BR112014030431B1

BR112014030431B1 - Processo para a preparação de uma fração sacarídica e uso da fração

Info

Publication number: BR112014030431B1
Application number: BR112014030431-9A
Authority: BR
Inventors: Rodolfo Riccio
Original assignee: Farmaceutici Damor S.P.A.
Priority date: 2012-06-04
Filing date: 2013-06-04
Publication date: 2021-07-20
Also published as: EA032318B1; CN104470528B; PT2863926T; EP2863926A1; US20150148309A1; EP2863926B1; ES2604471T3; ITFI20120104A1; SMT201700015B; JP2015518871A; KR20150021043A; BR112014030431A2; US9895392B2; EA201401322A1; CN104470528A; KR102095696B1; PL2863926T3; JP6169170B2; WO2013182551A1

Abstract

fração de sacarídeos do trigo, processo de isolamento e respectivo uso. são descritas as frações extraídas de sementes de trigo germinadas e maceradas em água, que têm um peso molecular compreendido entre 3 e 30 k daltons.

Description

Campo da invenção

[001] A invenção refere-se à área de extratos naturais, em particular extratos de cereais, e aos processos para seu isolamento.

Fundamentos da Invenção

[002] O uso clínico e cosmético de macromoléculas do tipo proteína (como, por exemplo, os fatores de crescimento) ou do tipo glicina (como, por exemplo, o ácido hialurônico, o amido não tratado ou o amido hidrolisado e suas frações, glicosaminoglicanos (GAGs), etc.), assim como dos extratos indefinidos, obtidos quimicamente a partir de várias plantas (por exemplo, Aloé vera, Centella asiatica, etc.), tornou-se atualmente generalizado, sendo estes produtos amplamente utilizados, por exemplo, em doenças envolvendo o tecido epidérmico (por exemplo, feridas ou úlceras) ou para fins cosméticos.

[003] Por exemplo, na patente EP 743 323 (em nome da mesma requerente), estão descritas frações sacarídicas obtidas de amido.

[004] Em alguns estudos, como por exemplo, D'Agostino et al. "Uma fração purificada de Triticum vulgare tem efeitos tróficos sobre CaCO-2" [GASTROENTEROLOGIA, ELSEVIER, FILADÉLFIA, vol. 104, n° 4, Supl, 01 de janeiro de 1993, pag. 819] e em Fiore et al. "As atividades diferenciais de extrato de Triticum vulgare e de suas frações em fibroblastos de rato"[ACTA THERAPEUTICA Vol. 19, n° 2, 1993 páginas 151-162], são descritas frações sacarídicas que são obtidas, sem especificar o método utilizado para a germinação e o crescimento das plantas, e também contendo uma fração de péptido, hexose e hexosamina.

[005] Estes extratos são utilizados como agentes de estimulação da fase de re- epitelialização e, portanto, de formação de cicatriz, como, por exemplo, agentes calmantes em casos de irritação da pele, isto é, emolientes, e genericamente em todas as doenças não infecciosas da pele e das mucosas.

[006] A pesquisa está ainda direcionada para o isolamento de novos compostos do tipo acima mencionado, tanto para aumentar a disponibilidade de produtos utilizados para os fins acima mencionados, como para isolar os compostos com atividade aumentada, e para obter produtos sem custos excessivos, como, por exemplo, os fatores de crescimento e um número de materiais de glicose acima indicado.

[007] No entanto, como já foi mencionado, todos os extratos naturais acima descritos (incluindo os extratos de trigo) consistem em um número indeterminado e elevado de substâncias de diferentes tipos e/ou de macromoléculas, a maioria das quais não foram identificadas; e ainda nem sempre é possível atribuir a atividade para quaisquer dos componentes identificados.

[008] Esta é também a razão pela qual os meios para a obtenção de material vegetal e as frações que podem, opcionalmente, ser purificadas não foram completamente descritas deforma normatizada.

[009] Por outro lado, e surpreendentemente, a fração que constitui o objeto da presente invenção - como foi identificada e caracterizada - exibe todas as atividades do extrato total e, assim, representa o principal responsável pela ação do extrato total.

Breve Descrição dos Desenhos

[0010] As figuras são representativas da invenção, como segue: - A Figura 1 representa cromatogramas obtidos por análise de, respectiva mente, uma placa de referência (água), a fração de acordo com a invenção (denominada no desenho como a fração CP), e a fração a partir da qual a fração obtida no parágrafo (d) do processo, de acordo com a invenção, é separada, designada como TVE na figura.

Descrição Resumida da Invenção

[0011] As frações extraídas de germes de trigo macerados em água são descritas, cujas frações têm uma massa molecular dentro do intervalo de 3 a 30 Daltons.

Descrição Detalhada da Invenção

[0012] A presente invenção refere-se a uma fração de um extrato obtido a partir de germes de trigo macerados em água, que têm um número de características biológicas típicas de fatores de crescimento, exceto que é, obviamente, de origem vegetal, bem como de origem animal, e tem a estrutura química de um polissacarídeo, não de uma proteína; as referidas características totalmente inesperadas tornam esta fração especialmente interessante para a preparação de medicamentos e de produtos úteis para o tratamento de feridas e úlceras.

[0013] Em particular, a presente invenção refere-se a uma fração obtida a partir de sementes de trigo germinadas, sob as condições normalmente utilizadas para se obter extratos análogos que já são conhecidos, conforme acima descrito no que se relaciona à arte anterior, tendo uma massa molecular dentro do intervalo de 3 a 30 Daltons.

[0014] Deve-se ter em mente que a fração, de acordo com a invenção, está ausente em sementes não germinadas, e que apenas - ou principalmente - esta fração (isto é, aquela dentro do intervalo de 3 a 30 Daltons) tem as propriedades acima descritas.

[0015] De acordo com a presente invenção, o processo proporciona a preparação de um extrato em bruto, obtido de trigo germinado, de acordo com os métodos conhecidos, e a subsequente purificação da fração ativa.

[0016] O processo acima mencionado compreende as seguintes etapas: a) a germinação de sementes de trigo, sob quaisquer condições de luz (de preferência no escuro), umidade (de preferência a uma umidade superior a 60%), temperatura (de preferência entre 5 a 20° C), obtendo-se rebentos de preferência crescidos entre 3 a 15 cm de altura, em água e/ou em suportes de crescimento natural ou artificial; b) o aquecimento do material vegetal obtido (opcionalmente, preventivamente, esmagado em pequenos tamanhos e com adição de água) a uma temperatura dentro do intervalo de 85 a 125° C, opcionalmente com adição de água, para preparar a próxima etapa e para evitar o crescimento microbiano; c) a maceração do material obtido, que é colocado em água (de preferência a um pH de 2 a 4) e, opcionalmente, macerado a baixas temperaturas (10° C no máximo); d) a eliminação do resíduo sólido por meio de filtração, prensagem ou esmagamento, ou por meio de outros sistemas equivalentes, tais como extratores, para a obtenção de uma primeira solução límpida (entendido como um extrato em bruto), que pode ser esterilizada; e) a purificação da fração com massa molecular entre 3 000 e 30.000 Daltons, a partir da solução acima mencionada, para, assim, se obter uma segunda solução que tenha um teor percentual elevado de fração ativa; f) o isolamento da fração ativa purificada, caracterizado pela massa molecular dentro do intervalo de 3 000 a 30.000 Daltons da segunda solução acima mencionada; se necessário, as sementes podem ser umedecidas com água purificada antes da etapa a).

[0017] A etapa b) e a esterilização mencionada na etapa d) são realizadas de acordo com técnicas convencionais, de preferência em autoclave.

[0018] A etapa c) é de preferência realizada a um pH entre 2 e 4 e, preferivelmente, durante 1 a 72 horas.

[0019] A etapa c) e a eliminação do resíduo sólido na etapa d) podem ser realizadas através de um processo de enrolamento. Neste caso, a solução obtida na etapa d) é adicionada, em vez da água da etapa c), para novas plântulas germinadas de acordo com etapa b), e as etapas c) e d) são repetidas. Desta forma, é possível obter rendimentos mais elevados.

[0020] A eliminação das frações com massa molecular inferior a 3000 e acima de 30.000 Daltons (etapa e) pode ser realizada por métodos convencionais conhecidos por um perito na arte, por exemplo, por meio de filtração ou ultrafiltração em gel.

[0021] Por analogia, a fração de interesse é isolada por meio das técnicas acima mencionadas.

[0022] As massas moleculares até aqui mencionadas referem-se a membranas de ultrafiltração usadas para purificar a fração que constitui o objeto da presente invenção; estes valores referem-se às proteínas globulares, e devem, portanto, ser considerados meramente indicativos da verdadeira massa molecular das frações separadas; mais uma razão para selecionar a fração em objeto, que é do tipo de sacarídeos e tem uma estrutura linear e ramificada, assim, qualquer uma, mas globular.

[0023] Na sua forma final, a fração que constitui o objeto da presente invenção pode ser seca ou liofilizada, usando métodos convencionais, ou, de preferência, deixada em solução aquosa a uma concentração conhecida e pré-estabelecida; opcionalmente com adição de um conservante e/ou esterilizada.

[0024] O processo genericamente acima descrito será mais claramente ilustrado pelo exemplo específico a seguir:

Exemplo 1. Germinação

[0025] 5 kg de celulose de madeira umedecida são distribuídos em uma série de adequados tanques de aço; para isso, 2,4 kg de sementes de trigo, previamente estimulados com água, são então distribuídos; as sementes são colocadas para germinar no escuro durante alguns dias (4 a 10 dias) em uma câmara de ar-condicionado, até que as mudas com 5 a 15 cm de altura sejam obtidas. Durante o crescimento, o suporte é umedecido diariamente pela adição de uma quantidade suficiente de água.

[0026] A temperatura da câmara é mantida dentro do intervalo de 5 a 20° C e a umidade relativa é > 60%.

2. Aquecimento

[0027] O conteúdo dos tanques é colocado em recipientes adequados, hermeticamente vedados e, em seguida, tratado em autoclave durante 1 hora a 1 atmosfera (~ 121° C).

3. Maceração e extração

[0028] O material é então transferido para um recipiente de aço, com capacidade adequada, e 100 litros de água purificada, contendo 120 ml de 10% v/v de ácido sulfúrico e 60 ml de 10% v/v de ácido hidroclorídrico são adicionados. A maceração pode efetuada durante 1 a 72 horas. A fase aquosa é, em seguida, extraída, sob pressão, a 300 atmosferas, e a fase sólida de exaustão é eliminada.

[0029] O líquido assim obtido (definido como "primeira compressão") é suplementado com 120 ml de 10% v/v de ácido sulfúrico e 60 ml de 10% v/v de ácido hidroclorídrico, e misturados com os conteúdos de um número equivalente adicional de outros tanques. O processo descrito como "primeira compressão" é, então, repetido, obtendo-se assim a ("segunda compressão").

[0030] As mesmas operações são repetidas mais uma vez, obtendo-se assim a "terceira compressão" e a "quarta compressão".

[0031] Quando colocada em contato com o material vegetal, para obter a extração, a fase líquida é misturada energicamente e em seguida mantida em um local frio (5 a 9o C) durante cerca de 24 a 72 horas.

[0032] O líquido final também pode ser mantido em um local frio (5 a 9o C) por aproximadamente 24 a 72 horas.

4. Filtração e esterilização

[0033] O líquido da "quarta compressão" é filtrado através de métodos convencionais; em recipientes adequados, é então tratado em autoclave, através da aplicação de um ciclo equivalente a 1 hora a 1 atmosfera.

5. Ultrafiltração

[0034] Usando instrumentos adequados de ultrafiltração, com cartuchos com um limite de exclusão de 3 Daltons, o líquido acima obtido é ultrafiltrado para o máximo permitido pelo instrumento; a água é adicionada ao líquido retido, e a ultrafiltração é repetida 2 a 3 vezes, para descartar as massas moleculares inferiores contidas na fase de eluição.

[0035] Em seguida, utilizando o mesmo método, porém substituindo os cartuchos com outros com um limite de exclusão de 30 Daltons, o resíduo contendo as massas moleculares acima 3.000 Daltons é adicionalmente ultrafiltrado; no entanto, neste caso o resíduo retido representa as massas moleculares superiores a 30.000 Daltons e é descartado, enquanto que a fase de eluição contém a fração ativa, tendo massas moleculares dentro do intervalo de 3.000 a 30.000 Daltons.

[0036] A solução que contém a fração ativa é, então, liofilizada (ou exsicada) tal e qual ou sobre um suporte adequado; ou é esterilizada (com a adição de um conservante, por exemplo, 2% w/w de fenoxietanol).

A. DADOS QUÍMICOS RELACIONADOS COM A FRAÇÃO ATIVA 1. ANÁLISE CROMATOGRÁFICA DA FRAÇÃO

[0037] Um sistema cromatográfico HPAE (High Pressure Anion Exchange) foi selecionado, acoplado com um detector PAD (Pulsed Amperométric Detector), especialmente indicado para análise de carboidratos.

[0038] O sistema de cromatografia tem as seguintes características: - sistema de bombas com eluição linear com um gradiente binário; - Eluente 1: 0,5 M NaOH - Eluente 2: acetato de sódio 1 M em 0,5 M NaOH

[0039] O gradiente é imposto pelo programa linear a seguir (com fluxo constante igual a 1,0 ml/min), em que o percentual 2 indica a percentagem do eluente em relação à bomba 2, com respeito ao total da mistura:

- Coluna cromatográfica CarboPac PAI (4x250 mm), com proteção CarboPac PAI, pré-coluna (10-32) ou equivalente, mantida a uma temperatura de 35° C. - Detector PAD equipado com um elétrodo de ouro, sob as condições operacionais a seguir:

♦Preparação da solução padrão

[0040] Uma série de soluções de fração ativa, que têm concentrações dentro do intervalo de 4 a 12 mg em 100 ml de água deionizada, é preparada com base em uma solução concentrada de uma fração ATIVA pura, e deve ser entendida como padrão de referência; ou, alternativa mente, utilizando um padrão de operação calibrado contra um padrão de referência.

* Procedimento

[0041] 100 μl são injetados como o branco, verificando-se que o correspondente cromatograma é planar, com a exclusão de alguns picos devido aos saltos no gradiente do sistema eluente.

[0042] 100 μl de cada uma das soluções de teste são, então, injetados.

[0043] O cromatograma da amostra de fração ativa purificada tem um único pico com Rt ~ 44 minutos, correspondendo exatamente à fração ativa (ver figura 1, amostra denominada "fração CP").

[0044] O cromatograma da amostra do extrato purificado ou parcialmente purificado mostra um curso característico com uma série de picos, entre os quais o pico com Rt ~ 44 minutos é aquele que se refere à fração ativa.

2. ANÁLISE CROMATOGRÁFICA DA FRAÇÃO APÓS A HIDRÓLISE

[0045] Esta verificação de controle é executada para verificar a natureza dos monossacáridos individuais, que constituem a estrutura do oligossacárido da fração de teste.

[0046] A cromatografia HPA (High Pressure Anion Exchange) é usada em uma amostra hidrolisada.

[0047] O tipo de instrumento é equivalente ao acima mencionado, para verificar o íntegro, ou seja, a fração não hidrolisada.

Procedimento

[0048] A hidrólise é realizada pela adição de 0,35% (v/v) de HCI à fração e hidrolisando a 100° C durante 20 horas, em uma amostra de concentração de fração não ativa no intervalo de 5 a 75 mg / 100 ml.

[0049] As condições analíticas de HPA são os seguintes: - CarboPack PAI, coluna de 4 x 250 mm - eluente isocrático 0,017 N NaOH - fluxo constante a 1 ml / min - detecção PED - volume de injeção: 75 μl da solução da amostra hidrolisada, diluída de 1 a 100 com água.

[0050] Equivalente análise é feita utilizando os monossacarídeos mais comuns como o padrão.

[0051] A amostra em estudo provou ter uma presença maciça e predominante de glicose, em que outros picos (relativos a outros monossacarídeos ou similares: manose, galactose, glucosamina, pentose etc.) estão ausentes ou presentes apenas em vestígios.

[0052] Uma análise idêntica efetuada antes da hidrólise produz analogamente a ausência de quaisquer monossacáridos, demonstrando que a fração é constituída por uma estrutura de oligossacárido.

B. ATIVIDADE BIOLÓGICA DA FRAÇÃO

[0053] A fração, de acordo com a presente invenção, provou possuir in vivo re-epitelização pronunciada e atividade curativa de feridas e/ou úlceras de qualquer tipo, semelhante àqueles fatores de crescimento de origem animal, e, por conseguinte, a fração pode ser utilizada na fabricação de produtos medicinais para o tratamento de feridas e úlceras.

[0054] A fração também mostra, in vitro, a ativação considerável do crescimento celular em fibroblastos e de atividade da ODC.

[0055] Também foi demonstrada a ativação do mecanismo de hidrólise de fosfolípidos de inositol, o que é típico dos fatores de crescimento.

[0056] A atividade terapêutica é ilustrada, no que segue, por vários estudos farmacológicos.

1. ENSAIO DE ESTIMULAÇÃO DO CRESCIMENTO DE CÉLULA FIBROBLASTA

[0057] Os fibroblastos são células que desempenham um papel fundamental no mecanismo de reparação de tecidos. O ensaio é, por conseguinte, realizado para verificar se o efeito curativo do produto é observado, como o resultado de um mecanismo de estimulação do crescimento das células desses organismos.

Procedimento

[0058] As culturas de fibroblastos 3T3 de rato são mantidas em um meio DMV suplementado com 10% v/v de soro de vitelo (CS), penicilina (10 U/ml). Estas culturas são cultivadas em frascos Falcon de 25 ml, a 37° C, em uma atmosfera úmida que contém 5% de CO2 e sofrem subculturas a cada 4 a 6 dias. As culturas confluentes são, por conseguinte, lavadas com 3 ml de PBS e são tripsinizadas com 0,25% de tripsina, a 37° C. Para desativar a tripsina, 2 ml de DME é adicionado e o sedimento celular obtido após a centrifugação é diluído com meio de cultura fresco, até uma densidade adequada para alcançar a disseminação.

[0059] O efeito estimulante do palato é testado em fibroblastos que foram deixados em um estado de repouso em um meio que contém baixas concentrações de CS. As células são semeadas a uma densidade de cerca de 2000 a 4000 células por placa em DME suplementada com 5% de CS. O meio é renovado depois de 18 horas e substituído por meio fresco contendo 0,6% de CS, e as células são deixadas para crescer durante mais 48 horas, antes de cada ensaio de atividade sucessivo. Para o ensaio em questão, o produto (diluído em água a uma concentração de 20 mg/100 ml) é adicionado a cada dia em concentrações crescentes entre 2 e 20% v/v, durante todo o período de crescimento.

[0060] No final do quinto dia, o número de células é estimulado pela tripsinização das culturas e as células são contadas em um contador Coulter.

Resultados

[0061] A adição do produto na diluição indicada produz uma estimulação dependente de dose acentuada do crescimento celular. O efeito começa a ser significativo em uma percentagem de 5% do produto (diluído, tal como indicado acima), e é máximo entre 10 e 20%, em uma quantidade ligeiramente inferior do que aquela exibida por CS para a paridade da concentração, porém, pelo menos, quatro vezes maior do que aquela de controle, no ponto máximo.

2. ENSAIO DE ATIVAÇÃO DE ODC (ORNITINA DESCARBOXILASE)

[0062] A ornitina descarboxilase é a enzima chave na síntese da poliamina espermidina, catalisando a conversão de intoputrescina de aminoácido ornitina. Estas poliaminas são co- envolvidas no controle dos processos de multiplicação celular. O ensaio é efetuado para verificar se a ação de estimulação do crescimento dos fibroblastos produzidos correlacionou- se com um aumento na atividade da ODC.

Procedimento

[0063] A atividade da ODC é testada em células 3T3, cultivadas em um meio contendo 0,6% de CS (soro de vitela), e é preparada, como acima descrito, no ensaio de estimulação de crescimento de fibroblastos.

[0064] A atividade da ODC é medida usando o método descrito por Russell [Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 60 1420 (1968)], 6 horas após a adição do produto (diluído em água em uma concentração de 20 mg/100 ml), em quantidades crescentes de 1% a 10% v/v.

Resultados

[0065] Nas concentrações e sob as condições testadas, o produto mostra - 6 horas após a adição e dependentemente da dose, - uma estimulação notável da ODC de aproximadamente 4 vezes maior do que aquela de controle, e semelhante àquela do CS, para paridade de concentração.

ENSAIO DA ESTIMULAÇÃO DA HIDRÓLISE DO FOSFOLIPÍDEO DE INOSITOL

[0066] Está amplamente documentado que um dos principais mecanismos bioquímicos, com os quais uma substância é capaz de ativar os processos responsáveis pela ativação e pela multiplicação de células, consiste na estimulação específica de hidrólise da membrana de fosfolípidos de inositol, que, por sua vez, produz um aumento nos segundos portadores, trifosfato de inositol (InsP3) e diacilglicerol. Este mecanismo está intimamente ligado, inter alia, com outro sistema de transdução de sinal, a ativação de tirosina quinase responsável, por exemplo, para a ação do EGF (fator de crescimento epidérmico), de insulina e de fatores semelhantes à insulina.

[0067] Por conseguinte, considera-se vantajoso avaliar o efeito do produto sobre a acumulação de fosfato de inositol (como um índice específico de hidrólise de fosfoinositideo) em células 3T3, tanto em condições basais como após a estimulação com soro CS, o qual é conhecido por ser um ativador do metabolismo dos fosfolípidos em fibroblastos. Procedimento

[0068] A hidrólise de fosfolípidos de inositol é testada em células 3T3 cultivadas em um meio contendo 0,6% de CS (soro de vitelo), e preparada como descrito acima no ensaio de estimulação do crescimento de fibroblastos.

[0069] Uma vez que a quiescência é atingida, as células são lavadas em um meio de Ham F-10 (com baixa concentração de inositol), e incubada a 37° C, durante 24 horas, com a adição de 0,6% de CS e 0,6 μmol de 2 - [3H] mioinositol, durante 24 horas, para marcar a membrana de fosfolípidos de inositol. No final desta incubação, as células são lavadas com tampão Krebs-Henseleit, contendo 10 mmol de LiCI e 0,1% de BSA. As células são, então, incubadas durante 24 horas com quantidades crescentes de 0 a 20% (v/v) do produto (em solução aquosa a uma concentração de 4 mg/100 ml), com e sem 10% de CS.

[0070] Os fosfatos de inositol são, então, medidos usando a técnica que se segue: o meio de incubação é aspirado e as células são extraídas com clorofórmio/metanol/água 1/1/1 (v/v), após a centrifugação, a fase aquosa é realizada e carregada em 1 ml de colunas Dowex-1 em forma de formiato; as colunas são lavadas com 24 ml de água para remover o inositol marcado que não tenha sido incorporado; os fosfatos de inositol são, então, eluídos por lavagem com 0,2 m de formiato de amónio e 0,1 M de ácido fórmico. A radioatividade é então determinada por espectrometria de cintilação.

Resultados

[0071] Nas concentrações e sob as condições testadas, o produto mostrou-se marcado e estimulação dependente de dose da hidrólise dos fosfolípidos de inositol mostrou-se cerca de 4 vezes maior do que aquela de controle e semelhante àquela da concentração equivalente de CS. Deve notar-se que a presença simultânea do produto de CS conduz a uma ativação maior do que aquela com somente CS (e somente com o produto), sugerindo que existem efeitos sinérgicos vantajosos entre os dois componentes.

4. ENSAIO DE CURA IN VIVO, EM FERIDAS EXPERIMENTAIS

[0072] O teste de cura in vivo, realizados em animais, por aplicação tópica, demonstra a eficácia do produto no tratamento de feridas.

Procedimento

[0073] O ensaio é realizado em ratos machos da linhagem Wistar, com um peso compreendido dentro do intervalo de 220 a 250 g. Durante uma semana antes do ensaio, os animais são mantidos em condições controladas de temperatura, umidade e luz, com acesso livre à comida e água. Os animais são divididos em grupos experimentais homogéneos, constituídos por 10 animais cada; um grupo é utilizado como controle e é tratado com um placebo, o outro grupo é tratado com o produto.

[0074] Na manhã do primeiro dia do ensaio, todos os animais são submetidos a um procedimento cirúrgico para produzir uma ferida padrão, obtida da seguinte maneira: após a aplicação de anestesia leve (10% de acetato de uretano em uma dose de 10 ml/kg), a região lombar de cada animal é raspada com precisão depois de ter sido desinfetada, a pele é cortada ao redor da borda de um disco de metal de 2,5 cm de diâmetro, 8,5 no caso de um tratamento tópico, e a pele e o tecido subcutâneo são então removidos, usando um fórceps curvo. Feridas substancialmente idênticas são obtidas em todos os animais.

[0075] Após cada dia de tratamento, a ferida é adequadamente coberta, e os animais são mantidos em gaiolas individuais.

[0076] A extensão da ferida é, cada dia, medida com um planímetro (traçando a ferida sobre uma folha de papel transparente), durante 9 dias (5 dias no caso de tratamento tópico).

Tratamento diário usando aplicação tópica

[0077] As feridas dos animais do grupo de controle são tratadas com uma gaze esterilizada impregnada com placebo, consistindo de uma solução fisiológica (0,9% de NaCI).

[0078] As feridas dos animais do outro grupo são tratadas com gaze esterilizada impregnada com o produto, dissolvido em água a uma concentração de 20 mg/100 ml.

Resultados

[0079] Nos animais tratados com o produto, uma aceleração do processo reparatório é observada, que se manifesta com uma redução notável nas áreas da ferida, em comparação com o grupo de controle, em média, em cerca de 20 a 30% no final do tratamento.

PREPARAÇÃO DE PRODUTOS COSMÉTICOS E/OU FARMACÊUTICOS

[0080] A fração ativa, que é objeto da presente invenção, pode ser utilizada para preparar produtos que tenham atividade farmacêutica ou cosmética.

[0081] A dose pode variar de acordo com a patologia e com o tipo de tecido a ser tratado, o grau de extensão, os parâmetros do paciente (idade, sexo, peso) e o tipo de composição cosmética ou farmacêutica. A dosagem da fração ativa pode variar, também, em função do grau de purificação da fração utilizada.

[0082] A fração, que é objeto da presente invenção, pode ser administrada na forma de composições que contenham uma quantidade eficaz da referida fração, misturadas com excipientes e substâncias veiculares convencionais conhecidas pelo técnico no assunto no estado da técnica.

[0083] As composições da presente invenção podem ser preparadas utilizando métodos conhecidos e técnicas convencionais.

[0084] Outros componentes ativos podem estar presentes na preparação final.

[0085] A título de exemplo de composições farmacêuticas e cosméticas, podem ser citados frascos para injetáveis, loções, cremes, pomadas, gel, soluções, medicamentos, supositórios, óvulos, sabonetes, espumas, comprimidos, pós, leites.

Claims

1. PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA FRAÇÃO SACARÍDICA, obtida a partir de sementes de trigo germinadas, que têm um peso molecular compreendido no intervalo de 3.000 a 30.000 Daltons, caracterizado por proporcionar: a) germinação de sementes de trigo conduzida no escuro, com umidade superior a 60% de umidade relativa (HR), em temperatura entre 5 a 20°C, produzindo mudas de até 3 a 15 cm de altura, em água ou sobre um suporte de crescimento artificial inerte; b) tratamento térmico das mudas realizado a temperaturas elevadas (85 a 150 °C), opcionalmente com adição de água, durante 25 a 120 minutos, esta fase sendo realizada em material vegetal da forma como é obtido ou triturado em tamanhos de dimensões reduzidas; c) maceração do material obtido em solução aquosa, conduzida a um pH entre 2 e 7 e a uma baixa temperatura (2 a 10 °C); d) eliminação do resíduo sólido, até que uma primeira solução límpida seja obtida, a qual é esterilizada, usando uma membrana sintética, um filtro de papel, uma prensa ou um extrator de líquido-sólido; e) eliminação das frações com pesos moleculares inferiores a 3.000 Daltons e superiores a 30.000 Daltons, obtendo a purificação da fração com peso molecular dentro do intervalo de 3.000 a 30.000.

2. USO DA FRAÇÃO, obtida pelo processo, conforme descrito na reivindicação 1, caracterizado por ser na preparação de um medicamento contendo um princípio ativo ou um componente para uso no tratamento de úlceras, feridas, na pele ou nas mucosas, ou para tratar alterações da pele.

3. USO DA FRAÇÃO, obtida pelo processo, conforme descrito na reivindicação 1, caracterizado por ser como um componente para a preparação de cosméticos, para o tratamento de alterações da pele.

4. USO DA FRAÇÃO, obtida pelo processo, conforme descrito na reivindicação 1, caracterizado por ser para preparar uma composição farmacêutica, contendo o extrato total, conforme definido na reivindicação 1, misturadas com excipientes e substâncias veiculares convencionais.

5. USO DA FRAÇÃO, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por as ditas composições farmacêuticas se apresentarem sob a forma de frascos para injetáveis, loções, cremes, pomadas, gel, soluções, medicamentos, supositórios, óvulos, sabonetes, espumas, comprimidos, pós ou leites.

6. USO DA FRAÇÃO, obtida pelo processo, conforme descrito na reivindicação 1, caracterizado por ser para preparar uma composição cosmética contendo o extrato total, conforme definido na reivindicação 1, misturadas com excipientes e substâncias veiculares convencionais.

7. USO DA FRAÇÃO, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por dita composição cosmética se apresentar sob a forma de frascos para injetáveis, loções, cremes, pomadas, gel, soluções, medicamentos, supositórios, óvulos, sabonetes, espumas, comprimidos, pós ou leites.