BR112018008490B1 - Compostos e conjugados de criptoficina, processos para a preparação dos mesmos, medicamento e composição farmacêutica - Google Patents

Abstract

COMPOSTOS E CONJUGADOS DE CRIPTOFICINA, PROCESSOS PARA A PREPARAÇÃO DOS MESMOS, MEDICAMENTO E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA . A presente invenção refere-se a compostos de criptoficina de fórmula (I): A invenção também se refere a cargas úteis de criptoficina, conjugados de criptoficina, composições contendo-os e seu uso terapêutico, especialmente como agentes anticâncer. A invenção também se refere ao processo para a preparação desses conjugados.

Description

[0001] A presente invenção refere-se aos novos compostos de criptoficina, às novas cargas úteis de criptoficina, aos novos conjugados de criptoficina, às composições contendo-os e ao seu uso terapêutico, especialmente como agentes anticâncer. A invenção também se refere ao processo para a preparação destes conjugados.

[0002] Criptoficinas são metabólitos secundários que pertencem à classe de macrociclos de depsipeptídeo produzidos por cianobactérias do gênero Nostoc. A primeira representativa desta classe de moléculas, criptoficina-1 (C-1), foi isolada em 1990 de cianobactéria N o sto c sp (ATCC 53789; veja Eißler S., et al., Synthesis 2006, 22, 3747-3789). Criptoficinas C-1 e C-52, que são caracterizadas por função de epóxido, foram constatadas ter atividade antitumor in vitro e in vivo no início da década de 1990. As cloro-hidrinas destas, C-8 e C-55, foram acentuadamente mais ativas, porém não puderam ser formuladas como soluções estáveis (Bionpally R.R., et al., Cancer Chemother Pharmacol 2003, 52, 2533). Sua atividade elevada foi correlacionada por sua capacidade putativa de gerar os epóxidos correspondentes em células. Sem nenhum método para adequadamente estabilizar as cloro-hidrinas no momento, a criptoficina C-52 (LY355703) entrou em experimentos clínicos, produziu atividade antitumor marginal em dois experimentos de câncer de fase ll com 30 a 40% de doença estável, e foi, desse modo descontinuada (Edelman M.J., et al., Lung Cancer 2003, 39, 197-99 e Sessa C., et al., Eur J Cancer 2002, 38, 2388-96).

[0003] Considerando sua potência elevada e mecanismo comum de ação com maitansinoides e auristatinas, as duas moléculas citotóxicas validadas na clínica para conjugados de anticorpo-fármaco (CAF), esta série foi considearada como um potencial ligante de tubulina para CAF. Portanto, os conjugados na série de criptoficina foram desenvolvidos iniciando de derivação na posição para-benzílica do macrociclo (AlAwar R.S., et al., J Med Chem 2003, 46, 2985-3007).

[0004] O WO2011/001052 descreve os conjugados de anticorpo- fármaco de criptoficina aos quais a porção citotóxica está ligada ao anticorpo através da posição para-benzílica usando várias espécies de ligantes. Elas podem ser cliváveis, seníveis a dissulfeto ou protease, ou não cliváveis.

[0005] Outra otimização de conjugados de anticorpo-fármaco de criptoficina descrita no WO2011/001052 induz a potentes conjugados de criptoficina que exibiram atividade antitumor promissora, porém foram constatados instáveis no plasma de camundongos, enquanto sendo estáveis no plas de espécies não roedoras. Portanto, havia uma necessidade de conjugados de criptoficina exibindo propriedades de estabilidade.

[0006] O propósito desta invenção é o de propor novos macrociclos de criptoficina, que uma vez conjugados a um anticorpo são estáveis em plasma de camundongos, e novos conjugados de criptoficina compostos daqueles macrociclos estáveis.

Sumário da Invenção

[0007] A este respeito, a invenção refere-se aos compostos de criptoficina de fórmula (I): em que: Ri representa um grupo (C1-C6) alquila; R2 e R3 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila; ou alternativamente R2 e R3 formam juntamente com o átomo de carbono ao qual eles são ligados um grupo (C3-C6) cicloalquila ou (C3-C6) heterocicloalquila; R4 e R5 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila ou um grupo (C1-C6) alquil-NH(R12) ou um grupo (C1-C6) alquil-OH ou um grupo (C1-C6) alquil- SH ou um grupo (C1-C6) alquil-CO2H; ou alternativamente R4 e R5 formam juntamente com o átomo de carbono ao qual eles são ligados um grupo (C3-C6) cicloalquila ou (C3-C6) heterocicloalquila; R6 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila; R7 e R8 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila ou um grupo (C1-C6) alquil-CO2H ou um grupo (C1-C6) alquil-N(C1-C6)alquil2; ou alternativamente R7 e R8 formam juntamente com o átomo de carbono ao qual eles são ligados um grupo (C3-C6)cicloalquila ou um grupo (C3-C6)heterocicloalquila; R9 representa um ou mais substituintes do núcleo fenila escolhido, independentemente um do outro, de: um átomo de hidrogênio, -OH, (C1-C4)alcóxi, um átomo de halogênio, -NH2, -NH(C1- C6)alquila, -N(C1-C6)alquil2, -NH(C1-C6)cicloalquila ou (C3- C6)heterocicloalquila; Rio representa pelo menos um substituinte do núcleo fenila escolhido de um átomo de hidrogênio e um grupo (C1-C4)alquila; W representa (Ci-C6)alquil-NH(Rii), mais particularmente (CH2)nNHRii; (Ci-C6)alquil-OH, mais particularmente (CH2)nOH; (C1-C6)alquil-SH, mais particularmente (CH2)nSH; CO2H ou C(=O)NH2; (C1-C6)alquil-CO2H ou (C1-C6)alquil-C(=O)NH2; ou (C1-C6)alquil-N3. W sendo posicionado em uma posição orto (o), meta (m) ou para (p) do núcleo fenila; R11 e R12 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou (C1-C6)alquila, mais particularmente um grupo metila; n representa um número inteiro entre 1 e 6.

[0008] A invenção também se refere às cargas úteis de criptoficina de fórmula (II): em que: R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 e R10 são como definidos na fórmula (I); Y representa (C1-C6)alquil-NR11 ou (C1-C6)alquil-O ou (C1-C6) alquil-S; ou alternativamente Y representa C(=O)O, C(=O)NH, (C1-C6) alquil-C(=O)O ou (C1-C6)alquil-C(=O)NH; ou alternativamente Y representa (C1-C6)alquil-triazol- como Y sendo posicionado em uma posição orto (o), meta (m) ou para (p) do núcleo fenila; R11 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila; L representa um ligante; RCG1 representa um grupo químico reativo presente na extremidade do ligante, RCG1 sendo reativo para um grupo químico reativo presente em um anticorpo.

[0009] A invenção também se refere aos conjugados de fórmula (III): em que: R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 e R10 são como definidos na fórmula (I); Y e L são como definidos na fórmula (II); G representa o produto de reação entre RCG1, um grupo químico reativo presente na extremidade do ligante e RCG2, um grupo químico reativo ortogonal presente no anticorpo (Ab); Ab representa um anticorpo.

[00010] Cada substituinte R1 a R11 pode também adotar uma das configurações espaciais (por exemplo, R ou S ou alternativamente Z ou E) como descrito nos exemplos.

[00011] Os compostos de fórmula (I), (II) e (III) podem conter um ou mais átomos de carbono assimétricos. Eles podem, portanto, existir na forma de enantiômeros ou diastereoisômeros. Estes enantiômeros e diastereoisômeros, e também misturas dos mesmos, incluindo misturas racêmicas, formam parte da invenção.

[00012] Os compostos de fórmula (I), incluindo aqueles que são ilustrados, podem existir na forma de sais de adição de ácido ou bases, especialmente de ácidos farmaceuticamente aceitáveis.

Definições

[00013] No contexto da presente invenção, certos termos têm as seguintes definições: • Grupo alquenila: um grupo hidrocarboneto obtido por remoção de um átomo de hidrogênio de um alceno. O grupo alquenila pode ser linear ou ramificado. Exemplos que podem ser mencionados incluem etenila (-CH=CH2, também chamada vinila) e propenila (-CH2- CH=CH2, também chamada alila). • Grupo alcóxi: um grupo -O-alquila, em que o grupo alquila é como abaixo definido; • Grupo alquila: um grupo com base em hidrocarboneto alifático saturado linear ou ramificado obtido por remoção de um átomo de hidrogênio de um alcano. Exemplos que podem ser mencionados incluem grupos metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, terc- butila, pentila, neopentila, 2,2-dimetilpropila e hexila; • Grupo alquileno: um grupo divalente saturado de fórmula empírica -CnH2n-, obtido por remoção de dois átomos de hidrogênio de um alcano. O grupo alquileno pode ser linear ou ramificado. Exemplos que podem ser mencionados incluem grupos metileno (-CH2-), etileno (- CH2CH2-), propileno (-CH2CH2CH2-), butileno (-CH2CH2CH2CH2-) e hexileno (-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-) ou os seguintes grupos ramificadosA ; preferivelmente, o grupo alquileno é da fórmula -(CH2)n-, n representando um número inteiro; nas faixas de valores, os limites são incluídos (por exemplo, uma faixa do tipo "n variando de 1 a 6" ou "entre 1 e 6" inclui os limites de 1 e 6); • Anticorpo: um anticorpo com afinidade com relação ao alvo biológico, mais particularmente um anticorpo monoclonal. A função do anticorpo é direcionar o composto biologicamente ativo como um composto citotóxico para o alvo biológico. O anticorpo pode ser monoclonal, policlonal ou multiespecífico; el epode também ser um fragmento de anticorpo; ele pode também ser um anticorpo de murino, quimérico, humanizado ou humano. Um "anticorpo" pode ser um anticorpo natural ou convencional em que duas cadeias pesadas são ligadas umas as outras por ligações de dissulfeto e cada cadeia pesada é ligada a uma cadeia leve por uma ligação de dissulfeto (também referido como um "anticorpo de tamanho natural"). Os termos "anticorpo convencional (ou de tamanho natural)" referem-se tanto a um anticorpo compreendendo o peptídeo de sinal (ou pró-peptídeo, se houver), quanto à forma madura obtida na secreção e processamento proteolítico da cadeia(s). Existem dois tipos de cadeia leve, lambda (l) e kappa (k). Existem cinco classes de cadeia pesada principais (ou isotipos) que determinam a atividade functional de uma molécula de anticorpo: IgM, IgD, IgG, IgA e IgE. Cada cadeia contém domínios de sequência distintos. A cadeia leve inclui dois domínios ou regiões, um domínio variável (VL) e um domínio constante (CL). A cadeia pesada inclui quatro domínios, um domínio variável (VH) e três domínios constants (CH1, CH2 e CH3, coletivamente referidos como CH). As regiões variáveis tanto de cadeias leves (VL) quanto pesadas (VH) determinam o reconhecimento de ligação e especificidade ao antígeno. Os domínios de região constante das cadeias leves (CL) e pesadas (CH) conferem propriedades biológicas importantes tais como associação de cadeia de anticorpo, associação, secreção, mobilidade trans-placental, ligação de complemento, e ligação aos receptores de Fc (FcR). O fragmento de Fv é a parte terminal de N do fragmento de Fab de uma imunoglobulina e consiste nas porções variáveis de uma cadeia leve e uma cadeia pesada. A especifidade do anticorpo reside na complementaridade estrutural entre o sítio de combinação de anticorpo e o determinante antigênico. Os sítios de combinação de anticorpo são constituídos por resíduos que são principalmente das regiões determinantes de hipervariáveis ou complementaridade (CDRs). Ocasionalmente, resíduos de regiões não hipervariáveis ou estruturais (FR) influenciam a estrutura de domínio global e, consequentementem o sítio de combinação. Regiões Determinantes da Complementaridade ou CDRs referem-se às sequências de aminoácido que juntamente definem a afinidade e especificidade de ligação da região Fv natural de um sítio de ligação de imunoglobulina. Cada uma das cadeias leves e pesadas de uma imunoglobulina tem três CDRs, designadas CDR1-L, CDR2-L, CDR3-L e CDR1-H, CDR2-H, CDR3-H, respectivamente. Um sítio de ligação de antígeno de anticorpo convencional, portanto, inclui seis CDRs, compreendendo o grupo de CDR de cada região V de cadeia pesada e leve.

[00014] Como usado aqui, o termo "anticorpo" significa tanto anticorpos convencionais (tamanho natural) quanto fragmentos dos mesmos, bem como fragmentos e anticorpos de domínio simples dos mesmos, em particular, cadeia pesada variável de anticorpos de domínio simples. Fragmentos de anticorpos (convencionais) tipicamente compreendem uma porção de um anticorpo intacto, em particular a região de ligação de antígeno ou região variável do anticorpo intacto, e mantêm a função biológica do anticorpo convencional. Exemplos de tais fragmentos incluem Fv, Fab, F(ab')2, Fab', dsFv, (dsFv)2, scFv, sc(Fv)2 e diacorpos.

[00015] A função do anticorpo é direcionar o composto biologicamente ativo como um composto citotóxico para o alvo biológico. • Grupo arila: um grupo aromático cíclico contendo entre 5 a 10 átomos de carbono. Exemplos de grupos arila incluem fenila, tolila, xilila, naftila; • Alvo biológico: um antígeno (ou grupo de antígenos) preferivelmente localizado na superfície de células de câncer ou células estromais associadas com este tumor; estes antígenos pode ser, por exemplo, um receptor de crescimento, um produto de oncogene ou um produto de gene "supressor de tumor" mutado, uma molécula relacionada à angiogênese ou uma molécula de adesão; • conjugado: um conjugado de anticorpo-fármaco ou ADC, isto é, um anticorpo ao qual é covalentemente ligado por meio de um ligante pelo menos uma molécula de um composto citotóxico; • grupo cicloalquila: um grupo alquila cíclica compreendendo entre 3 e 6 átomos de carbono comprometidos na estrutura cíclica. Exemplos que podem ser mencionados incluem grupos ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila e ciclo-hexila; • DAR (relação de fármaco-para-anticorpo): um número médio de moléculas citotóxicas ligadas por meio de um ligante a um anticorpo; • halogênio: qualquer um dos quatro elementos, flúor, cloro, bromo e iodo; • grupo heteroarila: um grupo arila contendo entre 2 a 10 átomos de carbono e entre 1 a 5 heteroátomos tais como nitrogênio, oxigênio ou enxofre comprometidos no anel e conectados aos átomos de carbono formando o anel. Exemplos de grupos heteroarila incluem piridila, pirimidila, tienila, imidazolila, triazolila, indolila, imidazo-piridila, pirazolila; • Grupo heterocicloalquila: um grupo cicloalquila contendo entre 2 a 8 átomos de carbono e entre 1 a 3 heteroátomos, tais como nitrogênio, oxigênio e enxofre comprometidos no anel e conectados aos átomos de carbono formando o anel. Exemplos incluem aziridinila, pyrrolidinila, piperidinila, piperazinila, morfolinila, tiomorfolinila, tetra- hidrofuranila, tetra-hidrotiofuranila, tetra-hidropiranila, azetidinila, oxetanila e piranila; • Ligante: um grupo de átomos ou uma ligação simples que pode covalentemente ligar um composto citotóxico a um anticorpo a fim de formar um conjugado; • Fragmento: moléculas mais simples que permitem a síntese total de compostos de criptoficina; • carga útil: um composto citotóxico ao qual é covalentemente ligado um ligante; • grupo químico reativo: grupo de átomos que pode promover ou sofrer uma reação química.

Abreviações

[00016] CAF: conjugado de anticorpo-fármaco; AcOH: ácido acético; AIBN: azobisisobutironitrila; ALQ: grupo (C1-C12)alquileno, mais particularmente (C1-C6)alquileno, mais particularmente da forma - (CH2)n-, n sendo um número inteiro de 1 a 12 e preferivelmente de 1 a 6; aq.: aquoso; Ar: argônio; AUC: área sob a curva; BEMP: 2-terc- butilimino-2-dietilamino-1,3-dimetilper-hidro-1,3,2-diazafosforina; BF3: trifluoreto de boro; Boc2O: di-terc-butil-dicarbonato; BuLi: butil lítio; CAN: nitrato de amônio cérico; Cbz: carboxibenzila; CHCl3: clorofórmio; CH3CN: acetonitrila; CH3I: iodeto de metila; CO2: dióxido de carbono; CL: clearance; m-CPBA: ácido m-cloroperbenzoico; CR: resposta completa; cripto significa a unidade de fórmula , cripto especialmente denotando um dos compostos de criptoficina D1D19 descritos posteriormente ou um composto de criptoficina de um exemplo; D1 refere-se a um ADC com uma DAR de 1, D2 a um ADC com uma DAR de 2, etc.; d: dia; DAR : relação de fármaco-para- anticorpo; DBU: 8-diazabiciclo [5.4.0]undec-7-eno; DCC: N,N’-diciclo- hexilcarbodiimida; DCE: dicloroetano; DCM: diclorometano; DDQ: 2,3- dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona; DIC: N,N'-di-isopropilcarbodiimida; DIAD: di-isopropilazodicarboxilato; DIEA: N,N-di-isopropiletilamina; DMA: dimetilacetamida; DMAP : 4-(dimetilamino)piridina; DME: dimetoxietano; DMEM: Meio de Eagle Modificado de Dulbecco; DMEM/F12: Mistura de Nutriente de Meio de Eagle Modificado de Dulbecco F-12; DMF: dimetilformamida; DMSO: dimetilsulfóxido; DPBS: Salina tamponada por fosfato de Dulbecco; DPPA: difenilfosforazida (PhO)2P(=O)N3; DSC: carbonato de N,N‘-dissuccinimidila; EDA: etilenodiamina; EDC: 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida; EDTA: ácido etilenodiaminatetra-acético; EEDQ: N-etoxicarbonil-2- etóxi-1,2-di-hidroquinolina; ELSD: detector de dispersão de luz por evaporação; eq.: equivalente; ES: eletrovaporização; EtOAc: acetato de etila; Et2O: dietil éter; EtOH: etanol; Ex.: exemplo; FCS: soro de bezerro fetal; Fmoc: 9-fluorenilmetoxicarbonila; FmocOSu: N-(9- fluorenilmetoxicarbonilóxi) succinimida; GI: grupo eletrocondutor; Grubbs I: benzilideno-bis(triciclo-hexilfosfina)diclororutênio; Grubbs II: (1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-2-imidazolidinilideno)dicloro(fenilmetileno) (triciclo-hexilfosfina)rutênio; h: hora; H2O: água; Hal: halogênio; HATU: hexafluorofosfato de 3-óxido de 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3- triazolo [4,5-b]piridínio; HCl: ácido cloro-hídrico; HEPES: ácido 4-(2- hidroxietil)-1-piperazinaetanossulfônico; HIC: cromatografia de interação hidrofófica; HOAt: 1-hidróxi-7-azabenzotriazol; HOBt: 1- hidróxi-benzotriazol; HPLC: cromatografia líquida de desempenho elevado; EMAR: espectrometria de massa de alta resolução; IC50: concentração inibitória média; i.e.: id est significando isto é; IEC: cromatografia de permuta de íon; iPrOH: 2-propanol; iPr2O: di-isopropil éter; i.v.: intravenoso; K2CO3: carbonato de potássio; LDA: di- isopropilamida de lítio; LiOH: hidróxido de lítio; marg.: marginalmente; MeOH: metanol; MeTHF: 2-metil-tetra-hidrofurano; MgSO4: sulfato de magnésio; min: minuto; MNBA: anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico; MTBE: terc-butil éter de metila; DMT: dose máxima tolerada; NaH: hidreto de sódio; NaHSO4: bissulfato de sódio; Na2S2O3: tiossulfato de sódio; NaCl: cloreto de sódio; NaHCO3: carbonato de hidrogênio de sódio; NaHSO3: bissulfeto de sódio; NaHSO4: sulfato de hidrogênio de sódio; NaOH: hidróxido de sódio; NH4Cl: cloreto de amônio; NHS: N- hidroxissuccinimida; NMP: 1-metil-2-pirrolidona; RMN: ressonância magnética nuclear; P2-Et: 1-etil-2,2,4,4,4-pentacis (dimetilamino)- 2À5,4À5-catenadi(fosfazeno); PBS: salina tamponada por fosfato; PEG: polietileno glicol; PK: farmacocinéticos; PMB: para-metoxibenzila; PNGase F: Peptídeo-N-Glicosidase F; PPh3: trifenilfosfina; ppm: partes por milhão; PR: resposta parcial; QS: quantum satis significando a quantidade que é necessária; Q-Tof: tempo de trajetória de quadrupolo; quant.: produção quantitativa; RCG: grupo químico reativo; RT: temperatura ambiente; sat.: saturado; s.c.: subcutaneamente; SCID: imunodeficiência combinada severa; SEC: cromatografia por exclusão de tamanho; TBAF: fluoreto de tetrabutilamônio; tBuOK: terc-butóxido de potássio; TCEP: cloridrato de tris(2-carboxietil)fosfina; TEA: trietilamina; TEMPO: (2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)oxila TFA: ácido trifluoroacético; TFS: sobrevivente livre de tumor; THF: tetra- hidrofurano; THP: tetra-hidropirano; TLC: cromatografia de camada fina; t1/2: meia vida; tR: tempo de retenção; p-TsOH: ácido para- toluenossulfônico; UPLC: Cromatografia Líquida de Ultra Desempenho; UV: ultra-violeta; Vss: volume aparente de distribuição em estado constante. Figuras Figura 1: Espectro de massa de alta resolução de Ex. 3 Figura 2: Espectro de massa de alta resolução de Ex. 7 Figura 3: Espectro de massa de alta resolução de Ex.10 Figura 4: Espectro de massa de alta resolução de Ex.14 Figura 5: Espectro de massa de alta resolução de Ex. 20 Figura 6: Espectro de massa de alta resolução de Ex. 23 Figura 7: Eficácia in vivo de Ex. 3 contra xenoenxerto de MDA-MB-231 em camundongos SCID Figura 8: Eficácia in vivo de Ex. 7 contra xenoenxerto de MDA-MB-231 em camundongos SCID Figura 9: Eficácia in vivo de Ex.10 contra xenoenxerto de MDA-MB-231 em camundongos SCID Figura 10: Eficácia in vivo de Ex.14 contra xenoenxerto de MDA-MB-231 em camundongos SCID Figura 11: Eficácia in vivo de Ex.20 contra xenoenxerto de MDA-MB-231 em camundongos SCID Figura 12: Eficácia in vivo de Ex.23 contra xenoenxerto de MDA-MB-231 em camundongos SCID Figura 13: Perfil de PK in vivo de ADC1 após uma administração i.v. simples em camundongos SCID Figura 14: Perfil de PK in vivo de ADC1 após uma administração i.v. simples em espécies não roedoras Figura 15: Perfil de PK in vivo de Ex.3 após uma administração i.v. simples em camundongos SCID Figura 16: Perfil de PK in vivo de Ex.7 após uma administração i.v. simples em camundongos SCID Figura 17: Espectro de EMAR de ADC1 desglicolisado em 96 horas após administração i.v. simples em camundongos SCID Figura 18: Espectro de EMAR de cadeia leve de ADC2 em 96 horas após administração i.v. simples em camundongos SCID Figura 19: Espectro de EMAR de ADC1 desglicolisado em 6 dias após uma administração i.v. simples em espécies não roedoras Figura 20: Espectro de EMAR de Ex.3 em 96 horas após administração i.v. simples em camundongos SCID Figura 21: Espectro de EMAR de Ex.7 em 96 horas após administração i.v. simples em camundongos SCID Figura 22: Espectro de EMAR de Ex.10 em 96 horas após administração i.v. simples em camundongos SCID Figura 23: Espectro de EMAR de Ex.14 em 96 horas após administração i.v. simples em camundongos SCID Figura 24: Espectro de EMAR de Ex.20 em 96 horas após administração i.v. simples em camundongos SCID Figura 25: Espectro de EMAR de Ex.23 em 96 horas após administração i.v. simples em camundongos SCID

Descrição Detalhada da Invenção

[00017] A invenção refere-se aos compostos de criptoficina de fórmula (I): em que: Ri representa um grupo (C1-C6) alquila; R2 e R3 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila; ou alternativamente R2 e R3 formam juntamente com o átomo de carbono ao qual eles são ligados um grupo (C3-C6) cicloalquila ou (C3-C6) heterocicloalquila; R4 e R5 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila ou um grupo (C1-C6) alquil-NH(R12) ou um grupo (C1-C6) alquil-OH ou um grupo (C1-C6) alquil- SH ou um grupo (C1-C6) alquil-CO2H; ou alternativamente R4 e R5 formam juntamente com o átomo de carbono ao qual eles são ligados um grupo (C3-C6) cicloalquila ou (C3-C6) heterocicloalquila; R6 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila; R7 e R8 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila ou um grupo (C1-C6) alquil-CO2H ou um grupo (C1-C6) alquil-N(C1-C6)alquil2; ou alternativamente R7 e R8 formam juntamente com o átomo de carbono ao qual eles são ligados a um grupo (C3-C6)cicloalquila ou um (C3-C6)heterocicloalquila; R9 representa um ou mais substituintes do núcleo fenila escolhido, independentemente um do outro, de: um átomo de hidrogênio, -OH, (C1-C4)alcóxi, um átomo de halogênio, grupo -NH2, - NH(C1-C6) alquila ou -N(C1-C6)alquil2 ou -NH(C1-C6)cicloalquila ou (C3- C6)heterocicloalquila; R10 representa pelo menos um substituinte do núcleo fenila escolhido de um átomo de hidrogênio e um grupo (C1-C4)alquil; W representa • (Ci-C6)alquil-NH(Rii), mais particularmente (CH2)nNHRii; • (Ci-C6)alquil-OH, mais particularmente (CH2)nOH; (C1-C6)alquil-SH, mais particularmente (CH2)nSH; • CO2H ou C(=O)NH2; • (C1-C6)alquil-CO2H ou (C1-C6)alquil-C(=O)NH2; ou • (C1-C6)alquil-N3.

[00018] W é posicionado em uma posição orto (o), meta (m) ou para (p) do núcleo fenila; • R11 e R12 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6)alquila, mais particularmente um grupo metila; • n representa um número inteiro entre 1 e 6.

[00019] O composto de criptoficina pode ser um dos seguintes D1-D19: em que: • W e Ri2 são como definidos na fórmula (I); ou o composto de criptoficina pode ser uma unidade equivalente descrita em um dos exemplos.

[00020] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um primeiro grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R1 representa um grupo (C1-C6)alquila, em particular um grupo metila.

[00021] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um segundo grupo de compostos é composto dos compostos para os quais cada um de R2 e R3 representa um átomo de hidrogênio.

[00022] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um terceiro grupo de compostos é composto dos compostos para os quais um de R2 e R3 representa um grupo (C1- C6)alquila, em particular, metila, e o outro representa um átomo de hidrogênio.

[00023] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um quarto grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R2 e R3 formam juntamente com o átomo de carbono ao qual eles são ligados um grupo (C3-C6)cicloalquila, em particular um grupo ciclopropila.

[00024] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um quinto grupo de compostos é composto dos compostos para os quais cada um de R4 e R5 representa um grupo (C1-C6)alquila, em particular um grupo metila.

[00025] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um sexto grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R6 representa um átomo de hidrogênio.

[00026] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um sétimo grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila.

[00027] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um oitavo grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R9 representa dois substituintes selecionados de um grupo metóxi e um átomo de cloro. Mais particularmente, o núcleo fenila compreende dois substituintes nas posições 3 e 4 no núcleo fenila. Preferivelmente, ele é 3-Cl e 4-metóxi.

[00028] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um nono grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R10 representa um átomo de hidrogênio.

[00029] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um décimo grupo de compostos é composto dos compostos para os quais W está posicionado na posição para do núcleo fenila.

[00030] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um décimo primeiro grupo de compostos é composto dos compostos para os quais W é selecionado de (C1-C6)alquil-NHR11, em particular (C1-C3)alquil-NHR11, particularmente um grupo CH2-NH2, (C1- C6)alquil-OH, em particular (C1-C3)alquil-OH, particularmente um grupo CH2-OH, (C1-C6)alquil-SH, em particular (C1-C3)alquil-SH e (C1- C6)alquil-CO2H, em particular (C1-C3)alquil-CO2H.

[00031] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um décimo segundo grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R1 representa um grupo (C1-C6)alquila, em particular um grupo metila, cada um de R2 e R3 representa um átomo de hidrogênio, R6 representa um átomo de hidrogênio, R9 representa dois substituintes selecionados de um grupo metóxi e um átomo de cloro, mais particularmente, o núcleo fenila compreende dois substituintes nas posições 3 e 4 no núcleo fenila, preferivelmente, ele é 3-Cl e 4-metóxi e R10 representa um átomo de hidrogênio.

[00032] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um décimo terceiro grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R1 representa um grupo (C1-C6)alquila, em particular um grupo metila, R2 e R3 representa um grupo (C1-C6)alquila, em particular um grupo metila, e o outro representa um átomo de hidrogênio, R6 representa um átomo de hidrogênio, R9 representa dois substituintes selecionados de um grupo metóxi e um átomo de cloro, mais particularmente, o núcleo fenila compreende dois substituintes nas posições 3 e 4 no núcleo fenila, preferivelmente, ele é 3-Cl e 4-metóxi e R10 representa um átomo de hidrogênio.

[00033] Alternativamente, W é selecionado de (CH2)nNHR11, (CH2)nSH de (CH2)nOH, em que n representa um número inteiro entre 1 e 6.

[00034] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um décimo quarto grupo de compostos é composto dos compostos da seguinte estrutura (configuração beta epóxido):

[00035] Todos estes subgrupos considerados sozinhos ou em combinação são parte da invenção.

[00036] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, menção pode ser feita em particular dos seguintes compostos:

[00037] A invenção também se refere às cargas úteis de criptoficina de fórmula (II): em que: • Ri, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R7, R9 e R10 são como definidos na fórmula (I); Y representa (C1-C6)alquil-NR11 ou (C1-C6)alquil-O ou (C1-C6) alquil-S; ou alternativamente Y representa C(=O)O, C(=O)NH, (C1-C6) alquil-C(=O)O ou (C1-C6)alquil-C(=O)NH; ou alternativamente Y representa (C1-C6)alquil-triazol- como I Y é posicionado em uma posição orto (o), meta (m) ou para (p) do núcleo fenila; Rii representa um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila; L representa um ligante; RCGi representa um grupo químico reativo presente na extremidade do ligante, RCGi sendo reativo para um grupo químico reativo presente em um anticorpo.

[00038] Entre os compostos de fórmula (II) que são o assunto objeto da invenção, um primeiro grupo de compostos é composto dos compostos para os quais Ri representa um grupo (C1-C6)alquila, em particular um grupo metila.

[00039] Entre os compostos de fórmula (II) que são o assunto objeto da invenção, um segundo grupo de compostos é composto dos compostos para os quais cada um de R2 e R3 representa um átomo de hidrogênio.

[00040] Entre os compostos de fórmula (II) que são o assunto objeto da invenção, um terceiro grupo de compostos é composto dos compostos para os quais um de R2 e R3 representa um grupo (C1-C6) alquila, em particular um grupo metila e o outro representa um átomo de hidrogênio.

[00041] Entre os compostos de fórmula (II) que são o assunto objeto da invenção, um quarto grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R2 e R3 formam juntamente com o átomo de carbono ao qual eles são ligados um grupo (C3-C6)cicloalquila, em particular um grupo ciclopropila.

[00042] Entre os compostos de fórmula (II) que são o assunto objeto da invenção, um quinto grupo de compostos é composto dos compostos para os quais cada um de R4 e R5 representa um grupo (C1-C6) alquila, em particular um grupo metila.

[00043] Entre os compostos de fórmula (II) que são o assunto objeto da invenção, um sexto grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R6 representa um átomo de hidrogênio.

[00044] Entre os compostos de fórmula (II) que são o assunto objeto da invenção, um sétimo grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila.

[00045] Entre os compostos de fórmula (II) que são o assunto objeto da invenção, um oitavo grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R9 representa dois substituintes selecionados de um grupo metóxi e um átomo de cloro. Mais particularmente, o núcleo fenila compreende dois substituintes nas posições 3 e 4 no núcleo fenila. Preferivelmente, ele é 3-Cl e 4-metóxi.

[00046] Entre os compostos de fórmula (II) que são o assunto objeto da invenção, um nono grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R10 representa um átomo de hidrogênio.

[00047] Entre os compostos de fórmula (II) que são o assunto objeto da invenção, um décimo grupo de compostos é composto dos compostos para os quais Y está posicionado na posição para do núcleo fenila.

[00048] Entre os compostos de fórmula (II) que são o assunto objeto da invenção, um décimo primeiro de compostos é composto dos compostos para os quais Y representa (C1-C6)alquil-NR11 em particular (C1-C3)alquil-NR11 mais particularmente CH2-NH.

[00049] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um décimo segundo grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R1 representa um grupo (C1-C6)alquila, em particular um grupo metila, cada um de R2 e R3 representa um átomo de hidrogênio, R6 representa um átomo de hidrogênio, R9 representa dois substituintes selecionados de um grupo metóxi e um átomo de cloro, mais particularmente, o núcleo fenila compreende dois substituintes nas posições 3 e 4 no núcleo fenila, preferivelmente, ele é 3-Cl e 4-metóxi e R10 representa um átomo de hidrogênio.

[00050] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um décimo terceiro grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R1 representa um grupo (C1-C6)alquila, em particular um grupo metila, R2 e R3 representa um grupo (C1-C6)alquila, em particular um grupo metila, e o outro representa um átomo de hidrogênio, R6 representa um átomo de hidrogênio, R9 representa dois substituintes selecionados de um grupo metóxi e um átomo de cloro, mais particularmente, o núcleo fenila compreende dois substituintes nas posições 3 e 4 no núcleo fenila, preferivelmente, ele é 3-Cl e 4-metóxi e R10 representa um átomo de hidrogênio.

[00051] Entre os compostos de fórmula (II) que são o assunto objeto da invenção, um décimo quarto grupo de compostos é composto dos compostos da seguinte estrutura (configuração beta epóxido):

[00052] Todos estes subgrupos considerados sozinhos ou em combinação são parte da invenção.

[00053] Entre os compostos de fórmula (II) que são o assunto objeto da invenção, menção pode ser feita em particular dos seguintes compostos:

[00054] A invenção também se refere aos conjugados de fórmula (III): Ri, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 e R10 são como definidos na fórmula (I); Y e L são como definidos na fórmula (II); G representa o produto de reação entre RCGi, um grupo químico reativo presente na extremidade do ligante e RCG2, um grupo químico reativo ortogonal presente no anticorpo (Ab); Ab representa um anticorpo.

[00055] Entre os compostos de fórmula (III) que são o assunto objeto da invenção, um primeiro grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R1 representa um grupo (C1-C6)alquila, em particular um grupo metila.

[00056] Entre os compostos de fórmula (III) que são o assunto objeto da invenção, um segundo grupo de compostos é composto dos compostos para os quais cada um de R2 e R3 representa um átomo de hidrogênio.

[00057] Entre os compostos de fórmula (III) que são o assunto objeto da invenção, um terceiro grupo de compostos é composto dos compostos para os quais um de R2 e R3 representa um grupo (C1-C6) alquila, em particular um grupo metila e o outro representa um átomo de hidrogênio.

[00058] Entre os compostos de fórmula (III) que são o assunto objeto da invenção, um quarto grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R2 e R3 formam juntamente com o átomo de carbono ao qual eles são ligados um grupo (C3-C6)cicloalquila, em particular um grupo ciclopropila.

[00059] Entre os compostos de fórmula (III) que são o assunto objeto da invenção, um quinto grupo de compostos é composto dos compostos para os quais cada um de R4 e R5 representa um grupo (C1-C6) alquila, em particular um grupo metila.

[00060] Entre os compostos de fórmula (III) que são o assunto objeto da invenção, um sexto grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R6 representa um átomo de hidrogênio.

[00061] Entre os compostos de fórmula (III) que são o assunto objeto da invenção, um sétimo grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila.

[00062] Entre os compostos de fórmula (III) que são o assunto objeto da invenção, um oitavo grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R9 representa dois substituintes selecionados de um grupo metóxi e um átomo de cloro. Mais particularmente, o núcleo fenila compreende dois substituintes nas posições 3 e 4 no núcleo fenila. Preferivelmente, ele é 3-Cl e 4-metóxi.

[00063] Entre os compostos de fórmula (III) que são o assunto objeto da invenção, um nono grupo de compostos é composto dos compostos para os quais R10 representa um átomo de hidrogênio.

[00064] Entre os compostos de fórmula (II) que são o assunto objeto da invenção, um décimo grupo de compostos é composto dos compostos para os quais Y está posicionado na posição para do núcleo fenila.

[00065] Entre os compostos de fórmula (III) que são o assunto objeto da invenção, um décimo primeiro de compostos é composto dos compostos para os quais Y representa (C1-C6)alquil-NR11 em particular (C1-C3)alquil-NR11 mais particularmente CH2-NH.

[00066] Entre os compostos de fórmula (I) que são o assunto objeto da invenção, um décimo segundo grupo de compostos é composto dos compostos da seguinte estrutura (configuração beta epóxido):

[00067] Todos estes subgrupos considerados sozinhos ou em combinação são parte da invenção.

[00068] Entre os compostos de fórmula (III) que são o assunto objeto da invenção, menção pode ser feita em particular dos seguintes compostos:

[00069] A ligação entre a carga útil de criptoficina de fórmula (II) e o anticorpo, a fim de obter o conjugado de fórmula (III), é produzido por meio de um grupo químico reativo RCG1 presente na carga útil que é reativo a um grupo reativo RCG2 presente no anticorpo. A reação entre RCG1 e RCG2 garante a ligação do composto de fórmula (II) ao anticorpo por formação de uma ligação covalente. No conjugado de fórmula (III), partes de RCG1 e RCG2 podem permanecer formando a ligação entre o ligante e o anticorpo.

[00070] Exemplos de RCG1 que podem ser mencionados incluem: (i) O grupo -C(=O)-ZaRa reativo para o qual Za representa uma ligação simples, O ou NH, mais particularmente O, e Ra representa um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6)alquila, (C3-C7)cicloalquila, alquenila, arila, heteroarila ou (C3-C7)heterocicloalquila. O grupo arila pode ser substituído por 1 a 5 grupos escolhidos de halogênio, em particular grupos F, alquila, alcóxi, nitro e ciano; (ii) um dos seguintes grupos reativos: o grupo maleimido ; o grupo haloacetamido com R13 representando um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila, mais particularmente Me; -Cl; -N3; -OH; -SH; -NH2; -C?CH ou um C?C ativado, tal como uma porção ciclo-octina como ; uma Oalquil hidroxilamina ou um substrato de reação Pictet-Spengler tal como N descrito em Agarwal P., et al., Bioconjugate Chem 2013, 24, 846-851.

[00071] Mais particularmente, -ZaRa pode representar -OH, -OCH3, - OCH2CH=CH2, (O-NHS) ou onde cátion representa por exemplo, sódio, potássio ou césio ou ou o grupo em que GI representa pelo menos um grupo eletroindutor tal como -NO2 ou -Hal, especialmente -F. Eles podem ser, por exemplo, os seguintes grupos: Outro tipo de grupo -C(=O)ZaRa é o seguinte: Mais particularmente, RCG1 pode ser escolhido de um daqueles descritos nos exemplos.

[00072] Exemplos de RCG2 que podem ser mencionados incluem (Garnett M.C., et al., Advanced Drug Delivery Reviews 2001, 53, 171-216): (i) Grupos e-amino de lisinas suportados pelas cadeias laterais dos resíduos de lisina que estão presentes na superfície um anticorpo; (ii) Grupos a-amino de aminoácidos de terminal N de cadeias pesadas e leves de anticorpo; (iii) Os grupos sacarídeo da região de articulação; (iv) Os tióis de cisteínas gerados pela redução de ligações de dissulfeto intracadeia e os tióis de cisteínas engenheiradas; (v) Grupos amida suportados pelas cadeiais laterais de alguns resíduos de glutamina que estão presentes na superfície de um anticorpo; (vi) Grupos aldeído introduzidos usando enzima geradora de formilglicina.

[00073] Mais recentemente, outros métodos de conjugação foram considerados, por exemplo, a introdução de cisteínas por mutação (Junutula J.R., et al., Nature Biotechnology 2008, 26, 925-932), a introdução de aminoácidos não naturais permitindo outros tipos de química (Axup J.Y., et al., PNAS 2012, 109, 40, 16101-16106) ou a conjugação nos glicanos de anticorpo (Zhou Q., et al., Bioconjugate Chem. 2014, 25, 510-520). Outro método para modificações específicas de sítio de anticorpos é baseado na rotulagem enzimática usando, por exemplo, transglutaminase bacteriana (Jeger S., et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2010, 49, 9995-9997; Strop P., et al., Chem. Biol. 2013, 20, 161-167) ou enzima geradora de formilglicina (Hudak J.E., et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2012, 51, 4161-4165). Para uma revisão de estratégias de conjugação específica de sítio, veja, Agarwal P. e Bertozzi C.R., Bioconjugate Chem 2015, 26, 176-192. Estas tecnologias de conjugação podem também ser aplicadas às cargas úteis de criptoficina descritas na presente invenção.

[00074] É também possível modificar quimicamente o anticorpo, a fim de introduzir os novos grupos químicos reativos RCG2. Desse modo, é bem conhecido por aqueles versados na técnica como modificar um anticorpo com o auxílio de um agente de modificação introduzindo, por exemplo, dissulfeto ativado, grupos tiol, maleimido ou haloacetamido (veja especialmente, WO2005/077090 página 14 e WO2011/001052). A modificação torna possível melhorar a reação de conjugação e usar uma variedade mais ampla de grupos RCG1.

[00075] Mais particularmente, no caso onde RCG1 é do tipo (ii) acima, é possível modificar quimicamente o anticorpo usando um agente de modificação adequado ou introduzir um ou mais aminoácidos não naturais, a fim de introduzir as funções adequadas RCG2. Por exemplo: quando RCG1 representa um N-hidroxissuccinimidil éster, RCG2 representa um grupo -NH2; quando RCG1 representa uma função maleimido ou haloacetamido ou um grupo -Cl, RCG2 pode ser um grupo -SH; quando RCG1 representa um grupo -N3, RCG2 pode ser um grupo -C=CH ou um C=C ativado tal como uma porção ciclo-octina; quando RCG1 representa um grupo -OH ou -NH2, RCG2 pode ser uma função ácido carboxílico ou amida; quando RCG1 representa um grupo -SH, RCG2 pode ser uma função maleimido ou haloacetamido; quando RCG1 representa uma função -C=CH ou um C=C, RCG2 ativado pode ser um grupo -N3; quando RCG1 representa uma função -O-alquil hidroxiamina ou um substrato de reação de Pictet-Spengler, RCG2 pode ser uma função aldeído ou cetona.

[00076] Exemplos de G que podem ser mencionados incluem:

[00077] A invenção refere-se às cargas úteis de criptoficina de fórmula (II) e aos conjugados de fórmula (III): em que o ligante L é de fórmula (IV): em que: L1 representa (i) uma ligação simples ou um grupo NR16(hetero)aril- CR15R14-O-C(=O), se Y = (C1-C6)alquil-N(R11); (ii) um grupo NR18-(C2-C6)alquil-NR17-C(=O) ou um grupo NR16(hetero)aril-CR15R14-O-C(=O)NR18-(C2-C6)alquil-NR17-C(=O), se Y = (C1-C6)alquil- O- ou (C1-C6)alquil- S; (iii) um grupo NR16(hetero)aril-CR15R14, se Y = C(=O)O, C(=O)NH, (C1-C6)alquil-C(=O)O ou (C1-C6)alquil-C(=O)NH; R11, R14, R15, R16, R17 e R18 representam, independentemente um do outro, H ou um grupo (C1-C6) alquila; (AA)w representa uma sequência de w aminoácidos AA conectados entre si por meio de ligações de peptídeo; w representa um número inteiro variando de 1 a 12, preferivelmente de 1 a 6 e mais particularmente 2 ou 3; L2 representa uma ligação simples ou um grupo (C1-C6) alquila ou um grupo (C1-C6)alquil-(OCH2CH2)i ou um grupo (C1-C6)alquil- (OCH2CH2)i-O(C1-C6)alquila ou um grupo (CH2CH2O)i(C1-C6)alquila ou um grupo CH(SO3H)-(C1-C6)alquila ou um grupo (C1-C6)alquil- CH(SO3H) ou um grupo (C1-C6)alquil-ciclo-hexila ou um grupo NR19-(C1- C6)alquila ou um grupo NR20-(CH2CH2O)i(C1-C6)alquila ou um grupo NR21-arila ou um grupo NR21-heteroarila ou um grupo (C1-C6)alquil- NR22C(=O)-(C1-C6)alquila ou um grupo (C1-C6)alquil-NR22C(=O)-(C1- C6)alquil-(OCH2CH2)i. Mais particularmente L2 representa um grupo (C1-C6) alquila ou um grupo (C1-C6)alquil-(OCH2CH2)i ou a CH(SO3H)- (C1-C6)alquila; Ri9, R20, R21 e R22 representam, independentemente um do outro, H ou um grupo (C1-C6) alquila; i representa um número inteiro entre 1 e 50 e preferivelmente entre 1 e 10 (i pode considerar todos os valores entre 1 e 50).

[00078] AA significa um aminoácido natural ou não natural, de configuração D ou L, mais particularmente escolhido de: alanina (Ala), ß-alanina, ácido Y—aminobutírico, ácido 2-amino-2-ciclo-hexilacético, ácido 2-amino-2-fenilacético, arginina (Arg), asparagina (Asn), ácido aspártico (Asp), citrulina (Cit), cisteína (Cys), ácido a,a-dimetil-Y- aminobutírico, ácido ß,ß-dimetil-Y—aminobutirico, glutamina (Gln), ácido glutâmico (Glu), glicina (Gli), histidina (His), isoleucina (Ile), leucina (Leu), lisina (Lys), e-acetil-lisina (AcLys), metionina (Met), ornitina (Orn), fenilalanina (Phe), prolina (Pro), serina (Ser), treonina (Thr), triptofano(Trp), tirosina (Tir), valina (Val). Mais particularmente, AA é escolhido de alanina (Ala), citrullina (Cit), glutamina (Gln), glicina (Gli), e-acetil-lisina (AcLis), valina (Val).

[00079] A sequência (AA)w tem a fórmula: em que R23 representa a cadeia lateral de um dos aminoácidos descritos acima. Exemplos de sequências são como segue: Gly-Gly, Phe-Lys, Val-Lys, Val-AcLys, Val-Cit, Phe-Phe-Lys, D- Phe-Phe-Lys, Gly-Phe-Lys, Ala-Lys, Val-Ala, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Trp-Cit, Phe-Ala, Ala-Phe, Gly-Gly-Gly, Gly-Ala-Phe, Gly-Val-Cit, Gly- Phe-Leu-Cit, Gly-Phe-Leu-Gly, Ala-Leu-Ala-Leu.

[00080] Para Y = (C1-C6)alquil-N(R11) e mais particularmente CH2NH, RCG1-L pode ser um dos seguintes (IV1-17): em que: (AA)w representa uma sequência de w aminoácidos AA conectados entre si por meio de ligações de peptídeo como descrito acima; w representa um número inteiro variando de 1 a 12, preferivelmente de 1 a 6 e mais particularmente 2 ou 3; i representa um número inteiro entre 1 e 50 e preferivelmente entre 1 e 10 (i pode considerar todos os valores entre 1 e 50); M1, M2, M3 e M4 são escolhidos, independentemente um do outro, de CR24 e N;

[00081] R19, R20, R21, R22 e R24 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila, mais particularmente um átomo de hidrogênio ou um grupo metila.

[00082] Para Y = (C1-C6)alquil-O ou (C1-C6)alquil-S e mais particularmente CH2O ou CH2S, RCG1-L pode ser um dos seguintes (IV18-34): em que: (AA)w representa uma sequência de w aminoácidos AA conectados entre si por meio de ligações de peptídeo como descrito acima; w representa um número inteiro variando de 1 a 12, preferivelmente de 1 a 6 e mais particularmente 2 ou 3; i representa um número inteiro entre 1 e 50 e preferivelmente entre 1 e 10 (i pode considerar todos os valores entre 1 e 50); M1, M2, M3 e M4 são escolhidos, independentemente um do outro, de CR24 e N; R17, R18, R19, R20, R21, R22 e R24 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila, mais particularmente um átomo de hidrogênio ou um grupo metila.

[00083] Para Y = (C1-C6)alquil-N(R11) e mais particularmente CH2NH, RCG1-L pode também ser um dos seguintes (IV35-51): AA)w representa uma sequência de w aminoácidos AA conectados entre si por meio de ligações de peptídeo como descrito acima; w representa um número inteiro variando de 1 a 12, preferivelmente de 1 a 6 e mais particularmente 2 ou 3; i representa um número inteiro entre 1 e 50 e preferivelmente entre 1 e 10 (i pode considerar todos os valores entre 1 e 50); J1, J2, J3 e J4 são escolhidos, independentemente um do outro, de CR24 e N; M1, M2, M3 e M4 são escolhidos, independentemente um do outro, de CR24 e N; R14, R15, R16, R19, R20, R21, R22 e R24 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila, mais particularmente um átomo de hidrogênio ou um grupo metila.

[00084] Para Y = (C1-C6)alquil-O ou (C1-C6)alquil-S e mais particularmente CH2O ou CH2S, RCG1-L pode também ser um dos seguintes (IV52-68): (AA)w representa uma sequência de w aminoácidos AA conectados entre si por meio de ligações de peptídeo como descrito acima; w representa um número inteiro variando de 1 a 12, preferivelmente de 1 a 6 e mais particularmente 2 ou 3; i representa um número inteiro entre 1 e 50 e preferivelmente entre 1 e 10 (i pode considerar todos os valores entre 1 e 50); J1, J2, J3 e J4 são escolhidos, independentemente um do outro, de CR24 e N; M1, M2, M3 e M4 são escolhidos, independentemente um do outro, de CR24 e N; R14, R15, R16, R17, R18, R19, R20, R21, R22 e R24 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila, mais particularmente um átomo de hidrogênio ou um grupo metila.

[00085] Para Y = C(=O)O, C(=O)NH, (C1-C6)alquil-C(=O)O ou (C1-C6) alquil-C(=O)NH e mais particularmente C(=O)O ou CH2-C(=O)O, RCG1-L pode ser um dos seguintes (IV69-85): em que: (AA)w representa uma sequência de w aminoácidos AA conectados entre si por meio de ligações de peptídeo como descrito acima; w representa um número inteiro variando de 1 a 12, preferivelmente de 1 a 6 e mais particularmente 2 ou 3; i representa um número inteiro entre 1 e 50 e preferivelmente entre 1 e 10 (i pode considerar todos os valores entre 1 e 50); J1, J2, J3 e J4 são escolhidos, independentemente um do outro, de CR24 e N; M1, M2, M3 e M4 são escolhidos, independentemente um do outro, de CR24 e N; R14, R15, R16, R19, R20, R21, R22 e R24 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila, mais particularmente um átomo de hidrogênio ou um grupo metila.

[00086] Para Y = C(=O) ou (C1-C6)alquil-C(=O), a invenção também refere-se às cargas úteis de criptoficina de fórmula (II) e aos conjugados de fórmula (III): em que: em que o ligante L é de fórmula (V): em que: (AA)’w representa uma sequência de w aminoácidos AA conectados entre si por meio de ligações de peptídeo; w representa um número inteiro variando de 1 a 12, preferivelmente de 1 a 6 e mais particularmente 2 ou 3; R25 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1 C6) alquila; L3 representa um grupo (C1-C6) alquila ou um grupo (CH2CH2O)i-(C1-C6)alquila ou um grupo (C1-C6)alquil-(OCH2CH2)i ou um grupo CH(SO3H)-(C1-C6)alquila ou ou um grupo (C1-C6)alquil-(OCH2 CH2)i-O(C1-C6)alquila ou um grupo NR19-(C1-C6)alquila ou um grupo NR20-(CH2CH2O)iCH2CH2 ou um grupo (C1-C6)alquil-ciclo-hexil-C(=O) NR19-(C1-C6)alquila ou um grupo (C1-C6)alquil-ciclo-hexil-C(=O)NR20- (CH2CH2O)i-CH2CH2 ou um grupo NR21-aril-C(=O)NR19-(C1-C6)alquila ou um grupo NR21-heteroaril-C(=O)NR19-(C1-C6)alquila ou um grupo (C1-C6)alquil-NR22C(=O)(CH2CH2O)i-(C1-C6)alquila; R19, R20, R21, R22 e R25 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila; RCG1 representa um grupo químico reativo que é reativo a um grupo químico reativo presente no anticorpo, como acima definido; R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 e R10 são como acima definidos.

[00087] AA significa um aminoácido natural ou não natural, de configuração D ou L, mais particularmente escolhido de: alanina (Ala), ß- alanina, ácido Y-aminobutírico, ácido 2-amino-2-ciclo-hexilacético, ácido 2- amino-2-fenilacético, arginina (Arg), asparagina (Asn), ácido aspártico (Asp), citrulina (Cit), cisteína (Cys), ácido a,a-dimetil-Y-aminobutírico, ácido e,e-dimetil-Y-aminobutírico, glutamina (Gln), ácido glutâmico (Glu), glicina (Gly), histidina (His), isoleucine (Ile), leucina (Leu), lisina (Lys), e-acetil- lisina (AcLys), metionina (Met), ornitina (Orn), fenilalanina (Phe), prolina (Pro), serina (Ser), treonina (Thr), triptofano (Trp), tirosina (Tyr), valina (Val). Mais particularmente, AA é escolhido de alanina (Ala), citrulina (Cit), glutamina (Gln), glicina (Gly),e-acetil-lisina (AcLys), valina (Val).

[00088] A sequência (AA)’w tem a fórmula: - . em que R26 representa a cadeia lateral de um dos aminoácidos descritos acima. Exemplos de sequências são como segue: Gly-Gly, Lys-Phe, Lys-Val, AcLys-Val, Cit-Val, Lys-Phe-Phe, Lys-Phe-DPhe, Lys-Phe-Gly, Lys-Ala, Ala-Val, Cit-Phe, Cit-Leu, Cit-Ile, Cit-Trp, Ala-Phe, Phe-Ala, Gly-Gly-Gly, Phe-Ala-Gly, Cit-Val-Gly, Cit- Leu-Phe-Gly, Gly-Leu-Phe-Gly, Leu-Ala-Leu-Ala.

[00089] Para Y = C(=O) ou (C1-C6)alquil-C(=O) e mais particularmente C(=O) ou CH2-C(=O), RCG1-L pode ser um dos seguintes (V86-101): em que: (AA)’w representa uma sequência de w aminoácidos AA conectados entre si por meio de ligações de peptídeo como descrito acima; w representa um número inteiro variando de 1 a 12, preferivelmente de 1 a 6 e mais particularmente 2 ou 3; i representa um número inteiro entre 1 e 50 e preferivelmente entre 1 e 10 (i pode considerar todos os valores entre 1 e 50); M1, M2, M3 e M4 são escolhidos, independentemente um do outro, de CR24 e N; R19, R20, R21, R22, R24 e R25 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila, mais particularmente um átomo de hidrogênio ou um grupo metila.

[00090] O ligante L pode também ser escolhido dos compostos ilustrados.

[00091] De acordo com a invenção, os compostos de fórmula geral (I), (II) e (III) podem ser preparados pelos seguintes processos. Processo para a preparação dos compostos de criptoficina Rotina geral A para a preparação dos compostos de fórmula (I), no caso onde W=CH2N3 ou CH2NH2

Esquema 1

[00092] Os fragmentos A, B, C e D permitem a preparação de compostos de criptoficina P1 a P3 com o auxílio das etapas detalhadas abaixo: Etapa (i): acoplamento peptídico entre os fragmentos AD1 e BC na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, HOAt e HATU; Etapa (ii): desproteção em condições acídicas usando, por exemplo, TFA e macrociclização na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, HOAt e HATU; Etapa (iii): oxidação da olefina para formar o epóxido usando, por exemplo, m-CPBA; Etapa (v): redução do grupo azido usando, por exemplo, TCEP.

[00093] Os fragmentos A e B foram preparados de acordo com a síntese descrita abaixo. Fragmentos C protegidos como metil ésteres são comercialmente disponíveis para R4=H, R5=Me (R), R2=R3=H (número de CAS [92535-26-7]); R4=H, R5=Me (S), R2=R3=H (número de CAS [118138-56-0]); R4=R5=Me, R2=R3=H (número de CAS [25307-828]); R2=H, R3=Me (R), R4=H, R5=Me (R) (número de CAS [86544-92-5]); R2=H, R3=Me (S), R4=H, R5=Me (R) (número de CAS [86544-93-6]); R2=H, R3=Me (R), R4=R5=Me (número de CAS [1315052-25-5]); R2=H, R3=Me (S), R4=R5=Me (número de CAS [1315050-96-4]); R2=H, R3=iPr (R), R4=R5=Me (número de CAS [1314999-06-8]); R2=H, R3=iPr (S), R4=R5=Me (número de CAS [1315054-33-1]); R2=R3=R4=R5=Me (número de CAS [90886-53-6]); R4 e R5 formam juntamente com o átomo de carbono ao qual eles são ligados um grupo ciclopropila (número de CAS [914226-26-9]). Eles podem também ser preparados como descrito nos exemplos. Fragmentos não comercialmente disponíveis C foram preparados como descrito nos exemplos. Todos os fragmentos D são comercialmente disponíveis: L-Fmoc-Ala-OH (número de CAS [35661-39-3]); L-Fmoc-Val-OH (número de CAS [68858-20-8]); L-Fmoc-terc-Leu-OH (número de CAS [132684-60-7]); L- Fmoc-Leu-OH (número de CAS [35661-60-0]); L-Fmoc-NMe-Leu-OH (número de CAS [103478-62-2]); L-Fmoc-3-dimetilamino-Ala-OH (número de CAS [587880-86-2]); L-Fmoc-(Oalil)Asp-OH (número de CAS [146982-24-3]); L-Fmoc-4-metil-Leu-OH (número de CAS [13955174-9]). Os blocos de construção AD1 e BC foram preparados de acordo com a síntese descrita abaixo. Rotina geral B para a preparação dos compostos de fórmula (I), no caso onde W=CH2OH ou CH2N3 ou CH2NH2 Esquema 2

[00094] Os fragmentos A, B, C e D permitem a preparação de compostos de criptoficina P2 a P4 com o auxílio das etapas detalhadas abaixo: Etapa (i): acoplamento peptídico entre os fragmentos AD1 e BC na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, HOAt e HATU; Etapa (ii): desproteção em condições acídicas usando por exemplo, TFA, macrociclização na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, HOAt e HATU e hidrólise de acetato em pH 6 a 7 usando, por exemplo, NaOH em uma mistura de água e AcOEt; Etapa (iii): proteção de álcool benzílico como um silil éter usando, por exemplo, clorotri-isopropilsilano na presença de uma base tal como, por exemplo, imidazol; oxidação da olefina para formar o epóxido usando, por exemplo, m-CPBA; desproteção do silil éter usando, por exemplo, uma solução de TBAF. Etapa (iv): azidação na presença de DPPA e uma base tal como, por exemplo, DBU; Etapa (v): redução do grupo azido usando, por exemplo, TCEP.

[00095] Os fragmentos A e B foram preparados de acordo com a síntese descrita abaixo. Os fragmentos C eram comercialmente disponíveis como reportado na seção anterior ou preparados como descrito nos exemplos. Todos os fragmentos D são comercialmente disponíveis como reportado na seção anterior. Blocos de construção AD2 e BC foram preparados de acordo com a síntese descrita abaixo. Rotina geral C para a preparação dos compostos de fórmula (I), no caso onde W= CH2OH ou CH2N3 ou CH2NH2

Esquema 3

[00096] Álcool de Sakurai e fragmentos B, C e D permitem a preparação de compostos de criptoficina P2 a P4 com o auxílio das etapas detalhadas abaixo: Etapa (i): acoplamento peptídico entre os fragmentos AD3 e BC alternativo na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, HOAt e HATU; Etapa (ii): macrociclização metátese de fechamento de anel na presença de um catalisador tal como, por exemplo, catalisador Grubbs I; Etapa (iii): desproteção do p-metoxibenzil éter em condições acídicas tal como, por exemplo, TFA a 10%; Etapa (iv): oxidação do álcool usando um agente de oxidação tal como, por exemplo, TEMPO na presença de hipoclorito de sódio; Etapa (v): introdução do epóxido por reação Corey- Chaykovsky assimétrica usando sulfônio quiral derivado de isotiocineol substituído apropriadamente na presença de uma base tal como, por exemplo, base de fosfazeno P2-Et; Etapa (vi): redução do grupo azido usando, por exemplo, TCEP.

[00097] Álcool de Sakurai e fragmento B foram preparados de acordo com a síntese descrita abaixo. Fragmentos C foram comercialmente disponíveis como reportado na seção anterior ou preparados como descrito nos exemplos. Todos os fragmentos D são comercialmente disponíveis como reportado na seção anterior. Blocos de construção AD3 e BC alternativo foram preparados de acordo com a síntese descrita abaixo. Preparação dos compostos de fórmula (I), no caso onde W=CH2SH Esquema 4

[00098] P4 permite a preparação de outros compostos de criptoficina P5 e P6 com o auxílio das etapas detalhadas abaixo: Etapa (i): introdução do grupo cloro usando cloreto de metanossulfonila na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): funcionalização usando trimetilsililtiolato de tetrabutilamônio preparado in situ de TBAF e hexametildisilatiano de acordo com Hu J., et al., J. Org. Chem. 1999, 64, 4959-496: no curso desta reação, o dímero intermediário descrito no Esquema 3 é geralmente formado; Etapa (iii): redução do dímero usando uma fosfina tal como, por exemplo, TCEP.

[00099] Os Esquemas 1, 2, 3 e 4 descrevem os casos n=1, porém podem também aplicar-se com relação à preparação de compostos de fórmula (I) no caso onde n>1 partindo de P2, P3 ou P4 com o auxílio das etapas detalhadas abaixo e descritas no Esquema 2 de WO2011/001052: Esquema 5 Etapa (i): abertura do anel epóxido em meio acídico, a fim de obter a função diol; ácido perclórico concentrado pode ser usado, por exemplo; Etapa (ii): clivagem oxidativa do diol usando, por exemplo, periodato de sódio; Etapa (iii): Reação Wittig usando um haleto de fosfônio adequado, por exemplo, um brometo, e uma base forte, por exemplo, BuLi; Etapa (iv): oxidação da olefina para formar o epóxido usando, por exemplo, m-CPBA; Etapa (v): desproteção do silil éter usando, por exemplo, uma solução de TBAF. Preparação dos compostos de fórmula (I), no caso onde W=CO2H Esquema 6

[000100] P4 permite a preparação de outros compostos de criptoficina P7 e P8 com o auxílio das etapas detalhadas abaixo: Etapa (i): oxidação usando o reagente Dess-Martin; Etapa (ii): oxidação do tipo Pinnick na presença de 2 metil-2- buteno (Pinnick H.W., Tetrahedron 1981, 37, 2091-2096).

[000101] O Esquema 6 descreve o caso n=0 porém pode também aplicar-se à preparação de compostos de fórmula (I) no caso onde W=(CH2)nCO2H partindo de um análogo de P4 transportando um grupo (CH2)n+1OH. Os Esquemas 1, 2, 3, 4, 5 e 6 são fornecidos para um ligante na posição para, porém podem identicamente aplicar-se para as posições orto ou meta. Similarmente, eles são fornecidos para um composto de criptoficina, porém podem também aplicar-se à preparação de outros compostos de fórmula (I), especialmente D1-D19. Processo para a preparação das cargas úteis de criptoficina

[000102] Os compostos de fórmula (II) podem ser preparados de acordo com Esquema 7, iniciando com um composto de criptoficina de fórmula (I) e um precursor de ligante (LP): Esquema 7

[000103] W representa • (Ci-C6)alquil-NH(Rii), mais particularmente (CH2)nNHRii; • (Ci-C6)alquil-OH, mais particularmente (CH2)nOH; • (C1-C6)alquil-SH, mais particularmente (CH2)nSH; • CO2H; • (C1-C6)alquil-CO2H, mais particularmente (CH2)nCO2H; ou • (C1-C6)alquil-N3. em que R11 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila, mais particularmente um grupo metila.

[000104] O precursor do ligante LP tem a função de introduzir um precursor do ligante L no composto de criptoficina após reação entre o grupo W e uma função química presente no LP.

[000105] No Esquema 7, diversas etapas e/ou reações podem ser necessárias para preparar a carga útil de criptoficina (II) partindo do composto de criptoficina (I). Por exemplo, no caso onde ZaRa = -O-NHS, um ligante L para o qual ZaRa = -O-alila pode ser introduzida usando o precursor do ligante correspondente, seguido por desproteção da função éster e introduzindo -O-NHS. Desproteção pode ser realizada por tratamento com um catalisador de paládio, por exemplo, Pd(PPh3)4 na presença de um recuperador de amina, por exemplo, morfolina; a ativação pode ser realizada com DSC na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA ou com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC. Esta convensão de um grupo ZaRa em outro grupo ZaRa (por exemplo, -O-alila -> -O-NHS) pode ser aplicada para obter outros grupos ZaRa, especialmente aqueles descritos anteriormente.

[000106] O Esquema 7’ similarmente ilustra a preparação de um composto de criptoficina compreendendo um ligante transportando respectivamente, um grupo maleimido, haloacetamido, amino ou azido (L* representa um fragmento de um ligante de modo que L= -L*- maleimido ou L= -L*-haloacetamido ou L= -L*-NH2- ou L= -L*-N3 ).

[000107] Estes compostos são obtidos por reação entre um composto de criptoficina compreendendo um ligante L’ compreendendo um grupo amino e um agente de modificação para introdução, respectivamente, um grupo maleimido, haloacetamido, amino ou azido.

[000108] Os compostos de fórmula (II) podem alternativamente ser preparados de acordo com o Esquema 8 iniciando com o mesmo composto de criptoficina de fórmula (I) e outro precursor de ligante (LP’): Esquema 8

[000109] No Esquema 8, diversas etapas e/ou reações podem ser necessárias para chegar à carga útil de criptoficina (II) partindo do composto de criptoficina (I). Por exemplo, no caso onde ZaRa = -O-NHS, um precursor de ligante protegido L’ pode ser introduzido, seguido por desproteção e acoplamento a um precursor de ligante L’’ para introduzir a função de ácido carboxílico que pode ser diretamente ativada para ZaRa = -O-NHS ou primeiro desprotegida e subsequentemente ativada (L’ e L’’ representam fragmentos de ligante, de modo que L=L’-L’’). A desproteção pode ser realizada por tratamento com uma base, por exemplo, piperidina; o acoplamento a um ligante L’’ pode prosseguir através da abertura de um anidrido cíclico, por exemplo, anidrido glutárico; a ativação pode ser realizada com DSC na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA ou com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC.

[000110] Um exemplo de reação entre o grupo W e uma função química presente no LP é uma amidação ou entre um precursor de ligante LP transportando uma função ácido carboxílico e W=(CH2)nNH2 ou entre um precursor de ligante LP transportando uma função amina e W=CO2H ou (CH2)nCO2H: esta reação pode ser realizada na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDCI ou HOBt. É possível também reagir um precursor de ligante LP transportando uma função amina e W’=(CH2)nO-C(=O)-O-(4-nitrofenil) obtida de W=(CH2)nOH e cloroformiato de p-nitrofenila (ativação do álcool na forma de carbonato) de acordo com o esquema abaixo (R17 = H ou (C1-C6)alquil): -NHRi7 + crypto-(CH2)nO-C(=O)-O-(4-nitrofenil) ^ cripto-(CH2)nO- C(=O)-NR17-

[000111] A mesma espécie de reação pode também ser realizada entre um precursor de ligante LP transportando uma função álcool ativada como um carbonato e W=(CH2)nNH2. Outro exemplo de reação é uma esterificação entre um precursor de ligante transportando uma função álcool e W=CO2H ou (CH2)nCO2H: esta reação pode ser realizada na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, MNBA. Outro exemplo de reação é um cicloadição de azida- alcina catalisada por cobre entre um precursor de ligante transportando uma função alcina e W=(CH2)N3: esta reação pode ser realizada na presença de sulfato de cobre e ascorbato de sódio. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=(CH2)nNH2 e L=(IV1) com n=1, Ri5=H e ALQ=(CH2)3 com base no Esquema 7 Esquema 9 Etapa (i): acoplamento peptídico na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC e HOBt, e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): desproteção do alil éster na presença de um catalisador tal como, por exemplo, tetracis-(trifenilfosfina)paládio; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS por tratamento com DSC na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=(CH2)nNH2 e L=(IV1) com n=1, Rii=H e ALQ=(CH2)3 com base no Esquema 8 Esquema 10 Etapa (i): acoplamento peptídico na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC e HOBt e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): desproteção da amina de Fmoc na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento ao anidrido glutárico; Etapa (iv): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS por tratamento com DSC na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000112] Os Esquemas 9 e 10 descrevem o caso L(IV1) com n=1, R11=H e ALQ=(CH2)3, porém eles podem também aplicar-se aos outros ligantes L com RCG1=C(=O)ONHS, a saber, o caso L(IV1) com n#1 e/ou Rn#H e/ou ALK#(CH2)3 e os casos L(IV2) e L(IV3). Eles são fornecidos para um ligante na posição para, porém podem identicamente aplicar-se às posições orto ou meta. Similarmente, eles são fornecidos para um composto de criptoficina, porém podem também aplicar-se à preparação de outros compostos de fórmula (I), especialmente D1-D19. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=(CH2)nNH2 com n=1, Rii=H e RCG1=maleimido, haloacetamido, NH2, N3 ou ciclo- octina, a saber, ligantes L(IV4) a L(IV17) Esquema 11 Etapa (i): acoplamento peptídico na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC e HOBt e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): desproteção da amina de Fmoc na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina.

[000113] O Esquema 11 descreve os casos L(IV4) com n=1, R11=H e ALQ=(CH2)5, L(IV8) com n=1 e R11=H, L(IV12) com n=1, R11=H e ALQ=(CH2)4, L(IV14) com n=1, R11=H e ALQ=(CH2)3 e L(IV16) com n=1, R11=H, ALQ=(CH2)3 e ALQ’=(CH2)2, porém ele pode também aplicar-se aos outros ligantes L(IV4) a L(IV17) com RCG1=maleimido, iodoacetamido, NH2, N3 ou ciclo-octina. Ele é descrito para um grupo iodoacetamido reativo, porém pode identicamente aplicar-se a um grupo bromoacetamido reativo. Ele é fornecido para um ligante na posição para, porém podem identicamente aplicar-se às posições orto ou meta. Similarmente, ele é fornecido para um composto de criptoficina, porém pode também aplicar-se à preparação de outros compostos de fórmula (I), especialmente D1-D19. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=(CH2)nX com X=O ou S e L=(IV18) com n=1, R17 e Ri8=H e ALQ=(CH2)3 com base no Esquema 7 Esquema 12 Etapa (i): ativação do álcool benzílico ou tiol benzílico como um p-nitrofenil-(tio)carbonato por tratamento com p-nitrofenil- cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): formação do (tio)carbamato por reação com uma amina na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iii): desproteção do alil éster na presença de um catalisador tal como, por exemplo, tetracis(trifenilfosfina)paládio; Etapa (iv): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS por tratamento com DSC na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=(CH2)nX com X=O ou S e L=(IV18) com n=1, R17 e Ri8=H e ALQ=(CH2)3 com base no Esquema 8 Esquema 13 Etapa (i): formação do (tio)carbamato por reação com uma amina na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): desproteção da amina de Fmoc na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento ao anidrido glutárico; Etapa (iv): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS por tratamento com DSC na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000114] Os Esquemas 12 e 13 descrevem o caso L(IV18) com n=1, R17 e R18=H e ALQ=(CH2)3 porém eles podem também aplicar-se aos outros ligantes L com RCG1=C(=O)ONHS, a saber, o caso L(IV18) com p#1 e/ou Ri7, Ri8#H e/ou ALK#(CH2)3 e os casos L(IV19) e L(IV20). Eles são fornecidos para um ligante na posição para, porém podem identicamente aplicar-se às posições orto ou meta. Similarmente, eles são fornecidos para um composto de criptoficina, porém podem também aplicar-se à preparação de outros compostos de fórmula (I), especialmente Di-Di9. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=(CH2)nX com X=O ou S e RCG1=maleimido, haloacetamido, NH2, N3 ou ciclo- octina, a saber, ligantes L(IV21) a (IV34) Esquema 14 Etapa (i): formação do (tio)carbamato, a reação é realizada na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): desproteção da amina de Fmoc na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina.

[000115] O Esquema 14 descreve o caso L(IV21) com n=1, R17 e R18=H e ALQ=(CH2)5, o caso L(IV25) com n=1 e R17 e R18=H, o caso L(IV29) com n=1, R17 e R18=H e ALQ=(CH2)4, o caso L(IV31) com n=1, R17 e R18=H e ALQ=(CH2)3 e o caso L(IV33) com n=1, R17, R18 e R22= H, ALQ=(CH2)3 e ALQ’=(CH2)2 porém ele pode também aplicar-se aos outros ligantes L(IV21 a 34) com RCG1=maleimido, iodoacetamido, NH2, N3 ou ciclo-octina. Ele é descrito para um grupo iodoacetamido reativo, porém pode identicamente aplicar-se a um grupo bromoacetamido reativo. Ele é fornecido para um ligante na posição para, porém podem identicamente aplicar-se às posições orto ou meta. Similarmente, ele é fornecido para um composto de criptoficina, porém pode também aplicar-se à preparação de outros compostos de fórmula (I), especialmente D1-D19. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=(CH2)nNH2 e L=(IV35) com n=1, Rii=Ri4=Ri5=Ri6=H, JI=J2=J3=J4=CH e ALQ= (CH2)3 com base no Esquema 7 Esquema 15 Etapa (i): formação do carbamato, a reação é realizada na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): desproteção do alil éster na presença de um catalisador tal como, por exemplo, tetracis-(trifenilfosfina)paládio; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS por tratamento com DSC na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=(CH2)nNH2 e L=(IV35) com n=1, R11=R14=R15=R16=H, J1=J2=J3=J4=CH e ALQ= (CH2)3 com base no Esquema 8 Esquema 16 Etapa (i): formação do carbamato, a reação é realizada na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA na presença de um reagente de p-nitrofenilcarbonato adequado; Etapa (ii): desproteção da amina de Fmoc na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento ao anidrido glutárico; Etapa (iv): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS por tratamento com DSC na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000116] Os Esquemas 15 e 16 descrevem o caso L(IV35) com n=1, R11=R14=R15=R16=H, J1=J2=J3=J4=CH, um álcool para-benzílico e ALQ=(CH2)3 porém eles podem também aplicar-se aos outros ligantes L com RCG1=C(=O)ONHS, a saber, o caso L(IV35) com n#1 e/ou R11, R14, R15, RI6#H e/ou J1, J2, J3, J4#CH e/ou um álcool orto-benzílico e/ou ALK#(CH2)3 e os casos L(IV36) e L(IV37). Eles são fornecidos para um ligante na posição para, porém podem identicamente aplicar-se às posições orto ou meta. Similarmente, eles são fornecidos para um composto de criptoficina, porém podem também aplicar-se à preparação de outros compostos de fórmula (I), especialmente D1-D19. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=(CH2)nNH2 com n=1, Rii=Ri4=Ri5=Ri6=H, JI=J2=J3=J4=CH e RCG1=maleimido, haloacetamido, NH2, N3 ou ciclo-octina, a saber, ligantes L(IV38) a L(IV151) Esquema 17 Etapa (i): formação do carbamato, a reação é realizada na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA na presença de um reagente de p-nitrofenilcarbonato adequado; Etapa (ii): desproteção da amina de Fmoc na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina.

[000117] O Esquema 17 descreve os casos L(IV38) com n=1, R11=R14=R15=R16=H, J1=J2=J3=J4=CH, um álcool para-benzílico e ALQ=(CH2)5, L(IV42) com n=1, R11=R14=R15=R16=H e J1=J2=J3=J4=CH e um álcool para-benzílico, L(IV46) com n=1, R11=R14=R15=R16=H, J1=J2=J3=J4=CH, um álcool para-benzílico e ALQ=(CH2)4, L(IV48) com n=1, R11=R14=R15=R16=H, J1=J2=J3=J4=CH, um álcool para-benzílico e ALQ=(CH2)3 e L(IV50) com n=1, R11=R14=R15=R16=R22=H, J1=J2=J3=J4= CH, um álcool para-benzílico , ALQ=(CH2)3 e ALQ’=(CH2)2 porém ele pode também aplicar-se aos outros ligantes L(IV38) A L(IV51) com RCG1=maleimido, iodoacetamido, NH2, N3 ou ciclo-octina. Ele é fornecido com um álcool para-benzílico, porém ele pode também aplicar-se a um álcool orto-benzílico. Ele é descrito para um grupo iodoacetamido reativo, porém pode identicamente aplicar-se a um grupo bromoacetamido reativo. Ele é fornecido para um ligante na posição para, porém podem identicamente aplicar-se às posições orto ou meta. Similarmente, ele é fornecido para um composto de criptoficina, porém pode também aplicar-se à preparação de outros compostos de fórmula (I), especialmente D1-D19. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=(CH2)nX com X=O ou S e L=(IV52) com n=1, R14=R15=R16=R17=R18=H, J1=J2=J3=J4=CH e ALQ=(CH2)3 com base no Esquema 7 Esquema 18 Etapa (i): formação do (tio)carbamato por reação com uma amina na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): desproteção do alil éster na presença de um catalisador tal como, por exemplo, tetracis(trifenilfosfina)paládio; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS por tratamento com DSC na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=(CH2)nX com X=O ou S e L=(IV52) com n=1, Ri4=Ri5=Ri6=Ri7=Ri8=H, JI=J2=J3=J4=CH e ALQ=(CH2)3 com base no Esquema 8 Esquema 19 Etapa (i): formação do (tio)carbamato por reação com uma amina na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): desproteção da amina de Fmoc na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento ao anidrido glutárico; Etapa (iv): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS por tratamento com DSC na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000118] Os Esquemas 18 e 19 descrevem o caso L(IV52) com n=1, R14=R15=R16=R17=R18=H, J1=J2=J3=J4=CH, um álcool para-benzílico e ALQ=(CH2)3 porém eles podem também aplicar-se aos outros ligantes L com RCG1=C(=O)ONHS, a saber, o caso L(IV52) com n#1 e/ou R14, R15, R16, R17, RI8#H e/ou J1, J2, J3, J4#CH e/ou um álcool orto-benzílico e/ou ALQ#(CH2)3 e os casos L(IV53) e L(IV54). Eles são fornecidos para um ligante na posição para, porém podem identicamente aplicar-se às posições orto ou meta. Similarmente, eles são fornecidos para um composto de criptoficina, porém podem também aplicar-se à preparação de outros compostos de fórmula (I), especialmente D1-D19. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=(CH2)nX com X=O ou S e RCG1=maleimido, haloacetamido, NH2, N3 ou ciclo- octina, a saber, ligantes L(IV55) a (IV68) Esquema 20 Etapa (i): formação do (tio)carbamato por reação com uma amina na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): desproteção da amina de Fmoc na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina.

[000119] O Esquema 20 descreve o caso L(IV55) com n=1, R14=R15= R16=R17=R18=H, J1=J2=J3=J4=CH, um álcool para-benzílico , ALQ= (CH2)2 e ALQ’=(CH2)5, o caso L(IV59) com n=1, R14=R15=R16=R17=R18= H, J1=J2=J3=J4=CH, um álcool para-benzílico e ALQ=(CH2)2, o caso L(IV63) com n=1, R14=R15=R16=R17=R18=H, J1=J2=J3=J4=CH, um álcool para- benzílico , ALQ=(CH2)2 e ALQ’=(CH2)4, o caso L(IV65) com n=1, R14=R15=R16=R17=R18=H, J1=J2=J3=J4=CH, um álcool para-benzílico , ALQ=(CH2)2 e ALQ’=(CH2)3 e o caso L(IV67) com n=1, R14=R15=R16= R17=R18=R22=H, J1=J2=J3=J4=CH, um álcool para-benzílico , ALQ= (CH2)2, ALQ’=(CH2)5 e ALQ’’=(CH2)2, porém ele pode também aplicar-se aos outros ligantes L(IV55 a 68) com RCG1=maleimido, iodoacetamido, NH2, N3 ou ciclo-octina. Ele é descrito para um grupo iodoacetamido reativo, porém pode identicamente aplicar-se a um grupo bromoacetamido reativo. Ele é fornecido para um ligante na posição para, porém podem identicamente aplicar-se às posições orto ou meta. Similarmente, ele é fornecido para um composto de criptoficina, porém pode também aplicar-se à preparação de outros compostos de fórmula (I), especialmente D1-D19. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=C(=O)O e L=(IV69) com Ri4=Ri5=Ri6=H, JI=J2=J3=J4=CH e ALQ=(CH2)3 com base no Esquema 7 Esquema 21 Etapa (i): esterificação na presença de um reagente de acoplamento tal como, por exemplo, MNBA e uma base tal como, por exemplo, DMAP e DIEA; Etapa (ii): desproteção do alil éster na presença de um catalisador tal como, por exemplo, tetracis-(trifenilfosfina)paládio; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS por tratamento com DSC na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=C(=O)O e L=(IV69) com RI4=RI5=RI6=H, JI=J2=J3=J4=CH e ALQ=(CH2)3 com base no Esquema 8 Esquema 22 Etapa (i): esterificação na presença de um reagente de acoplamento tal como, por exemplo, MNBA e uma base tal como, por exemplo, DMAP e DIEA; Etapa (ii): desproteção da amina de Fmoc na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento ao anidrido glutárico; Etapa (iv): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS por tratamento com DSC na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000120] Os Esquemas 21 e 22 descrevem o caso L(IV69) com R14= R15=R16=H, J1=J2=J3=J4=CH, um álcool para-benzílico e ALQ=(CH2)3 porém eles podem também aplicar-se aos outros ligantes L com RCG1=C(=O)ONHS, a saber, o caso L(IV69) com R14, R15, Rw#H e/ou J1, J2, J3, J4#CH e/ou um álcool orto-benzílico e/ou ALQ#(CH2)3 e os casos L(IV70) e L(IV71). Eles são fornecidos para um ligante na posição para, porém podem identicamente aplicar-se às posições orto ou meta. Similarmente, eles são fornecidos para um composto de criptoficina, porém podem também aplicar-se à preparação de outros compostos de fórmula (I), especialmente D1-D19. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=C(=O)O com RI4=RI5=RI6=H, JI=J2=J3=J4=CH e RCG1=maleimido, haloacetamido, NH2, N3 ou ciclo-octina, a saber, ligantes L(IV72) a L(IV85) Esquema 23 Etapa (i): esterificação na presença de um reagente de acoplamento tal como, por exemplo, MNBA e uma base tal como, por exemplo, DMAP e DIEA; Etapa (ii): desproteção da amina de Fmoc na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina.

[000121] O Esquema 23 descreve os casos L(IV72) com n=1, R14=R15=R16=H, J1=J2=J3=J4=CH, um álcool para-benzílico e ALQ=(CH2)5, L(IV76) com n=1, R14=R15=R16=H e J1=J2=J3=J4=CH e um álcool para-benzílico, L(IV80) com n=1, R14=R15=R16=H, J1=J2=J3=J4= CH, um álcool para-benzílico e ALQ=(CH2)4, L(IV82) com n=1, R14= R15=R16=H, J1=J2=J3=J4=CH, um álcool para- benzílico e ALQ=(CH2)3 e L(IV84) com n=1, R14=R15=R16=R22=H, J1=J2=J3=J4=CH, um álcool para-benzílico , ALQ=(CH2)3 e ALQ’=(CH2)2, porém ele pode também aplicar-se aos outros ligantes L(IV72) a L(IV85) com RCG1=maleimido, iodoacetamido, NH2, N3 ou ciclo-octina. Ele é fornecido com um álcool para-benzílico porém ele pode também aplicar-se a um álcool orto-benzílico. Ele é descrito para um grupo iodoacetamido reativo, porém pode identicamente aplicar-se a um grupo bromoacetamido reativo. Ele é fornecido para um ligante na posição para, porém podem identicamente aplicar-se às posições orto ou meta. Similarmente, ele é fornecido para um composto de criptoficina, porém pode também aplicar-se à preparação de outros compostos de fórmula (I), especialmente D1-D19. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=C(=O)O e L=(V86) com R25=H e ALQ=(CH2)7 Esquema 24 Etapa (i): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS por tratamento com DSC na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): acoplamento peptídico na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS por tratamento com DSC na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000122] O Esquema 24 descreve o caso L(V86) com R25=H e ALQ=(CH2)7, porém eles pode também aplicar-se aos outros ligantes L com RCG1=C(=O)ONHS, a saber, o caso L(V86) com R25#H e/ou ALQ#(CH2)7 e os casos L(V87) e L(V88). Eles são fornecidos para um ligante na posição para, porém podem identicamente aplicar-se às posições orto ou meta. Similarmente, eles são fornecidos para um composto de criptoficina, porém podem também aplicar-se à preparação de outros compostos de fórmula (I), especialmente D1D19. Preparação dos compostos de fórmula (II) no caso onde W=C(=O)O com R30=H e RCG1=maleimido, haloacetamido, NH2, N3 ou ciclo-octina, a saber, ligantes L(V89) a L(V101) Esquema 25 Etapa (i): acoplamento peptídico na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): redução do azido por tratamento com um agente de redução tal como, por exemplo, TCEP.

[000123] O Esquema 25 descreve os casos L(V89) com R25=H e ALQ=(CH2)5, L(V93) com R25=H e ALQ=(CH2)3, L(V96) com R25=H e ALQ=(CH2)4, L(V98) com R25=H e ALQ=(CH2)3 e L(V100) com R22=R25=H, ALQ=(CH2)3 e ALQ’=(CH2)2, porém ele pode também aplicar-se aos outros ligantes L(V89) a L(V101) com RCG1=maleimido, iodoacetamido, NH2, N3 ou ciclo-octina. Ele é descrito para um grupo iodoacetamido reativo, porém pode identicamente aplicar-se a um grupo bromoacetamido reativo. Ele é fornecido para um ligante na posição para, porém podem identicamente aplicar-se às posições orto ou meta. Similarmente, ele é fornecido para um composto de criptoficina, porém pode também aplicar-se à preparação de outros compostos de fórmula (I), especialmente D1-D19. Processo para a preparação dos conjugados de criptoficina

[000124] Os compostos de fórmula (III) podem ser preparados de acordo com o Esquema 26 iniciando com uma carga útil de criptoficina de fórmula (II) e um anticorpo (Ab): Esquema 26 em que: Y representa (C1-C6)alquil-NR11 ou (C1-C6)alquil-O ou (C1-C6) alquil-S; ou alternativamente Y representa C(=O)O ou O (C1-C6)alquil- C(=O)O; ou alternativamente Y representa (C1-C6)alquil-triazol- como . Y é posicionado em uma posição orto (o), meta (m) ou para (p) do núcleo fenila; R11 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1 C6) alquila; L representa um ligante posicionado em uma posição orto (o), meta (m) ou para (p) do núcleo fenila, como acima definido; RCG1 representa um grupo químico reativo que é reativo a um grupo químico reativo presente no anticorpo, como acima definido; Ab representa um anticorpo. Processo para a preparação dos blocos de construção para a síntese de compostos de criptoficina de fórmula (I) Síntese geral de fragmento A Esquema 27

[000125] O fragmento A pode ser preparado em 12 etapas partindo de ésteres de hidróxido apropriados com o auxílio das etapas detalhadas abaixo: Etapa (i): proteção do álcool como um p-metoxibenzil éter usando álcool p-metoxibenzílico ativado como um tricloroacetimidato na presença de uma quantidade catalítica de ácido tal como, por exemplo, p-TsOH; Etapa (ii): redução do ester usando um agente de redução tal como, por exemplo, boro-hidreto de lítio; Etapa (iii): oxidação do álcool usando um agente de oxidação tal como, por exemplo, TEMPO na presença de hipoclorito de sódio; Etapa (iv): alilação diastereosseletivo usando aliltributiles- tanho na presença de tetracloreto de estanho; Etapa (v): metátese cruzada usando terc-butilacrilato na presença de um catalisador tal como, por exemplo, catalisador Grubbs II; Etapa (vi): desproteção do p-metoxibenzil éter usando CAN e tratamento subsequente com etanoditiol na presença de uma quantidade catalítica de ácido tal como, por exemplo, p-TsOH; Etapa (vii): proteção do álcools como silil éteres usando clorotrietilsilano na presença de uma base tal como, por exemplo, imidazol; Etapa (viii): oxidação Swern usando DMSO e cloreto de oxalila na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ix): reação Wittig usando um haleto de fosfônio adequado, por exemplo, um brometo, e uma base forte tal como, por exemplo, BuLi; Etapa (x): desproteção do silil éter usando, por exemplo, uma solução de TBAF. Etapa (xi): oxidação do álcool benzílico usando um agente de oxidação tal como, por exemplo, óxido de manganês; Etapa (xii): isomerização da ligação dupla usando AIBN na presença de benzenotiol.

[000126] Ésteres de hidróxi são comercialmente disponíveis para R1=Me (número de CAS [72657-23-9]), Et (número de CAS [72604-810]) e iPr (número de CAS [72604-82-1]). Preparação de haletos de fosfônio é descrita no WO2011/001052. Síntese geral de fragmento B Esquema 28

[000127] O fragmento B pode ser preparado em 2 etapas partindo de appropriate aminoácidos com o auxílio das etapas detalhadas abaixo: Etapa (i): proteção do amina por tratamento com Boc2O na presença de uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): saponificação do metal éster usando uma base tal como, por exemplo, LiOH.

[000128] Aminoácidos protegidos como metil ésteres são comercialmente disponíveis para R9=3-Cl, 4-OMe (número de CAS [704870-54-2]); 3-Cl, 4-OEt (número de CAS [1256963-00-9]); 3-Cl, 4- OPr (número de CAS [1259709-59-9]); 3-Cl, 4-OMe, 5-F (número de CAS [1213670-98-4]); 3-Cl, 4-OMe, 5-Cl (número de CAS [1259701-422]); 3-Cl, 4-OMe, 5-OMe (número de CAS [1212820-34-2]); 3-Cl, 4-OH, 5-OMe (número de CAS [1213426-93-7]); 3-Cl, 4-NH2 (número de CAS [1213672-64-0]); 2-Cl, 3-Cl, 4-NH2 (número de CAS [1213607-49-8]); 3Cl, 4-NH2, 5-F (número de CAS [1213400-66-8]); 3-Cl, 4-NH2, 5-Cl (número de CAS [1213480-30-8]). Síntese geral de bloco de construção AD1 Esquema 29

[000129] Os fragmentos A e D permitem a preparação de bloco de construção AD1 com o auxílio das etapas detalhadas abaixo: Etapa (i): esterificação de fragmento D com o fragmento A na presença de um reagente de acoplamento tal como, por exemplo, MNBA e uma base tal como, por exemplo, DMAP e DIEA; Etapa (ii): redução do aldeído em um álcool usando um agente de redução tal como, por exemplo, trimetoxiboro-hidreto de sódio; Etapa (iii): ativação do álcool como um mesilato por tratamento com cloreto de metanossulfonila na presença de uma base tal como, por exemplo, TEA; substituição do mesilato por um grupo azido por tratamento com azida de sódio; Etapa (iv): desproteção da amina por tratamento com uma base tal como, por exemplo, piperidina. Síntese geral de bloco de construção AD2 Esquema 30

[000130] Os fragmentos A e D permitem a preparação de bloco de construção AD2 com o auxílio das etapas detalhadas abaixo: Etapa (i): esterificação de fragmento D com o fragmento A na presença de um reagente de acoplamento tal como, por exemplo, MNBA e uma base tal como, por exemplo, DMAP e DIEA; Etapa (ii): redução do aldeído em um álcool usando um agente de redução tal como, por exemplo, trimetoxiboro-hidreto de sódio; Etapa (iii): desproteção da amina por tratamento com uma base tal como, por exemplo, piperidina. Síntese geral de bloco de construção AD3 Esquema 31 Etapa (i): esterificação de fragmento D com Álcool de Sakurai na presença de um reagente de acoplamento tal como, por exemplo, MNBA e uma base tal como, por exemplo, DMAP e DIEA; Etapa (ii): desproteção da amina por tratamento com uma base tal como, por exemplo, piperidina. Síntese geral de bloco de construção BC Esquema 32

[000131] Os fragmentos B e C permitem a preparação de bloco de construção BC com o auxílio das etapas detalhadas abaixo: Etapa (i): acoplamento peptídico de fragmento B com fragmento C na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, HOBt e EDC e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): saponificação do metil éster usando uma base tal como, por exemplo, LiOH. Síntese geral de um bloco de construção alternativo BC Esquema 33

[000132] Os fragmentos B e C permitem a preparação de um bloco de construção alternativo BC com o auxílio das etapas detalhadas abaixo: Etapa (i): acoplamento peptídico de fragmento B com fragmento C na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, HOBt e EDC e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): desproteção do grupo Boc em condições acídicas usando, por exemplo, TFA; Etapa (iii): formação do acrilamida por tratamento com cloreto de acriloíla chloride na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; s saponificação do metil éster usando uma base tal como, por exemplo, tBuOK. Preparação dos precursors de ligante LP

[000133] LP pode ser um dos seguintes; LP1 a LP101 são descritos usando L aminoácidos, porém podem também aplicar-se aos aminoácidos D. Eles são fornecidos para w=2, porém podem similarmente aplicar-se ao w>2 repetindo quantas vezes forem necessárias a etapa de acoplamento de peptídeo.

[000134] Lpi preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre Fmoc-L- aminoácido-ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em temperatura ambiente em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN.

[000135] Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; os diácidos monoprotegidos como alil ésteres são comercialmente disponíveis para n=2 (succinato de monoalila) ou podem ser preparados por transesterificação do metil ou terc-butil monoésteres, que são comercialmente disponíveis para n=2 a 6.

[000136] LP2 preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre Fmoc-L- aminoácido-ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC suportado; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN.

[000137] Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; os diácidos de PEG monoprotegidos como alil ésteres podem ser preparados de acordo com o esquema abaixo: quando ALQ=CH2CH2 Etapa (i): alongamento da cadeia de PEG; a reação é realizada em um solvente aprótico polar anidroso tal como THF ou DMF por tratamento de um ácido protegido insaturado com o alcóxido gerado pela ação de sódio em quantidade catalítica; Etapa (ii): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético. No último caso, trifluoroacetato da função álcool presente na estrututura pode ser formado. Este trifluoroacetato é clivado durante a etapa (iii) seguinte; Etapa (iii): proteção do ácido carboxílico como um metil éster; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como MeOH, por tratamento com trimetilsilildiazometano; Etapa (iv): saponificação do metil éster; a reação é realizada em uma mistura de solventes polares tal como uma mistura de THF/H2O na presença de LiOH; Etapa (v): proteção do ácido carboxílico como um alil éster; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM na presença de alil álcool, um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC e uma base tal como, por exemplo, DMAP; Etapa (vi): alongamento da cadeia de PEG; a reação é realizada em um solvente aprótico polar anidroso tal como THF ou DMF por tratamento de um éster halogenado com o alcóxido do PEG diol monoprotegidos como um éter de THP. A preparação deste tipo de PEG diol monoprotegido é bem descrita na literatura: veja, por exemplo, Richard A., et al., Chem. Eur. J. 2005, 11, 7315-7321 ou Sakellariou E.G., et al., Tetrahedron 2003, 59, 9083-9090.

[000138] Os PEG dióis de partida são comercialmente disponíveis para i=3 a 12.

[000139] LP3 preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre Fmoc-L- aminoácido-ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DMF/H2O por tratamento com carbonato de N,N’-dissuccinimidila na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em temperatura ambiente em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN.

[000140] Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; os sulfo diácidos monoprotegidos como alil éster podem ser preparados de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): proteção do ácido carboxílico como um alil éster; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM na presença de alil álcool, um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC e uma base tal como, por exemplo, DMAP; Etapa (ii): a-sulfonação do ácido carboxílico; a reação é realizada a 75°C em um solvente aprótico polar como DCE por tratamento com ácido clorossulfônico na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA. Etapa (iii): formação da porção ácido carboxílico; a reação é realizada por tratamento com hidróxido de sódio; Etapa (iv): substituição do brometo por um tioacetil; a reação é realizada a -20°C em um solvente aprótico polar tal como THF usando ácido tioacético na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (v): formação da porção ácido sulfônico; a reação é realizada em temperatura ambiente por tratamento com peróxido de hidrogênio e ácido acético.

[000141] Ácidos ciano carboxílicos são comercialmente disponíveis para n=1 a 12.

[000142] preparado de acordo com o esquema abaixo: de peptídeo entre Fmoc-L- a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN.

[000143] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; os ácidos carboxílicos de maleimido são comercialmente disponíveis para n=1 a 12.

[000144] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre Fmoc-L aminoácido-ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC suportado; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN.

[000145] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; os ácidos de maleimido são comercialmente disponíveis para ALQ=ALQ’=CH2CH2 e i=1 a 7 e podem ser de outro modo preparados de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): alongamento da cadeia de PEG; a reação é realizada em um solvente aprótico polar anidroso tal como THF ou DMF por tratamento de um ácido protegido insaturado com o alcóxido gerado pela ação de sódio em quantidade catalítica; Etapa (ii): Reação Mitsunobu em maleimida; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como THF por tratamento de maleimida pelo ácido de hidróxido de PEG na presença de PPh3 e DIAD; Etapa (iii): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético; Etapa (iv): alongamento da cadeia de PEG; a reação é realizada em um solvente aprótico polar anidroso tal como THF ou DMF por tratamento de um éster halogenado com o alcóxido do PEG diol monoprotegido como o éter de THP. A preparação deste tipo de PEG diol monoprotegido é bem descrita na literatura: veja, por exemplo, Richard A., et al., Chem. Eur. J. 2005, 11, 7315-7321 ou Sakellariou E.G., et al., Tetrahedron 2003, 59, 9083-9090; Etapa (v): desproteção seletiva de éter de THP; a reação é realizada em um solvente prótico polar tal como MeOH usando uma quantidade catalítica de cloreto de acetila; Etapa (vi): ativação do álcool como um mesilato; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com cloreto de metanossulfonila na presença de uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (vii): substituição nucleofílica; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DMF na presença de uma base tal como, por exemplo, hidreto de sódio; Etapa (viii): proteção do álcool como um benzil éter; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como THF por tratamento com brometo de benzila na presença de uma base tal como, por exemplo, hidreto de sódio; Etapa (ix): desproteção do álcool usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano); Etapa (x): desproteção do álcool por hidrogenólise na presença de um catalisador tal como, por exemplo, paládio sobre carbono.

[000146] Os PEG dióis de partida são comercialmente disponíveis para i=3 a 12. Os ALQ dióis de partida são comercialmente disponíveis para n=1 a 12.

[000147] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre Fmoc-L- aminoácido-ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente polar tal como a mixture DMF/H2O por tratamento com carbonato de N,N’-dissuccinimidila na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN.

[000148] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; o ácido ciclo-hexanocarboxílico de maleimido é comercialmente disponível para ALQ=CH2 e pode ser de outro modo preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): hidrogenação; a reação é realizada a 60°C em ácido acético na presença de um catalisador tal como óxido de platina sob pressão de hidrogênio, por exemplo, 4,21 kg/cm2 (60 psi); Etapa (ii): proteção do amina; a reação é realizada em um solvente prótico polar tal como uma mistura de dioxano/H2O por tratamento com benzilcloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, NaOH; Etapa (iii): proteção do ácido carboxílico; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com terc-butanol na presença de um reagente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC e uma base tal como, por exemplo, DMAP; Etapa (iv): desproteção da amina; a reação é realizada por hidrogenólise em um solvente prótico polar tal como MeOH na presença de um catalisador tal como, por exemplo, paládio; Etapa (v): introdução dq porção maleimido; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DMF por tratamento com anidrido maleico na presença de NHS e um reagente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC; Etapa (vi): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético; Etapa (vii): acoplamento catalisado por paládio; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como THF por tratamento com o derivado de bromo-ALQ-ciano na presença de cloreto de lítio, zinco e trimetilclorosilano e um catalisador tal como, por exemplo, tetracis(trifenilfosfina)paládio.

[000149] Os derivados de bromo-ALQ-ciano adequados são comercialmente disponíveis para n=1 a 12.

[000150]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre Fmoc-L- aminoácido-ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): a-sulfonação do ácido carboxílico; a reação é realizada a 75°C em um solvente aprótico polar como DCE por tratamento com ácido clorossulfônico na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iv): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em temperatura ambiente em um solvente polar tal como uma mistura de DMF/H2O por tratamento com carbonato de N,N’-dissuccinimidila na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (v): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em temperatura ambiente em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN. Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; os ácidos de maleimido são comercialmente disponíveis para n=1 a 12.

[000151] preparado de acordo com o esquema abaixo: solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN.

[000152] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; bromo- e iodo-acetatos de N-succinimidila são comercialmente disponíveis.

[000153]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento aminoácido-ONHS e L-aminoácido; solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento e ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; o acoplamento de bromo- e iodo-acetato de N- succinimidila com o amino ácido carboxílico é realizada em temperatura ambiente em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/DMF seguido pela adição de carbonato de N,N’-dissuccinimidila e uma base, tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN.

[000154] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; bromo e iodo-acetatos de N-succinimidila são comercialmente disponíveis, os ácidos carboxílicos de amino também para n=1 a 12 e os ácidos carboxílicos de amino metilados por N para n=1 a 7.

[000155]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre Fmoc-L-aminoácido- ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento e ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; o acoplamento de bromo e iodo-acetato de N- succinimidila com o ácido carboxílico de amino é realizado em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/DMF seguido pela adição de carbonato de N,N’-dissuccinimidila e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN.

[000156] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; bromo e iodo-acetato de N-succinimidila são comercialmente disponíveis; no caso onde ALQ=CH2CH2 e R20=H, os ácidos carboxílicos de amino PEG são comercialmente disponíveis para i=1 a 6 e, de outro modo podem ser preprados de acrilato de terc-butila e o amino-PEG-álcool correspondente; no caso onde ALQ#CH2CH2, eles podem ser preparados de acordo com os esquemas abaixo: Etapa (i): proteção do amina; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento da amina com dicarbonato de di-terc-butila na presença de uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): proteção do ácido carboxílico; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com terc- butanol na presença de um reagente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC e uma base tal como, por exemplo, DMAP; Etapa (iii): alquilação do átomo de nitrogênio; a reação é realizada em um solvente aprótico polar anidroso tal como THF por tratamento com uma base tal como hidreto de sódio na presença de um reagente transportando um grupo de saída tal como um haleto;

[000157] Etapa (iv): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético; Etapa (v): alongamento da cadeia de PEG; a reação é realizada em um solvente aprótico polar anidroso tal como THF ou DMF por tratamento de um éster halogenado com o alcóxido de um benzofenona- imina-PEG-álcool Gerado por meio da ação de hidreto de sódio ou naftalenida de potássio coomo descrito no WO2007/127440; Etapa (vi): saponificação do éster; a reação é realizada reagindo o éster com LiOH na presença de H2O.

[000158] Os amino-PEG-álcoois são comercialmente disponíveis, por exemplo, para i=3, 4, 7, 8 ou podem ser preparados dos PEG dióis, que são comercialmente disponíveis para i=3 a 12, de acordo com o procedimento descrito no US7230101. A proteção da função amina com benzofenona pode ser realizada por desidratação azeotrópica na presença de um ácido Lewis tal como eterato de BF3.

[000159]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre Fmoc-L-aminoácido- NHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina Fmoc; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento e ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; o acoplamento de bromo e iodo-acetato de N- succinimidila com o ácido carboxílico de amino é realizado em temperatura ambiente em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/DMF seguido pela adição de carbonato de N,N’- dissuccinimidila e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em temperatura ambiente em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN.

[000160] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; bromo e iodo-acetato de N-succinimidila são comercialmente disponíveis; os ácidos amino-(hetero)aril-carboxílicos são comercialmente disponíveis, como, por exemplo, ácido 4-amino-2- benzoico, ácido carboxílico de 6-amino-3-piridina, ácido carboxílico de 5- amino-2-pirazina, ácido carboxílico de 2-amino-5-pirimidina ou ácido carboxílico de 6-amino-1,2,4,5-tetrazina.

[000161]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre Fmoc-Laminoácido-ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN.

[000162] Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; os ácidos carboxílicos de amino são comercialmente disponíveis para n=1 a 11.

[000163] preparado de acordo com o esquema abaixo:Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre Fmoc-Laminoácido-ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC suportado; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN.

[000164] O éster de NHS Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; no caso onde ALQ=CH2CH2, ácidos carboxílicos de amino PEG protegidos por Fmoc são comercialmente disponíveis para i=1 a 6 e, de outro modo podem ser preparados de acrilato de terc-butila e o amino- PEG-álcool correspondente; no caso onde ALQ#CH2CH2, eles podem ser preparados de acordo com os esquemas descritos para o precursor de ligante LP10. A proteção da função amina com um grupo Fmoc pode ser realizada por tratamento com FmocOSu (número de CAS [82911-69-1]) na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000165]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre Fmoc-L- aminoácido-ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): introdução do grupo azido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de acetona/H2O por tratamento com azida de sódio; Etapa (iv): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC; Etapa (v): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN.

[000166] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; ácidos carboxílicos de bromo são comercialmente disponíveis para n=1 a 11.

[000167]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre Fmoc-L- aminoácido-ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC suportado; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN.

[000168] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; ácidos de azido PEG podem ser preparados de acordo com os esquemas abaixo: Etapa (i): alongamento da cadeia de PEG; a reação é realizada em um solvente aprótico polar anidroso tal como THF ou DMF por tratamento de um ácido protegido insaturado com o alcóxido gerado pela ação de sódio em quantidade catalítica; Etapa (ii): ativação da função álcool; a reação é realizada em um solvente polar tal como DCM usando cloreto de metanossulfonila na presença de uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (iii): substituição do mesilato por um grupo azido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de acetona/H2O por tratamento com azida de sódio; Etapa (iv): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano); Etapa (v): alongamento da cadeia de PEG; a reação é realizada em um solvente aprótico polar anidroso tal como THF ou DMF por tratamento de um éster halogenado com o alcóxido do PEG diol monoprotegidos como um éter de THP, alcóxido Gerado, por exemplo, com hidreto de sódio. A preparação deste tipo de PEG diol monoprotegido é bem descrita na literatura: veja, por exemplo, Richard A. et al. Chem. Eur. J. 2005, 11, 7315-7321 ou Sakellariou E.G., et al. Tetrahedron 2003, 59, 9083-9090; Etapa (vi): saponificação do metil éster; a reação é realizada em temperatura ambiente em uma mistura de solventes polares tal como uma mistura de THF/H2O na presença de LiOH.

[000169] Os PEG dióis de partida são comercialmente disponíveis para i=3 a 12; os metil ésteres de bromo são comercialmente disponíveis para n=1 a 12.

[000170] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre Fmoc-Laminoácido-ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento de ciclo-octina; a reação é realizada em um solvente polar tal como DCM; Etapa (iv): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC; Etapa (v): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM.

[000171] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; ciclo-octinas são comercialmente disponíveis para n’=1, 2, 3 e 5; diácidos monoativados como éster de NHS são comercialmente disponíveis para n=1 a 3 e para n=4 a 10, eles podem ser preparados por ativação de diácidos comercialmente disponíveis com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC e uma base tal como, por exemplo, DMAP. acordo com o esquema abaixo:

[000172]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre Fmoc-L- aminoácido-ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento de ciclo-octina; a reação é realizada em um solvente polar tal como DCM; Etapa (iv): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano); Etapa (v): ativação do ácido carboxílico de ciclo-octina-PEG como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC; Etapa (vi): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM.

[000173] Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; ciclo-octinas são comercialmente disponíveis para n’=1, 2, 3 e 5; os diácidos de PEG mono-ativados como éster de NHS são preparados de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): alongamento da cadeia de PEG; a reação é realizada em um solvente aprótico polar anidroso tal como THF ou DMF por tratamento de um ácido protegido insaturado com o alcóxido gerado pela ação de sódio em quantidade catalítica; Etapa (ii): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético; Etapa (iii): monoativação de um ácido como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente polar tal como THF usando NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC e uma base tal como, por exemplo, DMAP; Etapa (iv): alongamento da cadeia de PEG; a reação é realizada em um solvente aprótico polar anidroso tal como THF ou DMF por tratamento de um éster halogenado com o alcóxido do PEG diol monoprotegido como um éter de THP. A preparação deste tipo de PEG diol monoprotegido é bem descrita na literatura: veja, por exemplo, Richard A., et al., Chem. Eur. J. 2005, 11, 7315-7321 ou Sakellariou E.G., et al., Tetrahedron 2003, 59, 9083-9090; Etapa (v): proteção do ácido carboxílico como um metil éster; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como MeOH, por tratamento com trimetilsilildiazometano; Etapa (vi): saponificação do metil éster; a reação é realizada em uma mistura de solventes polares tal como uma mistura de THF/H2O na presença de LiOH; Etapa (vii): ativação do ácido como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente polar tal como THF usando NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC e uma base tal como, por exemplo, DMAP.

[000174] Os PEG dióis de partida são comercialmente disponíveis para i=3 a 12.

[000175]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (v): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000176] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro. Os diácidos monoprotegidos como alil ésteres são comercialmente disponíveis para n=2 (succinato de monoalila) ou podem ser preparados por transesterificação do metil ou terc-butil monoésteres, que são comercialmente disponíveis para n’=2 a 6.

[000177]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (v): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000178] Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro; os diácidos de PEG monoprotegidos como alil ésteres são preparados de acordo com os esquemas descritos para o precursor de ligante LP2.

[000179] preparado de acordo com o esquema abaixo:de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (v): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000180] Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro; os sulfo diácidos monoprotegidos como alil éster são preparados de acordo com os esquemas descritos para o precursor de ligante LP3.

[000181]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA. Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (v): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000182] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro; os ácidos carboxílicos de maleimido são comercialmente disponíveis para n=1 a 12.

[000183]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/Me0H na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC suportado; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (v): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000184] Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro; os ácidos de maleimido PEG são comercialmente disponíveis para ALQ=ALQ’=CH2CH2 e i=1 a 7 e são de outro modo preparados de acordo com os esquemas descritos para o precursor de ligante LP5.

[000185] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (v): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000186] Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro; o ácido ciclo-hexanocarboxílico de maleimido é comercialmente disponível para ALQ=CH2 e podem de outro modo ser preparados de acordo com os esquemas descritos para o precursor de ligante LP6.

[000187] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): a-sulfonação do ácido carboxílico; a reação é realizada a 75°C em um solvente aprótico polar como DCE por tratamento com ácido clorossulfônico na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iv): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC; Etapa (v): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (vi): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000188]Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro; os ácidos de maleimido são comercialmente disponíveis para n=1 a 12.

[000189] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (iv): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000190]Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e Ri7 e Ri8 = H ou Me independentemente um do outro; bromo e iodo-acetatos de N- succinimidila são comercialmente disponíveis.

[000191] preparado de acordo com o esquema preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento e ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; o acoplamento de bromo e iodo-acetato de N- succinimidila com o ácido carboxílico de amino é realizado em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/DMF seguido pela adição de carbonato de N,N’-dissuccinimidila e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (v): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000192] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro; bromo e iodo-acetatos de N- succinimidila são comercialmente disponíveis; os ácidos carboxílicos de amino são comercialmente disponíveis para n=1 a 12 e os ácidos carboxílicos de amino metilados por N para n=1 a 7.

[000193] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento e ativação do ácido carboxílico como éster de NHS; o acoplamento de bromo e iodo-acetato de N- succinimidila com o ácido carboxílico de amino é realizado em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/DMF seguido pela adição de carbonato de N,N’-dissuccinimidila e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (v): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000194] Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro; bromo e iodo-acetato de N- succinimidila são comercialmente disponíveis; no caso onde ALQ=CH2CH2 e R20=H, os ácidos carboxílicos de amino PEG são comercialmente disponíveis para e i=1 a 6 e, de outro modo podem ser preparados de acrilato de terc-butila e o amino-PEG-álcool correspondente; no caso onde ALQ#CH2CH2, eles podem ser preparados de acordo com os esquemas descritos para o precursor de ligante LP10.

[000195]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento e ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; o acoplamento de bromo e iodo-acetato de N- succinimidila com o ácido carboxílico de amino é realizado em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/DMF seguido pela adição de carbonato de N,N’-dissuccinimidila e uma base tal como, por exemplo,DIEA; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (v): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000196] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro; bromo e iodo-acetato de N- succinimidila são comercialmente disponíveis; os ácidos amino- (hetero)aril-carboxílicos são comercialmente disponíveis, como, por exemplo, ácido 4-amino-2-benzoico, ácido carboxílico de 6-amino-3- piridina, ácido carboxílico de 5-amino-2-pirazina, ácido carboxílico de 2- amino-5-pirimidina ou ácido carboxílico de 6-amino-1,2,4,5-tetrazina.

[000197] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (v): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000198] Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro; os ácidos carboxílicos de amino são comercialmente disponíveis para n=1 a 12.

[000199] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC suportado; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (v): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000200] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro; ácidos carboxílicos de amino PEG protegidos por Fmoc são comercialmente disponíveis para e i=1 a 6 e, de outro modo podem ser preparados de acrilato de terc-butila e o amino-PEG-álcool correspondente; no caso onde ALQ#CH2CH2, eles podem ser preparados de acordo com os esquemas para o precursor de ligante LP10. A proteção da função amina com um grupo Fmoc pode ser realizada por tratamento com FmocOSu (número de CAS [82911- 69-1]) na presença de uma base tal como, por

[000201]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EDC; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (v): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000202] Os ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro; os ácidos carboxílicos de azido podem ser preparados de acordo com os esquemas descritos para o precursor de ligante LP14.

[000203] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como DCM por tratamento com NHS na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC suportado; Etapa (iv): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (v): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000204] Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro; ácidos carboxílicos de azido PEG podem ser preparados de acordo com os esquemas descritos para o precursor de ligante LP15.

[000205] preparado de acordo com o esquema abaixo: _dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000206] Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro; ligantes de ciclo-octina ativados como ésteres de NHS podem ser preparados de acordo com os esquemas descritos para o precursor de ligante LP16.

[000207]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como bicarbonato de sódio ou em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como anidrido propilfosfônico e uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): desproteção da amina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento de peptídeo entre o dipeptídeo e o éster de NHS; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (iv): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000208] Ésteres de NHS de Fmoc-L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e R17 e R18 = H ou Me independentemente um do outro; ligantes de ciclo-octina ativados como ésteres de NHS podem ser preparados de acordo com os esquemas descritos para o precursor de ligante LP17.

[000209] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante LP1 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenil- carbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000210] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, 4-(hidroximetil)-anilina (número de CAS [623-04-1]), 4-(1-hidroxietil)-anilina (racêmico (número de CAS [14572-89-5]) ou enantiopure (R) (número de CAS [210754-259]) ou (S) (número de CAS [500229-84-5])), 4-amino-a,a-dimetil- benzeno-methanol (número de CAS [23243-04-1]), 4-amino-a- metóxi-a-metil-benzenometanol (número de CAS [1379318-81-6]), 4-amino-a-metil-a-trifluorometil-benzenometanol (número de CAS [851652-56-7]), 2-amino-benzenometanol (número de CAS [534490-1]), 2-amino-a-metil-benzenometanol (racêmico (número de CAS [10517-50-7]) ou enantiopure (R) (número de CAS [3205-21-8]) ou (S) (número de CAS [3205-21-8])), 6-amino-3-piridinametanol (número de CAS [113293-71-3]), 6-amino-a-metil-3-piridinametanol (número de CAS [1335054-83-5]), 6-amino-a-etil-3-piridinametanol (número de CAS [1355225-85-2]), 6-amino-a,a-dimetil-3- piridinametanol (número de CAS [843646-03-8]), 5-amino-3- piridinametanol (número de CAS [873651-92-4]), 2-amino-3- piridinametanol (número de CAS [23612-57-9]), 2-amino-a-metil-3- piridinametanol (racêmico (número de CAS [869567-91-9]) ou enantiopure (R) (número de CAS [936718-01-3]) ou (S) (número de CAS [936718-00-2])), 2-amino-a-etil-3-piridinametanol (número de CAS [914223-90-8]), 2-amino-a,a-dimetil-3-piridinametanol (número de CAS [213666-96-7]), 3-amino-4-piridinametanol (número de CAS [152398-05-5]), 3-amino-a-metil-4-piridinametanol (número de CAS [1242470-88-7]), 3-amino-a,a-metil-4-piridinametanol (número de CAS [13357-81-8]), 4-amino-3-piridinametanol (número de CAS [138116-34-4]), 4-amino-a-metil-3-piridinametanol (número de CAS [741223-49-4]), 4-amino-a,a-metil-3-piridinametanol (número de CAS [1339013-26-1]), 3-amino-2-piridinametanol (número de CAS [52378-63-9]), 3-amino-a-metil-2-piridinametanol (número de CAS [954240-54-1]), 3-amino-a,a-metil-2-piridinametanol (número de CAS [899438-57-4]).

[000211] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante LP2 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenil- carbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000212] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, aqueles listados para LP35.

[000213] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante LP3 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenil- carbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000214] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, aqueles listados para LP35.

[000215] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante Lp4 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenil- carbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000216] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, aqueles listados para Lp35.

[000217] preparado de acordo com o esquema abaixo: J Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante LP5 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenil- carbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000218] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, aqueles listados para LP35.

[000219] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante LP6 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenil- carbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000220] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, aqueles listados para LP35.

[000221]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante LP7 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenilcarbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000222] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, aqueles listados para LP35.

[000223]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante LP8 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenil- carbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000224] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, aqueles listados para LP35.

[000225] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante Lp9 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenil- carbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000226] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, aqueles listados para Lp35.

[000227]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante LP10 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/Me0H na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenil- carbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000228] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, aqueles listados para LP35.

[000229] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante LP11 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/Me0H na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenil- carbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000230] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, aqueles listados para LP35.

[000231]preparado de acordo com o esquema abaixo:Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante LP12 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenilcarbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000232] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, aqueles listados para LP35.

[000233]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante LP13 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenilcarbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000234] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, aqueles listados para LP35.

[000235]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante LP14 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenil- carbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000236] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, aqueles listados para LP35.

[000237]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante LP15 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenil- carbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000238]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante LP16 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenil- carbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000239] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, aqueles listados para LP35. preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento de peptídeo entre o precursor do ligante LP17 e um derivado de anilina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/MeOH na presença de um agente de acoplamento tal como, por exemplo, EEDQ; Etapa (ii): ativação do álcool benzílico como um p-nitrofenil- carbonato por tratamento com p-nitrofenil-cloroformiato na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA.

[000240] Muitos derivados de anilina são comercialmente disponíveis tais como, por exemplo, aqueles listados para LP35.

[000241]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP35 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000242] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP36 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000243]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP37 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000244] LP55preparado de acordo com o esquema abaixo: solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000245] LP56preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP38 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP39 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000246] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP40 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000247] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP41 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000248]preparadode acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP42 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000249] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP43 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000250]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP44 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000251] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP45 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000252] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP46 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000253]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP47 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000254] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP48 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000255] preparado de acordo com o esquem abaixo: Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP49 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000256] LP67preparado de acordo com o esquema abaixo:Etapa (i): formação do carbamato entre o precursor do ligante LP50 e uma diamina monoprotegida; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000257] LP68preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): formação do carbamato; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético.

[000258]preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP35.

[000259] preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP36.

[000260]preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP37.

[000261]preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP38.

[000262] preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP39.

[000263]preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP40.

[000264]preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP41 .

[000265]preparado deacordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP42.

[000266]preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP43.

[000267]preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP44.

[000268]preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP45.

[000269]preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP46.

[000270]preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP47.

[000271]preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP48.

[000272]preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP49.

[000273]preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP50.

[000274]preparado de acordo com a 1ª etapa descrita para o precursor de ligante LP51.

[000275]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento do ácido em resina Wang por esterificação; a reação é realizada em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como, por exemplo, DIC e uma base tal como, por exemplo, DMAP; Etapa (ii): desproteção do Fmoc group; a reação é realizada em um solvente polar tal como DMF por tratamento com uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento peptídico; a reação é realizada em um solvente polar tal como DMF na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, HOBt e HATU e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iv): clivagem da resina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/H2O na presença de um ácido tal como, por exemplo, TFA.

[000276] Aminoácidos de alquila protegidos por Fmoc são comercialmente disponíveis para n=1 a 9; Fmoc L-aminoácidos são comercialmente disponíveis.

[000277]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento do ácido em resina Wang por esterificação; a reação é realizada em um solvente polar tal como DCM na presença de um reagente de acoplamento tal como, por exemplo, DIC e uma base tal como, por exemplo, DMAP; Etapa (ii): desproteção do grupo Fmoc; a reação é realizada em um solvente polar tal como DMF por tratamento com uma base tal como, por exemplo, piperidina; Etapa (iii): acoplamento peptídico; a reação é realizada em um solvente polar tal como DMF na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, HOBt e HATU e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iv): clivagem da resina; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DCM/H2O na presença de um ácido tal como, por exemplo, TFA.

[000278] Ácidos carboxílicos de amino PEG protegidos por Fmoc são comercialmente disponíveis para i=1 a 6 e, de outro modo, podem ser preparados de acrilato de terc-butila e do amino-PEG-álcool correspondente; no caso onde ALQ?CH2CH2, eles podem ser preparados de acordo com os esquemas descritos para o precursor de ligante LP10. Proteção da função amina com um grupo Fmoc pode ser realizada por tratamento com FmocOSu (número de CAS [82911-69-1]) na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Fmoc Laminoácidos são comercialmente disponíveis.

[000279]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): acoplamento peptídico com sulfo aminoácidos; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC e HOBt e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000280] L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; ésteres de NHS de L-aminoácidos protegidos por Bocsão comercialmente disponíveis; sulfo aminoácidos são comercialmente disponíveis para n=1 e 2 ou de outro modo, podem ser preparados de acordo com o esquema abaixo:

[000281] Etapa (i): substituição do brometo por um tioacetil; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como, por exemplo, THF usando ácido tioacético na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): formação da porção ácido sulfônico; a reação é realizada por tratamento com peróxido de hidrogênio e ácido acético; Etapa (iii): substituição do brometo por um azido; a reação é realizada em um solvente polar tal como, por exemplo, DMA por tratamento com azida de sódio; Etapa (iv): desproteção de metil éster; a reação é realizada em condições acídicas tal como, por exemplo, uma mistura de HCl e AcOH; Etapa (v): redução do azido; a reação é realizada por hidrogenólise em um solvente polar tal como H2O na presença de um catalisador tal como paládio sobre carbono.

[000282] Derivados de dibromo são comercialmente disponíveis para n=3, 4 e 9.

[000283] LP89 preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento peptídico entre Boc-L-aminoácido- ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): acoplamento peptídico com aminas de maleimido; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC e HOBt e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000284] L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; Ésteres de NHS de L-aminoácidos protegidos por Boc são comercialmente disponíveis; aminas de maleimido são comercialmente disponíveis para n=2 a 6.

[000285]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento peptídico entre Boc-L-aminoácido- ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): acoplamento peptídico com aminas de maleimido PEG; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC e HOBt e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000286] L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; Ésteres de NHS de L-aminoácidos protegidos por Boc são comercialmente disponíveis; aminas de maleimido PEG são comercialmente disponíveis para ALQ=ALQ’=CH2CH2 e i=0 e 1 ou de outro modo pode ser preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i: Reação Mitsunobu em maleimida; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como, por exemplo, THF por tratamento de malemida pelo ácido de hidróxido de PEG na presença de PPh3 e DIAD; Etapa (ii): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético; Etapa (iii): ativação do álcool como um tosilato; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como, por exemplo, DCM por tratamento com cloreto de tosila na presença de uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (iv): substituoção do grupo tosila; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como, por exemplo, THF, na presença de uma base tal como, por exemplo, hidreto de sódio. Etapa (v): desproteção do grupo benzila; a reação é realizada por hidrogenólise em um solvente polar tal como, por exemplo, MeOH, na presença de uma quantidade catalítica de catalisador, tal como, por exemplo, paládio sobre carbono; Etapa (vi): ativação do álcool como um mesilato; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como, por exemplo, DCM por tratamento com cloreto de metanossulfonila na presença de uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (vii): substituição nucleofílica; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como, por exemplo, DMF na presença de uma base tal como hidreto de sódio;

[000287] Os álcoois de amino PEG protegidos por Boc são comercialmente disponíveis para i=2 a 4 ou podem ser preparados por tratamento de álcoois de amino PEG comercialmente disponíveis por Boc2O para i=5 a 8; os álcoois de amino ALQ de partida são comercialmente disponíveis para n=1 e 3 a 10; os PEG dióis de partida monoprotegidos com um grupo benzila são comercialmente disponíveis para i=1 a 9; os dióis ALQ’ de partida são comercialmente disponíveis para n=1 a 12.

[000288] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento peptídico entre Boc-L-aminoácido- ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): acoplamento peptídico com aminas de maleimido; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC e HOBt e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000289] L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; Ésteres de NHS de L-aminoácidos protegidos por Boc são comercialmente disponíveis; aminas de maleimido pode ser preparado de acordo com o esquema abaixo:Etapa (i): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente polar tal como a mixture DMF/H2O por tratamento com carbonato de N,N’-dissuccinimidila na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000290] O ácido ciclo-hexanocarboxílico de maleimido é comercialmente disponível para ALQ=CH2 ou de outro modo, pode ser preparado de acordo com os esquemas descritos para LP6; as diaminas monoprotegidas com um grupo Boc são comercialmente disponíveis para n=1 a 10.

[000291]preparado de acordo com o esquema abaixo:Etapa (i): acoplamento peptídico entre Boc-L-aminoácidoONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): acoplamento peptídico com aminas de maleimido PEG; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC e HOBt e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000292] L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; Ésteres de NHS de L-aminoácidos protegidos por Boc são comercialmente disponíveis; aminas de maleimido PEG pode ser preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): ativação do ácido carboxílico como um éster de NHS; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DMF/H2O por tratamento com carbonato de N,N’-dissuccinimidila na presença de uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (ii): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000293] O ácido ciclo-hexanocarboxílico de maleimido é comercialmente disponível para ALQ=CH2 ou de outro modo pode ser preparado de acordo com os esquemas descritos para LP6; as diaminas PEG monoprotegidas com um grupo Boc são comercialmente disponíveis para i=1 a 9.

[000294] O R 29 HN O NH 2 R 30 NR 25 O NR 19 I or Br ALK preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento peptídico entre Boc-L-aminoácido- ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): acoplamento peptídico com aminas de PEG de halogenoacetamido; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC e HOBt e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000295] L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; Ésteres de NHS de L-aminoácidos protegidos por Boc são comercialmente disponíveis; halogenoacetamido aminas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e 8 ou pode ser preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (ii): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000296] Bromo e iodo-acetatos de N-succinimidila são comercialmente disponíveis; as diaminas monoprotegidas com um grupo Boc são comercialmente disponíveis para n=1 a 10.

[000297]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento peptídico entre Boc-L-aminoácido- ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): acoplamento peptídico com aminas de PEG de halogenoacetamido; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC e HOBt e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000298] L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; Ésteres de NHS de L-aminoácidos protegidos por Boc são comercialmente disponíveis; halogenoacetamido aminas são comercialmente disponíveis para n=2 a 4 e 8 ou pode ser preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (ii): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000299] Bromo e iodo-acetatos de N-succinimidila são comercialmente disponíveis; as diaminas de PEG monoprotegidas com um grupo Boc são comercialmente disponíveis para i=1 a 9.

[000300]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento peptídico ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): acoplamento peptídico com aminas de halogenoacetamido; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC e HOBt e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000301] L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; Ésteres de NHS de L-aminoácidos protegidos por Boc são comercialmente disponíveis; aminas de halogenoacetamido podem ser preparadas de acordo com o esquema abaixo: Etapa (ii): acoplamento de peptídeo; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como uma mistura de DCM/CH3CN; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000302] Ésteres de NHS de halogenoacetamidas podem ser preparadas como descrito para o precursor ligante LP11; as diaminas monoprotegidas com um grupo Boc são comercialmente disponíveis para n=1 a 10.

[000303]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento peptídico entre Boc-L-aminoácido- ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): acoplamento peptídico com azido aminas; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC e HOBt e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000304] L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; Ésteres de NHS de L-aminoácidos protegidos por Boc são comercialmente disponí-veis; azido aminas são comercialmente disponíveis para n=2 a 8 e 10.

[000305] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento peptídico entre Boc-L-aminoácido- ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): acoplamento peptídico com aminas de de PEG de azido; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC e HOBt e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000306] L-aminoácidos são comercialmente disponíveis; Ésteres de NHS de L-aminoácidos protegidos por Boc são comercialmente disponíveis; para ALQ=CH2CH2, aminas de PEG de azido são comercialmente disponíveis para i=1 a 8 e 10, para ALQ#CH2CH2, aminas de PEG de azido podem ser preparadas de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): ativação do álcool como um mesilato; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como, por exemplo, DCM por tratamento com cloreto de metanossulfonila na presença de uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): substituição do mesilato por um grupo azido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de acetona/H2O por tratamento com azida de sódio; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000307] Os álcoois de amino de PEG de partida preparados como descrito para o precursor ligante LP90.

[000308]preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento peptídico entre Boc-L-aminoácido- ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): acoplamento peptídico com aminas de ciclo-octina; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC e HOBt e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000309] As aminas de ciclo-octina são comercialmente disponíveis para n=1, 2, 3 e 5.

[000310] preparado de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): acoplamento peptídico entre Boc-L-aminoácido- ONHS e L-aminoácido; a reação é realizada em um solvente polar tal como uma mistura de DME/THF/H2O na presença de uma base tal como, por exemplo, bicarbonato de sódio; Etapa (ii): acoplamento peptídico com aminas de PEG de ciclo- octina; a reação é realizada em um solvente polar tal como CH3CN na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, DCC e HOBt e uma base tal como, por exemplo, DIEA; Etapa (iii): desproteção do grupo Boc usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano).

[000311] As aminas de PEG de ciclo-octina podem ser preparadas de acordo com o esquema abaixo: Etapa (i): ativação do álcool como um mesilato; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como, por exemplo, DCM por tratamento com cloreto de metanossulfonila na presença de uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (ii): substituição nucleofílica; a reação é realizada em um solvente aprótico polar tal como, por exemplo, DMF na presença de uma base tal como hidreto de sódio; Etapa (iii): desproteção usando uma solução de ácido hidroclórico (por exemplo, solução em dioxano) ou de ácido trifluoroacético; Etapa (iv): proteção do amina com um grupo Boc; a reação é realizada em um solvente polar tal como, por exemplo, DCM, por tratamento com Boc2O na presença de uma base tal como, por exemplo, TEA; Etapa (v): acoplamento peptídico; a reação é realizada em um solvente polar tal como, por exemplo, DCM, na presença de reagente de acoplamento tal como, por exemplo, HOBt e EDC.

[000312] Os álcois de amino de ALQ de partida são comercialmente disponíveis para n=1 a 10; ciclo-octinas são comercialmente disponíveis para n=1, 2, 3 e 5. Legendas da tabela l: ou - Alq. 1 Os exemplos são fornecidos para um composto de criptoficina, porém podem aplicar-se a qualquer composto de criptoficina de fórmula (I), especialmente D1-D19. 2 Na Tabela I, L é fornecido aqui na posição para, porém é possível obter compostos de uma maneira similar com L em uma posição orto ou meta.

Processo para preparação dos conjugados de fórmula (III)

[000313] Os conjugados da presente invenção podem ser obtidos por meio do processo que compreende as etapas que consistem em: (i) colocar em contato e deixar reagir uma solução aquosa opcionalmente tamponada de um anticorpo, opcionalmente primeiro modificada por meio de um agente de modificação, e uma solução da carga útil de criptoficina de fórmula (II), o grupo químico RCG1 do composto de fórmula (II) sendo reativo aos grupos químicos RCG2 presentes no anticorpo, especialmente aos grupos amino presentes nos anticorpos, os referidos grupos químicos RCG2 foram introduzidos, onde apropriado, pelo agente de modificação, a fim de ligar o composto de fórmula (II) ao composto por formação de uma ligação covalente; (ii) e em seguida, separar opcionalmente o conjugado formado na etapa (i) da carga útil de criptoficina e/ou do anticorpo não reagido e/ou de quaisquer agregados formados.

[000314] De acordo com uma variante e mais particularmente, na etapa (ii) o conjugado de etapa (i) é separado da carga útil de criptoficina não reagida e de quaisquer agregados formados, e qualquer anticorpo não reagido é deixado na solução.

[000315] A função da colocação em contato é reagir os grupos químicos RCG1 e RCG2 a fim de garantir a ligação da carga útil de criptoficina ao composto por formação de uma ligação covalente; preferivelmente, quando RCG1 representa -C(=O)-ZaRa, a reação preferivelmente ocorre nas funções amino do anticorpo, especialmente os grupos e-amino suportados pelas cadeias laterais de resíduos de lisina (Lys) anticorpo e os grupos a-amino de aminoácidos de terminal N de cadeias pesadas e leves. Um conjugado da seguinte fórmula é obtido neste caso: mAb- [NH-C(=O)-L*-Cripto]d com L* = fragmento de um ligante L compreendendo RCG1=-C(=O)- ZaRa e de modo que L= - L*C(=O)- ZaRa e d representando a relação fármaco-para-anticorpo ou DAR; quando RCG1 representa -Cl ou um grupo maleimido ou haloacetamido, o anticorpo pode compreender grupos químicos de tiol; quando RCG1 representa um grupo azido, o anticorpo pode compreender uma porção -C=CH ou uma ligação tripla ativada, tal como um ciclo-octina; quando RCG1 representa -NH2, a reação pode ocorrer em função amida do anticorpo usando uma catálise enzimática, especialmente os grupos amida suportados pelas cadeias laterais de resíduos de glutamina (Gln) de um anticorpo. Um conjugado da seguinte fórmula é obtido neste caso: mAb- [C(=O)-NH-L*-Cripto]d com L* = fragmento de um ligante L compreendendo RCG1=-NH2 e de modo que L= -L*NH2 e d representando a relação de fármaco-para-anticorpo ou DAR; quando RCG1 representa -C=CH ou um C=C ativado tal como uma porção ciclo-octina, o anticorpo pode compreender grupos azido.

[000316] O termo "agregados" significa associações que podem se formar entre dois ou mais anticorpos, os anticorpos possivelmente foram modificados por conjugação. Os agregados são responsáveis por formar a influência de uma ampla variedade de parâmetros, tais como uma concentração elevada de anticorpo na solução, o pH da solução, elevadas forças de cisalhamento, o número de fármacos enxertados e e sua natureza hidrofóbica, a temperatura (veja as referências citadas na introdução de J. Membrane Sci. 2008, 318, 311-316), a influência deles, entretanto, não tendo sido claramente elucidada. No caso de proteínas ou anticorpos, referência pode ser feita ao AAPS Journal, "Protein Aggregation and Bioprocessing" 2006, 8(3), E572-E579. O teor de agregado pode ser determinado por meio de técnicas conhecidas, tal como SEC (veja a este respeito, Analytical Biochemistry 1993, 212 (2), 469-480).

[000317] A solução aquosa do anticorpo pode ser tamponada com tampões tais como, por exemplo, fosfato de potássio ou HEPES ou uma mistura de tampões tal como o tampão A descrito posteriormente. O tampão depende da natureza do anticorpo. A carga útil de criptoficina é dissolvida em um solvente polar orgânico tal como, por exemplo, DMSO ou DMA.

[000318] A reação ocorre em uma temperatura geralmente dentre 20°C e 40°C. O tempo de reação pode variar entre 1 e 24 horas. A reação entre o anticorpo e a carga útil de criptoficina pode ser monitorada por SEC com um detector refractométrico e/ou de ultravioleta e/ou EMAR a fim de determinar seu grau de progresso. Se o grau de substituição for insuficiente, a reação poderá ser durante mais tempo e/ou o composto de criptoficina poderá ser adicionado. Referência pode ser feita à seção de exemplo para maiores detalhes, considerando as condições particulares. Modalidades particulares são descritas nos Exemplos 3, 7, 10, 14, 20 e 23.

[000319] Uma pessoa versada na técnica tem à sua disposição várias técnicas cromatográficas para a separação de etapa (ii): o conjugado pode ser purificado, por exemplo, por cromatografia de exclusão estérica (SEC), por cromatografia de adsorção (por exemplo, permuta de íon, IEC), por cromatografia de interação hidrofóbica (HIC), por cromatografia de afinidade, por cromatografia em suportes mistos tais como hidroxiapatita cerâmica, ou por HPLC. Purificação por diálise ou diafiltragem pode também ser usada.

[000320] Depois da etapa (i) ou (ii), a solução do conjugado pode passar por uma etapa de ultrafiltragem e/ou diafiltragem (iii). Depois destas etapas, o conjugado em solução aquosa é, desse modo, obtido.

Anticorpo

[000321] O anticorpo pode ser um anticorpo monoclonal selecionado do grupo consistindo em um anticorpo de murino, quimérico, humanizado e humano.

[000322] Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo monoes- pecífico, isto é, um anticorpo que especificamente se liga a um alvo simples, el epode ser um anticorpo multiespecífico.

[000323] Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo de IgG, por exemplo, um anticorpo de IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4.

[000324] O anticorpo de acordo com a invenção especificamente se liga a um alvo, desse modo direcionando o composto biologicamente ativo como um composto citotóxico para o referido alvo, como usado aqui, "especificamente liga" ou "especificamente se liga a" ou "liga-se a" ou similares, significa que um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo forma um complexo com um antígeno que é relativamente estável sob condições fisiológicas. A ligação específica pode ser caracterizada por uma constante de dissociação de equilíbrio (KD) de pelo menos cerca de 1x10-8 M ou menos (por exemplo, uma KD menor significa uma ligação mais estreita). Métodos para determinar se duas moléculas especificamente se ligam são bem conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, diálise de equilíbrio, ressonância plasmônica de superfície, e similares. Como descrito aqui, anticorpos foram caracterizados, por exemplo, por sua ligação específica ao alvo e/ou antígeno alvo usando ressonância plasmônica de superfície, por exemplo, BIACORE™.

[000325] O alvo tipicamente corresponde a uma proteína expressa na superfície celular, por exemplo, uma proteína expressa na superfície de células de tumor.

[000326] Em uma modalidade, o alvo é o receptor de EphA2. O receptor de EphA2 é um receptor de Ephrin, e é também referido como "receptor de EPH A2" ou "Proteína Tirosina Cinase Receptora de Célula Epitelial" (veja, por exemplo, OMIM Entry *176946, disponível no website omim.org/ entry/176946, versão atualizada em 21 de Julho de 2016). O anticorpo que especificamente se liga ao receptor de EphA2 pode, por exemplo, corresponder a um dos anticorpos descritos no WO2008/010101 ou WO2011/039724.

[000327] Em outra modalidade, o alvo é CD19. CD19 é uma molécula de superfície celular especificamente expressa por linfócitos B e células dendríticas foliculares do sistema hematopoietico, e é também referida como "CD19 de antígeno de linfócito B" (veja, por exemplo, OMIM Entry *107265, disponível no website mundial omim.org/entry/107265, última versão atualizada em 11 de Maio de 2015). O anticorpo que especificamente se liga ao CD19 pode, por exemplo, corresponder a Coltuximabe, isto é, a parte de anticorpo (porção) de Coltuximabe Ravtansina.

[000328] O anticorpo pode opcionalmente ser modificado com um agente de modificação a fim de promover a ligação da carga útil de criptoficina como anteriormente descrito. O anticorpo pode especialmente ser monoclonal, policlonal ou multiespecífico. Ele pode também ser um fragmento de anticorpo. Ele pode também ser um anticorpo de murino, humano, humanizado ou quimérico. O anticorpo usado nos exemplos da presente invenção é hu2H11_R3574, um anticorpo de antagonista contra o receptor de EphA2. A sequência de hu2H11_R3574 é descrita no WO2011/039724 (SEQ ID NO: 18 para a cadeia pesada e SEQ ID NO: 16 para a cadeia leve).

Conjugado

[000329] Um conjugado geralmente compreende cerca de 1 a 10 compostos de criptoficina covalentemente ligados ao anticorpo (isto é, o grau de enxerto ou relação de fármaco-para-anticorpo" ou "DAR"). Este número varia como uma função da natureza do anticorpo e do composto de criptoficina, e também das condições de operação usadas no processo de conjugação (por exemplo, o número de equivalentes de composto de criptoficina com relação ao anticorpo, um tempo de reação, a natureza do solvente e de qualquer cossolvente). A colocação do anticorpo e do composto de criptoficina em contato induz a uma mistura compreendendo diversos conjugados que são individualmente distinguidos uns dos outros por diferentes DARs; opcionalmente agregados. A DAR que é determinada na solução final, desse modo corresponde a uma DAR média. A DAR pode ser calculada a partir da deconvolução do espectro de SEC-EMAR do conjugado. A DAR (EMAR) é preferivelmente maior do que 0,5, mais particularmente entre 1 e 10 e ainda mais particularmente entre 2 e 7.

[000330] O conjugado pode ser usado como um agente anticâncer. Devido à presença do anticorpo, o conjugado é altamente seletivo com relação às células de tumor e não às células saudáveis. Isto torna possível direcionar o composto de criptoficina em um ambiente similar a ele ou diretamente nele; (a este respeito, veja as seguintes publicações que descrevem o uso de conjugados de anticorpo monoclonal em tratamento de câncer: "Antibody-drug conjugates for cancer therapy" Carter P.J., et al., Cancer J. 2008, 14, 154-169; "Targeted cancer therapy: conferring specificity a cytotoxic drugs" Chari R., Acc. Chem. Res. 2008, 41, 98-107). É possível tratar cânceres sólidos ou líquidos. O conjugado pode ser usado sozinho ou em combinação com pelo menos um outro agente anticâncer.

[000331] O conjugado é formulado na forma de uma solução aquosa tamponade em uma concentração de gentalmente entre 1 e 10 mg/mL. Esta solução pode ser injetada em forma de perfusão de per si ou pode ser rediluída para formar uma solução de perfusão.

Exemplos

[000332] Os exemplos que seguem descrevem a preparação de certos compostos de acordo com a invenção. Estes exemplos não são limitantes, e meramente ilustram a presente invenção.

Métodos analíticos usados Cromatografia Líquida de Pressão Elevada - Espectrometria de Massa (LCMS) Método A1

[000333] Os espectros foram obtidos em um sistema Waters UPLC- SQD em um modo positivo e/ou negativo de eletrovaporização (ES+/-) usando detecção de ELSD e UV (210-400 nm). As condições cromatográficas foram as seguintes: coluna: ACQUITY BEH C18 - 1,7 µm - 2,1 x 50 mm; solventes: A: H2O (ácido fórmico a 0,1%), B: CH3CN (ácido fórmico a 0,1%); temperatura de coluna: 50°C; taxa de fluxo: 0,8 mL/min; gradiente (2.5 min): de 5 a 100% de B em 1,8 min; 2,4 min: 100% de B; 2,45 min: de 100 a 5% de B em 0,05 min.

Método A2

[000334] Os espectros foram obtidos em um sistema Waters XeVo- QTof em modo positivo de eletrovaporização (ES+) usando detecção de ELSD e UV (210-400 nm). As condições cromatográficas foram as seguintes: coluna: ACQUITY BEH C18 - 1,7 µm - 2,1 x 100 mm; solventes: A: H2O (ácido fórmico a 0,1%), B: CH3CN (ácido fórmico a 0,1%); temperatura de coluna: 70°C; taxa de fluxo: 0.55 mL/min; gradiente (11 min): de 5 a 97% de B em 8,3 min; 8,6 min: 97% de B; 9 min: de 97 a 5% de B em 0,7 min e 5% de B durante 2 min. Método A3

[000335] Os espectros foram obtidos em um sistema Waters XeVo- QTof em modo positivo de eletrovaporização (ES+). As condições cromatográficas foram as seguintes: coluna: ACQUITY BEH C18 - 1,7 µm - 2,1 x 100 mm; solventes: A: H2O (ácido fórmico a 0,1%), B: CH3CN (ácido fórmico a 0,1%); temperatura de coluna: 45°C; taxa de fluxo: 0,6 mL/min; gradiente (5.3 min): 5% de B durante 0,3 min; de 5 a 100% de B em 3,7 min; 4,6 min: 100% de B; 5,3 min 5% de B.

Método A4

[000336] Os espectros foram obtidos em um sistema Waters UPLC- SQD em um modo positivo e/ou negativo de eletrovaporização (ES+/-) usando detecção de ELSD e UV (210-400 nm). As condições cromatográficas foram as seguintes: coluna: ACQUITY BEH C18 - 1,7 µm - 2,1 x 50 mm; solventes: A: H2O (ácido fórmico a 0,1%), B: CH3CN (ácido fórmico a 0,1%); temperatura de coluna: 45°C; taxa de fluxo: 0,8 mL/min; gradiente (10 min): de 5 a 100% de B em 8,6 min; 9,6 min: 100% de B; 9,8 min: 5% de B.

Método A5

[000337] Os espectros foram obtidos em um sistema Waters UPLC- SQD em um modo positivo e/ou negativo de eletrovaporização (ES+/-) usando detecção de ELSD e UV (210-400 nm). As condições cromatográficas foram as seguintes: coluna: ACQUITY CSH C18 - 1,7 µm - 2,1 x 50 mm; solventes: A: H2O (ácido fórmico a 0,1%), B: CH3CN (ácido fórmico a 0,1%); temperatura de coluna: 40°C; taxa de fluxo: 0,85 mL/min; gradiente (2.5 min): de 5 a 100% de B em 1,8 min; 2,4 min: 100% de B; 2,45 min: de 100 a 5% de B em 0,05 min.

1H Ressonância Magnética Nuclear (RMN)

[000338] Os espectros de 1H RMN foram adquiridos em um esctrômetro Bruker Avance, de modelo DRX-300, DRX-400 ou DRX- 500. Os desvios químicos (d) são fornecidos em ppm.

Cromatografia por exclusão de tamanho - Espectrometria de massa de alta resolução (SEC-EMAR)

[000339] A análise cromatográfica foi realizada em uma máquina Agilent HP1100 e uma coluna Waters BEH SEC 200 1,7 µm (2,1 x 150 mm) a 30°C com uma taxa de fluxo de 0,5 mL/min e uma eluição isocrática de (A) formiato de amônio a 25 mM + ácido fórmico a 1%/(B) CH3CN + ácido fórmico a 0,1% 70/30 durante 15 minutos. A espectrometria de massa foi realizada em uma máquina Waters QTOF- II com ionização por eletrovaporização em modo positivo (ES+). Os espectros de massa foram deconvoluídos com o software Waters MaxEnt1.

Cromatografia por Exclusão de Tamanho Analítica (SEC)

[000340] A análise foi realizada em um sistema Waters Alliance HPLC ou um sistema Hitachi Lachrom equipado com um detector de arranjo de fotodiodo e uma coluna Tosoh Bioscience TSKgel G3000 SWXL 5 µm (7.8 x 300 mm) com uma taxa de fluxo de 0,5 mL/min e uma eluição isocrática de 30 minutos com um tampão a pH 7 contendo 0,2 M de KCl, 0,052 M de KH2PO4, 0,107 M de K2HPO4 e 20% por volume de isopropanol. n • Tampão A (pH 6,5): NaCl (50 mM), fosfato de potássio (50 mM), EDTA (2 mM) • Tampão B (pH 6,5): NaCl (140 mM), fosfato de potássio e sódio (9,6 mM) • PBS (pH 7,4): KH2PO4 (1,06 mM), NaCl (155,17 mM), Na2HPO4-7H2O (2,97 mM) • DPBS: KCl (2,67 mM), KH2PO4(1,47 mM), NaCl (136,9 mM), Na2HPO4 (8,10 mM) ajustdo a pH 6,5 com HCl de 5N (1 mL por 1000 mL de tampão)

Método geral para a preparação de conjugado de anticorpo -fármaco (CAF)

[000341] Uma solução de anticorpo em um tampão aquoso composto de uma mistura de 96:4 de tampão A e 1 N de HEPES foi tratada com um excesso de uma solução em aproximadamente 10 mM de carga útil de criptoficina em DMA, de modo que a concentração de anticorpo final seja de 3 mg/mL e a porcentagem de DMA no tampão aquoso seja de 20%. Após agitar durante 2 horas, a mistura foi analisada por SEC-EMAR para determinar a DAR na população de anticorpos monoméricos. Se a DAR fosse constatada insuficiente, a mistura seria tratada com outro excesso (1 a 5 equivalentes) de solução de criptoficina em DMA durante 2 adicionais em temperatura ambiente sob agitação. A mistura foi purificada por filtragem por gel usando uma matriz Superdex 200 pg (coluna de dessalinização HiLoad 16/60 ou 26/60, GEHealthcare) pré- equilibrada em tampão aquoso pH 6,5 (tampão B ou DPBS) contendo 10 a 20% de NMP. As frações contendo o anticorpo de conjugado monomérico foram agrupadas e concentradas em Amicon Ultra-15 (membrana de 10k ou 50k Ultracel, Millipore) para uma concentração dentre 2 e 5 mg/mL. Uma permuta de tampão ou uma diluição no tampão apropriado foi então realizada para formular o conjugado no tampão. No caso de uma permuta de tampão, ela foi realizada por filtragem por gel usando uma matriz SephadexTM G25 (colunas de dessalinização NAP-5, NAP-10, NAP-25/PD-10 ou Hiprep 26/10, GEHealthcare) pré-equilibrada com o tampão aquoso final cuja composição e pH são ajustados para cada conjugado. O conjugado foi finalmente filtrado através de uma unidade de filtro Steriflip® (membrana de 0,22 µm Durapore® PVDF, Millipore). O conjugado final foi ensaiado por espectrometria de UV ou SEC-HPLC a fim de medir a concentração de conjugado, por SEC-HPLC a fim de determinar a pureza monomérica e por SEC-EMAR a fim de determinar a DAR a partir da deconvolução do espectro de massa do conjugado. Síntese de fragmento A: 8-(4-formilfenil)-5-hidróxi-6-metilocta-2,7- dienoato de (2E,5S,6R,7E)-terc-butila Composto 1: 5-hidróxi-7-((4-metoxibenzil)óxi)-6-metil-hept-2- enoato de (2E,5S,6R)-terc-butila

[000342] Sob argônio, a uma solução de (2R,3S)-1- [(4- metoxifenil)metóxi] -2-metil-5-hexen-3-ol ou álcool de Sakurai (número de CAS [203926-55-0], 100 g, 399,5 mmol) em DCM (350 mL) foram adicionados acrilato de terc-butila (354,7 mL, 2,435 mol) e catalisador Grubbs (4,849 g, 2,435 mol). Após agitação durante 17 h em temperatura ambiente, a mistura reacional foi filtrada em 230 g de sílica e eluída com uma mistura de heptano/AcOEt (50/50, 6 x 300 mL). Após concentração, o resíduo foi purificado por cromatografia rápida em 1,2 kg de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/EtOAc) para fornecer 140,8 g de um óleo marrom. O óleo foi dissolvido em DCM anidroso (550 mL), 10 g de resina quadraPureTM TU foram adicionados para remover o excesso de catalisador. A mistura foi agitada durante 3 h a 35°C. A resina foi filtrada e lavada com DCM, o filtrado foi concentrado e secado em vácuo para fornecer 135,75 g de composto 1 como um óleo marrom (97%).

[000343] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,85 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,42 (s, 9 H); 1,72 (m, 1 H); 2,18 (m, 1 H); 2,30 (m, 1 H); 3,24 (dd, J = 7,0 e 9,3 Hz, 1 H); 3,46 (dd, J = 7,7 e 9,3 Hz, 1 H); 3,49 (m, 1 H); 3,73 (s, 3 H); 4,35 (s, 2 H); 4,65 (d, J = 5,8 Hz, 1 H); 5,76 (td, J = 1,5 e 15,6 Hz, 1 H); 6,83 (td, J = 7,4 e 15,6 Hz, 1 H); 6,90 (d, J = 8,8 Hz, 2 H); 7,23 (d, J = 8,8 Hz, 2 H). Composto 2: 5,7-di-hidróxi-6-metil-hept-2-enoato de (2E,5S, 6R)-terc-butila

[000344] A uma solução de composto 1 em CH3CN (910 mL), H2O (90 mL) foi adicionado e a mistura foi resfriada a 12°C antes de adicionar em 25 min uma solução de CAN (196,7 g, 358,9 mmol) em H2O (300 mL). A agitação foi continuada durante 1 h em temperatura ambiente. CAN adicional (18,83 g, 34,36 mmol) dissolvido em uma mistura de CH3CN (70 mL) e H2O (30 mL) foi adicionado e agitado durante 1 h em temperatura ambiente para concluir a reação. A mistura foi extinta com NaCl até a saturação da camada aquosa, em seguida MTBE (400 mL) foi adicionado. Após decantação, a camada aquosa foi extraída com MTBE (2 x 80 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma mistura de 3:1 de 5% de NaHCO3/H2O (3 x 200 mL), salmoura saturada (2 x 130 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas. A camada aquosa foi acidificada com HCl a 2N até pH 4, em seguida saturada com NaCl e extraída com MTBE (2 x 150 mL). Esta segunda camada orgânica foi lavada com 5% de NaHCO3 (60 mL), salmoura saturada (60 mL), secada sobre MgSO4, concentrada e combinada com a primeira camada orgânica para fornecer um óleo marrom alaranjado.

[000345] A mistura foi dissolvida em MeTHF (300 mL), em seguida foram adicionados 1,2-etanoditiol (22 mL, 0,260 mol) e p-TsOH (1,651 g, 8,590 mmol). Após agitação a 60°C durante 5 h, MTBE (200 mL) foi adicionado à mistura reacional e ela foi lavada com 5% de NaHCO3 (2 x 120 mL), salmoura saturada (120 mL), secada sobre MgSO4, filtrada, concentrada em vácuo e purificada por cromatografia rápida em 520 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MTBE) para fornecer 29,48 g de composto 2 como um óleo amarelo (75%). Composto 3: 6-metil-5,7-bis((trietilsilil)óxi)hept-2-enoato de (2E,5S,6R)-terc-butila

[000346] Sob argônio, a uma solução de composto 2 (39,38 g, 0,171 mol) em DCM anidroso (500 mL) foi adicionado imidazole (51,540 g, 0,749 mol). A mistura amarela foi resfriada a 0°C, em seguida foi adicionado trietilclorosilano (63,99 mL, 0,374 mol) e a solução foi deixada aquecer para temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi extinta com NH4Cl saturado (400 mL), MTBE (300 mL) e gelo. O pH foi ajustado a 4 com NaHSO4 a 2M, as camadas foram separadas após agitação vigorosa. A camada aquosa foi extraída com MTBE (200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NH4Cl parcialmente saturado (2 x 250 mL), tampão de fosfato pH 7 (150 mL), salmoura saturada (150 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por cromatografia rápida em 490 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/Et2O) para fornecer 74,52 g de composto 3 como um óleo amarelo claro (95%). Composto 4: 6-metil-7-oxo-5-((trietilsilil)óxi)hept-2-enoato de (2E,5S,6S)-terc-butila

[000347] Sob argônio, a uma solução de DMSO (102,400 mL, 1,427 mol) em DCM (300 mL) foi adicionado gota a gota at -75°C cloreto de oxalila (63 mL, 0,719 mol) em 1 h e a agitação foi continuada durante 15 min antes da adição de, a -75°C, uma solução de composto 3 em DCM (150 mL) enquanto mantendo a temperatura abaixo de -70°C. A mistura reacional foi deixada aquecer para -40°C e a agitação continuou durante 2 h. A mistura reacional foi resfriada novamente a -75°C, em seguida DIEA (425 mL, 2,432 mol) foi adicionado em 75 minutos, enquanto mantendo a temperatura abaixo de -65°C. A mistura reacional foi deixada aquecer para temperatura ambiente e em seguida extinta com MTBE (500 mL), gelo, NH4Cl saturado (200 mL) e 2M de NaHSO4 para alcançar o pH 4. As camadas foram separadas após agitação vigorosa. A camada aquosa foi extraída com MTBE (200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NH4Cl (3 x 300 mL), tampão de fosfato pH 7 (300 mL), salmoura saturada (300 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por cromatografia rápida em 1,25 kg de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/Et2O) para fornecer 51,74 g de composto 4 como um óleo laranja (93%). Composto 5: 5-hidróxi-8-(4-(hidroximetil)fenil)-6-metilocta-2,7- dienoato de (2E,5S,6R,7E)-terc-butila

[000348] Sob argônio, a uma suspensão de brometo de fosfônio (síntese descrita no WO2011/001052, 147 g, 0,237 mol) em THF anidroso (1,5 L) foi adicionada a -50°C uma solução a 2,5 M de n-BuLi em hexano (90 mL, 0,225 mol). A temperatura foi deixada aquecer para -40°C e a agitação foi continuada durante 15 min. Após aquecer para temperatura ambiente, a mistura vermelha foi agitada durante 1 h. O meio de reação foi resfriado a -70°C antes da adição de uma solução de composto 4 (51,63 g, 126,6 mmol) em THF (200 mL) enquanto mantendo a temperatura abaixo de -65°C. Quando a adição foi concluída, a mistura reacional foi deixada aquecer para temperatura ambiente e a agitação foi continuada durante a noite. A mistura reacional foi filtrada para remover o insolúvel que foi lavado com MTBE (500 mL). O filtrado foi parcialmente concentrado a 42°C (1/3), em seguida extinto com gelo, NH4Cl (500 mL), MTBE (500 mL) e 2M de NaHSO4 para alcançar pH 4. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com MTBE (200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NH4Cl meio saturado (250 mL), tampão de fosfato pH 7 (250 mL), salmoura saturada (250 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e meio concentradas em vácuo até 250 mbar. A suspensão foi diluída com 50:50 heptano/MTBE (600 mL) resfriada com um banho gelado, filtrada e lavada com 50:50 heptano/MTBE. O filtrado foi concentrado em vácuo para fornecer 100,05 g como um óleo marrom.

[000349] O composto cru foi dissolvido em THF anidroso (320 mL), em seguida foi adicionado tri-hidrato de TBAF (90 g, 282,40 mmol) e a mistura reacional foi agitado durante 3 h. Após concentração em vácuo, o cru foi diluído com 10:1 de MTBE/THF (770 mL), lavado com um NH4Cl parcialmente saturado (3 x 200 mL), NaHSO4 a 1M (200 mL), tampão de fosfato pH 7 (200 mL), salmoura saturada (200 mL), secado sobre MgSO4, filtrado e concentrado. A camada aquosa foi extraída com MTBE. Após decantação, a camada orgânica foi lavada com tampão de fosfato pH 7 (30 mL), salmoura saturada (30 mL), secada sobre MgSO4 e filtrada. Após concentração, as camadas orgânicas combinadas foram purificadas por cromatografia rápida em 1,25 kg de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/Et2O) para fornecer 36,91 g de composto 5 como um óleo marrom avermelhado (88 %). Fragmento A: 8-(4-formilfenil)-5-hidróxi-6-metilocta-2,7- dienoato de (2E,5S,6R,7E)-terc-butila

[000350] Sob argônio, a uma solução de composto 5 (30,3 g, 91,7 mmol) em DCM anidroso (600 mL) foi adicionado, a 10°C, óxido de manganês (175 g, 3,013 mol) e a mistura reacional foi agitada durante 4 h a 35°C. O oxidante foi filtrada através de um tampão de celita e e lavada com acetone quente. O filtrado foi concentrado para fornecer 30,43 g de óleo vermelho-laranja.

[000351] Sob argônio, o óleo foi diluído com benzeno (800 mL) e refluxando na presença de AIBN (880 mg, 4,58 mmol), e tiofenol (2,81 mL, 27,51 mmol) durante 1 h. Mais AIBN (530 mg, 0,03 eq) e tiofenol (1,03 mL, 10,087 mmol) foram adicionados e o refluxo continuou durante mais 1 h. Mais AIBN (530 mg, 0,03 eq) e tiofenol (1,03 mL, 10,087 mmol) foram adicionados e o refluxo continuou durante 3 h. Mais AIBN (353 mg, 1,834 mmol) e tiofenol (468 µL, 4,58 mmol) foram adicionados e o refluxo continou durante 1 h. A conversão E/Z foi 92/8, 352,6 mg de AIBN foram adicionados e o refluxo continuou durante 1 h. A mistura reacional foi resfriada para temperatura ambiente e concentrado em vácuo para fornecer 28,03 g de fragmento A como um óleo laranja (92%) com uma relação de E/Z superior a 98/2. Síntese de fragmento B: ácido (R)-2-(( terc- butoxicarbonil)amino)-3-(3- cloro-4-metóxi-fenil)propanoico

[000352] A uma solução de (R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-(3- cloro-4-metoxifil)-propanoato de metila (número de CAS [162465-44-3], 30 g, 87,26 mmol) em THF (225 mL), foram adicionados H2O (30 mL) e mono-hidrato de LiOH (4,4 g, 104,85 mmol). O meio de reação foi agitado 2 horas em temperatura ambiente. Após este tempo, o meio de reação foi diluído com H2O(200 mL) em seguida acidificado a pH 2 com HCl a 5N (20 mL) e extraído por EtOAc (2 x 250 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com H2O (500 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo, diluídas com Et2O e concentradas em vácuo para fornecer 26,9 g de fragmento B como um sólido branco (94%).

[000353] RMN 1H (300 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 1,21 a 1,37 (m, 9 H); 2,74 (dd, J = 11,0 e 14,3 Hz, 1 H); 2,96 (dd, J = 5,0 e 14,3 Hz, 1 H); 3,81 (s, 3 H); 4,04 (m, 1 H); 6,99 a 7,09 (m, 2 H); 7,18 (dd, J = 2,3 e 8,7 Hz, 1 H); 7,29 (d, J = 2,3 Hz, 1 H); 12,60 (m amplo, 1 H). Síntese de fragmento C1: cloridrato de 3-amino-2,2-dimetilpropanoato de metila Composto 6: 3-(( terc- butoxicarbonil)amino)-2,2- dimetilpropanoato de metila

[000354] Sob argônio, a uma solução de ácido 3-( [(terc- butóxi)carbonil]amino)-2,2-dimetilpropanoico (número de CAS [18018102-6], 250 mg, 1,09 mmol) em DCM (6 mL) e MeOH (2 mL) foi adicionado, gota a gota a 0°C, (trimetilsilil)diazometano (819,86 µL, 1,64 mmol) até cor persistente amarela. Em seguida, AcOH foi adicionado até descoloração completa. A mistura reacional foi concentrada em vácuo em seguida diluída com H2Oe extraída com DCM twice. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada, secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo para fornecer 260 mg de composto 6 como um óleo incolor (quant.). Fragmento C1: cloridrato de 3-amino-2,2-dimetilpropanoato de metila

[000355] A uma solução de composto 6 (260 mg, 1,12 mmol) em 1,4- dioxano (10 mL) foi adicionado HCl a 4N em 1,4-dioxano (2,81 mL, 11,24 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite em seguida concentrada em vácuo para fornecer 200 mg de fragmento C1 (quant.). Síntese de fragmento C2: cloridrato de 3-amino-2,2-dimetilbutanoato de metila Composto 7: ácido 3-((terc-butoxicarbonil)amino)butanoico

[000356] A uma solução de ácido DL-3-aminobutírico (número de CAS [541-48-02], 18,72 g, 176,09 mmol) em H2O (96 mL) foram adicionados dicarbonato de di-terc-butila (39,62 g, 176,09 mmol) e NaOH (8,03 g, 200,74 mmol) em H2O(76 mL), em seguida álcool terc-butílico (132 mL). A mistura reacional foi agitada durante em temperatura ambiente durante a noite. Após este tempo, o meio de reação foi concentrado em vácuo, em seguida diluído com EtOAc (200 mL) e acidificado em pH 3 com HCl diluído. Após assentamento, a fase aquosa foi extraída com EtOAc (200 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e concentrada em vácuo para fornecer 34,5 g de composto 7 como um óleo incolor (82%).

[000357] RMN 1H (300 MHz, d em ppm, CDCl3-d1): 1,25 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,45 (s, 9 H); 2,55 (m, 2 H); 4,04 (m, 1 H); 4,93 (m amplo, 1 H); 8,41 (m amplo, 1 H). Composto 8: 3-((terc-butoxicarbonil)amino)butanoato de metila

[000358] Sob argônio, uma solução de composto 7 (10 g, 49.20 mmol) em tolueno (350 mL) e MeOH (100 mL) foi agitada durante a +5°C. Entre +5°C e +10°C, (trimetilsilil)diazometano (73,81 mL, 147,61 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura reacional foi agitada durante 3 h em seguida evaporada em vácuo para fornecer 10,8 g de composto 8 como um óleo amarelo claro (quant.).

[000359] RMN 1H (300 MHz, d em ppm, CDCl3-d1): 1,20 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,45 (s, 9 H); 2,50 (m, 2 H); 3,69 (s, 3 H); 4,03 (m, 1 H); 4,90 (m amplo, 1 H). Composto 9: 3-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilbutanoato de metila

[000360] Sob argônio, a uma solução de LDA (2M em THF, 25,32 mL, 50,63 mmol) em THF (48 mL) a -70°C foi adicionada gota a gota uma solução de composto 8 (5 g, 23,01 mmol) em THF (62 mL). A mistura reacional foi agitada durante 1 h a -75°C, em seguida iodometano (5,79 mL, 92,05 mmol) foi adicionado gota a gota a -70°C. A mistura reacional foi agitada durante 3 h a -75°C, em seguida em temperatura ambiente durante a noite. Após este tempo, uma solução aquosa de 20% de NH4Cl (100 mL) e Et2O (125 mL) foram adicionados. Após assentamento, a fase orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (80 mL), em seguida NaCl saturado (80 mL). As fases aquosas combinadas foram extraídas com Et2O (125 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo para fornecer 5,49 g de óleo cru. Cristalização com pentano (15 mL) forneceu 2,65 g de composto 9 após secagem em vácuo. A solução de pentano foi concentrada em vácuo e purificada por cromatografia rápida em 100 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/Et2O) para fornecer 1,98 g de composto 9. As duas bateladas foram agrupadas (87%) e usadas no estado em que se encontra na etapa seguinte. Composto 10: 3-(( terc- butoxicarbonil)amino)-2-,2- dimetilbutanoato de metila

[000361] Sob argônio, THF (46 mL) foi resfriado a -72°C, em seguida foram adicionados LDA (2M em THF, 22 mL, 44,0 mmol) e gota a gota a -72°C (+/- 2°C) uma solução de composto 9 (4,60 g, 19,89 mmol) em THF (64 mL). A mistura reacional foi agitada durante 1h15 a -75°C, em seguida iodometano (5 mL, 79,55 mmol) foi adicionado gota a gota a - 72°C (+/- 2°C). O meio de reação foi agitado 3 h a -75°C, em seguida durante a noite em temperatura ambiente. Após este tempo, uma solução aquosa de 20% de NH4Cl (50 mL) e Et2O (80 mL) foram adicionados. Após assentamento, a fase orgânica foi lavada com sat. NaHCO3 (50 mL) e salmoura saturada (50 mL). As fases aquosas combinadas foram extraída com Et2O (80 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e concentrada em vácuo para fornecer 6,5 g de óleo cru que foi purificado por cromatografia rápida em 200 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/iPr2O) para fornecer 1,9 g de composto 10 como um óleo incolor (39%).

[000362] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,92 (d, J = 7,1 Hz, 3 H); 1,02 (s, 3 H); 1,04 (s, 3 H); 1,48 (s, 9 H); 3,58 (s, 3 H); 3,88 (m, 1 H); 6,62 (d amplo, J = 10,5 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 146, m/z = 246 [M+H]+; tR = 1,2 min. Fragmento C2: cloridrato de 3-amino-2,2-dimetilbutanoato de metila

[000363] Em um frasco de fundo redondo, sob agitação magnética, composto 10 (0,3 g, 1,22 mmol) foi introduzido, seguido por 1,4- dioxano (5 mL) e HCl a 4N em 1,4-dioxano (5 mL). A mistura reacional foi agitada durante em temperatura ambiente durante a noite em seguida concentrada em vácuo. O sólido cru obtido foi precipitado em iPr2O (15 mL), filtrado e secado para fornecer 210 mg de fragmento C2 como um sólido branco (95%).

[000364] LCMS (A1): ES m/z = 146 [M+H]+; tR = 0,8 min. Síntese de fragmento C3: 2-(1-aminociclopropil)-2,2-dimetilpropanoato de etila

[000365] Sob argônio, a uma solução de 2-ciano-2-metilpropionato de etila (número de CAS [1572-98-1], 2 g, 13,88 mmol) em Et2O (48 mL) foi adicionado isopropóxido de titânio (IV) (4,63 g, 15,97 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 10 minutos em temperatura ambiente, em seguida resfriada a -5°C. Uma solução de brometo de etilmagnésio a 3M em Et2O (9,72 mL, 29,16 mmol) foi adicionado gota a gota a -5°C-0°C em 25 min, a mistura reacional foi em seguida agitada durante 40 minutos sem o banho de resfriamento. Neste momento, uma TLC mostrou que a reação foi concluída. O meio de reação foi resfriado a 0°C e eterato de dietila de trifluoreto de boro (3M em Et2O, 3,6 mL, 29,16 mmol) foi adicionado gota a gota a 0°C. A mistura reacional foi agitada durante 30 minutos sem o banho de resfriamento. Após este tempo, HCl a 1N foi adicionado a 0°C até o pH 1-2 (8 mL), em seguida NaOH a 2N até o pH 8 (28 mL), a mistura reacional foi extraída com EtOAc (3 x 150 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo para fornecer 2,4 g de um óleo cru amarelo que foi purificado por cromatografia rápida em 70 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 915 mg de fragmento C3 como um óleo amarelo claro (39%).

[000366] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, CDCl3-d1): 0,52 (m, 2 H); 0,70 (m, 2 H); 1,11 (s, 6 H); 1,27 (t, J = 7,2 Hz, 3 H); 1,64 (s amplo, 2 H); 4,18 (q, J = 7,2 Hz, 2 H). Síntese de fragmento C4: cloridrato de 3-amino-2-(hidroximetil)-2- metilpropanoato de metila Composto 11: ácido 3-(( terc- butoxicarbonil)amino)-2- metilpropanoico

[000367] A uma solução de ácido DL-3-aminoisobutírico (número de CAS [10569-72-9], 5 g, 47,52 mmol) em NaOH a 2 N (24,7 mL) foi adicionado gota a gota uma solução de Boc2O (11,73 g, 53,22 mmol) em THF (75 mL) enquanto mantendo a temperatura de meio de reação abaixo de 30°C com um banho de água fria. O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 18 horas, em seguida concentrado em vácuo, diluído em H2O (75 mL) e lavado com MTBE (3 x 150 mL). A fase aquosa foi acidificada a pH 3 pela adição de ácido cítrico a 100 g/L (150 mL) e extraída com EtOAc (3 x 150 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com H2O (3 x 45 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo para fornecer 9,4 g de composto 11 como um óleo incolor (97%).

[000368] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 1,01 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,38 (s, 9H); 2,48 (m, 1H); 2,91 (dt, J = 6,1, 6,5 e 13,5 Hz, 1H); 3,15 (ddd, J = 6,1, 7,4 e 13,5 Hz, 1H); 6,80 (t, J = 6,1 Hz, 1H); 12,15 (s amplo, 1H). Composto 12: 3-(( terc- butoxicarbonil)amino)-2- metilpropanoato de metila

[000369] A uma solução de composto 11 (9,4 g, 46,25 mmol) em acetona (300 mL) foram adicionados K2CO3 (16,14 g, 115,63 mmol) e CH3I (13,26 g, 92,5 mmol). Um meio de reação, uma suspensão amarela, foi agitado em temperatura ambiente durante 20 horas, em seguida filtrado sobre Clarcel. A massa, desse modo obtida, foi lavada com acetona, o filtrado concentrado em vácuo, diluído com DCM (100 mL), filtrado sobre Clarcel, a massa desse modo obtida foi lavada com DCM e o filtrado concentrado em vácuo para fornecer 9,4 g de composto 12 como um líquido amarelo (93%).

[000370] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 1,01 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,37 (s, 9H); 2,54 (m, 1H); 2,91 (dt, J = 6,2 e 13,5 Hz, 1H); 3,15 (ddd, J = 6,2, 6,9 e 13,5 Hz, 1H); 3,59 (s, 3H); 6,90 (t, J = 6,2 Hz, 1H). Composto 13: 3-(( terc-butoxicarbonil)amino)-2-(((4- metoxibenzil)óxi)metil)-2-metilpropanoato de metila

[000371] A uma solução de DIEA (3.2 mL, 22,45 mmol) em THF (10 mL) resfriada a -75°C foi adicionada gota a gota uma solução de 1,6 M de n-BuLi em THF (14 mL, 22,4 mmol). O meio de reação foi agitado a -75°C durante 20 min; em seguida foi adicionado gota a gota a -75°C uma solução de composto 12 (2 g, 9,21 mmol) em THF (16 mL) e a mistura reacional foi agitada durante a -75°C durante 10 min. Uma solução de 1-((clorometóxi)metil)-4-metoxibenzeno (1,72 g, 9,21 mmol) em THF (16 mL) foi em seguida rapidamente adicionada à mistura reacional e a agitação realizada a -25°C durante 4 horas. O meio de reação foi diluído com DCM (100 mL) antes da adição de uma solução de ácido cítrico a 100 g/L (50 mL), enquanto mantendo a temperatura abaixo de 5°C. O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 15 min. A fase orgânica foi lavada com uma solução de ácido cítrico a 100 g/L (2 x 50 mL), H2O (3 x 50 mL), secada sobre MgSO4, filtrada e concentrada em vácuo para fornecer 4,08 g de um óleo amarelo-laranja que foi purificado por cromatografia rápida em 150 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/EtOAc) para fornecer 2,05 g de composto 13 como um óleo incolor (60%).

[000372] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 1,03 (s, 3H); 1,37 (s, 9H); 3,14 (d, J = 6,8 Hz, 2H); 3,31 (d, J = 9,1 Hz, 1H); 3,48 (d, J = 9,1 Hz, 1H); 3,58 (s, 3H); 3,73 (s, 3H); 4,38 (s, 2H); 6,76 (t, J = 7,1 Hz, 1H); 6,90 (d, J = 8,9 Hz, 2H); 7,20 (m, 2H). Fragmento C4: cloridrato de 3-amino-2-(hidroximetil)-2- metilpropanoato de metila

[000373] O Composto 13 (1,5 g, 4,08 mmol) foi tratado com uma solução de HCl a 4 M em dioxano (24 mL) em temperatura ambiente durante 1 h. O meio de reação foi em seguida concentrado em vácuo e coevaporado na presença de tolueno para fornecer 794 mg de fragmento C4 como um óleo viscoso (quant.). Síntese de AD1: 5-(((S)-2-amino-4-metilpentanoil)óxi)-8-(4-(azidome- til)fenil)-6-metilocta-2,7-dienoato de (2E,5S,6R,7E)-terc- butila Composto 14: 5-(((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metóxi)carbonil) amino)-4-metilpentanoil)óxi)-8-(4-formilfenil)-6-metilocta-2,7-dienoato de (2E,5S,6R,7E)-terc-butila

[000374] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo sob agitação magnética, Fmoc-Leu-OH (4,9 g, 13,86 mmol) foi introduzido, seguido por fragmento A (3,5 g, 10,59 mmol) em DCM (100 mL) e DIEA (6,6 mL, 38,13 mmol). Em seguida, MNBA (5 g, 14,52 mmol) e DMAP (620 mg, 5,07 mmol) foram adicionados e a mistura reacional agitada durante a noite em temperatura ambiente. Após este tempo, o meio de reação foi lavado com H2O (100 mL) e salmoura saturada (100 mL). A fase orgânica foi secada sobre MgSO4, filtrada e concentrada em vácuo para fornecer 9,1 g de óleo laranja cru que foi purificado por cromatografia rápida em 400 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/AcOEt) para fornecer 5 g de composto 14 como um óleo amarelo claro (71%).

[000375] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,77 (d, J = 6,8 Hz, 6 H); 1,05 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,33 a 1,64 (m, 4 H); 1,38 (s, 9 H); 2,39 a 2,63 (m parcialmente mascarado, 2 H); 4,01 (m, 1 H); 4,13 a 4,31 (m, 3 H); 4,95 (m, 1 H); 5,81 (d, J = 15,9 Hz, 1 H); 6,37 (dd, J = 8,8 e 16,2 Hz, 1 H); 6,52 (d, J = 16,2 Hz, 1 H); 6,70 (td, J = 7,3 e 15,9 Hz, 1 H); 7,29 (t, J = 7,9 Hz, 2 H); 7,40 (t, J = 7,9 Hz, 2 H); 7,56 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,67 (dd, J = 7,9 Hz, 2 H); 7,74 a 7,82 (m, 3 H); 7,87 (d, J = 7,9 Hz, 2 H); 9,93 (s, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 666 [M+H]+, m/z = 689 [M+Na]+; tR = 1,92 min. Composto 15: 5-(((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metóxi)carbonil) amino)-4-metilpentanoil)óxi)-8-(4-(hidroximetil)fenil)-6-metilocta-2,7- dienoato de (2E,5S,6R,7E)-terc-butila

[000376] Sob argônio, a uma solução de composto 14 (5 g, 7,51 mmol) em MeTHF (60 mL), foi adicionado trimetoxiboro-hidreto de sódio (1,2 g, 8,91 mmol) portionwise. O meio de reação foi agitado 5 h em temperatura ambiente. Após este tempo, NH4Cl saturado (100 mL) e acetona (20 mL) foram adicionados. O meio de reação foi agitado 1 h em temperatura ambiente. Após assentamento, a fase orgânica foi lavada com H2O, em seguida com salmoura saturada (50 mL), secada sobre MgSO4, filtrada e concentrada em vácuo para fornecer 5,3 g de óleo amarelo cru que foram purificados por cromatografia rápida em 300 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/AcOEt) para fornecer 3,15 g de composto 15 como um semissólido branco (63%).

[000377] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,80 (m, 6 H); 1,02 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,35 a 1,66 (m, 4 H); 1,38 (s, 9 H); 2,35 a 2,56 (m parcialmente mascarado, 2 H); 4,02 (m, 1 H); 4,15 a 4,32 (m, 3 H); 4,43 (d, J = 5,5 Hz, 2 H); 4,92 (m, 1 H); 5,12 (t, J = 5,5 Hz, 1 H); 5,80 (d, J = 15,9 Hz, 1 H); 6,10 (dd, J = 8,8 et 16,2 Hz, 1 H); 6,39 (d, J = 16,2 Hz, 1 H); 6,69 (m, 1 H); 7,20 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,28 a 7,33 (m, 4 H); 7,41 (t, J = 7,9 Hz, 2 H); 7,69 (t, J = 7,9 Hz, 2 H); 7,80 (d, J = 8,2 Hz, 1 H); 7,88 (d, J = 7,9 Hz, 2 H). LCMS (A1): ES m/z = 668 [M+H]+; m/z = 690 [M+Na]+; m/z = 712 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,84 min. Composto 16: 5-(((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metóxi)carbonil) amino)-4-metilpentanoil)óxi)-8-(4-(azidometil)fenil)-6-metilocta-2,7-die- noato de (2E,5S,6R,7E)-terc-butila

[000378] Sob argônio, o composto 15 (3,15 g, 4,72 mmol) e DCM (50 mL) foram introduzidos em um frasco de fundo redondo. A 0°C, TEA (987 µL, 7,08 mmol) foi adicionado, seguido por cloreto de metanossulfonila (438 µL, 5,66 mmol), o meio de reação foi agitado durante 1 hora a 0°C e 13 horas em temperatura ambiente. Após este tempo, DCM (50 mL) e água (50 mL) foram adicionados. Após assentamento, a fase orgânica foi lavada com salmoura saturada (3 x 25 mL), secada sobre MgSO4 e concentrada em vácuo. Sob argônio, o produto cru, desse modo obtido, foi dissolvido em DMF (50 mL) e azida de sódio (644 mg, 9,91 mmol) foi adicionado. O meio de reação foi agitado durante a noite em temperatura ambiente. Após este tempo, DMF foi concentrado em vácuo e AcOEt foi adicionado. A mistura obtida foi lavada com HCl a 0,1N (25 mL), com NaHCO3 saturado (25 mL) e salmoura saturada (25 mL), secada sobre MgSO4, filtrada e concentrada em vácuo para fornecer 3,3 g de cru que foi purificado por cromatografia rápida em 200 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/AcOEt) para fornecer 1,8 g de composto 16 como uma goma incolor (55%) e 740 mg de composto AD1 (33%).

[000379] LCMS (A2): ES m/z = 715 [M+Na]+; tR = 8,95 min. Composto AD1: 5-(((S)-2-amino-4-metilpentanoil)óxi)-8-(4- (azidometil)fenil)-6-metilocta-2,7-dienoato de (2E,5S,6R,7E)-terc-butila

[000380] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo sob agitação magnética, composto 16 (1,8 g, 2,6 mmol) e DCM (50 mL) foram introduzida, seguido por piperidina (1,6 mL, 16,2 mmol). O meio de reação foi agitado durante a noite em temperatura ambiente. Após este tempo, ele foi lavado com HCl a 1N em seguida com NaHCO3 saturado, salmoura saturada, secado sobre MgSO4, filtrado e concentrado em vácuo para fornecer 2 g de cru que foi purificado por cromatografia rápida em 130 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/AcOEt) para fornecer 1,48 g de composto AD1 como um óleo amarelo claro (quant.).

[000381] LCMS (A3): ES m/z = 471 [M+H]+; tR = 2.65 min. Síntese de AD2: cloridrato de 5-(((S)-2-amino-4,4-dimetilpentanoil)óxi)- 8-(4-(hidroximetil)fenil)-6-metilocta-2,7-dienoato de (2E,5S,6R,7E)-terc- butila Composto 17: 5-(((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metóxi)carbonil) amino)-4,4-dimetilpentanoil)óxi)-8-(4-formilfenil)-6-metilocta-2,7- dienoato de (2E,5S,6R,7E)-terc-butila

[000382] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo a uma solução de composto A (1,633 g, 4,94 mmol) em DCM (60 mL) foram adicionados L-Fmoc-terc-Leu-OH (1,82 g, 4,94 mmol), DIEA (2,57 mL, 14.83 mmol), MNBA (1,70 g, 4,94 mmol) e DMAP (241,51 mg, 1,98 mmol). Após agitação durante 2 horas em temperatura ambiente, o meio de reação foi diluído com H2O (50 mL) e extraído duas vezes com DCM. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com ácido cítrico (2 x 50 mL), NaHCO3 saturado (50 mL) e salmoura saturada (50 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo para fornecer 3,24 g de composto 17 cru usados diretamente na redução subsequente (96%). Composto 18: 5-(((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metóxi)carbonil) amino)-4,4-dimetilpentanoil)óxi)-8-(4-(hidroximetil)fenil)-6-metilocta- 2,7-dienoato de (2E,5S,6R,7E)-terc-butila

[000383] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo a uma solução de composto 17 (3,24 g, 4,77 mmol) em MeTHF (60 mL) foi adicionado trimetoxiboro-hidreto de sódio (670,56 mg, 5.24 mmol) a 0°C. Após agitação durante 1 hora em temperatura ambiente, mais trimetoxiboro- hidreto de sódio (304 mg, 2,38 mmol) foi adicionado e agitado durante 2 horas. Em seguida, o meio de reação foi resfriado a 0°C, diluído com acetona (18 mL) e NH4Cl saturado (36 mL) e extraído com AcOEt. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada, secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por cromatografia rápida em 100 g de sílica gel (gradiente Heptano/AcOEt) para fornecer 2,61 g de composto 18 como um sólido amorfo incolor (80%).

[000384] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,80 (s, 9 H); 1,02 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,35 a 1,60 (m, 4 H); 1,38 (s, 9 H); 2,37 a 2,58 (m parcialmente mascarado, 2 H); 4,04 (m, 1 H); 4,16 a 4,33 (m, 3 H); 4,45 (d, J = 5,7 Hz, 2 H); 4,91 (m, 1 H); 5,12 (t, J = 5,7 Hz, 1 H); 5,80 (d, J = 16,0 Hz, 1 H); 6,10 (dd, J = 8,8 e 16,2 Hz, 1 H); 6,39 (d, J = 16,2 Hz, 1 H); 6,69 (m, 1 H); 7,21 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,25 a 7,33 (m, 4 H); 7,40 (t, J = 7,9 Hz, 2 H); 7,68 (t, J = 7,9 Hz, 2 H); 7,78 (d, J = 8,3 Hz, 1 H); 7,88 (d, J = 7,9 Hz, 2 H). LCMS (A1): ES m/z = 608; m/z = 682 [M+H]+; m/z = 726 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,85 min. Composto AD2: cloridrato de 5-(((S)-2-amino-4,4- dimetilpentanoil)óxi)-8-(4-(hidroximetil)fenil)-6-metilocta-2,7-dienoato de (2E,5S, 6R,7E)-terc-butila

[000385] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 18 (2,61 g, 3,83 mmol) em DCM (40 mL) foi adicionado piperidina (7,60 mL, 76,56 mmol) e o meio de reação foi agitado durante 1 hora em temperatura ambiente. Em seguida ele foi concentrado e extraído com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com HCl a 1N, H2O e salmoura saturada, secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi diluído com iPr2O (50 mL) e agitado durante 40 horas em temperatura ambiente. O produto cru foi filtrado, lavado com iPr2O e secado em vácuo 3 horas a 40°C para fornecer 1,706 g de composto AD2 como um sólido amorfo incolor (90%).

[000386] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,88 (s, 9 H); 1,10 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,39 a 1,49 (m, 1 H); 1,42 (s, 9 H); 1,75 (dd, J = 6,1 e 15,1 Hz, 1 H); 2,47 a 2,64 (m parcialmente mascarado, 2 H); 3,92 (t, J = 5,5 Hz, 1 H); 4,47 (d, J = 5,7 Hz, 2 H); 5,02 (m, 1 H); 5,15 (t, J = 5,7 Hz, 1 H); 5,90 (d, J = 15,9 Hz, 1 H); 6,15 (dd, J = 8,3 e 16,1 Hz, 1 H); 6,44 (d, J = 16,1 Hz, 1 H); 6,77 (td, J = 7,3 e 15,9 Hz, 1 H); 7,26 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,34 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 8,10 (m amplo, 3 H). LCMS (A1): ES m/z = 460 [M+H]+; tR = 0,95 min. Síntese de AD3: (2R,3S)-1-((4-metoxibenzil)óxi)-2-metil-hex-5-en-3-il (S)-2-amino-4,4-dimetilpentanoato Composto 19: (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metóxi)carbonil)amino) -4,4-dimetilpentanoato de (2R,3S)-1-((4-metoxibenzil)óxi)-2-metil-hex- 5-en-3-ila

[000387] A uma solução de álcool de Sakurai (1,02 g, 4,08 mmol) e ácido (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metóxi)carbonil)amino)-4,4- dimetilpentanoio (1,5 g, 4,08 mmol) em THF (15 mL) foram adicionados cloreto de 2,4,6-triclorobenzoíla (1,02 g, 4,08 mmol), gota a gota TEA (1,14 mL, 8,16 mmol) e DMAP (126,0 mg, 1,02 mmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 5 horas, em seguida resfriado usando um banho gelado antes da adição de HCl a 1N (60 mL), enquanto mantendo a temperatura abaixo de 10°C. O meio resultante foi agitado durante em temperatura ambiente durante 15 minutos e extraída com EtOAc (3 x 50 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com sat. NaHCO3 (15 mL), salmoura saturada (3 x 15 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por três cromatografias rápidas sucessivas em sílica gel (150 g, eluição por gradiente de heptano/EtOAc; 150 g e 20 g, eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 1,78 g de composto 19 como um óleo incolor (72%).

[000388] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,85 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 0,89 (s, 9H); 1,51 (dd, J = 2,8 e 14,3 Hz, 1H); 1,61 (dd, J = 9,0 e 14,3 Hz, 1H); 1,95 (m, 1H); 2,21 (m, 1H); 2,31 (m, 1H); 3,20 (dd, J = 6,5 e 9,6 Hz, 1H); 3,35 (m, 1H); 3,73 (s, 3H); 4,04 (m, 1H); 4,18 a 4,34 (m, 5H); 4,83 (m, 1H); 5,00 (dq, J = 2,1 e 10,3 Hz, 1H); 5,05 (dq, J = 2,1 e 7,3 Hz, 1H); 5,70 (m, 1H); 6,87 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 7,17 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 7,30 (m, 2H); 7,41 (t, J = 7,8 Hz, 2H); 7,70 (d, J = 7,8 Hz, 2H); 7,75 (d, J = 8,3 Hz, 1H); 7,90 (d, J = 7,8 Hz, 2H). LCMS (A5): ES m/z = 600 [M+H]+; m/z = 617 [M+H+NH3]+; m/z = 644 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,86 min. Composto AD3: (S)-2-amino-4,4-dimetilpentanoato de(2R,3S) -1-((4-metoxibenzil)óxi)-2-metil-hex-5-en-3-ila

[000389] A uma solução de composto 19 (1,78 g, 2,98 mmol) em DCM (63 mL) foi adicionada gota a gota piperidina (1,77 mL, 17,9 mmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 4 h, diluído com DCM (150 mL), lavado com HCl a 1 N (2 x 20 mL), NaHCO3 saturado (20 mL), salmoura saturada (3 x 20 mL), secado sobre MgSO4, filtrado, concentrado em vácuo e purificado por cromatografia rápida em 50 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/EtOAc) para fornecer 644 mg de composto AD3 como um óleo incolor (57%).

[000390] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,88 (s, 9H); 0,89 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,21 (dd, J = 6, 9 e 13,9 Hz, 1H); 1,56 (dd, J = 5,0 e 13,9 Hz, 1H); 1,66 ( s amplo, 2H); 2,00 (m, 1H); 2,24 (m, 1H); 2,33 (m, 1H); 3,26 (m, 2H); 3,38 (dd, J = 5,5 e 9,4Hz, 1H); 3,74 (s, 3H); 4,36 (s, 2H); 4,84 (m, 1H); 5,00 a 5,10 (m, 2H); 5,72 (m, 1H); 6,89 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 7,22 (d, J = 8,8 Hz, 2H). LCMS (A5): ES m/z = 378 [M+H]+; tR = 0,88 min. Síntese de BC1: ácido 3-((R)-2-(( terc- butoxicarbonil)amino)-3-(3-cloro- 4-metoxifenil)-propanamido)-2,2-dimetilpropanoico Composto 20: 3-((R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-(3-cloro- 4-metoxifenil)-propanamido)-2,2-dimetilpropanoato de metila

[000391] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo foram introduzidos o fragmento C1 (981,45 mg, 4,00 mmol) e DCM (50 mL), seguido por DIEA (1,84 mL, 10,92 mmol), fragmento B (1,2 g, 3,64 mmol), HOBt (563,40 mg, 4,00 mmol) e EDC (1,45 mL, 8,01 mmol). O meio de reação foi agitado durante a noite em temperatura ambiente. Após este tempo, o meio de reação foi diluído com H2O (30 mL) e extraído duas vezes com DCM. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada, secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo para fornecer 2,5 g de óleo cru que foi purificado por cromatografia rápida em 110 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/AcOEt) para fornecer 1,06 g de composto 20 como um merengue branco (66%).

[000392] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 1,06 (s, 3 H); 1,07 (s, 3 H); 1,30 (s, 9 H); 2,65 (dd, J = 11,6 e 13,9 Hz, 1 H); 2,82 (dd, J = 4,0 e 13,9 Hz, 1 H); 3,18 (dd, J = 6,1 e 13,4 Hz, 1 H); 3,29 (m parcialmente mascarado, 1 H); 3,60 (s, 3 H); 3,81 (s, 3 H); 4,11 (m, 1 H); 6,90 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,04 (d, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,19 (dd, J = 2,3 e 8,6 Hz, 1 H); 7,33 (s amplo, 1 H); 7,75 (t grande, J = 6,1 Hz, 1 H). Composto BC1: ácido 3-((R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3- (3-cloro-4-metoxifenil)-propanamido)-2,2-dimetilpropanoico

[000393] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo foram introduzidos composto 20 (1,06 g, 2,39 mmol) e THF (25 mL) seguido por LiOH (70,18 mg, 2,87 mmol) e H2O (1 mL). O meio de reação foi agitado algumas horas antes da adição de 70 mg de LiOH e agitado durante a noite em temperatura ambiente. Após este tempo, resina de Amberlit foi adicionada até o pH 4, filtrada em seguida lavada com THF e concentrada em vácuo para fornecer 1 g de composto BC1 como um sólido branco (97%). Síntese de BC2: ácido 3-((R)-2-(( terc- butoxicarbonil)amino)-3-(3-cloro- 4-metoxifenil)-propanamido)-2,2-dimetilbutanoico Composto 21: 3-((R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-(3-cloro- 4-metoxifenil)-propanamido)-2,2-dimetilbutanoato de metila

[000394] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo foram introduzidos fragmento B (1,02 g, 2,78 mmol) e DCM (25 mL), seguido por EDC (592 mg, 3,03 mmol) e HOBt (478 mg, 3,03 mmol). O meio de reação foi agitado 15 minutos, em seguida o fragmento C2 (0,5 g, 2,75 mmol) e DIEA (1,7 mL, 9,73 mmol) foram adicionados. O meio de reação foi agitado durante a noite em temperatura ambiente. Após este tempo, o meio de reação foi concentrado em vácuo, em seguida diluído com AcOEt. A camada orgânica foi lavada com salmoura saturada, secada sobre MgSO4, filtrada e concentrada em vácuo para fornecer 1,45 g de óleo cru que foi purificado por cromatografia rápida em 100 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/AcOEt) para fornecer 845 mg de composto 21 como uma espuma branca (67%).

[000395] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): mistura diastereoisomérica de 50:50; 0,87 (d, J = 6,8 Hz, 1,5 H); 0,97 (d, J = 6,8 Hz, 1,5 H); 1,01 (s, 1,5 H); 1,03 (s, 1,5 H); 1,07 (s, 3 H); 1,31 (s, 9 H); 2,58 a 2,87 (m, 2 H); 3,59 (s, 1,5 H); 3,60 (s, 1,5 H); 3,81 (s, 3 H); 3,99 a 4,20 (m, 2 H); 6,90 (d, J = 9,0 Hz, 0,5 H); 6,97 (d, J = 9,0 Hz, 0,5 H); 7,05 (broad d, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,19 (split dd, J = 2,4 e 8,6 Hz, 1 H); 7,32 (d, J = 2,4 Hz, 0,5 H); 7,34 (d, J = 2,4 Hz, 0,5 H); 7,54 (d, J = 10,1 Hz, 0,5 H); 7,62 (d, J = 10,1 Hz, 0,5 H). LCMS (A3): mistura diastereoisomérica 50:50; ES m/z = 457 [M+H]+; m/z = 479 [M+Na]+; tR = 3,19-3,2 min.

[000396] Estereômeros 1 e 2 de Composto 21: 3-((R)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-(3-cloro-4-metoxifenil)-propanamido)-2,2- dimetilbutanoato de metila - estereômeros 1 e 2

[000397] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo a uma solução de fragmento B (1,17 g, 3,55 mmol) em DCM (30 mL) foram adicionados EDC (741,75 mg, 3,87 mmol), HOBt (592,57 mg, 3,87 mmol). Após agitação durante 15 minutos em temperatura ambiente, o fragmento C2 (639 mg, 3,52 mmol) e DIEA (2,17 mL, 12,31 mmol) foram adicionados. O meio de reação foi agitado durante 4 horas, em seguida concentrado e diluído com AcOEt (100 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com H2O (2 x 10 mL) e salmoura saturada (2 x 10 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo. O produto cru foi purificado por cromatografia rápida em 50 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/AcOEt) para fornecer 1,306 g de mistura de diastereoisômeros (81%) que foram separados por duas cromatografias rápidas sucessivas, a primeira em 100 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 376 mg de estereômero 1 de composto 21 (23%), o Segundo em 70 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 181 mg de estereômero 1 de composto 21 (11%), 279 mg de estereômero 2 de composto 21 (17%) e 476 mg de mistura de diastereoisômeros.

Estereômero 1 de Composto 21

[000398] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,85 (d, J = 6,8 Hz, 3 H); 1,07 (s, 6 H); 1,31 (s, 9 H); 2,57 (m, 1H); 2,80 (dd, J = 5,2 e 13,8 Hz, 1 H); 3,60 (s, 3 H); 3,81 (s, 3 H); 4,05 (m, 1 H); 4,16 (m, 1 H); 6,99 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,05 (d, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,20 (dd, J = 2,0 e 8,6 Hz, 1 H); 7,34 (d, J=2,0 Hz, 1 H); 7,57 (d, J=10,1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 381; m/z = 401; m/z = 455 [M-H]-; m/z = 457 [M+H]+; tR = 1,29 min.

Estereômero 2 de Composto 21

[000399] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,95 (d, J = 6,8 Hz, 3 H); 1,00 (s, 3 H); 1,03 (s, 3 H); 1,31 (s, 9 H); 2,55 (m, 1H); 2,80 (dd, J = 5,0 e 14,3 Hz, 1 H); 3,59 (s, 3 H); 3,81 (s, 3 H); 4,09 a 4,22 (m, 2 H); 6,92 (d, J = 8,8 Hz, 1 H); 7,05 (d, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,20 (dd, J = 2,0 e 8,6 Hz, 1 H); 7,34 (d, J = 2,0 Hz, 1 H); 7,64 (d, J = 10,1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 381; m/z = 401; m/z = 455 [M-H]-; m/z = 457 [M+H]+; tR = 1,29 min.

[000400] Composto BC2: ácido 3-((R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)- 3-(3-cloro-4-metoxifenil)-propanamido)-2,2-dimetilbutanoico

[000401] O Composto 21 (0,845 g, 1,85 mmol) e MeOH (20 mL) foram introduzidos em um frasco de fundo redondo seguido por 1,8 mL of 10M NaOH. A solução foi agitada durante e aquecida a 50°C durante a noite. O meio de reação foi evaporado em vácuo em seguida diluído com H2O (20 mL) e neutralizado com HCl a 5N. A solução foi extraída duas vezes com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada, secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo para fornecer 800 mg de composto BC2 como uma espuma branca (97%).

[000402] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): mistura diastereoisomérica 50:50; 0,91 (d, J = 6,8 Hz, 1,5 H); 0,97 (d, J = 6,8 Hz, 1,5 H); 1,00 (s, 3 H); 1,03 (s, 1,5 H); 1,07 (s, 1,5 H); 1,31 (s, 9 H); 2,57 (m, 1 H); 2,83 (m, 1 H); 3,81 (s, 3 H); 4,01 a 4,16 (m, 2 H); 6,90 (d, J = 9,0 Hz, 0,5 H); 6,95 (d, J = 9,0 Hz, 0,5 H); 7,03 (d, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,20 (amplo, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,31 (s amplo, 1 H); 7,49 (d, J = 10,1 Hz, 0,5 H); 7,54 (d, J = 10,1 Hz, 0,5 H); 11,94 (m amplo, 1 H). LCMS (A1): mistura diastereoisomérica 50:50; ES m/z = 387; m/z = 443 [M+H]+; tR = 1,20-1,21 min.

[000403] Estereômero 1 de Composto BC2: estereômero 1 de 3- ((R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-(3-cloro-4- metoxifenil)propanamido)-2,2-dimetilbutanoico

[000404] Estereômero 1 de composto 21 (0,325 g, 1,85 mmol) e MeOH (8 mL) foram introduzidos em um frasco de fundo redondo seguido por 0,692 mL de NaOH a 10M. A solução amarela foi agitada durante e aquecida a 50°C durante a noite. O meio de reação foi evaporado em vácuo, em seguida diluído com H2O (20 mL) e extraída com AcOEt (3 x 5 mL). As camadas aquosas foram acidificadas com HCl a 5N e extraídas com AcOEt (3 x 30 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (5 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo para fornecer 303 mg de estereômero 1 de composto BC2 como uma espuma branca (96%) usado diretamente na reação subsequente.

[000405] Estereômero 2 de Composto BC2: estereômero 2 de ácido 3-((R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-(3-cloro-4- metoxifenil)propanamido)-2,2-dimetilbutanoico

[000406] Estereômero 2 de Composto 21 (1,094 g, 2,39 mmol), THF (5 mL) e H2O (5 mL) foram introduzidos em um frasco de fundo redondo seguido por LiOH (301 mg, 7,18 mmol). A solução foi agitada durante 44 horas, em temperatura ambiente. A reação não foi concluída, LiOH (301 mg) foi adicionado. A mistura foi agitada durante 48 h, em seguida 301 mg de LiOH foram adicionados em THF (10 mL) e H2O (5 mL) e um meio de reação agitada durante 40 h a 60°C. O meio de reação foi evaporado em vácuo. Ácido cítrico a 1M foi adicionado até o pH 2 e a mistura foi extraída com AcOEt (2 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com H2O, secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo para fornecer 1,096 g de estereômero 2 de composto BC2 como um sólido amorfo branco (quant.) usado diretamente na reação subsequente. Síntese de BC3: ácido 2-((R)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-(3- cloro-4-metoxifenil)-propanamido)ciclopropil)-2-metilpropanoico de etila Composto 22: 2-((R)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-(3- cloro-4-metoxifenil)-propanamido)ciclopropil)-2-metilpropanoato de etila

[000407] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo foram introduzidos o fragmento C3 (1,2 g, 7,01 mmol) e THF (16,5 mL), seguido por fragmento B (2,54 g, 7,71 mmol), HOBt (1,77g, 8,76 mmol), EDC (1,23 g, 8,06 mmol) e DIEA (1,35 mL, 7,71 mmol). O meio de reação foi agitado durante 2 horas em temperatura ambiente. Após este tempo, o meio de reação foi diluído com H2O (25 mL) e extraído com AcOEt (250 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com H2O (2 x 25 mL), salmoura saturada (2 x 25 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia rápida, o primeiro em 200 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/AcOEt) para fornecer 2,16 g de composto 22 como uma espuma incolor (64%) e 343 mg de mistura contendo o composto esperado que foi também purificado em 30 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/AcOEt) para fornecer 160 mg de composto 22 como uma espuma incolor (4,7%).

[000408] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,62 (m, 1 H); 0,74 a 0,99 (m, 3 H); 1,03 (s, 3 H); 1,10 (s, 3 H); 1,24 (t, J = 7,2 Hz, 3 H); 1,42 (s, 9 H); 2,90 (m, 2 H); 3,88 (s, 3 H); 4,08 (m, 1 H); 4,10 (q, J = 7,2 Hz, 2 H); 4,96 (m, 1 H); 6,33 (s amplo, 1 H); 6,85 (d, J = 8,5 Hz, 1 H); 7,03 (dd, J = 2,4 e 8,5 Hz, 1 H); 7,17 (d, J = 2,4 Hz, 1 H). Composto BC3: ácido 2-((R)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino) -3-(3-cloro-4-metoxifenil)-propanamido)ciclopropil)-2-metilpropanoico

[000409] O Composto 22 (2,09 g, 4,33 mmol), THF (10 mL) e H2O(8 mL) foram introduzidos em um frasco de fundo redondo seguido por LiOH (726,33 mg, 17,31 mmol). A solução foi agitada durante e aquecida a 65°C. Após 16 h, a reação não foi concluída, 726,33 mg de LiOH em 10 mL de H2Oforam adicionados. A mistura foi agitada durante 48 h a 65°C. Após resfriamento, o meio de reação foi diluído com H2O (20 mL) em seguida extraído com AcOEt (3 x 40 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com H2O(2 x 10 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo para fornecer 1,29 g de mistura de éster/ácido. A camada aquosa foi acidificada com HCl a 5N até o pH 3, em seguida extraída com AcOEt (3 x 50 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com H2O (2 x 10 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo para fornecer 787 mg de composto BC3 como uma espuma bege (40%).

[000410] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,50 a 0,90 (m, 4 H); 1,03 (s, 6 H); 1,30 (s, 9 H); 2,60 (dd, J = 10,5 e 14,1 Hz, 1 H); 2,78 (dd, J = 5,0 e 14,1 Hz, 1 H); 3,81 (s, 3 H); 3,97 (m, 1 H); 6,80 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,03 (d, J = 8,5 Hz, 1 H); 7,18 (dd, J = 2,0 e 8,5 Hz, 1 H); 7,31 (d, J = 2,0 Hz, 1 H); 7,86 (s, 1 H); 12,11 (m amplo, 1 H). Síntese de BC4: ácido (S)-3-((R)-2-acrilamido-3-(3-cloro-4-metoxifenil) propanamido)-2,2-dimetilbutanoico Composto 23: (S)-3-((R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-(3- cloro-4-metoxifenil)-propanamido)-2,2-dimetilbutanoato de metila

[000411] A uma solução de fragmento B (2 g, 6,06 mmol) em DCM (60 mL) foram adicionados EDC (1,13 mL, 7,06 mmol) e HOBt (948 mg, 6,67 mmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 15 minutos, em seguida foram adicionados (S)-3-amino-2,2- dimetilbutanoato de metila (881 mg, 6,06 mmol) e DIEA (1,53 mL, 9,10 mmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 4 horas, concentrado em vácuo e diluído com EtOAc (100 mL) e H2O (20 mL). A fase aquosa foi extraída com EtOAc (20 mL); as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (2 x 20 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por cromatografia rápida em 150 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/EtOAc) para fornecer 2,21 g de composto 23 como uma laca incolor (79%).

[000412] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,88 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 1,08 (s, 6H); 1,32 (s, 9H); 2,67 (dd, J = 9,9 e 13,6 Hz, 1H); 2,82 (dd, J = 5,2 e 13,6 Hz, 1H); 3,62 (s, 3H); 3,83 (s, 3H); 4,06 (m, 1H); 4,77 (m, 1H) 6,97 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 7,05 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 7,20 (dd, J = 2,4 e 8,6 Hz, 1H); 7,33 (d, J = 2,4 Hz, 1H); 7,55 (d, J = 9,8 Hz, 1H). Composto 24: 2,2,2-trifluoroacetato de (S)-3-((R)-2-amino-3- (3-cloro-4-metoxifenil)propanamido)-2,2-dimetilbutanoato de metila

[000413] A uma solução de composto 23 (2,2 g, 4,81 mmol) em DCM (25 mL) foi adicionado TFA (3,6 mL, 48,1 mmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante a noite, concentrado em vácuo e coevaporado na presença de tolueno para fornecer 2,0 g de composto 24 como uma mistura diastereoisomérica (88%).

[000414] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,80 (d, J = 6,9 Hz, 3H); 1,04 (s, 3H); 1,10 (s, 3H); 2,95 (d, J = 7,0 Hz, 2H); 3,62 (s, 3H); 3,84 (s, 3H); 4,00 (m, 1H); 4,15 (m, 1H); 7,10 a 7,30 (m, 3H); 8,00 (d, J = 9,5 Hz, 1H); 8,22 (s amplo, 3H). Composto 25: (S)-3-((R)-2-acrilamido-3-(3-cloro-4- metoxifenil)propanamido)-2,2-dimetilbutanoato de metila

[000415] A uma solução de composto 24 (2,0 g, 4,25 mmol) em DCM (20 mL) foram adicionados cloreto de acriloíla (536 µL, 6,37 mmol) e DIEA (2,5 mL, 12,74 mmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 2 horas, em seguida diluído com H2O(20 mL). A fase aquosa foi extraída com DCM (2 x 20 mL), as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (2 x 20 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por cromatografia rápida em 100 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/EtOAc) para fornecer 850 mg de composto 25 como um 85:15 mistura diastereoisomérica (68%).

[000416] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,85 (d, J = 6,9 Hz, 3H); 1,03 (s, 3H); 1,04 (s, 3H); 2,72 (dd, J = 9,7 e 13,9 Hz, 1H); 2,86 (dd, J = 5,8 e 13,9 Hz, 1H); 3,58 (s, 3H); 3,80 (s, 3H); 4,15 (m, 1H); 4,56 (m, 1H); 5,56 (dd, J = 2,3 e 10,2 Hz, 1H); 6,03 (dd, J = 2,3 e 17,2 Hz, 1H); 6,28 (dd, J = 10,2 e 17,2 Hz, 1H); 7,02 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 7,17 (dd, J = 2,2 e 8,5 Hz, 1H); 7,31 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 7,72 (d, J = 9,8 Hz, 1H); 8,36 (d, J = 8,6 Hz, 1H). Composto BC4: ácido (S)-3-((R)-2-acrilamido-3-(3-cloro-4- metoxifenil)propanamido)-2,2-dimetilbutanoico

[000417] A uma solução de tBuOK (1,11 g, 9,86 mmol) em THF (4 mL) resfriada a 0°C foram adicionados H2O (47 µL) e o composto 25 (450 mg, 1,10 mmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 3 horas, em seguida acidificado com HCl a 1N (5 mL). A fase aquosa foi extraída com DCM (2 x 20 mL); as fases orgânicas combinadas foram lavadas com H2O (30 mL), salmoura saturada (20 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo. Os dois diastereoisômeros foram separados por cromatografia de fluido supercrítico em uma coluna Chiralpak AS 10 µm (eluição isocrática a 85/15 CO2/ [MeOH + 0,1% de TEA] para fornecer 385 mg de composto BC4 como um sólido amorfo (89%).

[000418] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,88 (d, J = 6,9 Hz, 3H); 0,99 (s, 3H); 1,00 (s, 3H); 2,71 (dd, J = 9,4 e 13,7 Hz, 1H); 2,88 (dd, J = 5,3 e 13,7 Hz, 1H); 3,80 (s, 3H); 4,10 (m, 1H); 4,54 (m, 1H); 5,55 (dd, J = 2,3 e 10,2 Hz, 1H); 6,01 (dd, J = 2,3 e 17,1 Hz, 1H); 6,28 (dd, J = 10,2 e 17,1 Hz, 1H); 7,02 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,17 (dd, J = 2,4 e 8,7 Hz, 1H); 7,32 (d, J = 2,4 Hz, 1H); 7,80 (d, J = 9,8 Hz, 1H); 8,39 (d, J = 8,8 Hz, 1H); 12,00 (s amplo, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 395 [M-H]-; m/z = 397 [M+H]+; tR = 0,92 min. Síntese de BC5: ácido (S)-3-((R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-(3- cloro-4-metoxifenil)-propanamido)-2,2-dimetilbutanoico

[000419] O Composto BC5 foi preparado partindo de (3S)-3-amino- 2,2-dimetilbutanoato de metila (MFCD09256689) e seguindo a síntese geral de bloco de construção BC descrita no Esquema 32 e descrita para os compostos BC1 e BC2,

[000420] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,89 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 1,02 (s, 3H); 1,04 (s, 3H); 1,30 (s, 9H); 2,68 (dd, J = 13,6 e 10,2 Hz, 1H); 2,82 (dd, J = 5,2 e 13,6 Hz, 1H); 3,80 (s, 3H); 4,05 (m, 1H); 4,12 (m, 1H); 7,00 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,05 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,20 (dd, J = 2,2 e 8,7 Hz, 1H); 7,32 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 7,52 (d, J = 9,9 Hz, 1H); 12,35 (s amplo, 1H). LCMS (A1): ES m/z = 441 [M-H]-; m/z = 443 [M+H]+; m/z = 883 [2M-H]-; tR = 1,16 min. Síntese de BC6: ácido 3-((R)-2-acrilamido-3-(3-cloro-4- metoxifenil)propanamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpropanoico 3-((R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-(3-cloro-4- Composto 26: metoxifenil)-propanamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpropanoato de metila

[000421] A uma solução de fragmento C4 (1,059 g, 5,77 mmol) em THF (60 mL) foram adicionados DIEA (2,06 mL, 11,76 mmol), fragmento B (1,90 g, 5,77 mmol), HOBt (935 mg, 6,92 mmol) e EDC (1,23 mL, 6,92 mmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 48 horas, concentrado em vácuo e purificado por cromatografia rápida em 200 g de sílica gel (eluição isocrática de heptano/EtOAc) para fornecer 1,05 g de composto 26 como um óleo incolor (39%).

[000422] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,98 (s, 3H); 1,30 (s, 9H); 2,63 (m, 1H); 2,83 (m, 1H); 3,18 a 3,48 (m, 4H); 3,60 (s, 3H); 3,80 (s, 3H); 4,10 (m, 1H); 4,81 (m, 1H); 6,98 (d, J = 8,9 Hz, 1H); 7,04 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,20 (dd, J = 2,1 e 8,7 Hz, 1H); 7,35 (d, J = 2,1 Hz, 1H); 7,83 (m, 1H), LCMS (A5): ES m/z = 457 [M-H]-; m/z = 459 [M+H]+; m/z = 503 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,1 min. Composto 27: cloridrato de 3-((R)-2-amino-3-(3-cloro-4- metoxifenil)propanamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpropanoato de metila

[000423] O Composto 26 (1,05 g, 2,29 mmol) foi tratado com HCl a 4M em dioxano (16 mL, 64 mmol) durante 1 hora em temperatura ambiente. O meio de reação foi concentrado em vácuo e coevaporado duas vezes na presença de tolueno. O produto cru foi triturado com iPr2O (10 mL), filtrado e lavado duas vezes com iPr2O (5 mL). A massa foi em seguida dissolvida em DCM, filtrada e concentrada em vácuo para fornecer 809 mg de composto 27 como uma espuma branca (90%) que foi usada sem outra purificação.

[000424] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,92 (s, 1,5H); 0,97 (s, 1,5H); 2,88 (m, 1H); 3,00 (m, 1H); 3,19 a 3,47 (m, 4H); 3,60 (s, 3H); 3,85 (s, 3H); 4,05 (m, 1H); 4,89 (m, 1H); 7,11 (divisão de d, J = 8,6 Hz, 1H); 7,19 (split dd, J = 2,0 e 8,6 Hz, 1H); 7,38 (divisão de d, J = 2,0 Hz, 1H); 8,15 (s amplo, 3H); 8,39 (m, 1H). Composto 28: 3-((R)-2-amino-3-(3-cloro-4- metoxifenil)propanamido)-2-metil-2-(((trietilsilil)óxi)metil)propanoato de metila

[000425] A uma solução de composto 27 (809 mg, 2,05 mmol) em DCM (4 mL) resfriada com um banho gelado foram adicionados TEA (1,43 mL, 10,23 mmol) e clorotrietilsilano (1,37 mL, 8,19 mmol) enquanto mantendo a temperatura abaixo de 4°C. Agitação a 4°C foi realizada durante 10 minutos, em seguida o meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 20 horas. Salmoura saturada (20 mL) e DCM foram adicionados ao meio que foi agitado durante 10 min. A fase orgânica foi lavada com salmoura saturada (3 x 10 mL), secada sobre MgSO4, filtrada, concentrada em vácuo e purificada por cromatografia rápida em 70 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 706 mg de composto 28 como um óleo amarelo claro (73%).

[000426] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,52 (q, J = 8,0 Hz, 6H); 0,89 (t, J = 8,0 Hz, 9H); 0,98 (s, 3H); 1,70 (s amplo, 2H); 2,54 (m, 1H); 2,82 (m, 1H); 3,18 a 3,45 (m, 3H); 3,58 (m, 2H); 3,60 (s, 3H); 3,80 (s, 3H); 7,03 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,14 (dd, J = 2,3 e 8,7 Hz, 1H); 7,28 (split d, J = 2,3 Hz, 1H); 7,78 (m, 1H), LCMS (A5): ES m/z = 471 [M-H]-; m/z = 473 [M+H]+; m/z = 517 [M-H+HCO2H]-; tR = 0,97 min. Composto 29: 3-((R)-2-acrilamido-3-(3-cloro-4-metoxifenil) propanamido)-2-metil-2-(((trietilsilil)óxi)metil)propanoato de metila

[000427] A uma solução de composto 28 (704 mg, 1,49 mmol) em DCM (19 mL) resfriada com um banho de gelo/acetona foram adicionados DIEA (780 µL, 4,46 mmol) e gota a gota cloreto de acriloíla (181 µL, 2,23 mmol). O meio de reação foi agitado a 0-5°C durante 1 hora, em seguida EtOAc foi adicionado (38 mL) e o meio lavado com HCl a 1N (5 mL), NaHCO3 saturado (5 mL), salmoura saturada (3 x 15 mL), secado sobre MgSO4, filtrado, concentrado em vácuo e purificado por cromatografia rápida em 30 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 742 mg de composto 29 como um óleo incolor (94%).

[000428] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,52 (split q, J = 8.0 Hz, 6H); 0,89 (divisão de t, J = 8,0 Hz, 9H); 0,99 (s, 1,5H); 1,01 (s, 1,5H); 2,69 (m, 1H); 2,87 (m, 1H); 3,20 (m, 1H); 3,28 (m, 1H); 3,50 (dd, J = 3,1 e 9,9 Hz, 1H); 3,58 (s, 3H); 3,68 (d, J = 9,9 Hz, 1H); 3,80 (s, 3H); 4,59 (m, 1H); 5,55 (d, J = 10,3 Hz, 1H); 6,00 (d, J = 17,3 Hz, 1H); 6,25 (divisão de dd, J = 10,3 e 17,3 Hz, 1H); 7,02 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 7,18 (divisão de dd, J = 2,0 e 8,5 Hz, 1H); 7,31 (divisão de d, J = 2,0 Hz, 1H); 7,96 (m, 1H); 8,39 (d, J = 8,9 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 525 [M-H]-; m/z = 527 [M+H]+; m/z = 571 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,54 min. Composto BC6: ácido 3-((R)-2-acrilamido-3-(3-cloro-4- metoxifenil)propanamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpropanoico

[000429] A uma suspensão de tBuOK (1,42 g, 12,65 mmol) em THF (7 mL) resfriada com um banho de gelo/acetona foi adicionado H2O (50 µL), o meio foi agitado durante 10 minutos antes da adição de uma solução de composto 29 (741 mg, 1,41 mmol) em THF (7 mL). A agitação foi realizada a 0°C durante 10 minutos, em seguida em temperatura ambiente durante 1 hora. O meio de reação foi resfriado com um banho gelado antes da adição de HCl a 1N (16,9 mL). Após 15 minutos de agitação, o meio de reação foi extraído com DCM (3 x 25 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (2 x 15 mL), H2O (15 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo para fornecer 656 mg de composto BC6 como uma espuma amarela (quant.).

[000430] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,91 (s, 3H); 2,69 (m, 1H); 2,90 (dd, J = 4,8 e 13,6 Hz, 1H); 3,18 a 3,42 (m, 4H); 3,80 (s, 3H); 4,59 (m, 1H); 4,73 (amplo, 1H); 5,55 (d, J = 2,3 e 10,3 Hz, 1H); 6,00 (dd, J = 2,3 e 17,2 Hz, 1H); 6,24 (dd, J = 10,3 e 17,2 Hz, 1H); 7,03 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,19 (dd, J = 2,0 e 8,7 Hz, 1H); 7,35 (d, J = 2,0 Hz, 1H); 8,00 (m, 1H); 8,39 (d, J = 8,8 Hz, 1H); 12,30 (s amplo, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 397 [M-H]-; m/z = 399 [M+H]+; tR = 0,77 min. Síntese de Exemplos 1 a 3: amina benzílica de aza-C52, éster de NHS de amina glutaril-Val-Ala-aza-C52 benzílica e ADC correspondente Composto 30: 6-(3-cloro-4-metoxibenzil)-13-isobutil-2,2,10, 10-tetrametil-4,7,11-trioxo-3-oxa-5,8,12-triazatetradecan-14-oato de (6R,13S)-(1E,3R,4S,6E)-1-(4-(azidometil)fenil)-8-(terc-butóxi)-3-metil- 8-oxo-octa-1,6-dien-4-ila

[000431] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo foram introduzidos o composto BC1 (899,55 mg, 2,10 mmol) em DMF (25 mL), HATU (861 mg, 2,20 mmol) e HOAt (302 mg, 2,20 mmol). A mistura foi agitada durante 30 minutos em temperatura ambiente. Após os quais, o composto AD1 (940 mg, 2 mmol) e DIEA (1,05 mL, 5,99 mmol) foram adicionados. O meio de reação foi agitado durante 4 horas em temperatura ambiente. Após este tempo, o meio de reação foi diluídas com H2O (50 mL) e extraída com AcOEt (2 x 40 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura saturada (25 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia rápida em 80 g de sílica gel (eluição por gradiente de heptano/AcOEt) para fornecer 1,011 g de composto 30 como um semissólido amarelo (57%).

[000432] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,76 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,78 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 1,03 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,07 (s, 6 H); 1,39 (s, 9 H); 1,37 a 1,63 (m, 3 H); 1,41 (s, 9 H); 2,36 a 2,60 (m parcialmente mascarado, 3 H); 2,64 (dd, J = 9,5 e 14,1 Hz, 1 H); 2,86 (dd, J = 5,6 e 14,1 Hz, 1 H); 3,18 (dd, J = 6,1 e 13,5 Hz, 1 H); 3,25 (dd, J = 6,9 e 13,5 Hz, 1 H); 3,79 (s, 3 H); 4,09 (m, 1 H); 4,26 (m, 1 H); 4,40 (s, 2 H); 4,92 (m, 1 H); 5,81 (d, J = 15,9 Hz, 1 H); 6,17 (dd, J = 8,4 e 16,1 Hz, 1 H); 6,44 (d, J = 15,9 Hz, 1 H); 6,70 (m, 1 H); 6,94 (d, J = 8,9 Hz, 1 H); 7,02 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,18 (dd, J = 2,3 e 8,9 Hz, 1 H); 7,31 (m, 3 H); 7,42 (d, J = 8,5 Hz, 2 H); 7,59 (t, J = 6,3 Hz, 1 H); 7,77 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), LCMS (A1): ES m/z = 879 [M-H]-; m/z = 881 [M+H]+; m/z = 925 [M- H+HCO2H]-; tR = 1,89 min. Composto 31: (3S,10R,16S,E)-16-((R,E)-4-(4- (azidometil)fenil)but-3-en-2-il)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-3-isobutil- 6,6-dimetil-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-eno- 2,5,9,12-tetraona

[000433] O Composto 31 foi preparado em duas etapas.

[000434] Etapa 1: em um frasco de fundo redondo foram introduzidos o composto 30 (1,011 g, 1,15 mmol) em DCM (10 mL). Após resfriamento para 0°C, TFA (1,72 mL, 22.94 mmol) e 100 µL de H2O foram adicionados. O meio de reação foi agitado durante 72 horas em temperatura ambiente. Na conclusão, o tolueno foi adicionado ao meio e foi concentrado em vácuo para fornecer 900 mg de intermediário de amino/ácido (quant.).

[000435] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,76 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,78 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 1,03 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,07 (s, 3 H); 1,08 (s, 3 H); 1,38 a 1,62 (m, 3 H); 2,35 a 2,58 (m parcialmente mascarado, 3 H); 2,79 (dd, J = 11,0 e 13,8 Hz, 1 H); 3,00 (dd, J = 4,1 e 13,8 Hz, 1 H); 3,16 (dd, J = 5,9 e 13,5 Hz, 1 H); 3,28 a 3,39 (m mascarado, 1 H); 3,81 (s, 3 H); 4,03 (m, 1 H); 4,26 (m, 1 H); 4,40 (s, 2 H); 4,92 (m, 1 H); 5,82 (d, J = 16,1 Hz, 1 H); 6,16 (dd, J = 8,8 e 16,4 Hz, 1 H); 6,42 (d, J = 16,4 Hz, 1 H); 6,73 (m, 1 H); 7,09 (d, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,18 (dd, J = 2,0 e 8,6 Hz, 1 H); 7,32 (d, J = 8,6 Hz, 2 H); 7,37 (d, J = 2,0 Hz, 1 H); 7,41 (d, J = 8,6 Hz, 2 H); 7,84 (d, J = 7,9 Hz, 1 H); 8,01 (amplo s grande, 3 H); 8,10 (t, J = 6,4 Hz, 1 H); 12,2 (s amplo, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 723 [M-H]-; m/z = 725 [M+H]+; tR = 1,09 min.

[000436] Etapa 2: em um frasco de fundo redondo, a uma solução de intermediário de amino/ácido (840 mg, 1,16 mmol) em 200 mL de CH3CN foram adicionados DIEA (1,95 mL, 11,58 mmol), HOAt (159,23 mg, 1,16 mmol) e HATU (499,40 mg, 1,27 mmol). O meio de reação foi agitado durante 3 horas em temperatura ambiente. Após concentração em vácuo, o cru foi diluído com AcOEt (200 mL), neutralizado com ácido cítrico a 0,5M (12 mL) e HCl a 1N (6 mL). A camada orgânica foi separada, lavada com NaHSO3 saturado, NaHCO3 saturado, salmoura saturada, secada sobre MgSO4, filtrada, concentrada e purificada por cromatografia rápida em 40 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 558 mg de composto 31 como um sólido branco (68%).

[000437] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,60 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,61 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,97 (s, 3 H); 1,07 (s, 3 H); 1,09 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,15 (m, 1 H); 1,33 a 1,48 (m, 2 H); 2,24 (m, 1 H); 2,53 a 2,70 (m, 2 H); 2,88 (d grande, J = 13,6 Hz, 1 H); 3,01 (dd, J = 3,5 e 14,5 Hz, 1 H); 3,23 a 3,32 (m mascarado, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 4,18 (m, 1 H); 4,35 (m, 1 H); 4,40 (s, 2 H); 4,95 (m, 1 H); 5,86 (dd, J = 1,7 e 15,8 Hz, 1 H); 6,13 (dd, J = 8,8 e 16,1 Hz, 1 H); 6,40 (m, 1 H); 6,47 (d, J = 16,1 Hz, 1 H); 7,04 (d, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,18 (dd, J = 2,0 e 8,6 Hz, 1 H); 7,29 (d, J = 2,0 Hz, 1 H); 7,32 (d, J = 8,6 Hz, 2 H); 7,41 (broad d, J = 8,6 Hz, 3 H); 7,89 (d, J = 8,9 Hz, 1 H); 8,1 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), LCMS (A1): ES m/z = 705 [M-H]-; m/z = 707 [M+H]+; tR = 1.58 min. Composto 32: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4- (azidometil)fenil)oxiran-2-il)etil)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-3-isobutil- 6,6-dimetil-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-eno- 2,5,9,12-tetraona

[000438] Em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 31 (410 mg, 0,579 mmol) em DCM (50 mL) foi adicionado, a 0°C, m-CPBA (259 mg,1,16 mmol). Após agitação durante 16 horas em temperatura ambiente, m-CPBA (130 mg) foi adicionado duas vezes em 24 h. Uma vez a reação concluída, a mistura crua foi agitada durante 1 hora com NaHCO3 saturado (15 mL) e Na2S2O3 saturado (15 mL) em seguida extraída com DCM (3 x 15 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura saturada (15 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas para fornecer 440 mg de uma mistura de alfa e beta epóxidos como um semissólido amarelo. Alfa e beta epóxidos foram separados por cromatografia líquida quiral que foi realizada em uma coluna de 76 x 350 mm embalada com 1,1 kg de 10 µm de Chiralpak AD (amilose tris-3,5-dimetilfenilcarbamato revestido em um suporte de silica gel, Chiral Technologies Europe) usando eluição isocrática com 80:20 heptano/EtOH. Após concentração, 185 mg de composto 32 foram obtidos como um sólido branco (44%) e 118 mg do alfa epóxido foram obtidos como um sólido branco (28%).

[000439] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,72 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,74 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,96 (s, 3 H); 1,04 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,08 (s, 3 H); 1,11 (m, 1 H); 1,40 a 1,55 (m, 2 H); 1,79 (m, 1 H); 2,26 (m, 1 H); 2,64 (m, 2 H); 2,85 (d amplo, J = 13,2 Hz, 1 H); 3,00 (m, 2 H); 3,25 (dd, J = 10,2 e 13,2 Hz, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,90 (d, J = 2,0 Hz, 1 H); 4,17 (m, 1 H); 4,35 (m, 1 H); 4,46 (s, 2 H); 5,12 (m, 1 H); 5,80 (dd, J = 1,7 e 16,0 Hz, 1 H); 6,39 (ddd, J = 3,8, 11,6 e 16,0 Hz, 1 H); 7,04 (d, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,18 (dd, J = 2,0 e 8,6 Hz, 1 H); 7,29 (d, J = 2,0 Hz, 1 H); 7,31 a 7,40 (m, 5 H); 7,94 (d, J = 9,1 Hz, 1 H); 8,40 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), LCMS (A1): ES m/z = 723 [M+H]+; tR = 1,48 min.

Exemplo 1: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(aminometil)fenil) oxiran-2-il)etil)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-3-isobutil-6,6-dimetil-1-oxa- 4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-eno- 2,5,9,12-tetraona

[000440] Em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 32 (185 mg, 255,79 µmol) em DCM (6 mL), MeOH (6 mL) e H2O (0,8 mL), foi adicionado TCEP (81,47 mg, 281,37 µmol). A solução foi agitada durante 16 horas em temperatura ambiente. Uma vez a reação concluída, a mistura crua foi diluída com NaHCO3 saturado (15 mL) e extraída com DCM (2 x 30 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura saturada, secadas sobre MgSO4, fitradas, concentradas e purificadas por duas cromatografias rápidas sucessivas, em 15 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 90 mg de exemplo 1 como um sólido branco (51%).

[000441] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,72 (d, J = 6,6 Hz, 3 H); 0,75 (d, J = 6,6 Hz, 3 H); 0,97 (s, 3 H); 1,03 (d, J = 7,1 Hz, 3 H); 1,07 (s, 3 H); 1,14 (m, 1 H); 1,42 a 1,57 (m, 2 H); 1,77 (m, 1 H); 1,92 (m amplo, 2 H); 2,26 (m, 1 H); 2,64 (m, 2 H); 2,86 (d amplo, J = 13,0 Hz, 1 H); 2,94 (dd, J = 2,0 e 8,0 Hz, 1 H); 3,00 (dd, J = 3,6 e 14,4 Hz, 1 H); 3,27 (dd, J = 10,2 e 13,0 Hz, 1 H); 3,70 (s, 2 H); 3,80 (s, 3 H); 3,84 (d, J = 2,0 Hz, 1 H); 4,18 (m, 1 H); 4,34 (m, 1 H); 5,11 (m, 1 H); 5,79 (dd, J = 1,7 e 15,6 Hz, 1 H); 6,38 (ddd, J = 4,1, 11,6 e 15,6 Hz, 1 H); 7,05 (d, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,16 (dd, J = 2,0 e 8,6 Hz, 1 H); 7,22 (d, J = 8,5 Hz, 2 H); 7,28 (d, J = 2,0 Hz, 1 H); 7,31 (d, J = 8,5 Hz, 2 H); 7,35 (d, J = 10,2 Hz, 1 H); 7,91 (d, J = 9,0 Hz, 1 H); 8,38 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), LCMS (A1): ES m/z = 695 [M-H]-; m/z = 697 [M+H]+; tR = 0,83 min. Composto 33: (S)-2-amino-N-((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1- ((3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-3-isobutil-6,6-dimetil- 2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16- il)etil)oxiran-2-il)benzil)amino)-1-oxopropan-2-il)-3-metilbutanamida

[000442] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo a uma solução de exemplo 1 (90 mg, 129,01 µmol) em DCM (20 mL), foram adicionados ácido (S)-2-((S)-2-((((9H-fluoren-9- il)metóxi)carbonil)amino)-3-metilbutan-amido)propanoico ou FmocValAla (número de CAS [150114-97-9], 79,47 mg, 193,61 µmol), EDC (34,27 µL, 193,61 µmol) e HOBt (20,93 mg, 154,9 µmol). O meio de reação foi agitado durante a noite em temperatura ambiente. Após este tempo, piperidina (129 µL, 1,29 mmol) foi adicionado e agitado durante 2 h. O solvente foi removido e o resíduo cru foi purificado por cromatografia rápida em 15 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 50 mg de composto 33 (45%) como um sólido branco.

[000443] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,75 (m, 9 H); 0,88 (d, J = 7,1 Hz, 3 H); 0,96 (s, 3 H); 1,03 (d, J = 7,1 Hz, 3 H); 1,08 (s, 3 H); 1,18 (m, 1 H); 1,23 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,42 a 1,57 (m, 2 H); 1,70 (m amplo, 2 H); 1,79 (m, 1 H); 1,92 (m, 1 H); 2,26 (m, 1 H); 2,63 (m, 2 H); 2,86 (d amplo, J = 13,0 Hz, 1 H); 2,99 (m, 3 H); 3,22 a 3,33 (m parcialmente mascarado, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,86 (d, J = 2,0 Hz, 1 H); 4,18 (m, 1 H); 4,28 (d, J = 6,3 Hz, 2 H); 4,33 (m, 2 H); 5,11 (m, 1 H); 5,79 (dd, J = 1,7 e 15,6 Hz, 1 H); 6,39 (ddd, J = 4,1, 11,6 e 15,6 Hz, 1 H); 7,03 (d, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,16 (dd, J = 2,0 e 8,6 Hz, 1 H); 7,24 (s, 4 H); 7,28 (d, J = 2,0 Hz, 1 H); 7,37 (d, J = 10,2 Hz, 1 H); 7,92 (d, J = 9,1 Hz, 1 H); 8,07 (d amplo, J = 8,3 Hz, 1 H); 8,38 (d, J = 8,1 Hz, 1 H); 8,42 (t, J = 6,3 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 434 [M+2H]2+; m/z = 865 [M-H]-; m/z = 867 [M+H]+; m/z = 911 [M-H+HCO2H]-; tR = 0,88 min. Composto 34: ácido 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1- ((3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-3-isobutil-6,6-dimetil- 2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16- il)etil)oxiran-2-il)benzil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1- oxobutan-2-il)amino)-5-oxopentanoico

[000444] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 33 (54 mg, 57,64 µmol) em DMF (5 mL) foi adicionado anidrido glutárico (8 mg, 69,17 µmol). O meio de reação foi agitado durante 3,5 h em temperatura ambiente. Após este tempo, o solvente foi removido e o resíduo cru foi purificado por cromatografia rápida em 1,8 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 51 mg de composto 34 como um sólido branco (90%).

[000445] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,73 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,76 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,81 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,84 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,97 (s, 3 H); 1,03 (d, J = 7,2 Hz, 3 H); 1,05 (s, 3 H); 1,15 (m, 1 H); 1,22 (d, J = 7,2 Hz, 3 H); 1,43 a 1,52 (m, 2 H); 1,70 (m, 2 H); 1,77 (m, 1 H); 1,97 (m, 1 H); 2,17 (m, 2 H); 2,24 (m, 1 H); 2,55 a 2,68 (m, 2 H); 2,85 (d amplo, J = 12,7 Hz, 1 H); 2,96 (dd, J = 1,8 e 7,7 Hz, 1 H); 2,99 (dd, J = 3,0 e 14,6 Hz, 1 H); 3,23 a 3,40 (m parcialmente mascarado, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,85 (d, J = 1,8 Hz, 1 H); 4,22 a 4,38 (m, 4 H); 5,11 (m, 1 H); 5,79 (d, J = 14,9 Hz, 1 H); 6,37 (ddd, J = 4,1, 11,3 e 14,9 Hz, 1 H); 7,04 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,15 (dd, J = 2,0 et 8,7 Hz, 1 H); 7,23 (s amplo, 4 H); 7,28 (d, J = 2,0 Hz, 1 H); 7,37 (d amplo, J = 10,7 Hz, 1 H); 7,87 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,93 (d, J = 9,2 Hz, 1 H); 8,06 (m grande, 1 H); 8,37 (m amplo, 1 H); 8,41 (m amplo, 1 H); 12,03 (m amplo, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 979 [M-H]-; m/z = 981 [M+H]+; tR = 1,17 min.

Exemplo 2: 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10- (3-cloro-4-metoxibenzil)-3-isobutil-6,6-dimetil-2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa- 4,8,11 -triazaciclo-hexadec-13-en-16-il)etil)oxiran-2-il)benzil)amino)-1- oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-5-oxopentanoato de 2,5-dioxopirrolidin-1-ila

[000446] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 34 (30 mg, 30,56 µmol) em THF (5 mL) foram adicionados DIEA (5,34 µL, 30,56 µmol) e DSC (16,31 mg, 61,13 µmol). O meio de reação foi agitado durante 2 h em temperatura ambiente. Após este tempo, o solvente foi removido e o resíduo cru foi purificado por cromatografia rápida em 1,3 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/iPrOH) para fornecer 9 mg de exemplo 2 como um sólido branco. Uma segunda batelada contendo o composto esperado, bem como uma impureza foi diluídas com MeTHF, lavada twice com H2O, salmoura saturada, secada sobre MgSO4, filtrada e concentrada para fornecer 15 mg de exemplo 2 como um sólido branco (produção global de 73%).

[000447] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,73 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,77 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,82 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,84 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,96 (s, 3 H); 1,03 (d, J = 7,2 Hz, 3 H); 1,07 (s, 3 H); 1,15 (m, 1 H); 1,23 (d, J = 7,2 Hz, 3 H); 1,43 a 1,56 (m, 2 H); 1,78 (m, 1 H); 1,81 (m, 1 H); 1,97 (m, 1 H); 2,20 a 2,33 (m, 3 H); 2,58 a 2,69 (m, 4 H); 2,80 (s, 4 H); 2,85 (d amplo, J = 12,7 Hz, 1 H); 2,98 (dd, J = 2,1 e 7,9 Hz, 1 H); 3,00 (dd, J = 3,2 e 14,7 Hz, 1 H); 3,22 a 3,34 (m parcialmente mascarado, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,85 (d, J = 2,1 Hz, 1 H); 4,15 (m, 2 H); 4,22 a 4,38 (m, 4 H); 5,11 (m, 1 H); 5,79 (d, J = 15,1 Hz, 1 H); 6,38 (ddd, J = 3,9, 11,2 e 15,1 Hz, 1 H); 7,04 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,15 (dd, J = 2,2 e 8,7 Hz, 1 H); 7,22 (s amplo, 4 H); 7,29 (d, J = 2,2 Hz, 1 H); 7,36 (d amplo, J = 10,3 Hz, 1 H); 7,89 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,92 (d, J = 8,9 Hz, 1 H); 8,04 (d, J = 7,4 Hz, 1 H); 8,32 (t, J = 6,1 Hz, 1 H); 8,39 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), LCMS (A1): ES m/z = 540; m/z = 1076 [M-H]-; m/z = 1078 [M+H]+; m/z = 1122 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,23 min. Exemplo 3: mAb-Ex2

[000448] O método geral descrito anteriormente foi usado para a preparação de exemplo 3. 60 mg de hu2H11_R35-74 foram reagidos com 161 µL de uma solução a 9,96 mM de exemplo 2 em DMA (1,733 mg, 4 eq.) durante 2 h. Naquele momento, 121 µL da solução de exemplo 2 (3 eq.) foram adicionados e o meio agitado durante 2 horas. Naquele momento, 121 µL da solução de exemplo 2 (3 eq.) foram adicionados e agitados durante 2 horas. Após purificação em Superdex 200 pg em DPBS pH 6,5 + 20% NMP, concentração em Amicon Ultra- 15, permuta de tampão em PD-10 em tampão B pH 6,5 + 5% NMP e filtragem em Steriflip, 39,9 mg de exemplo 3 foram obtidas como uma solução límpida incolor em uma concentração de 2,28 mg/mL com uma DAR de 4,6 (EMAR), uma pureza monomérica de 99% e uma produção global de 66%.

[000449] SEC-EMAR: espectro para ADC intacto na Figura 1; m/z = 150346 (D1); m/z = 151307 (D2); m/z = 152274 (D3); m/z = 153240 (D4); m/z = 154200 (D5); m/z = 155165 (D6); m/z = 156133 (D7); m/z = 157095 (D8). Síntese dos exemplos 4 a 7: amina benzílica de (S)-3-neopentila-aza- C52, éster de NHS de amina glutaril-Val-Ala-(S)-3-neopentila-aza-C52 benzílica e ADC correspondenteComposto 35: (6R,13S)-(1E,3R,4S,6E)-8-(tert-butóxi)-1-(4- (hidroximetil)fenil)-3-metil-8-oxo-octa-1,6-dien-4-íla 6-(3-cloro-4- metoxibenzil)-2,2,10,10-tetrametil-13-neopentil-4,7,11-trioxo-3-oxa- 5,8,12-triazatetradecan-14-oato

[000450] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de fragmento BC1 (1,32 g, 3,08 mmol) em DCM (60 mL) foram adicionados DIEA (1,53 mL, 9,25 mmol), HOAt (503,75 mg, 3,70 mmol) e HATU (1,41 g, 3,70 mmol). A suspensão amarela foi agitada durante 30 minutos em RT, em seguida o fragmento AD2 (1,7 g, 3,08 mmol) foi adicionado. O meio de reação foi agitado durante 2 horas em RT. Após este tempo, 1,53 mL de DIEA foi adicionado e agitado durante 1 hora. A mistura foi neutralizada com ácido cítrico a 1M (50 mL) e extraído com AcOEt (2 x 80 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com NaHSO4 a 1M, H2O, secado sobre MgSO4, filtrado, concentrado e purificado por cromatografia rápida em 100 g de sílica gel (heptano de eluição por gradiente/AcOEt) para fornecer 1,475 g de composto 35 como um sólido incolor (57%). Composto 36: Ácido (2E,5S,6R,7E)-5-(((S)-2-(3-((R)-2-amino- 3-(3-cloro-4-metoxifenil)-propanamido)-2,2-dimetilpropanamido)-4,4- dimetilpentanoil)óxi)-8-(4-(hidroximetil)-fenil)-6-metilocta-2,7-dienoico

[000451] Em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 35 (1,475 g, 1,69 mmol) em DCM (20 mL), foram adicionados TFA (8 mL, 52,27 mmol) e H2O (2 mL). O meio de reação foi agitado durante 5 horas em RT. O solvente foi removido. O resíduo foi diluído com H2O (20 mL) e AcOEt (20 mL) e tratado com NaOH a 2M (2 mL) durante 2 horas em RT. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 10 mL), secado sobre MgSO4, filtrado e concentrado para fornecer 1,24 g de um sólido incolor. O sólido foi dissolvido em AcOEt (10 mL) e H2O (10 mL) e tratado com NaOH a 2M (400 µL) durante 2 horas em RT. A camada orgânica foi separada, as camadas aquosas foram extraídas com AcOEt (2 x 10 mL), secada sobre MgSO4, filtrada, concentrada e purificada por cromatografia rápida em 100 g de sílica gel (eleuição por gradiente de heptano/AcOEt) para fornecer 990 mg de composto 36 como um sólido branco (82%).

[000452] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,80 (s, 9 H); 0,99 (s, 3 H); 1,02 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,05 (s, 3 H); 1,52 (dd, J = 2,0 e 14,8 Hz, 1 H); 1,69 (dd, J = 9,9 e 14,8 Hz, 1 H); 2,36 a 2,61 (m parcialmente mascarado, 4 H); 2,84 (dd, J = 5,0 e 13,9 Hz, 1 H); 3,18 (d, J = 7,5 Hz, 2 H); 3,40 (dd, J = 5,1 e 8,1 Hz, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 4,29 (m, 1 H); 4,45 (s, 2 H); 4,90 (m, 1 H); 5,12 (m amplo, 1 H); 5,81 (d, J = 15,5 Hz, 1 H); 6,10 (dd, J = 8,4 e 15,9 Hz, 1 H); 6,40 (d, J = 15,9 Hz, 1 H); 6,70 (td, J = 7,5 e 15,5 Hz, 1 H); 7,01 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,11 (dd, J = 2,4 e 8,7 Hz, 1 H); 7,25 (m, 3 H); 7,32 (d, J = 8,2 Hz, 2 H); 7,72 (t, J = 6,5 Hz, 1 H); 7,79 (d, J = 7,8 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 712 [M-H]-; m/z = 714 [M+H]+; tR = 0,94 minuto. Composto 37: (3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)- 16-((R,E)-4-(4-(hidroximetil)-fenil)but-3-en-2-il)-6,6-dimetil-3-neopentil- 1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000453] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, foram introduzidos composto 36 (990 mg, 1,39 mmol) e CH3CN (150 mL), aquecidos com um banho de água a 50°C até completar a solubilização e agitada durante 10 minutos. Após isso, DIEA (687,20 µL, 4,16 mmol), HOAt (207,51 mg, 1,52 mmol) e HATU (579,7 mg, 1,52 mmol) foram adicionados e agitados durante 30 minutos em RT. O meio de reação foi neutralizado com ácido cítrico a 1M (30 mL). O solvente foi removido e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 40 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com NaHSO4 a 1M, H2O, secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas. O sólido cru foi diluído com H2O (200 mL) e agitado durante 1 hora. O sólido foi filtrado, em seguida diluído com AcOEt, secado sobre MgSO4, filtrado e concentrado para fornecer uma mistura de composto 37 e HATU. O sólido foi agitado com MeTHF (50 mL) e H2O (50 mL). A camada orgânica foi separada, lavada com H2O (4 x 20 mL), secada sobre MgSO4, filtrada, concentrada e purificada por cromatografia rápida em 10 g de sílica gel (eleuição por gradiente de heptano/AcOEt) para fornecer 680 mg de composto 37 como um sólido incolor (70 %).

[000454] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,68 (s, 9 H); 0,98 (s, 3 H); 1,03 (s, 3 H); 1,09 (d, J = 6,9 Hz, 3 H); 1,19 (d amplo, J = 14,5 Hz, 1 H); 1,58 (dd, J = 10,3 e 14,5 Hz, 1 H); 2,23 (m, 1 H); 2,52 a 2,70 (m, 3 H); 2,86 (d amplo, J = 12,7 Hz, 1 H); 3,00 (dd, J = 3,3 e 14,8 Hz, 1 H); 3,22 a 3,33 (m parcialmente mascarado, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 4,18 (m, 1 H); 4,42 (m, 1 H); 4,46 (d, J = 6,0 Hz, 2 H); 4,91 (m, 1 H); 5,13 (t, J = 6,0 Hz, 1 H); 5,85 (d amplo, J = 15,0 Hz, 1 H); 6,05 (dd, J = 8,4 e 15,9 Hz, 1 H); 6,40 (m, 2 H); 7,03 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,18 (dd, J = 2,2 e 8,7 Hz, 1 H); 7,25 (d, J = 8,5 Hz, 2 H); 7,29 (d, J = 2,2 Hz, 1 H), 7,31 (d, J = 8,5 Hz, 2 H); 7,42 (d, J = 10,6 Hz, 1 H); 7,94 (d, J = 9,1 Hz, 1 H); 8,41 (d, J = 8,2 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 694 [M-H]-; m/z = 696 [M+H]+; tR = 1,36 minuto. Composto 38: (3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)- 6,6-dimetil-3-neopentil-16-((R,E)-4-(4-(((tri- isopropilsilil)óxi)metil)fenil)but-3-en-2-il)-1-oxa-4,8,11-triazaciclo- hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000455] Sob argônio, a 0°C em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 37 (680 mg, 0,976 mmol) em CHCl3 (10 mL) foram adicionados 1H-imidazol (305,84 mg, 4,49 mmol) e clorotri- isopropilsilano (480,13 µl, 2,25 mmol). O meio de reação foi agitado durante 5 horas, em temperatura ambiente, em seguida diluído com NH4Cl saturado e MTBE (30 mL). A camada orgânica foi lavada com NaHSO4 a 1M, NaHCO3 saturado, salmoura saturada, secado sobre MgSO4, filtrado e concentrado para fornecer 970 mg de composto 38 como um sólido amorfo laranja (quantidade).

[000456] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,63 (s, 9 H); 0,87 à 1,17 (m, 31 H); 1,53 (dd, J = 10,9 e 14,3 Hz, 1 H); 2,22 (m, 1 H); 2,51 a 2,70 (m, 3 H); 2,86 (d amplo, J = 13,0 Hz, 1 H); 3,00 (dd, J = 3,2 e 14,9 Hz, 1 H); 3,24 a 3,35 (m parcialmente mascarado, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 4,18 (m, 1 H); 4,41 (m, 1 H); 4,76 (s, 2 H); 4,91 (m, 1 H); 5,87 (d amplo, J = 15,4 Hz, 1 H); 6,06 (dd, J = 8,9 e 15,9 Hz, 1 H); 6,40 (m, 2 H); 7,03 (d, J = 8,5 Hz, 1 H); 7,18 (d amplo, J = 8,5 Hz, 1 H); 7,25 (d, J = 8,3 Hz, 2 H); 7,28 (d, J = 8,3 Hz, 2 H); 7,30 (s amplo, 1 H); 7,42 (d, J = 10,5 Hz, 1 H); 7,93 (d, J = 9,2 Hz, 1 H); 8,42 (d, J = 8,1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 850 [M-H]-; m/z = 852 [M+H]+; m/z = 896 [M-H+HCO2H]-; tR = 2,15 minutos.

Exemplo 4: (3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-16-((S)-1-((2R, 3R)-3-(4-(hidróxi-metil)fenil)oxiran-2-il)etil)-6,6-dimetil-3-neopentil-1- oxa-4,8,11 -triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000457] O Exemplo 4 foi preparado em 2 etapas.

[000458] Etapa 1: sob argônio, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 38 (832 mg, 0,976 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado, em três vezes, m-CPBA (339,15 mg, 1,51 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 50 horas, em temperatura ambiente, em seguida diluída com DCM (10 mL) e agitada durante 15 minutos com NaHCO3 saturado (30 mL) e Na2S2O3 (30 mL). A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura saturada, secada sobre MgSO4, filtrada e concentrada para fornecer 1,1 g de mistura de alfa e beta epóxidos como uma espuma incolor (quantidade).

[000459] Etapa 2: a mistura de alfa e beta epóxidos foi diluída em THF (30 mL) e TBAF a 1M (952,32 µL) foi adicionada. Após agitação durante 2 horas, 952 µL de TBAF foram adicionados. Após agitação durante 1 hora, a mistura foi diluída com H2O (50 mL) e extraída com AcOEt (3 x 50 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura saturada, secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas para fornecer 770 mg da mistura de alfa e beta epóxidos como um sólido amarelo (quantidade). Alfa e beta epóxidos foram separados por cromatografia líquida quiral que foi realizada em um 76 x 350 mm de coluna embalada com 1,1 kg de 10 µm de Chiralpak AD (tris-3,5-dimetilfenilcarbamato de mylose revestido em um suporte de sílica gel, Chiral Technologies Europe) usando eluição isocrática com 75:25 heptano/EtOH. Após a concentração, 190 mg de exemplo 4 foram obtidos como um sólido branco (31%) e 125 mg do alfa epóxido foram obtidos como um sólido branco (20%).

[000460] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,81 (s, 9 H); 0,98 (s, 3 H); 1,03 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,05 (s, 3 H); 1,26 (m, 1 H); 1,71 (dd, J = 10,4 e 14,5 Hz, 1 H); 1,82 (m, 1 H); 2,26 (m, 1 H); 2,52 (m, 2 H); 2,84 (d, J = 12,8 Hz, 1 H); 2,92 (dd, J = 2,1 e 7,8 Hz, 1 H); 3,00 (dd, J = 3,1 e 14,5 Hz, 1 H); 3,24 a 3,36 (m parcialmente mascarado, 1 H); 3,81 (s, 3 H); 3,90 (d, J = 2,1 Hz, 1 H); 4,17 (ddd, J = 3,4, 8,0 e 11,7 Hz, 1 H); 4,42 (m, 1 H); 4,50 (d, J = 6,0 Hz, 2 H); 5,10 (m, 1 H); 5,20 (t, J = 6,0 Hz, 1 H); 5,79 (dd, J = 1,8 e 15,4 Hz, 1 H); 6,39 (ddd, J = 3,8, 11,5 e 15,4 Hz, 1 H); 7,05 (d, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,16 (dd, J = 2,1 e 8,6 Hz, 1 H); 7,26 (d, J = 8,3 Hz, 2 H); 7,29 (d, J = 2,1 Hz, 1 H); 7,32 (d, J = 8,3 Hz, 2 H); 7,41 (d, J = 10,3 Hz, 1 H); 8,02 (d, J = 9,2 Hz, 1 H); 8,38 (d, J = 8,2 Hz, 1H). LCMS (A1): ES m/z = 710 [M-H]-; m/z = 712 [M+H]+; tR = 1,28 minutos. Composto 39: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4- (azidometil)fenil)oxiran-2-il)etil)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6-dimetil- 3-neopentil-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000461] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de exemplo 4 (100 mg, 140 µmol) em THF (5 mL) foram adicionados DPPA (156,82 µl, 701,98 µmol) e DBU (110,22 µl, 701,98 µmol). A solução foi agitada durante 6 horas, em temperatura ambiente, em seguida diluído com H2O e extraído com AcOEt (3 x 30 mL). A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura saturada, secada sobre MgSO4, filtrada, concentrada e purificada em 15 g de sílica gel (Eluição por gradiente de DCM/iPrOH) para fornecer 100 mg de composto 39 como um sólido branco (40 %).

[000462] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,80 (s, 9 H); 0,97 (s, 3 H); 1,03 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,04 (s, 3 H); 1,28 (d, J = 14,5 Hz, 1 H); 1,69 (dd, J = 10,7 e 14,5 Hz, 1 H); 1,84 (m, 1 H); 2,28 (m, 1 H); 2,62 (m, 2 H); 2,84 (d, J = 12,8 Hz, 1 H); 2,93 a 3,03 (m, 2 H); 3,22 a 3,34 (m parcialmente mascarado, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,92 (s amplo, 1 H); 4,17 (m, 1 H); 4,40 a 4,49 (m, 3 H); 5,10 (m, 1 H); 5,80 (d, J = 15,8 Hz, 1 H); 6,39 (ddd, J = 3,8, 11,7 e 15,8 Hz, 1 H); 7,03 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,16 (dd, J = 2,2 e 8,7 Hz, 1 H); 7,28 (d, J = 2,1 Hz, 1 H); 7,32 (d, J = 8,3 Hz, 2 H); 7,39 (d, J = 8,3 Hz, 2 H); 7,41 (m, 1 H); 8,00 (d, J = 9,1 Hz, 1 H); 8,36 (d, J = 8,2 Hz, 1H). LCMS (A1): ES m/z = 735 [M-H]-; m/z = 737 [M+H]+; tR = 1,54 minutos.

Exemplo 5: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(aminometil)fenil) oxiran-2-il)etil)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6-dimetil-3-neopentil-1- oxa-4,8,11 -triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000463] Em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 39 (100 mg, 122,07 µmol) em DCM (2,5 mL) e MeOH (2,5 mL) uma adicionada gota a gota uma solução de TCEP (38,88 mg, 134,28 µmol) em H2O (500 µL). O meio de reação foi agitado durante 24 horas em temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com H2O e NaHCO3 saturado, extraída com DCM (3 x 10 mL). A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura saturada, secada sobre MgSO4, filtrada e concentrada para fornecer 73 mg de exemplo 5 como um sólido branco (84%) usado sem outra purificação na etapa seguinte.

[000464] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,82 (s, 9 H); 0,97 (s, 3 H); 1,03 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,04 (s, 3 H); 1,29 (d, J = 14,4 Hz, 1 H); 1,70 (dd, J = 10,2 e 14,4 Hz, 1 H); 1,80 (m, 1 H); 2,02 (m amplo, 2 H); 2,25 (m, 1 H); 2,62 (m, 2 H); 2,83 (d, J = 13,0 Hz, 1 H); 2,93 (dd, J = 2,2 e 7,8 Hz, 1 H); 2,99 (dd, J = 3,4 e 14,5 Hz, 1 H); 3,23 a 3,35 (m parcialmente mascarado, 1 H); 3,71 (s, 2 H); 3,80 (s, 3 H); 3,88 (d, J = 2,2 Hz, 1 H); 4,17 (ddd, J = 3,5, 8,5 e 11,5 Hz, 1 H); 4,41 (m, 1 H); 5,09 (m, 1 H); 5,79 (d, J = 15,7 Hz, 1 H); 6,39 (ddd, J = 3,7, 11,4 e 15,7 Hz, 1 H); 7,05 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,16 (dd, J = 2,3 e 8,7 Hz, 1 H); 7,22 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,28 (d, J = 2,3 Hz, 1 H); 7,34 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,40 (d, J = 10,3, 1 H); 8,02 (d, J = 8,9 Hz, 1 H); 8,38 (d, J = 8,2 Hz, 1H). LCMS (A1): ES m/z = 709 [M-H]-; m/z = 711 [M+H]+; tR = 0,86 minuto. Composto 40: ((S)-1 -(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R, 16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6-dimetil-3-neopentil-2,5,9,12- tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16-il)etil)oxiran-2- il)benzil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2- il)carbamato de (9H-fluoren-9-il)metila

[000465] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo foram introduzidos o exemplo 5 (73 mg, 82,10 µmol) e DMF (1 mL), seguidos por FmocValAla (50,55 mg, 123,16 µmol), HOBt (17,75 mg, 131,37 µmol), DCM (10 mL) e EDC (14,53 µl, 82,10 µmol). A solução foi agitada durante 4 horas, em temperatura ambiente, em seguida diluído com H2O (10 mL) e extraído com DCM (3 x 20 mL). A camada orgânica foi separada, lavada com H2O, secada sobre MgSO4, filtrada, concentrada e purificada em 15 g de sílica gel (Eluição por gradiente de DCM/iPrOH) para fornecer 90 mg de composto 40 como um sólido incolor (99 %).

[000466] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,80 (s, 9 H); 0,84 (d, J = 7,1 Hz, 3 H); 0,86 (d, J = 7,1 Hz, 3 H); 0,93 (s, 3 H); 1,02 (d, J = 7,1 Hz, 3 H); 1,04 (s, 3 H); 1,24 (d, J = 7,3 Hz, 3 H); 1,29 (d, J = 14,5 Hz, 1 H); 1,70 (dd, J = 10,5 e 14,5 Hz, 1 H); 1,81 (m, 1 H); 1,99 (m, 1 H); 2,25 (m, 1 H); 2,60 (m, 2 H); 2,82 (d, J = 13,0 Hz, 1 H); 2,91 (dd, J = 1,9 e 7,6 Hz, 1 H); 2,99 (dd, J = 3,4 e 14,5 Hz, 1 H); 3,29 (m, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,88 (d, J = 1,9 Hz, 1 H); 3,90 (m, 1 H); 4,16 (ddd, J = 3,4, 8,0 e 11,8 Hz, 1 H); 4,20 a 4,35 (m, 6 H); 4,41 (m, 1 H); 5,09 (m, 1 H); 5,79 (d, J = 15,7 Hz, 1 H); 6,39 (ddd, J = 3,7, 11,6 e 15,7 Hz, 1 H); 7,05 (d, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,15 (dd, J = 2,5 e 8,6 Hz, 1 H); 7,21 (d, J = 8,5 Hz, 2 H); 7,24 (d, J = 8,5 Hz, 2 H); 7,28 (d, J = 2,5 Hz, 1 H); 7,32 (t, J = 7,9 Hz, 2 H); 7,38 a 7,47 (m, 4 H); 7,73 (t, J = 7,9 Hz, 2 H); 7,89 (d, J = 7,9 Hz, 2 H); 8,03 (d, J = 9,1 Hz, 1 H); 8,05 (d, J = 7,9 Hz, 1 H); 8,39 (m, 2 H). LCMS (A1): ES m/z = 1103 [M+H]+; m/z = 1147 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,71 minutos. Composto 41: (S)-2-amino-N-((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1- ((3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6-dimetil-3-neopentil- 2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16- il)etil)oxiran-2-il)benzil)amino)-1-oxopropan-2-il)-3-metilbutanamida

[000467] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, foi introduzido composto 40 (104 mg, 76,65 µmol) em DCM (5 mL) seguido por piperidina (138,87 µl, 1,40 mmol). A solução foi agitada durante 5 horas, em temperatura ambiente, em seguida concentrada e purificada em 10 g de sílica gel (DCM/MeOH/H2O de eluição por gradiente) para fornecer 50 mg de composto 41 como um sólido incolor (60 %).

[000468] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,76 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,81 (s, 9 H); 0,88 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,97 (s, 3 H); 1,02 (d, J = 7,1 Hz, 3 H); 1,04 (s, 3 H); 1,22 (d, J = 7,3 Hz, 3 H); 1,29 (d, J = 14,6 Hz, 1 H); 1,66 (m amplo, 2 H); 1,70 (dd, J = 10,6 e 14,6 Hz, 1 H); 1,81 (m, 1 H); 1,92 (m, 1 H); 2,25 (m, 1 H); 2,60 (m, 2 H); 2,83 (d, J = 13,0 Hz, 1 H); 2,93 (dd, J = 1,9 e 7,4 Hz, 1 H); 2,99 (m, 2 H); 3,28 (dd, J = 10,4 e 13,0 Hz, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,89 (d, J = 1,9 Hz, 1 H); 4,16 (ddd, J = 3,2 e 8,2 et 11,8 Hz, 1 H); 4,29 (d, J = 6,0 Hz, 2 H); 4,34 (m, 1 H); 4,41 (m, 1 H); 5,09 (m, 1 H); 5,79 (dd, J = 1,7 e 15,5 Hz, 1 H); 6,38 (ddd, J = 3,8, 11,3 e 15,5 Hz, 1 H); 7,04 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,16 (dd, J = 2,2 e 8,7 Hz, 1 H); 7,25 (m, 4 H); 7,29 (d, J = 2,2 Hz, 1 H); 7,40 (d, J = 10,4 Hz, 1 H); 8,02 (d, J = 9,1 Hz, 1 H); 8,08 (d large, J = 7,7 Hz, 1 H); 8,39 (d, J = 8,2 Hz, 1 H); 8,45 (t, J = 6,0 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 441 2+ - + - [M+2H] ; m/z = 879 [M-H]-; m/z = 881 [M+H] ; m/z = 925 [M-H+HCO2H]-; tR = 0,99 minuto. Composto 42: ácido 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1- ((3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metóxi-benzil)-6,6-dimetil-3-neopentil- 2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16- il)etil)oxiran-2-il)benzil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1- oxobutan-2-il)amino)-5-oxopentanoico

[000469] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, foi introduzido composto 41 (50 mg, 51,05 µmol) em DCM (10 mL) seguido por anidrido glutárico (10,48 mg, 91,89 µmol). O meio de reação foi agitado durante 2 horas em temperatura ambiente, concentrado e purificado em 10 g de sílica gel (DCM/MeOH/H2O de eluição por gradiente) para fornecer 42 mg de composto 42 como um sólido incolor (82 %).

[000470] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,80 (s, 9 H); 0,82 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,85 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,97 (s, 3 H); 1,02 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,04 (s, 3 H); 1,23 (d, J = 7,2 Hz, 3 H); 1,29 (d, J = 14,2 Hz, 1 H); 1,70 (m, 3 H); 1,81 (m, 1 H); 1,96 (m, 1 H); 2,18 a 2,25 (m, 5 H); 2,61 (m, 2 H); 2,83 (d, J = 13,0 Hz, 1 H); 2,93 (dd, J = 2,0 e 7,4 Hz, 1 H); 3,00 (dd, J = 3,1 e 14,5 Hz, 1 H); 3,29 (dd, J = 10,4 e 13,0 Hz, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,89 (d, J = 2,0 Hz, 1 H); 4,16 (m, 2 H); 4,25 a 4,31 (m, 3 H); 4,42 (m, 1 H); 5,09 (m, 1 H); 5,79 (dd, J = 1,9 e 15,5 Hz, 1 H); 6,39 (ddd, J = 3,8, 11,6 et 15,5 Hz, 1 H); 7,05 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,15 (dd, J = 2,1 e 8,7 Hz, 1 H); 7,23 (m, 4 H); 7,28 (d, J = 2,1 Hz, 1 H); 7,40 (d, J = 10,4 Hz, 1 H); 7,83 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 8,02 (m, 2 H); 8,35 (t, J = 6,1 Hz, 1 H); 8,39 (d, J = 8,0 Hz, 1 H); 12,04 (m amplo, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 498 [M+2H]2+; m/z = 993 [M-H]-; m/z = 995 [M+H]+; tR = 1,27 minutos.

Exemplo 6: 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10- (3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6-dimetil-3-neopentil-2,5,9,12-tetraoxo-1- oxa-4,8,11 -triazaciclo-hexadec-13-en-16-il)etil)oxiran-2-il)benzil) amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-5- oxopentanoato de 2,5-dioxopirrolidin-1-ila

[000471] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, foram introduzidos composto 42 (23 mg, 23,10 µmol) em DCM (5 mL), seguidos por DSC (8,29 mg, 32,34 µmol) e DIEA (5,63 µL, 32,34 µmol). O meio de reação foi agitado durante 2 horas em temperatura ambiente. Após este tempo, 2 mg de DSC, 1 µL de DIEA e DCM (2 mL) foram adicionados e agitados durante 1 hora em temperatura ambiente. O solvente foi removido e o resíduo cru foi purificado por cromatografia rápida em 10 g de sílica gel (Eluição por gradiente de DCM/iPrOH) para fornecer 20 mg de exemplo 6 como um sólido incolor (79%).

[000472] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,80 (s, 9 H); 0,82 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,85 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,97 (s, 3 H); 1,02 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,04 (s, 3 H); 1,23 (d, J = 7,2 Hz, 3 H); 1,30 (d, J = 14,2 Hz, 1 H); 1,70 (dd, J = 10,7 e 14,7 Hz, 1 H); 1,81 (m, 3 H); 1,97 (m, 1 H); 2,21 a 2,32 (m, 3 H); 2,61 (m, 2 H); 2,68 (t, J = 7,8 Hz, 2 H); 2,80 (s amplo, 4 H); 2,83 (d, J = 13,0 Hz, 1 H); 2,94 (dd, J = 2,0 et 7,6 Hz, 1 H); 3,00 (dd, J = 3,4 e 14,9 Hz, 1 H); 3,28 (dd, J = 10,5 e 13,0 Hz, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,88 (d, J = 2,0 Hz, 1 H); 4,16 (m, 2 H); 4,23 a 4,31 (m, 3 H); 4,42 (m, 1 H); 5,10 (m, 1 H); 5,79 (dd, J = 1,9 e 15,3 Hz, 1 H); 6,39 (ddd, J = 3,8, 11,4 e 15,3 Hz, 1 H); 7,05 (d, J = 8,8 Hz, 1 H); 7,16 (dd, J = 2,2 e 8,8 Hz, 1 H); 7,23 (m, 4 H); 7,28 (d, J = 2,2 Hz, 1 H); 7,40 (d, J = 10,5 Hz, 1 H); 7,89 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 8,02 (d, J = 9,1 Hz, 1 H); 8,06 (d, J = 7,5 Hz, 1 H); 8,34 (t, J = 6,1 Hz, 1 H); 8,39 (d, J = 8,1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 546,5 [M+2H]2+; m/z = 1090 [M-H]-; m/z = 1092 [M+H]+; m/z = 1136 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,34 minutos.

Exemplo 7: mAb-Ex6

[000473] O método geral descrito previamente foi usado para a preparação de exemplo 7. 60 mg de hu2H11_R35-74 foram reagidos com 233 µL de uma solução a 10,6 mM de exemplo 6 em DMA (5 equivalentes) durante 2 horas. Após purificação em SuperDex 200 pg em DPBS pH 6,5 + 20% de NMP, concentração em Amicon Ultra-15, permuta de tampão em NAP-25 em tampão B pH 6,5 + 5% de NMP e filtração em Steriflip, 39 mg de exemplo 7 foram obtidos como uma solução límpida e incolor em uma concentração de 1,98 mg/mL com um DAR de 4,1 (HRMS), uma pureza monomérica de 100 % e uma produção global de 66%.

[000474] SEC-HRMS: espectro para ADC intacto na Figura 2; m/z = 149370 (mAb nu); m/z = 150357 (D1); m/z = 151330 (D2); m/z = 152307 (D3); m/z = 153285 (D4); m/z = 154262 (D5); m/z = 155238 (D6); m/z = 156222 (D7). Síntese dos exemplos 8 a 10 : estereoisômero 1 de amina benzílica de 7-Me-aza-C52, éster de NHS de estereômero de amina benzílica de glutaril-Val-Ala-7-Me-aza-C52 1 e ADC correspondente Exemplo Composto 43: 6-(3-cloro-4-metoxibenzil)-13-isobutil-2,2,9,10, 10-pentametil-4,7,11-trioxo-3-oxa-5,8,12-triazatetradecan-14-oato de (6R,13S)-(1E,3R,4S,6E)-1-(4-(azidometil)fenil)-8-(terc-butóxi)-3-metil- 8-oxo-octa-1,6-dien-4-íla

[000475] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, foi introduzido fragmento BC2 (1,10 g, 2,48 mmol) em DMF (5 mL), seguido por HATU (950 mg, 2,5 mmol) e HOAt (340 mg, 2,5 mmol). A mistura foi agitada durante 30 minutos em temperatura ambiente, em seguida o fragmento AD1 (1,24 g, 2,18 mmol) e DIEA (1,2 mL , 6,87 mmol) foram adicionados. A solução amarela foi agitada durante 16 horas em temperatura ambiente, saciada com H2O e extraída com AcOEt (3 x 30 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com H2O, salmoura saturada, secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas e purificadas em 200 g de sílica gel (eleuição por gradiente de heptano/AcOEt) para fornecer 1,55 g de composto 43 como um merengue branco (77%).

[000476] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): mistura de diastereoisômero de 55/45; 0,82 a 0,89 (m, 6 H); 0,85 (d, J = 7,0 Hz, 1,65 H); 0,91 (d, J = 7,0 Hz, 1,35 H); 0,99 a 1,09 (m, 9 H); 1,30 (s, 9 H); 1,40 (s, 10 H); 1,50 a 1,70 (m, 2 H); 2,38 a 2,59 (m parcialmente mascarado, 3 H); 2,68 (m, 1 H); 2,84 (m, 1 H); 3,79 (s, 1,35 H); 3,81 (s, 1,65 H); 4,00 a 4,18 (m, 2 H); 4,30 (m, 1 H); 4,40 (s amplo, 2 H); 4,92 (m, 1 H); 5,81 (d, J = 15,7 Hz, 1 H); 6,18 (dd, J = 8,3 e 16,1 Hz, 1 H); 6,45 (d, J = 16,1 Hz, 1 H); 6,71 (td, J = 7,3 e 15,7 Hz, 1 H); 6,94 (d, J = 8,1 Hz, 0,45 H); 6,96 (d, J = 8,1 Hz, 0,55 H); 7,04 (split d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,19 (d amplo, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,30 (d, J = 7,8 Hz, 2 H); 7,32 (s amplo, 1 H); 7,41 (d, J = 8,7 Hz, 2 H); 7,52 (d, J = 10,1 Hz, 0,45 H); 7,59 (d, J = 10,1 Hz, 0,55 H); 7,74 (m, 1 H). LCMS (A1): mistura de diastereoisômero de 55/45; ES m/z = 895 [M+H]+; m/z = 917 [M+Na]+; tR = 6,94-6,98 minutos. Compostos 44 & 45: (3S,10R,16S,E)-16-((R,E)-4-(4-(azido- metil)fenil)but-3-en-2-il)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-3-isobutil-6,6,7- trimetil-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000477] Os compostos 44 & 45 foram obtidos em duas etapas.

[000478] Etapa 1: a 0°C, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 43 (1,50 g, 1,67 mmol) em 11 mL de DCM foram adicionados TFA (2,6 mL, 34,65 mmol) e 100 µL de H2O. A mistura foi agitada durante 15 minutos a 0°C e em temperatura ambiente durante 6,5 horas. O meio de reação foi, em seguida, evaporado em vácuo e coevaporado na presença de tolueno para fornecer 1,7 g de intermediário desprotegido como um sólido laranja.

[000479] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): mistura de diastereoisômero de 55/45; 0,70 a 0,80 (m, 7,65 H); 0,90 (s, 1,35 H); 0,95 (m, 3 H); 1,01 a 1,09 (m, 6 H); 1,38 a 1,68 (m, 3 H); 2,40 a 2,60 (m parcialmente mascarado, 3 H); 2,80 a 3,02 (m, 2 H); 3,81 (s, 1,35 H); 3,82 (s, 1,65 H); 3,96 a 4,08 (m, 1 H); 4,18 (m, 1 H); 4,28 (m, 1 H); 4,41 (s, 2 H); 4,91 (m, 1 H); 5,83 (d, J = 15,7 Hz, 0,45 H); 5,85 (d, J = 15,7 Hz, 0,55 H); 6,18 (m, 1 H); 6,43 (d, J = 16,1 Hz, 0,45 H); 6,46 (d, J = 16,1 Hz, 0,55 H); 6,74 (m, 1 H); 7,08 a 7,20 (m, 2 H); 7,30 (m mascarado, 0,45 H); 7,32 (d, J = 7,8 Hz, 2 H); 7,37 (d, J = 2,0 Hz, 0,55 H); 7,42 (m, 2 H); 7,76 (d, J = 8,00 Hz, 0,45 H); 7,79 (d, J = 8,00 Hz, 0,55 H); 7,86 (d, J = 10,1 Hz, 0,55 H); 8,00 (d, J = 10,1 Hz, 0,45 H); 8,11 (m amplo, 3 H); 12,22 (m amplo, 1 H). LCMS (A1): mistura de diastereoisômero de 55/45; ES m/z = 737 [M-H]-; m/z = 739 [M+H]+; tR = 1,07 a 1,09 minuto.

[000480] Etapa 2: em um frasco de fundo redondo, a uma solução de intermediário desprotegido (1,43 g, 1,68 mmol) em 25 mL de CH3CN foram adicionados DIEA (3 mL, 16,23 mmol), HOAt (250,91 mg, 1,84 mmol) e HATU (700,91 mg, 1,84 mmol). A mistura foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente. Em seguida, o solvente foi removido, o meio diluído com AcOEt (200 mL), neutralizado com ácido cítrico a 0,5 M e HCl. A camada orgânica foi separada, lavada com NaHSO3 saturado, NaHCO3 saturado, salmoura saturada, secada sobre MgSO4, filtrada, concentrada e purificada em 100 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 640 mg de compostos 44 & 45 como um sólido amarelo (53%).

[000481] Diastereoisômeros em C7 foram separados por cromatografia líquida quiral que foi realizada em uma coluna de 76,5 x 350 mm embalada com 1,1 kg de Whelk 01 SS a 10 µm (4-(3,5- dinitrobenzamido)tetra-hidrofenantreno, Regis Technologies) usando eluição isocrática com heptano/EtOH de 50:50. Após concentração, 210 mg de composto 44 (estereoisômero 1) foram obtidos como um sólido branco (17%) e 236 mg de composto 45 (estereoisômero 2) foram obtidos como um sólido branco (19%).

Composto 44 (estereoisômero 1):

[000482] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,60 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,62 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,98 (s, 3 H); 1,05 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,10 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,14 (s, 3 H); 1,18 (m, 1 H); 1,40 a 1,54 (m, 2 H); 2,24 (m, 1 H); 2,48 a 2,61 (m parcialmente mascarado, 2 H); 2,65 (dd, J = 11,8 e 14,5 Hz, 1 H); 3,04 (dd, J = 3,2 e 14,5 Hz, 1 H); 3,55 (m, 1 H); 3,81 (s, 3 H); 4,19 (m, 2 H); 4,40 (s, 2 H); 4,96 (m, 1 H); 5,91 (dd, J = 1,4 e 15,5 Hz, 1 H); 6,13 (dd, J = 8,9 e 16,1 Hz, 1 H); 6,40 (ddd, J = 3,9, 11,3 e 15,5 Hz, 1 H); 6,46 (d, J = 16,1 Hz, 1 H); 7,03 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,19 (dd, J = 2,1 e 8,7 Hz, 1 H); 7,30 (d, J = 2,1 Hz, 1 H); 7,32 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,41 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,87 (d, J = 8,9 Hz, 1 H); 8,36 (d, J = 9,9 Hz, 1 H); 8,40 (d, J = 8,0 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 719 [M-H]-; m/z = 721 [M+H]+; tR = 1,61 minutos

Composto 45 (estereoisômero 2):

[000483] RMN 1H (d em ppm, DMSO-d6): 0,59 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,67 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,88 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 1,03 (s, 3 H); 1,10 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,19 (s, 3 H); 1,21 (m, 1 H); 1,49 a 1,60 (m, 2 H); 2,23 (m, 1 H); 2,46 a 2,61 (m parcialmente mascarado, 2 H); 2,71 (dd, J = 11,3 e 14,5 Hz, 1 H); 2,98 (dd, J = 3,7 e 14,5 Hz, 1 H); 3,48 (m, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 4,05 (m, 1 H); 4,11 (ddd, J = 3,7, 7,6 e 11,3 Hz, 1 H); 4,40 (s, 2 H); 4,90 (m, 1 H); 5,93 (d, J = 15,7 Hz, 1 H); 6,14 (dd, J = 8,7 e 16,1 Hz, 1 H); 6,47 (d, J = 16,1 Hz, 1 H); 6,51 (ddd, J = 5,2, 10,3 e 15,5 Hz, 1 H); 7,02 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,21 (dd, J = 2,4 e 8,7 Hz, 1 H); 7,31 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,37 (d, J = 2,4 Hz, 2 H); 7,41 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,87 (d, J = 6,9 Hz, 1 H); 7,89 (d, J = 9,0 Hz, 1 H); 8,51 (d, J = 7,6 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 719 [M-H]-; m/z = 721 [M+H]+; tR = 1,61 minuto. Composto 46: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-(3-(4-(azidometil) fenil)oxiran-2-il)etil)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-3-isobutil-6,6,7-trimetil- 1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000484] A 0°C, sob argônio, em um frasco de fundo redondo a uma solução de composto 44 (154 mg, 213,51 µmol) em DCM (10 mL) foi adicionado m -CPBA (80 mg, 324,51 µmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 5 dias. A mistura reacional foi diluída com DCM (15 mL) e agitada durante 15 minutos com NaHCO3 saturado (6 mL) e Na2S2O3 (6 mL). A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura saturada (2 x 3 mL), secada sobre MgSO4, filtrada e concentrada para fornecer 150 mg de composto 46 como um sólido branco (quantidade).

[000485] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): mistura de diastereoisômero de 60/40; 0,75 (d, J = 6,8 Hz, 1,8 H); 0,79 (d, J = 6,8 Hz, 3 H); 0,85 (d, J = 6,8 Hz, 1,2 H); 0,95 a 0,99 (m, 4,2 H); 1,02 a 1,09 (m, 4,8 H); 1,15 (s, 1,8 H); 1,18 (s, 1,2 H); 1,20 (m, 0,6 H); 1,38 (m, 0,4 H); 1,59 a 1,62 (m, 2 H); 1,80 (m, 0,6 H); 1,89 (m, 0,4 H); 2,25 (m, 0,6 H); 2,40 a 2,71 (m parcialmente mascarado, 2,4 H); 2,96 a 3,08 (m, 2 H); 3,54 (m, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,82 (d, J = 1,9 Hz, 0,4 H); 3,92 (d, J = 1,9 Hz, 0,6 H); 4,14 a 4,29 (m, 2 H); 4,40 a 4,50 (m, 2 H); 5,11 (m, 1 H); 5,85 (dd, J = 2,0 e 15,5 Hz, 0,6 H); 5,95 (dd, J = 2,0 e 15,5 Hz, 0,4 H); 6,38 (m, 1 H); 7,04 (split d, J = 8,8 Hz, 1 H); 7,16 (dd, J = 2,2 e 8,8 Hz, 0,6 H); 7,19 (dd, J = 2,2 e 8,8 Hz, 0,4 H); 7,28 (d, J = 2,2 Hz, 0,6 H); 7,30 (d, J = 2,2 Hz, 0,4 H); 7,30 a 7,40 (m, 4 H); 7,89 (d, J = 8,1 Hz, 0,6 H); 7,92 (d, J = 8,1 Hz, 0,4 H); 8,29 (d, J = 10,0 Hz, 0,6 H); 8,32 (d, J = 8,1 Hz, 0,6 H); 8,35 (d, J = 10,0 Hz, 0,4 H); 8,40 (d, J = 8,1 Hz, 0,4 H). LCMS (A1): ES m/z = 735 [M-H]-; m/z = 737 [M+H]+; tR = 1,52 minuto.

Exemplo 8: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-(3-(4-(aminometil)fenil)oxiran-2- il)etil)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-3-isobutil-6,6,7-trimetil-1-oxa-4,8,11 - triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000486] A 0°C, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 46 (60 mg, 81,38 µmol) em DCM (3 mL) e MeOH (3 mL) foi adicionada gota a gota uma solução de TCEP (38,9 mg, 134,3 µmol) em 1 mL de H2O. A mistura reacional foi agitada durante em temperatura ambiente durante 35 horas, em seguida diluída com DCM (15 mL) e NaHCO3 saturado. Após agitação durante 10 minutos, a camada orgânica foi separada, lavada com salmoura saturada, secada sobre MgSO4, filtrada, concentrada em vácuo e purificada em 5 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 23 mg de exemplo 8 como um sólido branco (40 %).

[000487] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): mistura de diastereoisômero de 60/40; 0,77 (d, J = 7,0 Hz, 1,8 H); 0,81 (split d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,88 (d, J = 7,0 Hz, 1,4 H); 0,95 (d, J = 7,0 Hz, 1,2 H); 0,98 (s, 1,8 H); 1,00 (s, 1,2 H); 1,02 a 1,09 (m, 4,8 H); 1,17 (s, 1,8 H); 1,19 (s, 1,2 H); 1,22 (m, 0,6 H); 1,40 (m, 0,4 H); 1,51 a 1,64 (m, 2 H); 1,78 (m, 0,6 H); 1,89 (m, 0,4 H); 2,28 (m, 0,6 H); 2,40 a 2,71 (m parcialmente mascarado, 2,4 H); 2,96 (dd, J = 2,2 e 7,5 Hz, 0,6 H); 2,99 (dd, J = 2,2 e 7,5 Hz, 0,4 H); 3,03 (m, 1 H); 3,55 (m, 1 H); 3,70 (s, 1,2 H); 3,72 (s, 1,8 H); 3,78 (d, J = 2,2 Hz, 0,4 H); 3,81 (s, 3 H); 3,88 (d, J = 2,2 Hz, 0,6 H); 4,12 a 4,30 (m, 2 H); 5,12 (m, 1 H); 5,84 (dd, J = 1,8 e 15,6 Hz, 0,6 H); 5,96 (dd, J = 1,8 e 15,6 Hz, 0,4 H); 6,39 (m, 1 H); 7,05 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,16 a 7,38 (m, 6 H); 7,90 (d, J = 8,1 Hz, 0,6 H); 7,93 (d, J = 8,1 Hz, 0,4 H); 8,28 (d, J = 10,0 Hz, 0,6 H); 8,32 (d, J = 8,1 Hz, 0,6 H); 8,37 (d, J = 10,0 Hz, 0,4 H); 8,41 (d, J = 8,1 Hz, 0,4 H). LCMS (A1): ES m/z = 709 [M-H]-; m/z = 711 [M+H]+; tR = 0,86 minuto. Composto 47: ((S)-1-(((S)-1-((4-(3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10- (3-cloro-4-metoxibenzil)-3-isobutil-6,6,7-trimetil-2,5,9,12-tetraoxo-1- oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16-il)etil)oxiran-2- il)benzil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2- il)carbamato de (9H-fluoren-9-il)metila

[000488] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo foram introduzidos exemplo 8 (110 mg, 154,65 µmol) e DMF (2 mL), seguidos por FmocValAla (90 mg, 219 µmol), HOBt (30 mg, 222 µmol), DCM (10 mL) e EDC (35 µl, 197,52 µmol). A solução foi agitada durante em temperatura ambiente durante 3 horas e 30 minutos, em seguida saciada com H2O (10 mL) e extraída por DCM (3 x 10 mL). A camada orgânica foi separada, lavada com NaHCO3 saturado, salmoura saturada, secada sobre MgSO4, filtrada, concentrada na presença de tolueno e purificada em 15 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 49 mg de composto 47 como um sólido branco (46 %).

[000489] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): mistura de diastereoisômero de 60/40; 0,76 (d, J = 7,0 Hz, 1,8 H); 0,80 (m, 3 H); 0,82 a 0,89 (m, 6,4 H); 0,95 (d, J = 7,0 Hz, 1,2 H); 0,98 (s, 1,8 H); 1,00 (s, 1,2 H); 1,02 a 1,09 (m, 4,8 H); 1,17 (s, 1,8 H); 1,19 (s, 1,2 H); 1,20 a 1,32 (m, 3,6 H); 1,40 (m, 0,4 H); 1,51 a 1,63 (m, 2 H); 1,78 (m, 0,6 H); 1,85 (m, 0,4 H); 2,00 (m, 1 H); 2,27 (m, 0,6 H); 2,40 a 2,72 (m parcialmente mascarado, 2,4 H); 2,96 (m, 1 H); 3,04 (m, 1 H); 3,55 (m, 1 H); 3,77 (d, J = 2,2 Hz, 0,4 H); 3,81 (s, 3 H); 3,88 (d, J = 2,2 Hz, 0,6 H); 3,90 (m, 1 H); 4,15 a 4,38 (m, 6 H); 5,12 (m, 1 H); 5,85 (dd, J = 1,8 e 15,6 Hz, 0,6 H); 5,95 (dd, J = 1,8 e 15,6 Hz, 0,4 H); 6,39 (m, 1 H); 7,05 (split d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,15 a 7,48 (m, 19 H); 7,73 (t, J = 8,1 Hz, 2 H); 7,90 (d, J = 8,1 Hz, 2,6 H); 7,92 (d, J = 8,1 Hz, 0,4 H); 8,05 (d, J = 8,1 Hz, 1 H); 8,25 a 8,45 (m, 3 H). LCMS (A1): ES m/z = 552 [M+2H]2+; m/z = 1103 [M+H]+; m/z = 1147 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,55 a 1,57 minuto. Composto 48: (2S)-2-amino-N-((2S)-1-((4-((2R,3R)-3-((1S)-1- ((3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-3-isobutil-6,6,7-trimetil- 2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16- il)etil)oxiran-2-il)benzil)amino)-1-oxopropan-2-il)-3-metilbutanamida

[000490] Em um frasco de fundo redondo, piperidina (60 µL, 600,6 µmol) foi adicionado a uma solução de composto 47 (50 mg, 45,30 µmol) em DCM (5 mL). A mistura resultante foi agitada durante 24 horas em temperatura ambiente, concentrada em vácuo e purificada em 5 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 70 mg de afa e beta epóxidos.

[000491] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): mistura de diastereoisômero de 60/40; 0,75 (d, J = 7,0 Hz, 1,8 H); 0,80 (m, 3 H); 0,82 a 0,92 (m, 6,4 H); 0,96 (d, J = 7,0 Hz, 1,2 H); 0,98 (s, 1,8 H); 1,00 (s, 1,2 H); 1,02 a 1,09 (m, 4,8 H); 1,15 (s, 1,8 H); 1,19 (s, 1,2 H); 1,20 a 1,42 (m, 4 H); 1,50 a 1,70 (m mascarado, 2 H); 1,78 (m, 0,6 H); 1,85 (m, 0,4 H); 2,00 (m, 1 H); 2,25 (m, 0,6 H); 2,40 a 2,72 (m parcialmente mascarado, 2,4 H); 2,92 a 3,08 (m, 3 H); 3,54 (m, 1 H); 3,79 (d, J = 2,1 Hz, 0,4 H); 3,81 (s, 3 H); 3,88 (d, J = 2,1 Hz, 0,6 H); 4,13 a 4,41 (m, 6 H); 5,12 (m, 1 H); 5,85 (d, J = 15,4 Hz, 0,6 H); 5,93 (d, J = 15,4 Hz, 0,4 H); 6,38 (m, 1 H); 7,05 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,15 a 7,32 (m, 6 H); 7,90 (d, J = 8,3 Hz, 0,6 H); 7,93 (d, J = 8,3 Hz, 0,4 H); 8,10 a 8,55 (m, 7 H). LCMS (A1): ES m/z = 441 [M+2H]2+; m/z = 879 [M-H]-; m/z = 881 [M+H]+; m/z = 925 [M-H+HCO2H]-; tR = 0,92 minuto.

[000492] Alfa e beta epóxidos foram separados por cromatografia líquida quiral que foi realizada em um 76 x 350 mm de coluna embalada com 1,1 kg de 10 µm de Chiralpak AD (tris-3,5-dimetilfenilcarbamato de amilose revestido em um suporte de sílica gel, Chiral Technologies Europe) usando eluição isocrática com 70:30 heptano/EtOH. Após concentração, 28 mg de composto 48 foram obtidos como um sólido branco (70%) e 19 mg do alfa epóxido foram obtidos como um sólido branco.

[000493] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,75 (d, J = 7,0 Hz, 6 H); 0,80 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,88 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,98 (s, 3 H); 1,03 (d, J = 7,0 Hz, 6 H); 1,17 (s, 3 H); 1,23 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,35 (m, 1 H); 1,50 a 1,68 (m, 2 H); 1,78 (m, 1 H); 1,91 (m, 1 H); 2,26 (m, 1 H); 2,58 a 2,70 (m, 2 H); 2,96 (dd, J = 1,9 e 7,7 Hz, 1 H); 2,99 (d, J = 4,8 Hz, 1 H); 3,02 (dd, J = 3,3 e 14,8 Hz, 1 H); 3,53 (m, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,89 (d, J = 1,9 Hz, 1 H); 4,10 a 4,23 (m, 3 H); 4,28 (d, J = 6,1 Hz, 2 H); 4,35 (m, 1 H); 5,11 (m, 1 H); 5,83 (dd, J = 1,9 e 15,2 Hz, 1 H); 6,37 (ddd, J = 4,0, 11,2 e 15,2 Hz, 1 H); 7,03 (d, J = 8,8 Hz, 1 H); 7,18 (dd, J = 2,4 e 8,8 Hz, 1 H); 7,26 (s, 4 H); 7,29 (d, J = 2,4 Hz, 1 H); 7,90 (d, J = 8,2 Hz, 1 H); 8,08 (d amplo, J = 7,7 Hz, 1 H); 8,29 (d, J = 10,1 Hz, 1 H); 8,33 (d, J = 8,2 Hz, 1 H); 8,46 (t, J = 6,7 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 441 [M+2H]2+; m/z = 879 [M-H]-; m/z = 881 [M+H]+; m/z = 925 [M-H+HCO2H]- ; tR = 0,92 minuto. Composto 49: ácido 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1- ((3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-3-isobutil-6,6,7-trimetil- 2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16- il)etil)oxiran-2-il)benzil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1- oxobutan-2-il)amino)-5-oxopentanoico

[000494] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, uma solução de anidrido glutárico (3,78 mg, 32,44 µmol) em DCM (4 mL) foi adicionada a uma solução de composto 48 (26 mg, 29,5 µmol) em DCM (9 mL). A mistura resultante foi agitada durante 2 horas em temperatura ambiente, concentrada em vácuo e purificada em 2,5 g de sílica gel (DCM/MeOH/H2O de eluição por gradiente) para fornecer 18 mg de composto 49 como um sólido branco (61%).

[000495] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,78 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,80 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,82 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,84 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,97 (s, 3 H); 1,03 (d, J = 7,0 Hz, 6 H); 1,15 (s, 3 H); 1,23 (d amplo, J = 7,0 Hz, 4 H); 1,49 a 1,61 (m, 2 H); 1,70 (m, 2 H); 1,78 (m, 1 H); 1,97 (m, 1 H); 2,20 (m, 4 H); 2,25 (m, 1 H); 2,62 (m, 2 H); 2,95 (m, 1 H); 3,02 (m, 1 H); 3,53 (m, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,88 (s, 1 H); 4,10 a 4,22 (m, 3 H); 4,24 a 4,31 (m, 3 H); 5,11 (m, 1 H); 5,83 (d, J = 15,7 Hz, 1 H); 6,36 (m, 1 H); 7,03 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,19 (d amplo, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,23 (m, 4 H); 7,29 (s amplo, 1 H); 7,87 (d, J = 8,9 Hz, 1 H); 7,90 (d, J = 8,1 Hz, 1 H); 8,06 (d large, J = 7,3 Hz, 1 H); 8,29 (d, J = 10,1 Hz, 1 H); 8,37 (m, 2 H); 12,0 (m amplo, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 993 [M-H]-; m/z = 995 [M+H]+; tR = 1,21 minuto.

Exemplo 9: 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10- (3-cloro-4-metoxibenzil)-3-isobutil-6,6,7-trimetil-2,5,9,12-tetraoxo-1- oxa-4,8,11 -triazaciclo-hexadec-13-en-16-il)etil)oxiran-2- il)benzil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2- il)amino)-5-oxopentanoato de 2,5-dioxopirrolidin-1-íla

[000496] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 49 (15 mg, 15,07 µmol) em DCM (5 mL) foram adicionados DSC (5,63 mg, 21,09 µmol) e DIEA (3,56 µL, 21,09 µmol). A mistura resultante foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente, concentrado em vácuo e purificada em 2,5 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 7,7 mg de exemplo 9 como um sólido branco (47 %).

[000497] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,78 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,80 (d, J = 6,7 Hz, 3 H); 0,82 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,85 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,99 (s, 3 H); 1,04 (d, J = 7,2 Hz, 6 H); 1,18 (s, 3 H); 1,26 (m, 4 H); 1,57 (m, 2 H); 1,79 (m, 1 H); 1,83 (m, 2 H); 1,99 (m, 1 H); 2,22 a 2,33 (m, 3 H); 2,60 à 2,71 (m, 4 H); 2,82 (s, 4 H); 2,97 (dd, J = 2,1 e 7,7 Hz, 1 H); 3,04 (dd, J = 3,4 e 14,7 Hz, 1 H); 3,55 (m, 1 H); 3,81 (s, 3 H); 3,89 (d, J = 2,1 Hz, 1 H); 4,19 (m, 3 H); 4,26 a 4,34 (m, 3 H); 5,12 (m, 1 H); 5,86 (dd, J = 2,0 e 15,7 Hz, 1 H); 6,38 (ddd, J = 3,8, 11,2 e 15,7 Hz, 1 H); 7,05 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,19 (dd, J = 2,2 e 8,7 Hz, 1 H); 7,26 (m, 4 H); 7,29 (d, J = 2,2 Hz, 1 H); 7,91 (m, 2 H); 8,09 (m, 1 H); 8,29 (d, J = 9,9 Hz, 1 H); 8,35 (m, 2 H). LCMS (A1): ES m/z = 1092 [M+H]+; m/z = 1136 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,26 minuto.

Exemplo 10: mAb-Ex9

[000498] O método geral descrito anteriormente foi usado para a preparação de exemplo 10. 60 mg de hu2H11_R35-74 foram reagidos com 198 µL de uma solução a 10,78 mM de exemplo 9 em DMA (5 equivalentes) durante 2 horas. Nesse tempo, 120 µL da solução de exemplo 9 (3 equivalentes) foram adicionados e o meio agitado durante 2 horas. Após purificação em SuperDex 200 pg em DPBS pH 6,5 + 20% de NMP, concentração em Amicon Ultra-15, permuta de tampão em PD-10 em tampão B pH 6,5 + 5% de NMP e filtração em Steriflip, 46 mg de exemplo 10 foram obtidos como uma solução límpida e incolor em uma concentração de 2,23 mg/mL com um DAR de 4,7 (HRMS), uma pureza monomérica de 99,2% e uma produção global de 78%.

[000499] SEC-HRMS: espectro para ADC intacto na Figura 3; m/z = 150345 (D1); m/z = 151319 (D2); m/z = 152297 (D3); m/z = 153274 (D4); m/z = 154251 (D5); m/z = 155222 (D6); m/z = 156202 (D7); m/z = 157183 (D8). Síntese dos exemplos 11 a 14: amina benzílica de 3-(S)-neopentil-7-Me- aza-C52 estereoisômero 1, éster de NHS de glutaril-Val-Ala-3-(S)- neopentil-7-Me-aza-C52 benzílico estereômero de amina 1 e Composto 50: 6-(3-cloro-4-metoxibenzil)-2,2,9,10,10-penta- metil-13-neopentil-4,7,11-trioxo-3-oxa-5,8,12-triazatetradecan-14-oato de (6R,13S)-(1E,3R,4S,6E)-8-(terc-butóxi)-1-(4-(hidroximetil)fenil)-3- metil-8-oxo-octa-1,6-dien-4-íla

[000500] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de fragmento BC2 (742 mg, 1,68 mmol) em DMF (20 mL) foram adicionados HATU (716 mg, 1,83 mmol) e HOAt (251 mg, 1,83 mmol). A mistura foi agitada durante 30 minutos em temperatura ambiente. Em seguida, uma solução de fragmento AD1 (730 mg, 1,59 mmol) em DMF (10 mL) e DIEA (981 µL, 5,56 mmol) foi adicionada. O meio de reação foi agitado durante 24 horas em temperatura ambiente. Após este tempo, o meio de reação foi diluído com gelo (200 g), extraído com AcOEt (4 x 200 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com H2O (80 mL), salmoura saturada (2 x 80 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas e purificadas por duas cromatografias rápidas sucessivas, a primeira aquela em 300 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) e a segunda aquela em 70 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 428 mg de composto 50 como uma espuma incolor (30%). Composto 51: Ácido (2E,5S,6R,7E)-5-(((2S)-2-(3-((R)-2- amino -3-(3-cloro-4-metoxifenil)-propanamido)-2,2-dimetilbutanamido)- 4,4-dimetilpentanoil)óxi)-8-(4-(hidroximetil)fenil)-6-metilocta-2,7- dienoico

[000501] Em um frasco de fundo redondo, foram introduzidos composto 50 (428 mg, 483,87 µmol) e DCM (27 mL). A solução foi resfriada a 0°C, em seguida TFA (8 mL, 106,62 mmol ) foi adicionado. A mistura foi agitada durante 1,5 hora em temperatura ambiente. O solvente foi removido e coevaporado sob pressão reduzida com tolueno (3 x 100 mL). O óleo cru foi diluído com 1:1 de AcOEt/H2O (75 mL) e neutralizado com NaOH a 2M (250 µL) até pH 6 a 7. A mistura foi agitada durante 6 horas em temperatura ambiente. As camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com AcOEt (3 x 50 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura saturada (2 x 15 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas para fornecer 374 mg de composto 51 como uma espuma incolor (quantidade). Composto 52: (3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)- 16-((R,E)-4-(4-(hidroximetil)-fenil)but-3-en-2-il)-6,6,7-trimetil-3- neopentil-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000502] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 51 (352 mg, 483,31 µmol) em CH3CN (60 mL) foram adicionados HATU (208 mg, 531,64 mmol), HOAt (73,09 mg, 531,64 µmol) e DIEA (244,52 µL, 1,45 mmol). O meio de reação foi agitado durante 45 minutos em temperatura ambiente. Após este tempo, o meio de reação foi neutralizado com ácido cítrico a 0,5 N até pH 4, concentrado parcialmente em vácuo e extraído com AcOEt (150 mL). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (10 mL), salmoura saturada (3 x 10 mL), secada sobre MgSO4, filtrada, concentrada e purificada por cromatografia rápida em 15 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 188 mg de composto 52 como uma espuma incolor (54 %). Composto 53: (3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)- 6,6,7-trimetil-3-neopentil-16-((R,E)-4-(4-(((tri- isopropilsilil)óxi)metil)fenil)but-3-en-2-il)-1-oxa-4,8,11-triazaciclo- hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000503] A 0°C, sob argônio, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 52 (188 mg, 264,68 µmol) em DCM (7 mL), foram adicionados 1H-imidazol (83,72 mg, 1,2 mmol) e clorotri-isopropilsilano a 1M (134,15 µl). O meio de reação foi agitado durante 5 horas em temperatura ambiente, em seguida saciado com NH4Cl saturado e agitado durante 15 minutos. As camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM (3 x 25 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com NaHSO4 a 1M (10 mL), NaHCO3 saturado (10 mL), salmoura saturada, secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia rápida em 10 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 137 mg de composto 53 como uma espuma incolor (59 %).

Exemplo 11: (3S,10R,16S,E)-10-(^cloro-4-metoxibenzil)-16-((S)-1- ((2R,3R)-3-(4-(hidroximetil)fenil)oxiran-2-il)etil)-6,6,7-trimetil-3- neopentil-1-oxa-4,8,11 -triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000504] Exemplo 11 foi preparado em duas etapas.

[000505] Etapa 1: a 0°C sob argônio, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 53 (137 mg, 158,78 µmol) em DCM (5,5 mL) foi adicionada uma solução de m -CPBA (50,66 mg, 205,51 µmol) em DCM (2 mL) e o meio de reação foi agitado durante 2 horas. Em seguida, 39 mg de m-CPBA foram adicionados duas vezes após 2 horas de agitação. Após 16 horas de agitação, a mistura foi saciada com NaHCO3 saturado (30 mL) e Na2S2O3 (30 mL), agitada durante 15 minutos e diluída com DCM (40 mL). As camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM (2 x 20 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura saturada (2 x 8 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas para fornecer 160 mg de alfa e beta epóxidos como um sólido incolor (quantidade).

[000506] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): mistura de diastereoisômero de 60/40; 0,80 a 0,91 (m, 12 H); 0,97 a 1,09 (m, 24 H); 1,12 a 1,21 (m, 6 H); 1,32 (d, J = 14,7 Hz, 0,6 H); 1,40 (d, J = 14,7 Hz, 0,4 H); 1,70 a 1,87 (m, 1 H); 1,90 (dd, J = 10,1 e 14,7 Hz, 0,4 H); 1,97 (dd, J = 10,1 e 14,7 Hz, 0,6 H); 2,28 (m, 0,6 H); 2,40 (m, 0,4 H); 2,55 a 2,79 (m, 2 H); 2,90 a 3,00 (m, 2 H); 3,44 (m, 1 H); 3,79 (d, J = 2,1 Hz, 0,4 H); 3,80 (s, 3 H); 3,90 (d, J = 2,1 Hz, 0,6 H); 4,03 a 4,22 (m, 2 H); 4,78 (s, 0,8 H); 4,80 (s, 1,2 H); 5,03 (m, 1 H); 5,90 (dd, J = 1,5 e 15,5 Hz, 0,6 H); 5,99 (dd, J = 1,5 e 15,5 Hz, 0,4 H); 6,40 a 6,55 (m, 1 H); 7,02 a 7,07 (m, 1 H); 7,13 a 7,38 (m, 6 H); 7,85 a 7,93 (m, 2 H); 8,40 (d, J = 7,3 Hz, 0,6 H); 8,51 (d, J = 7,3 Hz, 0,4 H). LCMS (A1): ES m/z = 880 [M-H]-; m/z = 882 [M+H]+; m/z = 926 [M-H+HCO2H]-; tR = 2,05 a 2,06 minutos.

[000507] Etapa 2: a 0°C sob argônio, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de alfa e beta epóxidos (177 mg, 200,53 µmol) em THF (7,5 mL) foi gota a gota adicionado TBAF a 1M (221 µL, 221 µmol). Após agitação durante 2 horas em temperatura ambiente, 50 µL de TBAF foram adicionados e agitados durante 3,5 horas. O meio de reação foi diluído com H2O (9 mL), agitado durante 10 minutos e extraído com DCM (3 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (3 x 8 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas para fornecer 210 mg de alfa e beta epóxidos como um sólido incolor (quantidade).

[000508] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): mistura de diastereoisômero de 60/40; 0,82 a 1,25 (m, 21 H); 1,32 (d, J = 14,5 Hz, 0,6 H); 1,42 (d, J = 14,5 Hz, 0,4 H); 1,80 (m, 1 H); 1,91 (dd, J = 10,0 e 14,5 Hz, 0,4 H); 1,98 (dd, J = 10,0 e 14,5 Hz, 0,6 H); 2,22 a 2,48 (m, 1 H); 2,55 a 2,78 (m, 2 H); 2,89 a 3,03 (m, 2 H); 3,44 (m, 1 H); 3,79 (d, J = 2,2 Hz, 0,4 H); 3,80 (s, 3 H); 3,90 (d, J = 2,2 Hz, 0,6 H); 4,04 a 4,22 (m, 2 H); 4,48 (d, J = 5,8 Hz, 0,8 H); 4,50 (d, J = 5,8 Hz, 1,2 H); 5,03 (m, 1 H); 5,16 (t, J = 5,8 Hz, 0,4 H); 5,19 (t, J = 5,8 Hz, 0,6 H); 5,89 (dd, J = 1,9 e 15,6 Hz, 0,6 H); 5,99 (dd, J = 1,9 e 15,6 Hz, 0,4 H); 6,40 a 6,52 (m, 1 H); 7,02 (d, J = 8,7 Hz, 0,6 H); 7,04 (d, J = 8,7 Hz, 0,4 H); 7,16 a 7,37 (m, 6 H); 7,83 a 7,94 (m, 2 H); 8,39 (d, J = 7,4 Hz, 0,6 H); 8,50 (d, J = 7,4 Hz, 0,4 H). LCMS (A1): ES m/z = 724 [M-H]-; m/z = 726 [M+H]+; tR = 1,29 minuto.

[000509] Alfa e beta epóxidos foram separados por cromatografia líquida quiral que foi realizada em um 76 x 350 mm de coluna embalada com 1,1 kg de 10 µm de Chiralpak AD (tris-3,5-dimetilfenilcarbamato de amilose revestido em um suporte de sílica gel, Chiral Technologies Europe) usando eluição isocrática com 75:25 heptano/EtOH. Após concentração, 66 mg de exemplo 11 foram obtidos como um sólido branco (45%) e 45 mg do alfa epóxido foram obtidos como um sólido branco (31%).

[000510] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,82 a 0,89 (m, 12 H); 0,99 (s, 3 H); 1,03 (d, J = 6,9 Hz, 3 H); 1,19 (s, 3 H); 1,34 (d, J = 14,6 Hz, 1 H); 1,80 (m, 1 H); 1,98 (dd, J = 10,1 e 14,6 Hz, 1 H); 2,26 (m, 1 H); 2,61 (m, 1 H); 2,69 (dd, J = 11,1 e 14,6 Hz, 1 H); 2,91 (dd, J = 2,1 e 7,8 Hz, 1 H); 2,94 (dd, J = 3,7 e 14,6 Hz, 1 H); 3,42 (m, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,91 (d, J = 2,1 Hz, 1 H); 4,03 a 4,14 (m, 2 H); 4,50 (d, J = 5,8 Hz, 2 H); 5,03 (m, 1 H); 5,19 (t, J = 5,8 Hz, 1 H) ; 5,89 (dd, J = 2,1 e 15,5 Hz, 1 H); 6,43 (ddd, J = 4,7, 10,9 e 15,5 Hz, 1 H); 7,03 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,20 (dd, J = 2,3 e 8,7 Hz, 1 H); 7,23 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,30 (d, J = 2,3 Hz, 1 H); 7,33 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,86 (d, J = 8,4 Hz, 1 H); 7,92 (d, J = 7,1 Hz, 1 H); 8,39 (d, J = 9,1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 724 [M-H]- ; m/z = 726 [M+H]+; tR = 1,29 minuto. Composto 54: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4- (azidometil)fenil)oxiran-2-il)etil)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6,7- trimetil-3-neopentil-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12- tetraona

[000511] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de exemplo 11 (66 mg, 90,87 µmol) em THF (5 mL) foram adicionados, a 0°C, DPPA (100,23 µl, 454,36 µmol) e DBU (69,27 µl, 454,36 µmol). A solução foi agitada durante 5 horas, em temperatura ambiente, em seguida diluída com H2O e extraída com AcOEt (2 x 15 mL). A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura saturada (2 x 5 mL), secada sobre MgSO4, filtrada, concentrada e purificada em 15 g de sílica gel (Eluição por gradiente de DCM/iPrOH) para fornecer 64 mg de composto 54 como um sólido incolor (94 %).

Exemplo 12: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(aminometil)fenil) oxiran-2-il)etil)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6,7-trimetil-3-neopentil-1- oxa-4,8,11 -triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000512] Em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 54 (64 mg, 85,18 µmol) em DCM (3 mL), MeOH (3 mL) e H2O (400 µL) foi adicionado TCEP (26,86 mg, 93,70 µmol). O meio de reação foi agitado durante 24 horas em temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com DCM (15 mL) e NaHCO3 saturado, agitada durante 10 minutos e extraída com DCM (3 x 15 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada, secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia rápida em 4,5 g de sílica gel modificada por amino-propil (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 42 mg de exemplo 12 como um sólido branco (68 %). Composto 55: (9H-fluoren-9-il)metila ((2S)-1-(((2S)-1-((4- ((2R,3R)-3-((1S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6,7- trimetil-3-neopentil-2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec- 13-en-16-il)etil)oxiran-2-il)benzil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3- metil-1-oxobutan-2-il)carbamato

[000513] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, foram introduzidos exemplo 12 (42 mg, 57,91 µmol) e DMF (1 mL), seguidos por FmocValAla (34,44 mg, 86,86 µmol), HOBt (13,20 mg, 93,81 µmol), DCM (10 mL) e EDC (10.36 µl, 57,91 µmol). O meio de reação foi agitado durante 3 horas em temperatura ambiente e, em seguida, diluído com H2O (15 mL), agitado durante 10 minutos em temperatura ambiente e extraído com DCM (3 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas para fornecer 83 mg de composto 55 como um sólido branco (quantidade). Composto 56: (2S)-2-amino-N-((2S)-1-((4-((2R,3R)-3-((1S)-1- ((3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6,7-trimetil-3-neopentil- 2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16- il)etil)oxiran-2-il)benzil)amino)-1-oxopropan-2-il)-3-metilbutanamida

[000514] Em um frasco de fundo redondo, piperidina (57,8 µL, 579,10 µmol) foi adicionada a uma solução de composto 55 (64,73 mg, 57,91 µmol) em DCM (10 mL). Após agitação durante 5 horas, 57,8 µL de piperidina foram adicionados e o meio foi agitado durante a noite em temperatura ambiente. O meio de reação foi concentrado em vácuo e purificado em 15 g de sílica gel (gradiente DCM/MeOH/H2O) para fornecer 30 mg de composto 56 como um sólido incolor (58%).

[000515] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,86 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,82 a 0,90 (m, 15 H); 1,00 (s, 3 H); 1,03 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,19 (s, 3 H) ; 1,24 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,34 (d, J = 14,6 Hz, 1 H); 1,66 (m amplo, 2 H); 1,80 (m, 1 H); 1,91 (m, 1 H); 1,98 (dd, J = 10,2 e 14,6 Hz, 1 H); 2,27 (m, 1 H); 2,60 (m, 1 H); 2,69 (dd, J = 11,1 e 14,6 Hz, 1 H); 2,91 (dd, J = 2,0 e 7,7 Hz, 1 H); 2,94 (dd, J = 3,7 e 14,6 Hz, 1 H); 2,99 (d, J = 4,9 Hz, 1 H); 3,43 (m, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,91 (d, J = 2,0 Hz, 1 H); 4,03 a 4,12 (m, 2 H); 4,29 (d, J = 6,2 Hz, 2 H); 4,34 (m, 1 H); 5,03 (m, 1 H); 5,89 (dd, J = 1,8 e 15,6 Hz, 1 H); 6,43 (ddd, J = 4,8, 10,9 e 15,6 Hz, 1 H); 7,02 (d, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,20 (dd, J = 2,2 e 8,6 Hz, 1 H); 7,22 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,26 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,32 (d, J = 2,2 Hz, 1 H); 7,86 (d, J = 8,4 Hz, 1 H); 7,92 (d, J = 7,2 Hz, 1 H); 8,07 (d amplo, J = 7,9 Hz, 1 H); 8,40 (d, J = 7,3 Hz, 1 H); 8,45 (t, J = 6,2 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 448 [M+2H]2+; m/z = 893 [M-H]-; m/z = 895 [M+H]+; m/z = 939 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,29 minuto. Composto 57: ácido 5-(((2S)-1-(((2S)-1-((4-((2R,3R)-3-((1S)- 1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6,7-trimetil-3- neopentil-2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16- il)etil)oxiran-2-il)benzil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1- oxobutan-2-il)amino)-5-oxopentanoico

[000516] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, uma solução de anidrido glutárico (4,29 mg, 36,85 µmol) em DCM (2 mL) foi adicionado a uma solução de composto 56 (30 mg, 33,5 µmol) em DCM (6 mL). O meio de reação foi agitado durante 2 horas em temperatura ambiente, concentrado parcialmente em vácuo e purificada em 2,5 g de sílica gel (DCM/MeOH/H2O de eluição por gradiente) para fornecer 34 mg de composto 57 como uma laca incolor (quantidade).

[000517] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,80 a 0,89 (m, 18 H); 0,99 (s, 3 H); 1,03 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,19 (s, 3 H); 1,24 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,34 (d, J = 14,6 Hz, 1 H); 1,70 (m, 2 H); 1,80 (m, 1 H); 1,97 (m, 2 H); 2,19 (m, 4 H); 2,26 (m, 1 H); 2,60 (m, 1 H); 2,70 (dd, J = 11,2 e 14,6 Hz, 1 H); 2,90 (dd, J = 2,2 e 7,8 Hz, 1 H); 2,95 (dd, J = 3,7 e 14,6 Hz, 1 H); 3,43 (m, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,91 (d, J = 2,2 Hz, 1 H); 4,03 a 4,18 (m, 3 H); 4,22 a 4,33 (m, 3 H); 5,03 (m, 1 H); 5,90 (d, J = 15,5 Hz, 1 H); 6,43 (ddd, J = 4,9, 11,0 e 15,5 Hz, 1 H); 7,02 (d, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,19 a 7,28 (m, 5 H); 7,32 (d, J = 2,2 Hz, 1 H); 7,85 (d amplo, J = 8,9 Hz, 2 H); 7,91 (d, J = 7,2 Hz, 1 H); 8,06 (d amplo, J = 7,5 Hz, 1 H); 8,36 (t amplo, J = 6,6 Hz, 1 H); 8,42 (d, J = 7,8 Hz, 1 H); 12,10 (m amplo, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 1007 [M-H]-; m/z = 1009 [M+H]+; tR = 1,21 minuto.

Exemplo 13: 2,5-dioxopirrolidin-1-ila 5-(((2S)-1-(((2S)-1-((4-((2R,3R)-3- ((1S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6,7-trimetil-3- neopentil-2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa-4,8,11 -triazaciclo-hexadec-13-en-16- il)etil)oxiran-2-il)benzil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1- oxobutan-2-il)amino)-5-oxopentanoato

[000518] Sob argônio, em um frasco de fundo redondo, a uma solução de composto 57 (33 mg, 32,69 µmol) em DCM (8 mL) foram adicionados DSC (11,72 mg, 45,76 µmol) e DIEA (7,7 µL, 45,76 µmol). O meio de reação foi agitado durante 1 hora em temperatura ambiente, concentrado em vácuo e purificado por duas cromatografias rápidas sucessivas em 2,5 g de sílica gel (Eluição por gradiente de DCM/iPrOH) para fornecer 17,9 mg de exemplo 13 como um sólido incolor (49 %).

[000519] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,80 a 0,90 (m, 18 H); 1,00 (s, 3 H); 1,04 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,19 (s, 3 H); 1,24 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,34 (d, J = 14,6 Hz, 1 H); 1,80 (m, 1 H); 1,83 (m, 2 H); 1,98 (m, 2 H); 2,26 (m, 1 H); 2,29 (m, 2 H); 2,60 (m, 1 H); 2,68 (t, J = 7,5 Hz, 2 H); 2,70 (dd, J = 11,2 e 14,6 Hz, 1 H); 2,80 (s, 4 H); 2,91 (dd, J = 2,2 e 7,6 Hz, 1 H); 2,95 (dd, J = 3,7 e 14,6 Hz, 1 H); 3,43 (m, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,90 (d, J = 2,2 Hz, 1 H); 4,06 a 4,15 (m, 2 H); 4,18 (dd, J = 6,9 e 8,7 Hz, 1 H); 4,21 a 4,33 (m, 3 H); 5,03 (m, 1 H); 5,89 (d, J = 15,5 Hz, 1 H); 6,43 (ddd, J=4,9, 10,9 e 15,5 Hz, 1 H); 7,02 (d, J=8,7 Hz, 1 H); 7,20 (dd, J = 2,3 e 8,7 Hz, 1 H); 7,23 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,25 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 7,31 (d, J = 2,3 Hz, 1 H); 7,84 (d, J = 8,6 Hz, 1 H); 7,89 (m, 2 H); 8,04 (d, J = 7,5 Hz, 1 H); 8,33 (t, J = 6,5 Hz, 1 H); 8,39 (d, J = 7,6 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 796; m/z = 1104 [M-H]-; m/z = 1106 [M+H]+; m/z = 1150 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,26 minutos.

Exemplo 14: mAb-Ex13

[000520] O método geral descrito anteriormente foi usado para a preparação de exemplo 14. 60 mg de hu2H11_R35-74 foram reagidos com 200 µL de uma solução a 10,05 mM de exemplo 13 em DMA (5 equivalentes) durante 2 horas. Neste momento, 180 µL da solução de exemplo 13 (4,5 equivalentes) foram adicionados e o meio agitado durante 2 horas. Após purificação em SuperDex 200 pg em tampão B pH 6,5 + 10% de NMP, concentração em Amicon Ultra-15, permuta de tampão em PD-10 em tampão B pH 6,5 + 5% de NMP e filtração em Steriflip, 46 mg de exemplo 14 foram obtidos como uma solução límpida e incolor em uma concentração de 2 mg/mL com um DAR de 3,5 (HRMS), uma pureza monomérica de 99,7% e uma produção global de 77%.

[000521] SEC-HRMS: espectro para ADC intacto na Figura 4; m/z = 149336 (mAb nu); m/z = 150328 (D1); m/z = 151319 (D2); m/z = 152311 (D3); m/z = 153302 (D4); m/z = 154295 (D5); m/z = 155290 (D6); m/z = 156282 (D7). Exemplo 15: (3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-16-((S)-1-(3- (4-(hidróxi-metil)fenil)oxiran-2-il)etil)-3,6,6-trimetil-1-oxa-4,8,11 - triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000522] O Exemplo 15 foi preparado seguindo a rotina geral B representada no Esquema 2 e representada pelos exemplos 4 e 11.

[000523] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): mistura de diastereoisômero de 65/35; 0,93 a 1,26 (m, 12 H); 1,75 (m, 0,65 H); 1,83 (m, 0,35 H); 2,22 (m, 0,65 H); 2,41 (m, 0,35 H); 2,55 a 2,70 (m, 2 H); 2,81 (d, J = 13,7 Hz, 0,65 H); 2,88 (d, J = 13,7 Hz, 0,35 H); 2,93 (dd, J = 2,1 e 8,2 Hz, 0,65 H); 3,00 (m, 1,35 H); 3,22 a 3,35 (m parcialmente mascarado, 1 H); 3,77 (d, J = 2,1 Hz, 0,35 H); 3,81 (s, 3 H); 3,88 (d, J = 2,1 Hz, 0,65 H); 4,25 a 4,39 (m, 1,65 H); 4,34 (m, 0,35 H); 4,48 (d, J = 6,0 Hz, 0,7 H); 4,50 (d, J = 6,0 Hz, 1,3 H); 5,08 (m, 1 H); 5,17 (t, J = 6,0 Hz, 0,35 H); 5,20 (t, J = 6,0 Hz, 0,65 H); 5,78 (dd, J = 1,9 e 15,5 Hz, 0,65 H); 5,89 (dd, J = 1,9 e 15,5 Hz, 0,35 H); 6,40 (m, 1 H); 7,04 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,16 (dd, J = 2,2 e 8,7 Hz, 0,65 H); 7,19 (dd, J = 2,2 e 8,7 Hz, 0,35 H); 7,20 a 7,34 (m, 5 H); 7,58 (d amplo, J = 10,2 Hz, 0,65 H); 7,64 (d amplo, J = 10,2 Hz, 0,35 H); 8,00 (d, J = 8,4 Hz, 0,65 H); 8,07 (d, J = 8,4 Hz, 0,35 H); 8,35 (d, J = 8,3 Hz, 0,65 H); 8,44 (d, J = 8,3 Hz, 0,35 H). LCMS (A1): ES m/z = 654 [M-H]-; m/z = 656 [M+H]+; tR = 1,06 minuto. Exemplo 16: (3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-16-((S)-1-(3- (4-(hidróxi-metil)fenil)oxiran-2-il)etil)-6,6-dimetil-3-isopropil-1-oxa-4,8, 11 -triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000524] O Exemplo 16 foi preparado seguindo a rotina geral B representada no Esquema 2 e representada pelos exemplos 4 e 11.

[000525] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): mistura de diastereoisômero de 60/40; 0,72 (d, J = 7,0 Hz, 1,8 H); 0,82 (d, J = 7,0 Hz, 1,2 H); 0,84 (d, J = 7,0 Hz, 1,8 H); 0,87 (d, J = 7,0 Hz, 1,2 H); 0,98 (s, 1,8 H); 0,99 (d, J = 7,0 Hz, 1,8 H); 1,01 (s, 1,2 H); 1,05 (d, J = 7,0 Hz, 1,2 H); 1,09 (s, 1,8 H); 1,11 (s, 1,2 H); 1,82 (m, 1 H); 1,91 (m, 0,6 H); 2,01 (m, 0,4 H); 2,30 (m, 1 H); 2,52 a 2,72 (m, 2 H); 2,88 a 3,04 (m, 3 H); 3,25 a 3,35 (m mascarado, 1 H); 3,79 (d, J = 2,2 Hz, 0,4 H); 3,80 (s, 3 H); 3,88 (d, J = 2,2 Hz, 0,6 H); 4,09 a 4,21 (m, 2 H); 4,48 (d, J = 5,8 Hz, 0,8 H); 4,50 (d, J = 5,8 Hz, 1,2 H); 5,14 a 5,29 (m, 2 H); 5,79 (dd, J = 1,7 e 15,4 Hz, 0,6 H); 5,90 (dd, J = 1,7 e 15,4 Hz, 0,4 H); 6,40 a 6,52 (m, 1 H); 7,05 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,10 (dd, J = 2,0 e 10,2 Hz, 1 H); 7,17 (m, 1 H); 7,21 a 7,35 (m, 5 H); 7,70 (d, J = 9,3 Hz, 0,6 H); 7,80 (d, J = 9,3 Hz, 0,4 H); 8,39 (d, J = 8,0 Hz, 0,6 H); 8,44 (d, J = 8,0 Hz, 0,4 H). LCMS (A1): ES m/z = 682 [M-H]-; m/z = 684 [M+H]+; tR = 1,16 minuto. Exemplo 17: (3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-16-((S)-1-(3- (4-(hidróxi-metil)fenil)oxiran-2-il)etil)-3-terc- butil-6,6-dimetil-1-oxa-4,8, 11 -triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000526] O Exemplo 17 foi preparado seguindo a rotina geral B representada no Esquema 2 e representada pelos exemplos 4 e 11.

[000527] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 50/50 mistura diastereoisomérica; 0,90 (s, 4,5 H); 0,91 (s, 4,5 H); 1,00 (d, J = 7,0 Hz, 1,5 H); 1,03 (s, 1,5 H); 1,05 (s, 1,5 H); 1,06 (d, J = 7,0 Hz, 1,5 H); 1,10 (s, 1,5 H); 1,12 (s, 1,5 H); 1,85 (m, 1H); 2,32 (m, 1H); 2,55 a 2,72 (m, 2 H); 2,90 a 3,03 (m, 3 H); 3,25 a 3,35 (m mascarado, 1 H); 3,81 (s, 3 H); 3,90 (d, J = 2,2 Hz, 1 H); 4,15 (m, 1 H); 4,36 (d, J = 10,0 Hz, 0,5 H); 4,43 (d, J = 10,0 Hz, 0,5 H); 4,49 (d, J = 5,9 Hz, 1 H); 4,51 (d, J = 5,9 Hz, 1 H); 5,15 (t, J = 5,9 Hz, 0,5 H); 5,18 (t, J = 5,9 Hz, 0,5 H); 5,29 (m, 1 H); 5,79 (dd, J = 2,0 e 15,4 Hz, 0,5 H); 5,90 (d, J = 15,4 Hz, 0,5 H); 6,39 (m, 1 H); 6,91 (dd, J = 2,5 e 10,4 Hz, 0,5 H); 6,98 (dd, J = 2,5 e 10,4 Hz, 0,5 H); 7,05 (split d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,15 (split dd, J = 2,4 e 8,7 Hz, 1 H); 7,20 a 7,39 (m, 6 H); 8,32 (d, J = 7,9 Hz, 0,5 H); 8,40 (d, J = 7,9 Hz, 0,5 H). LCMS (A4): ES m/z = 696 [M-H]-; m/z = 698 [M+H]+; tR = 4,13 a 4,16 minutos. Exemplo 18 (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4- (aminometil)fenil)oxiran-2-il)etil)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-3-isobutil- 6,6,7-trimetil-1-oxa-4,8,11 -triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12- tetraona

[000528] O Exemplo 18 foi preparado seguindo a rotina geral A representada no Esquema 1 e descrita para o Exemplo 8.

[000529] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,78 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,84 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,87 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,00 (s, 3 H); 1,03 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,19 (s, 3 H); 1,30 (m, 1 H); 1,50 a 1,90 (m, 5 H); 2,28 (m, 1 H); 2,55 a 2,76 (m, 2 H); 2,90 a 3,00 (m, 2 H); 3,48 (m, 1 H); 3,70 (s, 2 H); 3,80 (s, 3 H); 3,89 (s, 1 H); 4,02 a 4,15 (m, 2 H); 5,06 (m, 1 H); 5,88 (d, J = 15,5 Hz, 1 H); 6,47 (m, 1 H); 7,03 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,20 (m, 3 H); 7,31 (m, 3 H); 7,80 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,89 (d, J = 7,3 Hz, 1 H); 8,41 (d, J = 8,2 Hz, 1 H). Exemplo 19: 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)- 10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-3-isobutil-6,6,7-trimetil-2,5,9,12-tetraoxo-1- oxa-4,8,11 -triazaciclo-hexadec-13-en-16-il)etil)oxiran-2-il)benzil) amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-5- oxopentanoato de 2,5-dioxopirrolidin-1-íla

[000530] O Exemplo 19 foi preparado como representado no Esquema 3 e representado pelos exemplos 2, 6, 9 e 13.

[000531] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,79 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,81 a 0,89 (m, 18 H); 1,01 (s, 3 H); 1,03 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,20 (s, 3 H); 1,24 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,31 (m, 1 H); 1,60 a 1,74 (m, 2 H); 1,78 a 1,86 (m, 3 H); 1,96 (m, 1 H); 2,21 a 2,31 (m, 3 H); 2,55 a 2,72 (m, 4 H); 2,80 (s, 4 H); 2,96 (m, 2 H); 3,47 (m, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,89 (d, J = 2,2 Hz, 1 H); 4,03 a 4,14 (m, 2 H); 4,17 (dd, J = 6,8 e 8,6 Hz, 1 H); 4,21 a 4,33 (m, 3 H); 5,06 (m, 1 H); 5,89 (d, J = 15,5 Hz, 1 H); 6,47 (ddd, J = 5,2, 10,5 e 15,5 Hz, 1 H); 7,02 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,20 (dd, J = 2,3 e 8,7 Hz, 1 H); 7,23 (m, 4 H); 7,32 (d, J = 2,3 Hz, 1 H); 7,80 (d, J = 8,3 Hz, 1 H); 7,89 (m, 2 H); 8,04 (d, J = 7,6 Hz, 1 H); 8,32 (t, J = 6,3 Hz, 1 H); 8,42 (d, J = 7,6 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 1092 [M+H]+; m/z = 1136 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,23 minuto. Exemplo 20: mAb-Ex19

[000532] O Exemplo 20 foi preparado em um meio similar aos exemplos 3, 7, 10 e 14. 45 mg de exemplo 20 foram obtidos como uma solução límpida e incolor em uma concentração de 2,55 mg/mL com um DAR de 4,4 (HRMS), uma pureza monomérica de 99,1% e uma produção global de 78%.

[000533] SEC-HRMS: espectro para ADC intacto na Figura 5; m/z = 150368 (D1); m/z = 151350 (D2); m/z = 152327 (D3); m/z = 153304 (D4); m/z = 154281 (D5); m/z = 155255 (D6); m/z = 156237(D7); m/z = 157217 (D8). Exemplo 21: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-(3-(4-(aminometil)fenil)oxiran-2- il)etil)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-7-cilopropil-3-isobutil-6,6-dimetil-1- oxa-4,8,11 -triazacilo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000534] O Exemplo 21 foi preparado seguindo a rotina geral A repre-sentada no Esquema 1 e representada pelos exemplos 1 e 8. Exemplo 22: 5-(((S)-1-(((S)-1-((^((2R,3R)-^((S)-1-((3S,10R,16S,E)- 10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-7-cilopropil-3-isobutil-6,6-dimetil-2,5,9,12- tetraoxo-1-oxa-4,8,11 -triazaciclo-hexadec-13-en-16-il)etil)oxiran-2-il) benzil)amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)- 5-oxopentanoato de 2,5-dioxopirrolidin-1-íla

[000535] O Exemplo 22 foi preparado como representado no Esquema 3 e representado pelos exemplos 2, 6, 9 e 13.

[000536] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,34 (m, 1 H); 0,66 (m, 1 H); 0,74 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,76 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,78 (s, 3 H); 0,80 (m, 1 H); 0,82 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 0,85 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,04 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,08 (s, 3 H); 1,11 (m, 1 H); 1,20 (m, 1 H); 1,23 (d, J = 7,0 Hz, 3 H); 1,43 a 1,54 (m, 2 H); 1,78 (m, 1 H); 1,82 (m, 2 H); 1,98 (m, 1 H); 2,22 (m, 1 H); 2,28 (m, 2 H); 2,65 (m, 3 H); 2,79 (m, 1 H); 2,81 (s, 4 H); 2,97 (dd, J = 2,2 e 7,9 Hz, 1 H); 3,80 (s, 3 H); 3,89 (d, J = 2,2 Hz, 1 H); 4,02 (m, 1 H); 4,17 (dd, J = 6,7 e 8,7 Hz, 1 H); 4,27 (d, J = 6,3 Hz, 2 H); 4,30 (m, 1 H); 4,37 (m, 1 H); 5,10 (m, 1 H); 5,79 (dd, J = 1,8 e 15,5 Hz, 1 H); 6,39 (ddd, J = 4,0, 11,6 e 15,5 Hz, 1 H); 7,02 (d, J = 8,7 Hz, 1 H); 7,11 (dd, J = 2,3 e 8,7 Hz, 1 H); 7,20 (d, J = 2,3 Hz, 1 H); 7,22 (m, 4 H); 7,46 (s, 1 H); 7,77 (d, J = 9,0 Hz, 1 H); 7,89 (d, J = 8,6 Hz, 1 H); 8,05 (d, J = 7,5 Hz, 1 H); 8,29 (d, J = 7,6 Hz, 1 H); 8,32 (t, J = 6,3 Hz, 1 H). Exemplo 23: mAb-Ex22

[000537] O Exemplo 23 foi preparado em um meio similar aos exemplos 3, 7, 10 e 14. 45 mg de exemplo 23 foram obtidos como uma solução límpida e incolor em uma concentração de 2,14 mg/mL com um DAR de 3,6 (HRMS), uma pureza monomérica de 100 % e uma produção global de 75%.

[000538] SEC-HRMS: espectro para ADC intacto na Figura 6; m/z = 150341 (D1); m/z = 151329 (D2); m/z = 152317 (D3); m/z = 153308 (D4); m/z = 154296 (D5); m/z = 155287 (D6); m/z = 156279 (D7); m/z = 157267 (D8). Exemplo 24: (3S,7S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(azidometil) fenil)oxiran-2-il)-etil)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6,7-trimetil-3- neopentil-1-oxa-4,8,11 -triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000539] Exemplo 24 foi preparado seguindo a rotina geral C representada no Esquema 3 e descrita para o Exemplo 32.

[000540] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,83 (s, 9H); 0,88 (d, J = 6,8 Hz, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,03 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,19 (s, 3H); 1,33 (d, J = 14,5 Hz, 1H); 1,84 (m, 1H); 1,97 (dd, J = 9,8 e 14,5 Hz, 1H); 2,27 (dd, J = 11,1 e 14,5 Hz, 1H); 2,61 (m, 1H); 2,69 (dd, J = 11,1 e 14,2 Hz, 1H); 2,92 (dd, J = 2,1 e 7,7 Hz, 1H); 2,96 (dd, J = 3,6 e 14,2 Hz, 1H); 3,43 (m, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,96 (d, J = 2,1 Hz, 1H); 4,08 (ddd, J = 3,6, 7,1 e 11,1 Hz, 1H); 4,12 (m, 1H); 4,46 (s, 2H); 5,05 (ddd, J = 1,3, 3,9 e 11,3 Hz, 1H); 5,90 (dd, J = 1,3 e 15,3 Hz, 1H); 6,45 (ddd, J = 4,7, 10,7 e 15,3 Hz, 1H); 7,02 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,20 (dd, J = 2,4 e 8,7 Hz, 1H); 7,32 (m, 3H); 7,40 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,88 (d, J = 8,4 Hz, 1H); 7,92 (d, J = 7,1 Hz, 1H); 8,40 (d, J = 7,4 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 749 [MH]-; m/z = 751 [M+H]+; m/z = 795 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,52 minuto. Exemplo 25: (3S,7S, 10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(amino- metil)fenil)oxiran-2-il)etil)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6,7-trimetil-3- neopentil-1-oxa-4,8,11 -triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000541] O Exemplo 25 foi preparado como descrito para os exemplos 1, 5, 8 e 11.

[000542] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,86 (s, 9H); 0,88 (d, J = 6,9 Hz, 3H); 0,98 (s, 3H); 1,02 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,18 (s, 3H); 1,34 (d, J = 14,5 Hz, 1H); 1,80 (m, 1H); 1,98 (dd, J = 9,8 e 14,5 Hz, 1H); 2,27 (dd, J = 11,1 e 14,5 Hz, 1H); 2,40 (m amplo, 2H); 2,62 (m, 1H); 2,68 (dd, J = 11,1 e 14,2 Hz, 1H); 2,90 (dd, J = 2,1 e 7,7 Hz, 1H); 2,96 (dd, J = 3,6 e 14,2 Hz, 1H); 3,43 (m, 1H); 3,76 (s, 2H); 3,80 (s, 3H); 3,91 (d, J = 2,1 Hz, 1H); 4,02 a 4,15 (m, 2H); 5,04 (ddd, J = 1,3, 3,9 e 11,3 Hz, 1H); 5,88 (dd, J = 1,3 e 15,4 Hz, 1H); 6,45 (ddd, J = 4,7, 10,7 e 15,3 Hz, 1H); 7,03 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 7,20 (dd, J = 2,2 e 8,5 Hz, 1H); 7,23 (d, J = 8,3 Hz, 2H); 7,32 (d, J = 2,2 Hz, 2H); 7,36 (d, J = 8,3 Hz, 2H); 7,86 (d, J = 8,3 Hz, 1H); 7,93 (d, J = 6,9 Hz, 1H); 8,40 (d, J = 7,1 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 723 [MH]-; m/z = 725 [M+H]+; m/z = 769 [M-H+HCO2H]-; tR = 0,87 minuto. Síntese dos exemplos 26 a 28: álcoool benzílico de 3-(S)-neopentil-7- (S)-Me-aza-C52, éster de NHS de álcool benzílico glutaril-Val-Ala-EDA- 3-(S)-neopentil-7-(S)-Me-aza-C52 e ADC correspondente Composto 58: (S)-2-((S)-3-((R)-2-acrilamido-3-(3-cloro-4-me- toxifenil)propanamido)-2,2-dimetilbutanamido)-4,4-dimetilpentanoato de (2R,3S)-1-((4-metoxibenzil)óxi)-2-metilex-5-en-3-íla

[000543] A uma solução de composto BC4 (365 mg, 919,7 µmol) em DMF (12 mL) foram adicionados HATU (402 mg, 1,06 mmol) e HOAt (144 mg, 1,06 mmol), o meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 30 minutos, em seguida foram adicionados uma solução de composto AD3 (365 mg, 965,7 µmol) em DMF (5 mL) e DIEA (562 µL, 3,22 mmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 4 horas, em seguida diluído com H2O (50 mL) e extraído com EtOAc (3 x 50 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com H2O (15 mL), salmoura saturada (3 x 15 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por duas cromatografias rápidas sucessivas em 30 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH e heptano/EtOAc) para fornecer 564 mg de composto 58 como uma espuma incolor (81%).

[000544] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,83 (d, J = 6,9 Hz, 3H); 0,85 (s, 9H); 0,87 (d, J = 6,9 Hz, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,03 (s, 3H); 1,55 (dd, J = 2,4 e 14,5 Hz, 1H); 1,78 (dd, J = 9,5 e 14,5 Hz, 1H); 1,96 (m, 1H); 2,20 (m, 1H); 2,30 (m, 1H); 2,72 (dd, J = 9,6 e 13,9 Hz, 1H); 2,87 (dd, J = 5,3 e 13,9 Hz, 1H); 3,20 (dd, J = 6,5 e 9,5 Hz, 1H); 3,37 (dd, J = 5,4 e 9,5 Hz, 1H); 3,76 (s, 3H); 3,80 (s, 3H); 4,19 (m, 1H); 4,28 (m, 1H); 4,34 (s, 2H); 4,55 (m, 1H); 4,82 (m, 1H); 5,00 (d, J = 10,2 Hz, 1H); 5,07 (d, J = 17,4 Hz, 1H); 5,55 (dd, J = 2,3 e 10,2 Hz, 1H); 5,71 (m, 1H); 6,01 (dd, J = 2,3 e 17,1 Hz, 1H); 6,28 (dd, J = 10,2 e 17,1 Hz, 1H); 6,90 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 7,02 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 7,17 (dd, J = 2,3 e 8,6 Hz, 1H); 7,22 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 7,32 (d, J = 2,3 Hz, 1H); 7,65 (d, J = 9,5 Hz, 1H); 7,70 (d, J = 7,9 Hz, 1H); 8,35 (d, J = 8,4 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 754 [M-H]-; m/z = 756 [M+H]+; m/z = 800 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,62 minuto. Composto 59: (3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4- metoxibenzil)-16-((R)-1-((4-metóxi-benzil)óxi)propan-2-il)-6,6,7-trimetil- 3-neopentil-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000545] A uma solução de composto 58 (560 mg, 740,4 µmol) em DCM (56 mL) foi adicionado sob catalisador de Ar Grubbs I (31,0 mg, 37,02 µmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 1 hora e 30 minutos antes da adição de 31,0 mg de catalisador. A agitação foi realizada em temperatura ambiente durante 1 hora e 30 minutos antes da adição de 31,0 mg de catalisador. A agitação foi realizada em temperatura ambiente durante 1 hora e 30 minutos antes da adição de 31,0 mg de catalisador e o meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 1 hora e 30 minutos. Foi concentrada em vácuo e purificada por cromatografia rápida em 25 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 330 mg de composto 59 (61%) e 220 mg que foram também purificados por cromatografia rápida em 15 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 204 mg de composto 59 (37%) como uma mistura com óxido de triciclo-hexilfosfina.

[000546] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,85 (s, 9H); 0,88 (d, J = 6,9 Hz, 3H); 0,91 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,04 (s, 3H); 1,20 (s, 3H); 1,29 (d, J = 14,5 Hz, 1H); 1,95 (dd, J = 9,8 e 14,5 Hz, 1H); 1,99 (m, 1H); 2,26 (m, 1H); 2,43 (m, 1H); 2,72 (dd, J = 10,1 e 14,3 Hz, 1H); 2,97 (dd, J = 3,6 e 14,3 Hz, 1H); 3,27 (dd, J = 6,1 e 9,3 Hz, 1H); 3,40 (dd, J = 5,8 e 9,3 Hz, 1H); 3,46 (m, 1H) ; 3,72 (s, 3H); 3,80 (s, 3H); 4,10 (m, 1H); 4,13 (m, 1H); 4,38 (s, 2H); 4,97 (m, 1H); 5,93 (d, J = 15,4 Hz, 1H); 6,43 (ddd, J = 4,8, 10,7 e 15,4 Hz, 1H); 6,90 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 7,02 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 7,17 (d, J = 8,6 Hz, 3H); 7,36 (d, J = 2,3 Hz, 1H); 7,88 (m, 2H); 8,48 (d, J = 7,5 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 726 [M-H]-; m/z = 728 [M+H]+; m/z = 772 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,54 minuto. Composto 60: (3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4- metoxibenzil)-16-((R)-1-hidroxipropan-2-il)-6,6,7-trimetil-3-neopentil-1- oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000547] O Composto 59 (532 mg, 730,4 µmol) foi tratado com uma solução de TFA (3,93 mL) em DCM (36 mL) em temperatura ambiente durante 30 minutos. O meio de reação foi despejado em NaHCO3 aquoso a 9 % (130 mL) sob agitação magnética. A agitação foi realizada durante 30 minutos, em seguida a fase aquosa foi extraída com DCM (2 x 70 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com H2O (3 x 20 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por cromatografia rápida em 30 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 299 mg de composto 60 como uma espuma branca (67%).

[000548] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,88 (d, J = 6,9 Hz, 3H); 0,89 (s, 9H); 0,90 (d, J = 7,0 Hz, 3H) 1,03 (s, 3H); 1,20 (s, 3H); 1,36 (dd, J = 1,8 e 14,5 Hz, 1H); 1,80 (m, 1H); 1,96 (dd, J = 9, 6 e 14,5 Hz, 1H); 2,25 (m, 1H); 2,43 (m, 1H); 2,72 (dd, J = 11,1 e 14,3 Hz, 1H); 2,97 (dd, J = 3,8 e 14,3 Hz, 1H); 3,25 (m, 1H); 3,45 (m, 2H); 3,80 (s, 3H); 4,10 (m, 1H); 4,16 (m, 1H); 4,57 (t, J = 5,3 Hz, 1H); 4,98 (m, 1H); 5,93 (dd, J = 1,3 e 15,3 Hz, 1H); 6,45 (ddd, J = 4,9, 10,7 e 15,3 Hz, 1H); 7,02 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 7,22 (dd, J = 2,3 e 8,6 Hz, 1H); 7,36 (d, J = 2,3 Hz, 1H); 7,89 (m, 2H); 8,48 (d, J = 7,3 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 606 [M-H]-; m/z = 608 [M+H]+; tR = 1,2 minuto. Composto 61: (S)-2-((3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-cloro—4- metoxibenzil)-6,6,7-trimetil-3-neopentil-2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa-4,8,11- triazaciclo-hexadec-13-en-16-il)propanal

[000549] A uma solução de composto 60 (297 mg, 488,4 µmol) em DCM (6 mL) resfriada com um banho de gelo/acetona foram adicionados a 0°C uma solução de KBr (58,11 mg, 488,4 µmol) em H2O (1,18 mL), TEMPO (1,57 mg, 9,8 µmol) e, gota a gota, uma solução aquosa de hipocloreto de sódio a 1,56M, pH 9,5 (467,6 µL, 732,52 µmol). A agitação foi realizada a 0°C durante 15 minutos, em seguida foi adicionado um Na2S2O3 saturado a 0°C (3,56 mL), o banho de gelo foi removido e o meio de reação agitado durante 10 minutos. Foi, em seguida, extraído com DCM (3 x 25 mL), as fases orgânicas combinadas foram lavadas com H2O (2 x 10 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por cromatografia rápida em 15 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 139 mg de composto 61 como uma laca branca (47%).

[000550] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,85 (s, 9H); 0,90 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 1,03 (s, 3H) ; 1,04 (d, J = 6,9 Hz, 3H); 1,20 (s, 3H); 1,26 (d, J = 15,3 Hz, 1H); 1,95 (m, 1H); 2,44 (m, 1H); 2,57 (m, 1H); 2,72 (dd, J = 11,2 e 14,4 Hz, 1H); 2,80 (m, 1H); 2,98 (dd, J = 3,1 e 14,4 Hz, 1H); 3,80 (s, 3H); 4,10 (m, 3H); 5,22 (m, 1H); 5,98 (d, J = 15,3 Hz, 1H); 6,47 (ddd, J = 4,9, 10,8 e 15,3 Hz, 1H); 7,04 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,22 (dd, J = 2,3 e 8,7 Hz, 1H); 7,37 (s, 1H); 7,90 (m, 1H); 7,92 (d, J = 8,2 Hz, 1H); 8,53 (d, J = 7,6 Hz, 1H); 9,68 (s, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 604 [MH]-; m/z = 606 [M+H]+; m/z = 650 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,28 minuto. Composto 62: (4-(((tri-isopropilsilil)óxi)metil)fenil)metanol

[000551] A uma solução de 1,4-benzenodimetanol (2 g, 14,33 mmol) em THF (100 mL) foi adicionado imidazol (1,13 g, 16,48 mmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 15 minutos, em seguida foi adicionado cloreto de tri-isopropilsilila (3,14 mL, 14,33 mmol) e a agitação foi realizada em temperatura ambiente durante a noite. Et2O (50 mL) foi adicionado à mistura reacional e a fase orgânica foi lavada duas vezes com salmoura saturada (100 mL), filtrada sobre MgSO4, concentrada em vácuo, dissolvida em DCM, filtrada, concentrado em vácuo e purificada por cromatografia rápida em 200 g de sílica gel (eluição isocrática de 8:2 de heptano/EtOAc) para fornecer 1,9 g de Composto 62 como um óleo incolor (45%).

[000552] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 1,04 (d, J = 6,7 Hz, 18H); 1,15 (m, 3H); 4,48 (d, J = 5,7 Hz, 2H); 4,78 (s, 2H); 5,13 (t, J = 5,7 Hz, 1H); 7,29 (s, 4H). Composto 63: ((4-(bromometil)benzil)óxi)tri-isopropilsilano

[000553] A uma suspensão de N-bromosuccinimida (1,29 g, 7,16 mmol) em DCM (65 mL) resfriada a 0°C foi adicionado gota a gota sulfeto de dimetila (953 µL, 12,9 mmol). A agitação foi realizada a 0°C durante 10 minutos, em seguida o meio de reação foi resfriado a -20°C e agitada durante a -20°C durante 10 minutos. Uma solução de Composto 62 (1,9 g, 6,45 mmol) em DCM (30 mL) resfriada a -20°C foi, em seguida, adicionada. A agitação foi realizada a -20°C durante 15 minutos, em seguida a 0°C durante 15 minutos e em temperatura ambiente durante a noite. O meio de reação foi lavado duas vezes com salmoura saturada (100 mL), secado sobre MgSO4, filtrado, concentrado em vácuo e purificado por duas cromatografias rápidas sucessivas em 40 g de sílica gel (eleuição por gradiente de heptano/EtOAc). As frações contendo o composto expresso foram combinadas, concentradas em vácuo e dissolvidas em heptano (8 mL). A suspensão foi filtrada, o filtrado concentrado em vácuo, dissolvido em Et2O (5 mL), resfriado a -20°C, filtrado, concentrado em vácuo para fornecer 1,18 g de composto 63 como um óleo amarelo pálido (51%).

[000554] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 1,04 (d, J = 6,8 Hz, 18H); 1,15 (m, 3H); 4,70 (s, 2H); 4,81 (s, 2H); 7,29 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,41 (d, J = 8,4 Hz, 2H). LCMS (A5): ES m/z = 104; m/z = 356 [M]+; tR = 1,99 minuto. Composto 64: (1R,4S,5R,6S)-4,7,7-trimetil-6-(4-(((tri- isopropilsilil)óxi)metil)benzil)-6-thiabicilo [3,2,1]octan-6-ium trifluorometanossulfonato

[000555] Ao (1R,4R,5R)-4,7,7-trimetil-6-thiabicilo [3,2,1]octano (número de CAS [5718-75-2], 562,3 mg, 3,3 mmol) foi adicionada uma solução de composto 63 (1,18 g, 3,3 mmol) em DCM (3,4 mL). Uma solução de trifluorometanossulfonato de lítio (2,63 g, 16,51 mmol) em H2O (3 mL) foi em seguida adicionada gota a gota e o meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante a noite. H2O (15 mL) e DCM (15 mL) foram, em seguida, adicionados ao meio de reação e agitação realizada em temperatura ambiente durante 10 minutos. A fase aquosa foi extraída com DCM (3 x 20 mL), as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (3 x 8 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo. O óleo amerelo pálido foi triturado em iPr2O (5 mL), o sólido desse modo obtido foi filtrado, lavado com iPr2O (2 x 5 mL) e secado sob vácuo para fornecer 1,125 g de composto 64 como um sólido branco (57%).

[000556] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 1,04 (m, 21H); 1,15 (m, 3H); 1,45 (m, 1H); 1,60 (m, 2H); 1,68 (s, 3H); 1,71 (m, 1H); 1,74 (s, 3H); 1,98 (m, 1H); 2,40 (d, J = 14,6 Hz, 1H); 2,45 (m, 1H); 2,58 (d amplo, J = 14,6 Hz, 1H); 3,85 (m, 1H); 4,56 (d, J = 12,6 Hz, 1H); 4,83 (s, 2H); 4,90 (d, J = 12,6 Hz, 1H); 7,44 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,57 (d, J = 8,4 Hz, 2H). Composto 65: (3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4- metoxibenzil)-6,6,7-trimetil-3-neopentil-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(((tri- isopropilsilil)óxi)metil)fenil)oxiran-2-il)etil)-1-oxa-4,8,11-triazaciclo- hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000557] A uma solução de compostos 61 (138 mg, 227,7 µmol) e 64 (149,5 mg, 250,4 µmol) em DCM (4 mL) resfriado a -70°C foi adicionado gota a gota BEMP (Número de CAS [98015-45-3], 90,2 µL, 296,0 µmol). A mistura reacional foi agitada durante a -70°C durante 2 horas, salmoura saturada (7 mL) foi adicionada à mistura reacional, o banho removido e a agitação realizada vigorosamente até RT. A fase aquosa foi extraída com DCM (3 x 20 mL), as fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por cromatografia rápida em 10 g de sílica gel (eluição por graiente de DCM/MeOH) para fornecer 163 mg de Composto 65 como um óleo incolor (30%) e 60 mg de composto 61 (43%).

[000558] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,84 (s, 9H); 0,88 (d, J = 6,9 Hz, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,05 (d, J = 7,3 Hz, 18H); 1,15 (m, 3H); 1,19 (s, 3H); 1,32 (d, J = 14,8 Hz, 1H); 1,82 (m, 1H); 1,97 (dd, J = 9,9 e 14,8 Hz, 1H); 2,28 (dt, J = 11,1 e 14,9 Hz, 1H); 2,61 (m, 1H); 2,69 (dd, J = 11,2 e 14,3 Hz, 1H); 2,91 (dd, J = 2,2 e 7,6 Hz, 1H); 2,95 (dd, J = 3,8 e 14,3 Hz, 1H); 3,43 (m, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,91 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 4,08 (ddd, J = 3,8, 7,4 e 11,2 Hz, 1H); 4,12 (m, 1H); 4,81 (s, 2H); 5,04 (ddd, J = 1,5, 4,5 e 11,1 Hz, 1H); 5,89 (dd, J = 1,5 e 15,2 Hz, 1H); 6,44 (ddd, J = 4,5, 10,6 e 15,2 (d, J = 2,3 Hz, 1H); 7,36 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,88 (d, J = 8,4 Hz, 1H); 7,91 (d, J = 7,1 Hz, 1H); 8,39 (d, J = 7,4 Hz, 1H). LCMS (A4): ES m/z = 120; m/z = 882 [M+H]+; tR = 7,65 minutos. Exemplo 26: (3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)- 16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(hidroximetil)fenil)oxiran-2-il)etil)-6,6,7-trimetil- 3-neopentil-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000559] A uma solução de composto 65 em THF resfriada a 0°C foi adicionado TBAF. O meio de reação foi agitado a 0°C durante 1 hora e 30 minutos, em seguida H2O (5 mL) foi adicionado e a agitação realizada durante 20 minutos. O meio de reação foi extraído com DCM (3 x 20 mL), a fase orgânica combinada foi lavada com salmoura saturada (3 x 5 mL), secada sobre MgSO4, filtrada, concentrada em vácuo e purificada por cromatografia rápida em 15 g de sílica gel (eluição por gradiente de EtOAc/MeOH/H2O) para fornecer 69 mg de Exemplo 26 como uma laca branca (91%).

[000560] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,85 (s, 9H); 0,89 (d, J = 6,9 Hz, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,19 (s, 3H); 1,35 (d, J = 14,8 Hz, 1H); 1,80 (m, 1H); 1,99 (dd, J = 9,9 e 14,8 Hz, 1H); 2,27 (dt, J = 11,1 e 14,9 Hz, 1H); 2,61 (m, 1H); 2,69 (dd, J = 11,2 e 14,3 Hz, 1H); 2,90 (dd, J = 2,2 e 7,6 Hz, 1H); 2,95 (dd, J = 3,8 e 14,3 Hz, 1H); 3,43 (m, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,91 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 4,06 a 4,15 (m, 2H); 4,50 (d, J = 5,9 Hz, 2H); 5,03 (dd, J = 1,5, 3,7 e 11,5 Hz, 1H); 5,20 (t, J = 5,9 Hz, 1H); 5,89 (dd, J = 1,5 e 15,3 Hz, 1H); 6,43 (ddd, J = 4,6, 10,7 e 15,3 Hz, 1H); 7,02 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 7,20 (dd, J = 2,2 e 8,6 Hz, 1H); 7,23 (d, J = 8,3 Hz, 2H); 7,32 (m, 3H); 7,87 (d, J = 8,3 Hz, 1H); 7,92 (d, J = 7,0 Hz, 1H); 8,40 (d, J = 7,4 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 724 [MH]-; m/z = 726 [M+H]+; m/z = 770 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,29 minuto. Composto 66: (4-nitrofenil)carbonato de 4-((2R,3R)-3-((S)-1- ((3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6,7-trimetil-3- neopentil-2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16- il)etil)oxiran-2-il)benzila

[000561] A uma solução de exemplo 26 (68 mg, 93,6 µmol) em DCM (5 mL) foram adicionados bis (4-nitrofenil)carbonato (118,7 mg, 374,5 µmol) e gota a gota DIEA (49 µL, 281,0 µmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 6 dias, em seguida salmoura saturada foi adicionada e foi extraída com DCM (3 x 10 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por cromatografia rápida em 5 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 79 mg de Composto 66 como uma laca branca (94%).

[000562] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,85 (s, 9H); 0,89 (d, J = 6,9 Hz, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,05 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,19 (s, 3H); 1,34 (d, J = 14,6 Hz, 1H); 1,83 (m, 1H); 1,97 (dd, J = 9,9 e 14,6 Hz, 1H); 2,28 (dt, J = 11,1 e 14,9 Hz, 1H); 2,61 (m, 1H); 2,69 (dd, J = 11,2 e 14,3 Hz, 1H); 2,93 (m, 2H); 3,42 (m, 1H); 3,79 (s, 3H); 3,99 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 4,09 (m, 2H); 5,05 (dd, J = 1,3, 4,0 e 11,1 Hz, 1H); 5,31 (s, 2H); 5,89 (dd, J = 1,3 e 15,3 Hz, 1H); 6,47 (ddd, J = 4,8, 10,8 e 15,3 Hz, 1H); 7,01 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 7,21 (dd, J = 2,2 e 8,6 Hz, 1H); 7,31 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 7,36 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 7,50 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 7,59 (d, J = 9,3 Hz, 2H); 7,87 (d, J = 8,3 Hz, 1H); 7,92 (d, J = 7,0 Hz, 1H); 8,32 (d, J = 9,3 Hz, 2H); 8,39 (d, J = 7,4 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 889 [MH]-; m/z = 891 [M+H]+; m/z = 935 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,55 minuto. Composto 67: cloridrato de ((S)-1-(((S)-1-((2-NBoc-aminoetil) amino)-1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamato de (9H-fluoren-9-il)metila

[000563] A uma suspensão de Fmoc-Val-Ala-OH (3,5 g, 8,53 mmol) em DCM (100 mL) foram adicionados carga de TEA (3,6 mL, 25,58 mL) para completar dissolvidos de material de partida, N-Boc-EDA (1,62 mL, 10,23 mmol) e uma solução de anidrido propilfosfônico (6,51 g, 10,23 mmol) 50% em DCM. O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 3 horas, em seguida NaOH a 1N (50 mL) foi adicionado e a suspensão filtrada, lavada com H2O e DCM. A fase orgânica do filtrado foi lavado com H2O. A massa e a fase orgânica foram combinadas, parcialmente concentradas em vácuo, filtradas, lavadas com DCM e secadas para fornecer 3,952 g de Composto 67 como um pó branco (84%).

[000564] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,84 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 0,86 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 1,19 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,37 (s, 9H); 1,99 (m, 1H); 2,92 a 3,14 (m, 4H); 3,88 (dd, J = 6,9 e 9,1 Hz, 1H); 4,19 a 4,35 (m, 4H); 6,71 (m, 1H); 7,32 (m, 2H); 7,38 (m, 1H); 7,42 (m, 2H); 7,73 (m, 2H); 7,84 (t, J = 6,8 Hz, 1H); 7,89 (d, J = 7,8 Hz, 2H); 7,92 (d, J = 7,8 Hz, 1H). Composto 68: cloridrato de ((S)-1-(((S)-1-((2-aminoetil)amino)- 1-oxopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamato de (9H- fluoren-9-il)metila

[000565] À suspensão de Composto 67 (100 mg, 159,5 µmol) em dioxano (3 mL) foi adicionado HCl a 4N em dioxano (905 µL, 3,62 mmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 20 horas, em seguida concentrado em vácuo. O produto cru foi ressuspenso em iPr2O (3 mL), imerso em um banho ultrassônico e filtrado. A massa desse modo obtida foi lavada com iPr2O (2 x 3 mL) e secada sob vácuo para fornecer 78 mg de composto 68 como um sólido branco (88%).

[000566] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,85 (d, J = 6,9 Hz, 3H); 0,87 (d, J = 6,9 Hz, 3H); 1,23 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,99 (m, 1H); 2,83 (m, 2H); 3,29 (m, 2H); 3,89 (dd, J = 6,9 e 8,9 Hz, 1H); 4,19 a 4,38 (m, 4H); 7,33 (m, 2H); 7,42 (m, 3H); 7,75 (m, 2H); 7,88 (s amplo, 3H); 7,90 (d, J = 7,6 Hz, 2H); 8,08 (d, J = 7,3 Hz, 1H); 8,14 (d, J = 5,9 Hz, 1H). Composto 69: (2-((S)-2-((S)-2-amino-3- metilbutanamido)propanamido)etil)carbamato de 4-((2R,3R)-3-((S)-1- ((3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6,7-trimetil-3- neopentil-2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16- il)etil)oxiran-2-il)benzila

[000567] A uma suspensão de compostos 66 (78 mg, 87,5 µmol) e 68 (51,4 mg, 105,0 µmol) em DCM foi adicionado DIEA (44,0 µL, 262,5 µmol). O meio de reação é agitado em temperatura ambiente durante a noite, em seguida foram adicionados composto 68 (24 mg, 49 µoml) e DIEA (15 µL) e a agitação foi realizada em temperatura ambiente durante 1 dia. Piperidina (87,0 µL, 875,0 µmol) foi adicionado e agitação realizada em temperatura ambiente durante a noite. O meio de reação foi concentrado em vácuo e purificado por duas cromatografias rápida sucessivas em 5 g de sílica gel (eluição por gradiente de EtOAc/MeOH/H2O) para fornecer 57 mg de Composto 69 como uma laca branca (66%).

[000568] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,75 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 0,85 (s, 9H); 0,86 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 0,87 (d, J = 6,7 Hz, 3H); 0,99 (s, 3H); 1,04 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 1,18 (m, 6H); 1,33 (d, J = 14,5 Hz, 1H); 1,75 (s amplo, 2H); 1,81 (m, 1H); 1,92 (m, 1H); 1,98 (dd, J = 10,0 e 14,5 Hz, 1H); 2,28 (m, 1H); 2,61 (m, 1H); 2,69 (dd, J = 11,3 e 14,7 Hz, 1H); 2,90 (dd, J = 2,0 e 7,5 Hz, 1H); 2,96 (m, 1H); 2,98 (d, J = 4,7 Hz, 1H); 3,05 (m, 2H); 3,12 (m, 2H); 3,43 (m, 1H); 3,81 (s, 3H); 3,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H); 4,09 (m, 2H); 4,26 (m, 1H); 5,01 (s, 2H); 5,04 (m, 1H); 5,89 (dd, J = 1,5 e 15,2 Hz, 1H); 6,45 (ddd, J = 4,5, 10,4 e 15,2 Hz, 1H); 7,02 (d, J = 8,8 Hz, 1H); 7,20 (dd, J = 2,4 e 8,8 Hz, 1H); 7,26 (t, J = 6,0 Hz, 1H); 7,29 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,32 (d, J = 2,5 Hz, 1H); 7,37 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,88 (d, J = 8,4 Hz, 1H); 7,93 (d, J = 7,1 Hz, 1H); 8,00 (t, J = 6,0 Hz, 1H); 8,03 (d, J = 8,1 Hz, 1H); 8,41 (d, J = 7,2 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 492 [M+2H]2+; m/z = 980 [M-H]-; m/z = 982 [M+H]+; m/z = 1026 [M-H+HCO2H]-; tR = 0,91 minuto. Composto 70: Ácido (9S,12S)-1-(4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S, 10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metóxi-benzil)-6,6,7-trimetil-3-neopentil-2,5, 9,12-tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16-il)etil)oxiran- 2-il)fenil)-12-isopropil-9-metil-3,8,11,14-tetraoxo-2-oxa-4,7,10,13-tetra- azaoctadecan-18-oico

[000569] A uma solução de composto 69 (56,0 mg, 56,8 µL) em DCM (8 mL) foi adicionada uma solução de anidrido glutárico (7,27 mg, 62,5 µmol) em DCM (4 mL). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 2 horas, concentrado em vácuo e purificado por cromatografia flash em 5 g de sílica gel (DCM/MeOH/H2O de eluição por gradiente) para fornecer 35,5 mg de composto 70 como uma laca branca (56%).

[000570] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,81 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 0,83 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 0,85 (s, 9H); 0,87 (d, J = 6,5 Hz, 3H); 0,99 (s, 3H); 1,04 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,19 (m, 6H); 1,32 (d, J = 14,3 Hz, 1H); 1,70 (m, 2H); 1,81 (m, 1H); 1,92 (m, 1H); 1,98 (m, 2H); 2,15 (m, 2H); 2,19 (t, J = 7,5 Hz, 2H); 2,27 (m, 1H); 2,61 (m, 1H); 2,69 (dd, J = 11,1 e 14,1 Hz, 1H); 2,91 (d, J = 7,6 Hz, 1H); 2,95 (m, 1H); 3,04 (m, 2H); 3,10 (m, 2H); 3,41 (m, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,93 (s, 1H); 4,03 a 4,16 (m, 3H); 4,19 (m, 1H); 5,01 (s, 2H); 5,04 (m, 1H); 5,89 (d, J = 15,6 Hz, 1H); 6,43 (ddd, J = 5,3, 11,0 e 15,6 Hz, 1H); 7,02 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,20 (dd, J = 2,3 e 8,7 Hz, 1H); 7,28 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,30 (m, 1H); 7,32 (d, J = 2,3 Hz, 1H); 7,36 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,88 (m, 2H); 7,93 (d, J = 7,4 Hz, 1H); 7,98 (s amplo, 1H); 8,06 (s amplo, 1H); 8,42 (d, J = 7,4 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 549 [M+2H]2+; m/z = 1094 [M-H]-; m/z = 1096 [M+H]+; tR = 1,21 minuto. Exemplo 27: (9S,12S)-1-(4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S,10R, 16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6,7-trimetil-3-neopentil-2,5,9,12- tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triazacilo-hexadec-13-en-16-il)etil)oxiran-2-il) fenil)-12-isopropil-9-metil-3,8,11,14-tetraoxo-2-oxa-4,7,10,13-tetra- azaoctadecan-18-oato de 2,5-dioxopirrolidin-1-íla

[000571] A uma solução de composto 70 (14,6 mg, 13,3 µmol) em DCM (5 mL) sob Ar foram adicionados DSC (4,3 mg, 16,0 µmol) e DIEA (2,8 µL, 16,0 µmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 3 horas, em seguida foram adicionados DSC (1,5 mg, 5,6 µmol) e DIEA (1 µL, 5,7 µmol) e a agitação foi realizada em temperatura ambiente durante 1 hora. O meio de reação foi concentrado em vácuo e purificadp por cromatografia rápida em 16,4 g de sílica gel modificada por diol (Eluição por gradiente de DCM/iPrOH) para fornecer 11,4 mg de exemplo 27 como uma laca branca (72%).

[000572] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,81 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 0,83 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 0,85 (s, 9H); 0,88 (d, J = 6,5 Hz, 3H); 0,99 (s, 3H); 1,04 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,19 (m, 6H); 1,34 (d, J = 14,4 Hz, 1H); 1,83 (m, 3H); 1,98 (m, 2H); 2,26 (m, 1H); 2,29 (m, 2H); 2,60 (m, 1H); 2,68 (t, J = 7,6 Hz, 2H); 2,70 (dd, J = 11,2 e 14,3 Hz, 1H); 2,80 (s, 4H); 2,91 (dd, J = 2,3 e 7,6 Hz, 1H); 2,95 (dd, J = 3,7 e 14,3 Hz, 1H); 2,99 a 3,20 (m, 4H); 3,43 (m, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,93 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 4,05 a 4,25 (m, 4H); 5,01 (m, 2H); 5,03 (m, 1H); 5,89 (dd, J = 1,6 e 15,4 Hz, 1H); 6,44 (ddd, J = 4,6, 10,9 e 15,4 Hz, 1H); 7,02 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 7,20 (m, 2H); 7,28 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 7,31 (d, J = 2,3 Hz, 1H); 7,37 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 7,86 (m, 3H); 7,91 (d, J = 7,1 Hz, 1H); 7,95 (d, J = 7,6 Hz, 1H); 8,39 (d, J = 7,3 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 311; m/z = 1191 [M-H]-; m/z = 1193 [M+H]+; m/z = 1237 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,26 minuto. Exemplo 28: mAb-Ex27

[000573] O Exemplo 28 foi preparado em um meio similar aos exemplos 3, 7, 10 e 14. 1,56 mg de exemplo 28 foram obtidos como uma solução límpida e incolor em uma concentração de 0,78 mg/mL com um DAR de 4 (HRMS), uma pureza monomérica de 100 % e uma produção global de 13%.

[000574] SEC-HRMS: m/z = 149405 (mAb nu); m/z = 150486 (D1); m/z = 151568 (D2); m/z = 152645 (D3); m/z = 153725 (D4); m/z = 154802 (D5); m/z = 155882 (D6); m/z = 156961 (D7); m/z = 158039 (D8). Síntese de exemplo 29: amina benzílica de maleimido-mc-vc-PABA-3- (S)-neopentil-7-(S)-Me-aza-C52 Composto 71: (4-nitrofenil)carbonato de 4-((S)-2-((S)-2-(6- (2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-íla)hexanamido)-3- metilbutanamido)-5-ureidopentanamido)benzila

[000575] O Composto 72 foi preparado como descrito por Verma V.A., et al., em Bioorg Med Chem Lett 2015, 25, 864-868.

[000576] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,83 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 0,87 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 1,18 (m, 2H); 1,31 a 1,75 (m, 8H); 1,96 (m, 1H); 2,10 (m, 1H); 2,18 (m, 1H); 2,96 (m, 1H); 3,01 (m, 1H); 3,37 (t, J = 7,2 Hz, 2H); 4,19 (dd, J = 7,0 e 8,6 Hz, 1H); 4,38 (m, 1H); 5,24 (s, 2H); 5,42 (s, 2H); 5,98 (t, J = 6,0 Hz, 1H); 7,00 (s, 2H); 7,40 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 7,57 (d, J = 9,2 Hz, 2H); 7,66 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 7,81 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 8,12 (d, J = 7,9 Hz, 1H); 8,31 (d, J = 9,2 Hz, 2H); 10,08 (s, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 738 [M+H]+; m/z = 782 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,1 minuto. Exemplo 29: (4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S,10R,16S,E)-10-(3- cloro-4-metoxibenzil)-6,6,7-trimetil-3-neopentil-2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa- 4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16-il)etil)oxiran-2-il)benzil)carbamato de 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1- íla)hexanamido)-3-metil-butanamido)-5-ureidopentanamido)benzila

[000577] Ao Composto 71 (16,0 mg, 21,7 µmol) foram adicionados uma solução de Exemplo 25 (14,3 mg, 19,7 µmol) em DCM (2,5 mL) e DIEA (3,4 µL, 19,7 µmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante a noite, em seguida foi adicionado DMF (1 mL) e a agitação foi realizada em temperatura ambiente durante 1 dia. H2O (8 mL) foi adicionado ao meio de reação, a agitação realizada durante 15 minutos, em seguida a fase aquosa foi extraída com DCM (3 x 10 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo, coevaporadas duas vezes com tolueno e purificadas por cromatografia rápida em 5 g em sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 15,8 mg de Exemplo 29 como um sólido branco (60%).

[000578] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,81 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 0,85 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 0,86 (s, 9H); 0,89 (d, J = 6,8 Hz, 3H); 0,99 (s, 3H); 1,04 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 1,18 (s, 3H); 1,19 (m, 2H); 1,31 a 1,75 (m, 9H); 1,80 (m, 1H); 1,96 (m, 2H) 2,10 (m, 1H); 2,18 (m, 1H); 2,27 (m, 1H); 2,61 (m, 1H); 2,69 (dd, J = 10,8 e 14,3 Hz, 1H); 2,90 (dd, J = 2,1 e 7,6 Hz, 1H); 2,96 (m, 2H); 3,01 (m, 1H); 3,37 (t, J = 7,2 Hz, 2H); 3,42 (m, 1H); 3,80 (s, 3H); 3,90 (d, J = 2,1 Hz, 1H); 4,08 (m, 1H); 4,11 (m, 1H); 4,20 (m, 3H); 4,39 (m, 1H); 4,97 (s, 2H); 5,04 (m, 1H); 5,40 (s, 2H); 5,89 (dd, J = 1,7 e 15,5 Hz, 1H); 5,97 (t, J = 6,2 Hz, 1H); 6,45 (ddd, J = 4,8, 10,7 e 15,5 Hz, 1H); 6,99 (s, 2H); 7,01 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,20 (dd, J = 2,2 e 8,7 Hz, 1H); 7,21 a 7,30 (m, 6H); 7,31 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 7,59 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 7,78 (m, 2H); 7,85 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 7,90 (d, J = 6,9 Hz, 1H); 8,07 (d, J = 7,8 Hz, 1H); 8,39 (d, J = 7,3 Hz, 1H); 9,97 (s, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 662 [M+2H]2+; m/z = 1322 [M-H]-; m/z = 1324 [M+H]+; m/z = 1368 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,3 minuto. Síntese dos exemplos 30 & 31: éster de NHS de não-clivável triazolo-3- (S)-neopentil-7-(S)-Me-aza-C52 e ADC correspondente Composto 72: 3-(prop-2-in-1-ilóxi)propanoato de terc-butila

[000579] A uma solução de álcool propargílico (1,362 mL, 23,4 mmol) em THF (23 mL) foi adicionado sódio (20,08 mg, 0,874 mmol), o meio de reação foi aquecido a 60°C até completar a solubilização de sódio, em seguida resfriado em temperatura ambiente antes da adição de acrilato de terc-butila (2,286 mL, 15,6 mmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante a noite, em seguida H2O (25 mL) foi adicionado e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 25 mL). A fase orgânica combinada foi secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo para fornecer 2 g de composto 72 como um óleo incolor (70%). Composto 73: ácido 3-(prop-2-in-1-ílaóxi)propanoico

[000580] A uma solução de composto 72 (2,0 g, 10,86 mmol) em DCM (50 mL) foi adicionado TFA (8,765 mL, 108,6 mmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante a noite, concentrado em vácuo, coevaporado com tolueno e purificado por cromatografia rápida em 80 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 1,1 g de composto 73 como um óleo (80%).

[000581] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 2,46 (t, J = 6,4 Hz, 2H); 3,43 (t, J = 2,4 Hz, 1H); 3,63 (t, J = 6,4 Hz, 2H); 4,11 (d,J = 2,4 Hz, 2H); 12,20 (amplo, 1H). Composto 74: ácido 3-((1-(4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S,10R, 16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6,7-trimetil-3-neopentil-2,5,9,12- tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16-il)etil)oxiran-2- il)benzil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi)propanoico

[000582] A uma solução de Exemplo 24 (50 mg, 66,6 µmol) em THF (0,5 mL) foram adicionados Composto 73 (17,05 mg, 113,1 µmol), sulfato de cobre (II) aquoso a 0,1M (266 µL, 26,6 µmol) e ascorbate de sódio aquoso a 0,2M (266 µL, 53,2 µmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 1 dia, em seguida H2O (1 mL) foi adicionado e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 1 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada, secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por filtração em Sephadex LH20 (eluição de DCM) para fornecer 40 mg de um óleo que foi também purificado por cromatografia rápida em 5 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 20 mg de composto 74 (35%).

[000583] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,82 (s, 9H); 0,88 (d, J = 6,7 Hz, 3H); 1,00 (s, 3H); 1,04 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,18 (s, 3H); 1,31 (d, J = 14,6 Hz, 1H); 1,80 (m, 1H); 1,97 (dd, J = 10,0 e 14,6 Hz, 1H); 2,25 (m, 1H); 2,42 (t, J = 6,6 Hz, 2H); 2,60 (m, 1H); 2,70 (dd, J = 10,9 e 14,4 Hz, 1H); 2,90 (dd, J = 2,2 e 7,6 Hz, 1H); 2,95 (dd, J = 3,6 e 14,4 Hz, 1H); 3,44 (m, 1H); 3,62 (t, J = 6,6 2H); 3,80 (s, 3H); 3,94 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 4,08 (m, 2H); 4,49 (s, 2H); 5,03 (m, 1H); 5,59 (s, 2H); 5,89 (dd, J = 1,7 e 15,3 Hz, 1H); 6,43 (ddd, J = 4,8, 10,8 e 15,3 Hz, 1H); 7,02 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,20 (dd, J = 2,4 e 8,7 Hz, 1H); 7,29 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,32 (d, J = 2,4 Hz, 1H); 7,35 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,85 (d, J = 8,4 Hz, 1H); 7,90 (d, J = 7,0 Hz, 1H); 8,13 (s, 1H); 8,46 (m, 1H); 12,20 (broad, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 440 [M+2H]2+; m/z = 877 [M-H]-; m/z = 879 [M+H]+; tR = 1,24 minuto. Exemplo 30: 3-((1-(4-((2R,3R)-3-((S)-1- ((3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6,6,7-trimetil-3- neopentil-2,5,9,12-tetraoxo-1-oxa-4,8,11-triaza-ciclo-hexadec-13-en- 16-il)etil)oxiran-2-il)benzil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi)propanoato de 2,5-dioxopirrolidin-1-íla

[000584] A uma solução de Composto 74 (20 mg, 22,7 µmol) em DCM (5 mL) foram adicionados DIEA (5,0 µL, 28,5 µmol) e DSC (6,34 mg, 23,8 µmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 3 horas, em seguida foram adicionados DSC (3 mg, 11,3 µmol) e DIEA (5 µL, 28,5 µmol) e a agitação foi realizada em temperatura ambiente durante 2 horas. O meio de reação foi, em seguida, concentrado em vácuo e purificado por duas cromatografias rápidas sucessivas em 1,5 g de sílica gel modificada por diol (Eluição por gradiente de DCM/iPrOH) para fornecer 11,5 mg de Exemplo 30 (50%).

[000585] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,83 (s, 9H); 0,87 (d, J = 6,6 Hz, 3H); 0,99 (s, 3H); 1,03 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,04 (d, J = 6,6 Hz, 3H); 1,19 (s, 3H); 1,32 (d, J = 14,5 Hz, 1H); 1,81 (m, 1H); 1,96 (dd, J = 10,2 e 14,5 Hz, 1H); 2,25 (m, 1H); 2,60 (m, 1H); 2,70 (dd, J = 11,2 e 14,5 Hz, 1H); 2,80 (s, 4H); 2,90 (dd, J = 2,0 e 7,4 Hz, 1H); 2,94 (t, J = 6,1 Hz, 2H); 2,97 (dd, J = 3,6 e 14,1 Hz, 1H); 3,42 (m, 1H); 3,74 (t, J = 6,1 Hz, 2H); 3,80 (s, 3H); 3,92 (d, J = 2,0 Hz, 1H); 4,09 (m, 2H); 4,55 (s, 2H); 5,03 (m, 1H); 5,59 (s, 2H); 5,89 (dd, J = 1,6 e 15,2 Hz, 1H); 6,44 (ddd, J = 4,7, 10,6 e 15,2 Hz, 1H); 7,02 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 7,20 (dd, J = 2,4 e 8,6 Hz, 1H); 7,29 (d, J = 8,3 Hz, 2H); 7,32 (m, 3H); 7,86 (d, J = 8,4 Hz, 1H); 7,90 (d, J = 6,9 Hz, 1H); 8,14 (s, 1H); 8,39 (d, J = 7,5 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 120; m/z = 974 [M-H]-; m/z = 976 [M+H]+; m/z = 1020 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,29 minuto. Exemplo 31: mAb-Ex.30

[000586] O Exemplo 31 foi preparado em um meio similar aos exemplos 3, 7, 10 e 14. 5,4 mg de Exemplo 31 foram obtidos como uma solução límpida e incolor em uma concentração de 1,8 mg/mL com um DAR de 4 (HRMS), uma pureza monomérica de 98,1% e uma produção global de 45%.

[000587] SEC-HRMS: m/z = 149399 (mAb nu); m/z = 150245 (D1); m/z = 151101 (D2); m/z = 151965 (D3); m/z = 152831 (D4); m/z = 153679 (D5); m/z = 154546 (D6); m/z = 155408 (D7); m/z = 156273 (D8); m/z = 157284(D9). Síntese de exemplo 32: amina benzílica de 3-(S)-neopentil-6-Me-6- CH2OH-aza-C52 32 Composto 75: (2R,3S)-1-((4-metoxibenzil)óxi)-2-metilex-5- en-3-il (2S)-2-((4-((R)-2-acrilamido-3-(3-cloro-4-metoxifenil) propana- mido)-3-(hidroximetil)-3-metil-2-oxobutil)amino)-4,4-dimetilpentanoato

[000588] A uma solução de composto BC6 (385,6 mg, 773,5 µmol) em DMF (12 mL) foram adicionados HATU (348,7 mg, 889,5 µmol) e HOAt (122,3 mg, 889,5 µmol). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 30 minutos, em seguida foram adicionados uma solução de composto AD3 (292 mg, 773,5 µmol) em DMF (5 mL) e DIEA (475,2 µL, 2,71 mmol) e a agitação foi realizada em temperatura ambiente durante 4 horas. H2O (50 mL) foi adicionado e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 50 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com H2O (15 mL), salmoura saturada (3 x 15 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por cromatografia rápida em 30 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 383 mg de Composto 75 como um óleo incolor (65%).

[000589] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): mistura de diastereoisômero de 55/45; 0,85 a 0,88 (m, 12H); 0,91 (s, 1,65H) ; 0,92 (s, 1,35H) ; 1,56 (m, 1H) ; 1,60 (m, 1H) ; 1,98 (m, 1H) ; 2,21 (m, 1H) ; 2,30 (m, 1H); 2,71 (m, 1H); 2,92 (m, 1H); 3,19 a 3,45 (m, 6H); 3,73 (s, 3H); 3,80 (s, 3H); 4,29 (m, 1H); 4,33 (m, 2H); 4,58 (m, 1H); 4,82 (m, 1H); 4,95 a 5,09 (m, 3H); 5,55 (dd, J = 2,2 e 10,2 Hz, 1H); 5,71 (m, 1H); 6,01 (dd, J = 2,2 e 17,2 Hz, 1H); 6,23 (dd, J = 10,2 e 17,2 Hz, 1H); 6,89 (m, 2H); 7,01 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 7,17 (dd, J = 2,2 e 8,6 Hz, 1H); 7,21 (m, 2H); 7,34 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 7,82 (d, J = 8,7 Hz, 0,45H); 7,84 (d, J = 8,7 Hz, 0,55H); 7,98 (t, J = 6,5 Hz, 0,45H); 8,70 (t, J = 6,5 Hz, 0,55H); 8,39 (d, J = 8,6 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 756 [M-H]-; m/z = 758 [M+H]+; m/z = 802 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,54 a 1,56 minuto. Composto 76: (3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6- (hidroximetil)-16-((R)-1-((4-metoxibenzil)óxi)propan-2-il)-6-metil-3- neopentil-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000590] A uma solução de Composto 75 (380 mg, 501,1 µmol) em DCM (38 mL) sob Ar foi adicionado catalisador de Grubbs I (20,97 mg, 25,05 µmol). O meio de reação foi agitado sob Ar em temperatura ambiente durante 4 horas, em seguida foi adicionado catalisador de Grubbs I (20,97 mg, 25,05 µmol). A agitação foi realizada em temperatura ambiente durante 3 horas, em seguida foi adicionado catalisador de Grubbs I (20,97 mg, 25,05 µmol) e a agitação realizada em temperatura ambiente. Após 24 horas de reação, o catalisador de Grubbs I (20,97 mg, 25,05 µmol) foi adicionado e a agitação realizada durante 4 horas. O meio de reação foi concentrado em vácuo e purificado por cromatografia rápida em 20 g de sílica gel (eluição isocrática heptano/EtOAc) para fornecer 170 mg de estereoisômero 1 de Composto 76 (56%) e 138 mg de estereoisômero 2 de composto 76 (37%). Estereoisômero 1 de Composto 76

[000591] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,83 (s, 9H); 0,91 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,02 (s, 3H); 1,30 (dd, J = 2,4 e 14,6 Hz, 1H); 1,53 (dd, J = 9,9 e 14,6 Hz, 1H); 1,99 (m, 1H); 2,28 (m, 1H); 2,45 (m, 1H); 2,67 (m, 1H); 2,91 (dd, J = 3,0 e 13,7 Hz, 1H); 2,97 (dd, J = 4,0 e 14,5 Hz, 1H); 3,17 a 3,49 (m, 5H); 3,72 (s, 3H); 3,80 (s, 3H); 4,18 (m, 1H); 4,37 (m, 2H); 4,50 (td, J = 2,4 e 9,6 Hz, 1H); 5,00 (m, 3H); 5,82 (dd, J = 1,9 e 15,4 Hz, 1H); 6,39 (ddd, J = 4,2, 11,6 e 15,4 Hz, 1H); 6,90 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 7,04 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 7,12 (m, 1H); 7,15 (dd, J = 2,3 e 8,6 Hz, 1H); 7,21 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 7,28 (d, J = 2,3 Hz, 1H); 8,79 (d, J = 9,6 Hz, 1H); 8,38 (d, J = 8,7 Hz, 1H). LCMS (A4): ES m/z = 728 [M-H]- ; m/z = 730 [M+H]+; m/z = 774; tR = 5,15 minutos.

Composto 76 estereoisômero 2

[000592] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,83 (s, 9H); 0,88 (s, 3H); 0,91 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,28 (dd, J = 2,4 e 14,6 Hz, 1H); 1,67 (dd, J = 9,9 e 14,6 Hz, 1H); 1,99 (m, 1H); 2,28 (m, 1H); 2,45 (m, 1H); 2,67 (m, 1H); 3,02 (dd, J = 3,3 e 14,2 Hz, 1H); 3,08 (dd, J = 1,9 e 13,5 Hz, 1H); 3,25 a 3,42 (m, 4H); 3,55 (dd, J = 5,1 e 11,0 Hz, 1H); 3,73 (s, 3H); 3,81 (s, 3H); 4,17 (m, 1H); 4,37 (m, 2H); 4,44 (td, J = 2,1 e 9,3 Hz, 1H); 4,80 (t, J = 5,1 Hz, 1H); 5,00 (m, 2H); 5,86 (dd, J = 1,6 e 15,1 Hz, 1H); 6,38 (ddd, J = 4,0, 11,4 e 15,3 Hz, 1H); 6,90 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 7,04 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,19 (dd, J = 2,2 e 8,7 Hz, 1H); 7,22 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 7,30 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 7,42 (d, J = 10,4 Hz, 1H); 7,92 (d, J = 8,9 Hz, 1H); 8,45 (d, J = 8,7 Hz, 1H). LCMS (A4): ES m/z = 728 [M-H]-; m/z = 730 [M+H]+; m/z = 774; tR = 4,79 minutos. Composto 77: (3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)- 16-((R)-1-((4-metóxi-benzil)óxi)propan-2-il)-6-metil-3-neopentil-6- (((trietilsilil)óxi)metil)-1-oxa-4,8,11-triaza-ciclo-hexadec-13-eno- 2,5,9,12-tetraona

[000593] A uma solução de estereoisômero 1 de composto 76 (170 mg, 232,8 µmol) em DCM (3 mL) resfriada com um banho de gelo foram adicionados a 4°C clorotrietilsilano (159.3 µL, 931,1 µmol) e, gota a gota, TEA (131,1 µL, 931,1 µmol). O meio de reação foi agitado a 4°C durante 30 minutos, em seguida em temperatura ambiente durante 20 horas. O meio de reação foi diluído com DCM (50 mL) e salmoura (10 mL) e a agitação foi realizada durante 10 minutos. A fase orgânica foi lavada com salmoura saturada (2 x 10 mL), secada sobre MgSO4, filtrada e concentrada em vácuo. O outro diastereoisômero de Composto 76 (138 mg, 189,0 µmol) foi similarmente protegido, ambas as bateladas foram misturadas e purificada por cromatografia rápida em 20 g de sílica gel (eluição isocrática heptano/EtOAc) para fornecer 139 mg de Composto 77 estereoisômero 1 como uma espuma incolor (39%) e 107 mg de estereoisômero 2 de Composto 77 como uma espuma incolor (30%).

Composto 77 estereoisômero 1

[000594] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,62 (q, J = 8,1 Hz, 6H); 0,83 (s, 9H); 0,91 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 0,96 (t, J = 8,1 Hz, 9H); 1,04 (s, 3H); 1,66 (dd, J = 3,4 e 14,4 Hz, 1H); 1,43 (dd, J = 9,3 e 14,4 Hz, 1H); 1,99 (m, 1H); 2,28 (m, 1H); 2,47 (m, 1H); 2,68 (m, 1H); 2,92 (dd, J = 3,0 e 13,5 Hz, 1H); 2,99 (dd, J = 4,0 e 14,8 Hz, 1H); 3,21 a 3,40 (m, 3H); 3,48 (m, 1H); 3,63 (d, J = 10,3 Hz, 1H); 3,73 (s, 3H); 3,81 (s, 3H); 4,17 (m, 1H); 4,36 (m, 2H); 4,51 (td, J = 2,9 e 9,4 Hz, 1H); 5,02 (m, 1H); 5,82 (dd, J = 1,8 e 15,4 Hz, 1H); 6,39 (ddd, J = 4,3, 11,6 e 15,4 Hz, 1H); 6,89 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 7,02 (m, 1H); 7,04 (d, J = 8,7 Hz, 1H); 7,15 (dd, J = 2,3 e 8,7 Hz, 1H); 7,21 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 7,29 (d, J = 2,3 Hz, 1H); 7,96 (d, J = 9,4 Hz, 1H); 8,31 (d, J = 8,7 Hz, 1H). LCMS (A4): ES m/z = 842 [M-H]-; m/z = 844 [M+H]+; m/z = 888 [M-H+HCO2H]-; tR = 7,08 minutos.

Composto 77 estereoisômero 2

[000595] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,52 (q, J = 8,1 Hz, 6H) 0,84 (s, 9H); 0,88 a 0,93 (m, 15H); 1,29 (dd, J = 2,6 e 14,5 Hz, 1H); 1,68 (dd, J = 10,1 e 14,5 Hz, 1H); 1,99 (m, 1H); 2,28 (m, 1H); 2,47 (m, 1H); 2,68 (m, 1H); 3,01 (dd, J = 3,4 e 14,5 Hz, 1H); 3,15 (d, J = 12,8 Hz, 1H); 3,33 (m, 1H); 3,48 (d, J = 10,4 Hz, 1H); 3,73 (s, 3H); 3,81 (s, 3H); 3,83 (d, J = 10,4 Hz, 1H); 4,17 (m, 1H); 4,36 (m, 2H); 4,45 (td, J = 2,4 e 9,2 Hz, 1H); 5,01 (m, 1H); 5,84 (dd, J = 1,8 e 15,3 Hz, 1H); 6,39 (ddd, J = 3,9, 11,4 e 15,3 Hz, 1H); 6,90 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 7,05 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 7,19 (dd, J = 2,2 e 8,6 Hz, 1H); 7,22 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 7,30 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 7,47 (d, J = 10,4 Hz, 1H); 8,71 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 8,41 (d, J = 8,7 Hz, 1H). LCMS (A4): ES m/z = 842 [M-H]-; m/z = 844 [M+H]+; m/z = 888 [M-H+HCO2H]-; tR = 6,88 minutos. Composto 78: 3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-16- ((R)-1-hidroxipropan-2-il)-6-metil-3-neopentil-6-(((trietilsilil)óxi)metil)-1- oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-eno-2,5,9,12-tetraona

[000596] A uma solução de ambos os diastereoisômeros de composto 77 (245 mg, 290,1 µmol) em DCM (10 mL) e H2O (2,5 mL) resfriada com um banho de gelo/acetona foram adicionados DDQ (339,4 mg, 1,45 mmol) e 2,6-di-terc-butilpiridina (171,7 mg, 870,3 µmol). O meio de reação foi agitado a 0°C durante 2 horas, em seguida foi diluído com NaHCO3 aquoso (10 mL) e DCM (10 mL) e a agitação foi realizada durante 10 minutos. A fase aquosa foi extraída com DCM (3 x 20 mL), as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (3 x 5 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por cromatografia rápida em 20 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 155 mg de composto 78 como uma espuma branca (74%).

[000597] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,49 a 0,65 (m, 6H); 0,80 a 1,07 (m, 24H); 1,35 a 1,71 (m, 2H); 1,83 (m, 1H); 2,28 (m, 1H); 2,47 (m, 1H ; 2,68 (m, 1H); 2,90 a 3,50 (m, 5,96H); 3,65 (d, J = 10,6 Hz, 0,52H); 3,80 (s, 3H); 3,82 (d, J = 10,6 Hz, 0,52H); 4,18 (m, 1H); 4,29 a 4,70 (m, 2H); 5,02 (m, 1H); 5,80 a 5,89 (m, 1H); 6,05 (m, 0,11H); 6,39 (m, 0,89H); 6,98 a 7,31 (m, 3,48H); 7,47 (d, J = 10,6 Hz, 0,52H); 7,87 (d, J = 9,4 Hz, 0,11H); 7,96 (d, J = 9,4 Hz, 0,52H); 8,70 (d, J = 9,4 Hz, 0,37H); 8,31 (d, J = 8,7 Hz, 0,63H); 8,42 (d, J = 8,4 Hz, 0,37H). LCMS (A4): ES m/z = 722 [M-H]-; m/z = 724 [M+H]+; m/z = 768 [M-H+HCO2H]- ; tR = 5,68 a 5,78 minutos. Composto 79: 2S)-2-((3S,10R,16S,E)-10-(3-cloro-4- metoxibenzil)-6-metil-3-neopentil-2,5,9,12-tetraoxo-6- (((trietilsilil)óxi)metil)-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13-en-16- il)propanal

[000598] A uma solução de composto 78 (154 mg, 212,6 µmol) em DCM (1,5 mL) resfriada com um banho de gelo / acetona foram adicionadas a 0°C uma solução de KBr (25,6 mg, 212,6 µmol) em H2O (612 µL), uma solução de TEMPO a 5 mg/mL em DCM (137 µL, 4,25 µmol) e, gota a gota, uma solução aquosa de hipocloreto de sódio a 1,56M pH 9,5 (204 µL, 318.9 µmol). A agitação foi realizada a 0°C durante 15 minutos, em seguida foi adicionado um Na2S2O3 saturado a 0°C (1,9 mL), o banho de gelo foi removido e o meio de reação agitado durante 10 minutos. Foi em seguida extraído com DCM (3 x 20 mL), as fases orgânicas combinadas foram lavadas com H2O (2 x 10 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por cromatografia rápida em 15 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 36 mg de composto 61 (23%).

[000599] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): mistura de diastereoisômero de 72/28: 0,49 a 0,65 (m, 6H); 0,80 a 1,08 (m, 24H); 1,32 a 1,69 (m, 2H); 2,40 (m, 1H); 2,68 (m, 2H); 2,79 (m, 1H); 2,89 a 3,70 (m, 5H); 3,80 (s, 3H); 4,10 a 4,53 (m, 2H); 5,02 (m, 0,28H); 5,28 (m, 0,72H); 5,78 a 5,91 (m, 1H); 6,07 (m, 0,28H); 6,40 (m, 0,72H); 7,00 a 7,51 (m, 4H); 7,90 (d, J = 9,4 Hz, 0,28H); 7,98 (d, J = 9,4 Hz, 0,72H); 8,34 (m, 1H); 9,59 (d, J = 2,5 Hz, 0,28H); 9,63 (d, J = 1,8 Hz, 0,72H). LCMS (A5): m/z = 722 [M+H]+; tR = 1,71 minutos. Composto 80: 1-(azidometil)-4-(bromometil)benzeno

[000600] A uma solução de dibrometo de p-xileno (2,0 g, 7,2 mmol) em DMF (20 mL) foi adicionada durante 20 minutos uma solução de azida de sódio (584,9 mg, 8,64 mmol) em DMF (20 mL). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 20 horas, em seguida despejado sobre gelo (100 g) e extraído com EtOAc (3 x 50 mL). A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura saturada (3 x 15 mL), secada sobre MgSO4, filtrada, concentrada em vácuo, coevaporada com tolueno e purificada por cromatografia rápida em 70 g de sílica gel (eluição de Et2O) para fornecer 773 mg de Composto 80 como um óleo incolor (47%).

[000601] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 4,45 (s, 2H); 4,71 (s, 2H); 7,35 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 7,47 (d, J = 8,5 Hz, 2H). Composto 81: trifluorometanossulfonato de (1R,4S,5R,6S)-6- (4-(azidometil)benzil)-4,7,7-trimetil-6-thiabicilo [3,2,1]octan-6-io

[000602] Ao (1R,4R,5R)-4,7,7-trimetil-6-thiabicilo [3,2,1]octano (Número de CAS [5718-75-2], 580,1 mg, 3,41 mmol) foi adicionada uma solução de composto 80 (770 mg, 3,41 mmol) em DCM (2,2 mL). Uma solução de trifluorometanossulfonato de lítio (2,71 g, 17,03 mmol) em H2O 2 mL) foi em seguida adicionada gota a gota e o meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante 2 dias. H2O (15 mL) e DCM (15 mL) foram, em seguida, adicionados ao meio de reação e a agitação realizada em temperatura ambiente durante 10 minutos. A fase aquosa foi extraída com DCM (3 x 15 mL), as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (3 x 8 mL), secadas sobre MgSO4, filtradas e concentradas em vácuo. O óleo amerelo pálido foi triturado em iPr2O (5 mL), o sólido desse modo obtido foi filtrado, lavado com iPr2O (2 x 5 mL) e secado sob vácuo para fornecer 1,266 g de composto 81 como um sólido branco (79%).

[000603] RMN 1H (400 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 1,08 (d, J = 7,2 Hz, 3H); 1,45 (m, 1H); 1,55 a 1,80 (m, 3H); 1,69 (s, 3H); 1,75 (s, 3H); 1,99 (m, 1H); 2,40 (d, J = 13,8 Hz, 1H); 2,45 (m, 1H); 2,59 (dm, J = 13,8 Hz, 1H); 3,88 (t, J = 4,6 Hz, 1H); 4,52 (s, 2H); 4,60 (d, J = 12,8 Hz, 1H); 4,90 (d, J = 12,8 Hz, 1H); 7,47 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 7,61 (d, J = 8,5 Hz, 2H). Composto 82: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4- (azidometil)fenil)oxiran-2-il)etil)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6-metil-3- neopentil-6-(((trietilsilil)óxi)metil)-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13- eno-2,5,9,12-tetraona

[000604] A uma solução de compostos 79 (35 mg, 48,5 µmol) e 81 (24,8 mg, 53,3 µmol) em DCM (1,5 mL) resfriado a -70°C foi adicionado gota a gota BEMP (Número de CAS [98015-45-3], 18,6 µL, 63,0 µmol). A mistura reacional foi agitada durante a -70°C durante 2 horas e 30 minutos, salmoura saturada (1,5 mL) foi adicionada à mistura reacional, o banho removido e a agitação realizada vigorosamente até RT. A fase aquosa foi extraída com DCM (3 x 10 mL), as fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por cromatografia rápida em 5 g de sílica gel (eluição por gradiente de DCM/MeOH) para fornecer 10,2 mg de Composto 82 como uma laca incolor (24%).

[000605] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,61 (q, J = 8,1 Hz, 6H); 0,80 (s, 9H); 0,98 (t, J = 8,1 Hz, 9H); 1,02 (s, 3H); 1,03 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,34 (dd, J = 2,5 e 14,4 Hz, 1H); 1,44 (dd, J = 10,0 e 14,4 Hz, 1H); 1,85 (m, 1H); 2,27 (m, 1H); 2,62 (m, 2H); 2,88 (dd, J = 2,6 e 13,5 Hz, 1H); 2,97 (dd, J = 3,7 e 14,2 Hz, 1H); 3,00 (dd, J = 2,3 e 7,3 Hz, 1H); 3,35 (m, 1H); 3,48 (dd, J = 9,5 e 14,2 Hz, 1H); 3,61 (d, J = 10,3 Hz, 1H); 3,81 (s, 3H); 3,92 (d, J = 2,3 Hz, 1H); 4,15 (m, 1H); 4,46 (s, 2H); 4,48 (td, J = 2,5 e 9,7 Hz, 1H); 5,10 (m, 1H); 5,78 (dd, J = 2,2 e 15,3 Hz, 1H); 6,40 (ddd, J = 4,3, 11,6 e 15,3 Hz, 1H); 7,04 (m, 2H); 7,14 (dd, J = 2,3 e 8,6 Hz, 1H); 7,28 (d, J = 2,3 Hz, 1H); 7,33 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,39 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,96 (d, J = 9,7 Hz, 1H); 8,28 (d, J = 8,7 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 120; m/z = 865 [M-H]-; m/z = 867 [M+H]+; m/z = 911 [M-H+HCO2H]-; tR = 1,87 minuto. Exemplo 32: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4- (aminometil)fenil)oxiran-2-il)etil)-10-(3-cloro-4-metoxibenzil)-6-metil-3- neopentil-6-(((trietilsilil)óxi)metil)-1-oxa-4,8,11-triazaciclo-hexadec-13- eno-2,5,9,12-tetraona

[000606] A uma solução de Composto 82 (9,4 mg, 10,84 µmol) em DCM (1,3 mL) e MeOH (0,7 mL) foi adicionada uma solução de TCEP (3,45 mg, 11,9 µmol) em H2O (0,7 mL). O meio de reação foi agitado em temperatura ambiente durante a noite, em seguida foi adicionado NaHCO3 aquoso (2,5 mL) e a agitação realizada durante 10 minutos. A fase aquosa foi extraída com DCM (3 x 10 mL), as fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas, concentradas em vácuo e purificadas por cromatografia slash em 5 g de sílica gel (DCM/MeOH/H2O de eluição por gradiente) para fornecer 4,55 mg de exemplo 32 como uma laca branca (57%).

[000607] RMN 1H (500 MHz, d em ppm, DMSO-d6): 0,82 (s, 9H); 1,01 (s, 3H); 1,03 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1,33 (dd, J = 2,3 e 14,5 Hz, 1H); 1,56 (dd, J = 10,1 e 14,5 Hz, 1H); 1,82 (m, 1H); 2,27 (m, 1H); 2,64 (m, 2H); 2,88 (dd, J = 2,6 e 13,5 Hz, 1H); 2,92 (dd, J = 2,2 e 7,3 Hz, 1H); 2,96 (dd, J = 4,0 e 11,2 Hz, 1H); 3,19 (dd, J = 4,3 e 10,9 Hz, 1H); 3,41 (m, 2H); 3,74 (s, 2H); 3,81 (s, 3H); 3,88 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 4,18 (m, 1H); 4,47 (td, J = 2,1 e 9,4 Hz, 1H); 4,91 (dd, J = 4,2 e 6,2 Hz, 1H); 5,08 (m, 1H); 5,76 (dd, J = 2,3 e 15,5 Hz, 1H); 6,40 (ddd, J = 3,7, 11,5 e 15,5 Hz, 1H); 7,05 (d, J = 8,8 Hz, 1H); 7,11 (m, 1H); 7,14 (dd, J = 2,4 e 8,8 Hz, 1H); 7,22 (d, J = 8,3 Hz, 2H); 7,25 (d, J = 2,4 Hz, 1H); 7,35 (d, J = 8,3 Hz, 2H); 8,78 (d, J = 9,4 Hz, 1H); 8,31 (d, J = 8,7 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 725 [M-H]-; m/z = 727 [M+H]+; tR = 0,79 minuto.

Resultados Farmacológicos

[000608] Os compostos da invenção foram submetidos a testes farmacológicos para determinação de seu efeito antitumoral. O ADC de fórmula (III) foi também avaliado em termos de estabilidade plasmática.

[000609] Para propósitos ilustrativos, dois conjugados, ADC1 e ADC2 descritos abaixo, derivados de WO2011/001052 foram também testados.

Avaliação da inibição de proliferação das linhagens de célula HCT116 e MDA-MB-231 pelos compostos de criptoficina de fórmula (I)

[000610] Células HCT116 e MDA-MB-231 em sua fase de crescimento exponencial foram tripsinizados e ressuspensos em seu respectivo meio de cultura (DMEM/F12 Gibco #21331, 10% de FCS Gibco #10500-056, 2 nM de glutamina Gibco #25030 para as células MDA-MB-231; DMEM Gibco #11960, 10% de FCS Gibco #10500-056, 2 mM de glutamina Gibco #25030 para as células HCT116). A suspensão foi semeada em placas de cultura de 96 cavidades Cytostar (GE Healthcare Europe, #RPNQ0163) no meio de cultura complete contendo soro em uma densidade de 5000 células/cavidade. Após incubação durante 4 horas, diluições sucessivas do composto de criptoficinas foram adicionadas às cavidades em concentrações diminuendo de 10-7 para 10-12 M (em triplicata para cada concentração). As células foram cultivadas a 37°C em uma atmosfera contendo 5% CO2 na presença do composto de criptoficinas durante 3 dias. No 4° dia, 10 µl de uma solução de 14C-timidina (0,1 µCi/cavidade, Perkin Elmer #NEC56825000) foram adicionados a cada cavidade. A incorporação de 14C-timidina foi medida 96 horas após o início do experimento com uma contadora de radioatividade microbeta (Perkin Elmer). Os dados foram expressos na forma de uma percentage de sobrevivência determinando a relação entre a contagem reduzida obtida com as células tratadas com o composto de criptoficina e a contagem obtida com as células das cavidades de controle (tratadas com o meio de cultura sozinho).

[000611] A atividade inibitória é fornecida pela concentração que inibe 50% da atividade. 1 Compostos de criptoficina de fórmula (I) foram testado como ß epóxidos puros ou como uma mistura de a e ß epóxidos como especificado na coluna intitulada "comentário estrutural". Sabe-se a partir da literatura que os ß epóxidos são geralmente 50 a 100 vezes mais potentes do que o a epóxido (veja, por exemplo, Al-Awar R.S., et al., J Med Chem 2003, 46, 2985-3007).

[000612] Os compostos de criptoficina de fórmula (I) foram constatados inibir a proliferação de linhagens de célula HCT116 e MDA- MB-231 com o IC50 variando de 50 pM a 2,815 nM. Avaliação da inibição de proliferação da linhagem de célula MDA-MB-

231 pelo ADC de fórmula (III)

[000613] As células MDA-MB-231 em sua fase de crescimento exponencial foram tripsinizadas e ressuspensas em seu meio de cultura (DMEM/F12 Gibco #21331, 10% de FCS Gibco #10500-056, 2 nM de glutamina Gibco #25030). A suspensão celular foi semeada em placas de cultura de 96 cavidades Cytostar (GE Healthcare Europe, #RPNQ0163) no meio de cultura completo contendo soro em uma densidade de 5000 células/cavidade. Após incubação durante 4 horas, diluições sucessivas do ADC são adicionadas à cavidades em concentrações diminuendo de 10-7 para 10-12 M (em triplicata para cada concentração). As células foram cultivadas a 37°C em uma atmosfera contendo CO2 a 5% na presença do ADC durante 3 dias. No 4° dia, 10 µl de uma solução de 14C-timidina (0,1 µCi/cavidade, Perkin Elmer #NEC56825000) foram adicionados a cada cavidade. A incorporação de 14C-timidina foi medida 96 horas após o início do experimento com uma contadora de radioatividade microbeta (Perkin Elmer). Os dados foram expressos na forma de uma porcentagem de sobrevivência determinando a relação entre a contagem reduzida obtida com as células tratadas com o ADC e a contagem obtida com as células das células de controle (tratadas com o meio de cultura sozinho). Em certos experimentos, o anticorpo nu foi adicionado às cavidades em uma concentração de 1 µM no início do experimento e a inibição de proliferação foi medida como anteriormente descrito.

[000614] ADC de criptoficina de fórmula (III), bem como ADC1 e ADC2, foram constatados inibir a proliferação de linhagem de célula MDA-MB-231 com IC50 variando de 20 pM a 130 pM e relação de seletividade de ADC sozinho vs ADC + anticorpo nu entre 185 e 500. Determinação da DMT do ADC de fórmula (III) após administração i.v. simples em camundongos SCID

[000615] DMT foi determinada como a dose máxima que não induz 15% de perda de peso corporal durante 3 dias consecutives para um camundongo individual ou 20% de pesa de peso corporal durante 1 dia ou mortalidade. Ela foi avaliada após uma injeção em bolus intravenosa (i.v.) simples em 3 camundongos SCID fêmeas e durante um período de 28 dias após tratamento.

[000616] ADC de criptoficina de fórmula (III) exibiu DMT em camundongos SCID variando de 20 mg/kg a > 50 mg/kg.

Avaliação da atividade antitumor in vivo de ADC de fórmula (III) contra MDA-MB-231 em camundongos SCID após administração i.v. simples

[000617] Atividade antitumor in vivo foi avaliada em 3 níveis de dose contra xenoenxertos de MDA-MB-231 de mama mensuráveis implantados s.c. em camundongos SCID fêmeas. Os grupos de controle foram deixados sem tratamento. Os conjugados foram administrados por uma injeção em bolus i.v. simples, o dia do tratamento foi indicado em cada gráfico por uma seta (?).

[000618] Para a avaliação de atividade antitumor dos conjugados, os animais foram pesados duas vezes semanalmente e os tumores foram medidos duas vezes semanalmente por calibre. Os pesos corporais de animal incluiam os pesos do tumor. O volume do tumor foi calculado usando a fórmula massa (mm3) = [comprimento (mm) x largura (mm)2]/2. As metas de eficácia primária foram ?T/?C, porcentagem de regressão média, regressões parciais e completas (PR e CR). Mudanças no volume de tumor para cada tratada (T) e controle (C) foram calculadas para cada tumor subtraindo o volume de tumor no primeiro tratamento (dia de preparo) do volume de tumor no dia da observação especificado. A ?T média foi calculada para o grupo tratado e a ?C media foi calculada para o grupo de controle. Em seguida, a relação ?T/?C foi calculada e expressa como uma porcentagem: ?T/?C = (delta T/delta C)x100.

[000619] A porcentagem de regressão de tumor foi definida como a % de decréscimo de volume de tumor no grupo tratado em um dia de observação especificado (t) em comparação com seu volume no primeiro dia do primeiro tratamento (t0). Em um ponto de tempo específico e para cada animal, % de regressão foi calculada. A % de regressão média foi em seguida calculada para o grupo. % de regressão (a t) = ((Volumeto - Volumet)/Volumeto)x1QQ. As regressões foram definidas como parciais (PR) quando o volume de tumor diminuiu para 5Q % do volume de tumor no início do tratamento e completas (CR) quando o volume de tumor não pôde ser medido (Q mm3). Sobrevivência livre de tumor (TFS) foi definida como os aniamis com tumores indetectáveis no término do estudo (>100 dias após o último tratamento). Avaliação da atividade antitumor in vivo de Ex.3 contra MDA-MB-231 em camundongos SCID após administração i.v. simples

[000620] Estes resultados mostraram que todos os exemplos testados da invenção, bem como ADC2, exibiram atividade antitumor em doses variando de 0,625 mg/kg a 5 mg/kg.

Determinação de parâmetros de PK de Ex.3 e Ex.7 após uma administração i.v. simples em camundongos SCID (5 mg/kg)

[000621] Os farmacocinéticos in vivo de ADC e anticorpo total foram avaliados em camundongos SCID fêmeas após administração do conjugado por uma injeção em bolus i.v. simples. Camundongos SCID fêmeas (5-6 semanas de idade, com peso médio de 20 a 25 g) foram alojados em uma estéril, sob condições assépticas e mem um capô laminar e foram alimentados ad libitum. O ADC foi administrado (design não serial, n=3 / tempo de amostragem) como um bolus i.v. em um nível de dose (10 mL/kg). Para cada animal em cada ponto de tempo selecionado (isto é, 0,083, 0,25, 24, 72, 96, 168, 240, 336 h), 600 µL de sangue foram coletados por meio de punção cardíaca e as amostras de sangue foram em seguida centrifugadas (15 minutos a 4°C e 3500 tr/min). Quantificação de ADC e anticorpo total em amostras de plasma foi realizada usando imunoensaios. Concentração plasmática versus perfis de tempo e parâmetros de PK de conjugado e anticorpo total em camundongos foram caracterizados usando análise não compartimental (Phoenix, WinNonLin versão 6.3) e são descritos nas Figuras 15 e 16. A área sob a curva de concentração-tempo, AUC (µg.dia/mL) foi estimada pela regra trapezoidal. Concentração a t=0 C0 (µg/mL), Clearance CL (L/(dia.kg), e meia vida de eliminação terminal t1/2 (dia) foram derivadas e calculadas a partir da curva.a: Dados informativos apenas como AUCext >> 30% (isto é, 42%); b: dados informativos apenas como AUCext >> 30% (isto é, 50%).

Avaliação por EMAR de estabilidade plasmática de ADC de criptoficina de fórmula (III) após administração i.v. simples em camundongos SCID a 5 mg/kg

[000622] As amostras de plasma do estudo de PK foram também analisados por LC-EMAR. A análise cromatográfica foi realizada em uma coluna Waters Acquity I Classe e uma Water Mass Prep Micro de Dessalinização 20 µm (2,1 x 5 mm) a 80°C com a eluição por gradiente de (A) água + ácido fórmico a 0,1%/(B) CH3CN + ácido fórmico a 0,1% descrito abaixo.

[000623] A espectrometria de massa foi realizada em uma máquina Waters QTOF Synapt G2-S com ionização por eletrovaporização em modo positivo (ES+). Os espectros de massa deconvoluídos com o software Waters Biopharmalynx. Os espectros de EMAR foram obtidos para todos os exemplos testados e são descritos nas Figuras 20 a 25.

[000624] Estes resultados mostraram que todos os exemplos testados da invenção não exibem a metabolização observada com referência a ADC, ADC1 e ADC2.

[000625] É, portanto, evidente que os compostos da invenção têm uma atividade anticancer e que os conjugados da invenção exibem uma estabilidade melhorada em plasma de camundongos.

[000626] Consequentemente, em outro de seus aspectos, a invenção também refere-se ao uso de compostos de criptoficina de fórmula (I) ou dos conjugados de fórmula (III) como agentes anticâncer.

[000627] A presente invenção, de acordo com outro de seus aspectos, também fornece medicamentos que compreendem um conjugado de fórmula (III).

[000628] Estes medicamentos são terapeuticamente empregados, especialmente no tratamento de câncer.

[000629] De acordo com outro de seus aspectos, a presente invenção refere-se às composições farmacêuticas compreendendo como princípio ativo um conjugado de fórmula (III) de acordo com a invenção. Estas composições farmacêuticas compreendem uma dose eficaz de pelo menos um conjugado de fórmula (III) de acordo com a invenção e também pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.

[000630] Os referidos excipientes são selecionados, de acordo com a forma farmacêutica e método de administração desejado, a partir dos excipientes usuais, que são conhecidos por uma pessoa versada na técnica.

[000631] A presente invenção, de acordo com outros de seus aspectos, também fornece um método de tratamento das patologias indicadas acima, que compreende administrar a um paciente uma dose eficaz de um conjugado de fórmula (III) de acordo com a invenção.

Claims (31)

1. Composto de criptoficina, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (I): em que: Ri representa um grupo (C1-C6) alquila; R2 e R3 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila; ou alternativamente R2 e R3 formam juntamente com o átomo de carbono ao qual eles são ligados um grupo (C3-C6) cicloalquila ou (C3-C6) heterocicloalquila; R4 e R5 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila ou um grupo (C1C6) alquil-NH(R12) ou um grupo (C1-C6) alquil-OH ou um grupo (C1-C6) alquil-SH ou um grupo (C1-C6) alquil-CO2H; ou alternativamente R4 e R5 formam juntamente com o átomo de carbono ao qual eles são ligados um grupo (C3-C6) cicloalquila ou (C3-C6) heterocicloalquila; R6 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1 C6) alquila; R7 e R8 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila ou um grupo (C1C6) alquil-CO2H ou um grupo (C1-C6) alquil-N(C1-C6)alquil2; ou alternativamente R7 e R8 formam juntamente com o átomo de carbono ao qual eles são ligados um grupo (C3-C6)cicloalquila ou um grupo (C3-C6)heterocicloalquila; R9 representa um ou mais substituintes do núcleo fenila escolhido, independentemente um do outro, de: um átomo de hidrogênio, -OH, (C1-C4)alcóxi, um átomo de halogênio, -NH2, -NH(C1- C6)alquila ou -N(C1-C6)alquil2 ou -NH(C1-C6)cicloalquila ou (C3- C6)heterocicloalquila; R10 representa pelo menos um substituinte do núcleo fenila escolhido de um átomo de hidrogênio e (C1-C4)alquila; W representa (Ci-C6)alquil-NH(Rii), (C1-C6)alquil-OH, (Ci-C6)alquil-SH, CO2H ou C(=O)NH2; (Ci-C6)alquil-CO2H ou (Ci-C6)alquil-C(=O)NH2; ou (Ci-C6)alquil-N3. R11 e R12 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (Ci-C6) alquila.

2. Composto de criptoficina de fórmula (I) de acordo com a reivindicação i, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte estrutura:

3. Composto de criptoficina de fórmula (I) de acordo com a reivindicação i ou 2, caracterizado pelo fato de que R1 representa um grupo metila.

4. Composto de criptoficina de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que: - cada um de R2 e R3 representa um átomo de hidrogênio, ou - um de R2 e R3 representa um grupo metila e o outro representa um átomo de hidrogênio, ou - R2 e R3 formam juntamente com o átomo de carbono ao qual eles são ligados um grupo ciclopropila.

5. Composto de criptoficina de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que cada um de R4 e R5 representa um grupo metila.

6. Composto de criptoficina de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que R6 representa um átomo de hidrogênio.

7. Composto de criptoficina de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que R7 e R8 representam independentemente um do outro um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila.

8. Composto de criptoficina de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que R9 representa dois substituintes selecionados de um grupo metóxi e um átomo de cloro.

9. Composto de criptoficina de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que R10 representa um átomo de hidrogênio.

10. Composto de criptoficina de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que: Ri representa uma (Ci-C6)alquila; cada um de R2 e R3 representa um átomo de hidrogênio; R6 representa um átomo de hidrogênio; R9 representa dois substituintes selecionados de um grupo metóxi e um átomo de cloro; e Rio representa um átomo de hidrogênio.

11. Composto de criptoficina de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que: R1 representa uma (C1-C6)alquila; R2 e R3 representam uma (C1-C6)alquila, e o outro representa um átomo de hidrogênio; R6 representa um átomo de hidrogênio; R9 representa dois substituintes selecionados de um grupo metóxi e um átomo de cloro; e R10 representa um átomo de hidrogênio.

12. Composto de criptoficina de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que W é selecionado de (C1-C6)alquil-NHR11, (C1-C6)alquil-OH, (C1- C6)alquil-SH e (C1-C6)alquil-CO2H, preferivelmente W representa um grupo CH2-NH2 ou um grupo CH2-OH.

13. Compostos de criptoficina de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, caracterizados pelo fato de serem selecionados da seguinte lista:

14. Carga útil de criptoficina, caracterizada pelo fato de que apresenta a fórmula (II): em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 e R10 são como definidos nas reivindicações 1 a 11, e Y é selecionado de grupo (Ci-C6)alquil-NRii, (Ci- C6)alquil-O, (C1-C6)alquil-S, C(=O)O, C(=O)NH, (C1-C6)alquil-C(=O)O, ou (C1-C6)alquil-C(=O)NH; R11 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1 C6) alquila; L representa um ligante; RCG1 representa um grupo químico reativo presente na extremidade do ligante, L é de fórmula (IV): em que: L1 representa uma ligação simples ou um grupo NR16(hetero)aril-CR15R14- O-C(=O), se Y = (C1-C6)alquil-N(R11); um grupo NR18-(C2-C6)alquil-NR17-C(=O) ou um grupo NR16(hetero)aril-CR15R14-O-C(=O)-NR18-(C2-C6)alquil-NR17-C(=O), se Y = (C1-C6)alquil- O ou (C1-C6)alquil- S; um grupo NR16(hetero)aril-CR15R14-, se Y = C(=O)O, C(=O)NH, (C1-C6)alquil-C(=O)O ou (C1-C6)alquil-C(=O)NH; Rii, Ri4, Ri5, Ri6, Ri7 e Ri8 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila; (AA)w representa uma sequência de w aminoácidos AA conectados entre si por meio de ligações de peptídeo; w representa um número inteiro variando de 1 a 12; L2 representa uma ligação simples ou um grupo (C1-C6) alquila ou um grupo (C1-C6)alquil-(OCH2CH2)i ou um grupo (C1-C6)alquil- (OCH2CH2)i-O(C1-C6)alquila ou um grupo (CH2CH2O)i(C1-C6)alquila ou um grupo CH(SO3H)-(C1-C6)alquila ou um grupo (C1-C6)alquil- CH(SO3H) ou um grupo (C1-C6)alquil-ciclo-hexila ou um grupo NR19-(C1- C6)alquila ou um grupo NR20-(CH2CH2O)i(C1-C6)alquila ou um grupo NR21-arila ou um grupo NR21-heteroarila ou um grupo (C1-C6)alquil- NR22C(=O)-(C1-C6)alquila ou um grupo (C1-C6)alquil-NR22C(=O)-(C1- C6)alquil-(OCH2CH2)i; Ri9, R20, R2i e R22 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila; i representa um número inteiro entre 1 e 50; AA significa um aminoácido natural ou não natural, de configuração D ou L, escolhido de: alanina (Ala), ß-alanina, ácido Y- aminobutírico, ácido 2-amino-2-ciclo-hexilacético, ácido 2-amino-2- fenilacético, arginina (Arg), asparagina (Asn), ácido aspártico (Asp), citrulina (Cit), cisteína (Cys), a,a-dimetil-ácido Y-aminobutírico, ácido e,e-dimetil-Y-aminobutírico, glutamina (Gln), ácido glutâmico (Glu), glicina (Gly), histidina (His), isoleucina (Ile), leucina (Leu), lisina (Lys), e- acetil-lisina (AcLys), metionina (Met), ornitina (Orn), fenilalanina (Phe), prolina (Pro), serina (Ser), treonina (Thr), triptofano (Trp), tirosina (Tyr), valina (Val).

15. Carga útil de criptoficina de fórmula (II) de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que apresenta a seguinte estrutura:

16. Carga útil de criptoficina de fórmula (II) de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizada pelo fato de que Y representa (C1-C6) alquil-NR11, preferivelmente Y representa CH2-NH.

17. Carga útil de criptoficina de fórmula (II) de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que a sequência (AA)w tem a fórmula: em que R23 representa a cadeia lateral de AA.

18. Carga útil de criptoficina de fórmula (II) de acordo com a reivindicação 14 ou 17, caracterizada pelo fato de que a sequência AA representa alanina (Ala), citrulina (Cit), glutamina (Gln), glicina (Gly), e- acetil-lisina (AcLys), valina (Val).

19. Carga útil de criptoficina de fórmula (II) de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 18, caracterizada pelo fato de que RCG1 é escolhido de: - grupo -C(=O)-ZaRa para o qual Za representa uma ligação simples, O ou NH, e Ra representa H ou um grupo (Ci-C6)alquila, (C3- C7)cicloalquila, (C5-C10)arila, (C5-C10)heteroarila ou (C3- C7)heterocicloalquila ou um grupo succinimidila; - um dos seguintes grupos reativos: o grupo maleimido grupo haloacetamido com R13 representando um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1-C6) alquila; -Cl; -N3; -OH; -SH; -NH2; -C=CH, um grupo ou um grupo O-(Ci-C6)alquil hidroxilamina.

20. Carga útil de criptoficina de fórmula (II) de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 18, caracterizada pelo fato de que L2 representa um grupo (C1-C6) alquila ou um grupo (C1-C6)alquil- (OCH2CH2)i ou um grupo CH(SO3H)-(C1-C6)alquila.

21. Cargas úteis de criptoficina de fórmula (II) de acordo com a reivindicação 14, caracterizadas pelo fato de que são selecionadas da seguinte lista:

22. Conjugado, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (III): em que Ri, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 e R10 são como definidos nas reivindicações 1 a 11; Y e L são como definidos na reivindicação 17 ou 18; G representa o produto de reação entre RCGi, um grupo reativo presente na extremidade do ligante e RCG2, um grupo reativo ortogonal presente em Ab; Ab representa um anticorpo.

23. Conjugado de fórmula (III) de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte estrutura:

24. Conjugado de fórmula (III) de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 ou 23, caracterizado pelo fato de que RCG2 é selecionado de: • grupos e-amino de lisinas suportados pelas cadeias laterais dos resíduos de lisina que estão presentes na superfície de um anticorpo; • grupos a-amino de aminoácidos de terminal N de cadeias pesadas e leves de anticorpo; • grupos sacarídeo da região de articulação; • tióis de cisteínas gerados por ligações de dissulfeto intracadeia ou tióis de cisteínas engenheiradas; • grupos amida suportados pelas cadeias laterais de alguns resíduos de glutamina que estão presentes na superfície de um anticorpo; • grupos aldeído introduzidos usando enzima geradora de formilglicina.

25. Conjugado de fórmula (III) de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 ou 23, caracterizado pelo fato de que: • quando RCG1 representa um N-hidroxissuccinimidil éster, RCG2 representa um grupo -NH2; • quando RCG1 representa uma função maleimido ou haloacetamido ou um grupo -Cl, RCG2 representa um grupo -SH; • quando RCG1 representa um grupo -N3, RCG2 representa um grupo -C=CH ou um C=C ativado; • quando RCG1 representa um grupo -OH ou -NH2, RCG2 representa uma função ácido carboxílico ou amida; • quando RCG1 representa um grupo -SH, RCG2 representa uma função maleimido ou haloacetamido; • quando RCG1 representa uma função -C=CH ou um C=C, RCG2 ativado representa um grupo -N3; • quando RCG1 representa uma função O-alquil hidroxilamina ou um substrato de reação Pictet-Spengler, RCG2 representa uma função aldeído ou cetona.

26. Conjugado de fórmula (III) de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 25, caracterizado pelo fato de que G é selecionado de:

27. Processo para preparação do composto de criptoficina de fórmula (I), caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de: em que: - a etapa (i) é um acoplamento peptídico entre os fragmentos AD3 e BC alternativo na presença de reagentes de acoplamento; - a etapa (ii) é uma macrociclização por metátese de fechamento de anel na presença de um catalisador; - a etapa (iii) é uma desproteção do p-metoxibenzil éter em condições acídicas; - a etapa (iv) é uma oxidação do álcool usando um agente de oxidação; - a etapa (v) é uma introdução do epóxido por reação Corey- Chaykovsky assimétrica usando sulfônio quiral derivado de isotiocineol substituído apropriadamente na presença de uma base; - a etapa (vi) é uma redução do grupo azido.

28. Processo para preparação de um conjugado de fórmula (III), caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: (i) colocar em contato e deixar reagir: - uma solução aquosa opcionalmente tamponada de um anticorpo, opcionalmente modificada por meio de um agente de modificação, e - uma solução de uma carga útil de criptoficina de fórmula (II) como definida em qualquer uma das reivindicações 14 a 21, o grupo químico RCG1 da carga útil de criptoficina de fórmula (II) sendo reativo aos grupos químicos RCG2 presente no anticorpo especialmente aos grupos amino presentes nos anticorpos, os referidos grupos químicos RCG2 tendo sido introduzidos, onde apropriado, pelo agente de modificação, a fim de ligar a carga útil de criptoficina de fórmula (II) ao anticorpo por formação de uma ligação covalente; (ii) e, em seguida, opcionalmente separar o conjugado formado na etapa (i) da carga útil de criptoficina de fórmula (II) e/ou do anticorpo não reagido e/ou de quaisquer agregados que podem ser formados.

29. Medicamento, caracterizado pelo fato de que compreende um conjugado de fórmula (III) como definido em qualquer uma das reivindicações 22 a 26.

30. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um conjugado de fórmula (III) como definido em qualquer uma das reivindicações 22 a 26, e também pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.

31. Conjugado de fórmula (III) de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 26, caracterizado pelo fato de ser para uso no tratamento de câncer.