BRPI0612734A2

BRPI0612734A2 - anticorpo monoclonal, composição farmacêutica, métodos de promoção de brotamento axonal, e de produção de um anticorpo anti-nogo, e, uso de um anticorpo anti-nogo

Info

Publication number: BRPI0612734A2
Application number: BRPI0612734-7A
Authority: BR
Inventors: Jonathan Henry Ellis; Paul Andrew Hamblin; Farhana Hussain; Alan Peter Lewis; Ruth Mcadam; Rabinder Kumar Prinjha; Paul Wilson
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 2005-07-05
Filing date: 2006-07-03
Publication date: 2010-11-30
Also published as: WO2007003421A3; CY1113310T1; MA29625B1; EA014291B1; PL1899377T3; SI1899377T1; EA200702634A1; AU2006265276B2; KR20080030960A; WO2007003421A2; CR9623A; HK1115598A1; NO20076663L; PT1899377E; JP2009500363A; AU2006265276A1; DK1899377T3; EP1899377A2; ES2391902T3; NZ564567A

Abstract

ANTICORPO MONOCLONAL, COMPOSIçãO FARMACêUTICA, METODOS DE PROMOçãO DE BROTAMENTO AXONAL, E DE PRODUçãO DE UM ANTICORPO ANTI-NOGO, E, USO DE UM ANTICORPO ANTI-NOGO. A presente invençâo se refere a anticorpos para NOGO, formulações farmacéuticas contendo eles e ao uso de tais anticorpos no tratamento e/ou profilaxia de doenças/distúrbios neurológicos.

Description

"ANTICORPO MONOCLONAL, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA,MÉTODOS DE PROMOÇÃO DE BROTAMENTO AXONAL, E DEPRODUÇÃO DE UM ANTICORPO ANTI-NOGO, E, USO DE UMANTICORPO ANTI-NOGO"

Campo da invenção

A presente invenção se refere a imunoglobulinas,particularmente anticorpos que se ligam a NOGO e neutralizam a atividadedeste, polinucleotídeos codificando tais anticorpos, formulaçõesfarmacêuticas contendo ditos anticorpos e ao uso de tais anticorpos notratamento e/ou profilaxia de doenças neurológicas.

Fundamentos da invenção

Derrame é um grande motivo de morte e incapacidade noMundo Ocidental. Não existe outra terapia aprovada para o tratamento dederrame do que plasminogênio de tecido (t-PA) que deve ser administradodentro de 3 horas de início seguindo uma varredura por tomografiacomputadorizada (CT) para excluir hemorragia. Até o momento a maioriados agentes terapêuticos dirigidos para o tratamento de derrame agudo (i.e.neuroproteção), envolveu predominantemente direcionar receptores deglutamato e suas vias de sinalização posterior conhecidos por estaremenvolvidos em morte celular aguda. Entretanto até o momento estasestratégias não obtiveram sucesso em testes clínicos e freqüentemente estãoassociadas com efeitos colaterais dose-limitantes (Hill & Hachinski, TheLancet, 352: (suppl III) 10-14 (1998)). Portanto existe uma necessidade denovas abordagens dirigidas para a melhora de morte celular seguindo atratamento de prevenir ou melhorar perda de célula neuronal em resposta aum insulto ou processo de doença. Isto pode ser atingido direcionando osneurônios diretamente ou indiretamente prevenindo perda de célula glial(incluindo oligodendrócito).

Seguindo o início de derrame, algum grau de recuperaçãofuncional espontânea é observado em muitos pacientes, sugerindo que océrebro tem a (embora limitada) capacidade de reparar e/ou remodelarseguindo lesão. Agentes que têm o potencial de estimular esta recuperaçãopodem portanto permitir que intervenção seja feita muito depois(potencialmente dias) seguindo o início de isquemia cerebral. Agentes que sãocapazes de oferecer tanto neuroproteção aguda como estimular recuperaçãofuncional podem fornecer vantagens significantes sobre estratégias neuroprotetoras potenciais atuais.

Os mecanismos fundamentando recuperação funcional sãoatualmente desconhecidos. O brotamento de axônios lesionados ou nãolesionados foi proposto como um possível mecanismo. Entretanto, emboraestudos in vivo tenham mostrado que tratamento de lesão medular ou derramecom fatores neurotróficos resulta em recuperação funcional estimulada e umgrau de brotamento axonal, estes não provaram uma ligação direta entre ograu de brotamento axonal e grau de recuperação funcional (Jakeman, et al.1998, Exp. Neurol. 154: 170-184, Kawamata et al. 1997, Proc Natl Acad. Sei.USA., 94:8179-8184, Ribotta, et al. 2000, J Neurosci. 20: 51445152). Alémdisso, brotamento axonal requer um neurônio viável. Em doenças tal comoderrame que está associado com morte celular extensiva, estimulação derecuperação funcional oferecida por um dado agente após derrame podeportanto ser através de mecanismos outros do que brotamento axonal tal comodiferenciação de células tronco endógenas, ativação de vias redundantes,mudanças em distribuição de receptor ou excitabilidade de neurônios ou glia(Fawcett & Asher, 1999, Brain Res. Bulletin, 49: 377-391, Homer & Gage,- 2000, Nature 407 963-970).

A capacidade limitada do sistema nervoso central (CNS) dereparar seguindo lesão pode ser devido a moléculas dentro do ambiente deCNS que têm um efeito inibidor em brotamento axonal (crescimento deneurito) tal como a proteína mielina NOGO (Sato S. et al (1989) Biochem.Biophys. Res. Comm.163,1473-1480; McKerracher L et al (1994) Neuron 13,805-811; Mukhopadhyay G et al (1994) Neuron 13, 757-767; Torigoe K andLundborg G (1997) Exp. Neurology 150, 254-262; Schafer et al (1996)Neuron 16, 1107-1113; W09522344; W09701352; Prinjha R et al (2000)Nature 403, 383-384; Chen MS et al (2000) Nature 403, 434-439; GrandPre Tet al (2000) Nature 403, 439-444; US005250414A; W0200005364A1;W00031235).

Três formas de NOGO humano foram identificadas: NOGO-Atendo 1192 resíduos de aminoácidos (no. de acesso de GenBank AJ251383);NOGO-B, uma variante de corte de carece de resíduos 186 a 1004 no domínioextracelular putativo (no. de acesso de GenBank AJ251384) e uma variante decorte mais curta, NOGO-C, que também carece de resíduos 186 a 1004 etambém tem domínio amino terminal alternativo menor (no. de acesso deGenBank AJ251385) (Prinjha et al (2000) acima).

Inibição das proteínas inibidoras de CNS tal como NOGOpode fornecer uma maneira terapêutica de melhorar dano neuronal epromover reparo e crescimento neuronal com isso auxiliando potencialmenterecuperação de lesão neuronal tal como aquela mantida em derrame.Exemplos de tais inibidores de NOGO podem incluir moléculas pequenas,peptídeos e anticorpos.

Anticorpos tipicamente compreendem duas cadeias pesadasligadas juntas por pontes dissulfeto e duas cadeias leves. Cada cadeia leve éligada a uma respectiva cadeia pesada por pontes dissulfeto. Cada cadeiapesada tem em uma extremidade um domínio variável seguido por diversosdomínios constantes. Cada cadeia leve tem um domínio variável em umaextremidade e um domínio constante em sua outra extremidade. O domíniovariável de cadeia leve é alinhado com o domínio variável da cadeia pesada.O domínio constante de cadeia leve é alinhado com o primeiro domínioconstante da cadeia pesada. Os domínios constantes nas cadeias leves epesadas não estão diretamente envolvidos em ligar o anticorpo a antígeno.

Os domínios variáveis de cada par de cadeias leves e pesadasformam o sítio de ligação de antígeno. Os domínios variáveis nas cadeiasleves e pesadas têm a mesma estrutura geral e cada domínio compreendequatro regiões de estrutura, cujas seqüências são relativamente conservadas,conectadas por três regiões determinantes de complementaridade (CDRs)freqüentemente referidas como regiões hipervariáveis. As quatro regiões deestrutura adotam amplamente uma conformação folha-beta e as CDRsformam alças conectando, e em alguns casos formando parte da estruturafolha-beta. As CDRs são mantidas em estreita proximidade pelas regiões deestrutura e, com as CDRs do outro domínio, contribuem para a formação dosítio de ligação de antígeno. CDRs e regiões de estrutura de anticorpos podemser determinadas por referência a Kabat et al ("Sequences of proteins ofimmunological interest" US Dept. of Health and Human Services, US Government Printing Office, 1987).

Foi relatado que um anticorpo monoclonal murino, IN-1, quefoi produzido contra NI-220/250, uma proteína mielina que é um inibidorpotente de crescimento de neurito (e subseqüentemente mostrada sendofragmento de NOGO-A), promove regeneração axonal (Caroni, P andSchwab, ME (1988) Neuron 1 85-96; Schnell, L and Schwab, ME (1990)Nature 343 269-272; Bregman, BS et al (1995) Nature 378 498-501 eThallmair, M et al (1998) Nature Neuroscience 1 124-131). Também foirelatado que NOGO-A é o alvo para IN-I (Chen et al (2000) Nature 403 434-439). Administração de fragmento Fab IN-I ou IN-I humanizado para ratosque passaram por transecção de medula espinhal, estimulou recuperação(Fiedler, M et al (2002) Protein Eng 15 931-941; Brosamle, C et al (2000) J.Neuroscience 20 8061-8068).

Anticorpos monoclonais que se ligam a NOGO são descritosem WO 04/052932 e W02005028508. WO 04/052932 descreve um anticorpomurino 11 Cl que se liga a certas formas de NOGO humano com altaafinidade.

É desejável isolar e desenvolver anticorpos monoclonaisterapeuticamente úteis adicionais que se ligam a, e inibem a atividade de,NOGO humano. O processo de neurodegeneração sustenta muitasdoenças/desordens neurológicas incluindo, mas não limitado a, doençasagudas tal como derrame (isquêmico ou hemorrágico), traumatismo crânio-encefálico e lesão medular assim como doenças crônicas incluindo mal deAlzheimer, demência fronto-temporal (tauopatias), neuropatia periférica, Malde Parkinson, Doença de Creutzfeldt-Jakob (CJD), Esquizofrenia, escleroselateral amiotrófica (ALS), esclerose múltipla, Doença de Huntington,esclerose múltipla e miosite de corpo de inclusão. Conseqüentemente umanticorpo monoclonal anti-NOGO pode ser útil no tratamento destasdoenças/desordens. Tais anticorpos para o tratamento das doenças/desordensmencionadas acima são fornecidos pela presente invenção e descritos emdetalhe abaixo.

WO 2005/061544 descreve anticorpos monoclonais de altaafinidade, incluindo um anticorpo monoclonal murino 2A10, e uma variantehumanizada deste Hl Ll 1.

Sumário da invenção

A presente invenção fornece diversos anticorpos monoclonaisque se ligam a NOGO humano. O presente pedido faz referência a muitosnúmeros de SEQ ED, os quais estão resumidos em Tabela 12, com asseqüências atuais seguindo aquela tabela até o fim deste documento.O anticorpo murino 2A10 se liga a NOGO humano com altaafinidade, e se liga à forma de NOGO que é expressa por linhagens celulareshumanas com alta afinidade. 2A10 foi humanizado com sucesso no passado(H1L11 que compreende a região variável de cadeia pesada Hl (SEQ ID NO.77) e a região variável de cadeia leve Lll (SEQ ID NO. 78)). A presenteinvenção fornece anticorpos monoclonais humanizados adicionais que retêmuma alta proporção da afinidade de, ou têm afinidade equivalente a, oanticorpo doador (2A10) para NOGO humano. Em particular os anticorpos dapresente invenção têm um alto grau de ligação a NOGO humano tanto emforma recombinante se expressa em células bacterianas (tal como E.Coli),como também na forma que é expressa por uma linhagem celular deneuroblastoma humano (por exemplo a linhagem celular de neuroblastomahumano IMR32).

Para o propósito de fornecer variantes humanizadas de 2A10,os presentes requerentes identificaram diversos resíduos de aminoácidoschave na seqüência de estrutura das regiões variáveis de 2A10 que acreditamser importante em retenção ótima de afinidade de ligação a NOGO humano.A região variável de cadeia pesada (VH) de 2A10 é fornecida em SEQ IDNO.7; a região variável de cadeia leve (VL) de 2A10 é fornecida em SEQ IDNO.8. Cadeias pesadas e leves quiméricas compreendendo as regiõesvariáveis murinas e regiões constantes humanas são fornecidas em SEQ IDNOs 9 e 10 respectivamente (a combinação das duas cadeias quiméricas édenominada HcLc). O leitor versado irá entender que SEQ ID NOs 9 e 10representam a cadeia pesada ou cadeias leves antes de qualquerprocessamento (e.g. processamento mediado por célula hospedeira) pararemoção de uma seqüência sinal. Tipicamente as formas processadas dascadeias de anticorpos irão começar em posição 20 (depois da remoção daseqüência sinal) para SEQ ID NO.9; e irão começar em posição 21 para SEQID NO. 10. Dentro do contexto da presente invenção todas as seqüências decadeia pesada e leve de comprimento completo serão fornecidas com aseqüência sinal incluída (que para todas as outras seqüências de comprimentocompleto, que não são SEQ ID NOs 9 e 10, correspondem a SEQ ID N0.75).Será perceptível para o homem versado que o anticorpo produzido por umalinhagem celular transfectada com um gene codificando qualquer destascadeias pesada e leve de comprimento completo, não deve compreender estaseqüência sinal.

Tabela 1, CDRs da cadeia pesada de 2A10 são:

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As CDRs foram identificadas de acordo com Kabat (Kabat etal. (1991) "Sequences of proteins of immunological interest"; Fifth Edition;US Department of Health and Human Services; NIH publication No 91-3242). CDRs preferivelmente são como definido por Kabat mas seguindo osprincípios de estrutura e enovelamento de proteínas como definido porChothia and Lesk, (Chothia et al., (1989) "Conformations of immunoglobulinhypervariable regions"; Nature 342, p877-883) será percebido que resíduosadicionais também podem ser considerados como sendo parte da região deligação de antígeno e são assim abrangidos pela presente invenção.

Os domínios Hl e Lll de VH e VL foram previamentedescritos em WO 2005/061544 e são um resultado das CDRs mencionadasem Tabelas 1 e 2 sendo enxertadas em regiões variáveis humanas com altahomologia para o anticorpo doador 2A10, cada construto enxertadocompreendendo adicionalmente mutações reversas em posições de kabat 93 e94 (para Hl VH) ou 4, 45 e 46 (para Ll 1 VL).O anticorpo 2A10 é capaz de se ligar a NOGO humano, etambém se liga a NOGO de Mico e Rato, e acredita-se que os novosanticorpos humanizados da presente invenção irão reter esta propriedade. Porexemplo um anticorpo monoclonal compreendendo as regiões variáveis H20 eL16 (veja abaixo para detalhes) se liga a NOGO de Mico assim como NOGOde Rato, Cynomolgus e macaco esquilo. A seqüência de fragmento A deNOGO de Mico é dada em SEQ ID NO. 113.

Anticorpos compreendendo as CDRs em Tabela 1 e 2 sãofornecidos pela presente invenção. Também abrangidos dentro da presenteinvenção são anticorpos compreendendo análogos destas CDRs.

Região Variável de Cadeia Pesada (VH)

Em um aspecto da presente invenção os anticorposcompreendem uma região variável de cadeia pesada tendo a seqüência deaminoácidos de SEQ ID NO. 77 (região variável Hl) compreendendoadicionalmente diversas substituições em uma ou mais de posições 12, 20, 38,40, 48, 67, 68, 70, 72, 74, 76, 79 e 91; caracterizados pelo fato de que cadaresíduo de aminoácido substituído é reposto com o resíduo de aminoácido naposição equivalente em SEQ ID NO 7 (a região variável de cadeia pesada doanticorpo doador 2A10) e o número de substituições é entre 1 e 13. Em outrasformas de realização o número de substituições é 1, ou 2, ou 3, ou 4, ou 5, ou6, ou 7, ou 8, ou 9, ou 10, ou 11, ou 12, ou 13. Em outras formas de realizaçãoo número de substituições é entre 2 e 13, ou 3 e 13, ou 4 e 13, ou 5 e 13, ou 6e 13, ou 7 e 13, ou 8 e 13, ou 9 e 13, ou 10 e 13 ou 11 e 13, ou 12 e 13. Emoutras formas de realização o número de substituições é 1 ou 2, ou nointervalo de 1 a 3 substituições, ou 1 a 4, ou 1 a 5, ou 1 a 6, ou 1 a 7, ou 1 a 8,ou 1 a 9, ou 1 a 10, ou 1 a 11, ou 1 a 12 substituições.

Neste contexto as substituições que são descritas sãoequivalentes em conceito a "mutações reversas" onde os resíduos deaminoácidos de estrutura humano em posições específicas dentro daseqüência de Hl são mutados reversamente para os resíduos de aminoácidosna posição equivalente dentro da seqüência de anticorpo doador 2A10.

A menos que de outra maneira especificamente determinado,quando uma posição numérica de um resíduo de aminoácido encontradodentro de uma seqüência específica neste documento, por exemplo "posição12", é pretendido que o leitor versado determine o primeiro aminoácido naseqüência a posição "1" e conte a partir de posição um e identifique oaminoácido que está na posição desejada, neste exemplo o décimo segundoresíduo de aminoácido na seqüência. O leitor versado irá perceber que estesistema de numeração não corresponde ao sistema de numeração de Kabatque é freqüentemente usado para posições de aminoácidos dentro deseqüências de anticorpos. A Tabela seguinte (Tabela 3) ilustra assubstituições/mutações reversas da presente invenção e dá suas posiçõesnuméricas e o número de Kabat para aquela posição numérica:

Tabela 3

Resíduo

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Com referência a Tabela 3, em uma forma de realização osanticorpos monoclonais da presente invenção compreendem asubstituição/mutação reversa em posição numérica 79 para formar anticorposde "Classe A".Para afinidade de ligação ótima, foi encontrado que os pares deresíduos de aminoácidos em posições 48 e 68, devem ser I e Arespectivamente (como eles existem em 2A10) ou M e V respectivamente(como eles existem em Hl). Por conseguinte, de novo com referência aTabela 3, em outra forma de realização, o anticorpo monoclonal "Classe B",compreende a substituição em posições 79, 48 e 68.

Em outra forma de realização os anticorpos monoclonais de"Classe A" ou "Classe B" ("Classe C") compreendem adicionalmente umasubstituição em posições 40 e/ou 67.

Em outra forma de realização os anticorpos monoclonais"Classe C" da presente invenção compreendem adicionalmente umasubstituição em posições 38, 72 ou 70 para formar anticorpos "Classe D".

Em outra forma de realização os anticorpos monoclonais"Classe D" compreendem adicionalmente substituições em uma ou mais deposições 12, 20, 74, 76 ou 91 ("Classe E").

A Tabela seguinte inclui detalhes de 20 diferentes regiõesvariáveis de cadeia pesada (VH) que podem formar parte dos anticorpos dapresente invenção. Cada uma das VH descrita é baseada na Hl VH (SEQ IDNO. 77) compreendendo adicionalmente as substituições mencionadas naTabela (Tabela 4) onde o resíduo Hl na posição relevante é substituído peloresíduo 2A10 naquela posição (na Tabela, " significa que não existe nenhumasubstituição naquela posição, e então o resíduo permanece como na seqüênciade Hl):

Tabela 4

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Por conseguinte é fornecido um anticorpo monoclonalcompreendendo a região variável de cadeia pesada tendo uma seqüência dadaem qualquer uma de SEQ ID NOs: 11-18 ou 85-91; ou variantes destascompreendendo análogos das CDRs. Em outra forma de realização éfornecido um anticorpo monoclonal compreendendo uma cadeia pesada tendouma seqüência dada em qualquer uma de SEQ ID NOs: 26-33 ou 92-98; ouvariantes destas compreendendo análogos das CDRs.

Em uma forma de realização particular o anticorpocompreende as regiões VH fornecidas em SEQ ID NOs 11, 12, 16, 18, 85, 86,87 ou 91 ou variantes destas compreendendo análogos das CDRs; ou ascadeias pesadas fornecidas em SEQ ID Nos 26, 27, 31, 33, 92, 93, 94 ou 98ou variantes destas compreendendo análogos das CDRs.

Região Variável de Cadeia Leve

Em um aspecto da presente invenção os anticorposcompreendem uma região variável de cadeia leve tendo a seqüência deaminoácidos de SEQ ID NO. 20 (região variável L13) opcionalmentecompreendendo adicionalmente diversas substituições em uma ou mais deposições 4, 7, 11, 19, 42, 64 e 70; caracterizados pelo fato de que cada resíduode aminoácido substituído é reposto com o resíduo de aminoácido na posiçãoequivalente em SEQ ID NO. 8 (a região variável de cadeia leve do anticorpodoador 2A10) e o número de substituições é entre O e 7. Em outras formas derealização o número de substituições é 1, ou 2, ou 3, ou 4, ou 5, ou 6, ou 7.Em outras formas de realização o número de substituições é entre 2 e 7, ou 3 e7, ou 4 e 7, ou 5 e 7, ou 6 e 7.

Em outras formas de realização o número de substituições é 1ou 2, ou no intervalo de 1 a 3 substituições, ou 1 a 4, ou 1 a 5, ou 1 a 6.

A Tabela seguinte (Tabela 5) ilustra as substituições/mutaçõesreversas da presente invenção e dá suas posições numéricas e o número deKabat para sua posição numérica:

Tabela 5

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Com referência a Tabela 5, em outra forma de realização, osanticorpos monoclonais "Classe X" da presente invenção compreendem umaregião VL tendo a substituição/mutação reversa em posições 11 e 19. Emoutra forma de realização os anticorpos monoclonais "Classe Y" de "ClasseX" compreendem adicionalmente a substituição em posição 42. Em umaforma de realização adicional os anticorpos monoclonais de "Classe X" ou"Classe Y" compreendem adicionalmente uma mutação reversa em posições7, 64 ou 70 para formar "Classe Z".

De novo com referência a Tabela 5, em outra forma derealização os anticorpos monoclonais da presente invenção compreendemuma região VL tendo uma substituição em posição 4 (correspondendo a Lll(SEQ ID NO.78)).

A Tabela seguinte (Tabela 6) inclui detalhes de sete diferentesregiões variáveis de cadeia leve (VL) que podem formar parte dos anticorposda presente invenção ou variantes destas compreendendo análogos das CDRs.Cada uma das VL descrita é, ou é baseada em, a Ll3 VL (SEQ ED NO. 20)opcionalmente compreendendo adicionalmente as substituições mencionadasna Tabela onde o resíduo L13 na posição relevante é substituído com oresíduo 2A10 naquela posição (na Tabela, "-" significa que não existenenhuma substituição naquela posição, e então o resíduo permanece como naseqüência de L13):

Tabela 6,

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Por conseguinte é fornecido um anticorpo monoclonalcompreendendo a região variável de cadeia leve tendo uma seqüência dadaem qualquer uma de SEQ ID NOs: 20-25; ou variantes destas compreendendoanálogos das CDRs. Em outra forma de realização é fornecido um anticorpomonoclonal compreendendo uma cadeia leve tendo uma seqüência dada emqualquer uma de SEQ ID NOs: 35-40; ou variantes destas compreendendoanálogos das CDRs.

Alternativamente é fornecido um anticorpo monoclonalcompreendendo a região variável de cadeia leve tendo a seqüência dada emSEQ ID NO. 19, ou uma cadeia leve tendo a seqüência dada em SEQ ID NO. 34.

Em uma forma de realização particular o anticorpocompreende as regiões VL fornecidas em SEQ ID NOs 20, 23 e 25 ouvariantes destas compreendendo análogos das CDRs ou as cadeias levesfornecidas em SEQ ID NOs 35, 38 e 40 ou variantes destas compreendendoanálogos das CDRs.

Combinações específicas de regiões variáveis de cadeia pesada e leve

A presente invenção fornece anticorpos ou os semelhantes,compreendendo todas as combinações possíveis das regiões variáveis decadeia pesada e regiões variáveis de cadeia leve que são descritas acima.Também contempladas nestas combinações, e nas combinações listadasabaixo, são as seqüências específicas referidas como ou variantes destascompreendendo análogos das CDRs naturalmente ocorrentes.

Os anticorpos da presente invenção compreendem uma regiãovariável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve.

Em uma forma de realização o anticorpo compreende:

(a) Uma região variável de cadeia pesada tendo a seqüência deaminoácidos de SEQ ID NO. 77 (região variável Hl)compreendendo adicionalmente diversas substituições em uma oumais de posições 12, 20, 38, 40, 48, 67, 68, 70, 72, 74, 76, 79 e 91;caracterizada pelo fato de que cada resíduo de aminoácidosubstituído é reposto com o resíduo de aminoácido na posiçãoequivalente em SEQ ID NO 7 (a região variável de cadeia pesadado anticorpo doador 2A10) e o número de substituições é entre 1 e13. Em outras formas de realização o número de substituições é 1,ou 2, ou 3, ou 4, ou 5, ou 6, ou 7, ou 8, ou 9, ou 10, ou 11, ou 12, ou 13; e

(b) uma região variável de cadeia leve selecionada a partir de SEQ IDNOs 20-25 ou 78.

Formas de realização particulares são anticorposcompreendendo as seguintes combinações de regiões variáveis de cadeiapesada e leve: H1L13 (SEQ ID 77 + SEQ ID 20), H5L13 (SEQ ID 11 + SEQID 20), H6L13 (SEQ ID 12 + SEQ ID 20), H14L13 (SEQ ID 14 + SEQ ID20), H15L13 (SEQ ID 15 + SEQ ID 20), H16L13 (SEQ ID 16 + SEQ ID 20),H17L13 (SEQ ID 17 + SEQ ID 20), H18L13 (SEQ ID 18 + SEQ ID 20),H19L13 (SEQ ID 85 + SEQ ID 20),'H20L13 (SEQ ID 86 + SEQ ID 20),H21L13 (SEQ ED 87 + SEQ ID 20), H22L13 (SEQ ID 88 + SEQ ID 20),H23L13 (SEQ ID 89 + SEQ ID 20), H24L13 (SEQ ID 90 + SEQ ID 20),H25L13 (SEQ ID 91 + SEQ ID 20), H700L13 (SEQ ID 13 + SEQ ID 20),H1L16 (SEQ ID 77 + SEQ ID 23), H5L16 (SEQ ID 11 + SEQ ID 23), H6L16(SEQ ID 12 + SEQ ID 23), H14L16 (SEQ ID 14 + SEQ ID 23), H15L16(SEQ ID 15 + SEQ ID 23), H16L16 (SEQ ID 16 + SEQ ID 23), H17L16(SEQ ID 17 + SEQ ID 23), H18L16 (SEQ ID 18 + SEQ ID 23), H19L16(SEQ ID 85 + SEQ ID 23), H20L16 (SEQ ID 86 + SEQ ID 23), H21L16(SEQ ID 87 + SEQ ID 23), H22L16 (SEQ ID 88 + SEQ ID 23), H23L16(SEQ ID 89 + SEQ ID 23), H24L16 (SEQ ID 90 + SEQ ID 23), H25L16(SEQ ID 91 + SEQ ID 23), H700L16 (SEQ ID 13 + SEQ ID 23), H1L18(SEQ ID 77 + SEQ ID 25), H5L18 (SEQ ID 11 + SEQ ID 25), H6L18 (SEQID 12 + SEQ ID 25), H14L18 (SEQ ID 14 + SEQ ID 25), H15L18 (SEQ ID15 + SEQ ID 25), H16L18 (SEQ ID 16 + SEQ ID 25), H17L18 (SEQ ID 17 +SEQ ID 25), H18L18 (SEQ ID 18 + SEQ ID 25), H19L18 (SEQ ID 85 + SEQID 25), H20L18 (SEQ ID 86 + SEQ ID 25), H21L18 (SEQ ID 87 + SEQ ID25), H22L18 (SEQ ID 88 + SEQ ID 25), H23L18 (SEQ ID 89 + SEQ ID 25),H24L18 (SEQ ID 90 + SEQ ID 25), H25L18 (SEQ ID 91 + SEQ ID 25),H700L18 (SEQ ID 13 + SEQ ID 25).

Outras formas de realização são anticorpos compreendendo asseguintes combinações de regiões variáveis de cadeia pesada e leve: HlL 14(SEQ ID 77 + SEQ ID 21), H5L14 (SEQ ID 11 + SEQ ID 21), H6L14 (SEQID 12 + SEQ ID 21), H14L14 (SEQ ID 14 + SEQ ID 21), H15L14 (SEQ ID15 + SEQ ID 21), H16L14 (SEQ ID 16 + SEQ ID 21), H17L14 (SEQ ID 17 +SEQ ID 21), H18L14 (SEQ ID 18 + SEQ ID 21), H19L14 (SEQ ID 85 + SEQID 21), H20L14 (SEQ ID 86 + SEQ ID 21), H21L14 (SEQ ID 87 + SEQ ID21), H22L14 (SEQ ID 88 + SEQ ID 21), H23L14 (SEQ ID 89 + SEQ ID 21),H24L14 (SEQ ID 90 + SEQ ID 21), H25L14 (SEQ ID 91 + SEQ ID 21),H700L14 (SEQ ID 13 + SEQ ED 21), H1L15 (SEQ ID 77 + SEQ ID 22),H5L15 (SEQ ID 11 + SEQ ID 22), H6L15 (SEQ ID 12 + SEQ ID 22),H14L15 (SEQ ID 14 + SEQ ID 22), H15L15 (SEQ ID 15 + SEQ ID 22),H16L15 (SEQ ID 16 + SEQ ID 22), H17L15 (SEQ ID 17 + SEQ ID 22),H18L15 (SEQ ID 18 + SEQ ID 22), H19L15 (SEQ ID 85 + SEQ ID 22),H20L15 (SEQ ID 86 + SEQ ID 22), H21L15 (SEQ ID 87 + SEQ ID 22),H22L15 (SEQ ID 88 + SEQ ID 22), H23L15 (SEQ ID 89 + SEQ ID 22),H24L15 (SEQ ID 90 + SEQ ID 22), H25L15 (SEQ ID 91 + SEQ ID 22),H700L15 (SEQ ID 13 + SEQ ID 22), H1L17 (SEQ ID 77 + SEQ ID 24),H5L17 (SEQ ID 11 + SEQ ID 24), H6L17 (SEQ ID 12 + SEQ ID 24),H14L17 (SEQ ID 14 + SEQ ID 24), H15L17 (SEQ ID 15 + SEQ ID 24),H16L17 (SEQ ID 16 + SEQ ID 24), H17L17 (SEQ ID 17 + SEQ ID 24),H18L17 (SEQ ID 18 + SEQ ID 24), H19L17 (SEQ ID 85 + SEQ ID 24),H20L17 (SEQ ID 86 + SEQ ID 24), H21L17 (SEQ ID 87 + SEQ ID 24),H22L17 (SEQ ID 88 + SEQ ID 24), H23L17 (SEQ ID 89 + SEQ ID 24),H24L17 (SEQ ID 90 + SEQ ID 24), H25L17 (SEQ ID 91 + SEQ ID 24),H700L17 (SEQ ID 13 + SEQ ID 24).

Formas de realização adicionais são anticorposPb compreendendo as seguintes combinações de regiões variáveis de cadeiapesada e leve: H1L6 (SEQ ID 77 + SEQ ID 19), H5L6 (SEQ ID 11 + SEQ ID19), H6L6 (SEQ ID 12 + SEQ ID 19), H14L6 (SEQ ID 14 + SEQ ID 19),H15L6 (SEQ ID 15 + SEQ ID 19), H16L6 (SEQ ID 16 + SEQ ID 19), H17L6(SEQ ID 17 + SEQ ID 19), H18L6 (SEQ ID 18 + SEQ ID 19), H19L6 (SEQID 85 + SEQ ID 19), H20L6 (SEQ ID 86 + SEQ ID 19), H21L6 (SEQ ID 87+ SEQ ID 19), H22L6 (SEQ ID 88 + SEQ ID 19), H23L6 (SEQ ID 89 + SEQID 19), H24L6 (SEQ ID 90 + SEQ ID 19), H25L6 (SEQ ID 91 + SEQ ID 19),H700L6 (SEQ ID 13 + SEQ ID 19), H5L11 (SEQ ID 11 + SEQ ID 78),H6L11 (SEQ ID 12 + SEQ ID 78), H14L11 (SEQ ID 14 + SEQ ID 78),H15L11 (SEQ ID 15 + SEQ ID 78), H16L11 (SEQ ID 16 + SEQ ID 78),H17L11 (SEQ ID 17 + SEQ ID 78), H18L11 (SEQ ID 18 + SEQ ID 78),H19L11 (SEQ ID 85 + SEQ ID 78), H20L11 (SEQ ID 86 + SEQ ID 78),H21L11 (SEQ ID 87 + SEQ ID 78), H22L11 (SEQ ID 88 + SEQ ID 78),H23L11 (SEQ ID 89 + SEQ ID 78), H24L11 (SEQ ID 90 + SEQ ID 78),H25L11 (SEQ ID 91 + SEQ ID 78), H700L11 (SEQ ID 13 + SEQ ID 78).

Em uma forma de realização o anticorpo compreende asseguintes regiões variáveis de cadeia Pesada e Leve H6L13, H16L16,H20L13 ou H20L16 ou variantes destas compreendendo análogos das CDRsnaturalmente ocorrentes. Em uma forma de realização o anticorpocompreende H20L16 ou variante desta compreendendo um análogo dasCDRs naturalmente ocorrentes.

Anticorpos Completos

Adicionalmente, a invenção também fornece um anticorpohumanizado que se liga a e neutraliza NOGO, preferivelmente NOGOhumano, mais preferivelmente NOGO-A humano. Mais especificamente éfornecido um anticorpo humanizado compreendendo uma região variável decadeia pesada como descrito neste lugar e uma região variável de cadeia levecomo descrito neste lugar.

Os anticorpos humanizados da presente invenção se ligam aNOGO humano com uma afinidade comparável com aquela do anticorpodoador murino 2A10 ou versão quimérica deste (HcLc). Em uma forma derealização a ligação do anticorpo da presente invenção com NOGO tem umaconstante de afinidade (KD, como medido por técnicas BiaCore) dentro de 10vezes de 2A10, e em outra forma de realização a constante de afinidade édentro de três ou duas vezes de 2A10, em outra forma de realização aconstante de afinidade não é diferente de 2A10 (ou 2A10 HcLc). Em outraforma de realização a constante de afinidade é dentro de três ou duas vezesdaquela de 2A10 e a taxa de dissociação (kd) é dentro de 10 vezes, ou trêsvezes, ou duas vezes de 2A10, em outra forma de realização a taxa dedissociação não é diferente de 2A10 (ou 2A10 HcLc). O método de medir aconstante de afinidade e a taxa de dissociação do anticorpo deve ser claro parao leitor versado, entretanto o método de análise cinética de BiaCore dado emExemplo 5 deste documento é ilustrativo sob esse aspecto. Por exemplo, aconstante de afinidade e a taxa de dissociação de 2A10 como medido poranálise cinética de BiaCore comumente é na região de InM e 1,84 xlO" (kdl/s) respectivamente; no mesmo ensaio os anticorpos de uma forma derealização da presente invenção terão uma constante de afinidade de menosdo que 8-IOnM e 1,84x10"2. De uma maneira similar à análise do anticorpo2A10 quimérico, HcLc, terá uma constante de afinidade de cerca de 1 a 2nMe2xl0" a4xl0" (kd l/s) respectivamente

Em formas de realização típicas, os anticorpos da invenção sãoda classe IgG, mais tipicamente IgGl ou IgG4 humana, com uma cadeia levehumana tipo K.

Um aspecto adicional da invenção fornece uma composiçãofarmacêutica compreendendo um anticorpo anti-NOGO da presente invençãoou fragmento funcional deste junto com um diluente ou carreadorfarmaceuticamente aceitável.

Em um aspecto adicional, a presente invenção fornece ummétodo de tratamento ou profilaxia de derrame (particularmente derrameisquêmico) e outras doenças neurológicas, em particular mal de Alzheimer ouEsclerose múltipla, em um humano que compreende administrar a ditohumano com necessidade deste uma quantidade efetiva de um anticorpo anti-NOGO da invenção ou fragmentos funcionais destes.

Em outro aspecto, a invenção fornece o uso de um anticorpoanti-NOGO da invenção ou um fragmento funcional deste na preparação deum medicamento para tratamento ou profilaxia de derrame (particularmentederrame isquêmico) e outras doenças neurológicas, em particular mal deAlzheimer ou Esclerose múltipla.

Em um aspecto adicional, a presente invenção fornece ummétodo de inibir neurodegeneração e/ou promover recuperação funcional emum paciente humano afligido com, ou em risco de desenvolver, um derrame(particularmente derrame isquêmico) ou outra doença neurológica, emparticular mal de Alzheimer ou Esclerose múltipla, que compreendeadministrar a dito humano com necessidade deste uma quantidade efetiva deum anticorpo anti-NOGO da invenção ou um fragmento funcional deste.

Em um aspecto ainda adicional, a invenção fornece o uso deum anticorpo anti-NOGO da invenção ou um fragmento funcional deste napreparação de um medicamento para inibir neurodegeneração e/ou promoverrecuperação funcional em um paciente humano afligido com, ou em risco dedesenvolver, um derrame e outra doença neurológica, em particular mal deAlzheimer ou Esclerose múltipla.

Em outros aspectos da presente invenção é fornecido o uso deanticorpos antiNOGO da presente invenção em um método de tratamento, ouna fabricação de um medicamento para o tratamento, de lesão nervosatraumática, tal como lesão medular ou outra lesão traumática para o sistemanervoso.

Outros aspectos e vantagens da presente invenção sãodescritos adicionalmente na descrição detalhada e nas formas de realizaçãopreferidas desta.

Em uma forma de realização os anticorpos de comprimentocompleto são aqueles compreendendo as cadeias leves de SEQ ID NOs 34-40e as cadeias pesadas de SEQ ID NOs 92-98; e em particular as cadeias levesde SEQ ID NOs 35, 38 ou 40 e cadeias pesadas de SEQ ID NOs 92, 93, 94 ou98. Será perceptível para aqueles versados na arte que todas as seqüênciasdadas para as cadeias de anticorpo de comprimento completo em Tabela 7 e12 (e seqüências anexas) representam as cadeias pesadas ou leves antes dequalquer processamento (e.g. processamento mediado por célula hospedeira)para remoção de uma seqüência sinal. Tipicamente as formas processadas dascadeias de anticorpos irão começar em posição 20 (depois da remoção daseqüência sinal (resíduos 1-19) que corresponde a SEQ ID NO. 75). Apresente invenção fornece os anticorpos tendo as seqüências de polipeptídeoslistadas (depois de remoção dos primeiros 19 aminoácidos da seqüênciasinal), e também fornece os anticorpos na forma na qual eles são produzidos epurificados a partir de células hospedeiras expressando os polinucleotídeoscodificando a cadeia pesada e leve.

Tabela 7, Anticorpos de comprimento completo específicos incluem:

<table>table see original document page 21</column></row><table>

Em uma forma de realização o anticorpo é H6L13FL, H16L16FL, H20L13 FL ou H20L16 FL. Em uma forma de realização o anticorpo éH20L16 FL, ou variante deste compreendendo um análogo de CDR.

Alternativamente as substituições mencionadas acima, sendoas mutações reversas para o resíduo de aminoácido exato encontrado naposição equivalente dentro da seqüência murina de doador 2A10, pode serqualquer substituição para um aminoácido que é uma substituiçãoconservativa do resíduo exato encontrado na posição equivalente dentro daseqüência murina de doador 2A10. O termo "substituição conservativa" éclaro para o leitor versado, e inclui por exemplo uma substituição de umaminoácido por outro resíduo de aminoácido tendo uma propriedade física,química ou estrutural similar tal como pH, carga, hidrofobicidade,aromaticidade etc.

Em uma forma de realização da presente invenção osanticorpos não são líticos, nos quais a região constante não é capaz de se ligara complemento e/ou mediar ADCC (citotoxicidade celular dependente deanticorpo). As regiões constantes dos anticorpos de comprimento completosão portanto ou baseadas em domínios constantes que naturalmente não sãolíticos, tal como IgG4 humana, ou compreendem inativar substituições emposições 235 e 237 dentro de uma região constante de IgGl humana (vejaEP0307434 para mais detalhes).

Descrição das Figuras

Figura 1 A e B, dados de ELISA para ligação de sobrenadantesde anticorpo monoclonal a NOGO humano recombinante.

Figura 2 A e B, dados de ELISA para ligação de anticorpomonoclonal purificado a NOGO humano recombinante.

Figura 3 A e B, dados de ELISA para ligação de sobrenadantesde anticorpo monoclonal a NOGO humano recombinante.

Figura 4 A e B, dados de ELISA para ligação de sobrenadantesde anticorpo monoclonal a NOGO humano recombinante.

Figura 5 A e B, dados de ELISA para ligação de sobrenadantesde anticorpo monoclonal a NOGO humano recombinante.

Figura 6, A a F, dados de FACS para ligação de anticorpopurificado a NOGO humano expresso por células de neuroblastoma humano.

Figura 7, resultados de ELISA de competição

Figura 8, dados de ELISA para ligação de anticorposmonoclonais a NOGO humano recombinante.

Figura 9, dados de ELISA para ligação de anticorposmonoclonais a NOGO humano recombinante.

Figura 10, dados de ELISA para ligação de anticorposmonoclonais a NOGO humano recombinante.

Figura 11, dados de ELISA para ligação de anticorposmonoclonais a NOGO humano recombinante.

Figura 12 A e B, dados de ELISA para ligação de anticorposmonoclonais a NOGO humano recombinante.

Figura 13, dados de FAGS para ligação de anticorpopurificado a NOGO humano expresso por células de neuroblastoma humano.

Figura 14 A a C, dados de FAGS para ligação de anticorpopurificado a NOGO humano expresso por células de neuroblastoma humano.Descrição detalhada da invenção

Anticorpos da invenção tipicamente têm a estrutura de um anticorpo natural oufragmento funcional deste. O anticorpo pode portanto compreender um anticorpo de comprimento completo,

um fragmento (Fab )2, um fragmento Fab, um dímero de cadeia leve ou umdímero de cadeia pesada. O anticorpo pode ser uma IgGl, IgG2, IgG3, ouIgG4; ou IgM; IgA, IgE ou IgD ou uma variante modificada destas. Odomínio constante da cadeia pesada de anticorpo pode ser selecionado porconseguinte. O domínio constante de cadeia leve pode ser um domínioconstante kappa ou lambdum. Além disso, o anticorpo pode compreendermodificações de todas as classes eg. dímeros de IgG, mutantes de Fc que nãose ligam mais a receptores de Fc ou mediam ligação de Clq. O anticorpotambém pode ser um anticorpo quimérico do tipo descrito em W086/01533que compreende uma região de ligação de antígeno e uma região de nãoimunoglobulina. A região de ligação de antígeno é um domínio variável decadeia leve ou domínio variável de cadeia pesada de anticorpo. Tipicamente aregião de ligação de antígeno compreende tanto domínios variáveis de cadeialeve como pesada. A região de não imunoglobulina é fundida em seu términoC à região de ligação de antígeno. A região de não imunoglobulina étipicamente uma proteína não imunoglobulina e pode ser uma enzima, umatoxina ou proteína tendo especificidade de ligação conhecida. As duas regiõesdeste tipo de anticorpo quimérico podem ser conectadas através de umaseqüência ligante clivável. Imunoadesinas tendo as CDRs como descritoacima também são contempladas na presente invenção.

A região constante é selecionada de acordo com afuncionalidade requerida. Normalmente uma IgGl irá demonstrar capacidadelítica através de ligação a complemento e/ou irá mediar ADCC (citotoxicidadecelular dependente de anticorpo). Uma IgG4 será preferida se um anticorpobloqueador não citotóxico é requerido. Entretanto, IgG4 anticorpos podemdemonstrar instabilidade em produção e portanto pode ser mais preferívelmodificar a IgGl geralmente mais estável. Modificações sugeridas sãodescritas em EP0307434 modificações preferidas incluem em posições 235 e237. A invenção portanto fornece uma forma lítica ou uma não lítica de umanticorpo de acordo com a invenção.

Em uma forma de realização o anticorpo da invenção é umanticorpo IgGl não lítico de comprimento completo (i.e. um tetrâmerocompreendendo duas cadeias pesadas e duas leves) tendo as seqüências deVH ou VL descritas acima. Em outra forma de realização nós fornecemos umanticorpo IgGl não lítico de comprimento completo tendo as VHs de SEQ IDNOs 11, 12, 16, 18 ou 85,86, 87 ou 91; e VLs de SEQ ID NOs 20, 23 ou 25.

Em um aspecto adicional, a invenção fornece polinucleotídeoscodificando as cadeias pesadas ou leves ou regiões variáveis descritas. Porexemplo a invenção fornece polinucleotídeos codificando VH tendo aseqüência contida em SEQ ID NOs 45-52, 99-105 e regiões VL tendo aseqüência contida em SEQ ID NOs 53-59.

"NOGO" se refere a qualquer polipeptídeo NOGO, incluindoformas variantes. Isto inclui, mas não é limitado é, NOGO-A tendo 1192resíduos de aminoácidos (no. de acesso de GenBank AJ251383); NOGO-B,uma variante de corte de carece de resíduos 186 a 1004 no domínioextracelular putativo (no. de acesso de GenBank AJ251384) e uma variante decorte mais curta, NOGO-C, que também carece de resíduos 186 a 1004 etambém tem domínio amino terminal alternativo (no. de acesso de GenBankAJ251385) (Prinjha et al (2000) acima). Todas as referências a "NOGO" nestelugar são entendidas como incluindo qualquer e todas as formas variantes deNOGO tal como NOGO-A e as variantes de corte descritas, a menos que umaforma específica seja indicada.

"Neutralizar" e variações gramaticais disto se referem àinibição, ou total ou parcial, de função de NOGO incluindo sua ligação aneurônios e inibição de crescimento de neurito.

Os termos Fv, Fe, Fd, Fab, ou F(ab)2 são usados com seussignificados padrão (veja, e.g., Harlow et al., Antibodies A LaboratoryManual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)).

Um "anticorpo quimérico" se refere a um tipo de anticorpomanipulado que contém uma região variável naturalmente ocorrente (cadeialeve e cadeias pesadas) derivada de um anticorpo doador em associação comregiões constantes de cadeia leve e pesada derivadas de um anticorpo aceptor.

Um "anticorpo humanizado" se refere a um tipo de anticorpomanipulado tendo suas CDRs derivadas de uma imunoglobulina de doadornão humano, as partes derivadas de imunoglobulina remanescente damolécula sendo derivadas de uma (ou mais) imunoglobulina(s) humana(s).Em adição, resíduos de apoio de estrutura podem ser alterados para preservarafinidade de ligação (veja, e.g., Queen et al., Proc. Natl Acad Sci USA,86:10029-10032 (1989), Hodgson et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)). Umanticorpo aceptor humano adequado pode ser um selecionado a partir de umbanco de dados convencional, e.g., o banco de dados de KABAT®, banco dedados de Los Alamos, e banco de dados de Swiss Protein, por homologia comas seqüências de nucleotídeos e aminoácidos do anticorpo doador. Umanticorpo humano caracterizado por uma homologia com as regiões deestrutura do anticorpo doador (em uma base de aminoácidos) pode seradequado para fornecer uma região constante de cadeia pesada e/ou umaregião de estrutura variável de cadeia pesada para inserção das CDRs dedoador. Um anticorpo aceptor adequado capaz de doar regiões de estruturaconstantes ou variáveis de cadeia leve pode ser selecionado de uma maneirasimilar. Deve ser observado que não é requerido que as cadeias pesadas eleves do anticorpo aceptor sejam originadas do mesmo anticorpo aceptor. Aarte anterior descreve diversas maneiras de produzir tais anticorposhumanizados - veja por exemplo Patente Européia-A-0239400 e PatenteEuropéia -A-054951

O termo "anticorpo doador" se refere a um anticorpo(monoclonal, e/ou recombinante) que contribui as seqüências de aminoácidosde suas regiões variáveis, CDRs, ou outros fragmentos funcionais ou análogosdestes para um primeiro parceiro de imunoglobulina, de forma a fornecer aregião de codificação de imunoglobulina alterada e anticorpo alteradoexpresso resultante com a especificidade antigênica e atividade neutralizantecaracterística do anticorpo doador.

O termo "anticorpo aceptor" se refere a um anticorpo(monoclonal e/ou recombinante) heterólogo ao anticorpo doador, quecontribui todas (ou qualquer porção, mas preferivelmente todas) as seqüênciasde aminoácidos codificando suas regiões de estrutura de cadeia pesada e/ouleve e/ou suas regiões constantes de cadeia pesada e/ou leve para o primeiroparceiro de imunoglobulina. Preferivelmente um anticorpo humano é oanticorpo aceptor.

"CDRs" são definidas como as seqüências de aminoácidos daregião determinante de complementaridade de um anticorpo que são asregiões hipervariáveis de cadeias pesadas e leves de imunoglobulina. Veja,e.g., Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th Ed.,U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health(1987). Existem três CDRs (ou regiões de CDR) de cadeia pesada e três decadeia leve na porção variável de uma imunoglobulina. Assim, "CDRs" comousado neste lugar se refere a todas as três CDRs de cadeia pesada, ou todas astrês CDRs de cadeia leve (ou tanto todas as CDRs de cadeia pesada comotodas as de cadeia leve, se apropriado).

A estrutura e enovelamento protéico do anticorpo podesignificar que outros resíduos são considerados parte da região de ligação deantígeno e devem ser entendidos assim por uma pessoa versada. Veja porexemplo Chothia et al., (1989) Conformations of immunoglobulinhypervariable regions; Nature 342, p877-883.

CDRs fornecem a maioria de resíduos de contato para aligação do anticorpo ao antígeno ou epítopo. CDRs de interesse nestainvenção são derivados de seqüências variáveis de cadeia pesada e leve deanticorpo doador, e incluem análogos das CDRs naturalmente ocorrentes,cujos análogos também compartilham ou retêm a mesma especificidade deligação de antígeno e/ou capacidade neutralizante que o anticorpo doador doqual elas são derivadas.

Um "fragmento funcional" é uma seqüência variável parcial decadeia pesada ou leve (e.g., deleções secundárias no término amino oucarboxi da região variável de imunoglobulina) que retém a mesmaespecificidade de ligação de antígeno e a mesma ou similar capacidadeneutralizante que o anticorpo do qual o fragmento foi derivado.

Um "análogo" é uma seqüência de aminoácidos modificadapor pelo menos um aminoácido, caracterizado pelo fato de que ditamodificação pode ser química ou uma substituição ou um rearranjo de unspoucos aminoácidos (i.e., não mais do que 10), cuja modificação permite quea seqüência de aminoácidos retenha as características biológicas, e.g.,especificidade de antígeno e alta afinidade, da seqüência não modificada.A presente invenção também inclui o uso de fragmentos Fabou fragmentos F(ab')2 derivados de mAbs da presente invenção dirigidoscontra NOGO. Um fragmento Fab contém a cadeia leve inteira e porçãoamino terminal da cadeia pesada; e um fragmento F(ab')2 é o fragmentoformado por dois fragmentos Fab ligados por pontes dissulfeto. FragmentosFab e fragmentos F(ab')2 podem ser obtidos por meios convencionais, e.g.,clivagem de mAb com as enzimas proteolíticas apropriadas, papaína e/oupepsina, ou por métodos recombinantes. Os fragmentos Fab e F(ab')2 sãoúteis eles mesmos como terapêuticos ou profiláticos, e como doadores deseqüências incluindo as regiões variáveis e seqüências de CDR úteis naformação de anticorpos recombinantes ou humanizados como descrito nestelugar.

Em aspectos adicionais da invenção fornecemos diacorpos(bivalentes ou biespecíficos), triacorpos, tetracorpos e outras espécies deproteína scFV multivalente tendo uma ou mais CDRs como descrito acimaque se ligam a e neutralizam função de NOGO.

Em uma forma de realização ainda adicional, o anticorpo dainvenção pode ter acoplado a ele um agente adicional. Por exemplo, oprocedimento de tecnologia de DNA recombinante pode ser usado paraproduzir um anticorpo manipulado da invenção no qual o fragmento Fc oudomínio CH2-CH3 de uma molécula de anticorpo de comprimento completofoi substituído por uma enzima ou outra molécula detectável (i.e., um efetorde polipeptídeo ou molécula repórter).

Os anticorpos da presente invenção pode ser produzidosfazendo um vetor de expressão convencional ou plasmídeo recombinantecolocando estas seqüências de codificação para o anticorpo em associaçãooperativa com seqüências de controle reguladoras convencionais capazes decontrolar a replicação e expressão em, e/ou secreção a partir de, uma célulahospedeira. Seqüências reguladoras incluem seqüências de promotor, e.g.,promotor CMV, e seqüências sinal, que podem ser derivadas de outrosanticorpos conhecidos. Similarmente, um segundo vetor de expressão podeser produzido tendo uma seqüência de DNA que codifica uma cadeia leve oupesada de anticorpo complementar. Preferivelmente este segundo vetor deexpressão é idêntico ao primeiro exceto na medida em que as seqüências decodificação e marcadores selecionáveis são relacionadas, de modo a assegurartanto quanto possível que cada cadeia de polipeptídeo seja funcionalmenteexpressa. Alternativamente, as seqüências de codificação de cadeia pesada eleve para o anticorpo alterado podem residir em um único vetor.

Uma célula hospedeira selecionada é co-transfectada portécnicas convencionais tanto com o primeiro como segundo vetor (ousimplesmente transfectada por um único vetor) para criar a célula hospedeiratransfectada da invenção compreendendo tanto as cadeias leves e pesadasrecombinantes ou sintéticas. A célula transfectada é então cultivada portécnicas convencionais para produzir o anticorpo manipulado da invenção. Oanticorpo que inclui a associação de tanto a cadeia pesada e/ou cadeia leverecombinante é triado a partir de cultura por ensaio apropriado, tal comoELISA ou RIA. Técnicas convencionais similares podem ser empregadas paraconstruir outros anticorpos e moléculas alteradas.

Vetores adequados para as etapas de clonagem e subclonagemempregados nos métodos e construção das composições desta invençãopodem ser selecionados por alguém de verso na arte. Por exemplo, a sérieconvencional pUC de vetores de clonagem pode ser usada. Um vetor, pUC 19,é comercialmente disponível a partir de provedores, tal como Amersham(Buckinghamshire, United Kingdom) ou Pharmacia (Uppsala, Sweden).Adicionalmente, qualquer vetor que é capaz de se replicar prontamente, temuma abundância de sítios de clonagem e genes selecionáveis (e.g., resistênciaa antibiótico), e é facilmente manipulado pode ser usado para clonagem.

Similarmente, os vetores empregados para expressão dosanticorpos podem ser selecionados por alguém de verso na arte a partir dequalquer vetor convencional. Os vetores também contêm seqüênciasreguladoras selecionadas (tal como promotores CMV ou RSV) que dirigem areplicação e expressão de seqüências de DNA heterólogo em célulashospedeiras selecionadas. Estes vetores contêm as seqüências de DNAdescritas acima que codificam para o anticorpo ou região de codificação deimunoglobulina alterada. Em adição, os vetores podem incorporar asseqüências de imunoglobulina selecionadas modificadas pela inserção desítios de restrição desejáveis para pronta manipulação.

Os vetores de expressão também podem ser caracterizados porgenes adequados para amplificar expressão das seqüências de DNAheterólogas, e.g., o gene de dihidrofolato redutase de mamíferos (DHFR).Outras seqüências de vetor preferíveis incluem uma seqüência sinal de poli A,tal como de hormônio de crescimento bovino (BGH) e a seqüência depromotor de betaglobina (betaglopro). Os vetores de expressão úteis nestelugar podem ser sintetizados por técnicas bem conhecidas por aquelesversados nesta arte.

Os componentes de tais vetores, e.g. replicons, genes deseleção, estimuladores, promotores, seqüências sinal e os semelhantes, podemser obtidos a partir de fontes comerciais ou naturais ou sintetizados porprocedimentos conhecidos para uso para dirigir a expressão e/ou secreção doproduto do DNA recombinante em um hospedeiro selecionado. Outrosvetores de expressão apropriados dos quais numerosos tipos são conhecidosna arte para expressão em mamíferos, bacteriana, em insetos, levedura, efüngica também podem ser selecionados para este propósito.

A presente invenção também abrange uma linhagem celulartransfectada com um plasmídeo recombinante contendo as seqüências decodificação dos anticorpos ou moléculas alteradas de imunoglobulina destes.Células hospedeiras úteis para a clonagem e outras manipulações destesvetores de clonagem também são convencionais. Entretanto, maisdesejavelmente, células de várias linhagens de E. coli são usadas parareplicação dos vetores de clonagem e outras etapas na construção deanticorpos alterados desta invenção.

Células hospedeiras ou linhagens celulares adequadas para aexpressão do anticorpo da invenção são preferivelmente células de mamíferostal como NSO5 Sp2/0, CHO (e.g. DG44), COS, uma célula de fibroblasto(e.g., 3T3), e células de mieloma, e mais preferivelmente uma CHO ou umacélula de mieloma. Células humanas podem ser usadas, possibilitando assimque a molécula seja modificada com padrões humanos de glicosilação.Alternativamente, outras linhagens de células eucarióticas podem serempregadas. A seleção de células hospedeiras de mamíferos adequadas emétodos para transformação, cultura, amplificação, triagem e produção deproduto e purificação são bem conhecidos na arte. Veja, e.g., Sambrook et al.,citado acima.

Células bacterianas podem ser úteis como células hospedeirasadequadas para a expressão dos Fabs recombinantes da presente invenção(veja, e.g., Pluckthun, A., Immunol. Rev., 130:151-188 (1992)). Entretanto,devido à tendência de proteínas expressas em células bacterianas estarem emforma desenovelada ou impropriamente enovelada ou em uma forma nãoglicosilada, qualquer Fab recombinante produzido em uma célula bacterianadeveria ser triado para retenção de capacidade de ligação de antígeno. Se amolécula expressa pela célula bacteriana foi produzida em uma formaapropriadamente enovelada, aquela célula bacteriana seria um hospedeirodesejável. Por exemplo, várias linhagens de E. coli usadas para expressão sãobem conhecidas como células hospedeiras no campo da biotecnologia. Váriaslinhagens de B. subtilis, Streptomyces, outros bacilos e os semelhantestambém podem ser empregadas neste método.

Onde desejado, linhagens de células de leveduras conhecidaspor aqueles versados na arte também são disponíveis como célulashospedeiras, assim como células de insetos, e.g. Drosophila e Lepidoptera esistemas de expressão viral. Veja, e.g. Miller et al., Genetic Engineering,8:277-298, Plenum Press (1986) e referências citadas neste.

Os métodos gerais pelos quais os vetores podem serconstruídos, os métodos de transfecção requeridos para produzir as célulashospedeiras da invenção, e métodos de cultura necessários para produzir oanticorpo da invenção a partir de tal célula hospedeira são todos técnicasconvencionais. Tipicamente, o método de cultura da presente invenção é ummétodo de cultura livre de soro, normalmente cultivando células livre de soroem suspensão. Da mesma maneira, uma vez produzidos, os anticorpos dainvenção podem ser purificados a partir dos conteúdos de cultura celular deacordo com procedimentos padrão da arte, incluindo precipitação com sulfatode amônio, colunas de afinidade, cromatografia em coluna, eletroforese emgel e os semelhantes. Tais técnicas estão dentro do verso na arte e não limitamesta invenção. Por exemplo, preparação de anticorpos alterados é descrita emWO 99/58679 e WO 96/16990.

Ainda outro método de expressão dos anticorpos pode utilizarexpressão em um animal transgênico, tal como descrito em Patente Norte-Americana No. 4.873.316. Isto se refere a um sistema de expressão usando opromotor de caseína do animal que quando transgenicamente incorporado emum mamífero permite que a fêmea produza a proteína recombinante desejadaem seu leite.

Em um aspecto adicional da invenção é fornecido um métodode produzir um anticorpo da invenção cujo método compreende a etapa decultivar uma célula hospedeira transformada ou transfectada com um vetorcodificando a cadeia leve e/ou pesada do anticorpo da invenção e recuperar oanticorpo produzido através deste.

Em conformidade com a presente invenção é fornecido ummétodo de produzir um anticorpo anti-NOGO da presente invenção que seliga especificamente a e neutraliza a atividade de NOGO-A humano cujométodo compreende as etapas de;

(a) fornecer um primeiro vetor codificando uma cadeia pesada doanticorpo;

(b) fornecer um segundo vetor codificando a cadeia leve do anticorpo;

(c) transformar uma célula hospedeira de mamífero (e.g. CHO) comditos primeiro e segundo vetores;

(d) cultivar a célula hospedeira de etapa (c) em condições propíciaspara a secreção do anticorpo a partir de dita célula hospedeira emdito meio de cultura;

(e) recuperar o anticorpo secretado de etapa (d).

Uma vez expresso pelo método desejado, o anticorpo é entãoexaminado para atividade in vitro por uso de um ensaio apropriado.Atualmente formatos convencionais de ensaio ELISA são empregados paraverificar ligação qualitativa e quantitativa do anticorpo a NOGO.Adicionalmente, outros ensaios in vitro também podem ser usados paraverificar eficácia neutralizante antes de subseqüentes estudos clínicoshumanos realizados para avaliar a persistência do anticorpo no corpo apesardos mecanismos comuns de depuração.

Os agentes terapêuticos desta invenção podem seradministrados como um profilático ou seguindo o evento de derrame/início desintomas clínicos, ou como de outra maneira necessitado. A dose e duração detratamento se referem à duração relativa das moléculas da presente invençãona circulação humana, e podem ser ajustadas por alguém de verso na artedependendo da condição sendo tratada e da saúde geral do paciente. Écontemplado que dosagem repetida (e.g. uma vez por semana ou uma vez acada duas semanas) por um período prolongado de tempo (e.g. quatro a seismeses) pode ser requerida para atingir eficácia terapêutica máxima.O modo de administração do agente terapêutico da invençãopode ser qualquer via adequada que entrega o agente ao hospedeiro. Osantagonistas e anticorpos, e composições farmacêuticas da invenção sãoparticularmente úteis para administração parenteral, i.e., subcutaneamente,intratecalmente, intraperitonealmente, intramuscularmente, intravenosamente,ou intranasalmente, das quais intravenosamente é particularmente preferida.

Agentes terapêuticos da invenção podem ser preparados comocomposições farmacêuticas contendo uma quantidade efetiva do antagonistaou anticorpo da invenção como um ingrediente em um carreadorfarmaceuticamente aceitável. No agente profilático da invenção, umasuspensão ou solução aquosa contendo o anticorpo manipulado,preferivelmente tamponado em pH fisiológico, em uma forma pronta parainjeção é preferida. As composições para administração parenteralcomumente irão compreender uma solução do antagonista ou anticorpo dainvenção ou um coquetel destes dissolvido em um carreadorfarmaceuticamente aceitável, preferivelmente um carreador aquoso. Umavariedade de carreadores aquosos pode ser empregada, e.g., 0,9% de salina,0,3% de glicina, e os semelhantes. Estas soluções são estéreis e geralmentelivres de matéria particulada. Estas soluções podem ser esterilizadas portécnicas de esterilização bem conhecidas convencionais (e.g., filtração). Ascomposições podem conter substâncias auxiliares farmaceuticamenteaceitáveis como requerido para aproximar condições fisiológicas tal comoagentes de ajuste de pH e tamponantes, etc. A concentração do antagonista ouanticorpo da invenção em tal formulação farmacêutica pode variaramplamente, i.e., de menos do que cerca de 0,5%, normalmente em ou pelomenos cerca de 1% até tanto quanto 15 ou 20% em peso e será selecionadabaseada primariamente em volumes de fluidos, viscosidades, etc., de acordocom o modo particular de administração selecionado.

Assim, uma composição farmacêutica da invenção parainjeção intramuscular pode ser preparada para conter 1 mL de águatamponada estéril, e entre cerca de 1 ng a cerca de 100 mg, e.g. cerca de 50 nga cerca de 30 mg ou mais preferivelmente, cerca de 5 mg a cerca de 25 mg, deum antagonista ou anticorpo da invenção. Similarmente, uma composiçãofarmacêutica da invenção para infusão intravenosa pode ser constituída paraconter cerca de 250 ml de solução de Ringer estéril, e cerca de 1 a cerca de 30e preferivelmente 5 mg a cerca de 25 mg de um anticorpo manipulado dainvenção. Métodos atuais para preparar composições administráveisparenteralmente são bem conhecidos ou serão perceptíveis para aquelesversados na arte e são descritos em mais detalhe em, por exemplo,Remington1S Pharmaceutical Science, 15th ed., Mack Publishing Company,Easton, Pennsylvania. Para a preparação de formulações de anticorposadministráveis intravenosamente da invenção veja Lasmar U and Parkins D"The formulation of Biopharmaceutical products", Pharma. Sci.Tech.today,page 129-137, Vol.3 (3rd April 2000), Wang, W "Instability, stabilisation andformulation of liquid protein pharmaceuticals", Int. J. Pharm 185 (1999) 129-188, Stability of Protein Pharmaceuticals Part A and B ed Ahern T.J.,Manning M.C., New York, NY: Plenum Press (1992), Akers,M.J. "Excipient-Drug interactions in Parenteral Formulations", J.Pharm Sci 91 (2002) 2283-2300, Imamura, K et al "Effects of types of sugar on stabilization of Protein inthe dried state", J Pharm Sci 92 (2003) 266-274,Izutsu, Kkojima, S."Excipient crystalinity and its protein-structure-stabilizing effect duringfreeze-drying", J Pharm. Pharmacol, 54 (2002) 1033-1039, Johnson, R,"Mannitol-sucrose mixtures-versatile formulations for protein lyophilization",J. Pharm. Sei, 91 (2002) 914922. Ha,E Wang W, Wang Y.j. "Peroxideformation in polysorbate 80 and protein stability", J. Pharm Sei, 91, 2252-2264,(2002) os conteúdos inteiros dos quais são incorporados neste lugar porreferência e aos quais o leitor é especificamente referido.

É preferido que o agente terapêutico da invenção, quando emuma preparação farmacêutica, esteja presente em formas de dose unitária. Adose terapeuticamente efetiva apropriada pode ser prontamente determinadapor aqueles de verso na arte. Para tratar efetivamente derrame e outrasdoenças neurológicas em um humano, uma dose de até 700 mg por 70 kg depeso corporal de um antagonista ou anticorpo desta invenção deve seradministrada parenteralmente, preferivelmente i.v. ou i.m.(intramuscularmente). Tal dose pode, se necessário, ser repetida em intervalosde tempo apropriados selecionados como apropriado por um médico. Comodescrito nos exemplos, os presentes requerentes foram capazes de demonstrarum efeito positivo em recuperação funcional no modelo de rato nestes quandoanticorpos da invenção foram administrados intravenosamente.

Os anticorpos descritos neste lugar podem ser liofilizados paraarmazenamento e reconstituídos em um carreador adequado antes de uso. Foimostrado que esta técnica é efetiva com imunoglobulinas convencionais etécnicas de liofilização e reconstituição conhecidas na arte podem serempregadas.

Anticorpos da invenção também podem ser usados emcombinação (i.e. simultaneamente, seqüencialmente ou separadamente) comum fator neurotrófico tal como fator de crescimento do nervo (NGF), porexemplo fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), agentesantiinflamatórios tal como corticosteróides, e/ou tPA. Combinações de umanticorpo NOGO da invenção e e.g. tPA podem ser verificadas no modeloMCAO apresentado nos exemplos abaixo.

Em outro aspecto, a invenção fornece uma composiçãofarmacêutica compreendendo anticorpo anti-NOGO da presente invenção ouum fragmento funcional deste e um carreador farmaceuticamente aceitávelpara tratamento ou profilaxia de derrame e outras doenças neurológicas.

Em um aspecto ainda adicional, a invenção fornece umacomposição farmacêutica compreendendo o anticorpo anti-NOGO da presenteinvenção ou um fragmento funcional deste e um carreador farmaceuticamenteaceitável para inibir neurodegeneração e/ou promover recuperação funcionalem um paciente humano sofrendo, ou em risco de desenvolver, um derrameou outra doença neurológica.

A invenção fornece adicionalmente um método de tratamentoou profilaxia de derrame (particularmente derrame isquêmico) e outrasdoenças/desordens neurológicas, em particular mal de Alzheimer, em umhumano que compreende administrar a dito humano com necessidade desteuma quantidade efetiva de um anticorpo anti-NOGO ou um fragmentofuncional deste. Anticorpos da invenção podem ser usados em métodos detratamento para retardar ou interromper a progressão e/ou início de mal deAlzheimer em adição a (ou como uma alternativa a) tratar doença estabelecidaem um paciente humano.

Adicionalmente a invenção fornece o uso de um anticorpoanti-NOGO, ou um fragmento funcional deste, na preparação de ummedicamento para tratamento ou profilaxia de derrame e outrasdoenças/desordens neurológicas, em particular mal de Alzheimer.

A invenção também fornece um método de inibirneurodegeneração e/ou promover recuperação funcional em um pacientehumano sofrendo, ou em risco de desenvolver, um derrame ou outradoença/desordem neurológica, em particular mal de Alzheimer, quecompreende administrar a dito humano com necessidade deste umaquantidade efetiva de um anticorpo anti-NOGO ou um fragmento funcionaldeste.

Em adição a invenção fornece o uso de um anticorpo anti-NOGO ou um fragmento funcional deste na preparação de um medicamentopara inibir neurodegeneração e/ou promover recuperação funcional em umpaciente humano afligido com, ou em risco de desenvolver, um derrame eoutra doença/desordem neurológica, em particular mal de Alzheimer.A invenção fornece adicionalmente um método de tratar ouprofilaxia de derrame ou outra doença/desordem neurológica, em particularmal de Alzheimer, em um humano compreendendo a etapa de administraçãoparenteral de uma quantidade terapeuticamente efetiva de um anticorpo anti-NOGO. Preferivelmente o anticorpo anti-NOGO é administradointravenosamente.

Doenças ou desordens neurológicas como usado acima inclui,mas não é limitado é traumatismo crânio-encefálico, lesão medular, demênciafronto-temporal (tauopatias), neuropatia periférica, Mal de Parkinson, Doençade Huntington, esclerose múltipla e em particular mal de Alzheimer.

A invenção também fornece um método de promoverbrotamento axonal compreendendo a etapa de colocar em contato um axôniohumano com um anticorpo anti-NOGO. Este método pode ser realizado in-vitro ou in-vivo, preferivelmente o método é realizado in-vivo.

Em um aspecto adicional portanto é fornecido o uso dosanticorpos anti-NOGO da invenção, em forma administrávelintravenosamente, na fabricação de um medicamento para o tratamento dederrame (particularmente derrame isquêmico), lesão cerebral, lesão medular,demência fronto-temporal (tauopatias), neuropatia periférica, Mal deParkinson, Doença de Huntington, esclerose múltipla e em particular mal deAlzheimer em um paciente humano.

Em um aspecto adicional portanto é fornecido um método detratar derrame (particularmente derrame isquêmico), lesão cerebral, lesãomedular, demência fronto-temporal (tauopatias), neuropatia periférica, Mal deParkinson, Doença de Huntington, esclerose múltipla e em particular mal deAlzheimer em um paciente humano cujo método compreende a administraçãointravenosa de uma quantidade terapeuticamente efetiva de um anticorpo anti-NOGO da invenção.

Em um aspecto adicional da presente invenção é fornecido ummétodo de promover brotamento de axônio de neurônios dentro do sistemanervoso central de um sujeito (e.g. paciente) humano cujo métodocompreende administrar (e.g. administrar intravenosamente) uma quantidadeterapeuticamente efetiva de um anticorpo anti-NOGO (e.g. um anticorpo anti-NOGO compreendendo CDRs como apresentadas neste lugar).

Em um aspecto adicional da presente invenção é fornecido ouso de um anticorpo anti-NOGO (e.g. um anticorpo anti-NOGOcompreendendo as CDRs apresentadas neste lugar) na fabricação de ummedicamento administrável intravenosamente para o tratamento de derrame(particularmente derrame isquêmico), lesão cerebral, lesão medular, demênciafronto-temporal (tauopatias), neuropatia periférica, Mal de Parkinson, Doençade Huntington, esclerose múltipla e em particular mal de Alzheimer em umpaciente humano.

Em um aspecto adicional da invenção é fornecido um métodode regenerar processos de axônios em neurônios do sistema nervoso centralem um paciente humano afligido com (ou susceptível a) derrame(particularmente derrame isquêmico), lesão cerebral, lesão medular, demênciafronto-temporal (tauopatias), neuropatia periférica, Mal de Parkinson, Doençade Huntington, esclerose múltipla e em particular mal de Alzheimer cujométodo compreende a etapa de administrar (e.g. intravenosamente) umaquantidade terapeuticamente efetiva de um anticorpo antiNOGO da presenteinvenção.

Em um aspecto adicional da invenção é fornecido o uso de umanticorpo antiNOGO da presente invenção na fabricação de uma composiçãofarmacêutica administrável intravenosamente para regenerar processos deaxônios em neurônios do sistema nervoso central em um paciente humanoafligido com (ou susceptível a) derrame (particularmente derrame isquêmico),lesão cerebral, lesão medular, demência fronto-temporal (tauopatias),neuropatia periférica, Mal de Parkinson, Doença de Huntington, esclerosemúltipla e em particular mal de Alzheimer.

Como usado neste lugar, o termo "recuperação funcional" serefere a uma melhora motora e/ou sensorial e/ou comportamental em umsujeito seguindo e.g. um evento ou lesão isquêmica ou início de sintomasclínicos. Recuperação funcional em humanos pode ser avaliada porinstrumentos projetados para medir funções neurológicas elementares talcomo força motora, sensação e coordenação, funções cognitivas tal comomemória, linguagem e a capacidade de seguir direção, e capacidadesfuncionais tal como atividades básicas do cotidiano ou atividadesinstrumentais. Recuperação de função neurológica elementar pode ser medidacom instrumentos tal como a Escala de Derrame NIH (NIHSS), recuperaçãode função cognitiva pode ser medida com testes neurofisiológicos tal comoBoston Naming Test5 Trail-making Tests, e Califórnia Verbal Learning Test,e atividades da vida diária podem ser medidas com instrumentos tal como aescala de ADCS/ADL (Estudos Clínicos de Mal de Alzheimer/Atividades davida diária) ou a Escala de Atividades da vida diária de Bristol, todos os testese escalas conhecidos na arte.

Exemplo 1, Construção e expressão de anticorpos anti-NOGO humanizados

Construtos VH e Vl murinos e humanizados foram preparadosde novo por construção de oligonucleotídeos sobrepostos incluindo sítios derestrição para clonagem em vetores de expressão Rld e Rln de mamíferosassim como uma seqüência sinal humana. Sítios de restrição Hind III e Spe Iforam introduzidos para compor o domínio VH contendo a seqüência sinalCAMPATH-1 H para clonagem em Rld contendo a região constante mutadayl humana. Sítios de restrição Hind III e BsiWl foram introduzidos paracompor o domínio Vl contendo a seqüência sinal CAMPATH-1 H paraclonagem em Rln contendo região constante kappa humana.

Seqüência sinal CAMPATH-1H: MGWSCIILFLV AT ATGVHS (SEQ.I.D.N0:82)Em paralelo uma versão quimérica de 11C7 foi gerada (vejaW004/052932). A seqüência de domínio pesado variável (derivada deW004/052932 Seq ID 43) e a seqüência de domínio leve variável (derivada deW004/052932 Seq ID 44) foram preparadas de novo por construção deoligonucleotídeos sobrepostos. Sítios de restrição Hind III e Spel foramintroduzidos para compor o domínio VH para clonagem em Rld contendo aregião constante mutada yl humana. Sítios de restrição Hindi!' e BsiWl foramintroduzidos para compor o domínio Vl para clonagem em Rln contendo aregião constante kappa humana.

Exemplo 2, Expressão de anticorpo em células CHO

Plasmídeos Rld e Rln codificando as cadeias pesadas e levesrespectivamente foram transientemente co-transfectados em células CHO eexpressos em pequena escala ou grande escala para produzir anticorpo.Alternativamente os mesmos plasmídeos foram co-transfectados em célulasCHO por eletroporação e uma população policlonal estável de célulasexpressando o anticorpo apropriado foi selecionada usando um meio livre denucleosídeo. Em algumas instâncias o anticorpo contido no sobrenadante foiensaiado, em outros casos o anticorpo recombinante foi recuperado epurificado por cromatografia de afinidade em sefarose de Proteína A.Exemplo 3, Anticorpo anti-NOGO humanizado se lisa a NOGO

GST-NOGO humano-A5 6 (SEQ ID: 76) a ^g/ml em PBS foirevestido em placas de Nunc lmmunosorp (lOOpl por poço) a 4°C durante anoite. Poços foram enxaguados uma vez com TBS + 0,05% de Tween (TBST)então incubados com 2% de BSA em TBST para bloquear sítios de ligaçãonão específicos em temperatura ambiente por 1 hora. Anticorpos foramdiluídos em TBST + 2% de BSA para 10μg/ml e diluições 1/2 feitas a partirdisto.

Anticorpos foram adicionados a poços em duplicata eincubados em temperatura ambiente por 1 hora. Poços foram lavados trêsvezes com TBST então incubados com conjugado de peroxidase e kappa anti-humano (1:2000) por 1 hora. Os poços foram lavados três vezes com TBST eentão incubados com ΙΟΟμΙ de substrato de OPD peroxidase (Sigma) porpoço por 10 minutos. A reação de cor foi parada pela adição de 25μΐ deH2SO4 concentrado. Densidade ótica em 490nm foi medida usando um leitorde placa. Valores de base lidos dos poços com nenhum anticorpo foramsubtraídos.

Figuras 1-5 ilustram a ligação dose-dependente de anticorposhumanizados em comparação com a quimera (denominada HcLc que é aquimera de 2A10 (compreendendo o VH (SEQ ID NO. 7) e VL (SEQ IDNO.8) murino de 2A10 e regiões constantes de IgG humana)) para NOGO-A56 humano (veja Exemplo 6 para detalhes) em um ensaio ELISA. O eixo Ymostra a densidade ótica medida (OD) em 490nm, uma medida quantitativade anticorpo capturado nos poços. O eixo X mostra a concentração deanticorpo usado (mcg/ml) por poço em cada ponto de dados.

O material de anticorpo usado em Figuras 1, 3, 4 e 5 foi geradoa partir de transfecções transientes de pequena escala. Níveis de IgG humanano sobrenadante são quantificados por ELISA (Exemplo 4). Para figura 2, omaterial usado foi anticorpo purificado (veja exemplo 2) gerado ou pelosistema de expressão policlonal ou transfecções transientes de grande escala.Nestes casos, níveis de IgG foram quantificados por ELISA e densidade ótica.

Em outro experimento, material de anticorpo (na forma desobrenadante de cultura de célula CHO) foi gerado a partir de transfecçõestransientes de pequena escala (em triplicata) para os seguintes anticorposhumanizados: H16L16, H17L16, H18L16, H16L18 e o anticorpo quiméricoHcLc. Os resultados deste experimento são consistentes com os dadosapresentados em Figuras 1-5 com a exceção de Hl 7L16 que atuou pior do quemostrado em Figuras IA e Figura 2. Apesar desta observação não poder serexplicada deve ser observado que as conclusões são contraditas por outroexperimento com material de sobrenadante (veja Figura IA) e umexperimento usando material de H17L16 purificado (Figura 2), ambosexperimentos indicaram que H17L16 mostra ligação comparável com outrasvariantes otimizadas.

Exemplo 4, Protocolo de purificação de anticorpo

Placas Nunc Immunosorp foram revestidas com anticorpo decaptura H19 (cadeia de IgG anti-humana de cabra, Sigma #13382) a 2pg/mlem tampão Bicarbonato (Sigma #C3041) e incubadas durante a noite at 4°C.As placas foram lavadas duas vezes com TBS contendo 0,05% de Tween20(TBST) e bloqueadas com 200μ1 de TBST contendo 2% de BSA (tampão debloqueio) por 1 h em temperatura ambiente. As placas foram lavadas duasvezes com TBST. Sobrenadantes de cultura de tecido contendo anticorpoforam titulados através da placa em etapas de diluição de 2 vezes em tampãode bloqueio e incubadas em temperatura ambiente por 1 h. As placas foramlavadas três vezes com TBST. Anticorpo H23 conjugado a HRP (cadeiakappa anti-humana de cabra, Sigma #A7164) foi diluído 1:2000 em TBST eΙΟΟμΙ adicionado a cada poço. As placas foram incubadas em temperaturaambiente por 1 h. As placas foram lavadas três vezes com TBST edesenvolvidas com ΙΟΟμΙ de substrato Fast-OPD (Sigma #P9187). Cor foipermitida se desenvolver por 5-1 Omins depois de cujo momento o ELISA foiparado com 25μ1 de 3M H2SO4. A absorbância em 490nM foi lida em placa econcentração de anticorpo determinada por referência a uma curva padrão.

Exemplo 5, Protocolo de ELISA de competição de anticorpo

GST-NOGO humano-A56 (SEQ ID: 76) a 0,l-l,0pg/ml emPBS foi revestido em placas Nunc lmmunosorp (ΙΟΟμΙ por poço) a 4°Cdurante a noite ou a 37°C por 1 hora. Placas foram enxaguadas três vezes comPBS então incubadas com 1% de BSA em PBS (tampão de bloqueio) parabloquear sítios de ligação não específicos em temperatura ambiente por 2horas. Em paralelo, uma mistura 50:50 de anticorpos foi feita. Anticorpomurino 2Α10 foi adicionado a uma concentração final de ou 0,5 ou 1,0mcg/ml em tampão de bloqueio. Anticorpos quiméricos (regiões variáveis decamundongo clonadas em uma região constante mutada Fc de IgGl humana)foram adicionados a uma concentração final de 0-25mcg/ml em tampão debloqueio. O tampão de bloqueio foi removido das placas e ΙΟΟμΙ da misturade anticorpos 50:50 foi adicionado por 1 hora em temperatura ambiente.

Poços foram lavados três vezes com PBS então incubados com ΙΟΟμΙ deconjugado de peroxidase e imunoglobulinas anti-camundongo policlonais decoelho (diluído 1:2000 em tampão de bloqueio, DakoCytomation #P0260) por1 hora em temperatura ambiente. Os poços foram lavados três vezes com PBSe então incubados com ΙΟΟμΙ de substrato de OPD peroxidase (Sigma#P9187) ou substrato de TMB (Sigma #T8665) por poço por 10-30 minutos.A reação de cor foi parada pela adição de 25μ 1 de H2SO4 concentrado.Densidade ótica em 490nm (OPD) ou 45Onm (TMB) foi medida usando umleitor de placa.

No primeiro experimento (Figura 7A), placas foram revestidascom GST-NOGO humano-A56 a 0,5pg/ml em PBS durante a noite a 4°C e asplacas foram desenvolvidas com substrato de TMB. Neste experimento, oanticorpo murino 2A10 foi verificado em combinação com HcLc (a formaquimérica de 2A10), 11 C7, um anticorpo quimérico de controle de isotipo eum controle branco. No segundo experimento (Figura 7B), placas foramrevestidas com GST-NOGO humano-A56 a 0,5pg/ml em PBS a 37°C por 1hora e as placas foram desenvolvidas com substrato de OPD. Nesteexperimento, o anticorpo murino 2A10 foi verificado em combinação comHcLc, 11C7, um controle de isotipo e anticorpo H16L18 purificado.

Exemplo 6, Produção de Frasmento NOGO-A (.NOGO-A56, SEQ.I.D.N0:76)

Uma seqüência de cDNA codificando aminoácidos 586-785(MQESLYPAAQLCPSFEESEATPSPVLPDIVMEAPLNSAVPSAGASVIQPSSSPLEASSVNYESIKHEPENPPPYEEAMSVSLKKVSGIKEEIKEPENINAALQETEAPYISIACDLIKETKLSAEPAPDFSDYSEMAX VEQP VPDHSELVEDSSPDSEPVDLFSDDSIPDVPQKQDETVMLVKESLTETSFESMIEYENKE - SEQ.I.D.NO:76) de NOGO-A humano foi clonada nos sítiosBamHI-Xhol de pGEX-6Pl para gerar uma proteína de fusão GST-etiquetadadesignada NOGO-A56. Plasmídeo foi expresso em células BL21 em meio2XTY com 10(^g/ml de ampicilina seguindo indução com IPTG para 0,5mMa 37C por 3 horas. Pelotas celulares foram lisadas por sonicação e a proteínade fusão purificada usando Glutationa-sefarose (Amersham Pharmacia)seguindo instruções de fabricantes. Proteína purificada foi eluída usandoglutationa reduzida e extensivamente dialisada contra PBS, quantificadausando padrões de BSA e um Ensaio de Proteína baseado em coomassie deBioRad e então armazenada em alíquotas a -80C.

Exemplo 7, Análise Bia Core de Anticorpos Monoclonais Anti NOGOHumanizados

A cinética de ligação dos anticorpos monoclonais (mAb) anti-NOGO purificados para NOGO-A humano (GST-NOGO humano-A56)recombinantemente expresso foi analisada usando o biosensor Biacore3000.O circuito integrado hNOGO-A foi preparado como segue:

Método

hNOGO (GST-NOGO humano-A56) foi imobilizado em umcircuito integrado CM5 por acoplamento de amina primária usando oprograma Biacore Wizard projetado para níveis de imobilização direcionados.A superfície de sensor CM5 foi ativada passando uma solução de 5 OmM deN-hidroxi-succinimida (NHS) e 200mM de N-etil-N'- dimetilaminopropilcarbonida (EDC). Então hNOGO em tampão acetato de sódio, pH5,0 ou pH4,5, foi passado através do circuito integrado e imobilizado. Depois deimobilização ter sido completada quaisquer ésteres ainda ativados forambloqueados por uma injeção de IM de cloridrato de etanolamina, pH8,5.

Os mAbs anti-NOGO foram diluídos em HBS-EP (IOmM deHEPES, pH 7,4, 150mM de NaCI, 3mM de EDTA, e 0,005% de tensoativo P-20) e estudos de ligação foram realizados em intervalo de concentraçõesdefinidas de anticorpo. Todas as corridas foram referenciadas contra umasuperfície de sensor apagada (uma que havia sido ativada e bloqueada comodescrito mais cedo mas que não tinha nenhuma adição de ligante). Análise deligação foi realizada usando o aplicativo computacional de análise cinéticaBlAevaluation versão 4.1. Análise Biacore de outros anticorpos da invençãoseguiu essencialmente o mesmo protocolo como descrito neste lugar.

Resultados - Tabela 8

<table>table see original document page 46</column></row><table>

Resultados - Tabela 9

Resultados mostrados são de um único experimento com a exceção de HcLc eH6Lc onde os valores mostrados são a média (+/- desvio padrão) de doisexperimentos separados

<table>table see original document page 46</column></row><table>

Resultados - Tabela 10

<table>table see original document page 46</column></row><table><table>table see original document page 47</column></row><table>

Exemplo 8, Análise BiaCore de Anticorpos monoclonais Anti NOGOHumanizados usando classificação de taxa de dissociação

O circuito integrado hNOGO foi preparado como para análisecinética. Sobrenadantes celulares foram tomados diretamente de transfecçõestransientes de células CHO-Kl. Estes foram passados diretamente pelasuperfície de sensor e a interação medida. Um sobrenadante de célulatransfectada falsa foi usado para referenciamento duplo para removerquaisquer artefatos devido ao meio de cultura de tecido. Todas as corridasforam referenciadas contra uma superfície de sensor apagada (uma que haviasido ativada e bloqueada como descrito mais cedo mas que não tinhanenhuma adição de ligante). Análise de ligação foi realizada usando oaplicativo computacional de análise cinética BlAevaluation versão 4.1.

Resultados — Tabela 11

Resultados mostrados são de um único experimento com a exceção deH6L13, H16L16, H16L18, HlLl 1, HcLc e H18L16 onde os valoresmostrados são a média (+/- desvio padrão) de dois ou três experimentosseparados

<table>table see original document page 47</column></row><table>H18L18 5,8e-3

H6L17 l,58e-2

H6L18 l,06e-2

H6L14 4,57e-2

H6L15 2,lle-2

H6L16 l,14e-2

Exemplo 9, Análise FACS de Anticorpos monoclonais Anti NOGOhumanizados

Células IMR32 de neuroblastoma humano foram re-suspensasem tampão de coloração FACS (PBS + 4% de FCS inativador por calor) emuma densidade de IO6 células por ml. ΙΟΟμΙ desta suspensão foi transferidopara poços de uma microplaca de fundo redondo de 96 poços. IOOpl de MeioA "Fix & Perm" (Caltag Laboratories, GASOOIS-100) foi adicionado a cadapoço e a placa incubada em temperatura ambiente por 15 mins. As célulasforam pelotizadas e lavadas duas vezes em tampão de coloração FACS.Seguindo lavagem, as células foram re-suspensas em 50μ1 de uma soluçãodos anticorpos anti-NOGO purificados ou um anticorpo de controlecompatível com isotipo em uma concentração de 2X a concentração final (0-200 pg/ml em tampão de coloração FACS). 50μ1 de Meio B "Fix & Perm"(Caltag Laboratories GAS002S-100) foi adicionado e a placa incubada emgelo por 1 hora. Células foram lavadas duas vezes em tampão de coloraçãoFACS antes de serem re-suspensas em ΙΟΟμΙ de uma solução de um F(ab')2de cabra específico anti yl humano conjugado a PE (Sigma P-8047) em umadiluição de 1/50 ou 1/100. Células incubadas por 1 hora em gelo. As célulasforam pelotizadas e lavadas 3 vezes em Tampão de coloração FACS e célulasre-suspensas em ΙΟΟμΙ do mesmo tampão. ΙΟΟμΙ de Meio B "Fix & Perm"foi adicionado para fixar as células para os experimentos mostrados emFiguras 6 e 13. ΙΟΟμΙ de BD CeIIFIX foi adicionado para fixar as célulaspara os experimentos mostrados em Figura 14. O grau de coloração foideterminado por citometria de fluxo usando um citômetro de fluxo BectonDickinson FACScan. Os controles compatíveis com isotipo foram usadoscomo referência.Resultados são mostrados em Figura 6 A a F. A totalidade dosdados mostrados ilustra que o anticorpo HcLc (de 2A10) gera um forte sinalneste ensaio FACS, o que indica forte ligação a NOGO expresso em célulahumana. Os dados também mostram que versões humanizadas desta quimerapodem reter esta propriedade. O anticorpo H20L16 consistentemente supera11C7 neste ensaio, enquanto o anticorpo quimérico 2A10, e outras versõeshumanizadas deste, consistentemente ou superam 11 C7 neste ensaio ou sãocomparáveis a este.

Exemplo 10, Anticorpos monoclonais anti-NOGO humanizados adicionais

Seguindo as técnicas descritas em Exemplos 1 e 2, diversosanticorpos monoclonais adicionais foram produzidos. A atividade de ligaçãodestes anticorpos foi ensaiada por BlAcore, ELISA e FAGS.

10.1 BlAcore

Baseado nas metodologias descritas em Exemplo 7, dados nosanticorpos antiNOGO adicionais são mostrados em Tabelas 13, 14 , 15 e 17abaixo (material de anticorpo purificado) e Tabela 16 (material desobrenadante).Resultados - Tabela 13

Resultados mostrados são de um único experimento. Neste experimento, ovalor obtido para H16L16 não foi típico de valores obtidos em outrosexperimentos (tipicamente exibindo um KD(nM) de cerca de 1 (veja tabelas 8 e 10)).

<table>table see original document page 46</column></row><table>

Resultados - Tabela 14

Resultados mostrados são de um único experimento.<table>table see original document page 50</column></row><table>

Resultados - Tabela 15

Resultados mostrados são de um único experimento.

<table>table see original document page 50</column></row><table>

Resultados - Tabela 16

Resultados mostrados são de um único experimento. Resultado é classificaçãode taxa de dissociação baseado em material de sobrenadante de transfecçãotransiente de pequena escala

<table>table see original document page 50</column></row><table>Tabela 17

Resultados são de 12 corridas independentes. Dados mostrados são a média edesvio padrão das 12 corridas

<table>table see original document page 51</column></row><table>

10.2 ELISA

Exemplo 11, Análise BiaCore de Formato Reverso de Anticorposmonoclonais Anti NOGO humanizados

A cinética de ligação dos anticorpos monoclonais (mAb) anti-NOGO purificados a NOGO-A humano recombinantemente expresso foianalisada usando o BiacoreTl 00. O circuito integrado foi preparado comosegue:

Método

Análise cinética de Biacorem" dos anticorpos NOGOhumanizados foi realizada usando captura de Proteína A dos anticorposcandidatos. Resumidamente, Proteína A foi imobilizada em um circuitointegrado CM5 por acoplamento de amina primária, usando procedimentos deacoplamento padrão, para densidades de cerca de 3000-4000 unidades deressonância (RU's) usando o assistente de imobilização inerente no aplicativocomputacional das máquinas. Anticorpo humanizado foi então passado pelasuperfície de Proteína A e capturado para níveis de cerca de 200-400 RU's,depois de um período de estabilização, NOGO humano 5+6 GST foi passadopela superfície de anticorpo capturado em concentrações definidas esensogramas de ligação foram obtidos. Regeneração ácida(IOOmM de H3Pa4ou IOmM de Glicina pH 1,5) resultou em remoção total do anticorpocapturado a partir da superfície de Proteína A, e não reduziusignificantemente a capacidade de ligação das superfícies. Todas as curvasforam duplamente referenciadas contra uma injeção de tampão ao invés deNOGO humano 5+6 GST e os dados foram ajustados para o modelo deligação 1:1 usando os parâmetros de ajuste globais em aplicativocomputacional de avaliação de Biacore TlOO ν 1.1. Todos os experimentosrealizados em um instrumento T100.

Tabela 18 - Resultados mostrados são a média e desvio padrão de 5 ou 6corridas independentes

<table>table see original document page 52</column></row><table>

Resumo de seqüências de anticorpo NOGO (Tabela 12)<table>table see original document page 53</column></row><table><table>table see original document page 54</column></row><table>

Seqüências

SEQ ID 1:2A10 CDR-M SYWMH

SEQID2:2A10CDR-H2 NINPSNGGTNYNEKFKS SEQID3:2A10CDR-H3GQGY

SEQID4:2A1 OCDR-Ll RSSKSLLYKDGKTYLNSEQID5:2A10CDR-L2 LMSTRASSEQID6:2A10CDR-L3 QQLVEYPLTSEQ ID 7: 2A10, VH (murina)

QVQLQQPGTELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCELGQGYWG QGTTLTVSSSEQ ID 8: 2A10, VL (murina)

DIVITQDELSNPVTSGESVSISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSP

QLLIYLMSTRASGVSDRFSGSGSGTDFTLEISRVKAEDVGVYYCQQLV

EYPLTFGAGTK LELK

SEQ ID 9: Cadeia pesada quimérica Hc

MGWS CIILFL VAAATG VHSQ VQLQQPGTEL VKPGAS VKL S CKAS G YTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSS WTVPSSSLGTQ

TYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELAGAPSVFLFP

PKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHN AKTKP

REEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK

AKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE WESNG

QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL

HNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 10: Cadeia leve quimérica Lc

MRCSLQFLGVLMFWISGVSGDIVITQDELSNPVTSGESVSISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVSDRFSGSGSGTDFTLEISRVKAEDVGVYYCQQLVEYPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPRE AKVQ WK\T)NALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID 11: construto humanizado de VH H5 de 2A10

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGL

EWMGNINPSNGGTNYNEKFKSRVTMTRDTSTSTAYMELSSLRSEDTA

VYYCELGQGY WGQGTL VTVSS

SEQ ID 12: construto humanizado de VH H6 de 2AlO

QVQL VQSGAE VKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQ APGQGL

EWIGNINPSNGGTNYNEKFKSRATMTRDTSTSTAYMELSSLRSEDTAV

YYCELGQGY WGQGTLVTVSS

SEQ ID 13: construto humanizado de VH H700 de 2A10

QVQLVQSGAE VKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQ APGQGL

EWIGNINPSNGGTNYNEKFKSRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAV

YYCELGQGYW GQGTLVTVSS

SEQ ID 14: construto humanizado de VH Hl4 de 2AlO

QVQLVQSGAEWKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQ APGQGLE

WIGNINPSNGGTNYNEKFKSRATLTRDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCELGQGYW GQGTLVTVSS

SEQ ID 15: construto humanizado de VH Hl5 de 2A10

QVQL VQSGAE WKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLE

WIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATLTVDTSSSTAYMELSSLRSEDSAVY

YCELGQGYWG QGTLVTVSS

SEQ ID 16: construto humanizado de VH Hl6 de 2A10

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGL

EWIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAV

YYCELGQGYWG QGTLVTVSS

SEQ ID 17: construto humanizado de VH Hl7 de 2A10

QVQL VQSGAE WKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLE

WIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMELSSLRSEDSAVY

YCELGQGYWG QGTLVTVS S

SEQ ID 18: construto humanizado de VH Hl8 de 2AlO

QVQL VQSGAE WKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLE

WIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMELSSLRSEDSAVY

YCELGQGYWG QGTLVTVSS

SEQ ID 19: construto humanizado de VL L6 de 2A10

DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSP

QLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLV

EYPLTFGGGTK VEIK

SEQ ID 20: construto humanizado de VL L13 de 2A10DIVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFQQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGGGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVEYPLTF GQGT KLEIK

SEQ ID 21: construto humanizado de VL L14 de 2A10DIVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIYLMSTRAS GVPDRF S GGGS GTDFTLKISRVE AED VGV YYCQQLVEYPLTFGQGTK LEIKSEQ ID 22: construto humanizado de VL Ll5 de 2A10DIVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVSDRFSGGGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVEYPLTFGQGTK LEIK

SEQ ID 23: construto humanizado de VL Ll6 de 2A10DIVMTQSPLSNPVTLGQPVSISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGGGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVEYPLTFGQGTK LEIK

SEQ ID 24: construto humanizado de VL Ll7 de 2A10DIVMTQDPLSLPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFQQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVSDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVEYPLTFGQGT KLEIK

SEQ ID 25: construto humanizado de VL Ll8 de 2A10DIVMTQDPLSNPVTLGQPVSIS CRS SKSLL YKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVSDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVEYPLTFGQGT KLEIK

SEQ ID 26: construto humanizado de cadeia pesada H5 de 2A10MGWSCIILFLVATATGVHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGNINPSNGGTNYNEKFKSRVTMTRDTSTSTA YMELSSLRSEDTAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGT AALGCL VKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 27: construto humanizado de cadeia pesada H6 de 2A10MGWSCIILFL V ATATGVHSQVQL VQSGAE VKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWIGNINPSNGGTNYNEKFKSRATMTRDT

STSTA YMELSSLRSEDTAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSASTKGPSV

FPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV

LQSSGL YSLSSWTWSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK

THTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE

VKFNWYVDGVE VHN AXTKPREEQ YNSTYR VVSVL TVLHQD WLNGK

EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSL

TCL VXGFYPSDIA VE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL YSKLTVD

KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 28: construto humanizado de cadeia pesada H700 de 2A10

MGWSCIILFLVATATGVHSQVQL VQSGAE VKKPGASVKVSCKASGYT

FTSYWMHWVRQAPGQGLEWIGNINPSNGGTOYNEKFKSRATLTVDK

STSTA YMELSSLRSEDTAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSASTKGPSV

FPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV

LQSSGL YSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK

THTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE

VKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQD WLNGKE

YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLT

CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK

SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 29: construto humanizado de cadeia pesada Hl4 de 2A10

MGWSCIILFLVATATGVHSQVQLVQSGAEWKPGASVKLSCKASGYTF

TSYWMHWVKQAPGQGLEWIGNINPSNGGTNYNEKFKSRATLTRDTS

TSTA YMELS SLRSEDT A VYYCELGQGYWGQGTL VTVS S ASTKGPS VF

PLAPSSKSTSGGT AAL GCLVKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA VL

QSS GL YSL S S WTVP S S SLGTQT YICNVNHKPSNTK VDKK VEPKSCDKT

HTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE

VKFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRW

SVLTVLHQD WLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 30: construto humanizado de cadeia pesada Hl5 de 2A10

MG WS CIILFL V AT ATGVHS Q VQL VQ SGAE WKPGAS VKLSCKAS GYTF

TSYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSNGGI1SÍYNEKFKSKATLTVDTS

SSTAYMELS SLRSEDS AVYYCELGQGYWGQGTL VTVS S ASTKGPS VF

PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL

QSSGL YSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKT

HTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE

VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK

EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSL

TCL VKGFYPSDIA VE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL YSKLT

VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 31: construto humanizado de cadeia pesada Hl6 de 2AlO

MGWSCIILFLVATATGVHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYT

FTSYWMHWKQRPGQGLEWIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATLTVDK

STSTAYMELSSLRSEDTAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSASTKGPSV

FPLAPSSKSTSGGT AALGCL VKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP AV

LQSSGL YSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK

THTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE

VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKE

YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLT

CL VKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK

SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 32: construto humanizado de cadeia pesada Hl 7 de 2A10

MGWS CIILFL V AT ATG VHSQ VQL VQS G AE WKPGAS VKL S CKAS G YTF

TSYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATLTVDKS

TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL

QSSGL YSLSSWTVPSSSLGTQTYICNYNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKT

HTCPPCP APELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE

VKFN WYVDG VE VHNAKTKPREEQ YNS TYRWS VLT VLHQD WLNGKE

YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLT

CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK

SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 33: construto humanizado de cadeia pesada Hl 8 de 2A10

MGWSCIILFL V ATATGVHSQVQL VQSGAE WKPGASVKLSCKASGYTF

TSYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATLTVDKS

SSTAYMELSSLRSEDSAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVF

PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL

QS SGL YSLS S WTVPS S SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKT

HTCPPCP APELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE

VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQD WLNGKE

YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE

LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFF

LYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 34: construto humanizado de cadeia leve L6 de 2A10

MGWSCIILFLVATATGVHSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLL

YKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFT

LKISRVEAEDVGVYYCQQL VE YPLTF GGGTK VEIKRTVAAPSVFIFPPS

DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD

SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID 35: construto humanizado de cadeia leve L13 de 2A10

MGWSCIILFL VATATGVHSDIVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSKSLL

YKDGKTYLNWFQQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGGGSGTDFT

LKISRVEAEDVGVYYCQQLVEYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPS

DEQLKSGTASWCLLNNF YPRE AKVQ WK VDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHK VY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID 36: construto humanizado de cadeia leve L14 de 2A10MGWSCIILFLVATATGVHSDIVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGGGSGTDFTLKJSRVE AED VGVYYCQQL VEYPLTF GQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNF YPRE AKVQ WKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID 37: construto humanizado de cadeia leve Ll5 de 2A10MGWSCIILFLVATATGVHSDIVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVSDRFSGGGSGTDFTLKISRVE AED VGVYYCQQL VE YPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID 38: construto humanizado de cadeia leve Ll6 de 2A10MGWSCIILFLVATATGVHSDIVMTQSPLSNPVTLGQPVSISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGGGSGTDFTLKISRVE AED VGVYYCQQL VE YPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID 39: construto humanizado de cadeia leve Ll7 de 2A10MG WS CIILFL V AT ATG VHSDIVMTQDPL SLP VTLGQP A SISCRS SKSLLYKDGKTYLNWFQQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVSDRFSGSGSGTDFTLKISRVE AED VGVYYCQQL VEYPLTFGQGTKLEIKRTV AAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID 40: construto humanizado de cadeia leve L18 de 2A10MGWSCIILFLVATATGVHSDIVMTQDPLSNPVTLGQPVSISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVSDRFSGSGSGTDFTLKISRVE AED VGVYYCQQL VE YPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPRE AKVQ WK VDNALQSGNSQESVTEQD

SKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID 41: PN codificando VH (murina) de 2A10 SEQ ID: 7

CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGACTGAACTGGTGAAGCCTGGG

GCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCA

GCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTG

AGTGGATTGGAAATATTAATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACA

ATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACACTGACTGTAGACAAATCCT

CCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACT

CTGCGGTCTATTATTGTGAACTGGGACAGGGCTACTGGGGCCAAG

GCACCACTCTCACAGTCTCCTCA

SEQ ID 42: PN codificando VL (murina ) de 2A10 SEQ ID: 8

GATATTGTGATAACCCAGGATGAACTCTCCAATCCTGTCACTTCTG

GAGAATCAGTTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTATA

TAAGGATGGGAAGACATACTTGAATTGGTTTCTGCAGAGACCAGG

ACAATCTCCTCAGCTCCTGATCTATTTGATGTCCACCCGTGCATCA

GGAGTCTCAGACCGGTTTAGTGGCAGTGGGTCAGGAACAGATTTC

ACCCTGG AAATCAGTAGAGTGAAGGCTGAGGATGTGGGTGTGTAT

TACTGTCAACAACTTGT AGAGT ATCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGA

CCAAGCTGGAGCTGAAA

SEQ ID 43: PN codificando Cadeia pesada quimérica He SEQ ID: 9

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTTTTGGTAGCAGCAGCTACAG

GTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGACTGAACTGG

TGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTA

CACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGG

ACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAAATATTAATCCTAGCAATGGTGG

TACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACACTGACTGT

AGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGAC

ATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTATTGTGAACTGGGACAGGGCTACTGGGGCCAAGGCACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCAAG

GGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTG

GGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCG

AACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCG

TGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCT

CAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGAC

CTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGA

CAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCC

ACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCCTC

TTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTG

AGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGG

TCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCA

AGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTG

GTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAG

GAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATC

GAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAG

GGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGG

ATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAG

GCTTCT ATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGC

AGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCG

ACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAG

GTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGC

TCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT

AAATGA

SEQ ID 44: PN codificando Cadeia leve quimérica Lc SEQ ID: 10

ATGAGGTGCTCTCTTCAGTTTCTGGGGGTGCTTATGTTCTGGATCTC

TGGAGTCAGTGGGGATATTGTGATAACCCAGGATGAACTCTCCAA

TCCTGTCACTTCTGGAGAATCAGTTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGT

AAGAGTCTCCTATATAAGGATGGGAAGACATACTTGAATTGGTTTCTGCAGAGACCAGGACAATCTCCTCAGCTCCTGATCTATTTGATGTC

CACCCGTGCATCAGGAGTCTCAGACCGGTTTAGTGGCAGTGGGTC

AGGAACAGATTTCACCCTGGAAATCAGTAGAGTGAAGGCTGAGGA

TGTGGGTGTGTATTACTGTCAACAACTTGTAGAGTATCCGCTCACG

TTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGTACGGTGGCTGCA

CCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTG

GAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGA

GGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTCCAATCGGGTAA

CTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTA

CAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAA

ACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTC

GCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTA G

SEQ ID 45: PN codificando construto humanizado de VH H5 de 2A10 SEQ

ID: 11

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG

GCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCA

GCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTG

AGTGGATGGGAAATATTAATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACA

ATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGTCACCATGACCAGGGACACGTCCA

CGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACA

CGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCTACTGGGGCCAGG

GAACACTAGTCACAGTCTCCTCA

SEQ ID 46: PN codificando construto humanizado de VH H6 de 2A10 SEQID: 12

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG

GCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCA

GCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTG

AGTGGATCGGAAATATTAATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACA

ATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGCCACCATGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCTACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCA

SEQ ID 47: PN codificando construto humanizado de VH H700 de 2A10SEQ ID: 13

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCT

CAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCAGCTACTGG

ATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATCGGAA

ATATTAATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAG

CAGAGCCACCCTGACCGTAGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAG

CTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGG

GACAGGGCTA CTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCA

SEQ ID 48: PN codificando construto humanizado de VH H14 de 2A10 SEQ

ID: 14

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGGTCAAGCGTGGG

GCCTCAGTGAAGCTCTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCA

GCTACTGGATGCACTGGGTGAAACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTG

AGTGGATCGG AAATATT AATCCTAGCAATGGTGGT ACTAACT ACA

ATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGCCACCCTCACCAGGGACACGTCCA

CGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACA

CGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCTACTGGGGCCAGG

GAACACTAGTCACAGTCTCCTCA

SEQ ID 49: PN codificando construto humanizado de VH Hl 5 de 2A10 SEQID: 15

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGGTCAAGCCTGGGGCCT

CAGTGAAGCTCTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCAGCTACTGG

ATGCACTGGGTGAAACAGCGACCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATCGGAA

ATATTAATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAG

CAAAGCCACCCTCACCGTCGACACGTCCAGCAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACAGCGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCTA CTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCASEQ ID 50: PN codificando construto humanizado de VH Hl6 de 2A10 SEQID: 16

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCT

CAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCAGCTACTGG

ATGCACTGGGTGAAACAGCGACCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATCGGAA

ATATTAATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAG

CAAAGCCACCCTCACCGTCGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAG

CTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGG

GACAGGGCTAC TGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCA

SEQ ID 51: PN codificando construto humanizado de VH Hl 7 de 2A10 SEQ

ID: 17

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGGTCAAGCCTGGGGCCT

CAGTGAAGCTCTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCAGCTACTGG

ATGCACTGGGTGAAACAGCGACCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATCGGAA

ATATTAATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAG

CAAAGCCACCCTCACCGTCGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAG

CTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGG

GACAGGGCTAC TGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCA

SEQ ID 52: PN codificando construto humanizado de VH Hl8 de 2A10 SEQ

ID: 18

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGGTCAAGCCTGGGGCCT

CAGTGAAGCTCTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCAGCTACTGG

ATGCACTGGGTGAAACAGCGACCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATCGGAA

ATATTAATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAG

CAAAGCCACCCTCACCGTCGACAAATCCAGCAGCACAGCCTACATGGAG

CTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACAGCGCCGTGTATTACTGTGAACTGG

GACAGGGCTAC TGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCASEQ ID 53: PN codificando construto humanizado de VL L6 de 2A10 SEQID: 19

GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTG

GAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTATA

TAAGGATGGGAAGACATACTTGAATTGGTTCCTGCAGCGACCAGG

GCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGATGTCCACCCGTGCATCA

GGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTT

ACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTAT

TACTGCCAACAACTTGTAGAGTATCCGCTCACGTTCGGCGGAGGG

ACCAAGGTGGAGATCAAA

SEQ ID 54: PN codificando construto humanizado de VL L13 de 2A10 SEQID: 20

GATATTGTGATGACCCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTGGACA

GCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTATATAAGGATG

GGAAGACATACTTGAATTGGTTTCAGCAGAGGCCAGGCCAATCTCCACA

GCTCCTAATTTATTTGATGTCCACCCGTGCATCTGGGGTCCCAGACAGAT

TCAGCGGCGGTGGGTCAGGCACTGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGT

GGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCCAACAACTTGTAGAGTATC

CGCTCACGT TTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA

SEQ ID 55: PN codificando construto humanizado de VL L14 de 2A10 SEQ

ID: 21

GATATTGTGATGACCCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTGGACA

GCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTATATAAGGATG

GGAAGACATACTTGAATTGGTTTCTCCAGAGGCCAGGCCAATCTCCACA

GCTCCTAATTTATTTGATGTCCACCCGTGCATCTGGGGTCCCAGACAGAT

TCAGCGGCGGTGGGTCAGGCACTGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGT

GGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCCAACAACTTGTAGAGTATC

CGCTCACGnT GGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA

SEQ ID 56: PN codificando construto humanizado de VL L15 de 2A10 SEQID: 22

GATATTGTGATGACCCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTGGACA

GCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTATATAAGGATG

GGAAGACATACTTGAATTGGTTTCTCCAGAGGCCAGGCCAATCTCCACA

GCTCCTAATTTATITGATGTCCACCCGTGCATCTGGGGTCAGCGACAGAT

TCAGCGGCGGTGGGTCAGGCACTGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGT

GGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCCAACAACTTGTAGAGTATC

CGCTCACGTTT GGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA

SEQ ID 57: PN codificando construto humanizado de VL Ll6 de 2A10 SEQ

ID: 23

GATATTGTGATGACCCAGTCTCCACTCTCCAACCCCGTCACCCTTG

GACAGCCGGTCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTATA

TAAGGATGGGAAGACATACTTGAATTGGTTTCTCCAGAGGCCAGG

CCAATCTCCACAGCTCCTAATTTATTTGATGTCCACCCGTGCATCT

GGGGTCCCAGACAGATTCAGCGGCGGTGGGTCAGGCACTGATTTC

ACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTAT

TACTGCCAACAACTTGTAGAGTATCCGCTCACGTTTGGCCAGGGGA

CCAAGCTGGAGATCAAA

SEQ ID 58: PN codificando construto humanizado de VL Ll7 de 2A10 SEQID: 24

GATATTGTGATGACCCAGGACCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTG

GACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTATA

TAAGGATGGGAAGACATACTTGAATTGGTTTCAGCAGAGGCCAGG

CCAATCTCCACAGCTCCTAATTTATTTGATGTCCACCCGTGCATCT

GGGGTCAGCGACAGATTCAGCGGCAGCGGGTCAGGCACTGATTTC

ACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTAT

TACTGCCAACAACTTGTAGAGTATCCGCTCACGTTTGGCCAGGGGA

CCAAGCTGGAGATCAAA

SEQ ID 59: PN codificando construto humanizado de VL Ll8 de 2A10 SEQID: 25

GATATTGTGATGACCCAGGACCCACTCTCCAACCCCGTCACCCTTG

GACAGCCGGTCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTATA

TAAGGATGGGAAGACATACTTGAATTGGTTTCTCCAGAGGCCAGG

CCAATCTCCACAGCTCCTAATTTATTTGATGTCCACCCGTGCATCT

GGGGTCAGCGACAGATTCAGCGGCAGCGGGTCAGGCACTGATTTC

ACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTAT

TACTGCCAACAACTTGTAGAGTATCCGCTCACGTTTGGCCAGGGGA

CCAAGCTGGAGATCAAA

SEQ ID 60: PN codificando construto humanizado de cadeia pesada H5 de2A10 SEQ ID: 26

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGA

AGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGAT

ACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTG

GACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAATATTAATCCTAGCAATGGTG

GTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGTCACCATGACCA

GGGACACGTCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGA

GATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCT

ACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCA

AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC

TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC

CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG

CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCC

CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG

ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGC

CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCC

TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGA

GGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC

CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTG

TGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCA

AGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA

TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC

AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACC

AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACAT

CGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA

AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTA

CAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACG

TCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACAC

GCAGAAGAGCCTC TCCCTGTCTCCGGGTAAATGA

SEQ ID 61: PN codificando construto humanizado de cadeia pesada H6 de

2A10 SEQ ID: 27

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGA

AGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGAT

ACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTG

GACAAGGGCTTGAGTGGATCGG AAAT ATT AATCCTAGCAATGGTG

GTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGCCACCATGACCA

GGGACACGTCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGA

GATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCT

ACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCA

AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC

TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC

CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG

CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCC

CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGC

CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCC

TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC

TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGA

GGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC

CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTG

TGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCA

AGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA

TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC

AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACC

AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACAT

CGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA

AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTA

CAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACG

TCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACAC

GCAGAAGAGCCTC TCCCTGTCTCCGGGTAAATGA

SEQ ID 62: PN codificando construto humanizado de cadeia pesada H700 de

2A10 SEQ ID: 28

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGA

AGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGAT

ACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTG

GACAAGGGCTTGAGTGGATCGGAAATATTAATCCTAGCAATGGTG

GTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGCCACCCTGACCG

TAGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGA

GATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCT

ACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCA

AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC

CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG

CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCC

CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG

ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGC

CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCC

TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC

TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGA

GGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAG.GTGCATAATGC

CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTG

TGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCA

AGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA

TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC

AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACC

AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACAT

CGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA

AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTA

CAGC AAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGG AACG

TCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACAC

GCAGAAGAGCCTCT CCCTGTCTCCGGGTAAATGA

SEQ ID 63: PN codificando construto humanizado de cadeia pesada H14 de

2A10 SEQ ID: 29

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGG

TCAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGCTCTCCTGCAAGGCATCTGGAT

ACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAACAGGCCCCTG

GACAAGGGCTTGAGTGGATCGG AAATATT AATCCTAGCAATGGTG

GTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGCCACCCTCACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGA

GATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCT

ACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCA

AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC

TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC

CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG

CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCT ACTCC

CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG

ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGC

CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCC

TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC

TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGA

GGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC

CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTG

TGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCA

AGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA

TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC

AGGTGT ACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACC

AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACAT

CGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA

AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTA

CAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACG

TCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACAC

GCAGAAGAGCCT CTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA

SEQ ID 64: PN codificando construto humanizado de cadeia pesada Hl5 de

2A10 SEQ ID: 30

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGT AGC AACAGCT ACAGGTGTCCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGGTCAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGCTCTCCTGCAAGGCATCTGGAT

ACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAACAGCGACCTG

GACAAGGGCTTGAGTGGATCGGAAATATTAATCCTAGC AATGGTG

GTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAAGCCACCCTCACCG

TCGACACGTCCAGCAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGA

GATCTGAGGACAGCGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCT

ACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCA

AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC

TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC

CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG

CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCC

CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG

ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGC

CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCC

TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC

TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGA

GGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC

CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTG

TGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCA

AGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA

TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC

AGGTGT ACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACC

AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACAT

CGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA

AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTA

CAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACG

TCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACAC

GCAGAAGAGCCTC TCCCTGTCTCCGGGTAAATGASEQ ID 65: PN codificando construto humanizado de cadeia pesada Hl6 de2A10 SEQ ID: 31

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGA

AGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGAT

ACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAACAGCGACCTG

GACAAGGGCTTGAGTGGATCGG AAATATT AATCCTAGCAATGGTG

GTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAAGCCACCCTCACCG

TCGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGA

GATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCT

ACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCA

AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC

TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC

CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG

CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCC

CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG

ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGC

CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCC

TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACC

CCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCT

GAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAAT

GCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCG

TGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGC

AAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCC

ATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCA

CAGGTGT ACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAAC

CAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACA

TCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCT

ACAGC AAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGG AAC

GTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACA

CGCAGAAGAGCCTCT CCCTGTCTCCGGGTAAATGA

SEQ ID 66: PN codificando construto humanizado de cadeia pesada Hl7 de

2A10 SEQ ID: 32

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGG

TCAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGCTCTCCTGCAAGGCATCTGGAT

ACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAACAGCGACCTG

GACAAGGGCTTGAGTGGATCGG AAATATT AATCCTAGCAATGGTG

GTACT AACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAAGCCACCCTCACCG

TCGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGA

GATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCT

ACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCA

AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC

TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC

CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG

CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCC

CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG

ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGC

CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCC

TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC

TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGA

GGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC

CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTG

TGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCA

AGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC

AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACC

AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACAT

CGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA

AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTA

CAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACG

TCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACAC

GCAGAAGAGCCTC TCCCTGTCTCCGGGTAAATGA

SEQ ID 67: PN codificando construto humanizado de cadeia pesada Hl 8 de

2A10 SEQ ID: 33

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGG

TCAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGCTCTCCTGCAAGGCATCTGGAT

ACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAACAGCGACCTG

GACAAGGGCTTGAGTGGATCGG AAATATT AATCCTAGCAATGGTG

GTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAAGCCACCCTCACCG

TCGACAAATCCAGCAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGA

GATCTGAGGACAGCGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCT

ACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCA

AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC

TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC

CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG

CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCC

CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG

ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGC

CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCC

TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC

TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC

CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTG

TGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCA

AGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA

TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC

AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACC

AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACAT

CGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA

AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTA

CAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACG

TCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACAC

GCAGAAGAGCCTC TCCCTGTCTCCGGGTAAATGA

SEQ ID 68: PN codificando construto humanizado de cadeia leve L6 de 2A10

SEQ ID: 34

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCGATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCC

CGTCACCCCTGGAGAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAG

AGTCTCCTATATAAGGATGGGAAGACATACTTGAATTGGTTCCTGC

AGCGACCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGATGTCCAC

CCGTGCATCAGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGG

CACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGT

TGGGGTTTATTACTGCCAACAACTTGTAGAGTATCCGCTCACGTTC

GGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACC

ATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGA

ACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGG

CCAAAGT ACAGTGG AAGGTGGACAACGCCCTCCAATCGGGTAACT

CCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTAC

AGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAA

CACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAGSEQ ID 69: PN codificando construto humanizado de cadeia leve Ll3 de2A10 SEQ ID: 35

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCGATATTGTGATGACCCAGTCTCCACTCTCCCTGCC

CGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAG

AGTCTCCTATATAAGGATGGGAAGACATACTTGAATTGGTTTCAGC

AGAGGCCAGGCCAATCTCCACAGCTCCTAATTTATTTGATGTCCAC

CCGTGCATCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGCGGCGGTGGGTCAGG

CACTGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAGGCTGAGGATGT

TGGGGTTTATTACTGCCAACAACTTGTAGAGTATCCGCTCACGTTT

GGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCA

TCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAA

CTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGC

CAAAGTACAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTCCAATCGGGTAACTC

CCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACA

GCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAAC

ACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGC

CCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG

SEQ ID 70: PN codificando construto humanizado de cadeia leve L14 de

2A10 SEQ ID: 36

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCGATATTGTGATGACCCAGTCTCCACTCTCCCTGCC

CGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAG

AGTCTCCTATATAAGGATGGGAAGACATACTTGAATTGGTTTCTCC

AGAGGCCAGGCCAATCTCCACAGCTCCTAATTTATTTGATGTCCAC

CCGTGCATCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGCGGCGGTGGGTCAGG

CACTGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAGGCTGAGGATGT

TGGGGTTTATTACTGCCAACAACTTGTAGAGTATCCGCTCACGTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCA

TCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAA

CTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGC

CAAAGTACAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTCCAATCGGGTAACTC

CCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACA

GCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAAC

ACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGC

CCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG

SEQ ID 71: PN codificando construto humanizado de cadeia leve L15 de

2A10 SEQ ID: 37

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCGATATTGTGATGACCCAGTCTCCACTCTCCCTGCC

CGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAG

AGTCTCCTATATAAGGATGGGAAGACATACTTGAATTGGTTTCTCC

AGAGGCCAGGCCAATCTCCACAGCTCCTAATTTATTTGATGTCCAC

CCGTGCATCTGGGGTCAGCGACAGATTCAGCGGCGGTGGGTCAGG

CACTGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAGGCTGAGGATGT

TGGGGTTTATTACTGCCAACAACTTGTAGAGTATCCGCTCACGTTT

GGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCA

TCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAA

CTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAAT AACTTCT ATCCCAGAGAGGC

CAAAGT ACAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTCCAATCGGGT AACTC

CCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACA

GCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAAC

ACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGC

CCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG

SEQ ID 72: PN codificando construto humanizado de cadeia leve Ll6 de

2A10 SEQ ID: 38

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTCCACTCCGATATTGTGATGACCCAGTCTCCACTCTCCAACCC

CGTCACCCTTGGACAGCCGGTCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAG

AGTCTCCTATATAAGGATGGGAAGACATACTTGAATTGGTTTCTCC

AGAGGCCAGGCCAATCTCCACAGCTCCTAATTTATTTGATGTCCAC

CCGTGCATCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGCGGCGGTGGGTCAGG

CACTGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAGGCTGAGGATGT

TGGGGTTTATTACTGCCAACAACTTGTAGAGTATCCGCTCACGTTT

GGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCA

TCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAA

CTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGC

CAAAGTACAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTCCAATCGGGTAACTC

CCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACA

GCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAAC

ACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGC

CCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG

SEQ ID 73: PN codificando construto humanizado de cadeia leve L17 de

2A10 SEQ ID: 39

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCGATATTGTGATGACCCAGGACCCACTCTCCCTGCC

CGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAG

AGTCTCCTATATAAGGATGGGAAGACATACTTGAATTGGTTTCAGC

AGAGGCCAGGCCAATCTCCACAGCTCCTAATTTATTTGATGTCCAC

CCGTGCATCTGGGGTCAGCGACAGATTCAGCGGCAGCGGGTCAGG

CACTGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAGGCTGAGGATGT

TGGGGTTTATTACTGCCAACAACTTGT AGAGT ATCCGCTCACGTTT

GGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCA

TCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAA

CTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGC

CAAAGTACAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACA

GCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAAC

ACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGC

CCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG

SEQ ID 74: PN codificando construto humanizado de cadeia leve Ll8 de

2A10 SEQ ID: 40

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCGATATTGTGATGACCCAGGACCCACTCTCCAACCC

CGTCACCCTTGGACAGCCGGTCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAG

AGTCTCCTATATAAGGATGGGAAGACATACTTGAATTGGTTTCTCC

AGAGGCCAGGCCAATCTCCACAGCTCCTAATTTATTTGATGTCCAC

CCGTGCATCTGGGGTCAGCGACAGATTCAGCGGCAGCGGGTCAGG

CACTGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAGGCTGAGGATGT

TGGGGTTTATTACTGCCAACAACTTGTAGAGTATCCGCTCACGTTT

GGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCA

TCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAA

CTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGC

CAAAGTACAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTCCAATCGGGTAACTC

CCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACA

GCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAAC

ACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGC

CCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG

SEQ ID 75: Seqüência líder de Campath MGWSCIILFLVATATGVHS

SEQ ID 76: Aminoácidos 586-785 de NOGO A humano (NOGO-A56)

MQESLYP AAQLCPSFEESEATPSPVLPDIVMEAPLNSAVPSAGASVIQP

SSSPLEASSVNYESIKHEPENPPPYEEAMSVSLKKVSGIKEEIKEPENIN

AALQETEAPYISIACDLIKETKLSAEPAPDFSDYSEMAKVEQPVPDHSE

LVEDSSPDSEPVDLFSDDSIPDVPQKQDETVMLVKESLTETSFESMIEY

ENKESEQ ID 77: construto humanizado de VH Hl de 2A10

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGL

EWMGNINPSNGGTNYNEKFKSRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTA

VYYCELGQG YWGQGTL VTVS S

SEQ ID 78: construto humanizado de VL Ll 1 de 2A10

DIVITQSPLSLPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFQQRPGQSP

QLLIYLMSTRASGVPDRFSGGGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQL

VEYPLTFGQGTK LEIK

SEQ ID 79: construto humanizado de cadeia pesada Hl de 2A10

MGWSCIILFLVATATGVHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYT

FTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGNINPSNGGTTNTYNEKFKSRVTMTRD

TSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSASTKGPS

VFPLAPSSKSTSGGT AALGCL VKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA

VLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD

KTHTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHED

PEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLN

GKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQV

SLTCL VKGFYPSDIA VE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT

VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 80: construto humanizado de cadeia leve Lll de 2A10

MGWSCIILFLVATATGVHSDIVITQSPLSLPVTLGQPASISCRSSKSLLY

KDGKTYLNWFQQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGGGSGTDFTL

KISRVEAEDVGVYYCQQL VE YPLTFGQGTKLEIKRTV AAPSVFIFPPSD

EQLKSGTASVVCLLNNF YPRE AKVQWK VDNALQSGNSQESVTEQDS

KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYA CEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID 81: PN codificando construto humanizado de VH Hl de 2A10 SEQ

ID: 77

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTG

AGTGGATGGGAAATATTAATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACA

ATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGTCACCATGACCAGGGACACGTCCA

CGAGCACAGTCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACA

CGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCTACTGGGGCCAGG

GAACACTAGTCACAGTCTCCTCA

SEQ ID 82: PN codificando construto humanizado de VL Ll 1 de 2A10 SEQID: 78

GATATTGTGATAACCCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTG

GACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTATA

TAAGGATGGGAAGACATACTTGAATTGGTTTCAGCAGAGGCCAGG

CCAATCTCCACAGCTCCTAATTTATTTGATGTCCACCCGTGCATCT

GGGGTCCCAGACAGATTCAGCGGCGGTGGGTCAGGCACTGATTTC

ACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTAT

TACTGCCAACAACTTGTAGAGTATCCGCTCACGTTTGGCCAGGGGA

CCAAGCTGGAGATCAAA

SEQ ID 83: PN codificando cadeia pesada humanizada Hl de 2A10 SEQ ID:79

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGA

AGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGAT

ACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTG

GACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAATATTAATCCTAGCAATGGTG

GTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGTCACCATGACCA

GGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGA

GATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCT

ACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCA

AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC

TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG

CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCC

CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG

ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGC

CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCC

TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC

TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGA

GGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC

CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTG

TGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCA

AGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA

TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC

AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACC

AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACAT

CGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA

AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTA

CAGC AAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGG AACG

TCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACAC

GCAGAAGAGCCTCT CCCTGTCTCCGGGTAAATGA

SEQ ID 84: PN codificando construto humanizado de cadeia leve Lll de

2A10 SEQ ID: 90

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCGATATTGTGATAACCCAGTCTCCACTCTCCCTGCC

CGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAG

AGTCTCCTATATAAGGATGGGAAGACATACTTGAATTGGTTTCAGC

AGAGGCCAGGCCAATCTCCACAGCTCCTAATTTATTTGATGTCCAC

CCGTGCATCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGCGGCGGTGGGTCAGG

CACTGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCCAACAACTTGTAGAGTATCCGCTCACGTTT

GGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCA

TCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAA

CTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGC

CAAAGTACAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTCCAATCGGGTAACTC

CCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACA

GCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAAC

ACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGC

CCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG

SEQ ID 85: construto humanizado de VH Hl 9 de 2A10

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQRPGQGL

EWIGNINPSNGGTNYNEKFKSRATMTRDTSTSTAYMELSSLRSEDTAV

YYCELGQGYWG QGTLVTVS S

SEQ ID 86: construto humanizado de VH H20 de 2A10

QVQL VQSGAE VKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGL

EWIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATMTRDTSTSTAYMELSSLRSEDTA

VYYCELGQGYWG QGTLVTVSS

SEQ ID 87: construto humanizado de VH H21 de 2A10

QVQL VQSGAE VKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQRPGQGL

EWIGNINPSNGGTW^NEKFKSKATMTRDTSTSTAYMELSSLRSEDTA

VYYCELGQGYWG QGTLVTVSS

SEQ ID 88: construto humanizado de VH H22 de 2A10

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGL

EWIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATMTRDTSTSTAYMELSSLRSEDTA

VYYCELGQGYWG QGTLVTVSS

SEQ ID 89: construto humanizado de VH H23 de 2A10

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWKQRPGQGL

EWIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATMTVDTSTSTAYMELSSLRSEDTA

VYYCELGQGYWG QGTLVTVSSSEQ ID 90: construto humanizado de VH H24 de 2A10

QVQL VQSGAE VKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGL

EWIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATLTVDTSTSTAYMELSSLRSEDTAV

YYCELGQGYWG QGTLVTVSS

SEQ ID 91: construto humanizado de VH H25 de 2A10

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQRPGQGL

EWMGNINPSNGGTNYNEKFKSRVTMTRDTSTSTAYMELSSLRSEDTA

VYYCELGQGYW GQGTLVTVSS

SEQ ID 92: construto humanizado de cadeia pesada Hl9 de 2A10

MGWSCIILFLVATATGVHSQVQL VQSGAE VKKPGASVKVSCKASGYT

FTSYWMHWVRQRPGQGLEWIGNINPSNGGTNYNEKFKSRATMTRDT

STSTAYMELSSLRSEDTAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSASTKGPSV

FPLAPSSKSTSGGT AALGCL VKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP AV

LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK

THTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE

VKFN WYVDG VE VHN AKTKPREEQ YNS T YR W S VLT VLHQD WLNGK

EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSL

TCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD

KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 93: construto humanizado de cadeia pesada H20 de 2A10

MGWSCIILFLVATATGVHSQVQL VQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYT

FTSYWMH WVRQ APGQGLEWIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATMTRDT

STSTAYMELSSLRSEDTAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSASTKGPSV

FPLAPSSKSTSGGT AALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV

LQSS GL YSL S S WTVP S S SLGTQT YICNVNHKP SNTK VDKK VEPKS CDK

THTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE

VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKE

YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLT

CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 94: construto humanizado de cadeia pesada H21 de 2A10

MGWSCIILFL V ATATGVHSQVQL VQSGAE VKXPGASVKVSCKASGYT

FTSYWMHWVRQRPGQGLEWIGNTNPSNGGTNYNEKFKSKATMTRDT

STSTA YMELSSLRSEDTAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSASTKGPSV

FPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV

LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK

THTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE

VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK

EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSL

TCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD

KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 95: construto humanizado de cadeia pesada H22 de 2A10

MGWSCIILFL V ATATGVHSQVQL VQSGAE VKKPGASVKVSCKASGYT

FTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATMTRDT

STSTA YMELSSLRSEDTAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSASTKGPSV

FPLAPSSKSTSGGT AALGCL VKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV

LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK

THTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE

VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYR VVS VLTVLHQD WLNGK

EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSL

TCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD

KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 96: construto humanizado de cadeia pesada H23 de 2A10

MGWSCIILFLV ATATGVHSQVQL VQSGAE VKKPGASVKVSCKASGYT

FTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATMTVDT

STSTA YMELSSLRSEDTAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSASTKGPSV

FPLAPSSKSTSGGT AALGCL VKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV

LQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE

VKFNWYVDGVE VHN AKTKPREEQYNSTYRWSYLTVLHQD WLNGKJE

YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLT

CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKrTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK

SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 97: construto humanizado de cadeia pesada H24 de 2A10

MGWSCIILFLVATATGVHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYT

FTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSNGGTNYNEKFKSKATLTVDT

STSTAYMELSSLRSEDTAVYYCELGQGYWGQGTLVTVSSASTKGPSV

FPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV

LQS SGLYSLS SWTWS S SLGTQTYICNYNHKPSNTKVDKKVEPKSCDK

THTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE

VKFNWYVDG VE VHNAKTKPREEQ YNSTYR WSVLTVLHQD WLNGKE

YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLT

CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK

SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 98: construto humanizado de cadeia pesada H25 de 2A10

MGWSCIILFLVATATGVHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYT

FTSYWMHWRQRPGQGLEWMGNINPSNGGTh^YNEKFKSRVTMTRD

TSTSTA YMELS SLRSEDT A VYYCELGQG Y WGQGTL VTVS S ASTKGPS

VFPLAPSSKSTSGGT AALGCL VKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA

VLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTK VDKK VEPKSCD

KTHTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHED

PEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ YNSTYR VVSVLTVLHQD WLN

GKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQV

SLTCL VKGFYPSDIA VE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT

VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID 99: PN codificando construto humanizado de VH Hl9 de 2A10 SEQ

ID: 85CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG

GCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCA

GCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGAGGCCTGGACAAGGGCTTG

AGTGGATCGG AAAT ATT AATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACA

ATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGCCACCATGACCAGGGACACGTCCA

CGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACA

CGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCTACTGGGGCCAGG

GAACACTAGTCACAGTCTCCTCA

SEQ ID 100: PN codificando construto humanizado de VH H20 de 2A10SEQ ID: 86

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG

GCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCA

GCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTG

AGTGGATCGG AAAT ATT AATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACA

ATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACCATGACCAGGGACACGTCCA

CGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACA

CGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCTACTGGGGCCAGG

GAACACTAGTCACAGTCTCCTCA

SEQ ID 101: PN codificando construto humanizado de VH H21 de 2A10SEQ ID: 87

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG

GCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCA

GCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGAGGCCTGGACAAGGGCTTG

AGTGGATCGGAAATATT AATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACA

ATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACCATGACCAGGGACACGTCCA

CGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACA

CGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCTACTGGGGCCAGG

GAACACTAGTCACAGTCTCCTCA

SEQ ID 102: PN codificando construto humanizado de VH H22 de 2A10SEQ ID: 88

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG

GCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCA

GCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGGCTTG

AGTGGATCGG AAATATT AATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACA

ATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACCATGACCAGGGACACGTCCA

CGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACA

CGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCTACTGGGGCCAGG

GAACACTAGTCACAGTCTCCTCA

SEQ ID 103: PN codificando construto humanizado de VH H23 de 2AlOSEQ ID: 89

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG

GCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCA

GCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGGCTTG

AGTGGATCGG AAAT ATT AATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACA

ATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACCATGACCGTAGACACGTCCA

CGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACA

CGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCTACTGGGGCCAGG

GAACACTAGTCACAGTCTCCTCA

SEQ ID 104: PN codificando construto humanizado de VH H24 de 2A10SEQ ID: 90

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG

GCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCA

GCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGGCTTG

AGTGGATCGGAAATATT AATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACA

ATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACCCTGACCGTAGACACGTCCA

CGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACA

CGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCTACTGGGGCCAGG

GAACACTAGTCACAGTCTCCTCASEQ ED 105: PN codificando construto humanizado de VH H25 de 2AlOSEQ ID: 91

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG

GCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCA

GCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGAGGCCTGGACAAGGGCTTG

AGTGGATGGG AAATATT AATCCTAGCAATGGTGGTACTAACTACA

ATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGTCACCATGACCAGGGACACGTCCA

CGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACA

CGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCTACTGGGGCCAGG

GAACACTAGTCACAGTCTCCTCA

SEQ ID 106: PN codificando construto humanizado de cadeia pesada Hl9 de2A10 SEQ ID: 92

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGA

AGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGAT

ACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGAGGCCTG

GACAAGGGCTTGAGTGGATCGG AAATATT AATCCTAGCAATGGTG

GT ACTAACT ACAATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGCCACCATGACCA

GGGACACGTCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGA

GATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCT

ACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCA

AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC

TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC

CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG

CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCC

CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG

ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGC

CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC

TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGA

GGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC

CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTG

TGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCA

AGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA

TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC

AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACC

AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACAT

CGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA

AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTA

CAGC AAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGG AACG

TCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACAC

GCAGAAGAGCCTC TCCCTGTCTCCGGGTAAATGA

SEQ ID 107: PN codificando construto humanizado de cadeia pesada H20 de

2A10 SEQ ID: 93

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTCC

ACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGC

CTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTT

CACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGG

GCTTGAGTGGATCGGAAATATTAATCCTAGCAATGGTGGTACTAA

CTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACCATGACCAGGGACAC

GTCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGA

GGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCTACTGGGG

CCAGGG AACACT AGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCC

ATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGG

CACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACC

GGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGC

AGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTAC

ATCTGC AACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAG

AAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCG

TGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCC

CCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGG

TCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCA

AGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGA

CAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCA

GCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGT

ACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGA

AAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGT

ACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCA

GCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGT

GGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCA

CGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAA

GCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTC

TGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAG

AGCCTC TCCCTGTCTCCGGGTAAATGA

SEQ ID 108: PN codificando construto humanizado de cadeia pesada H21 de2A10 SEQ ID: 94

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGA

AGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGAT

ACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGAGGCCTG

GACAAGGGCTTGAGTGGATCGGAAATATTAATCCTAGCAATGGTG

GTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACCATGACCA

GGGACACGTCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGA

GATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCTACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCA

AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC

TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC

CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG

CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCC

CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG

ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGC

CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCC

TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC

TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGA

GGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC

CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTG

TGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCA

AGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA

TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC

AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACC

AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACAT

CGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA

AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTA

CAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACG

TCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACAC

GCAGAAGAGCCTC TCCCTGTCTCCGGGTAAATGA

SEQ ID 109: PN codificando construto humanizado de cadeia pesada H22 de

2A10 SEQ ID: 95

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTCCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATCGG AAATATT AATCCTAGCAATGGTG

GTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACCATGACCA

GGGACACGTCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGA

GATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCT

ACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCA

AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC

TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC

CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG

CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCC

CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG

ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGC

CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCC

TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC

TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGA

GGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC

CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTG

TGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCA

AGGAGT ACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA

TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC

AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACC

AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACAT

CGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA

AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTA

CAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACG

TCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACAC

GCAGAAGAGCCTC TCCCTGTCTCCGGGTAAATGA

SEQ ID 110: PN codificando construto humanizado de cadeia pesada H23 de

2A10 SEQ ID: 96ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGC AACAGCT ACAG

GTGTCCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGA

AGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGAT

ACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTG

GACAAGGGCTTGAGTGGATCGGAAATATTAATCCTAGC AATGGTG

GTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACCATGACCG

TAGACACGTCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGA

GATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCT

ACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCA

AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC

TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC

CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG

CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCC

CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG

ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGC

CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCC

TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC

TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGA

GGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC

CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTG

TGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCA

AGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA

TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC

AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACC

AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACAT

CGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA

AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTA

CAGC AAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGG AACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCT CCCTGTCTCCGGGTAAATGASEQ ID 111: PN codificando construto humanizado de cadeia pesada H24 de2A10 SEQ ID: 97

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGA

AGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGAT

ACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTG

GACAAGGGCTTGAGTGGATCGG AAATATT AATCCTAGC AATGGTG

GTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACCCTGACCG

TAGACACGTCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGA

GATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCT

ACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCA

AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC

TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC

CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG

CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCC

CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG

ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGC

CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCC

TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC

TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGA

GGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCAT AATGC

CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGT ACCGTG

TGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCA

AGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA

TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC

AGGTGT ACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACAT

CGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA

AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTA

CAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACG

TCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACAC

GCAGAAGAGCCTC TCCCTGTCTCCGGGTAAATGA

SEQ ID 112: PN codificando construto humanizado de cadeia pesada H25 de

2A10 SEQ ID: 98

ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAG

GTGTCCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGA

AGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGAT

ACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGAGGCCTG

GACAAGGGCTTGAGTGGATGGG AAATATT AATCCTAGCAATGGTG

GTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAGAGTCACCATGACCA

GGGACACGTCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGA

GATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGAACTGGGACAGGGCT

ACTGGGGCCAGGGAACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCA

AGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC

TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC

CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGG

CGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCC

CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG

ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTG

GACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGC

CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCGCGGGGGCACCGTCAGTCTTCC

TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCC

TGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGA

GGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC

CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCA

AGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA

TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC

AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACC

AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACAT

CGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA

AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTA

CAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACG

TCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACAC

GCAGAAGAGCCTC TCCCTGTCTCCGGGTAAATGA

SEQ ID NO. 113 - Seqüência de aminoácidos de fragmento NOGO-A demico

VQDSLCPVAQLCPSFEESEATPSPVLPDIVMEAPLNSAVPSAGASAVQPSSSPLEASSVNFESVKHEPENPPPYEEAMNYSRKKVSGIKEEIKEPESINAA VQETE AP YISIACDLIKETKL S AEPTPDF S S YSEMAKVEQPLPDHSELVEDSSPDSEPVDLFSDDSIPDVPQKQDEAVILVKETLTETSFESMIEHENK

Claims

1. Anticorpo monoclonal que se liga a NOGO humano,caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeiapesada que tem a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO. 77compreendendo adicionalmente um número η de substituições em uma oumais de posições 12, 20, 38, 40, 48, 67, 68, 70, 72, 74, 76, 79 e 91; em quecada resíduo de aminoácido substituído é reposto com o resíduo deaminoácido na posição equivalente em SEQID NO 7 e η é um número entre 1e 13.

2. Anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende a substituição emposição 79.

3. Anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 2,caracterizado pelo fato de que a seqüência de anticorpo compreende asubstituição em posições 48 e 68.

4. Anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 2 oureivindicação 3, caracterizado pelo fato de compreender adicionalmente umasubstituição em posições 40 e/ou 67.

5. Anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 4,caracterizado pelo fato de compreender adicionalmente uma substituição emposições 38 e/ou 72 e/ou 70.

6. Anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 5,caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende adicionalmentesubstituições em uma ou mais de posições 12, 20, 74, 76 ou 91.

7. Anticorpo monoclonal de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a região variável de cadeiapesada tem uma seqüência dada em SEQ ID NOs: 11-18, 29-33 e 85-91.

8. Anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 7,caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende as regiões VHfornecidas em SEQ ID NOs 11, 12, 16, 18, 85, 86, 87 ou 91.

9. Anticorpo monoclonal, caracterizado pelo fato de quecompreende a região variável de cadeia pesada como definido em qualqueruma das reivindicações 1 a 8 em combinação com uma região variável decadeia leve tendo a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO. 20opcionalmente compreendendo adicionalmente diversas substituições em umaou mais de posições 4, 7, 11, 19, 42, 64 e 70; em que cada resíduo deaminoácido substituído é reposto com o resíduo de aminoácido na posiçãoequivalente em SEQ ID NO. 8 e o número de substituições é entre 0 e 7.

10. Anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 9,caracterizado pelo fato de que a região variável de cadeia leve tem umasubstituição em posições 11 e 19.

11. Anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 9,caracterizado pelo fato de que a região variável de cadeia leve tem umasubstituição em posição 4.

12. Anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 10,caracterizado pelo fato de que a região variável de cadeia leve tem umasubstituição em posição 42.

13. Anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 10ou 12, caracterizado pelo fato de que a região variável de cadeia leve tem umasubstituição em posições 7, 64 ou 70.

14. Anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 9,caracterizado pelo fato de que a região variável de cadeia leve é SEQ ID NO. 20.

15. Anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 9,caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende as regiões VLfornecidas em SEQ ID NOs 23 e 25.

16. Anticorpo monoclonal, caracterizado pelo fato decompreender as regiões VH e VL selecionadas a partir da seguinte lista:H1L13 (SEQ ID 77 + SEQ ID 20), H5L13 (SEQ ID 11 + SEQ ID 20), H6L13(SEQ ID 12 + SEQ ID 20), H14L13 (SEQ ID 14 + SEQ ID 20), H15L13(SEQ ID 15 + SEQ ID 20), H16L13 (SEQ ID 16 + SEQ ID 20), H17L13(SEQ ID 17 + SEQ ID 20), H18L13 (SEQ ID 18 + SEQ ID 20), H19L13(SEQ ID 85 + SEQ ID 20), H20L13 (SEQ ID 86 + SEQ ID 20), H21L13(SEQ ID 87 + SEQ ID 20), H22L13 (SEQ ID 88 + SEQ ID 20), H23L13(SEQ ID 89 + SEQ ID 20), H24L13 (SEQ ID 90 + SEQ ID 20), H25L13(SEQ ID 91 + SEQ ID 20), H700L13 (SEQ ID 13 + SEQ ID 20), H1L16(SEQ ID 77 + SEQ ID 23), H5L16 (SEQ ID 11 + SEQ ID 23), H6L16 (SEQID 12 + SEQ ID 23), H14L16 (SEQ ID 14 + SEQ ID 23), H15L16 (SEQ IDSEQ ID 23), H16L16 (SEQ ID 16 + SEQ ID 23), H17L16 (SEQ ID 17 +SEQ ID 23), H18L16 (SEQ ID 18 + SEQID 23), H19L16 (SEQ ID 85 + SEQID 23), H20L16 (SEQ ID 86 + SEQ ID 23), H21L16 (SEQ ID 87 + SEQ ID-23), H22L16 (SEQ ID 88 + SEQ ID 23), H23L16 (SEQ ID 89 + SEQ ID 23),H24L16 (SEQ ID 90 + SEQ ID 23), H25L16 (SEQ ID 91 + SEQ ID 23),H700L16 (SEQ ID 13 + SEQ ID 23), H1L18 (SEQ ID 77 + SEQ ID 25),H5L18 (SEQ ID 11 + SEQ ID 25), H6L18 (SEQ ID 12 + SEQ ID 25),H14L18 (SEQ ID 14 + SEQ ID 25), H15L18 (SEQ ID 15 + SEQ ID 25),H16L18 (SEQ ID 16 + SEQ ID 25), H17L18 (SEQ ID 17 + SEQ ID 25),H18L18 (SEQ ID 18 + SEQ ID 25), H19L18 (SEQ ID 85 + SEQ ID 25),H20L18 (SEQ ID 86 + SEQ ID 25), H21L18 (SEQ ID 87 + SEQ ID 25),H22L18 (SEQ ID 88 + SEQ ID 25), H23L18 (SEQ ID 89 + SEQ ID 25),H24L18 (SEQ ID 90 + SEQ ID 25), H25L18 (SEQ ID 91 + SEQ ID 25),H700L18 (SEQ ID 13 + SEQ ID 25).

17. Anticorpo monoclonal de acordo com a reivindicação 16,caracterizado pelo fato de ser obtido a partir da expressão de uma dasseguintes cadeias de anticorpo de comprimento completo em uma célula demamífero:<table>table see original document page 104</column></row><table>

18. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato decompreender um anticorpo anti-NOGO ou fragmento funcional deste comodefinido em qualquer uma das reivindicações 1 a 17 junto com um diluente oucarreador farmaceuticamente aceitável.

19. Uso de um anticorpo anti-NOGO como definido emqualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de incluiranticorpos alterados ou um fragmento funcional destes na preparação de ummedicamento para tratamento ou profílaxia de derrame e outrasdoenças/distúrbios neurológicos.

20. Uso de um anticorpo anti-NOGO como definido emqualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de incluiranticorpos alterados ou um fragmento funcional destes na preparação de ummedicamento para inibir neurodegeneração e/ou promover recuperaçãofuncional em um paciente humano afligido com, ou em risco de desenvolver,um derrame e outra doença/distúrbio neurológico.

21. Método de promoção de brotamento axonal, caracterizadopelo fato de compreender a etapa de colocar em contato um axônio humanocom um anticorpo anti-NOGO como definido nas reivindicações 1 a 17.

22. Método de acordo com reivindicação 21, caracterizadopelo fato de que o método é realizado in vitro.

23. Método de produção de um anticorpo anti-NOGO comodefinido em qualquer uma das reivindicações 1 a 17 que especificamente seliga a e neutraliza a atividade de NOGO-A humano cujo método écaracterizado pelo fato de compreender as etapas de;(a) fornecer um primeiro vetor codificando uma cadeia pesadado anticorpo;(b) fornecer um segundo vetor codificando a cadeia leve doanticorpo;(c) co-transfectar uma célula hospedeira de mamífero comditos primeiro e segundo vetores;(d) cultivar a célula hospedeira de etapa (c) em meio de cultura(preferivelmente livre de soro) em condições permissivas para a secreção doanticorpo a partir de dita célula hospedeira em dito meio de cultura;(e) recuperar o anticorpo secretado de etapa (d).

24. Método de produção de um anticorpo anti-NOGO queinibe competitivamente a ligação do anticorpo como definido em qualqueruma das reivindicações 1 a 17 cujo método é caracterizado pelo fato decompreender as etapas de;(a) fornecer um primeiro vetor codificando uma cadeia pesadado anticorpo;(b) fornecer um segundo vetor codificando a cadeia leve doanticorpo;(c) co-transfectar uma célula hospedeira de mamífero comditos primeiro e segundo vetores;(d) cultivar a célula hospedeira de etapa (c) em meio de cultura(preferivelmente livre de soro) em condições permissivas para a secreção doanticorpo a partir de dita célula hospedeira em dito meio de cultura;(e) recuperar o anticorpo secretado de etapa (d).

25. Método de acordo com reivindicações 23 e 24,caracterizado pelo fato de que a célula hospedeira é selecionada a partir dogrupo consistindo de; NSO Sp2/o, CHO, COS, uma célula de fibroblasto talcomo 3T3, particularmente CHO.