CN104039790B

CN104039790B - 嘌呤衍生物及它们在治疗疾病中的应用

Info

Publication number: CN104039790B
Application number: CN201280064734.5A
Authority: CN
Inventors: E·布里亚尔; P·菲雷; A·莱奇纳; P·迈尔; B·拉德蒂奇; D·A·桑达姆; Y·朱
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2011-10-28
Filing date: 2012-10-26
Publication date: 2016-04-13
Anticipated expiration: 2032-10-26
Also published as: SG11201401716XA; CA2853256C; CA2853256A1; EP2771342B1; US20140336166A1; PL2771342T3; AU2012327954A1; CN104039790A; WO2013061305A1; EP2771342A1; EA023935B1; TN2014000175A1; KR20140090218A; EA201490888A1; AP2014007601A0; CL2014001049A1; BR112014009890A2; AU2012327954B2; CU20140048A7; ES2587533T3

Abstract

本发明涉及式(I)的PI3K抑制剂，其中所有变量如说明书中所定义，涉及它们的制备、它们的医药应用、特别是它们在治疗癌症和神经变性疾病中的应用、及包含它们的药物。

Description

嘌呤衍生物及它们在治疗疾病中的应用

发明领域

本发明涉及嘌呤衍生物及其可药用盐、其制备方法、其在治疗疾病中的应用、其单独或与至少一种另外的治疗剂和任选与可药用载体的组合在制备药物制剂中的应用、该药物制剂在治疗疾病中的应用和治疗所述疾病的方法，该方法包括对温血动物、尤其是人施用所述嘌呤衍生物。

发明背景

磷脂酰肌醇-3-激酶超家族包含4种不同的PI3K相关脂质或蛋白激酶。I、II和III类是脂质激酶，它们通过其底物特异性存在差别，而IV类PI3K(也称作PIKK)是蛋白激酶。I类磷脂酰肌醇3-激酶包括如下脂质激酶家族，它们催化磷酸向肌醇脂质的D-3’位置的转化，从而产生磷酸肌醇-3-磷酸(PIP)、磷酸肌醇-3,4-二磷酸(PIP₂)和磷酸肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP₃)，然后它们通过与含有血小板-白细胞C激酶底物同系、FYVE、Phox及其他磷脂-结合域的蛋白结合为通常位于质膜的各种信号复合体而在信号级联中作为第二信使((Vanhaesebroeck等人,Annu.Rev.Biochem70:535(2001)；Katso等人,Annu.Rev.CellDev.Biol.17:615(2001))。在两种1类PI3K中，1A类PI3K是由具有催化性的p110亚单位(α、β、δ同种型)和与之组成性结合的调节亚单位(可以是p85α、p55α，p50α，p85β或p55γ)组成的异源二聚体。1B类亚类具有一个家族成员，它是由具有催化性的p110γ亚单位与两个调节亚单位(p101或p84)之一组成的异源二聚体(Fruman等人,AnnuRev.Biochem.67:481(1998)；Suire等人,Curr.Biol.15:566(2005))。p85/55/50亚单位的调节域包括Src同源性(SH2)域，它与激活的受体和细胞质酪氨酸激酶上特定序列中的磷酸酪氨酸残基结合，导致1A类PI3K的激活和定位。1B类PI3K通过G蛋白-偶联受体直接激活，后者与肽和非肽配体的不同组成部分结合(Stephens等人,Cell89:105(1997))；Katso等人,Annu.Rev.CellDev.Biol.17:615-675(2001))。因此，得到的I类PI3K的磷脂产物与具有下游细胞活性的上游受体连接，所述活性包括增殖、存活、趋化性、细胞运输(cellulartrafficking)、运动性、代谢、炎性和过敏反应、转录以及翻译(Cantley等人,Cell64:281(1991)；Escobedo和Williams,Nature335:85(1988)；Fantl等人,Cell69:413(1992))。

在许多情况下，PIP2和PIP3募集Akt(病毒致癌基因v-Akt的人类同源物的产物)至质膜，在此其作为多种对于生长和存活非常重要的细胞内信号通路的节点(Fantl等人,Cell69:413-423(1992)；Bader等人,NatureRev.Cancer5:921(2005)；Vivanco和Sawyer,NatureRev.Cancer2:489(2002))。PI3K的异常调节(通常通过Akt的激活而增加存活)是在人类癌症中最普遍的事件之一，已经在多种水平上显示其存在。肿瘤抑制因子基因PTEN能够在肌醇环的3’位置上将磷酸肌醇磷脂脱磷酸化，并且籍此拮抗PI3K的活性，但在多种肿瘤中它被除去功能。在其他肿瘤中，p110α同种型(PIK3CA)的基因以及Akt的基因被扩增，它们的基因产物的蛋白表达的增加在各种人类癌症中已经得到证明。另外，用于上调p85-p110复合体的p85α的突变和易位在人类癌症中已有报道。此外，在PIK3CA中的能够激活下游信号通路的体细胞错义突变在多种人类癌症中都有广泛的报道(Kang等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA102:802(2005)；Samuels等人,Science304:554(2004)；Samuels等人,CancerCell7:561-573(2005))。这些观察结果显示磷酸肌醇-3激酶以及该信号通路的上游和下游成分的失调是与人类癌症和增生性疾病有关的最常见的失调之一(Parsons等人,Nature436:792(2005)；Hennessey等人,NatureRev.DrugDisc.4:988-1004(2005))。

雷帕霉素的哺乳动物靶标(mTOR)是IV类PI3K的成员。mTOR组装信号传导网，其转导营养信号和各种其他刺激以调节广泛的细胞功能，包括细胞生长、增殖、存活、自噬、各种类型的分化和代谢。在哺乳动物细胞中，发现mTOR蛋白在称作mTORC1和mTORC2的两种不同的实体中复合。mTORC1复合物，即与raptor结合的mTOR已经成为大量研究的物质。mTORC1整合输入的营养物和生长因子，且由此主要通过蛋白质合成调节剂例如4EBP1或RPS6负责细胞生长调节。mTORC1调节需要用于激活的PI3K和Akt活化，即mTORC1是PI3K途径的效应物。已经证实mTOR在结合入mTOR复合物2(mTORC2)时负责通过使S473磷酸化来活化Akt(Akt1编号)(Sarbassov等人,Science307:7098(2005))。因此，mTORC2被视为Akt的上游激活物。令人感兴趣的，mTOR由此可以被视为重要的Akt上游和下游。mTOR催化抑制由此可以代表通过确定上游和下游效应物寻求极为强烈的阻断PI3K-Akt途径的独特方式。

还证实了mTOR抑制与自噬之间的相关性(Ravikumar等人,NatGenet.36(6):585-95(2004))。自噬对神经元动态平衡是必需的且其功能障碍与神经变性相关。神经元中自噬缺失导致小鼠神经变性疾病(Komatsu等人,Nature441:880-4(2006)；Hara等人,Nature441:885-9(2006))，这启示自噬在维持神经元中蛋白质动态平衡中的关键作用。神经变性疾病的特征在于包含错折叠蛋白作为标志之一。诱导自噬促进错折叠蛋白清除且由此提出将其作为神经变性蛋白病的疗法。

亨廷顿病(HD)是常染色体显性神经变性疾病，其中编码亨廷顿(Htt)蛋白的IT15基因突变导致Htt的Exon1上聚谷氨酰胺伸展。这种突变型Htt蛋白的胞内聚集和脑萎缩(特别是皮质和纹状体)是HD的主要标志。它在临床上除导致精神障碍和体重减轻外还导致运动失调和认知功能障碍。

抑制mTOR在HD体外和体内模型中诱导自噬和减少突变型Htt聚集和突变型Htt-介导的细胞死亡(Ravikumar等人,NatGenet.36(6):585-95(2004))。mTOR抑制由此为HD的药物干预和作为HD特征的受到破坏的细胞进程调节提供了机会。

鉴于上述观点，认为mTOR抑制剂在治疗增殖性疾病和其他障碍、特别是HD中是有价值的。

本发明涉及具有mTOR抑制活性的新的嘌呤衍生物、其制备方法、医疗用途和包含它们的药物。

发明概述

在第一个方面中，本发明涉及式(I)化合物或其可药用盐，

其中

R¹选自

其中

R¹⁸每次出现时独立地表示氟或甲基；

m表示0、1、2或3；

R¹⁹和R²⁰独立地表示氢或氟；

R²¹表示氟；

R²²每次出现时独立地表示氟、甲氧基、羟基甲基或甲氧基羰基；

q表示0、1或2且r表示0、1、2或3，条件是q+r不是0；

R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸和R⁹独立地表示氢、C_1-3烷基或氟代-C_1-3烷基；或R³和R⁶一起形成亚甲基桥；或R³和R⁸一起形成亚乙基桥；或R⁵和R⁶一起形成亚乙基桥；

n和p独立地表示0、1或2；

R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶和R¹⁷每次出现时独立地表示氢、C_1-3烷基、氟代-C_1-3烷基或羟基-C_1-3烷基；或R¹¹和R¹⁶一起形成亚乙基桥；或R¹³和R¹⁴一起形成亚乙基桥；或R¹⁴和R¹⁵与它们所连接的碳原子一起连接形成四氢吡喃基环；且

Y表示O、CHR²³、CR²⁴R²⁵或NR²⁶,

其中

R²³表示羟基或氟代-C_1-3烷基；或R²³和R¹³与它们所连接的碳原子一起连接形成稠合的四氢呋喃基环；

R²⁴和R²⁵独立地表示氢或卤素；或R²⁴和R²⁵与它们所连接的碳原子一起连接形成四氢吡喃基环；且

R²⁶表示C_1-3烷基或氧杂环丁基；

以及

选下以下所列的化合物的化合物或其可药用盐:

8-(1H-吲哚-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-2-[1,4]氧杂氮杂环庚-4-基-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-2-(3-丙基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

8-[8-(1H-吲哚-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-2-基]-8-氮杂-二环[3.2.1]辛-3-醇；

2-(3-乙基-吗啉-4-基)-8-(1H-吲哚-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-2-(6-氧杂-2-氮杂-螺[3.5]壬-2-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-2-(4-氧杂环丁烷-3-基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-2-(四氢-呋喃并[3,4-c]吡咯-5-基)-9H-嘌呤；

2-(六氢-呋喃并[3,4-c]吡啶-5-基)-8-(1H-吲哚-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-2-(3-异丙基-吗啉-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-2-(4-三氟甲基-哌啶-1-基)-9H-嘌呤；

2-(2,6-二甲基-吗啉-4-基)-8-(1H-吲哚-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-2-(7-氧杂-1-氮杂-螺[3.5]壬-1-基)-9H-嘌呤；

{4-[8-(1H-吲哚-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-2-基]-吗啉-2-基}-甲醇；和

{4-[8-(1H-吲哚-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-2-基]-吗啉-2-基}-甲醇。

定义

本文所用的术语“卤素”或“卤代”是指氟、氯、溴和碘。

本文所用的术语“C_1-3烷基”是指具有至多3个碳原子的完全饱和支链或非支链烃基团。有代表性的C_1-3烷基实例包括甲基、乙基、正丙基和异丙基。

本文使用的术语“羟基-C_1-3烷基”是指被一个羟基取代的如上文定义的C_1-3烷基。羟基-C_1-3烷基代表性的实例包括但不限于羟基-甲基、2-羟基-乙基、2-羟基-丙基和3-羟基-丙基。

本文使用的术语“氟代-C_1-3烷基”是指被一个或多个氟基团取代的如上文定义的C_1-3烷基。氟代-C_1-3烷基的实例包括三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基和3,3-二氟丙基。

除非上下文中另有指示或有清楚的相反说明，否则本文所用的单数形式的术语、“所述”和本发明上下文中(尤其是权利要求上下文中)使用的类似术语应视为覆盖单数和复数。本文提供的任意和所有实施例或示例性语言(如“例如”)的应用仅用于更好地阐明本发明，而不对另外请求保护的本发明的范围作出限定。

术语“本发明化合物”(除非另外具体指明)是指式(I)化合物、实施例的各化合物、所述化合物的可药用盐和/或所述化合物的水合物或溶剂合物以及所有的立体异构体(包括非对映异构体和对映体)、互变体和同位素标记的化合物(包括氘)。术语“本发明的活性剂”旨在具有与“本发明化合物”相同的意义。

本文使用的术语“抑制”指减少或压制给定病症、症状或障碍或疾病，或者指显著减少生物活性或过程的基线活性。

本文使用的术语“异构体”是指具有相同的分子式但是原子排列和结构不同的不同化合物。同样，本文使用的术语“光学异构体”或“立体异构体”是指给定的本发明化合物可能存在的各种立体异构体，包括几何异构体。应当理解，取代基可以连接在碳原子的手性中心上。术语“手性”是指与其镜像分子对具有不重叠性的分子，而术语“非手性”是指与其镜像分子对具有可重叠性的分子。因此，本发明包括化合物的对映异构体、非对映异构体或外消旋体。“对映异构体”是一对立体异构体，它们彼此的镜像是不可重叠的。一对对映异构体的1:1的混合物为“外消旋”混合物。如果适当的话，该术语用于指外消旋混合物。“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子的立体异构体，但是它们彼此不为镜像。绝对立体化学可以根据Cahn-Ingold-PrelogR-S系统规定。当化合物为纯的对映体时，每个手性碳处的立体化学可以指定为R或S。绝对构型未知的拆分了的化合物可以根据它们在钠D线波长处使得平面偏振光旋转的方向(右旋或左旋)而指定为(+)或(-)。本文中所述某些化合物包含一或多个不对称中心或轴，因此可以产生对映异构体、非对映异构体以及根据绝对立体化学定义为(R)-或(S)-的其它立体异构形式。

本文使用的术语“可药用载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣材料、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、增甜剂、矫味剂、染料等以及它们的组合，它们是那些本领域的技术人员众所周知的(参见，例如，雷明顿药物科学(Remington'sPharmaceuticalSciences),第18版,MackPrintingCompany,1990,第1289-1329页)。除了与活性成分不相容的那些常规载体外，其他常规载体均可以用于治疗或药物组合物中。

本文使用的术语任何具体疾病或障碍的“预防”是指在疾病或障碍的任何症状变得明显之前向个体施用本发明化合物。

本文使用的术语“盐”是指本发明化合物的酸加成盐。“盐”特别包括“可药用的盐”。术语“可药用的盐”是指能够保持本发明化合物的生物学有效性和性能的盐，它们通常不是生物学或其它方面所不可用的。

本文使用的术语“个体”是指动物。所述动物通常为哺乳动物。个体也是指例如灵长类(例如人类，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、犬、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，所述个体为灵长类。在另一个实施方案中，所述个体为人类。

本文中使用的“需要”治疗的个体是指通过所述治疗所述个体在生物学上、医学上或生活质量方面能够受益。

术语本发明化合物的“治疗有效量”是指能够引起个体的生物学或医学响应的本发明化合物的量，所述响应例如降低或抑制酶或蛋白质的活性，或者改善症状、减轻障碍、阻碍或延迟疾病进展或预防疾病等。在一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指当施用于个体时能够有效地发挥下列作用的本发明化合物的量：(1)至少部分减轻、抑制、预防和/或改善(i)由mTOR介导的或(ii)与mTOR有关的或(iii)其特征在于mTOR活性(正常或异常)的病症、障碍或疾病；或(2)降低或抑制mTOR的活性。在另一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指，当施用给细胞或组织或非细胞生物材料或介质时，能够有效地至少部分地降低或抑制mTOR活性的本发明化合物的量。上面mTOR的实施方案中所描述的术语“治疗有效量”的意义也可以以相同的意义应用于其它相关蛋白/肽/酶，诸如IV类PI3K。

在一个实施方案中，本文使用的术语任何疾病或障碍的“治疗”是指缓解疾病或障碍(即减缓或中止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施方案中，“治疗”是指调节疾病或障碍，包括机体上的(例如稳定可识别症状)、生理学上的(例如稳定机体参数)，或者它们两者。

发明详述

本发明提供了可用于治疗或预防通过抑制mTOR调节的疾病、病症和/或障碍的化合物及其药物制剂。

实施方案1:如上文所述的式(I)化合物或其可药用盐。

实施方案2:式(I)化合物或其可药用盐：

其中

R¹选自

其中

R¹⁸每次出现时独立地表示氟或甲基；

m表示0、1、2或3；

R¹⁹和R²⁰独立地表示氢或氟；

R²¹表示氟；

q表示0、1或2且r表示0、1、2或3，条件是q+r不是0；

n和p独立地表示0、1或2；

Y表示O、CHR²³、CR²⁴R²⁵或NR²⁶,

其中

R²⁶表示C_1-3烷基或氧杂环丁基。

实施方案3:依据实施方案1或实施方案2的化合物或其可药用盐，其中R¹表示

实施方案4:依据实施方案3的化合物或其可药用盐，其中m表示0。

实施方案5:依据实施方案1或实施方案2的化合物或其可药用盐，其中R¹表示

实施方案6:依据实施方案5的化合物或其可药用盐，其中R¹⁹和R²⁰均表示氢。

实施方案7:依据实施方案1或实施方案2的化合物或其可药用盐，其中R¹表示

实施方案8:依据实施方案7的化合物或其可药用盐，其中q表示0或1，且r表示0、1或2。

实施方案9:依据实施方案1至8中的任意一项的化合物或其可药用盐，其中R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸和R⁹独立地表示氢或甲基；或R³和R⁶一起形成亚甲基桥；或R³和R⁸一起形成亚乙基桥；或R⁵和R⁶一起形成亚乙基桥。

实施方案10:依据实施方案1至9中的任意一项的化合物或其可药用盐，其中Y表示O。

实施方案11:依据实施方案1至9中的任意一项的化合物或其可药用盐，其中Y表示CHR²³或CR²⁴R²⁵。

实施方案12:依据实施方案1的化合物或其可药用盐，其选自:

2,6-双-(3-甲基-吗啉-4-基)-8-吡啶-2-基-9H-嘌呤；

2-(3-甲基-吗啉-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-8-(1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤；

8-[4-(1H-咪唑-2-基)-苯基]-2,6-双-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

8-(6-氟-1H-吲哚-4-基)-2-(3-甲基-吗啉-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

{4-[2,6-双-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-1H-吲哚-6-基}-甲醇；

2-(3-甲基-吗啉-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-8-吡啶-2-基-9H-嘌呤；

2,6-双-(3-甲基-吗啉-4-基)-8-吡啶-2-基-9H-嘌呤；

2,6-二-吗啉-4-基-8-吡啶-2-基-9H-嘌呤；

2,6-双-(3-甲基-吗啉-4-基)-8-(1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤；

{4-[8-(1H-吲哚-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-2-基]-吗啉-2-基}-甲醇；

5-[2,6-双-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-吡啶-2-基胺；

5-[2,6-双-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-嘧啶-2-基-胺；

8-[4-(1H-咪唑-2-基)-苯基]-2,6-双-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

8-(6-甲氧基-1H-吲哚-4-基)-2-(3-甲基-吗啉-4-基)-6-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

4-[2,6-双-(3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯；及其可药用盐。

实施方案12:依据实施方案1的化合物或其可药用盐，其选自:

2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-吡啶-2-基-9H-嘌呤；

2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-(1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-2-[1,4]氧杂氮杂环庚-4-基-9H-嘌呤；

8-[4-(1H-咪唑-2-基)-苯基]-2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

8-(6-氟-1H-吲哚-4-基)-2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

{4-[2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-1H-吲哚-6-基}-甲醇；

2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-吡啶-2-基-9H-嘌呤；

2,6-双-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-吡啶-2-基-9H-嘌呤；

2,6-二-吗啉-4-基-8-吡啶-2-基-9H-嘌呤；

2,6-双-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-(1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤；

2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-(1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-2-((R)-3-丙基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

8-[8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-2-基]-8-氮杂-二环[3.2.1]辛-3-醇；

2-((R)-3-乙基-吗啉-4-基)-8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-2-(6-氧杂-2-氮杂-螺[3.5]壬-2-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-2-(4-氧杂环丁烷-3-基-哌嗪-1-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-2-(四氢-呋喃并[3,4-c]吡咯-5-基)-9H-嘌呤；

2-(六氢-呋喃并[3,4-c]吡啶-5-基)-8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-2-((R)-3-异丙基-吗啉-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-2-(4-三氟甲基-哌啶-1-基)-9H-嘌呤；

2-((2S,6R)-2,6-二甲基-吗啉-4-基)-8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-2-(7-氧杂-1-氮杂-螺[3.5]壬-1-基)-9H-嘌呤；

{(S)-4-[8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-2-基]-吗啉-2-基}-甲醇；

{(R)-4-[8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-2-基]-吗啉-2-基}-甲醇；

5-[2,6-双-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-吡啶-2-基胺；

5-[2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-吡啶-2-基胺；

5-[2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-嘧啶-2-基-胺；

8-[4-(1H-咪唑-2-基)-苯基]-2,6-双-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

8-(6-甲氧基-1H-吲哚-4-基)-2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

4-[2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯；及

其可药用盐。

由于式(I)化合物中可能存在一或多个不对称碳原子，所以相应的式(I)化合物可能以纯的光学活性形式或光学异构体混合物形式存在，例如外消旋混合物形式。所有所述纯光学异构体及其所有混合物(包括外消旋混合物)均为本发明的组成部分。

根据选择的原料和工艺方法，所述化合物可以以可能的异构体形式之一存在，或者以其异构体混合物的形式存在，例如作为纯光学异构体或异构体混合物，例如根据不对称碳原子的数目，为外消旋体和非对映异构体混合物。本发明应当包括所有此类可能存在的异构体，包括外消旋混合物、非对映异构体混合物和光学纯形式。光学活性的(R)-和(S)-异构体可以采用手性合成子或手性试剂制备，或者采用常规技术拆分。如果所述化合物含有双键，则取代基可以是E或Z构型。如果所述化合物含有二取代的环烷基，则该环烷基取代基可以为顺式-或反式-构型。如果本文中绘制的包含一个或多个手性中心的化合物结构中绘制了所述的立体化学，则意欲表示单独的光学异构体。如果本文中绘制的包含一个或多个手性中心的化合物结构中没有绘制所述的立体化学，则不意欲表示一个特定的旋光异构体，且绘制的化学结构可表示任何旋光异构体或具有该结构的异构体的混合物，例如外消旋混合物或非对映异构体混合物。

在一个实施方案中提供了作为分离的立体异构体的实施例化合物，其中所述化合物具有一个立构中心，且所述立体异构体为R构型。

在一个实施方案中提供了作为分离的立体异构体的实施例化合物，其中所述化合物具有一个立构中心，且所述立体异构体为S构型。

在一个实施方案中提供了作为分离的立体异构体的实施例化合物，其中所述化合物具有两个立构中心，且所述立体异构体为RR构型。

在一个实施方案中提供了作为分离的立体异构体的实施例化合物，其中所述化合物具有两个立构中心，且所述立体异构体为RS构型。

在一个实施方案中提供了作为分离的立体异构体的实施例化合物，其中所述化合物具有两个立构中心，且所述立体异构体为SR构型。

在一个实施方案中提供了作为分离的立体异构体的实施例化合物，其中所述化合物具有两个立构中心，且所述立体异构体为SS构型。

在一个实施方案中提供了实施例的化合物，其中所述化合物具有一个或两个立构中心，为外消旋混合物。

本发明的中间体和化合物也可能存在不同的互变异构形式，所有此类形式均包含在本发明的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指不同能量的结构异构体，它们可以通过较低的能量屏障即可互相转化。例如，质子互变异构体(也称为质子异变互变异构体)包括通过质子迁移的相互转化，例如酮-烯醇和亚胺-烯胺的异构化。质子互变异构体的具体示例是其中质子可以在两个环氮原子之间迁移的咪唑部分。化合价互变异构体包括通过某些结合电子重排的相互转化。

由于存在氨基或类似基团，本发明化合物能够形成酸盐。

在一个实施方案中，本发明涉及游离形式的本文所定义的式(I)化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及盐形式的本文所定义的式(I)化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及酸加成盐形式的本文所定义的式(I)化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及可药用的盐形式的本文所定义的式(I)化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及可药用的酸加成盐形式的本文所定义的式(I)化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及游离形式的任何一种实施例化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及盐形式的任何一种实施例化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及酸加成盐形式的任何一种实施例化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及可药用的盐形式的任何一种实施例化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及可药用的酸加成盐形式的任何一种实施例化合物。

可药用的酸加成盐可以采用无机酸和有机酸形成，例如乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐(chlortheophyllonate)、柠檬酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。

可制备盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。

可制备盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。

本发明的可药用的盐可以通过常规化学法自酸性部分合成。通常，此类盐可以通过使得这些化合物的游离碱形式与化学计算量的适当的酸反应而制备。此类反应通常在水或有机溶剂中或者在它们两者的混合物中进行。通常，如果适用的话，最好采用非水介质，如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。其它适当的盐的目录可以参考例如“雷明顿药物科学(Remington'sPharmaceuticalSciences)”、第20版、MackPublishingCompany、Easton、Pa.,(1985)；和“药用盐手册：性质、选择和使用(HandbookofPharmaceuticalSalts:Properties、Selection、andUse)”，StahlandWermuth(Wiley-VCH、Weinheim、德国、2002)。

另外，本发明化合物(包括其盐)也可以以其水合物的形式获得，或者包含用于其结晶的其它溶剂。本发明化合物由于自身特性可以或者通过设计可以与可药用的溶剂(包括水)形成溶剂化物；因此，本发明应当包括溶剂化物和非溶剂化物两种形式。术语“溶剂化物”是指由本发明化合物(包括其可药用的盐)与一或多个溶剂分子形成的分子复合物。此类溶剂分子是那些制药领域中常用的，已知它们对于受体是无害的，例如水、乙醇等。术语“水合物”是指其中溶剂分子为水的复合物。

含有能够作为氢键供体和/或受体的基团的本发明化合物(即式(I)化合物)能够与适当的共结晶形成剂形成共结晶(co-crystal)。这些共结晶可以根据已知的共结晶形成方法制备自式(I)化合物。所述方法包括研磨、加热、共升华、共融，或者在结晶条件下使得式(I)化合物与共结晶形成剂在溶液中接触，然后分离由此形成的共结晶。适当的共结晶形成剂包括那些描述于WO2004/078163中的形成剂。因此，本发明还提供了含有式(I)化合物的共结晶。

本发明化合物(包括其盐、水合物和溶剂化物)自身可以或者通过设计可以形成多晶形物。

本文中给出的任何分子式也应当代表化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有本文所给出的分子式所表述的结构，但是一或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子所替代。可以掺入本发明化合物中的同位素的示例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别例如²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸F、³¹P、³²P、³⁵S、³⁶Cl、¹²⁵I。本发明应当包括本文所定义的各种同位素标记化合物，例如那些其中存在放射性同位素(例如³H和¹⁴C)的化合物或非放射性同位素(例如²H和¹³C)的化合物。所述同位素标记化合物可以用于代谢研究(采用¹⁴C)、反应动力学研究(采用例如²H或³H)、检测或成像技术(例如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)，包括药物或底物组织分布研究，或者用于患者的放射治疗。尤其特别的是，¹⁸F标记化合物可以特别令人满意地用于PET或SPECT研究。同位素标记的式(I)化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规方法制备，或根据下面实施例和制备方法中所述类似工艺，采用适当的同位素标记试剂代替以前使用的非标记试剂制备。

另外，由于其具有较好的代谢稳定性，采用较重同位素(特别是氘(即²H或D))的取代可以提供一定的治疗上的益处，例如增加体内半衰期或降低剂量需要或者改善治疗指数。应当理解，在本文中，氘被视为是式(I)化合物的取代基。所述较重同位素(特别是氘)的浓度可以根据同位素富集因子定义。如本文使用的术语“同位素富集因子”是指指定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比例。如果本发明化合物中的取代基用氘表示，则该化合物中每个指定氘原子的同位素富集因子为至少3500(每个指定氘原子52.5％的氘掺入)、至少4000(60％的氘掺入)、至少4500(67.5％的氘掺入)、至少5000(75％的氘掺入)、至少5500(82.5％的氘掺入)、至少6000(90％的氘掺入)、至少6333.3(95％的氘掺入)、至少6466.7(97％的氘掺入)、至少6600(99％的氘掺入)或至少6633.3(99.5％的氘掺入)。

本发明的可药用的溶剂化物包括其中结晶溶剂是同位素取代的溶剂的那些，例如D₂O、d₆-丙酮、d₆-DMSO。

本发明化合物可以根据包含化学领域中众所周知的类似工艺的合成路线合成，特别是根据本文说明书中所述路线合成。原料通常可以获自商业途径，例如Sigma-Aldrich，或者可以采用本领域技术人员所熟知的方法容易地制备(例如，下列文献中描述的通用方法：LouisF.Fieser和MaryFieser、有机合成试剂、第1－19卷、Wiley、纽约(1967－1999ed.)，或BeilsteinsHandbuchderorganischenChemie、4、Aufl.ed.Springer-Verlag、Berlin、包括附录(也可以通过Beilstein在线数据库获得)。

在进一步的方面，本发明涉及制备游离形式或可药用盐形式的式(I)化合物的方法，其包括

(a)将式(II)化合物

其中Y、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、n和p如对式(I)所定义，与式(III)、(IV)或(V)的化合物反应

其中R¹如对式(I)所定义，或

(b)将式(VI)化合物

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸和R⁹如对式(I)所定义，且Hal表示卤素、例如氯，与式(VII)化合物反应

其中Y、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、n和p如对式(I)所定义，且

(c)将获得的化合物进行任选的还原、氧化或其它官能团化反应，

(d)裂解存在的任何保护基团，

(e)回收如此获得的游离形式或可药用盐形式的式(I)化合物，

(f)任选将光学活性异构体的混合物分离为它们的单独的光学活性异构体形式。

所述反应可以根据常规方法进行。例如，上文步骤(a)中描述的反应可在适合的金属催化剂例如Pd(PPh₃)₄或PdCl₂(dppf)、任选的适合的碱例如氟化铯、适合的溶剂例如甲苯或NEt₃、乙腈/水的存在下、并在适合的温度、例如90至150℃进行。

上文步骤(b)中描述的反应可在适合的碱例如DIPEA、适合的溶剂例如1-丁醇的存在下、并在适合的温度、例如70至90℃进行。

式(I)化合物的其它任选的还原、氧化或其它官能团化反应可以根据本领域技术人员众所周知的方法实施。

在本文范围内，除非本文中另有说明，只有并非本发明特定需要的终产物的构成部分的、易于除去的基团才被指定为“保护基团”。通过此类保护基团对官能团的保护、保护基团本身及其裂解反应描述于例如标准参考著作，例如J.F.W.McOmie、“有机化学中的保护基团(ProtectiveGroupsinOrganicChemistry)”、PlenumPress、LondonandNewYork1973；T.W.Greene和P.G.M.Wuts、“有机合成中的保护基团(ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis)”、第三版、Wiley、纽约1999；“肽(ThePeptides)”；第3卷(编者:E.Gross和J.Meienhofer)、AcademicPress、LondonandNewYork1981；“MethodenderorganischenChemie(有机化学方法)”、HoubenWeyl、第4版、第15/I卷、GeorgThiemeVerlag、Stuttgart1974；H.-D.Jakubke和H.Jeschkeit、“Peptide、Proteine(氨基酸，肽，蛋白质)”、VerlagChemie、Weinheim、DeerfieldBeach和Basel1982。保护基团的特征在于它们易于被除去(即不会发生不需要的二级反应)，例如通过溶剂分解、还原、光解或在生理学条件下(例如通过酶裂解)除去。

具有至少一个盐形成基团的本发明化合物的盐可以根据本领域技术人员已知的方法制备。例如，本发明化合物的酸加成盐可以通过常规方法获得，例如采用酸或适当的阴离子交换试剂处理所述化合物。

盐可以根据本领域技术人员已知的方法转化为游离化合物。酸加成盐可以例如通过采用适当的碱性试剂处理而转化。

任何获得的异构体混合物可以根据成分的物理化学性质的不同而分离为纯的或基本上纯的几何或光学异构体、非对映异构体、外消旋体，例如通过色谱和/或分步结晶的方法分离。

对于那些含有不对称碳原子的化合物，化合物可以单独的光学活性异构体形式存在，或者是以其混合物的形式存在，例如外消旋体和非对映异构体混合物。非对映异构体混合物可以通过本领域技术人员已知的方法根据其物理化学性质的不同而分离为其单独的非对映异构体，例如通过色谱和/或分步结晶的方法分离。对映异构体可以通过将对映体混合物转化为非对映体混合物而分离，采用与适当的光学活性化合物(例如手性助剂，如手性醇或Mosher酰氯)的反应，分离非对映异构体并将单独的非对映异构体转化(例如水解)为相应的纯对映异构体。对映异构体也可以通过采用获自商业的手性HPLC柱分离。

本发明还包括本方法的任何变通方法，其中可以采用反应成分的盐形式或光学纯材料。本发明化合物和中间体也可以根据本领域技术人员公知的方法彼此转化。

为了说明性的目的，下面描述的反应流程提供了本发明化合物以及关键中间体的可能的合成路线。为了更详细地描述各个反应步骤，可以参见下面的实施例章节。本领域技术人员应当理解，其它合成路线也可以用于合成本发明化合物。尽管在下面的流程和讨论中描述了具体的原料和试剂，然而也可以容易地替换为其它原料和试剂以获得多种衍生物和/或反应条件。另外，通过下述方法制备的多种化合物可以根据本公开采用本领域技术人员公知的常规化学方法进一步修饰。

流程1.合成嘌呤化合物的通用方法1

通常，可以根据流程1在四个步骤中由商购可得的物质(VIII)作为原料制备式(I)化合物。关于如上所示的流程中的各单独的步骤，步骤1包括通过用亲核试剂例如官能团化的吗啉代中间体(IX)替代氯来制备中间体(X)。可以通过使中间体(X)与中间体(VII)在足量碱例如二异丙基乙胺、溶剂例如二甲基乙酰胺的存在下、并加热进行反应来制备中间体(XI)。步骤3包括使用在适合的溶剂诸如二氯甲烷中的溴将中间体(XI)溴化为中间体(II)。通过使用金属催化剂(最常见的实例是商购可得的钯复合物)将中间体(II)与多种商购可得的或合成的结构(III)或(IV)的硼酸或酯或式(V)的三丁基锡烷基衍生物进行偶联可以制备式(I)目标化合物。

流程2.合成嘌呤化合物的通用方法2

通常，可以根据流程2在四个步骤中由商购可得的物质(VIII)作为原料制备式(I)化合物。关于如上所示的流程中的各单独步骤，步骤1包括通过使用亲核试剂诸如式(IX)的官能团化的吗啉代中间体替代氯来制备中间体(X)。中间体(XII)可以通过在适合的溶剂诸如二氯甲烷的存在下溴化中间体(X)来制备。步骤3包括使用金属催化剂(最常见的实例是商购可得的钯复合物)将中间体(XII)与多种商购可得的或合成的结构(III)或(IV)的硼酸或酯或式(V)的三丁基锡烷基衍生物进行偶联。可以通过在足量碱诸如二异丙基乙胺、溶剂诸如二甲基乙酰胺的存在下、并加热或在微波辐照下用官能团化的吗啉代中间体(VII)处理中间体(XIII)来制备式(I)的目标化合物。

流程3.合成烃基硼酸酯的通用方法

可以根据流程3在一个步骤中制备式(IV)的硼酸酯，其中R¹如对式(I)中所述。所述步骤包括在商购可得的钯催化剂、溶剂诸如二噁烷的存在下、并在80℃至120℃的范围的温度将式(XIV)的取代的芳基溴或杂芳基溴与联硼酸频哪醇酯(bis(pinacolato)diboron)进行反应。

本发明还包括本发明方法的任何变型，其中反应组分以它们的盐或旋光纯物质形式使用。本发明化合物和中间体还可以根据本领域技术人员公知的方法相互转化。

游离形式或可药用盐形式的式(I)的化合物、下文通常称作“本发明的活性剂”在体外测试时显示有价值的药理学特性且由此可以用于药物中、疗法中的或用作研究化学品，例如用作工具化合物。

本发明的活性剂是mTOR的抑制剂。本发明化合物对mTOR的抑制特性可以在如下文所述的试验中评价。

生物学试验

试验1:基于用于重组人mTOR的TR-FRETmTORATP-结合试验

1.在384-孔“主培养板(masterplate)”中在90％DMSO中进行化合物的8-点系列稀释(10mM储备溶液)，并将50nL转移至384-孔测定板(白色聚苯乙烯小容量；Matrix/ThermoScientific目录号#4365)。

2.该试验的最终体积为10μL，添加次序如下:

50nL化合物稀释液；

GST-mTOR与有或没有PI3K/mTOR抑制剂PI-103(3-(4-(4-吗啉基)吡啶并[3′,2′:4,5]呋喃并[3,2-d]嘧啶-2-基)苯酚，Calbiochem)的铕抗-GST抗体的5μL混合液；

5μL示踪剂-314。

在室温温育60分钟。

在以下条件下在BiotekSynergy2读板器测定TR-FRET：

激发340nm/发射665nm

激发340nm/发射620nm

测定缓冲液由50mMHEPESpH7.5、5mMMgCl2、1mMEGTA、0.01％PluronicF-127组成。示踪剂-314(Alexa647-标记的ATP-竞争性激酶抑制剂；目录号PV6087)、铕抗-GST抗体(目录号PV5594)和N-端GST-标记的截短的人mTOR(FRAP1)(目录号PV4754)从Invitrogen获得。

使用以下的最终浓度:

3nMGST-mTOR；

1nM铕抗-GST抗体；

+/-10μMPI-103；且

10nM示踪剂-314。

稀释化合物的最终浓度为9091；2730；910；273；91；27；9；和3nM。DMSO的最终浓度是0.45％

使用以下的对照:

高信号:溶剂介质、GST-mTOR、Eu-抗-GST抗体、示踪剂-314；

低信号:溶剂介质、GST-mTOR、Eu-抗-GST抗体、PI-103、示踪剂-314。

3.IC₅₀测定可如下进行:

用在340/620处的原始信号除以在340/665处的原始信号得到发射比例(emissionratio)。

将发射比例转化为各化合物浓度的抑制百分比。通过将S形剂量-效应曲线拟合至试验读数相对化合物浓度的图来计算IC₅₀值。使用XLfit4程序(IDBusinessSolutions,Guildford,UK)进行所有的拟合和分析。

试验2:细胞mTOR试验

在源自缺乏TSC1(TuberosclerosisComplex1，mTOR激酶活性的强效抑制基因)的小鼠的MEF(小鼠胚胎成纤维细胞)细胞中进行基于细胞的试验(384-孔模式)，用于测定化合物对细胞mTOR激酶的活性。由于缺乏TSC1，mTOR激酶被组成性激活，导致S6激酶1(S6K1)的Thr389(为mTOR的下游靶点之一)的持久增加的磷酸化(KwiatkowskiD.J.,ZhangH.,BanduraJ.L.等(2002)]。TSC1的小鼠模型显示肝血管瘤的性别依赖的致死性，和在TSC裸细胞中的p70S6激酶活性的向上调节。Hum.Mol.Gen.11:525-534)。

第0天:

细胞接种:在补充有10％热灭活FCS和2％Hepes的DMEM高葡萄糖培养液中培养亚融合的TSC1-/-MEF。将mTOR在这些细胞中组成性激活，造成p70S6激酶的持久增加的磷酸化。通过胰蛋白酶消化收获细胞，再混悬于生长培养基中，计数，并调节至133,333细胞/ml。使用Multidrop装置(Thermoscientific)向384孔-板中每孔加入30μl，得到4000细胞/孔。将板在37℃/5％CO₂的条件下温育20小时(使得沉降并粘附于表面)。

第1天:

化合物处理:在90％DMSO中制备测试-化合物的八个3-倍系列稀释(在1.8mM开始)，并安排在384孔主培养板(Greiner)中。将pan-pPI3K/mTOR抑制剂(0.8mM在90％DMSO中的8-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-3-甲基-1-(4-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-苯基)-1,3-二氢-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮)加入各孔中作为低对照(lowcontrol)。将90％DMSO加入各孔中作为高对照(highcontrol)。转移250nl(Hummingbird)化合物至384孔-聚丙烯微孔板(化合物板)中。用Multidrop将50μl生长培养基加入化合物板中(稀释1:200)。震荡后(2000rpm，1分钟)，用MatrixPlateMate2x3移液器将10μl第一次稀释液转移至细胞板(最终稀释1:4)。处理1小时后，将培养基从板中除去，并将20μlSurefire裂解缓冲液用Multidrop加入每孔中。

Surefire测定:将细胞裂解物冷冻15分钟，振荡解冻，并转移至实验的384孔-Proxiplate(5μl/孔)中，用于P-P70S6K(T389)Surefire测定(PerkinElmer#TGR70S50)。第一批混合液由反应缓冲液(含特异性抗体)、激活缓冲液和受体小珠组成(分别为40体积、10体积和1体积)。使用SPE工作站(CaliperLifeSciences)以5μl/孔将其加入裂解物中，并在室温在振荡下温育2小时。该温育时间后，用相同的装置将稀释缓冲液和供体小珠(分别为20体积和1体积)的第二批混合液加入板中(2μl/孔)。2小时后，可以用MultilabelReader(PerkinElmer)读取该板。由于小珠为光敏的，它们的转移和温育在暗室中进行(绿光)。

第2天:

数据分析:使用原始数据以得到测试化合物的剂量响应曲线，并由此计算IC₅₀值。

试验3：自噬试验

自噬是能够使氨基酸和脂肪酸再循环的溶酶体隔室中降解散状胞质溶胶的分解代谢途径。自噬的关键调节剂之一是雷帕霉素的哺乳动物靶标(mTOR)，即保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，当营养物、生长因子和能量可得到时它抑制自噬过程的启动。为了对mTOR抑制剂诱导的自噬定量，我们使用mCherry-GFP-LC3报道分子，它易于将逆转录病毒递送入哺乳动物细胞、稳定表达和通过荧光显微镜检查分析。

mCherry-GFP-LC3受体

如下显示了mCherry-GFP-LC3构建体的氨基酸序列(SEQIDNO：1)。给mCherry序列加下划线，GFP序列以粗体表示，给LC3A序列加框。

MVSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEGTQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNFEDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALKGEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERAEGRHSTGGMDELYKPVATMVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKVNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYKSGLRSRAQASNSAVD

下文描述了用于显示和测定自噬途径中的改变的成像方案和图像识别算法。

使用高容量成像和分析的自噬定量

1.第0天：细胞铺板。通过胰蛋白酶消化收集亚汇合的H4mCherry-GFP-LC3细胞，再混悬于生长培养基，计数(H4细胞：人神经胶质瘤细胞系(ATCC))。制备66`000细胞/mL的细胞混悬液，使用电子多通道移液管将30μL加入384-孔培养板的各孔。这导致以2000细胞/孔铺板。将培养板短暂自旋，置于37℃和5％CO₂。

2.第1天：化合物处理：用DMSO制备化合物。然后用介质将化合物按1:50稀释。将10ul稀释的化合物加入到30ul细胞中，得到原始化合物的最终1:200稀释度和0.5％DMSO的终浓度。一式三份地进行化合物-处理。将384-孔培养板置于37℃和5％CO₂。化合物处理进行16-18h(参见注释1)。

3.第2天：细胞固定：通过添加10μL/孔5x浓缩的补充了25μg/mLHoechst33342的Mirsky固定剂固定细胞。这导致是总体积为50μL/孔且浓度为1xMirsky固定剂和5μg/mLHoechst33342。将384-孔培养板短暂自旋，在室温温育1h。然后用384-孔培养板洗涤器、使用抽取使体积降至10μL/孔、然分配100μL/孔1XTBS的方案洗涤细胞。将抽吸和分配步骤重复4次，保持终体积100μL/孔。使用粘性PCR箔密封培养板。

4.成像：用70％乙醇清洁培养板底部，然后使用InCell1000自动表面荧光显微镜成像。使用20x放大倍数，每个孔成像4个不同区域(视野)，这典型地捕捉到总计约400个细胞/孔。使用360nm激发(D360_40x过滤器)、460nM发射(HQ460_40M过滤器)和150ms曝光时间获取Hoechst33342图。使用475nm激发(S475_20x过滤器)、535nM发射(HQ535_50M过滤器)和1s曝光时间获取GFP图像。使用535nm激发(HQ535_50x过滤器)、620nM发射(HQ620_60M过滤器)和1s曝光时间获取mCherry图像。将四倍通带镜(quadruplebandpassmirror)用于全部图像。

5.图像分析：InCell分析软件用于使用多靶标分析算法分析图像。首先，使用顶-帽分段(top-hatsegmentation)和50μm²的最小核面积检测Hoechst33342图像中的核。使用核周围10μm环确定细胞。其次，使用多-顶-帽分段(multi-top-hatsegmentation)鉴定mCherry图像中的点(细胞器)。第三，将mCherry点的掩蔽物转入GFP图像上。第四，测定mCherry点掩蔽物内侧的GFP荧光强度(对照强度)。

6.`细胞器`参数反映出mCherry-GFP-LC3报道分子的mCherry-阳性点并且用于计算`LC3点/细胞’。为了该目的，计算每个细胞的细胞器数量并且求指定孔内全部细胞的平均值(基于每个细胞的平均值)。将mCherry-阳性LC3点数(y-轴)对化合物剂量响应值(x-轴)作图并且对每种化合物计算EC50值。EC50值表示自噬活化方面的化合物效力(例如mCherry-阳性LC3点数的增加)。

注

1.在3-4h的化合物处理时间后已经可以观察到mCherry-GFP-LC3的自噬-调节和再分布。然而，使用16-18h的处理时间观察到更显著的效果。

实施例中的化合物在上述测定中测试时显示下表1中所示的值。

表1

n.d.＝未测定；n.m.＝不能测定

如上文所述的试验结果所示，本发明化合物可用于治疗通过抑制mTOR酶而调节的疾病、病症和障碍；因此，本发明化合物(包括其中使用的组合物和方法)可以用于制备本文所述的治疗应用的药物。因此，本发明的另一个实施方案是药物组合物，其包含本发明化合物或其可药用盐以及可药用赋形剂、稀释剂或载体。

通过混合本发明化合物和载体、稀释剂或赋形剂制备典型制剂。适合的载体、稀释剂和赋形剂是本领域技术人员众所周知的且包括这样的材料，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或可溶涨性聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。所用的具体载体、稀释剂或赋形剂取决于本发明化合物的应用方式和目的。溶剂一般基于本领域技术人员认为安全施用于哺乳动物的溶剂选择。一般而言，安全的溶剂是无毒性水性溶剂例如水和其他可溶于水或易于与水溶混的无毒性溶剂。适合的水性溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如PEG400、PEG300)等及其混合物。制剂还可以包括一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、香味剂、矫味剂和其他已知给药物(即本发明化合物或其药物组合物)提供优美外观或有助于制备药物产品(即药物)的添加剂。

可以使用溶解和混合方法制备制剂。例如，将原料药(即本发明化合物或该化合物的稳定形式(例如与环糊精衍生物或其他已知复合试剂复合))在一种或多种赋形剂的存在下溶于适合的溶剂。典型地将本发明化合物配制成药物剂型，得到药物剂量易于可控并且得到美观和易于操控的产品。

可以以不同方式包装用于应用的药物组合物(或制剂)，这取决于用于施用药物的方法。一般而言，用于分配的制品包括其中贮存适合形式的药物制剂的容器。适合的容器是本领域技术人员众所周知的且包括这样的材料，例如瓶(塑料和玻璃)、小药囊、安瓿、塑料袋、金属量筒等。该容器还可以包括防干扰装置以防止不慎进入包装内容物。此外，该容器上存在描述容器内容物的标签。所述标签还可以包括适当的警告性语言。

在一个实施方案中，本发明涉及由mTOR介导的细胞增殖性疾病、例如肿瘤和/或癌性细胞生长的治疗。疾病包括那些显示PI3Kα的过表达或扩增、Rheb、PIK3CA的体细胞突变或PTEN的种系突变或体细胞突变、TSC1、TSC2、或用于正调节p85-p110复合物的p85α的突变和易位的那些疾病。具体而言，化合物可用于治疗人或动物(例如鼠科动物(murine))癌症，包括例如肉瘤；肺癌；支气管癌；前列腺癌；乳腺癌(包括散发的乳腺癌和考登病患者)；胰腺癌；胃肠癌；结肠癌；直肠癌；结肠癌；结肠直肠腺瘤；甲状腺癌；肝癌；肝内胆管癌；肝细胞癌；肾上腺癌；胃癌；胃癌；神经胶质瘤；胶质母细胞瘤；子宫内膜癌；黑素瘤；肾癌；肾盂癌；膀胱癌；子宫体癌；子宫颈癌；阴道癌；卵巢癌；多发性骨髓瘤；食管癌；白血病；急性髓性白血病；慢性髓性白血病；淋巴细胞白血病；髓性白血病；脑癌；脑的癌；口腔和咽癌；喉癌；小肠癌；非霍奇金淋巴瘤；黑素瘤；绒毛状结肠腺瘤；瘤形成；上皮特征的瘤形成；淋巴瘤；乳癌；基底细胞癌；鳞状细胞癌；光化性角化病；肿瘤疾病，包括实体瘤；颈或头部肿瘤；真性红细胞增多症；原发性血小板增多症；骨髓纤维化伴骨髓化生；和瓦尔登斯特伦病。

在其他实施方案中，所述病症或障碍选自：真性红细胞增多症、特发性血小板增多症、骨髓纤维化伴骨髓化生、哮喘、COPD、ARDS、勒夫勒综合征、嗜酸细胞性肺炎、寄生虫(特别是后生动物)侵染(包括热带嗜酸细胞增多)、支气管肺曲霉病、结节性多动脉炎(包括丘-斯综合征)、嗜酸细胞肉芽肿、由药物反应引起的影响气道的与嗜酸性细胞有关的障碍、银屑病、接触性皮炎、特应性皮炎、斑秃、多形性红斑、疱疹样皮炎、硬皮病、白斑、变应性血管炎、荨麻疹、大疱性类天疱疮、红斑狼疮、天疱疮、后天性大疱性表皮松解、自身免疫性血液病(例如溶血性贫血、再生障碍性贫血、纯红细胞贫血和特发性血小板减少)、系统性红斑狼疮、多发性软骨炎、硬皮病、韦格纳肉芽肿病、皮肌炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、斯-琼氏综合征、特发性口炎性腹泻、自身免疫性炎性肠病(例如溃疡性结肠炎和克罗恩病)、内分泌性眼病、格雷夫斯病、结节病、肺泡炎、慢性过敏性肺炎、多发性硬化症、原发性胆汁性肝硬化、(前和后)眼色素层炎、肺间质纤维化、银屑病关节炎、肾小球肾炎、心血管疾病、动脉粥样硬化、高血压、深部静脉血栓形成、卒中、心肌梗死、不稳定心绞痛、血栓栓塞、肺栓塞、血栓溶解性疾病、急性动脉缺血、外周血栓性阻塞和冠状动脉疾病、再灌注损伤、视网膜病、例如糖尿病性视网膜病或高压氧引起的视网膜病，以及以升高眼内压或眼房水分泌为特征的病症、例如青光眼。

与mTOR激酶活性失调具有确立或潜在的分子关联的另外的综合征例如描述在下列文献中：“K.Inoki等人；DisregulationoftheTSC-mTORpathwayinhumandisease,NatureGenetics,第37卷,19-24”；“D.M.Sabatini；mTORandcancer：insightsintoacomplexrelationship,NatureReviews,第6卷,729-734”；和“B.T.Hennessy等人；ExploitingthePI3K/Aktpathwayforcancerdrugdiscovery,NatureReviews,第4卷,988-1004”，以及如下：

·器官或组织移植排斥，例如用于治疗例如心脏、肺、复合心-肺、肝、肾、胰腺、皮肤或角膜移植的接受者；移植物抗宿主病，例如骨髓移植后；

·再狭窄

·结节性硬化症；

·淋巴管平滑肌瘤病；

·色素性视网膜炎和其他视网膜变性障碍；

·自身免疫疾病，包括脑脊髓炎、胰岛素依赖性糖尿病、狼疮、皮肌炎、关节炎和风湿性疾病；

·类固醇抗性急性淋巴母细胞白血病；

·纤维变性疾病，包括硬皮病、肺纤维化、肾纤维化、囊性纤维化；

·肺动脉高压；

·免疫调节；

·多发性硬化；

·VHL综合征；

·Carney综合征；

·家族性腺瘤性息肉病；

·幼年性息肉病综合征

·Birt-Hogg-Duke综合征；

·家族性肥大性心肌病；

·Wolf-Parkinson-White综合征；

·神经变性疾病，例如tau突变导致的帕金森病、亨廷顿病、阿尔茨海默病和痴呆、脊髓小脑共济失调3型、SOD1突变导致的运动神经元病、神经元蜡样脂褐质沉积症/Batten病(儿科神经变性)

·眼科疾病，诸如湿和干性黄斑变性、眼色素层炎(包括自身免疫性眼色素层炎)、视网膜病、诸如糖尿病性视网膜病或高压氧-诱导的视网膜病和青光眼

·肌萎缩(萎缩，恶病质)和肌病，例如Danon病；

·细菌和病毒感染，包括结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、A组链球菌、HSVI型、HIV感染；

·神经纤维瘤病，包括1型神经纤维瘤；和

·波伊茨-耶格综合征、考登病。

对mTORC1具有抑制活性的化合物已经在免疫调节和治疗增殖性疾病、例如晚期肾细胞癌或结节-硬化(TSC)种系突变相关障碍中显示了有益性。

对于以上用途，所需的剂量当然将根据施用方式、所治疗的具体病症和所期望的作用而改变。通常，以约0.03至约100.0mg/kg体重，例如约0.03至约10.0mg/kg体重的日剂量全身施用表明可获得满意的结果。大型哺乳动物、例如人的指示日剂量的范围为约0.5mg至约3g，例如约5mg至约1.5g，其方便地例如以一天最多四次的分剂量或以延迟释放形式施用。适合于口服施用的单位剂型包含约0.1至约500mg，例如约1.0至约500mg活性成分。

通常，本发明化合物将作为药物组合物通过如下途径的任意一种施用：口服、全身(例如透皮、鼻内或通过栓剂)或胃肠外(例如肌内、静脉内或皮下)施用。优选的施用方式是使用便利的每日剂量方案口服，可以根据病患程度调整。组合物可以采用片剂、丸剂、胶囊、半固体、粉末、缓释制剂、溶液、混悬液、酏剂、气雾剂或任意其他适合的组合物的形式。用于施用本发明化合物的另一种优选的方式是吸入。这是用于将治疗剂直接递送至呼吸道的有效方法。

因此，本发明还提供了：

·在需要治疗的个体中预防或治疗通过激活PI3K(例如PI3激酶α)酶和/或mTOR酶所介导的病症、障碍或疾病的方法，例如以上所示的那些疾病，该方法包括向所述个体施用有效量的本发明化合物或其可药用盐。在一个实施方案中，提供了在需要治疗的个体中预防或治疗癌症、神经变性疾病或眼科疾病的方法，该方法包括向所述个体施用有效量的本发明化合物或其可药用盐。在另一个实施方案中，所述的神经变性疾病是帕金森病、亨廷顿病或阿尔茨海默病。在又一个实施方案中，所述的神经变性疾病是亨廷顿病。

·用作药物的本发明化合物或其可药用盐，例如用于本文所述的任何病症、障碍或疾病中，特别是用于一种或多种磷脂酰肌醇3-激酶介导的疾病。在一个实施方案中，提供了本发明化合物或其可药用盐，其用于预防或治疗癌症、神经变性疾病或眼科疾病。在另一个实施方案中，所述的神经变性疾病是帕金森病、亨廷顿病或阿尔茨海默病。在又一个实施方案中，所述的神经变性疾病是亨廷顿病。

·本发明化合物或其可药用盐在药物中作为药物活性成分的应用，例如用于治疗或预防本文所述的任何病症、障碍或疾病中、特别是用于治疗或预防一种或多种磷脂酰肌醇3-激酶介导的疾病。在一个实施方案中，提供了在药物中作为药物活性成分的本发明化合物或其可药用盐，所述药物用于预防或治疗癌症、神经变性疾病或眼科疾病。在另一个实施方案中，所述的神经变性疾病是帕金森病、亨廷顿病或阿尔茨海默病。在又一个实施方案中，所述的神经变性疾病是亨廷顿病。

·本发明化合物或其可药用盐在制备用于治疗或预防一种或多种磷脂酰肌醇3-激酶介导的疾病的药物中的应用。在一个实施方案中，提供了本发明化合物或其可药用盐在制备用于预防或治疗癌症、神经变性疾病或眼科疾病的药物中的应用。在另一个实施方案中，所述的神经变性疾病是帕金森病、亨廷顿病或阿尔茨海默病。在又一个实施方案中，所述的神经变性疾病是亨廷顿病。

本发明的活性剂可以作为单独的药物活性成分施用或作为与至少一种例如对治疗或预防癌症或神经变性疾病有效的另外的药物活性成分的组合施用。此类药物组合可以是单位剂型，该单位剂型包含预定量的所述至少两种活性组分中的每种以及至少一种可药用赋形剂、稀释剂或载体。或者，该药物组合可以是分别包含所述至少两种活性组分的包装形式，例如用于同时或分别施用至少所述两种活性组分的包装或分配装置，其中这些活性组分分别放置。另一方面，本发明涉及所述药物组合。

在进一步的方面，因此本发明涉及含本发明的活性剂或其可药用盐和另外的治疗剂的组合产品。

在一个实施方案中，所述组合产品是含本发明的活性剂或其可药用盐和另外的治疗剂以及可药用赋形剂、稀释剂或载体的药物组合物。

在一个实施方案中，所述组合产品是药盒，其包含两种或更多种单独的药物组合物，其中至少一种包含本发明的活性剂。在一个实施方案中，该药盒包含用于分别保存所述组合物的装置，例如容器、分开的瓶或分开的箔包装。此类药盒的实例是泡罩包装，如常用于片剂、胶囊等的泡罩包装。本发明的药盒可用于施用不同的剂型，例如口服和胃肠外剂型，用于在不同的剂量间隔施用单独的组合物，或用于针对彼此逐步增加所述单独的组合物的剂量。为了协助顺应性，本发明的药盒通常包括施用说明书。

由于它们的mTOR抑制活性，本发明化合物单独或组合可用于治疗癌症。因此，在一个实施方案中，本发明涉及与另外的治疗剂组合的本发明化合物或其可药用盐，其中所述另外的治疗剂选自下文所述的抗癌剂:

(a)激酶抑制剂:例如表皮生长因子受体(EGFR)激酶抑制剂，例如小分子喹唑啉类，包括吉非替尼(US5457105、US5616582和US5770599)、ZD-6474(WO01/32651)、厄洛替尼(US5,747,498和WO96/30347)和拉帕替尼(US6,727,256和WO02/02552)；血管内皮生长因子受体(VEGFR)激酶抑制剂，包括SU-11248(WO01/60814)、SU5416(US5,883,113和WO99/61422)、SU6668(US5,883,113和WO99/61422)、CHIR-258(US6,605,617和US6,774,237)、瓦他拉尼或PTK-787(US6,258,812)、VEGF-Trap(WO02/57423)、B43-染料木素(Genistein)(WO-09606116)、芬维A胺(fenretinide)(维A酸对-羟基苯胺)(US4,323,581)、IM-862(WO02/62826)、贝伐单抗或(WO94/10202)、KRN-951、3-[5-(甲基磺酰基哌啶甲基)-吲哚基]-喹诺酮、AG-13736和AG-13925、吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪类、ZK-304709、VMDA-3601、EG-004、CEP-701(US5,621,100)、Cand5(WO04/09769)；Erb2酪氨酸激酶抑制剂，例如帕妥珠单抗(WO01/00245)、曲妥珠单抗和利妥昔单抗；Akt蛋白激酶抑制剂，例如RX-0201；蛋白激酶C(PKC)抑制剂，例如LY-317615(WO95/17182)和哌立福新(US2003171303)；Raf/Map/MEK/Ras激酶抑制剂，包括索拉非尼(BAY43-9006)、ARQ-350RP、LErafAON、BMS-354825AMG-548和其他公开于WO03/82272的抑制剂；成纤维细胞生长因子受体(FGFR)激酶抑制剂；细胞依赖性激酶(CDK)抑制剂，包括CYC-202或roscovitine(WO97/20842和WO99/02162)；血小板衍生生长因子受体(PGFR)激酶抑制剂，例如CHIR-258、3G3mAb、AG-13736、SU-11248和SU6668；和Bcr-Abl激酶抑制剂和融合蛋白，例如STI-571或(伊马替尼)。

(b)抗雌激素药:选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括他莫西芬、托瑞米芬、雷洛西芬；芳香酶抑制剂，包括或阿那曲唑；雌激素受体下调剂(ERD)，包括或氟维司群。

(c)抗雄激素药:诸如氟他胺、比卡鲁胺、非那甾胺、氨鲁米特、酮康唑和皮质甾类。

(d)其他抑制剂:诸如蛋白法呢基转移酶抑制剂，包括替匹法尼或R-115777(US2003134846和WO97/21701)、BMS-214662、AZD-3409和FTI-277；拓扑异构酶抑制剂，包括美巴龙(merbarone)和二氟替康(diflomotecan)(BN-80915)；有丝分裂驱动蛋白纺锤体蛋白(KSP)抑制剂，包括SB-743921和MKI-833；蛋白酶体调节剂，例如硼替佐米(bortezomib)或(US5,780,454)、XL-784；和环氧酶2(COX-2)抑制剂，包括非甾体抗炎药I(NSAID)。

(e)癌症化疗药:诸如阿那曲唑必卡他胺硫酸争光霉素白消安白消安注射剂卡培他滨N4-戊氧基羰基-5-脱氧-5-氟胞苷、卡铂卡氮芥苯丁酸氮芥顺铂克拉屈滨环磷酰胺(或)、阿糖胞苷(cytarabine)、阿糖胞苷(cytosinearabinoside)阿糖胞苷脂质体注射液氮烯唑胺放线菌素D(ActinomycinD、Cosmegan)、柔红霉素盐酸盐柔红霉素柠檬酸盐脂质体注射液地塞米松、多烯紫杉醇多柔比星盐酸盐足叶乙甙氟达拉滨磷酸盐5-氟尿嘧啶氟他胺替扎他滨(tezacitibine)、吉西他滨(二氟去氧胞苷)、羟基脲依达比星异环磷酰胺依立替康L-天门冬酰胺酶甲酰四氢叶酸钙、美法仑6-巯基嘌呤甲氨蝶呤米托蒽醌吉妥单抗(mylotarg)、紫杉醇phoenix(Yttrium90/MX-DTPA)、喷司他丁、卡莫司汀植入膜剂20(polifeprosan20)他莫西芬柠檬酸盐替尼泊甙6-硫鸟嘌呤、噻替派、替拉扎明注射用拓扑替康盐酸盐长春碱长春新碱和长春瑞滨

(f)烷化剂:诸如VNP-40101M或cloretizine、奥沙利铂(US4,169,846、WO03/24978和WO03/04505)、葡磷酰胺、马磷酰胺、依托泊苷(US5,041,424)、泼尼莫司汀、曲奥舒凡、白消安、伊洛福芬(irofluven)(酰基富烯)、五氯甲定(penclomedine)、吡唑并吖啶(PD-115934)、O6-苄基鸟嘌呤、地西他滨(5-氮杂-2-去氧胞苷)、溴他利星、丝裂毒素C(MitoExtra)、TLK-286替莫唑胺、曲贝替定(US5,478,932)、AP-5280(顺铂的铂酸盐制剂)、甲基丝裂霉素和clearazide(meclorethamine)。

(g)螯合剂:诸如四硫钼酸铵(WO01/60814)、RP-697、ChimericT84.66(cT84.66)、钆磷维塞(gadofosveset)去铁胺以及任选与电穿孔(electorporation)(EPT)联合应用的博来霉素。

(h)生物响应调节剂:诸如免疫调节剂，包括星孢素及其大环类似物，包括UCN-01、CEP-701和米哚妥林(参见WO02/30941、WO97/07081、WO89/07105、US5,621,100、WO93/07153、WO01/04125、WO02/30941、WO93/08809、WO94/06799、WO00/27422、WO96/13506和WO88/07045)；角鲨胺(WO01/79255)；DA-9601(WO98/04541和US6,025,387)；阿来组单抗；干扰素类(例如IFN-a、IFN-b等)；白细胞介素，特别是IL-2或阿地白介素以及IL-1、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12及其活性生物学变体(其氨基酸序列大于70％的天然人类序列)；六甲蜜胺SU101或来氟米特(WO04/06834和US6,331,555)；咪唑并喹啉类，例如雷西莫特和咪喹莫特(US4,689,338、5,389,640、5,268,376、4,929,624、5,266,575、5,352,784、5,494,916、5,482,936、5,346,905、5,395,937、5,238,944和5,525,612)；和SMIP，包括吲哚类、蒽醌类、缩氨基硫脲类和色胺酮类(WO04/87153、WO04/64759和WO04/60308)。

(i)癌症疫苗:包括(TetrahedronLetters26，19742269-70)、奥戈伏单抗(STn-KLH)、黑素瘤疫苗、GI-4000系列(GI-4014、GI-4015和GI-4016)(其涉及在Ras蛋白中的5种突变)、GlioVax-1、MelaVax、或INGN-201(WO95/12660)、Sig/E7/LAMP-1、编码HPV-16E7、MAGE-3疫苗或M3TK(WO94/05304)、HER-2VAX、ACTIVE(它刺激针对肿瘤特异的T-细胞)、GM-CSF癌症疫苗和基于产单核细胞的利斯特菌属的疫苗。

(j)反义疗法:包括反义组合物，例如AEG-35156(GEM-640)、AP-12009和AP-11014(TGF-β2-特殊反义寡核苷酸)；AVI-4126、AVI-4557、AVI-4472、奥利美生JFS2、阿普卡生(WO97/29780)、GTI-2040(R2核糖核苷酸还原酶mRNA反义寡核苷酸)(WO98/05769)；GTI-2501(WO98/05769)、脂质体包囊的c-Raf反义脱氧核苷酸(LErafAON)(WO98/43095)和Sirna-027(基于RNAi的治疗靶向VEGFR-1mRNA)。

因此，在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含：

i)本发明化合物或其可药用盐，和

ii)至少一种选自以下的化合物

(a)激酶抑制剂,

(b)抗雌激素药,

(c)抗雄激素药,

(e)癌症化疗药,

(f)烷化剂,

(g)螯合剂,

(h)生物响应调节剂，和

ii)一种或多种可药用赋形剂、稀释剂或载体。

在一个实施方案中，本发明提供了包含本发明化合物或其可药用盐和依维莫司的药物组合物。

由于它们的mTOR抑制活性，本发明化合物单独或组合可用于治疗神经变性疾病。因此，在一个实施方案中，本发明涉及与另外的治疗剂组合的本发明化合物或其可药用盐，其中所述另外的治疗剂选自:

(a)乙酰胆碱酯酶抑制剂：例如多奈哌齐(Aricept^TM)、卡巴拉汀(Exelon^TM)和加兰他敏(Razadyne^TM)；

(b)谷氨酸拮抗剂：例如美金刚(memantine)(Namenda^TM)；

(c)抗抑郁药：用于情绪低落和易怒，例如西酞普兰(citalopram)(Celexa^TM)、氟西汀(Prozac^TM)、帕罗西汀(Paxil^TM)、舍曲林(Zoloft^TM)和曲唑酮(Desyrel^TM)；

(d)抗焦虑药：用于焦虑症、坐立不安、言语破坏性行为和抗性，例如劳拉西泮(Ativan^TM)和奥沙西泮(Serax^TM)；

(e)抗精神病药物：用于幻觉、妄想、攻击、激动、敌视和不合作性，例如阿立哌唑(aripiprazole)(Abilify^TM)、氯氮平(Clozaril^TM)、氟哌啶醇(Haldol^TM)、奥氮平(Zyprexa^TM)、喹硫平(Seroquel^TM)、利培酮(Risperdal^TM)和齐拉西酮(Geodon^TM)；

(f)情绪稳定剂：例如卡马西平(Tegretol^TM)和双丙戊酸(Depakote^TM)；

(g)烟碱α-7激动剂；

(h)mGluR₅拮抗剂；

(i)H3激动剂；和

(j)淀粉样蛋白治疗疫苗。

因此，在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含:

i)本发明化合物或其可药用盐，和

ii)至少一种选自以下的化合物

(a)乙酰胆碱酯酶抑制剂，

(b)谷氨酸盐拮抗剂，

(c)抗抑郁药，

(d)抗焦虑药，

(e)抗精神病药，

(f)情绪稳定剂,

(g)烟碱α-7激动剂,

(h)mGluR5拮抗剂,

(i)H3激动剂，和

ii)一种或多种可药用赋形剂、稀释剂或载体。

因此，本发明在另外的方面提供了

·药物组合，例如用于本文所述的任何方法的药物组合，其包括用于同时或依次施用的治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐以及另外的治疗剂。

·组合产品，其包含本发明化合物或其可药用盐以及另外的治疗剂。

·组合产品，其包含本发明化合物或其可药用盐以及另外的治疗剂，其作为组合制剂用于疗法，例如用于本文所述的任何疗法。在一个实施方案中，所述疗法是癌症或神经变性疾病的治疗或预防。在另一个实施方案中，所述疗法是帕金森病、亨廷顿病或阿尔茨海默病的治疗或预防。在另一个实施方案中，所述疗法是亨廷顿病的治疗或预防。

·药物组合物，其包含本发明化合物或其可药用盐、另外的治疗剂和可药用赋形剂、稀释剂或载体。

·如上文定义的方法，其包括共同施用、例如同时或依次施用治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐以及例如如上所述的另外的治疗剂。

·药物组合，例如药盒，其包含a)第一种活性剂，其为如本文公开的本发明化合物或其可药用盐；和b)另外的治疗剂，例如如上所述的另外的治疗剂；由此所述药盒包含用于其施用的说明书。

以下本发明化合物的实施例示例了本发明。所述化合物的制备方法如下所述。

实施例

EtOAc乙酸乙酯

AcOH乙酸

brs宽单峰

CDCl₃氘代氯仿

CsF氟化铯

d双峰

CH₂Cl₂二氯甲烷

DIPEA二-异丙基乙胺

DMSO二甲基亚砜

DMSO-d₆氘代二甲基亚砜

dppf1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁

EtOH乙醇

LC-MS液相色谱-质谱

MeOH甲醇

m多重峰

MS质谱

NEt₃三乙胺

NMR核磁共振

¹HNMR质子核磁共振

Pd(PPh₃)₄四(三苯基膦)钯

PPh₃三苯膦

s单峰

TFA三氟乙酸

THF四氢呋喃

UV紫外线

EtOH乙醇

CDCl₃氘代氯仿

SiO₂硅胶

MgSO₄硫酸镁

Na₂SO₄硫酸钠

Pd钯

aq含水的

TBME叔丁基甲醚

mL毫升

LDA二异丙基氨基锂

Raney-Ni阮内镍

ax轴向

eq平伏异构体

MHz兆赫

Rt保留时间

Na₂S₂O₃硫代硫酸钠

分析方法

NMR:除非另有说明，否则在BrukerAvancespectrometer或VarianOxford400波谱仪记录氢谱。化学位移以相对于二甲亚砜(δ2.50)或氯仿(δ7.26)的ppm表示。将少量干样品(2-5mg)溶于适合的氘代溶剂(1mL)中。

LC/MS:

将样品溶于适合的溶剂、诸如MeCN、DMSO或MeOH中，使用自动样品处理机直接进样至柱中。使用以下方法之一进行分析：

LC-MS-方法1

柱:AcquityHSST3,1.8μm,2.1x50mm；

洗脱剂:水(+0.05％甲酸+3.75mM乙酸铵):乙腈(+0.04％甲酸)，从98:2至2:98，1.4分钟，保持98％达0.75分钟；

流速/温度:1.2ml/min在50℃。

LC-MS-方法2

柱:Machery-NagelNucleosil100-3C18(70x4.6mm)；

溶剂/梯度:A:0.05％在水中的TFA；B:0.05％在乙腈中的TFA；从95％A/5％B至5％A/95％B，8分钟。

流速/温度:1.4ml/min，在45℃。

胺中间体的合成

胺中间体为商购可得，或者可如文献中所述或以类似的方式制备，或者可以如下文所述或以类似的方式制备。

二环胺中间体的合成

二环胺1:3-羟基-8-氮杂-二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯

向3-氧代-8-氮杂-二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(1.03g，4.57mmol)在EtOH(20mL)中的溶液中滴加NaBH₄。将该混合液在室温在氮气下搅拌4.5小时，随后第二次加入NaBH₄(0.36g，9.60mmol)。将该反应混合液在室温搅拌17.5小时，并最后一次加入NaBH₄(0.36g，9.60mmol)。将该溶液在室温搅拌2小时，然后加入饱和的氯化铵溶液，并将水相用EtOAc萃取。将合并的有机部分经Na₂SO₄干燥，过滤，并浓缩。将粗品经硅胶快速色谱使用环己烷/EtOAc作为洗脱剂进行纯化，蒸发后，得到轴向和平伏异构体(186mg，17.9％)和(205mg，19.7％)，为白色固体。1HNMR(600MHz,CDCl₃):4.57(d,1H),4.02(m,2H),3.89(d,1Hax),1.89-1.71(m,5H),1.65-1.54(m,1H),1.47-1.28(m,11H)和4.60(d,1H)3.99(m,2H),3.91(m,1Heq),2.18-2.03(m,2H),1.92-1.72(m,4H),1.67–1.56(m,2H),1.39(s,9H)

二环胺2:8-氮杂-二环[3.2.1]辛-3-醇

将HCl(4N在二噁烷中，0.82mL，3.27mmol)的溶液加入3-羟基-8-氮杂-二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯在乙腈中的混悬液中。将该混合液在70℃搅拌1小时，冷却，并浓缩。将产物(138mg，93％)分离，为盐酸盐。

1HNMR(600MHz,CDCl₃):9.07–8.49(m,1H),3.94(m,2H),3.85(m,1H),1.97-1.74(m,6H),1.60(t,2H)

以相同的方式制备轴向异构体(137mg，93％)。

1HNMR(600MHz,CDCl₃):9.01–8.44(m,1H),3.89(m,3H),2.29(d,2H),2.07(dt,2H),1.96-1.84(m,2H),1.83-1.71(m,2H)

吲哚中间体的合成

吲哚中间体为商购可得，或者可如文献中所述或以类似的方式制备，或者可以如下文所述或以类似的方式制备。

吲哚1:4-溴-6-甲氧基-1H-吲哚

(a)N-(3-溴-5-甲氧基-苯基)-N-羟基-乙酰胺

将3-溴-5-硝基苯甲醚(1.5g，6.46mmol)溶于20mL1,2-二氯乙烷和20mL乙醇中，并将该混合液冷却至0℃。在10分钟内加入阮内镍(30mg)和水合肼(0.79mL，12.9mmol)，并将该反应混合液在室温搅拌4小时，此时加入50mg阮内镍。搅拌16小时后，加入另外的50mg阮内镍，再搅拌4小时后，加入另外的50mg阮内镍。在室温继续搅拌4小时，此时原料已经完全消失。将该反应混合液经由Celite过滤，并将溶剂减压除去，得到固体状的N-(3-溴-5-甲氧基-苯基)-N-羟胺，将其溶于80ml甲苯中。加入碳酸氢钠(597mg，7.11mmol)、随后加入乙酰氯(0.51mL，7.11mol)。在室温继续搅拌20小时。然后将该反应混合液过滤，并减压浓缩。将残余物经柱色谱纯化(40gSiO₂；EtOAc/庚烷，梯度5/95至1/3)，得到标题化合物，为固体(360mg，21％历经2个步骤)。LC-MS，在254nm；[M+H]260.0/262.1；Rt0.82分钟；(LCMS方法1)。¹H-NMR(600MHz；DMSO-d⁶):10.85(brs,1H),7.50(dd,1H),7.26(dd,1H),6.94(dd,1H),3.77(s,3H),2.22(s,3H)。

(b)4-溴-6-甲氧基-1H-吲哚

将N-(3-溴-5-甲氧基-苯基)-N-羟基-乙酰胺(360mg，1.384mmol)溶于醋酸乙烯酯(1.92mL，20.8mmol)中，并加入Li₂PdCl₄(18.2mg，69μmol)。将该反应混合液在60℃搅拌3小时。将该反应混合液用EtOAc和盐水稀释；将有机层分离，并减压浓缩，得到固体，将其溶于20mLMeOH中。加入1NNaOH水溶液(2.61mL，2.61mmol)，并将该反应混合液在室温搅拌2小时。通过加入2NHCl水溶液(1.3mL，2.6mmol)、随后加入500mgNa₂CO₃将该反应混合液淬灭。加入50mLEtOAc后，将有机层分离，经Na₂SO₄干燥，过滤，并浓缩。将残余物经柱色谱纯化(20gSiO₂，EtOAc/庚烷，梯度为0/100至1/4)，得到标题化合物，为液体(145mg，46％历经2个步骤)。¹H-NMR(600MHz；DMSO-d⁶):11.26(brs,1H),7.31(dd,1H),6.93(d,1H),6.90(d,1H),6.29(dd,1H),3.78(s,3H)。

吲哚2:4-氯-6-氟-1H-吲哚

(a)1-氯-3-氟-5-硝基-苯

将四水合过硼酸钠(7.69g,50.0mmol)混悬于30mL乙酸中，并将该混悬液温至55℃。将3-氯-5-氟苯胺(1.46g，10mmol)溶于20mL乙酸中，并在1小时内加入。将该反应混合液在55℃搅拌1小时，然后冷却至室温。加入300mLTBME，并将该反应混合液过滤。将有机层用盐水洗涤、随后用20mLNa₂S₂O₃水溶液洗涤、之后用盐水洗涤。将有机层经Na₂SO₄干燥，并减压浓缩，得到残余物，将其经柱色谱纯化(40gSiO₂；环己烷)，得到标题化合物，为固体(320mg，18％)。¹H-NMR(400MHz；DMSO-d⁶):8.20(s,1H),8.18(d,1H),8.07(d,1H)。

(b)N-(3-氯-5-氟-苯基)-N-羟基-乙酰胺

将1-氯-3-氟-5-硝基-苯(320mg，1.82mmol)溶于5mL1,2-二氯乙烷和5mL乙醇中，并将该混合液冷却至0℃。在10分钟内加入阮内镍(30mg，2.0mmol)和水合肼(0.11mL，1.82mmol)，并将该反应混合液在室温搅拌4小时，此时加入50mg阮内镍。搅拌16小时后，加入另外的50mg阮内镍，再搅拌4小时后，加入另外的50mg阮内镍。继续在室温搅拌4小时，此时原料已经完全消失。将该反应混合液经由Celite过滤，并将溶剂减压除去，得到固体状的N-(3-溴-5-氟-苯基)-N-羟胺，将其溶于15ml甲苯中。加入碳酸氢钠(160mg，1.91mmol)、随后加入在0.5ml甲苯中的乙酰氯(136μL，1.91mmol)。在室温继续搅拌20小时。然后将该反应混合液过滤，并减压浓缩。将残余物经柱色谱纯化(40gSiO₂；EtOAc/庚烷，梯度为5/95至1/3)，得到标题化合物，为固体(214mg，53％历经2个步骤)。LC-MS，在254nm；[M+H]204.1；Rt0.83分钟；(LCMS方法1)。¹H-NMR(DMSO-d⁶):10.95(s,1H),7.62(s,1H),7.51(dd,1H),7.19(d,1H),2.24(s,3H)。

(c)4-氯-6-氟-1H-吲哚

将N-(3-氯-5-氟-苯基)-N-羟基-乙酰胺(200mg，982μmol)溶于醋酸乙烯酯(1.81mL，19.6mmol)中，并加入Li₂PdCl₄(25.7mg，98μmol)。将该反应混合液在60℃搅拌3hr。将该反应混合液用EtOAc和盐水稀释；将有机层分离，并减压浓缩，得到固体，将其溶于8mLMeOH中。加入1NNaOH水溶液(1.89mL，1.89mmol)，并将该反应混合液在室温搅拌2小时。通过加入2NHCl水溶液(0.95mL，1.9mmol)、随后加入300mgNa₂CO₃将该反应混合液淬灭。加入50mLEtOAc后，将有机层分离，经Na₂SO₄干燥，过滤，并浓缩。将残余物经柱色谱纯化(12gSiO₂；EtOAc/庚烷，梯度为0/100至1/4)，得到标题化合物，为液体(72mg，45％历经2个步骤)。¹H-NMR(DMSO-d⁶):11.52(brs,1H),7.45(d,1H),7.20(d,1H),7.05(d,1H),6.45(d,1H)。

烃基硼酸酯中间体的合成

用于制备本发明化合物的烃基硼酸酯中间体为商购可得，或者可如文献中所述或以类似的方式制备，或者可以如下文所述或以类似的方式制备。

烃基硼酸酯1:6-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚

在氩气下向4-溴-6-甲氧基-1H-吲哚(200mg，885μmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中加入联硼酸频哪醇酯(bis(pinacolato)diboron)(247mg，973μmol)，随后加入三环己基膦(14.9mg，53μmol)、双(二亚苄基丙酮)Pd(15.3mg，27μmol)和醋酸钾(130mg，1.33mmol)。将该反应混合液在65℃在氩气下搅拌18小时。然后通过加入30mlEtOAc和20ml盐水将该反应混合液稀释。将有机溶剂分离，经Na₂SO₄干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物经柱色谱纯化(20gSiO₂，叔丁基甲醚/庚烷比例为3/7)，得到产物(190mg，79％)。¹H-NMR(DMSO-d⁶):10.89(brs,1H),7.22(dd,1H),7.03(dd,1H),7.00(d,1H),6.64(dd,1H),3.77(s,3H),1.33(s,12H)。

实施例1:2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-吡啶-2-基-9H-嘌呤

a)2-氯-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤

将2,6-二氯-9H-嘌呤(2.36g，12.5mmol)、(R)-3-甲基吗啉盐酸盐(1.89g，13.8mmol)和二异丙基乙胺(5.46mL，31.3mmol)溶于15mL异丙醇中，并将该反应混合液在75℃搅拌18小时。然后将该反应混合液用200mLCH₂Cl₂稀释。将有机溶剂用Na₂CO₃水溶液洗涤、随后用水和盐水洗涤。经Na₂SO₄干燥、过滤，并减压浓缩，得到残余物，将其经柱色谱纯化(比例为96/4/0.1的150gSiO₂、CH₂Cl₂/EtOH/NH₃水)，得到产物，为固体(2.87g，91％)。

LC-MS，在254nm；[M+H]254.1/256.1；Rt0.72分钟；(LCMS方法1)。

¹HNMR(DMSO-d₆):13.25(1H,brs),8.17(1H,s),6.0-4.5(brs,2H),4.0-3.0(brs,1H),3.96(dd,1H),3.76(d,1H),3.67(dd,1H),3.51(ddd,1H),1.31(d,3H)

b)2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤

将2-氯-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤(1.02g，4mmol)、二异丙基乙胺(1.40mL，8mmol)和(R)-3-甲基吗啉盐酸盐(826mg，6mmol)在2-丁醇(5mL)中在封闭的微波管中在氩气下在50℃搅拌直至所有的成分溶解。然后将该反应混合液在180℃搅拌100小时。然后将该反应混合液冷却至室温，并用200mLCH₂Cl₂稀释。

将有机层用Na₂CO₃水溶液和盐水洗涤。经Na₂SO₄干燥，过滤，并减压浓缩，得到残余物，将其经柱色谱纯化(120gSiO₂，CH₂Cl₂/EtOH/NH₃水，以100/0/0.1至94/6/0.1的比例的梯度)，得到产物，为泡沫(1.11g，87％)。

LC-MS，在254nm；[M+H]319.0；Rt0.71分钟；(LCMS方法1)。

¹HNMR(DMSO-d₆):12.44(s,1H),7.77(s,1H),6.0-4.5(brs,2H),4.51(dd,1H),4.15(dd,1H),4.0-3.0(brs,1H),3.94(dd,1H),3.89(dd,1H),3.73(d,1H),3.69(d,1H),3.65(dd,1H),3.58(dd,1H),3.50(ddd,1H),3.42(dd,1H),3.07(ddd,1H),1.27(d,3H)1.15(d,3H)。

c)2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9-(四氢-吡喃-2-基)-9H-嘌呤

将2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤(600mg，1.89mmol)在氩气下溶于EtOAc(25mL)中。加入3,4-二氢-2H-吡喃(172μl，1.89mmol)、三氟乙酸酐(27μl，188μmol)和三氟乙酸(319μl，4.15mmol)后，将该反应混合液加热至70℃。6小时后，加入3,4-二氢-2H-吡喃(1.44mL，15.7mmol)。然后将该反应混合液搅拌22小时在70℃，然后冷却至室温。加入500mg固体Na₂CO₃，并继续搅拌10分钟。将该反应混合液用EtOAc稀释，将有机层分离，经Na₂SO₄干燥，过滤，并减压浓缩，得到残余物，将其经柱色谱纯化(40gSiO₂，庚烷/EtOAc，9/1至2/3的梯度)，得到产物，为泡沫(600mg，79％)。

LC-MS，在254nm；[M+H]403.3；Rt1.11分钟；(LCMS方法1)。

d)8-溴-2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9-(四氢-吡喃-2-基)-9H-嘌呤

在-60℃将二异丙基胺(290μl，2.04mmol)溶于4mLTHF中，此时加入在己烷中的丁基锂(1.27mL，2.04mmol)以形成LDA。将2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9-(四氢-吡喃-2-基)-9H-嘌呤(585mg，1.45mmol)溶于8mLTHF中，并在–78℃在10分钟内加入该反应混合液中。将该反应混合液在–78℃搅拌1小时。在10分钟内将在4mLTHF中的二溴四氯乙烷(947mg，2.91mmol)加入。将该反应混合液在–78℃搅拌2小时。通过加入饱和的NH₄Cl水溶液将该反应淬灭，并温至室温。将该混合液用80mLEtOAc和50mL盐水稀释。将有机层分离，经Na₂SO₄干燥，过滤，并浓缩，得到残余物，将其经柱色谱纯化(30gSiO₂，庚烷/TBME，比例7/3)，得到产物，为泡沫(546mg，78％)。

LC-MS，在254nm；[M+H]481.3/483.2；Rt1.37分钟；(LCMS方法1)。

¹HNMR(DMSO-d₆):5.50(dd,1H),5.4-4.5(brs,2H),4.48(brs,1H),4.13(dd,1H),4.01(d,1H),3.93-3.87(m,2H),3.74-3.66(m,2H),3.64-3.55(m,3H),3.5-3.0(brs,1H),3.46(ddd,1H),3.40(dd,1H),3.11-3.03(m,1H),3.00-2.90(m,1H),1.96(d,1H),1.78(d,1H),1.70-1.48(m,3H),1.24(d,3H),1.14(d,3H)。

e)2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-吡啶-2-基-9-(四氢-吡喃-2-基)-9H-嘌呤

将8-溴-2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9-(四氢-吡喃-2-基)-9H-嘌呤(40mg，83μmol)在氩气下在微波小瓶中溶于2ml甲苯中，并加入2-(三丁基锡烷基)-吡啶(36mg，83μmol)和Pd(PPh₃)₄(4.8mg，4.2μmol)。将微波小瓶盖上盖，并将该反应混合液在120℃搅拌3小时。将小瓶冷却至室温，并打开。将该混合液用EtOAc(20mL)和盐水稀释。将有机层分离，经Na₂SO₄干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物经柱色谱纯化(12gSiO₂，庚烷/TBME，梯度为4/1至2/3)，得到产物，为固体(35mg，88％)。

LC-MS，在254nm；[M+H]480.3；Rt1.34分钟；(LCMS方法1)。

¹HNMR(DMSO-d₆):8.68(d,1H),8.06(d,1H),7.94(dd,1H),7.46(dd,1H),6.53(dd,1H),6.0-4.5(brs,2H),4.58-4.48(m,1H),4.18(dd,1H),3.99-3.86(m,3H),3.78-3.69(m,2H),3.69-3.64(m,1H),3.64-3.56(m,1H),3.5-3.0(brs,1H),3.55-3.39(m,3H),3.28-3.17(m,1H),3.15-3.05(m,1H),2.00-1.92(m,1H),1.85(dd,1H),1.65-1.45(m,3H),1.28(d,3H),1.18(d,3H)。

f)2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-吡啶-2-基-9H-嘌呤

将2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-吡啶-2-基-9-(四氢-吡喃-2-基)-9H-嘌呤(33mg，69μmol)溶于3mLTHF中。加入2NHCl水溶液(344μl，688μmol)，并将该反应混合液在室温搅拌2小时。加入100mgNa₂CO₃和10mLCH₂Cl₂，并将该反应混合液搅拌20分钟。将有机层分离，经Na₂SO₄干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物经柱色谱纯化(12gSiO₂，庚烷/EtOAc，梯度为100/0至3/2)，得到产物，为固体(24mg，88％)。

LC-MS，在254nm；[M+H]396.3；Rt1.03分钟；(LCMS方法1)。

¹HNMR(DMSO-d₆):12.98(s,1H),8.62(d,1H),8.12(d,1H),7.89(ddd,1H),7.40(ddd,1H),6.0-4.5(brs,2H),4.57(dd,1H),4.20(d,1H),4.0-3.0(brs,1H),3.97(dd,1H),3.89(dd,1H),3.76(d,1H),3.71-3.66(m,2H),3.57(dd,1H),3.53(ddd,1H),3.41(ddd,1H),3.09(ddd,1H),1.30(d,3H)1.17(d,3H)

实施例2:2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-(1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤

a)2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤

将2-氯-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤(712mg，2.81mmol)、二异丙基乙胺(0.98mL，5.61mmol)和(S)-3-甲基吗啉盐酸盐(579mg，4.21mmol)在封闭的5mL微波管中在氩气下在50℃在2-丁醇(3mL)中搅拌直至所有的成分溶解。然后将该反应混合液在175℃搅拌48小时。将有机层用200mLCH₂Cl₂稀释，并用盐水洗涤。经Na₂SO₄干燥，过滤，并减压浓缩，得到残余物，将其经柱色谱纯化(40gSiO₂，CH₂Cl₂/EtOH/NH₃水，梯度为100/0/0.1至90/10/0.1)，得到产物，为固体(588mg，66％)。

LC-MS，在254nm；[M+H]319.2；Rt0.70分钟；(LCMS方法1)。

¹HNMR(DMSO-d₆):12.42(s,1H),7.75(s,1H),6.0-4.5(brs,2H),4.50(dd,1H),4.09(d,1H),4.0-3.0(brs,1H),3.92(dd,1H),3.87(d,1H),3.71(d,1H),3.67(d,1H),3.64(dd,1H),3.56(dd,1H),3.48(ddd,1H),3.40(dd,1H),3.05(ddd,1H),1.24(d,3H)1.12(d,3H)。

b)8-溴-2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤

将2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤(786mg，2.47mmol)溶于CH₂Cl₂(25mL)中。在2分钟内缓慢加入在2mLCH₂Cl₂中稀释的溴(0.16mL，3.09mmol)。将该反应混合液在室温搅拌6小时。将Na₂S₂O₃水溶液(10mL)加入该反应混合物中，并继续搅拌15分钟。将有机层用盐水和NaHCO₃水溶液洗涤。经Na₂SO₄干燥，过滤，并减压浓缩，得到残余物，将其经柱色谱纯化(40gSiO₂，庚烷/EtOAc，梯度为2/3至4/1)，得到产物，为泡沫(455mg，46％)。

LC-MS，在254nm；[M+H]399.1/397.2；Rt0.94分钟；(LCMS方法1)。

c)2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-6-((R)-甲基-吗啉-4-基)-8-(1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤

将8-溴-2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤(50mg，126μmol)溶于二甲氧基乙烷(2mL)和水(0.2mL)中，随后在氩气下加入1H-吡唑-3-基硼酸(21.1mg，189μmol)、PdCl₂(dppf)(9.21mg，13μmol)和NEt₃(53μl，378μmol)。将该反应混合液加热至85℃达23小时。然后将该反应混合液用EtOAc稀释，将有机层分离，用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物经柱色谱纯化(12gSiO₂，EtOAc)，得到产物(19mg，39％收率)。

LC-MS，在254nm；[M+H]385.3；Rt0.81分钟；(LCMS方法1)。

¹HNMR(DMSO-d₆):13.13(s,1H),12.72(s,1H),7.82(s,1H),6.73(s,1H),6.0-4.5(brs,2H),4.54(d,1H),4.13(d,1H),4.0-3.0(brs,1H),3.95(d,1H),3.89(d,1H),3.74(d,1H),3.71-3.64(m,2H),3.57(d,1H),3.51(dd,1H),3.41(dd,1H),3.07(dd,1H),1.26(d,3H)1.15(d,3H)

实施例3:8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-2-[1,4]氧杂氮杂环庚-4-基-9H-嘌呤

a)8-溴-2-氯-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤

向2-氯-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤(950mg，3.74mmol)在CH₂Cl₂(19mL)中的溶液中加入溴(0.23mL，4.49mmol)。将该混合液在环境温度搅拌19小时。加入饱和的硫代硫酸钠。将水层用二氯甲烷萃取两次。将有机层合并，经Na₂SO₄干燥，并减压除去溶剂。将粗品经快速柱色谱纯化(0-70％EtOAc/环己烷梯度)，得到产物，为白色固体(495mg，39％)。LC-MS，在254nm；[M+H]334.1；Rt0.89分钟；(LCMS方法1)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):14.09(br.s.,1H),5.4-4.9(m,2H)3.96(d,1H)3.75(d,1H)3.65(dd,1H)3.42-3.57(m,1H),3.41-3.37(m,1H),1.29(d,3H)

b)2-氯-8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤

在密封管中向8-溴-2-氯-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤(495mg，1.49mmol)在CH₃CN/H₂O(11/1.1mL)中的溶液中加入氟化铯(452mg，2.98mmol)、吲哚-4-硼酸(266mg，1.64mmol)和四(三苯基膦)钯(172mg，0.15mmol)。然后在微波辐照下在160℃将该反应进行30分钟。将溶剂减压除去，并将粗品经快速柱色谱纯化(20-100％EtOAc/环己烷梯度)，得到2-氯-8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤(350mg，63.8％)，为浅黄色固体。LC-MS，在254nm；[M+H]369.2；Rt1.00分钟；(LCMS方法1)。

(400MHz,DMSO-d₆):13.59(s,1H),11.41(s,1H),7.73(dd,1H),7.58-7.49(m,2H),7.38-7.20(m,2H),5.14(s,1H),4.05-4.01(m,1H),3.79-3.88(m,1H),3.69-3.79(m,1H),3.57(s,1H),3.60(s,1H),1.41(d,3H)

c)8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-2-[1,4]氧杂氮杂环庚-4-基-9H-嘌呤

向2-氯-8-(1H-吲哚-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤(50mg，0.14mmol)在1-丁醇(300μL)中的溶液中加入1,4-氧杂氮杂环庚烷(20.6mg，0.20mmol)、随后加入DIPEA(47.4μL，0.27mmol)。将该混合液在120℃搅拌24小时。反应完成后，将该溶液倾入水中。将水层用CH₂Cl₂萃取三次。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，减压浓缩，并将粗品经快速柱色谱纯化(30-100％EtOAc/环己烷梯度)，得到2-((2S,6R)-2,6-二甲基-吗啉-4-基)-6-吗啉-4-基-9H-嘌呤(35mg，59％)，为浅褐色固体。LC-MS，在254nm；[M+H]432.3；Rt1.00分钟；(LCMS方法1)。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)12.47(br.s.,1H),11.00(br.s.,1H),7.67(d,1H),7.43-7.39(m,2H),7.28(br.s.,1H),7.16(t,1H),5.45(d,1H),5.08(d,1H),4.10–3.95(m,1H),3.91-3.85(m,4H),3.82-3.75(m,4H),3.69-3.65(m,2H),3.63-3.57(m,1H),3.48-3.40(m,1H),1.98-1.90(m,2H),1.23-1.18(m,3H)μ

实施例4:8-[4-(1H-咪唑-2-基)-苯基]-2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤

a)8-溴-2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤

将2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤(637mg，2mmol)溶于50mLCH₂Cl₂中，并在氩气下搅拌。将溴(124μl，2.4mmol)溶于2mLCH₂Cl₂中，并在2分钟内加入。将该反应混合液在室温搅拌6小时。加入5mLNa₂S₂O₃水溶液，将该混合液搅拌15分钟，并将有机溶剂分离，用盐水和NaHCO₃水溶液洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并浓缩。将残余物经柱色谱纯化(40gSiO₂，庚烷/EtOAc，梯度为2/3至4/1)，得到泡沫(422mg，53％)。

¹HNMR(DMSO-d₆):13.20(1H,brs),5.4-4.5(brs,2H),4.48(d,1H),4.12(d,1H),3.93(d,1H),3.89(dd,1H),3.73(d,1H),3.68(d,1H),3.64(d,1H),3.56(dd,1H),3.48(ddd,1H),3.41(ddd,1H),3.4-3.1(brs,1H),3.07(ddd,1H),1.26(d,3H),1.15(d,3H)

b)8-[4-(1H-咪唑-2-基)-苯基]-2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤

在氩气下将8-溴-2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤(99mg，250μmol)溶于2mL乙腈和0.2mL水中。加入4-(1H-咪唑-2-基)苯基硼酸(58.7mg，313μmol)、CsF(57mg，375μmol)和Pd(PPh₃)₄(28.9mg，25μmol)。将该混悬液在50℃在封闭的微波小瓶中搅拌10分钟。然后将其在微波装置下辐照40分钟在150℃。将该小瓶冷却，并打开盖，并将该反应混合液用50mLCH₂Cl₂和10mL异丙醇稀释。将有机溶剂用盐水和NaHCO₃水溶液洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物经柱色谱纯化(40gSiO₂，CH₂Cl₂/EtOH/NH₃水，梯度为100/0/0.1至90/10/0.1)，得到产物，为固体(58mg，48％)。

LC-MS，在254nm；[M+H]461.3；Rt0.76分钟；(LCMS方法1)。

1HNMR(600MHz,DMSO-d₆):13.03(s,1H),12.62(s,1H),8.10(d,2H),8.02(d,2H),7.31(s,1H),7.07(s,1H),6.0-4.5(brs,2H),4.55(dd,1H),4.20(d,1H),4.0-3.0(brs,1H),3.99(dd,1H),3.92(dd,1H),3.79(d,1H),3.74-3.68(m,2H),3.61(dd,1H),3.55(ddd,1H),3.45(ddd,1H),3.12(ddd,1H),1.32(d,3H),1.19(d,3H)

实施例5:8-(6-氟-1H-吲哚-4-基)-2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤

在氩气下将4-氯-6-氟-1H-吲哚(72mg，0.42mmol)溶于4mL二噁烷中。在氩气下加入联硼酸频哪醇酯(198mg，778μmol)、三环己基膦(19.8mg，71μmol)、双(二亚苄基丙酮)钯(20.3mg，35μmol)和醋酸钾(104mg，1.06mmol)。将该反应混合液在80℃搅拌24小时。将该反应混合液冷却至室温，并用30mLEtOAc稀释。将有机层用20mL盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并减压浓缩。将残余物经柱过滤(40gSiO₂；EtOAc/庚烷，梯度为0/100至12/88)，得到一个混合液，将其减压浓缩，然后在氩气下溶于2mL乙腈和0.2mL水中。加入8-溴-2-((S)-3-甲基吗啉-4-基-)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤(100mg，153μmol)，随后加入氟化铯(25.8mg，170μmol)和四(三苯基膦)钯(26mg，23μmol)。将该反应混合液在135℃在密封的小瓶中搅拌2小时。将该反应混合液冷却至室温，并用40mLEtOAc稀释。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并浓缩。将残余物经柱色谱纯化(10gSiO₂；叔丁基甲醚)，得到标题化合物，为泡沫(36mg，19％历经2个步骤)。

LC-MS，在254nm；[M+H]452.3；Rt1.06分钟；(LCMS方法1)。

¹H-NMR(400MHz；DMSO-d⁶):12.95(s,1H),11.33(s,1H),7.57(d,1H),7.45(s,1H),7.25(s,1H),7.23(d,1H),6.0-4.5(brs,2H),4.56(d,1H),4.17(d,1H),4.0-3.0(brs,1H),4.00(d,1H),3.91(d,1H),3.80(d,1H),3.75-3.68(m,2H),3.60(d,1H),3.57(dd,1H),3.44(dd,1H),3.11(ddd,1H),1.35(d,3H),1.18(d,3H)。

实施例6:{4-[2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-1H-吲哚-6-基}-甲醇

在氩气下将4-[2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(实施例32,72mg，146μmol)溶于10mlTHF中。在5℃加入1N在THF中的LiAlH₄(0.22mL，0.22mmol)，并将该反应混合液在室温搅拌2小时。通过加入饱和的Na₂SO₄水溶液(1mL)将该反应淬灭。将该混合液用30mLCH₂Cl₂和3mL异丙醇稀释。将有机相分离，经Na₂SO₄干燥，过滤，并浓缩。将残余物经柱色谱纯化(12gSiO₂，CH₂Cl₂/EtOH，梯度为100/0至88/12)，得到产物，为固体(58mg，84％)。

LC-MS，在254nm；[M+H]464.3；Rt0.88分钟；(LCMS方法1)。

1HNMR(600MHz,DMSO-d₆):12.83(s,1H),11.22(s,1H),7.63(d,1H),7.44(s,1H),7.40(dd,1H),7.18(dd,1H),6.0-4.5(brs,2H),5.16(t,1H),4.61(d,2H),4.55(dd,1H),4.19(d,1H),4.0-3.0(brs,1H),3.99(dd,1H),3.90(dd,1H),3.79(d,1H),3.74-3.68(m,2H),3.59(dd,1H),3.56(ddd,1H),3.44(ddd,1H),3.10(ddd,1H),1.35(d,3H),1.17(d,3H)

实施例7至32

使用与实施例1中所述的那些类似的方法、使用适合的烃基硼酸或烃基硼酸酯中间体可以制备以下表2中的实施例7至9。

使用与实施例2中所述的那些类似的方法、使用适合的烃基硼酸或烃基硼酸酯中间体可以制备以下表2中的实施例10至11。

使用与实施例3中所述的那些类似的方法、使用适合的烃基硼酸或烃基硼酸酯中间体可以制备以下表2中的实施例12至26。

使用与实施例4中所述的那些类似的方法、使用适合的烃基硼酸或烃基硼酸酯中间体可以制备以下表2中的实施例27至32。

Claims

1.式(I)化合物或其可药用盐,

其中

R¹选自

其中

R¹⁸每次出现时独立地表示氟或甲基；

m表示0、1、2或3；

R¹⁹和R²⁰独立地表示氢或氟；

R²¹表示氟；

q表示0、1或2且r表示0、1、2或3，条件是q+r不是0；

n和p独立地表示0、1或2；

Y表示O、CHR²³、CR²⁴R²⁵或NR²⁶,

其中

R²⁶表示C_1-3烷基或氧杂环丁基；

以及

选自以下所列化合物的化合物或其可药用盐:

2.依据权利要求1的化合物或其可药用盐，其中R¹表示

3.依据权利要求1的化合物或其可药用盐，其中R¹表示

4.依据权利要求1的化合物或其可药用盐，其中R¹表示

5.依据权利要求1至4中的任意一项的化合物或其可药用盐，其中R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸和R⁹独立地表示氢或甲基；或R³和R⁶一起形成亚甲基桥；或R³和R⁸一起形成亚乙基桥；或R⁵和R⁶一起形成亚乙基桥。

6.依据权利要求1至4中的任意一项的化合物或其可药用盐，其中Y表示O。

7.依据权利要求5的化合物或其可药用盐，其中Y表示O。

8.依据权利要求1至4中的任意一项的化合物或其可药用盐，其中Y表示CHR²³或CR²⁴R²⁵。

9.依据权利要求5的化合物或其可药用盐，其中Y表示CHR²³或CR²⁴R²⁵。

10.依据权利要求1的化合物或其可药用盐，其选自:

2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-吡啶-2-基-9H-嘌呤；

8-[4-(1H-咪唑-2-基)-苯基]-2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

2,6-双-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-吡啶-2-基-9H-嘌呤；

2,6-二-吗啉-4-基-8-吡啶-2-基-9H-嘌呤；

2,6-双-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-(1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤；

2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-(1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤；

5-[2,6-双-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-吡啶-2-基胺；

5-[2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-吡啶-2-基胺；

5-[2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-嘧啶-2-基-胺；

8-[4-(1H-咪唑-2-基)-苯基]-2,6-双-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤；

4-[2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤-8-基]-1H-吲哚-6-甲酸甲酯；和

其可药用盐。

11.依据权利要求1的化合物或其可药用盐，所述化合物为具有以下结构式的2,6-双-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-吡啶-2-基-9H-嘌呤

12.依据权利要求1的化合物或其可药用盐，所述化合物为具有以下结构式的8-(6-氟-1H-吲哚-4-基)-2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-9H-嘌呤

13.依据权利要求1的化合物或其可药用盐，所述化合物为具有以下结构式的2-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-6-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-吡啶-2-基-9H-嘌呤

14.依据权利要求1的化合物或其可药用盐，所述化合物为具有以下结构式的2,6-双-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-8-(1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤

15.药物组合物，其包含依据权利要求1至14中的任意一项的化合物或其可药用盐以及可药用赋形剂、稀释剂或载体。

16.依据权利要求1至14中的任意一项的化合物或其可药用盐在制备药物中的应用，所述药物用于治疗或预防癌症、神经变性疾病或眼科疾病。

17.组合产品，其包含依据权利要求1至14中的任意一项的化合物或其可药用盐以及另外的治疗剂。