：选干燥无霉变的带皮桑枝条、桑树根经粉碎后成大小为0.2-0.5厘米左右的桑枝屑和桑根屑备用，蚕沙经过筛选晒干粉碎后备用，桑叶干燥后粉碎成5-10目的桑叶粉备用，其它辅料要求新鲜、无霉变；

（2）主料预湿：对当天制菌棒用的桑枝屑、桑根屑按比例混匀提前2天加水40%左右，边加水边搅拌，均匀后堆放，让料充分吸水预湿；

（3）拌料装袋：预湿后的桑枝屑、桑根屑与蚕沙、桑叶粉、麸皮、棉籽粕、石膏粉、石灰粉、碳酸钙、螯合态复合微肥按配方比例充分混合均匀，蔗糖放入容器中加水溶解，逐渐加入料中进行搅拌，然后加水，充分拌匀，含水量要求达到55%左右，以手握紧培养料有水痕无水滴为度；将拌好的培养基料装入根据不同需要选择不同的菌袋，一般采用15cm×55 cm×0.0045 cm聚丙烯塑料菌袋，利用机器分装，扎紧袋口，制成菌棒，做到分装紧实，料与袋壁无空隙，并检查有无拉薄、破损、刺破袋壁，当天拌料当天装袋当天灭菌一气呵成，忌堆积过夜；

（4）灭菌：将制好的菌棒在灭菌灶内“井”字型堆放，以不超过1500棒为宜，超过1500棒灭菌时间要增加。常压灭菌开始用旺火，使温度在3-4小时内达到100℃，也就是整个灭菌灶内都充满蒸气，下部有蒸气溢出，这样要保持温度12-15小时。整个灭菌过程不能中断，当锅炉内缺水时只能添加热水，忌加冷水。灭菌结束后等温度自然下降至60℃以下方可出灶，温度过高易发生料袋胀破，要求出灶过程轻拿轻放，搬运工具内要垫棉毡，防止刺破料袋；冷却场地事先要进行清扫、杀虫、杀菌处理，采用硫磺熏烟或含2000mg/L浓度的二氧化氯熏蒸消毒，或用1%有效氯浓度的漂白粉喷洒墙壁、空间及地面。将料棒移入经消毒后的冷却场地降至自然温度；

（5）接种：接种前对接种室经过严格清扫、消毒，可采用含二氧化氯400mg/L水溶液或含有效氯成分1%的漂白粉液进行喷洒消毒，接种箱和接种用具进行彻底清洗，接种箱和接种用具消毒选用气雾消毒剂4～8g熏蒸消毒30分钟左右；接种用具、菌棒外表处理及接种者双手应采用75%的酒精或0.2%高锰酸钾溶液擦洗消毒；消毒结束后就可以对菌棒进行打穴接种，用直径2cm的打孔棒在菌棒上打孔，每袋打2cm深孔穴4个，将菌种切成2.5×2.5cm左右的块状，塞入穴中，菌种接入略高出穴面，然后外套一层聚乙烯塑料袋进行封口；每一批接种完毕后，轻拿轻放，转移到培菌室，并及时清理接种箱内残留物，进行通风换气； 

（6）菌丝体培养管理：菌棒移入前要对培菌室进行清扫、杀虫、消毒处理，杀虫可采用80%敌敌畏乳油熏蒸，杀菌处理则采用用含二氧化氯400mg/L水溶液对墙面、地面、空间和用具进行喷洒，或用含2000mg/L浓度的二氧化氯，按40ml/m³用量熏蒸并密封24小时；将接好种的菌棒移入已经严格杀虫、消毒的培菌室内井字形堆放，堆高6-8层，进行菌丝体培养。菌丝培养大致可分以下三个时期：

萌发期：接种后第10天前温度控制在26-28℃，10-20天后室温控制在22-24℃左右，要经常检查注意堆温，堆温升高，要加大通风；

生长期：接种后20天后，温度宜控制在22℃左右，当白色菌丝体围绕接种孔生长到直径10cm-15cm时，去掉外层套袋以增氧通气，促进菌丝生长，同时进行翻堆，再过10-15天再次翻堆，淘汰感染杂菌的菌棒；

成熟期：接种后35-40天后，菌丝体逐渐进入生理成熟阶段，室温宜控制在20-22℃，主要通过开闭门窗进行通风调节，避免因温度过高造成烧菌。菌丝体长满袋后见有白色突起芝蕾时，在菌棒两端口剪2cm左右的口，促进子实体发育。此时即可进入芝棚；

（7）子实体阶段的管理：选择有水源、地势高、无污染的地方搭建芝棚。芝棚一般宽为6-8米，高2.5-3米的钢管或竹木结构的拱形棚，长度根据需要选择。棚膜选择白色膜，顶部搭一层黑色遮阳网。菌棒入棚前要严格杀虫、消毒；菌棒移入出芝棚进行排场时，将菌棒平摆在地面上，留出操作路，每两个菌棒间距离3―5厘米，中心填满富含腐殖质的菜园土，上覆1-2cm的细沙土，每天早晚各用微喷管间断喷雾状水1-2个小时，保持棚内相对湿度在85-95%，7-10天左右就可见灵芝子实体幼体芝蕾长出，当有多个芝蕾出现时，用消毒剪刀剪去一些，每个菌棒保存2―4个芝蕾，使营养集中供应，培育盖大朵厚的子实体。当菌盖边缘停止生长、菌盖下面长出棕红色担孢子时，说明子实体已成熟，此时即可采收。采收时，用小刀从菌柄中部以下切下，防止菌柄破裂，采摘后的灵芝摊晾干燥，或在低温55-60℃烘干。采收第1潮后，停水5-7天，待因采摘子实体造成的伤口愈合后，然后再间断喷水，保持相对湿度85%以上，进入下一潮子实体的生长发育阶段，以后均按此管理。

Claims (6)

1.一种富集DNJ成分的灵芝的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：其培养基质由下列重量份的原料组成：桑枝屑65-75、桑根屑10-20,、蚕沙1-10、桑叶粉1-10、麸皮1-10、棉籽粕1-5、蔗糖1-5、石膏粉1-5、石灰粉0.1-1、碳酸钙0.1-1；

（1）备料粉碎：选干燥无霉变的桑枝条、桑树根、桑叶、蚕沙经粉碎后备用，其它辅料要求新鲜、无霉变；

（2）主料预湿：对制菌棒用的桑枝屑、桑根屑提前按比例混匀，加水预湿；

（3）拌料装袋：预湿后的桑枝屑、桑根屑与蚕沙、桑叶粉、麸皮、棉籽粕、石膏粉、石灰粉、碳酸钙按配方比例充分混合均匀，蔗糖放入容器中加水溶解，然后逐渐加入进行搅拌，然后加水，边加边搅拌，含水量要求达到55%左右；将拌好的培养基料装入菌袋，扎紧袋口，制成菌棒；

（4）灭菌：将制好的菌棒在100℃常压下灭菌12-15小时，灭菌结束后等温度自然下降至60℃左右方可出锅，将料棒移入经清扫、消毒后的冷却场地降至自然温度； 

（5）接种：接种前对接种室经过严格清扫、消毒，接种箱和接种用具进行彻底清洗，接种箱和接种用具消毒选用气雾消毒剂4～8g熏蒸消毒30分钟左右；接种用具、菌棒外表处理及接种者双手应采用75%的酒精或0.2%高锰酸钾溶液擦洗消毒；消毒结束后就可以对菌棒进行打穴接种，及时在接好种的菌棒外进行套袋封口；接种完毕后，及时清理接种箱内残留物，进行通风换气； 

（6）菌丝体培养管理：将接好种的菌棒移入已经严格杀虫、消毒的培菌室内井字形堆放，堆高6-8层，进行菌丝体培养；接种后第8-10天温度控制在25℃左右，18-20天后室温控制在23℃左右，要经常检查注意堆温，堆温升高，要加大通风，当白色菌丝体围绕接种孔生长到直径12cm-15cm时，去掉外层套袋以增氧通气，促进生长；35-40天后，室温控制在20-22℃，菌丝体长满袋后见有白色突起芝蕾时可以在菌棒两端剪口，促进子实体发育，然后就可以移入出芝棚，进行排场；

（7）子实体阶段的管理：选择有水源、地势高、无污染的地方搭建芝棚，并严格杀虫、消毒后，菌棒就可移入出芝棚进行排场；排场时将菌棒平放在地面，菌棒间距3-5cm，填满富含腐殖质的菜园土，上覆1-2cm的细沙土，每天早晚各1-2个小时，利用微喷管间断喷雾状水，保持棚内相对湿度在85-95%左右，7天左右就可见灵芝子实体幼体芝蕾长出，用消毒的剪刀剪去过多的芝蕾，每棒保留芝蕾2-4个，灵芝子实体成熟后就可采收干制；采收第1潮后，停水5-7天，待因采摘子实体造成的伤口愈合后，然后再间断喷水，保持相对湿度85%以上，进入下一潮子实体的生长发育阶段的管理，以后均按此管理。

2.所述的一种富集DNJ成分的灵芝的培养方法，其特征在于，其培养基料由下列重量份的原料组成：桑枝屑72、桑根屑14、蚕沙3、桑叶粉3、麸皮2、棉籽粕2、蔗糖1、石膏粉1、石灰粉1、碳酸钙0.5。

3.所述的的一种富集DNJ成分的灵芝的培养方法，其特征在于步奏（1）选干燥无霉变的带皮桑枝条、桑树根经粉碎后成大小为0.2-0.5厘米左右的桑枝屑和桑根屑，桑叶干燥后粉碎成5-10目的桑叶粉，蚕沙经过筛选晒干粉碎后备用。

4.所述的的一种富集DNJ成分的灵芝的培养方法，其特征在于步奏（2）桑枝屑、桑根屑提前2天按比例混匀加水40%左右搅拌均匀后堆放，让料充分吸水预湿。

5.所述的的一种富集DNJ成分的灵芝的培养方法，其特征在于步奏（6）所述将接好种的菌棒移入已经严格杀虫、消毒的培菌室内井字形堆放，消毒采用含二氧化氯400mg/L水溶液对墙面、地面、空间和用具进行喷洒，或用含2000mg/L浓度的二氧化氯，按40ml/m³用量熏蒸并密封24小时。

6.所述的的一种富集DNJ成分的灵芝的培养方法，其特征在于培养基料中还包含有0.1-0.5重量份的含有铁、铜、锰、锌、钙、镁等元素的螯合态复合微肥。