DRG EADAR-NÀISEANTA Leabhar-stiùiridh Testosterone ELISA an-asgaidh

Intended Use: Quantitative determination of free testosterone
in human serum or plasma from an adult population
Control Concentration: Indicated on the Certificate of
Mion-sgrùdadh

Enzyme Conjugate: Testosterone conjugated with Horseradish
peroxidase (HRP)
Microtiterwells: Anti-Testosterone antibody adsorbed on
microplate

Substrate Solution: H2O2-TMB 0.26 g/L
Materials Required: Distilled water

Auxiliary Materials: Automatic dispenser, Precision Pipetting
Devices, Microplate reader (450 nm, 620-630 nm)

Stiùireadh airson cleachdadh bathar

1. Ullachadh

Ensure you have all the necessary materials provided in the kit
along with distilled water.

2. Handling Warnings

This kit is for professional use only, not for internal or
external use in humans or animals.
Use appropriate personal protective equipment while handling
ath-bheothaichean.

Adhere to Good Laboratory Practice (GLP) guidelines when
working with blood products.

3. Testing Procedure

Ullaich samples and controls as instructed in the manual.

Cuir samples, controls, and reagents to the microtiter plate
according to the protocol.
Incubate the plate according to the specified time and
teòthachd.

Read the absorbance using a microplate reader at 450 nm with a
reference wavelength of 620-630 nm.
Calculate the concentrations of free testosterone in the
samples based on the provided standards.

4. Stòradh agus Fuasgladh

Follow the instructions for sample storage provided in the
manual. Dispose of all materials according to the disposal
guidelines mentioned.

5. Smachd Càileachd

Ensure proper quality control by following the control
concentration indicated on the Certificate of Analysis.

Ceistean Cumanta (FAQ)

Q: Can this kit be used for animals?

A: No, this kit is intended for use with human serum or plasma
a-mhàin.

C: Dè bu chòir dhomh a dhèanamh ma thachras mi air mearachd rè
deuchainn?

A: Thoir sùil air an earrann fuasglaidh den leabhar-làimhe no fios
taic teachdaiche airson cuideachadh.

“`

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Stiùireadh airson a chleachdadh
Testosterone ELISA saor an asgaidh

EIA-2924 96

DRG Instruments GmbH, Germany Frauenbergstraße 18, 35039 Marburg Phone: +49 (0)6421-1700 0, Fax: +49 (0)6421-1700 50 Weblàrach-lìn: www.drg-diagnostics.de Post-d: drg@drg-diagnostics.de

DRG International, Inc., USA 841 Mountain Ave., Springfield, NJ 07081 Fòn: 973-564-7555, facs: 973-564-7556 Weblàrach-lìn: www.drg-international.com Post-d: corp@drg-international.com

Free Testosterone ELISA EIA-2924

Feuch nach cleachd thu ach an dreach dligheach den Stiùireadh Cleachdaidh a chaidh a thoirt seachad leis a’ ghoireas. Verwenden Sie nur die jeweils gültige, im Testkit enthaltene, Gebrauchsanweisung. Si prega di cleachdadh an dreach dligheach de na h-eagrachaidhean airson an cleachdadh agus disposizione con il kit. Airson fàbhar, cleachd an tionndadh slàn de na stiùiridhean airson an cleachdadh airson an t-sreath a chleachdadh. Cleachdadh an dreach dligheach de Stiùireadh airson cleachdadh fournies avec le kit.
Airson fàbhar, cleachd an dreach eadar-dhealaichte de dh’ ionnsramaid airson a bhith a’ cleachdadh fornecidas com o kit.

(01/2024)

Introduced modifications / Durchgeführte Änderungen / Modifiche introdotte / Modificaciones introducidas

The following changes have been made in comparison to the previous version: Im Vergleich zur Vorgängerversion wurden folgende Änderungen vorgenommen: Rispetto alla versione precedente, sono state apportate le seguenti modifiche: Se han introducido los siguientes cambios en comparación con la versión anterior:

Detailed editorial revision. Changed wording in several chapters. Change to a new microtiter plate.

addition of sample population

4.1:

addition of information of preservatives.

changes in bullet points 4 and 5;addition of bullet point 6

change in bullet points 5, 11. Addition of bullet point 13

9.2:

addition of chapter

9.4:

addition of information on sample stòradh

11:

addition of information on validity of run

17:

addition of information on disposal

18:

Rewording

Tionndadh 5.0;

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Free Testosterone ELISA EIA-2924
Table of Contents / Inhaltsverzeichnis / Tabella die Contenuti / Tabla de Contenidos
1 INTENDED PURPOSE …………………………………………………………………………………………………………………………….. 4 2 CLINICAL SIGNIFICANCE………………………………………………………………………………………………………………………… 4 3 PRINCIPLE OF THE METHOD………………………………………………………………………………………………………………….. 4 4 REAGENTS, MATERIALS, AND INSTRUMENTATION ………………………………………………………………………………… 5 5 WARNINGS ……………………………………………………………………………………………………………………………………………. 5 6 PRECAUTIONS ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 6 7 REAGENT STORAGE AND STABILITY ……………………………………………………………………………………………………… 6 8 SAMPLE COLLECTION AND STORAGE ……………………………………………………………………………………………………. 6 9 PROCEDURE …………………………………………………………………………………………………………………………………………. 6 10 QUALITY CONTROL ……………………………………………………………………………………………………………………………….. 8 11 CALCULATION OF RESULTS…………………………………………………………………………………………………………………… 8 12 MEASURING RANGE ………………………………………………………………………………………………………………………………. 8 13 METROLOGY AND TRACEABILITY ………………………………………………………………………………………………………….. 8 14 EXPECTED VALUES ……………………………………………………………………………………………………………………………….. 9 15 PERFORMANCE CHARACTERISTICS………………………………………………………………………………………………………. 9 16 LIMITATIONS OF USE …………………………………………………………………………………………………………………………… 11 17 WASTE MANAGEMENT …………………………………………………………………………………………………………………………. 11 18 PRODUCT COMPLAINTS AND TECHNICAL SUPPORT ……………………………………………………………………………. 11
1 ZWECKBESTIMMUNG …………………………………………………………………………………………………………………………… 12 2 KLINISCHE SIGNIFIKANZ ………………………………………………………………………………………………………………………. 12 3 TESTPRINZIP ……………………………………………………………………………………………………………………………………….. 12 4 REAGENZIEN, MATERIALIEN UND GERÄTEAUSSTATTUNG …………………………………………………………………… 13 5 WARNHINWEISE…………………………………………………………………………………………………………………………………… 13 6 VORSICHTSMASSNAHMEN…………………………………………………………………………………………………………………… 14 7 LAGERUNG UND STABILITÄT DER REAGENZIEN…………………………………………………………………………………… 14 8 ENTNAHME UND LAGERUNG DER PROBEN………………………………………………………………………………………….. 15 9 DURCHFÜHRUNG ………………………………………………………………………………………………………………………………… 15 10 QUALITÄTSKONTROLLE……………………………………………………………………………………………………………………….. 16 11 BERECHNUNG DER ERGEBNISSE ………………………………………………………………………………………………………… 17 12 MESSBEREICH …………………………………………………………………………………………………………………………………….. 17 13 METROLOGIE UND RÜCKVERFOLGBARKEIT ………………………………………………………………………………………… 17 14 ERWARTETE WERTE ……………………………………………………………………………………………………………………………. 17 15 LEISTUNGSMERKMALE ………………………………………………………………………………………………………………………… 17 16 GRENZEN DER ANWENDUNG ………………………………………………………………………………………………………………. 19 17 ENTSORGUNG……………………………………………………………………………………………………………………………………… 20 18 REKLAMATIONEN UND TECHNISCHE UNTERSTÜTZUNG ………………………………………………………………………. 20
1 DESTINAZIONE D’USO………………………………………………………………………………………………………………………….. 21 2 RILEVANZA CLINICA …………………………………………………………………………………………………………………………….. 21 3 PRINCIPIO DEL METODO ……………………………………………………………………………………………………………………… 21 4 REAGENTI, MATERIALI E STRUMENTAZIONE………………………………………………………………………………………… 22 5 AVVERTENZE ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 22 6 PRECAUZIONI………………………………………………………………………………………………………………………………………. 23 7 CONSERVAZIONE E STABILITÀ DEI REAGENTI ……………………………………………………………………………………… 24 8 RACCOLTA E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI…………………………………………………………………………………….. 24 9 PROCEDURA ……………………………………………………………………………………………………………………………………….. 24 10 CONTROLLO QUALITÀ………………………………………………………………………………………………………………………….. 25 11 CALCOLO DEI RISULTATI ……………………………………………………………………………………………………………………… 26 12 INTERVALLO DI MISURAZIONE……………………………………………………………………………………………………………… 26 13 METROLOGIA E TRACCIABILITÀ …………………………………………………………………………………………………………… 26 14 VALORI ATTESI…………………………………………………………………………………………………………………………………….. 26 15 CARATTERISTICHE DI AZIONE ……………………………………………………………………………………………………………… 26 16 LIMITAZIONI D’USO ………………………………………………………………………………………………………………………………. 29 17 GESTIONE DEI RIFIUTI …………………………………………………………………………………………………………………………. 29 18 RECLAMI SUI PRODOTTI E SUPPORTO TECNICO …………………………………………………………………………………. 29

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Free Testosterone ELISA EIA-2924
1 FINALIDAD PREVISTA …………………………………………………………………………………………………………………………… 30 2 IMPORTANCIA CLÍNICA ………………………………………………………………………………………………………………………… 30 3 PRINCIPIO DEL MÉTODO ……………………………………………………………………………………………………………………… 30 4 REACTIVOS, MATERIALES E INSTRUMENTACIÓN …………………………………………………………………………………. 31 5 ADVERTENCIAS …………………………………………………………………………………………………………………………………… 31 6 PRECAUCIONES…………………………………………………………………………………………………………………………………… 32 7 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS ……………………………………………………………………… 32 8 RECOGIDA Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS…………………………………………………………………………… 32 9 PROCEDIMIENTO …………………………………………………………………………………………………………………………………. 33 10 CONTROL DE CALIDAD ………………………………………………………………………………………………………………………… 34 11 CÁLCULO DE LOS RESULTADOS ………………………………………………………………………………………………………….. 35 12 RANGO DE MEDICIÓN ………………………………………………………………………………………………………………………….. 35 13 METROLOGÍA Y TRAZABILIDAD ……………………………………………………………………………………………………………. 35 14 VALORES ESPERADOS ………………………………………………………………………………………………………………………… 35 15 CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO………………………………………………………………………………………………….. 36 16 LÍMITES DE USO…………………………………………………………………………………………………………………………………… 38 17 GESTIÓN DE RESIDUOS ………………………………………………………………………………………………………………………. 38 18 RECLAMACIONES SOBRE PRODUCTOS Y ASISTENCIA TÉCNICA………………………………………………………….. 38
19 BIBLIOGRAPHY…………………………………………………………………………………………………………………………………….. 38 SYMBOLS USED ………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 39

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Free Testosterone ELISA EIA-2924
1 INTENDED PURPOSE Free Testosterone ELISA is a manual in vitro diagnostic device intended for the quantitative determination of free testosterone in human serum or plasma from an adult population. Results are to be used in conjunction with other clinical and laboratory data as an aid in the diagnosis and monitoring of disorders involving the male sex hormones (androgens).
For In Vitro Diagnostic Use For Laboratory Professional Use
2 CLINICAL SIGNIFICANCE Testosterone is found in circulation predominantly linked to carrier proteins, the most common of which being sex-hormone binding globulin (SHBG). Testosterone plays a key role in the development of primary and secondary sexual characteristics in males and is involved in the production of female sexual hormones. Only 1 2% of testosterone in circulation is not bound to any protein and is biologically active this is referred to as `free testosterone’ (FT). Bioavailable testosterone refers to the sum of FT and the testosterone bound to serum albumin, since it is bound with low affinity and readily able to dissociate to become available for its biological function. In males elevated levels of testosterone are associated with several conditions such as, early (precocious) puberty, congenital adrenal hyperplasia (CAH), androgen insensitivity syndrome (AIS), steroid use and testicular or adrenal tumours. Whereas the major causes of supressed levels include Klinefelter’s syndrome, testicular damage, pituitary disorders etc. In females of all ages, elevated testosterone levels can be associated with a variety of virilising conditions including adrenal tumours and polycystic ovarian syndrome (PCOS). These clinical conditions are associated with either a lack or excess of testosterone in circulation (hypoandrogenism or hyperandrogenism). Diagnosis of these disorders involve the quantification of total testosterone (TT) in association with other clinical evidence and laboratory data. However, clinical manifestations of androgen disorders are often associated with normal levels of TT. In such cases, additional information may be gained by the assessment of the biologically active, FT level. Several androgen disorders can be caused by alteration of SHBG production which affects the levels of FT available in serum. Measurement of FT can be considered useful in the diagnosis of several conditions including androgen deficiency in men and androgen excess in women1. Assessment of free testosterone levels may prove beneficial2 and may avoid an incorrect diagnosis of hypogonadism in cases when low concentrations of total testosterone are determined and alterations of SHBG are suspected. There is an observed and well documented circadian variation of testosterone levels in men with circulating concentrations being higher in the morning and declining throughout the day3. Testosterone levels also decline in ageing males (andropause) and is associated with loss of muscle and bone mass, leading to osteoporosis, loss of libido, erectile dysfunction. Depression and impaired cognitive function4.
3 PRINCIPLE OF THE METHOD The Free Testosterone ELISA is a competitive enzyme immunometric assay (ELISA) where free testosterone (antigen) in the sample competes with the antigenic testosterone conjugated with horseradish peroxidase (HRP) for binding to the limited number of antibodies anti-testosterone coated on the microplate (solid phase). After the incubation, the bound/free separation is performed by a simple solid phase washing. Then, the enzyme HRP in the bound fraction reacts with the Substrate (H2O2) and the TMB Substrate and develops a blue colour that changes into yellow when the Stop Solution (H2SO4) is added. The colour intensity is inversely proportional to the free testosterone concentration of in the sample. Free testosterone concentration in the sample is calculated through a calibration curve.

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Free Testosterone ELISA EIA-2924

4 REAGENTS, MATERIALS, AND INSTRUMENTATION 4.1 Reagents and materials provided with the kit 1. Standards (Standard 0 5) (6 vials, 1 mL each); ProClin >0.0015% and BSA 2. Controls (Control A and Control B) (2 vials, 1 mL)
Control concentration is indicated on the Certificate of Analysis; ProClin >0.0015% and human serum 3. Enzyme Conjugate (1 vial, 15 mL)
Testosterone conjugated with Horseradish peroxidase (HRP); ProClin >0.0015% and BSA 4. Microtiterwells (1 breakable microplate)
Anti-Testosterone antibody adsorbed on microplate 5. Substrate Solution (1 vial, 15 mL)
H2O2-TMB 0.26 g/L (avoid any skin contact); ProClin <0.0015% 6. Stop Solution (1 vial, 15 mL)
Sulphuric acid 0.15 M 7. Wash Solution, 10X Concentrated (2 vial, 25 mL);
0.2M Phosphate Buffer, pH 7.4; ProClin >0.0015% see “Reagent Preparation”
4.2 Materials required but not provided Distilled water
4.3 Auxiliary materials and instrumentation Automatic dispenser Precision Pipetting Devices Microplate reader (450 nm, 620-630 nm)

5 RABHADH
– This kit is intended for in vitro use by professional persons only. Not for internal or external use in humans or animals. – Use appropriate personal protective equipment while working with the reagents provided. – Follow Good Laboratory Practice (GLP) for handling blood products.

–

All human source material used in the preparation of the reagents has been tested and found negative for antibody to

HIV 1&2, HbsAg, and HCV. No test method however can offer complete assurance that HIV, HBV, HCV, or other infectious

agents are absent. Therefore, the Calibrators and the Controls should be handled in the same manner as potentially

infectious material.

–

Material of animal origin used in the preparation of the kit has been obtained from animals certified as healthy and the

bovine protein has been obtained from countries not infected by BSE, but these materials should be handled as potentially

infectious.

– Some reagents (calibrators, controls, conjugate and wash solution) contain small amounts of ProClinTM 300 (>0,0015%, <0,06%) as preservative. Avoid contact with skin or mucosa.

– Classification according to Regulation (EC) No. 1272/2008 [CLP]

Mothachadh craiceann, Roinn 1

Contains: ProClin 300
Warning Hazard statements: H317 – May cause an allergic skin reaction. Precautionary statements: P261 – Avoid breathing dust / fume / gas / mist / vapours / spray. P280 – Wear protective gloves/ protective clothing / eye protection / face protection / hearing protection. P321 – Specific treatment (see supplemental first aid instruction on this label). P333+P313 – If skin irritation or rash occurs: Get medical advice/attention. P362+P364 – Take off contaminated clothing and wash it before reuse. – Some reagents (calibrators and controls) contain small amounts of Sodium Azide (NaN3) <0.1% which may be toxic if ingested or absorbed through the skin or eyes; moreover, it may react with lead or copper plumbing to form potentially explosive metal azides. If you use a sink to remove the reagents, wash through with large amounts of water to prevent azide build-up. – The TMB Substrate contains an irritant, which is harmful if inhaled, ingested, or absorbed through the skin. To prevent injury, avoid inhalation, ingestion or contact with skin and eyes.

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– The Stop Solution consists of a diluted sulphuric acid solution. Sulphuric acid is poisonous, corrosive and can be toxic if ingested. To prevent chemical burns, avoid contact with skin and eyes.
– Avoid the exposure of reagent TMB/H2O2 to directed sunlight, metals, or oxidants. Do not freeze the solution. – The clinical significance of the determination of free testosterone can be invalidated if the patient was treated with cortisone
or natural or synthetic steroids.

6 ROIMH-RADH
– Please adhere strictly to the sequence of pipetting steps provided in this protocol. The performance data represented here were obtained using specific reagents listed in this Instruction For Use.
– All reagents should be stored refrigerated at 2 °C – 8 °C in their original container. Any exceptions are clearly indicated. – Allow all kit components and specimens to reach room temperature (22 °C – 28 °C) and mix well prior to use. – Do not interchange kit components from different lots. The expiry date printed on box and vials labels must be observed.
Do not use any kit component beyond their expiry date. – If you use automated equipment, the user has the responsibility to make sure that the kit has been appropriately validated
for its intended use/purpose. – The incomplete or inaccurate liquid removal from the wells could influence the assay precision and/or increase the
background. To improve the performance of the kit on automatic systems is recommended to increase the number of washes. – It is important that the time of reaction in each well is held constant for reproducible results. Pipetting of samples should not extend beyond ten minutes to avoid assay drift. If more than 10 minutes are needed, follow the same order of dispensation. If more than one plate is used, it is recommended to repeat the dose response curve in each plate – Addition of the TMB Substrate solution initiates a kinetic reaction, which is terminated by the addition of the Stop Solution. Therefore, the TMB Substrate and the Stop Solution should be added in the same sequence to eliminate any time deviation during the reaction. – Observe the guidelines for performing quality control in medical laboratories by assaying controls and/or pooled sera. – Maximum precision is required for reconstitution and dispensation of the reagents. – Samples microbiologically contaminated, highly lipemic, icteric or haemolysed should not be used in the assay. – Plate readers measure vertically. Do not touch the bottom of the wells. – Fresh disposable tips must be used when pipetting assay reagents including samples, calibrators and controls to mitigate the risk of carryover contamination. Failure to do so may lead to invalid results.

7 REAGENT STORAGE AND STABILITY Store the kit at 2 °C – 8 °C in the dark.
· The kit is stable at 2 °C – 8 °C until the expiry date stated on the external kit label. · Once opened, the kit is stable at 2 °C – 8 °C for 6 months. · The diluted wash solution is stable for 30 days at 2 °C – 8 °C.

Important note: open the bag containing the Coated Microplate only when it is at room temperature and close it immediately after use.

8 SAMPLE COLLECTION AND STORAGE

The assay should be performed using serum (standard sampling tubes or tubes containing serum separating gel) or plasma (lithium heparin, sodium heparin or potassium EDTA) samples.

Sample Stòradh

Fad

2 ° C - 8 ° C

24 uairean

Freeze/thaw cycles

1 cearcall

9 GNÌOMHACHAS

9.1 Preparation of Standards and Controls Before use, mix for 5 minutes with a rotating mixer. The Standards are ready for use and have the following concentration of Testosterone:

S0 S1 S2 S3 S4

td/mL

0.2 1.0 4.0 20.0 100.0

The Controls are ready to use.

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9.2 Preparation of the Conjugate The conjugate is ready to use. Mix gently, for 5 minutes, on a roller mixer.
9.3 Preparation of the Wash Solution Dilute the content of the two vials “Wash solution” with distilled water to a final volume of 500 mL prior to use (for both vials 25 mL + 25 mL + 450 mL) For smaller volumes respect the 1:10 dilution ratio. It is possible to observe the presence of crystals within the concentrated wash solution; in this case mix at room temperature until the complete dissolution of crystals. For greater accuracy, dilute the whole bottle of concentrated wash solution to 500 mL, taking care also to transfer crystals completely by rinsing of the bottle, then mix until crystals are completely dissolved.
9.4 Preparation of Samples The determination of free testosterone can be performed in human serum (standard sampling tubes or tubes containing serum separating gel) or plasma (lithium heparin, sodium heparin or potassium EDTA) samples. Store the sample at -20°C if the determination is not performed on the same day of the sample collection. Before using, mix gently, for 5 minutes, with a roller mixer.
9.5 Procedure – Allow all reagents to reach room temperature (22 °C – 28 °C) for at least 30 minutes. At the end of the assay,
immediately store the reagents at 2 °C – 8 °C: avoid long exposure to room temperature. – Unused coated microwell strips should be released securely in the foil pouch containing desiccant and stored at
2 °C – 8 °C. – To avoid potential microbial and/or chemical contamination, unused reagents should never be transferred into the
original vials. – As it is necessary to perform the determination in duplicate in order to improve accuracy of the test results, prepare two
wells for each point of the calibration curve (S0 – S5), two for each Control, two for each sample, one for Blank.

Ath-ghnìomhaiche

Inbhe

Sample / Control

bàn

Standard S0-S5

20 l

Sample / Control

20 l

Enzyme Conjugate

100 l

Incubate at 37 °C (± 0.5 °C) for 1 hour.
Remove the content from each well; wash the wells 3 times with 300 L of diluted wash solution. Important note: during each washing step, gently shake the plate for 5 seconds and remove excess solution by tapping the inverted plate on an absorbent paper towel. Automatic washer: if you use automated equipment, wash the wells at least 5 times.

Fuasgladh substrate TMB

100 l

Incubate at room temperature 22 °C 28 °C for 15 minutes in the dark.

Cuir stad air fuasgladh

100 l

Shake the microplate gently. Read the absorbance (E) at 450 nm against a reference wavelength of 620-630 nm or against Blank within 5
mionaidean.

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10 QUALITY CONTROL Good Laboratory Practice (GLP) requires the use of quality control specimens in each series of assays in order to check the performance of the assay. Controls should be treated as unknown samples, and the results analysed with appropriate statistical methods. The kit controls provided in the kit should be tested as unknowns and are intended to assist in assessing the validity of results obtained with each assay plate. The mean concentration of each control level is documented in the QC report included with each kit. These mean concentration levels are determined over several assays which are run in duplicate in multiple locations across each plate. DRG recommends the users to maintain graphic records of the control values generated with each assay run, including the running means, SDs and %CVs. This information will facilitate the controls trending analysis relating to the performance of current and historical control lots relative to the supplied Quality Control data. The trending will assist in the identification of assays which give control values significantly different from their average range. When interpreting control data, users should note that this product was designed and developed as a manual product. The range stated on the QC certificate should be appropriate for assays that are performed manually and with strict adherence to the Assay Procedure described above. It is recognised by Quality Control professionals, that as a result of differences in conditions and practices, there will always be variability in the mean values and precision of control measurements between different laboratories5.
11 CALCULATION OF RESULTS A variety of data reduction software packages are available, which may be employed to generate the mean calibration curve and to calculate the mean concentrations of unknown samples and controls. A 4-parameter logistic (4PL) curve fit, including Standard 0 is required.
Alternatively, a calibration curve may be prepared on semi-log graph paper by plotting mean absorbance on the Y-axis against concentration of analyte on the X-axis. Calibrator 0 should be included in the calibration curve. Read the mean absorbance value of each unknown sampleig às an lùb.
In order for the assay results to be considered valid the kit calibrators and control must fall within the specifications detailed in the lot specific certificate of analysis.
If a control is out of its specified range, the associated test results are invalid and sampfeumar ath-dhearbhadh.
Conversion of units To convert results to SI units: pmol/L = pg/mL x 3.47
To convert results to mass units: pg/mL = pmol/L x 0.289
12 MEASURING RANGE The assay measuring range (AMR) is 0.34 70.0 pg/mL (1.18 242.9 pmol/L). Any value that reads below 0.34 pg/mL (1.18 pmol/L) should be reported as “< 0.34 pg/mL (< 1.18 pmol/L)”. Any value that reads above 70.0 pg/mL (242.9 pmol/L) should be reported as “> 70.0 pg/mL (242.9 pmol/L)”.
13 METROLOGY AND TRACEABILITY The Free Testosterone ELISA has been standardised against internal reference standards (serum matrix) which have been value assigned to another commercially available test method.

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14 EXPECTED VALUES The following ranges were determined using the Free Testosterone ELISA and are provided for information only.

No. of subjects

Median pg/mL

Reference Interval (pg/mL)

Fireannaich

21 49 bliadhna

120

14.13

5.01 27.78

> 50 bliadhna

120

12.75

4.11 21.85

Females pre-menopausal post-menopausal

120

0.55

120

0.75

< LOQ 1.70 < LOQ 2.34

Bu chòir beachdachadh air na raointean gu h-àrd mar stiùireadh a-mhàin; Thathas a’ moladh gum bi gach obair-lann a’ stèidheachadh an raon ris a bheil dùil aca fhèin stèidhichte air an àireamh euslaintich aca fhèin.

15 PERFORMANCE CHARACTERISTICS Representative performance data are shown. Results obtained at individual laboratories may vary.

15.1 Comas lorgaidh

The limit of blank (LoB), limit of detection (LoD) and limit of quantitation (LoQ) were determined with guidance from CLSI EP17-A, “Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation” using 6 blanks and 6 low level samples.

Cugallachd

dùmhlachd

Crìochan bàn (LoB)

0.10 pg/mL

Cuibhreann Dearbhaidh (LoD)

0.20 pg/mL

Limit of Quantitation (LoQ)

0.34 pg/mL

15.2 Trueness Trueness has been demonstrated through method comparison of the Free Testosterone ELISA to a commercially available assay using native donor samples refer to section 14.5
15.3 Precision Precision of the Free Testosterone ELISA was determined by performing a complex precision study.

Repeatability: A total of 6 serum samples were assayed in 5 replicates, once per day for 5 days by 3 operators.

Data from one representative lot is shown below:

Sample

Mean Conc. (pg/mL)

Within run (Repeatability)

CV %

0.68

0.08

11.3%

1.62

0.10

5.9%

5.25

0.19

3.7%

10.43

0.48

4.6%

34.99

1.17

3.3%

68.65

4.62

6.7%

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Free Testosterone ELISA EIA-2924

Reproducibility (between run): A total of six serum samples were assayed in 5 replicates, once per day for 5 days by 3 operators and with 2 lots.

Sample

Ciall (pg/mL)

CV %

PS 1

150

0.75

11.1%

PS 2

150

1.74

6.6%

PS 3

150

5.48

3.8%

PS 4

150

10.72

4.1%

PS 5

150

37.41

5.5%

PS 6

150

73.81

6.9%

15.4 Linearity Linearity was evaluated based on CLSI EP-06, “Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures”. For free testosterone concentration by Free Testosterone ELISA, the measurement procedure shows linearity for the interval from 0.27 to 89.83 pg/mL within the allowable deviation of linearity (ADL) of ±15 %.

15.5 Method comparison

The Free Testosterone ELISA was compared against a commercially available quantitative manual ELISA test, following CLSI EP-9A, “Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples”. A total of 95 samples, selected to represent a wide range of free testosterone concentrations, was assayed by each method. Passing-Bablok regression analysis was performed on the comparative data:

Slope [95% CI]

Intercept (pg/mL) [95% CI]

Co-èifeachd co-dhàimh (r)

0.94 [0.88 to 0.99]

-0.02 [-0.14 to 0.06]

0.93

15.6 Analytical Specificity

The specificity was assessed with the following cross-reactants.

Cross-reactant

Deuchainn dùmhlachd air a dhearbhadh

11-keto-testosterone
11–hydroxy-testosterone 17OH-Progesterone Aldosterone

100 ng/mL 10 ng/mL 500 ng/mL 3000 ng/mL

Androstenedione

100 ng / mL

Cortisol

1000 ng / mL

Cortisone

1000 ng / mL

Danazol

1000 ng / mL

Dexamethasone

2000 ng / mL

DHEA DHEA-S

1000 ng/mL 10000 ng/mL

5a-dihydrotestosterone (DHT)

500 ng / mL

Estradiol

1000 ng / mL

Estriol

100 ng / mL

Estrone

1000 ng / mL

Eitirone

100 ng / mL

Norgestrel

100 ng / mL

Prednisone

1000 ng / mL

Pregnenolone

5000 ng / mL

Progesterone

1000 ng / mL

Testosterone propionate

1000 ng / mL

Mean %Cross reactivity 0.1% 0.2% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0%

The following substances do not interfere with a bias of > ±15% in the Free Testosterone ELISA when the concentrations are below the stated threshold presented in the following table.

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Free Testosterone ELISA EIA-2924

Potentially Interfering Reagent Bilirubin, conjugated Bilirubin, unconjugated Haemoglobin Total Protein Triglyceride

Threshold Concentration 15 mg/dL 15 mg/dL 200 mg/dL 7 g/dL 500 mg/dL

15.7 Serum-plasma study

The Free Testosterone ELISA matrix comparison study was performed to evaluate the difference across tube types (serum separator tubes (SST), lithium heparin plasma, sodium heparin plasma and K2 EDTA plasma) versus the control samples (red top serum, without additive) following CLSI EP9-A3 guidelines. A total of 21 samples (18 native, 3 spiked) to cover the range were evaluated. Linear regression analysis was performed on the comparative data:

Sample seòrsa

Slope [95% CI]

Intercept (pg/mL) [95% CI]

Co-èifeachd co-dhàimh (r)

SST

0.97 [0.92 to 1.02]

-0.02 [-1.01 to 0.98]

0.99

Lithium Heparin

0.99 [0.97 to 1.02]

-0.01 [-0.40 to 1.02]

1.00

Sodium Heparin

0.93 [0.87 to 0.99]

-0.01 [-1.12 to 1.10]

0.99

EDTA

1.03 [0.97 to 1.08]

0.27 [0.74 to 1.28]

0.99

16 CUMHACHDAN NAN CLEACHDADH
– As in the case of any diagnostic procedure, results must be interpreted in conjunction with the patient’s clinical presentation and other information available to the physician.
– The performance characteristics of this assay have not been established in a paediatric population. – Heterophilic antibodies in human serum can react with reagent immunoglobulins, interfering with in vitro immunoassays6.
Patients routinely exposed to animals or to animal serum products can be prone to this interference and anomalous values may be observed.

17 WASTE MANAGEMENT Reagents must be disposed of in accordance with local regulations. All materials that have come into contact with samples and reagents must be disposed of in accordance with country, state and local regulations.

18 PRODUCT COMPLAINTS AND TECHNICAL SUPPORT For a patient/user/third party in the European Union and in countries with similar regulatory regime (Regulation 2017/746/EU on IVD Medical Devices); if, during the use of this device or as a result of its use, a serious incident has occurred, please report it to the manufacturer and/or its authorised representative and to your national regulatory authority.

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Free Testosterone ELISA EIA-2924
1 ZWECKBESTIMMUNG Der Free Testosterone ELISA ist ein manueller Enzymimmunoassay zur quantitativen Messung von freiem Testosteron in Humanserum oder -plasma aus der erwachsenen Bevölkerung. Die Ergebnisse sind in Verbindung mit anderen Daten aus Klinik und Labor als Hilfsmittel für die Diagnose und Überwachung von Erkrankungen zu verwenden, die mit den männlichen Geschlechtshormonen (Androgenen) zusammenhängen.
Für den Einsatz in der In-vitro Diagnostik. Für den beruflichen Gebrauch in Laboratorien.
2 KLINISCHE SIGNIFIKANZ Testosteron befindet sich im Blutkreislauf überwiegend in Verbindung mit Trägerproteinen, von denen das Sexualhormon-bindende Globulin (SHBG) das häufigste ist. Testosteron spielt eine Schlüsselrolle bei der Entwicklung der primären und sekundären Geschlechtsmerkmale des Mannes und ist an der Produktion der weiblichen Sexualhormone beteiligt. Nur 1 – 2 % des im Blutkreislauf befindlichen Testosterons ist nicht an ein Protein gebunden und biologisch aktiv – dies wird als “freies Testosteron” (FT) bezeichnet. Bioverfügbares Testosteron bezieht sich auf die Summe von FT und dem an Serumalbumin gebundenen Testosteron, da es mit geringer Affinität gebunden ist und leicht dissoziieren kann, um für seine biologische Funktion verfügbar zu werden. Bei Männern werden erhöhte Testosteronwerte mit verschiedenen Erkrankungen in Verbindung gebracht, wie z. B. frühe (frühzeitige) Pubertät, kongenitale adrenale Hyperplasie (CAH), Androgeninsensitivitätssyndrom (AIS), Steroidkonsum und Hoden- oder Nebennierentumoren. Zu den Hauptursachen für unterdrückte Werte gehören das Klinefelter-Syndrom, Hodenschäden, Hypophysenstörungen usw. Bei Frauen aller Altersgruppen kann ein erhöhter Testosteronspiegel mit einer Reihe von virilisierenden Erkrankungen wie Nebennierentumoren und dem polyzystischen Ovarialsyndrom (PCOS) in Verbindung gebracht werden. Diese klinischen Zustände sind entweder mit einem Mangel oder einem Überschuss an Testosteron im Blutkreislauf verbunden (Hypoandrogenismus oder Hyperandrogenismus). Die Diagnose dieser Erkrankungen umfasst die Quantifizierung des Gesamttestosterons (TT) in Verbindung mit anderen klinischen Anzeichen und Labordaten. Klinische Manifestationen von Androgenstörungen sind jedoch häufig mit normalen TT-Werten verbunden. In solchen Fällen können zusätzliche Informationen durch die Bestimmung des biologisch aktiven FT-Spiegels gewonnen werden. Mehrere Androgenstörungen können durch eine veränderte SHBG-Produktion verursacht werden, die sich auf die im Serum verfügbaren FT-Spiegel auswirkt. Die Messung des FT-Spiegels kann als nützlich für die Diagnose verschiedener Erkrankungen angesehen werden, darunter Androgenmangel bei Männern und Androgenüberschuss bei Frauen1. Die Bestimmung des Gehalts an freiem Testosteron kann sich als vorteilhaft erweisen2 und kann eine falsche Diagnose von Hypogonadismus in Fällen vermeiden, in denen niedrige Konzentrationen von Gesamttestosteron bestimmt werden und Veränderungen des SHBG vermutet werden. Es gibt eine beobachtete und gut dokumentierte zirkadiane Variation des Testosteronspiegels bei Männern, wobei die zirkulierenden Konzentrationen am Morgen höher sind und im Laufe des Tages abnehmen3. Der Testosteronspiegel sinkt auch bei alternden Männern (Andropause) und wird mit dem Verlust von Muskel- und Knochenmasse in Verbindung gebracht, was zu Osteoporose, Libidoverlust, Erektionsstörungen. Depressionen und Beeinträchtigung der kognitiven Funktionen4.
3 TESTPRINZIP Der Free Testosterone ELISA ist ein kompetitiver Enzymimmunoassay, bei dem das freies Testosteron (Antigen) in der Probe mit an Meerrettich-Peroxidase (HRP) gebundenem Testosteron-Antigen im Konjugat um die Anlagerung an die AntiTestosteron-Antikörper auf der Mikrotiterplatte (feste Phase) konkurriert. Nach der Inkubation werden gebundenes und freies Antigen durch einfach durchzuführendes Waschen der festen Phase getrennt. Dann reagiert das Enzym HRP in der gebundenen Fraktion mit dem Substrat (H2O2) und dem TMB-Substrat und entwickelt eine blaue Färbung, die sich nach gelb verändert, wenn die Stopplösung (H2SO4) hinzugefügt wird. Die Intensität der Färbung ist umgekehrt proportional zur Konzentration des freien Testosterons in der Probe. Die Konzentration des freien Testosterons in der Probe wird mit einer Standardkurve berechnet.

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Free Testosterone ELISA EIA-2924
4 REAGENZIEN, MATERIALIEN UND GERÄTEAUSSTATTUNG 4.1 Mit dem Kit gelieferte Reagenzien und Materialien 1. Standards (Standard 0 5), (6 Fläschchen, je 1 mL); ProClin >0,0015% und BSA 2. Controls (Kontrollen, Control A und Control B) (2 Fläschchen, 1 mL)
Die Konzentration der Kontrollen ist auf dem Analysenzertifikat angegeben; ProClin >0,0015% and human serum 3. Enzyme Conjugate (Enzymkonjugat) (1 Fläschchen,15 mL)
Testosteron konjugiert mit Meerrettich-Peroxidase (HRP); ProClin >0,0015% und BSA 4. Microtiterwells (1 Mikrotiterplatte zum Auseinanderbrechen)
Anti-Testosteron-Antikörper an die Mikrotiterplatte gebunden 5. TMB Substrate Solution (TMB-Substratlösung) (1 Fläschchen, 15 mL)
H2O2-TMB 0,26 g/L (Hautkontakt vermeiden); ProClin <0,0015% 6. Stop Solution (Stopplösung) (1 Fläschchen, 15 mL)
Schwefelsäure 0,15 M (Hautkontakt vermeiden) 7. Wash Solution (Waschlösung) 10X konzentriert (2 Fläschchen, 25 mL);
0.2M Phosphatpuffer, pH 7,4; ProClin >0,0015% siehe “Reagenzienvorbereitung”

4.2 Nicht im Kit enthaltene erforderliche Reagenzien Destilliertes Wasser
4.3 Erforderliche Hilfsmittel und Geräteausstattung Dispenser Präzisionspipetten Mikrotiterplatten-Lesegerät (450 nm, 620-630 nm)

5 WARNHINWEISE

– Dieses Kit ist nur für In-vitro-Diagnostik zur Anwendung durch Fachpersonal bestimmt. Nicht zur inneren oder äußeren Anwendung bei Mensch oder Tier geeignet.
– Beim Arbeiten mit den enthaltenen Reagenzien geeignete persönliche Schutzausrüstung verwenden. – Beim Arbeiten mit Blutprodukten die GLP-(,,Good laboratory practice”) Richtlinien befolgen.

–

Die humanen Ausgangsmaterialien für die Produktion der Reagenzien dieses Produkts wurden auf Antikörper

gegen HIV 1&2, HBsAg und HCV getestet und waren negativ. Jedoch kann durch keine Testmethode das

Vorhandensein von HIV, HBV, HCV oder anderer infektiöser Krankheitserreger mit absoluter Sicherheit ausgeschlossen

werden. Deshalb sollten Standards und Kontrollen als potenziell infektiös betrachtet und entsprechend behandelt

weird.

–

Das für die Herstellung des Kits verwendete Material tierischen Ursprungs stammt von Tieren, deren Gesundheit

bescheinigt wurde, und das Rinderprotein wurde aus Ländern gewonnen, die nicht mit BSE infiziert sind; dennoch sollten

diese Materialien als potenziell infektiös behandelt werden.

– Manche Reagenzien (Standards, Kontrollen, Enzymkonjugat and Waschlösung) enthalten kleine Mengen an

ProClin 300TM (>0,0015%, <0,06%) als Konservierungsmittel. Kontakt mit der Haut oder Schleimhaut vermeiden.

– – Einstufung gemäß der Verordnung (EG) Nr. 1272/2008 [CLP]

Hautempfindlichkeit, Kategorie 1

Enthält: ProClin 300
Warnung Gefahrenhinweise: H317 – Kann eine allergische Hautreaktion verursachen. Sicherheitshinweise: P261 – Einatmen von Staub / Rauch / Gas / Nebel / Dämpfen / Spray vermeiden. P280 – Schutzhandschuhe / Schutzkleidung / Augenschutz / Gesichtsschutz / Gehörschutz tragen. P321 – Besondere Behandlung (siehe ergänzende Erste-Hilfe-Anleitung auf diesem Etikett). P333+P313 – Bei Auftreten von Hautreizungen oder Hautausschlag: Ärztlichen Rat einholen/ärztliche Hilfe hinzuziehen. P362+P364 – Kontaminierte Kleidung ausziehen und vor erneutem Tragen waschen.

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Free Testosterone ELISA EIA-2924
– Einige Reagenzien (Standards und Kontrollen) enthalten geringe Mengen Natriumazid (NaN3) <0,1 %, das bei Verschlucken oder Absorption über die Haut oder die Augen giftig sein kann; außerdem kann es mit Blei- oder Kupferrohren reagieren und explosionsfähige Metallazide bilden. Wenn Sie ein Waschbecken zum Entfernen der Reagenzien verwenden, spülen Sie es mit großen Mengen Wasser aus, um eine Ansammlung von Aziden zu vermeiden.
– Das TMB-Substrat enthält eine reizende Substanz, die beim Einatmen, Verschlucken oder der Aufnahme über die Haut gesundheitsschädlich sein kann. Um eine Schädigung zu verhindern, Einatmen, Verschlucken oder Kontakt mit der Haut oder den Augen vermeiden.
– Die Stopplösung besteht aus verdünnter Schwefelsäure. Schwefelsäure ist giftig und ätzend und kann bei Einnahme toxisch sein. Um Verätzungen zu verhindern, Kontakt mit der Haut oder den Augen vermeiden.
– Reagenz TMB/H2O2 keinem direkten Sonnenlicht, Metallen oder Oxidationsmitteln aussetzen. Die Lösung nicht einfrieren.
– Die Bestimmung des freien Testosterons hat möglicherweise keine klinische Aussagekraft, wenn der Patient mit Kortison oder natürlichen bzw. synthetischen Steroiden behandelt wurde.
6 VORSICHTSMASSNAHMEN – Die Reihenfolge der Pipettierschritte muss genau wie in dieser Anleitung angegeben eingehalten werden. Die hier
dargestellten Daten zur Performance wurden unter Verwendung der in dieser Gebrauchsanweisung genannten spezifischen Reagenzien ermittelt. – Alle Reagenzien im Originalbehälter kühl bei 2 °C – 8 °C lagern. Ausnahmen werden deutlich gekennzeichnet. – Vor der Verwendung müssen alle Kit-Komponenten und Proben Raumtemperatur (22 °C – 28 °C) annehmen und gut gemischt werden. – Die Kit-Komponenten zwischen unterschiedlichen Chargen nicht austauschen. Die auf den Etiketten des Kartons und der Fläschchen angegebenen Verfalldaten müssen eingehalten werden. Die Kit-Komponenten nach Ablauf ihres Verfalldatums nicht mehr verwenden. – – Wenn Sie automatisierte Geräte verwenden, liegt es in der Verantwortung des Anwenders, sicherzustellen, dass das Kit für den beabsichtigten Einsatz/Zweck entsprechend validiert wurde. – Unvollständige oder ungenaue Entfernung der Flüssigkeit aus den Vertiefungen kann die Testpräzision beeinträchtigen und/oder den Hintergrund verstärken. Um die Kit-Performance bei der Verwendung von automatischen ELISASystemen zu verbessern, wird empfohlen, die Anzahl der Waschschritte zu erhöhen. – Die Reaktionszeit muss für alle Vertiefungen konstant gehalten werden, damit die Ergebnisse reproduzierbar sind. Das Pipettieren der Proben sollte nicht länger als 10 Minuten dauern, um Testabweichungen zu vermeiden. Falls mehr als 10 Minuten benötigt werden, muss die Reihenfolge des Pipettierens eingehalten werden. Bei Verwendung von mehreren Platten wird empfohlen, die Dosis-Wirkungs-Kurve für jede Platte zu wiederholen. – Durch die Zugabe der TMB-Substratlösung wird eine kinetische Reaktion gestartet, die durch das Hinzufügen der Stopplösung beendet wird. Deshalb müssen die TMB-Substrat- und die Stopplösung jeweils in derselben Reihenfolge pipettiert werden, um Zeitabweichungen während der Reaktion zu vermeiden. – Die Richtlinien zur Qualitätskontrolle im medizinischen Labor müssen befolgt werden, indem Kontrollen und/oder vereinigte Serumproben mit untersucht werden. – Beim Lösen und Pipettieren der Reagenzien ist größte Genauigkeit erforderlich. – Mikrobiell kontaminierte, stark lipämische, ikterische oder hämolysierte Proben nicht im Test verwenden. – Mikrotiterplatten-Lesegeräte lesen vertikal ab. Nicht die Unterseite der Vertiefungen berühren. – Beim Pipettieren von Testreagenzien, einschließlich Proben, Standards und Kontrollen, müssen frische Einwegspitzen verwendet werden, um das Risiko einer Verschleppungskontamination zu verringern. Andernfalls kann dies zu ungültigen Ergebnissen führen.
7 LAGERUNG UND STABILITÄT DER REAGENZIEN Den Kit bei 2 °C 8 °C im Dunkeln lagern.
· Der Kit ist bei 2 °C – 8 °C bis zu dem auf dem Außenetikett des Kits angegebenen Verfallsdatum haltbar. · Nach dem Öffnen ist der Kit bei 2 °C – 8 °C für 6 Monate haltbar. · Die verdünnte Waschlösung ist bei 2 °C – 8 °C gelagert 30 Tage lang haltbar.
Wichtiger Hinweis: Den Beutel mit der beschichteten Mikrotiterplatte erst öffnen, wenn er Raumtemperatur angenommen hat und sofort nach Gebrauch wieder verschließen.

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8 ENTNAHME UND LAGERUNG DER PROBEN

Das folgende Probenmaterial kann in diesem Test eingesetzt werden:

Serum (Standardprobenröhrchen oder Röhrchen mit Serumtrenngel) oder

Plasma (Lithiumheparin, Natriumheparin oder Kalium-EDTA).

Probenlagerung

Dauer

2 ° C - 8 ° C

24 h

Einfrier-/Auftauzyklen

1 Zyklus

9 DURCHFÜHRUNG

9.1 Vorbereitung der Standards und Kontrollen Vor der Verwendung 5 Minuten mit einem rotierenden Schüttelgerät mischen. Die Standards sind gebrauchsfertig und haben die folgenden Testosteronkonzentrationen:
S0 S1 S2 S3 S4 S5

Die Kontrolle ist gebrauchsfertig.

pg/mL 0 0,2 1,0 4,0 20,0 100,0

9.2 Vorbereitung des Enzymkonjugats Das Konjugat ist gebrauchsfertig. Mischen Sie es vorsichtig 5 Minuten lang mit einem Rollenmischer.

9.3 Vorbereitung der Waschlösung Vor der Verwendung muss der Inhalt der beiden Fläschchen der ,,Wash Solution” mit destilliertem Wasser auf ein Endvolumen von 500 mL (bezogen auf beide Fläschchen: 25 mL + 25 mL + 450 mL) verdünnt werden. Bei kleineren Volumina entsprechend im Verhältnis 1:10 verdünnen.

Möglicherweise sind in der konzentrierten Waschlösung Kristalle sichtbar, in diesem Fall bei Raumtemperatur mischen, bis sich die Kristalle vollständig aufgelöst haben. Um die Genauigkeit zu erhöhen, den gesamten Inhalt der beiden Flaschen mit konzentrierter Waschlösung auf 500 mL auffüllen und dabei darauf achten, dass auch die Kristalle mit übertragen werden, anschließend mischen, bis sich die Kristalle vollständig aufgelöst haben.

9.4 Vorbereitung der Proben Die Bestimmung des freien Testosterons kann in Humanserum (Standardprobenröhrchen oder Röhrchen mit Serumtrenngel) oder Plasma (Lithiumheparin, Natriumheparin oder Kalium-EDTA) durchgeführt werden. Die Probe bei -20°C aufbewahren, wenn die Bestimmung nicht am selben Tag der Probenentnahme erfolgt. Vor der Verwendung 5 Minuten lang vorsichtig mit einem Rollenmischer mischen.

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9.5 Testdurchführung Alle Reagenzien müssen vor Gebrauch Raumtemperatur annehmen (22 °C – 28 °C, mindestens 30 Minuten). Nach Beendigung des Tests Reagenzien sofort bei 2 °C – 8 °C lagern: lange Einwirkungszeit von Raumtemperatur vermeiden. Nicht verwendete beschichtete Mikrotiter-Streifen müssen wieder zusammen mit dem beigefügten Trockenmittel in den Folienbeutel zurückgelegt werden, der Beutel muss fest verschlossen und bei 2 °C – 8 °C gelagert werden. Damit keine mikrobielle oder chemische Kontamination auftreten kann, überschüssige Chemikalien nicht wieder in das Originalfläschchen zurückfüllen. Da der Test zur Erhöhung der Genauigkeit der Testergebnisse als Doppelbestimmung durchgeführt wird, für jeden Punkt der Standardkurve (S0 – S5) zwei Vertiefungen, für jede Kontrolle und jede Probe ebenfalls zwei Vertiefungen und für den Nullwert eine Vertiefung vorbereiten.

Reagenz

Inbhe

Probe/ Kontrolle

Nullwert

Standard S0-S5

20 l

Probe / Kontrolle

20 l

Enzymconjugat

100 l

1 Stunde bei +37 °C (± 0,5 °C) inkubieren. Inhalt der Vertiefungen entfernen; die Vertiefungen dreimal mit 300 L verdünnter Waschlösung waschen.

Wichtiger Hinweis: Die Mikrotiterplatte während jedes Waschschritts 5 Sekunden lang vorsichtig schütteln und anschließend die umgedrehte Mikrotiterplatte auf ein saugfähiges Papiertuch schlagen, um Rückstände der Waschlösung zu entfernen. Automatisches Waschgerät: Bei Verwendung von automatischen Geräten die Vertiefungen mindestens 5-mal waschen.

TMB-Substratlösung

100 l

15 Minuten im Dunkeln bei Raumtemperatur (22 °C – 28 °C) inkubieren.

Stopplösung

100 l

Die Mikrotiterplatte vorsichtig schütteln. Die Extinktion (E) innerhalb von 5 min bei 450 nm gegen eine Referenz-Wellenlänge von 620-630 nm oder gegen den
Nullwert messen.

10 QUALITÄTSKONTROLLE Die gute Laborpraxis (GLP) erfordert die Verwendung von Qualitätskontrollproben in jeder Testreihe, um die Leistungsfähigkeit des Tests zu überprüfen. Die Kontrollen sollten wie unbekannte Proben behandelt und die Ergebnisse mit geeigneten statistischen Methoden ausgewertet werden. Die im Kit enthaltenen Kontrollen sollten als unbekannte Proben getestet werden und dienen dazu, die Gültigkeit der mit jeder Testplatte erzielten Ergebnisse zu beurteilen. Die mittlere Konzentration jeder Kontrollstufe wird im QC-Bericht dokumentiert, der jedem Kit beiliegt. Diese mittleren Konzentrationswerte werden über mehrere Assays ermittelt, die in doppelter Ausführung an mehreren Stellen auf jeder Platte durchgeführt werden. DRG empfiehlt den Anwendern, grafische Aufzeichnungen über die Kontrollwerte zu führen, die mit jedem Assay-Lauf erzeugt werden, einschließlich der laufenden Mittelwerte, SDs und %CVs. Diese Informationen erleichtern die Trendanalyse der Kontrollen in Bezug auf die Leistung der aktuellen und historischen Kontrollchargen im Vergleich zu den gelieferten Qualitätskontrolldaten. Die Trendanalyse hilft bei der Identifizierung von Assays, die Kontrollwerte liefern, die signifikant von ihrem Durchschnittsbereich abweichen. Bei der Interpretation der Kontrolldaten sollten die Anwender beachten, dass dieses Produkt als manuelles Produkt konzipiert und entwickelt wurde. Der auf dem QC-Zertifikat angegebene Bereich sollte für Assays geeignet sein, die manuell und unter strikter Einhaltung des oben beschriebenen Assay-Verfahrens durchgeführt werden. Fachleute für Qualitätskontrolle sind sich darüber im Klaren, dass es aufgrund unterschiedlicher Bedingungen und Praktiken immer zu Schwankungen bei den Mittelwerten und der Präzision der Kontrollmessungen zwischen verschiedenen Labors kommen wird5.

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11 BERECHNUNG DER ERGEBNISSE Es stehen verschiedene Softwarepakete zur Datenreduktion zur Verfügung, die zur Erstellung der Standardkurve und zur Berechnung der Konzentrationen der unbekannten Proben und Kontrollen verwendet werden können. Eine logistische 4-Parameter-Kurvenanpassung (4PL), die Standard 0 einschließt, ist erforderlich.

Alternativ kann eine Kalibrierkurve auf halblogarithmischem Millimeterpapier erstellt werden, indem die mittlere Absorption auf der Y-Achse gegen die Konzentration des Analyten auf der X-Achse aufgetragen wird. Der Standard 0 sollte in der Kalibrierkurve enthalten sein. Lesen Sie den mittleren Absorptionswert jeder unbekannten Probe an der Kurve ab.

Damit die Testergebnisse als gültig angesehen werden können, müssen die Kit-Kalibratoren und die Kontrolle innerhalb der Spezifikationen liegen, die im chargenspezifischen Analysezertifikat angegeben sind.

Liegt eine Kontrolle außerhalb ihres spezifizierten Bereichs, sind die zugehörigen Testergebnisse ungültig und die Proben müssen erneut getestet werden.

Umrechnung von Einheiten Umrechnung der Ergebnisse in SI-Einheiten:

pmol/L = pg/mL x 3,47

Zur Umrechnung der Ergebnisse in Masseneinheiten: pg/mL = pmol/L x 0,289

12 MESSBEREICH Der Assay-Messbereich beträgt 0,34 70,0 pg/mL (1,18 242,9 pmol/L). Jeder Wert, der unter 0,34 pg/mL (1,18 pmol/L) liegt, sollte als “< 0,34 pg/mL (< 1,18 pmol/L)” angegeben werden. Jeder Wert, der über 70,0 pg/mL (242,9 pmol/L) liegt, sollte als “> 70,0 pg/mL (242,9 pmol/L)” angegeben werden.

13 METROLOGIE UND RÜCKVERFOLGBARKEIT Der Free Testosterone ELISA wurde anhand interner Referenzstandards (Serummatrix) standardisiert, deren Werte einer anderen im Handel erhältlichen Testmethode zugeordnet wurden.

14 ERWARTETE WERTE Die folgenden Bereiche wurden mit dem Free Testosterone ELISA ermittelt und dienen nur zur Information.

Meadhanach (pg/mL)

Referenzbereich (pg/mL)

Männer

21 49 Jahre

120

14.13

5.01 27.78

> 50 Iahre

120

12.75

4.11 21.85

Frauen

pre-menopausal

120

0.55

< LOQ 1.70

post-menopausal

120

0.75

< LOQ 2.34

Die oben genannten Bereiche sollten nur als Richtlinien betrachtet werden; es wird empfohlen, dass jedes Labor seinen eigenen erwarteten Bereich auf der Grundlage seiner eigenen Patientenpopulation festlegt.

15 LEISTUNGSMERKMALE
Es werden repräsentative Leistungsdaten gezeigt. Die in den einzelnen Laboratorien erzielten Ergebnisse können abweichen.

15.1 Detektionsvermögen

Die Limit of Blank (LoB), die Nachweisgrenze (LoD) und die Quantifizierungsgrenze (LoQ) wurden anhand der CLSI EP17A, “Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation” (Protokolle zur Bestimmung von Nachweisund Bestimmungsgrenzen) unter Verwendung von 6 Leerwertproben und 6 Proben mit niedrigem Gehalt bestimmt.

Cugallach

Konzentration

“Limit of Blank” (LoB) Nachweisgrenze (LoD)

0,10 pg/mL 0,20 pg/mL

Quantifizierungsgrenze (LoQ) 0,34 pg/mL

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15.2 Richtigkeit Die Richtigkeit wurde durch einen Methodenvergleich des ELISA für freies Testosteron mit einem kommerziell erhältlichen Test unter Verwendung nativer Spenderproben nachgewiesen – siehe Abschnitt 14.5

15.3 Präzision

Die Präzision des ELISA für freies Testosteron wurde durch die Durchführung einer komplexen Präzisionsstudie bestimmt.

Wiederholbarkeit: Insgesamt wurden 6 Serumproben in 5 Wiederholungen, einmal pro Tag thairis air 5 Tage von 3 Mitarbeitern analysiert.

Die Daten einer repräsentativen Charge sind unten dargestellt:

Mittlere

Dèan sgrùdadh

Konzentration

(pg/ml)

CV %

0,68

0,08

11,3%

1,62

0,10

5,9%

5,25

0,19

3,7%

10,43

0,48

4,6%

34,99

1,17

3,3%

68,65

4,62

6,7%

Reproduzierbarkeit: Insgesamt wurden sechs Serumproben in 5 Wiederholungen, einmal pro Tag bho 5 Tage von 3 Anwendern und mit 2 Chargen untersucht.

Dèan sgrùdadh

Mittlere (pg/mL)

CV %

PS 1

150

0,75

11,1%

PS 2

150

1,74

6,6%

PS 3

150

5,48

3,8%

PS 4

150

10,72

4,1%

PS 5

150

37,41

5,5%

PS 6

150

73,81

6,9%

15.4 Linearität

Die Linearität wurde auf der Grundlage von CLSI EP-06, “Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures”, bewertet.

Für die Konzentration von freiem Testosteron mittels Free Testosterone ELISA zeigt das Messverfahren Linearität für den Bereich von 0,27 bis 89,83 pg/mL innerhalb der akzeptablen Abweichung von der Linearität (ADL) von ±15 %.

15.5 Methodenvergleich

Der ELISA für freies Testosteron wurde mit einem im Handel erhältlichen quantitativen manuellen ELISA-Assay gemäß

CLSI EP-9A, “Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples”, verglichen. Insgesamt 95 Proben, die so

ausgewählt wurden, dass sie ein breites Spektrum an Konzentrationen an freiem Testosteron repräsentieren, wurden mit

jeder Methode analysiert. An den Vergleichsdaten wurde eine Passing-Bablok-Regressionsanalyse durchgeführt:

Steigung [95% CI]

Achsenabschnitt (pg/mL) Korrelationskoeffizient

[95% CI]

(r)

0,94 [0,88 to 0,99]

-0,02 [-0,14 to 0,06]

0,93

15.6 Analytische Spezifität Die Spezifität wurde mit den folgenden Kreuzreaktionspartnern bewertet.

Cross-reactant 11-keto-testosterone 11–hydroxy-testosterone 17OH-Progesterone Aldosterone Androstenedione Cortisol

Concentration tested 100 ng/mL 10 ng/mL 500 ng/mL 3000 ng/mL 100 ng/mL 1000 ng/mL

Mean %Cross reactivity 0.1% 0.2% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0%

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Cross-reactant Cortisone Danazol Dexamethasone DHEA DHEA-S 5a-dihydrotestosterone (DHT) Estradiol Estriol Estrone Ethisterone Norgestrel Prednisone Pregnenolone Progesterone Testosterone propionate

Concentration tested 1000 ng/mL 1000 ng/mL 2000 ng/mL 1000 ng/mL 10000 ng/mL 500 ng/mL 1000 ng/mL 100 ng/mL 1000 ng/mL 100 ng/mL 100 ng/mL 1000 ng/mL 5000 ng/mL 1000 ng/mL 1000 ng/mL

Mean %Cross reactivity 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0% 0.0%

Die folgenden Substanzen stören den ELISA für freies Testosteron nicht mit einer Abweichung von > ±15 %, wenn die Konzentrationen unter dem in der folgenden Tabelle angegebenen Schwellenwert liegen.

Potenziell störendes Reagenz Bilirubin, konjugiert Bilirubin, nicht konjugiert Hämoglobin Gesamtprotein Triglyceride

Schwellenwert Konzentration 15 mg/dL 15 mg/dL 200 mg/dL 7 g/dL 500 mg/dL

15.7 Serum-Plasma Studie Die elisa-matrixvergleichsstudie für freies testosteron wurde durchgeführt, um die unterschiede zwischen den verschiedenen röhrchentypen (serumseparatorröhrchen (sst), lithium-heparin-plasma, natrium-heparin-plasma und k2edta-plasma) im vergleich zu den kontrollproben (red-top-serum, ohne additiv) gemäß den clsi ep9-a3-richtlinien zu bewerten. insgesamt wurden 21 proben (18 native, 3 dotierte) ausgewertet, um den gesamten bereich abzudecken. an den vergleichsdaten wurde eine lineare regressionsanalyse durchgeführt:

Typ der Probe
SST Lithium Heparin Natrium Heparin EDTA

Steigung [95% CI] 0.97 [0.92 to 1.02] 0.99 [0.97 to 1.02] 0.93 [0.87 to 0.99] 1.03 [0.97 to 1.08]

Abfangen (pg/mL) [95% CI] -0.02 [-1.01 to 0.98] -0.01 [-0.40 to 1.02] -0.01 [-1.12 to 1.10] 0.27 [0.74 to 1.28]

Korrelationskoeffizient (r) 0.99
1.00 0.99
0.99

16 GRENZEN DER ANWENDUNG Wie bei jedem diagnostischen Verfahren müssen die Ergebnisse in Verbindung mit dem klinischen Bild des Patienten und anderen dem Arzt vorliegenden Informationen interpretiert werden. Die Leistungsmerkmale dieses Assays wurden nicht in einer pädiatrischen Population ermittelt. Heterophile Antikörper im Humanserum können mit Reagenz-Immunglobulinen reagieren und In-vitro-Immunoassays stören6. Bei Patienten, die routinemäßig mit Tieren oder tierischen Serumprodukten in Kontakt kommen, kann es zu dieser Interferenz kommen, und es können anomale Werte beobachtet werden.

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17 ENTSORGUNG Bei der Entsorgung der Reagenzien sind die örtlichen Vorschriften zu beachten. Alle Materialien, die mit Proben und Reagenzien in Berührung gekommen sind, müssen gemäß den Vorschriften des Landes, des Staates und der Gemeinde entsorgt werden.
18 REKLAMATIONEN UND TECHNISCHE UNTERSTÜTZUNG Für Patienten/Anwender/Dritte in der Europäischen Union und in Ländern mit ähnlichen Vorschriften (Verordnung 2017/746/EU über IVD-Medizinprodukte): Wenn während der Verwendung dieses Produkts oder als Folge seiner Verwendung ein schwerwiegender Zwischenfall aufgetreten ist, melden Sie dies bitte dem Hersteller und/oder seinem bevollmächtigten Vertreter sowie Ihrer nationalen Aufsichtsbehörde.

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1 DESTINAZIONE D’USO Free Testosterone ELISA è un dispositivo diagnostico manuale in vitro destinato alla determinazione quantitativa del testosterone libero nel siero o nel plasma umano da una popolazione adulta. I risultati devono essere impiegati in associazione ad altri dati clinici e di laboratorio come ausilio nella diagnosi e nel monitoraggio dei disturbi che riguardano gli ormoni sessuali maschili (androgeni).
Per uso diagnostico in vitro Per uso professionale in laboratorio
2 RILEVANZA CLINICA Il testosterone circolante si coniuga principalmente a proteine di trasporto, tra cui la più comune è la globulina legante gli ormoni sessuali (SHBG). Il testosterone svolge un ruolo cruciale nello sviluppo dei caratteri sessuali maschili primari e secondari ed è coinvolto nella produzione di ormoni sessuali femminili. Solo l’12% del testosterone circolante non è legato ad alcuna proteina ed è biologicamente attivo; viene denominato “testosterone libero” (FT). Il testosterone biodisponibile si riferisce alla somma del FT e del testosterone legato alla sieroalbumina, poiché è associata a bassa affinità e facilmente in grado di dissociarsi per diventare disponibile per la sua funzione biologica. Nei soggetti di sesso maschile, livelli elevati di testosterone sono associati a diverse condizioni quali pubertà precoce, iperplasia surrenale congenita (CAH), sindrome da insensibilità agli androgeni (SIA), utilizzo di steroidi e tumori testicolari o surrenali. Mentre le cause principali della soppressione del testosterone includono la sindrome di Klinefelter, danni ai testicoli, disturbi della ghiandola ipofisaria, ecc. Ne soggetti di sesso femminile di qualsiasi età, livelli elevati di testosterone possono essere associati a una serie di condizioni virilizzanti, inclusi tumori surrenali e la sindrome dell’ovaio policistico (SOPC). Queste condizioni cliniche sono associate a mancanza o eccesso di testosterone in circolazione (ipoandrogenismo o iperandrogenismo). La diagnosi di questi disturbi comporta la quantificazione del testosterone totale (TT) in associazione ad altre evidenze cliniche e dati di laboratorio. Tuttavia, le manifestazioni cliniche dei disturbi a carico degli androgeni sono spesso associate a livelli normali di TT. In questi casi, è possibile ottenere ulteriori informazioni dalla valutazione del livello di FT biologicamente attivo. Diversi disturbi a carico degli androgeni possono essere causati da un’alterazione della produzione di SHBG che influisce sui livelli di FT disponibili nel siero. La misurazione di FT può essere considerata di utilità nella diagnosi di varie condizioni, tra cui la carenza di androgeni negli uomini e l’eccesso di tali ormoni nelle donne1. La misurazione dei livelli di testosterone libero può essere utile2 ed evitare un’errata diagnosi di ipogonadismo nei casi in cui sono stabilite basse concentrazioni di testosterone totale e si sospettano alterazioni della SHBG. Nei soggetti di sesso maschile è stata osservata e ben documentata una variazione circadiana dei livelli di testosterone circolante, con maggiori concentrazioni al mattino e una progressiva diminuzione nel corso della giornata3. Una diminuzione dei livelli di testosterone si manifesta anche durante l’invecchiamento (andropausa) ed è associata alla perdita di massa muscolare e ossea, con conseguente osteoporosi, calo della libido, disfunzione erettile, depressione e deficit delle funzioni cognitive4.
3 PRINCIPIO DEL METODO Il test Free Testosterone ELISA è un dosaggio immunometrico enzimatico competitivo (ELISA) in cui il testosterone libero (antigene) nel campione compete con il testosterone antigenico coniugato con perossidasi di rafano (HRP) per il legame al numero limitato di anticorpi anti testosterone rivestiti sulla micropiastra (fase solida). Dopo l’incubazione, la separazione del legato dal libero viene eseguita con un semplice lavaggio della fase solida. Quindi, l’enzima HRP nella parte libera reagisce con il substrato (H2O2) e il substrato TMB e sviluppa un colore blu che cambia in giallo quando viene aggiunta la soluzione di arresto (H2SO4). L’intensità del colore è inversamente proporzionale alla concentrazione di testosterone libero nel campione. La concentrazione di testosterone libero nel campione viene calcolata attraverso una curva di calibrazione.

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4 REAGENTI, MATERIALI E STRUMENTAZIONE 4.1 Reagenti e materiali forniti nel kit 1. Standards (Standard 0 5) (6 flaconi, 1 mL ciascuno); ProClin >0,0015% e BSA 2. Control (Control A and Control B) (2 flaconi, 1 mL ciascuno)
La concentrazione del Controllo è indicata sul Certificato di Analisi; ProClin >0,0015% e siero umano 3. Enzyme Conjugate (1 flacone, 15 mL)
Testosterone coniugato con Perossidasi di rafano (HRP); ProClin >0,0015% e BSA 4. Microtiterwells (1 micropiastra breakable)
Anticorpo anti Testosterone adsorbito su micropiastra 5. TMB Substrate Solution (1 flacone, 15mL)
H2O2-TMB (0,26 g/L) (evitare il contatto con la pelle); ProClin <0,0015% 6. Stop Solution (1 flacone, 15 mL)
Acido Solforico 0,15 M (evitare il contatto con la pelle) 7. Wash Solution 10X Concentrato (2 flaconi, 25 mL);
Tampone fosfato 0.2M pH 7,4; ProClin >0,0015% vedi “Preparazione dei Reagenti”

4.2 Materiali richiesti ma non forniti Acqua distillata
4.3 Materiali e strumentazione ausiliari Erogatore automatico Pipette di precisione Lettore di micropiastre (450 nm, 620630 nm)

5 OSNAIDHEAN BHO IFRINN
– Questo kit è destinato all’uso in vitro esclusivamente da parte di professionisti. Non per uso interno o esterno in esseri umani o animali.
– Utilizzare adeguati dispositivi di protezione individuale mentre si lavora con i reagenti forniti. – Seguire le buone prassi di laboratorio (GLP, Good Laboratory Practice) per la manipolazione di emoderivati.

–

Tutto il materiale di origine umana utilizzato nella preparazione dei reagenti è stato testato e risultato negativo per gli

anticorpi dell’HIV 1 e 2, HbsAg e HCV. Nessun metodo di prova, tuttavia, può offrire la completa garanzia che HIV, HBV, HCV o altri agenti infettivi siano assenti. Pertanto, i calibratori e i controlli devono essere manipolati allo stesso modo del

materiale potenzialmente infettivo.

–

Il materiale di origine animale utilizzato nella preparazione del kit è stato ottenuto da animali certificati come sani e la

proteina bovina è stata ottenuta da Paesi non infettati dalla BSE, ma tali materiali devono essere trattati come

potenzialmente infettivi.

– Alcuni reagenti (calibratori, controls, conjugate e wash solution) contengono piccole quantità di ProClinTM 300 (>0,0015%, <0,06%) come conservante. Evitare il contatto con pelle o mucose.

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– Classificazione secondo il regolamento (CE) n. 1272/2008 [CLP] Sensibilizzazione cutanea, categoria 1
Contiene: ProClin 300
Attenzione Indicazioni di pericolo: H317 – Può provocare una reazione allergica cutanea. Consigli di prudenza: P261 – Evitare di respirare la polvere / i fumi / i gas / la nebbia / i vapori / gli aerosol. P280 – Indossare guanti/indumenti protettivi / proteggere gli occhi / proteggere il viso / proteggere l’udito. P321 – Trattamento specifico (vedere istruzioni supplementari di pronto soccorso su questa etichetta). P333+P313 – In caso di irritazione o eruzione della pelle: Consultare un medico. P362+P364 – Togliere tutti gli indumenti contaminati e lavarli prima di indossarli nuovamente. – Alcuni reagenti (calibratori e controls) contengono piccole quantità di azoturo di sodio (NaN3) <0,1%, che può essere tossico se ingerito o assorbito attraverso la pelle o gli occhi; inoltre, può reagire con le tubature di piombo o rame per formare azoturi metallici potenzialmente esplosivi. Se si utilizza un lavandino per rimuovere i reagenti, lavare con abbondante acqua per evitare l’accumulo di azoturi. – Il substrato TMB contiene un irritante, che può essere dannoso se inalato, ingerito o assorbito per via cutanea. Per prevenire lesioni, evitare l’inalazione, l’ingestione o il contatto con pelle e occhi. – La Stop Solution consiste in una soluzione diluita di acido solforico. L’acido solforico è velenoso e corrosivo e può essere tossico se ingerito. Per prevenire ustioni chimiche, evitare il contatto con pelle e occhi. – Evitare l’esposizione del reagente TMB/H2O2 a luce solare diretta, metalli o ossidanti. Non congelare la soluzione. – La rilevanza clinica della determinazione del testosterone libero può essere invalidata se il paziente è stato trattato con cortisone o steroidi naturali o sintetici.
6 PRECAUZIONI – Attenersi rigorosamente alla sequenza dei passaggi di pipettaggio forniti in questo protocollo. I dati sulle prestazioni qui
rappresentati sono stati ottenuti utilizzando i reagenti specifici elencati in queste istruzioni per l’uso. – Tutti i reagenti devono essere conservati refrigerati a 2 °C – 8 °C nel contenitore originale. Tutte le eccezioni sono
chiaramente indicate. – Lasciare che tutti i componenti del kit e i campioni raggiungano la temperatura ambiente (22 °C – 28 °C) e mescolare bene
prima dell’uso. – Non scambiare i componenti di kit di lotti diversi. La data di scadenza stampata sulle etichette della confezione e delle fiale
deve essere rispettata. Non utilizzare alcun componente del kit dopo la data di scadenza. – Se si utilizzano apparecchiature automatizzate, l’utente ha la responsabilità di assicurarsi che il kit sia stato
adeguatamente convalidato per il suo utilizzo/scopo previsto. – La rimozione incompleta o imprecisa del liquido dai pozzetti potrebbe influenzare la precisione del dosaggio e/o aumentare
il background. Per migliorare le prestazioni del kit sui sistemi automatici, si raccomanda di aumentare il numero di lavaggi. – È importante che il tempo di reazione in ogni pozzetto sia mantenuto costante per ottenere risultati riproducibili. Il
pìobtaggio dei campioni non deve andare oltre i dieci minuti per evitare deviazioni del dosaggio. Se sono necessari più di 10 minuti, seguire lo stesso ordine di erogazione. Se si utilizza più di una piastra, si raccomanda di ripetere la curva doserisposta in ogni piastra. – L’aggiunta della soluzione di substrato TMB avvia una reazione cinetica, che viene terminata dall’aggiunta della soluzione di arresto. Pertanto, il substrato TMB e la soluzione di arresto devono essere aggiunti nella stessa sequenza per eliminare qualsiasi deviazione temporale durante la reazione. – Osservare le linee guida per l’esecuzione del controllo di qualità nei laboratori medici analizzando i controlli e/o i sieri in pool. – La massima precisione è richiesta per la ricostituzione e l’erogazione dei reagenti. – I campioni microbiologicamente contaminati, altamente lipemici, itterici o emolizzati non devono essere utilizzati nel dosaggio. – I lettori di piastre misurano verticalmente. Non toccare il fondo dei pozzetti. – Quando si pipettano i reagenti del dosaggio, compresi campioni, calibratori e controlli, è necessario utilizzare puntali monouso nuovi per ridurre il rischio di contaminazione da carryover. In caso contrario, i risultati potrebbero non essere validi.

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7 CONSERVAZIONE E STABILITÀ DEI REAGENTI Conservare il kit a 2 °C – 8 °C, al buio.
· Il kit è stabile a 2 °C – 8 °C fino alla data di scadenza indicata sull’etichetta esterna del kit. · Una volta aperto, il kit è stabile a 2 °C – 8 °C per 6 mesi. · La soluzione di lavaggio diluita è stabile per 30 giorni a 2 °C – 8 °C.

Nota importante: aprire il sacchetto contenente la micropiastra rivestita solo quando è a temperatura ambiente e chiuderlo immediatamente dopo l’uso.

8 RACCOLTA E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI

Il dosaggio deve essere effettuato su campioni di siero (provette di campionamento standard o provette contenenti gel per la separazione del siero) o plasma (litio eparina, sodio eparina o EDTA di potassio).

Conservazione dei campiion

Durata

2 ° C - 8 ° C

24 mèinn

Cicli di congelamento/scongelamento

1 ciclo

9 PROCEDURA 9.1 Preparazione di calibratori e controlli Prima dell’uso, mescolare per 5 minuti con un miscelatore a rotazione. I calibratori sono pronti per l’uso e hanno la seguente concentrazione di testosterone:
S0 S1 S2 S3 S4 S5 pg/mL 0 0,2 1,0 4,0 20,0 100,0 I controlli sono pronti per l’uso.
9.2 Preparazione del coniugato Il coniugato è pronto per l’uso. Miscelare delicatamente per 5 minuti in un mixer a rotazione.
9.3 Preparazione della soluzione di lavaggio Diluire il contenuto delle due fiale “Wash Solution 10X Conc.” con acqua distillata fino a un volume finale di 500 mL prima dell’uso (25 mL + 25 mL + 450 mL). Per i volumi più piccoli, rispettare il rapporto di diluizione 1:10.
È possibile osservare la presenza di cristalli all’interno della soluzione di lavaggio concentrata; in tal caso, mescolare a temperatura ambiente fino alla completa dissoluzione dei cristalli. Per una maggiore precisione, diluire l’intero flacone di soluzione di lavaggio concentrata a 500 mL, avendo cura anche di trasferire completamente i cristalli sciacquando il flacone, quindi mescolare fino a quando i cristalli non si dissolvono completamente.
9.4 Preparazione dei campioni La determinazione del testosterone libero può essere effettuata su campioni di siero (provette di campionamento standard o provette contenenti gel per la separazione del siero) o plasma (litio eparina, sodio eparina o EDTA di potassio) umano. Conservare il campione a -20 °C se la determinazione non viene eseguita lo stesso giorno della raccolta del campione. Prima dell’uso, miscelare delicatamente per 5 minuti con un miscelatore a rotazione.

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9.5 Procedura
– Lasciare che tutti i reagenti raggiungano la temperatura ambiente (2228 °C) per almeno 30 minuti. Alla fine del dosaggio, conservare immediatamente i reagenti a 2 °C – 8 °C: evitare una lunga esposizione a temperatura ambiente.
– Le strisce di micropozzetti rivestiti non utilizzate devono essere rilasciate in modo sicuro nella busta di alluminio contenente l’essiccante e conservate a 2 °C – 8 °C.
– Per evitare potenziali contaminazioni microbiche e/o chimiche, i reagenti inutilizzati non devono mai essere trasferiti nelle fiale originali.
– Poiché è necessario eseguire la determinazione in duplicato per migliorare la precisione dei risultati della prova, preparare due pozzetti per ogni punto della curva di calibrazione (S0 – S5), due per ogni controllo, due per ogni campione, uno per il bianco.

Reagente

Inbhe

Campione / Controllo

Bianco

Standard S0-S5

20 l

Campione/Controllo

20 l

Enzyme Conjugate

100 l

Incubare 1 h a +37 °C. Rimuovere il contenuto da ogni pozzetto, lavare i pozzetti per tre volte con 300 L di wash solution diluita.

Nota importante: ad ogni step di lavaggio, agitare delicatamente la piastra per 5 secondi e successivamente rimuovere l’eccesso di soluzione di lavaggio sbattendo delicatamente la micropiastra capovolta su fogli di carta assorbente. Lavaggi automatici: se si utilizza strumentazione automatica effettuare almeno 5 lavaggi.

Fuasgladh substrate TMB

100 l

Incubare 15 minuti a temperatura ambiente 22 °C – 28 °C, al riparo dalla luce.

Cuir stad air fuasgladh

100 l

Agitare delicatamente la micropiastra Leggere l’assorbanza (E) a 450 nm contro una lunghezza d’onda di riferimento di 620-630 nm oppure contro il
Bianco entro 5 minuti.

10 CONTROLLO QUALITÀ Le buone prassi di laboratorio (GLP) richiedono l’inclusione di campioni per il controllo della qualità in ogni serie di dosaggi al fine di verificare le prestazioni del dosaggio. I controlli devono essere trattati come campioni sconosciuti e i risultati devono essere analizzati con metodi statistici appropriati. I controlli forniti nel kit devono essere testati come se fossero sconosciuti e hanno lo scopo di agevolare la valutazione della validità dei risultati ottenuti in ogni piastra di dosaggio. La concentrazione media di ciascun livello di controllo è documentata nel rapporto del controllo di qualità incluso in ciascun kit. Tali livelli di concentrazione media sono determinati in base a diversi dosaggi eseguiti in duplicato in più posizioni su ciascuna piastra. DRG raccomanda agli utenti di conservare le annotazioni grafiche dei valori di controllo generati con ciascun dosaggio, tra cui medie mobili, DS e CV%. Queste informazioni faciliteranno l’analisi delle tendenze dei controlli per quanto riguarda le prestazioni dei lotti di controllo attuali e pregressi rispetto ai dati forniti nel controllo di qualità. Le tendenze aiuteranno a identificare i dosaggi che generano valori di controllo significativamente diversi dal rispettivo intervallo medio. Quando si interpretano i dati dei controlli, occorre tenere conto del fatto che il prodotto è stato progettato e sviluppato come prodotto per l’utilizzo manuale. L’intervallo riportato sul certificato del controllo di qualità deve essere appropriato per i dosaggi eseguiti manualmente e rispettando rigorosamente la procedura di dosaggio descritta sopra. Gli esperti del controllo di qualità riconoscono che, a causa delle differenze di condizioni e di prassi, si avrà sempre una variabilità nei valori medi e nella precisione delle misurazioni dei controlli eseguite da laboratori diversi5.

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11 CALCOLO DEI RISULTATI Sono disponibili vari pacchetti software di elaborazione dei dati, che possono essere utilizzati per generare la curva di calibrazione media e per calcolare le concentrazioni medie di campioni e controlli sconosciuti. È necessario un adattamento della curva logistica a 4 parametri (4PL) che includa il Standard 0.
In alternativa, è possibile preparare una curva di calibrazione su carta millimetrata semilogaritmica tracciando un grafico con l’assorbanza media sull’asse delle ordinate e la concentrazione dell’analita sull’asse delle ascisse. Nella curva di calibrazione deve essere incluso il calibratore 0. Leggere il valore medio dell’assorbanza di ciascun campian.

Affinché i risultati del dosaggio siano considerati validi, i calibratori e i controlli del kit devono rientrare nelle specifiche riportate nel certificato di analisi specifico del lotto.

In caso contrario, i risultati dei test associati non saranno validi e i campioni dovranno essere analizzati nuovamente.

Conversione delle unità Per convertire i risultati in unità SI:

pmol/L = pg/mL x 3,47

Per convertire i risultati in unità di massa: pg/mL = pmol/L x 0,289

12 INTERVALLO DI MISURAZIONE L’intervallo di misurazione del dosaggio (AMR) è 0,34 70,0 pg/mL (1,18 242,9 pmol/L). Qualsiasi valore inferiore a 0,34 pg/mL (1,18 pg/L) deve essere refertato come “< 0,34 pg/mL (< 1,18 pmol/L)”. Qualsiasi valore superiore a 70,0 pg/mL (242,9 pmol/L) deve essere refertato come “> 70,0 pg/mL (242,9 pmol/L)”.
13 METROLOGIA E TRACCIABILITÀ Il test Free Testosterone ELISA è stato standardizzato in base a standard interni di riferimento (matrice sierica) il cui valore è stato assegnato a un altro metodo di test disponibile in commercio.

14 VALORI ATTESI I seguenti intervalli sono stati determinati utilizzando Free Testosterone ELISA e sono forniti unicamente a scopo informativo.

N. di soggetti

Meadhanach (pg/mL)

Intervallo di riferimento (pg/mL)

Uomini

21 49 anni

120

14,13

5,01 27,78

>50 ann

120

12,75

4,11 21,85

Donn

pre-menopausa

120

0,55

post-menopausa

120

0,75

< LOQ 1,70 < LOQ 2,34

Gli intervalli sopraindicati devono essere considerati solo come linee guida; si raccomanda a ogni laboratorio di stabilire i propri intervalli di valori attesi sulla base della propria popolazione di pazienti.

15 CARATTERISTICHE DI AZIONE Sono mostrati i dati più rappresentativi delle prestazioni. I risultati ottenuti nei singoli laboratori possono variare.

15.1 Capacità di rilevamento

Il limite del bianco (LoB), il limite di rilevamento (LoD) e il limite della determinazione quantitativa (LoQ) sono stati definiti basandosi sulla procedura CLSI EP17-A, “Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation” utilizzando 6 bianchi e 6 campioni a basso livello.

Mothachadh

Concentrazione

Limite del bianco (LoB)

0,10 pg/mL

Limite di rilevamento (LoD)

0,20 pg/mL

Limite della determinazione quantitativa (LoQ)

0,34 pg/mL

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15.2 Esattezza L’esattezza è stata dimostrata attraverso il confronto del test Free Testosterone ELISA con un test disponibile in commercio utilizzando campioni di donatori nativi. Fare riferimento alla sezione 14.5.
15.3 Precisione La precisione del test Free Testosterone ELISA è stata determinata eseguendo un complesso studio di precisione.

Ripetibilità: un totale di 6 campioni di siero è stato analizzato in 5 repliche, una volta al giorno per 5 giorni da 3 operatori.

I dati di un lotto rappresentativo sono mostrati di seguito:

Campian

Conc. media (pg/mL)

Intra-test (ripetibilità)

% CV

0,68

0,08

11,3%

1,62

0,10

5,9%

5,25

0,19

3,7%

10,43

0,48

4,6%

34,99

1,17

3,3%

68,65

4,62

6,7%

Riproducibilità: Un totale di sei campioni di siero sono stati analizzati in 5 repliche, una volta al giorno per 5 giorni da 3 operatori e con 2 lotti:

Campian

Ciall (pg/mL)

% CV

PS 1

150

0,75

11,1%

PS 2

150

1,74

6,6%

PS 3

150

5,48

3,8%

PS 4

150

10,72

4,1%

PS 5

150

37,41

5,5%

PS 6

150

73,81

6,9%

15.4 Linearità
La linearità è stata valutata secondo le linee guida basate su CLSI EP-06, “Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures”. Per la concentrazione di testosterone libero mediante il test Free Testosterone ELISA, la procedura di misurazione mostra linearità per l’intervallo da 0,27 a 89,83 pg/mL entro la deviazione ammissibile di linearità (ADL) di ± 15%.

15.5 Confronto del metodo

Il test Free Testosterone ELISA è stato confrontato con un test quantitativo ELISA manuale disponibile in commercio, secondo CLSI EP-9A, “Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples”. Ogni metodo ha esaminato un totale di 95 campioni, selezionati per rappresentare un ampio intervallo di concentrazioni di testosterone libero. L’analisi di regressione di Passing-Bablok è stata effettuata su dati comparativi:

Pendenza [IC 95%]

Intercetta (pg/mL) [IC 95%]

Coefficiente di correlazione (r)

0,94 [da 0,88 a 0,99]

-0,02 [da -0,14 a 0,06]

0,93

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15.6 Specificità analitica

La specificità è stata valutata con i seguenti reagenti crociati.

Reagente crociato

Concentrazione testata (unità)

11-ketotestosterone

100 ng / mL

11–idrossi-testosterone 17OH-Progesterone Aldosterone

10 ng/mL 500 ng/mL 3.000 ng/mL

Androstenedione

100 ng / mL

Cortisolo

1.000 ng / mL

Cortisone

1.000 ng / mL

Danazolo

1.000 ng / mL

Desametasone

2.000 ng / mL

DHEA

1.000 ng / mL

DHEA-S

10.000 ng / mL

5a-diidrotestosterone (DHT)

500 ng / mL

Estradiolo

1.000 ng / mL

Estriolo

100 ng / mL

Estrone

1.000 ng / mL

Etisterone

100 ng / mL

Norgestrel Prednisone

100 ng/mL 1.000 ng/mL

Pregnenolone

5.000 ng / mL

Progesterone

1.000 ng / mL

Testosterone propionato

1.000 ng / mL

Reattività crociata media % 0,1% 0,2% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0% 0,0%

Le seguenti sostanze non interferiscono con un bias > ± 15% nel test Free Testosterone ELISA quando le concentrazioni sono inferiori alla soglia dichiarata presentata nella tabella seguente.

Reagente potenzialmente interferente

Concentrazione di soglia

Bilirubina, coniugata

15 mg / dL

Bilirubina, non coniugata

15 mg / dL

Emoglobina

200 mg / dL

Proteine totali

7 g / dL

Trigliceridi

500 mg / dL

15.7 Studio su siero-plasma È stato condotto uno studio di confronto tra matrici del test Free Testosterone ELISA per valutare la differenza tra i tipi di provette (provette per la separazione del siero (SST), per plasma in litio eparina, per plasma in sodio eparina e plasma in K2 EDTA) rispetto ai campioni di controllo (siero tappo rosso, senza additivo) secondo le linee guida CLSI EP9-A3. È stato valutato un totale di 21 campioni (18 nativi, 3 additivati) per coprire l’intervallo. L’analisi di regressione lineare è stata effettuata su dati comparativi:

Tipo di campione SST Litio eparina Sodio eparina EDTA

Pendenza [IC 95%] 0,97 [da 0,92 a 1,02] 0,99 [da 0,97 a 1,02] 0,93 [da 0,87 a 0,99] 1,03 [da 0,97 a 1,08]

Intercetta (pg/mL) [IC 95%] -0,02 [da -1,01 a 0,98] -0,01 [da -0,40 a 1,02] -0,01 [da -1,12 a 1,10] 0,27 [da 0,74 a 1,28]

Coefficiente di correlazione (r)
0,99
1,00
0,99
0,99

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16 LIMITAZIONI D’USO – Come nel caso di qualsiasi procedura diagnostica, i risultati devono essere interpretati unitamente ai dati clinici del
paziente e alle altre informazioni a disposizione del medico. – Non sono state stabilite le caratteristiche di azione di questo dosaggio nella popolazione pediatrica. – Gli anticorpi eterofili nel siero umano possono reagire con le immunoglobuline dei reagenti, interferendo con gli
immunodosaggi in vitro6. I pazienti regolarmente esposti agli animali o a prodotti derivati da siero animale possono essere soggetti a questa interferenza, quindi si potrebbero osservare valori anomali.
17 GESTIONE DEI RIFIUTI I reagenti devono essere smaltiti in conformità alle normative locali. Tutti i materiali che sono entrati in contatto con i campioni e i reagenti devono essere smaltiti in conformità con le normative nazionali, regionali e locali.
18 RECLAMI SUI PRODOTTI E SUPPORTO TECNICO Per un paziente/utente/terza parte nell’Unione Europea e nei Paesi con un regime normativo simile (Regulation 2017/746/EU on IVD Medical Devices); se, durante l’uso di questo dispositivo o come risultato del suo utilizzo, si è verificato un incidente grave, segnalarlo al produttore e/o al suo rappresentante autorizzato e all’autorità normativa nazionale.

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1 FINALIDAD PREVISTA Free Testosterone ELISA es un dispositivo manual de diagnóstico in vitro destinado a la determinación cuantitativa de la testosterona libre en suero o plasma humano de una población adulta. Los resultados deben usarse conjuntamente con otros datos clínicos y de laboratorio para ayudar en el diagnóstico y la monitorización de trastornos en los que están implicadas las hormonas sexuales masculinas (andrógenos).
Para uso en diagnóstico in vitro Para uso profesional de laboratorio
2 IMPORTANCIA CLÍNICA La testosterona se encuentra en circulación predominantemente vinculada a las proteínas portadoras, siendo la más común de ellas la globulina fijadora de hormonas sexuales (SHBG). La testosterona representa un papel fundamental en el desarrollo de las características sexuales primarias y secundarias en los hombres, y participa en la producción de las hormonas sexuales femeninas. Solo 1-2 % de la testosterona en circulación no está vinculada a ninguna proteína y es activa desde el punto de vista biológico, lo que se denomina «testosterona libre» (FT). La testosterona biodisponible es la suma de la FT y de la testosterona vinculada a la albúmina sérica, ya que se une con baja afinidad y puede disociarse fácilmente con el fin de estar disponible para realizar su función biológica. En los hombres, los niveles elevados de testosterona están asociados a diferentes afecciones como la pubertad temprana (precoz), la hiperplasia adrenal congénita (CAH), el síndrome de insensibilidad de los andrógenos (SIA), el uso de esteroides y los tumores testiculares o adrenales. Las principales causas de los niveles inhibidos son el síndrome de Klinefelter, las lesiones testiculares, los trastornos hipofisarios, etc. En las mujeres de todas las edades, los niveles elevados de testosterona pueden asociarse a diferentes afecciones virilizantes, como los tumores adrenales y el síndrome de ovario poliquístico (SOP). Estas afecciones clínicas están asociadas a la falta o al exceso de testosterona en circulación (hipoandrogenismo o hiperandrogenismo). El diagnóstico de estos trastornos implica la cuantificación de la testosterona total (TT) en relación con otras pruebas clínicas y datos de laboratorio. Sin embargo, las manifestaciones clínicas de los desequilibrios de los andrógenos se asocian con frecuencia a niveles normales de TT. En estos casos, se puede obtener información adicional mediante la evaluación del nivel de FT que está activo desde el punto de vista biológico. Varios desequilibrios de los andrógenos pueden ser causados por la alteración de la producción de SHBG, que afecta a los niveles de FT presentes en el suero. La medición de FT puede considerarse útil en el diagnóstico de algunas afecciones como la deficiencia de andrógenos en hombres y el exceso de andrógenos en mujeres1. La evaluación de los niveles de testosterona libre puede resultar beneficiosa2 y evitar el diagnóstico incorrecto del hipogonadismo en casos en los que se determinan concentraciones bajas de testosterona total y se sospecha que hay variaciones en los niveles de SHBG. Existe una variación circadiana observada y bien documentada de los niveles de testosterona en hombres donde la concentración en circulación es más alta por la mañana y disminuye a lo largo del día3. Los niveles de testosterona también disminuyen en hombres mayores (andropausia), lo cual se asocia a la pérdida de músculo y masa ósea, que produce osteoporosis, pérdida de libido y disfunción eréctil.
3 PRINCIPIO DEL MÉTODO El Free Testosterone ELISA es un ensayo enzimático inmunométrico competitivo (ELISA) en el que la testosterona libre (antígeno) de la muestra compite con la testosterona antigénica conjugada con peroxidasa de rábano picante (HRP) para unirse al número limitado de anticuerpos anti-testosterona recubiertos en la microplaca (fase sólida). Tras la incubación, la separación ligada/libre se realiza mediante un simple lavado en fase sólida. A continuación, la enzima HRP de la fracción ligada reacciona con el sustrato (H2O2) y el sustrato de TMB, y desarrolla un color azul que cambia a amarillo cuando se añade la solución de detención (H2SO4). La intensidad del color es inversamente proporcional a la concentración de testosterona libre de la muestra. La concentración de testosterona libre en la muestra se calcula mediante una curva de calibración.

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4 REACTIVOS, MATERIALES E INSTRUMENTACIÓN 4.1 Reactivos y materiales incluidos en el kit 1. Standard (Standard 0 5), Estándares (STD) de testosterona libre (6 frascos, 1 mL cada uno); ProClin >0,0015% y
BSA 2. Control (Control A y Control B) , (2 frascos, 1 mL cada uno)
La concentración del control se indica en el certificado de análisis (Certificate of Analysis); ProClin >0,015% y suero humano 3. Enzyme Conjugate, Conjugado (1 frasco, 15 mL) Testosterona conjugada con peroxidasa de rábano (HRP); ProClin >0,0015% y BSA 4. Microtiterwells , Microplaca recubierta (1 microplaca rompible) Anti-testosterona absorbido en la microplaca 5. TMB Substrate Solution, Substrato TMB (1 frasco, 15 mL) H2O2-TMB (0,26 g/l) (evitar el contacto con la piel); ProClin <0,0015% 6. Stop Solution, Solución de interrupción (1 frasco, 15 mL) Ácido sulfúrico 0,15 M (evitar el contacto con la piel) 7. Wash Solution, Solución de lavado conc. 10X (2 frascos, 25 mL), 0.2 M tampón fosfato, pH 7,4; ProClin >0,0015% véase “Preparación de Reactivos”

4.2 Materiales necesarios pero no suministrados Agua destilada
4.3 Materiales auxiliares e instrumentación Dispensador automático Dispositivos de pipetas de precisión Lector de microplacas (450 nm, 620-630 nm)

5 GNIOMHARA
– Este kit está destinado al uso in vitro realizado exclusivamente por profesionales. No es para uso interno o externo en personas ni animales.
– Utilice el equipo de protección personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados. – Siga las prácticas de laboratorio recomendadas (BPL) para manipular productos sanguíneos.

–

Todo el material de origen humano utilizado en la preparación de los reactivos ha sido sometido a pruebas que han dado

resultado negativo para los anticuerpos contra el VIH-1 y VIH-2, el HbsAg y el VHC. Sin embargo, ningún método de prueba

puede ofrecer una garantía total de ausencia de VIH, VHB, VHC u otros agentes infecciosos. Por lo tanto, los calibradores y

los controles deben manejarse de la misma manera que el material potencialmente infeccioso.

–

El material de origen animal utilizado en la preparación del kit se ha obtenido de animales certificados como

sanos y la proteína bovina se ha obtenido de países donde no hay infección de EEB, pero estos materiales deben

manejarse como potencialmente infecciosos.

– Algunos reactivos (calibradores, controls, conjugate y wash solution) contienen pequeñas cantidades de ProClinTM 300 (>0,0015%, <0,06%) como conservante. Evite el contacto con la piel o las mucosas.

– Clasificación según Reglamento (UE) n° 1272/2008 [CLP]

Sensibilización cutánea, categoría 1

Contiene: ProClin 300
Atención Indicaciones de peligro: H317 – Puede provocar una reacción alérgica en la piel. Consejos de prudencia: P261 – Evitar respirar el polvo / el humo / el gas / la niebla / los vapores / el aerosol. P280 – Llevar guantes / ropa de protección / equipo de protección para los ojos / la cara / los oídos. P321 – Se necesita un tratamiento específico (ver intrucciones de primeros auxilios en esta etiqueta). P333+P313 – En caso de irritación o erupción cutánea: Consultar a un médico. P362+P364 – Quitar las prendas contaminadas y lavarlas antes de volver a usarlas.

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– Algunos reactivos (calibradores y controls) contienen pequeñas cantidades de azida sódica (NaN3) <0,1%, que puede ser tóxica si se ingiere o se absorbe a través de la piel o los ojos; además, puede reaccionar con las tuberías de plomo o cobre para formar azidas metálicas potencialmente explosivas. Si elimina los reactivos en un fregadero, lávelos con gran cantidad de agua para evitar la acumulación de azida.
– El sustrato de TMB contiene un irritante que es perjudicial si se inhala, se ingiere o se absorbe a través de la piel. Para evitar lesiones, evite la inhalación, la ingestión o el contacto con la piel y los ojos.
– La Stop Solution consiste en una solución diluida de ácido sulfúrico. El ácido sulfúrico es venenoso, corrosivo y puede ser tóxico si se ingiere. Para evitar quemaduras químicas, evite el contacto con la piel y los ojos.
– Evite la exposición del reactivo TMB/H2O2 a la luz solar directa, a metales o a oxidantes. No congele la solución. – La importancia clínica de la determinación de la testosterona libre puede quedar invalidada si el paciente fue tratado con
cortisona o esteroides naturales o sintéticos.

6 ROIMH-RADH
– Siga estrictamente la secuencia de pasos de pipeteado que se indica en este protocolo. Los datos de rendimiento representados en este documento se obtuvieron utilizando los reactivos específicos indicados en estas instrucciones de uso.
– Todos los reactivos deben conservarse refrigerados entre 2 °C – 8 °C en su envase original. Las excepciones se indican claramente.
– Deje que todos los componentes del kit y las muestras alcancen la temperatura ambiente (22 °C – 28 °C) y mezcle bien antes de usarlos.
– No intercambie componentes del kit procedentes de diferentes lotes. Debe respetarse la fecha de caducidad impresa en las etiquetas de la caja y de los viales. No utilice ningún componente del kit después de su fecha de caducidad.
– Si el usuario utiliza un equipo automatizado, tiene la responsabilidad de asegurarse de que el kit ha sido debidamente validado para su uso previsto.
– La eliminación incompleta o imprecisa del líquido de los pocillos podría alterar la precisión del ensayo y/o aumentar el fondo. Para mejorar el rendimiento del kit en sistemas automáticos se recomienda aumentar el número de lavados.
– Es importante que el tiempo de reacción en cada pocillo se mantenga constante para obtener resultados reproducibles. El pipeteo de las muestras no debe prolongarse más de diez minutos para evitar errores en el ensayo. Si se necesitan más de 10 minutos, siga el mismo orden de dispensación. Si se utiliza más de una placa, se recomienda repetir la curva dosis-respuesta en cada placa.
– La adición de la solución de sustrato de TMB inicia una reacción cinética, que finaliza al añadir la solución de detención. Por lo tanto, el sustrato de TMB y la solución de detención deben añadirse en la misma secuencia para eliminar las posibles desviaciones temporales durante la reacción.
– Respete las directrices para realizar el control de calidad en los laboratorios médicos mediante el ensayo de controles y/o sueros combinados.
– Se requiere la máxima precisión en la reconstitución y dispensación de los reactivos. – No se deben usar en el ensayo muestras contaminadas microbiológicamente, muy lipémicas, ictéricas o hemolizadas. – Los lectores de placas miden en vertical. No toque el fondo de los pocillos. – Deben emplearse puntas desechables nuevas al pipetear reactivos de ensayo, incluidas las muestras, los calibradores y los
controles, para mitigar el riesgo de contaminación por arrastre. De lo contrario, los resultados podrían no ser válidos.

7 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS Almacene el kit a 2 °C – 8 °C en un lugar oscuro.
· El kit es estable a 2 °C – 8 °C hasta la fecha de caducidad indicada en su etiqueta externa. · Una vez abierto, el kit es estable a 2 °C – 8 °C durante 6 meses. · La solución de lavado diluida es estable durante 30 días a 2 °C – 8 °C.
Nota importante: abra la bolsa que contiene la microplaca recubierta solo cuando esté a temperatura ambiente y ciérrela inmediatamente después de su uso.

8 RECOGIDA Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS El ensayo debe realizarse usando muestras de
suero (tubos de muestras estándar o tubos que contienen gel de separación de suero) o plasma (heparina de litio, heparina de sodio o EDTA de potasio).

Almacenamiento de muestras

Dùrachd

2 °C – 8 °C Ciclos de congelación/descongelación

24 horas 1 ciclo

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9 PROCEDIMIENTO 9.1 Preparación de estándares y controles Antes de utilizarlos, mezclar durante 5 minutos con una batidora giratoria. Los calibradores están listos para utilizarse y tienen la siguiente concentración de testosterona:
S0 S1 S2 S3 S4 S5 pg/mL 0 0,2 1,0 4,0 20,0 100,0 Los controles están listos para su uso.
9.2 Preparación del conjugado El conjugado está listo para su uso. Mezclar suavemente durante 5 minutos con un mezclador de rodillos.
9.3 Preparación de la solución de lavado Diluir el contenido de los dos viales « Wash Solution, 10X Conc. »con agua destilada hasta un volumen final de 500 mL antes de usarlo (25 mL + 25 mL + 450 mL). Para volúmenes más pequeños, respete la relación de dilución de 1:10.
Es posible que observe la presencia de cristales dentro de la solución de lavado concentrada; en este caso, mezcle a temperatura ambiente hasta la completa disolución de los cristales. Para una mayor precisión, diluya todo el frasco de solución de lavado concentrada a 500 mL, teniendo cuidado también de transferir los cristales enjuagando completamente el frasco y luego mezclando hasta que los cristales se disuelvan completamente.
9.4 Preparación de las muestras La determinación de la testosterona libre puede realizarse usando muestras de suero humano (tubos de muestras estándar o tubos que contienen gel de separación de suero) o plasma (heparina de litio, heparina de sodio o EDTA de potasio). Almacenar la muestra a 20 °C si la determinación no se lleva a cabo el mismo día que se recoge la muestra. Antes de utilizar, mezclar suavemente durante 5 minutos con un mezclador de rodillos.

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9.5 Gnìomh

– Deje que todos los reactivos alcancen la temperatura ambiente (22 °C – 28 °C) durante al menos 30 minutos. Al finalizar el ensayo, almacene inmediatamente los reactivos a 2 °C – 8 °C: evite la exposición prolongada a la temperatura ambiente.
– Las tiras de micropocillos recubiertas no utilizadas deben dejarse de forma segura en el envoltorio de papel de aluminio que contiene desecante y almacenarse a 2 °C – 8 °C.
– Para evitar que se produzca una posible contaminación microbiana y/o química, los reactivos no utilizados nunca se deberán transferir a los viales originales.
– Como es necesario realizar la determinación por duplicado para mejorar la precisión de los resultados de la prueba, prepare dos pocillos para cada punto de la curva de calibración (S0 – S5), dos por cada control, dos para cada muestra y uno para el blanco.

Reactivo

Estandar

Muestra / Control

Blanco

Estándares S0-S5

20 µl

Muestra/Control

20 µl

Conjugado

100 µl

Incubar 1 h a +37 °C (± 0,5 °C). Retirar el contenido de cada pocillo y lavar los pocillos veces con 300 µL de solución de lavado diluida.

Nota importante: agite suavemente la placa durante 5 segundos en cada paso del lavado. Después del último lavado asegúrese haber eliminado completamente la solución de lavado de los pozos, invierta la placa y golpéela repetidas veces contra una servilleta de papel absorbente. Si se utiliza un equipo automático, lavar los pocillos al menos 5 veces.

Substrato TMB

100 µl

Incubar 15 minutos a temperatura ambiente (22 °C – 28°C), protegida de la luz.

Solución de interrupción

100 µl

Agitar la microplaca con cuidado. Leer la absorbancia (E) a 450 nm frente una segunda lectura de referencia a 620-630 nm o frente al blanco entre
5 mhionaid.

10 CONTROL DE CALIDAD Las prácticas de laboratorio recomendadas (BPL) requieren el uso de muestras de control de calidad en cada serie de ensayos para comprobar el rendimiento del ensayo. Los controles deberán tratarse como muestras desconocidas y los resultados deberán analizarse con métodos estadísticos adecuados. Los controles incluidos en el kit deberán ser probados como desconocidos y están destinados a ayudar a evaluar la validez de los resultados obtenidos con cada placa de ensayo. La concentración media de cada nivel de control se documenta en el informe de control de calidad que se incluye en cada kit. Los niveles de concentración media se determinan respecto de varios análisis, los cuales se realizan por duplicado en varios puntos diferentes de cada placa. DRG recomienda que los usuarios mantengan registros gráficos de los valores de control que se generan con cada ensayo, incluida la media de ejecución, la DE (desviación estándar) y el % CV. Esta información facilitará los ensayos de tendencia de los controles relacionados con el rendimiento de lotes de control actuales e históricos relativos a los datos de control de calidad proporcionados. La tendencia facilitará la identificación de los análisis que generan valores de control significativamente distintos de su intervalo medio. Al interpretar los datos de control, los usuarios deberán tener en cuenta que este producto fue diseñado y desarrollado como un producto manual. El rango establecido en el certificado de control de calidad deberá ser adecuado para los ensayos que se realizan manualmente y en estricto cumplimiento del procedimiento de ensayo anteriormente descrito. Los profesionales del control de la calidad reconocen que, como resultado de las diferencias en las condiciones y en las prácticas, siempre habrá variaciones entre laboratorios en los valores medios y en la precisión de las mediciones de control5.

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11 CÁLCULO DE LOS RESULTADOS Hay disponibles diversos paquetes de software de reducción de datos que se pueden utilizar para generar el promedio de la curva de calibración y para calcular el promedio de las concentraciones de muestras y controles desconocidos. Es necesario un ajuste de curva logístico de 4 parámetros (4PL), incluido el Standard 0.

También se puede preparar una curva de calibración en papel semilogarítmico mediante el trazado de la absorbancia media en el eje Y frente a la concentración de analitos en el eje X. El calibrador 0 debe incluirse en la curva de calibración. Lea el valor de absorbancia medio de cada muestra desconocida que se encuentra fuera de la curva.

Para que los resultados del ensayo se consideren válidos, los calibradores y el control del kit deben ajustarse a las especificaciones detalladas en el certificado de análisis específico del lote.#

Si un control está fuera de su rango especificado, los resultados de la prueba asociados no son válidos y se deben volver a realizar pruebas de las muestras.

Conversión de unidades Para convertir los resultados a unidades del SI:

pmol/L = pg/mL × 3,47

Para convertir los resultados en unidades de masa: pg/mL = pmol/L x 0,289

12 RANGO DE MEDICIÓN El rango de medición del ensayo (AMR) es de 0,34 70,0 pg/mL (1,18 242,9 pmol/L). Cualquier valor por debajo de 0,34 pg/ml (1,18 pmol/L) debería declararse como «< 0,34 pg/ml» («< 1,18 pmol/L»). Cualquier valor por debajo de 70,0 pg/ml (242,9 pmol/L) debería declararse como «> 70,0 pg/ml (242,9 pmol/L)».

13 METROLOGÍA Y TRAZABILIDAD El Free Testosterone ELISA ha sido estandarizado con respecto a los estándares de referencia internos (matriz de suero), cuyo valor ha sido asignado a otro método de prueba disponible en el mercado.

14 VALORES ESPERADOS Los siguientes rangos se determinaron usando Free Testosterone ELISA y se proporcionan solo con fines informativos.

Varones

Número de sujetos

Mediana Intervalo de referencia

(pg/mL)

21 49 años

120

14,13

5,01 27,78

> 50 bliadhna

120

12,75

4,11 21,85

Mujeres

premenopáusica

120

0,55

< LOQ 1,70

postmenopáusica

120

0,75

< LOQ 2,34

Los rangos anteriores deberán ser considerados como directrices solamente; se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango previsto en función de su propia población de pacientes.

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15 CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO Se muestran los datos de rendimiento representativos. Los resultados obtenidos en diferentes laboratorios pueden diferir.

15.1 Capacidad de detección

El límite de blanco (LoB), el límite de detección (LoD) y el límite de cuantificación (LoQ) se determinaron con orientación del documento CLSI EP17-A, “Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation”, usando 6 blancos y 6 muestras de bajo nivel.

Sensibilidad

dùmhlachd

Límite de blanco (LoB)

0,10 pg/mL

Límite de detección (LoD)

0,20 pg/mL

Límite de cuantificación (LoQ)

0,34 pg/mL

15.2 Veracidad Se ha demostrado la veracidad mediante la comparación del método Free Testosterone ELISA con un ensayo disponible en el mercado que utiliza muestras de donantes nativos; consulte la sección 14.5.

15.3 Precisión La precisión de Free Testosterone ELISA se determinó mediante la realización de un estudio de precisión complejo.

Repetibilidad: Se analizaron un total de 6 muestras de suero en 5 réplicas, una vez al día durante 5 días por 3 operadores.

A continuación se muestran los datos de un lote representativo:

Muestra

Medio conc. (pg/mL)

Intraprueba (repetibilidad)

CV %

0,68

0,08

11,3 %

1,62

0,10

5,9 %

5,25

0,19

3,7 %

10,43

0,48

4,6 %

34,99

1,17

3,3 %

68,65

4,62

6,7 %

Reproducibilidad: Se analizaron un total de seis muestras de suero en 5 réplicas, una vez al día durante 5 días por 3 operadores y con 2 lotes:

Muestra

Meadhanan (pg/mL)

CV %

PS 1

150

0,75

11,1 %

PS 2

150

1,74

6,6 %

PS 3

150

5,48

3,8 %

PS 4

150

10,72

4,1 %

PS 5

150

37,41

5,5 %

PS 6

150

73,81

6,9 %

15.4 Linealidad La linealidad se evaluó en base a CLSI EP-06, “Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures». Para la concentración de testosterona libre ELISA en Free Testosterone ELISA, el procedimiento de medición muestra linealidad para el intervalo de 0,27 a 89,83 pg/mL dentro de la desviación de linealidad permitida (ADL) de ±15 %.

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15.5 Comparación de métodos

La Free Testosterone ELISA se comparó con una prueba ELISA manual cuantitativa disponible en el mercado, siguiendo CLSI EP-9A, “Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples”. Con cada método se realizó el ensayo de un total de 95 muestras, seleccionadas para representar un amplio intervalo de concentraciones de testosterona libre. Se realizó el análisis de regresión de Passing y Bablock en los datos comparativos:

Pendiente [IC del 95 %]

Intersección (pg/mL) [IC del 95 %]

Coeficiente de correlación (r)

0,94 [0,88 a 0,99]

-0,02 [-0,14 a 0,06]

0,93

15.6 Especificidad analítica

La especificidad se evaluó con los siguientes reaccionantes cruzados.

Reaccionante cruzado

Concentración probada Promedio en % de reactividad cruzada

11-ceto-testosterona

100 ng / mL

0,1 %

11–hidroxi-testosterona 17OH-progesterona Aldosterona

10 ng/mL 500 ng/mL 3000 ng/mL

0,2% 0,0% 0,0%

Androstenediona

100 ng / mL

0,0 %

Cortisol

1000 ng / mL

0,0 %

Cortisona

1000 ng / mL

0,0 %

Danazol

1000 ng / mL

0,0 %

Dexametasona

2000 ng / mL

0,0 %

DHEA

1000 ng / mL

0,0 %

DHEA-S

10000 ng / mL

0,0 %

5a-dihidrotestosterona (DHT) Estradiol

500 ng/mL 1000 ng/mL

0,0% 0,0%

Estriol

100 ng / mL

0,0 %

Estrona

1000 ng / mL

0,0 %

Etisterona

100 ng / mL

0,0 %

Norgestrel

100 ng / mL

0,0 %

Prednisona

1000 ng / mL

0,0 %

Pregnenolona

5000 ng / mL

0,0 %

Progesterona

1000 ng / mL

0,0 %

Propionato de testosterona

1000 ng / mL

0,0 %

Las siguientes sustancias no interfieren con un sesgo de > ±15 % en la Free Testosterone ELISA cuando las concentraciones están por debajo del umbral indicado presentado en la siguiente tabla.

Reactivos que pueden interferir Límite máximo de concentración

Bilirrubina, conjugada

15 mg / dL

Bilirrubina, no conjugada

15 mg / dL

Hemoglobina

200 mg / dL

Proteína total

7 g / dL

Triglicéridos

500 mg / dL

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15.7 Estudio en suero-plasma

El Free Testosterone ELISA estudio de comparación de la matriz se realizó para evaluar la diferencia entre los tipos de tubos (tubos separadores de suero [SST], plasma de heparina de litio, plasma de heparina sódica y plasma K2 EDTA) frente a las muestras de control (tapón rojo para suero, sin aditivos) siguiendo las directrices CLSI EP9-A3. Se evaluó un total de 21 muestras (18 nativas, 3 con aditivos) para cubrir el intervalo. Se realizó un análisis de regresión lineal sobre los datos comparativos:

Tipo de muestra

Pendiente Intersección (pg/mL)

[IC del 95 %] [IC del 95 %]

Coeficiente de correlación (r)

SST

0,97 [0,92 a 1,02]

-0,02 [1,01 a 0,98]

0,99

Heparina de litio

0,99 [0,97 a 1,02]

-0,01 [0,40 a 1,02]

1,00

Heparina sódica

0,93 [0,87 a 0,99]

-0,01 [1,12 a 1,10]

0,99

EDTA

1,03 [0,97 a 1,08]

0,27 [0,74 a 1,28]

0,99

16 LÍMITES DE USO
– Como en cualquier procedimiento diagnóstico, los resultados se deberán interpretar junto con los hallazgos clínicos del paciente y otra información de la que el médico disponga.
– Las características de rendimiento de este análisis no se han establecido para una población pediátrica. – Los anticuerpos heterofílicos en el suero humano pueden presentar reacciones con las inmunoglobulinas reactivas, que
interfieren con los inmunoensayos in vitro6. Los pacientes que se exponen habitualmente a animales o a productos de suero animal pueden ser propensos a esta interferencia y puede que se observen valores anómalos.

17 GESTIÓN DE RESIDUOS Los reactivos deben eliminarse de acuerdo con la normativa local. Todos los materiales que hayan entrado en contacto con las muestras y los reactivos deben eliminarse de acuerdo con la normativa nacional, estatal y local.

18 RECLAMACIONES SOBRE PRODUCTOS Y ASISTENCIA TÉCNICA
Para un paciente/usuario/tercero en la Unión Europea y en países con un régimen regulatorio similar (Regulation 2017/746/EU on IVD Medical Devices); si, durante el uso de este dispositivo o como resultado de su uso, se ha producido un incidente grave, informe del mismo al fabricante y/o a su representante autorizado y al organismo regulador nacional.

19 BIBLIOGRAPHY 1. Shea JL, Wong PY, Chen Y. Free testosterone: clinical utility and important analytical aspects of measurement.
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Tionndadh 5.0;

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Free Testosterone ELISA EIA-2924

SIMBOLAIDHEAN AIR AN CLEACHDADH

samhladh

Sasannach

Co-chòrdadh Eòrpach

Deutsch
CE-Conformitätskennzeichnung

Thoir sùil air stiùireadh airson Gebrauchsanweisung

cleachdadh *

beinn *

Inneal meidigeach breithneachaidh in vitro *

In-vitro-Diagnosis *

Àireamh catalog *

Katalognummer *

Còd baidse *

Chargen-bezeichnung *

A’ toirt a-steach gu leòr airson deuchainnean *

Ausreichend for Prüfungen *

Crìochan teòthachd *

Temperaturgrenzwerte *

Ceann-latha cleachdaidh * Dèanadair *

Verwendbar bis * Hersteller *

Eadailtis
Conformità europea Consultare le istruzioni per l’uso
Diagnostica in vitro
Chan eil Cat.

Spàinneach
Conformidad europea Consulte las instrucciones de uso Diagnóstico in vitro No de catálogo

Français
Conformité normes européennes Consulter les instructions d’utilisation
Diagnostic ann vitro
Reference

Portugues
Conformidade Europeia Consultar as instruções de uso Dispositivo médico para diagnóstico in vitro Número de catálogo

Lotto chan eil

Àireamh de lot

Lean air adhart gu leòr airson an “n” saggi
Teòthachd glèidhteachais

Contenido gu leòr airson Teòthachd glèidhteachais

Data di scadenza Fecha de caducidad

Fabbricante

Fabricante

Chan eil
Lean air adhart airson deuchainnean “n”.
Temperature de conservation Date limite d’utilisation Fabricant

Código do lote Suficiente para <n> determinações Limites de temperatura Prazo de validade Fabricante

Neach-cuairteachaidh *

Vertriebspartner *

Date of manufacture * Herstellungsdatum *

Cunnartan bith-eòlasach *

Bith-eòlas *

Distributore Data di produzione Rischi biologici

Distribuidor Fecha de fabricación Riesgos biológicos

Neach-cuairteachaidh

Date de production Data de fabricação

Risques biologiques Riscos biológicos

Caution * Unique device Identifier *

Achtung * eindeutige Produktidentifizierung *

Attenzione
Identificativo unico del dispositivo*

Precaución
Identificación exclusiva del dispositivo *

An aire

Cuidado

ID de

Identificador

dispositif unique* único do

dispositivo *

Meud susbaint RUO / Àir.

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Nur für Forschungszwecke Inhalt Volumen/Anzahl

Solo agus scopo di ricerca

Solo airson rannsachadh a chleachdadh

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Contenido

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Seulement dans le cadre de recherches Conditionnement
Volume/Quantité

Conteúdo Volume / Quantidade

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Sgrìobhainnean/Goireasan

DRG INTERNATIONAL Free Testosterone ELISA [pdf] Leabhar-làimhe stiùiridh
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Testosterone ELISA saor an asgaidh

Sònrachaidhean

Stiùireadh airson cleachdadh bathar

1. Ullachadh

2. Handling Warnings

3. Testing Procedure

4. Stòradh agus Fuasgladh

5. Smachd Càileachd

Ceistean Cumanta (FAQ)

Q: Can this kit be used for animals?

C: Dè bu chòir dhomh a dhèanamh ma thachras mi air mearachd rè
deuchainn?

Sgrìobhainnean/Goireasan

Iomraidhean

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