INTRODUCCION

A LOS
SISTEMAS
MICROSCAN
QFB. NANCY YADIRA SERNA CABRERA
 TEMARIO

• Fase Pre análisis (pre examen)

• Fase de análisis (Examen)
• Suministros
• Metodología del Instrumento
 Primo Aislamiento
- Siembre la muestra en los medios de cultivo primarios de acuerdo al protocol de
examen, con la finalidad de promover el desarrollo de el o los agentes etiolóficos
asociados al proceso infeccioso.

- Tinción de Gram: Examine una muestra representativa del sitio infectado

mediante un extendido teñido por el método de Gram.

- Evalue la calidad de la muestra (indice Q) y valore la reacción inflamatoria.

Defina las formas y agrupación de las células bacterianas presentes.

- Incube 18-24 horas para obtener crecimiento bacteriano.

 Algoritmo del análisis
1
Toma de Muestra
Exámen
Microscópico

Recepción en el Lab.

Incubación
Medios Enriquecidos y
2
Selectivos Aislamiento
Procedimientos
 Recolección de Muestras

• Consideraciones
Importantes:

1. Medios de
Trasporte
2. Toma de Muestra
3. Conservación
 Muestra
– Tinción de Gram:

Microscopía

– Medio de Cultivo:
(necesario para desarrollo de la
bacteria)
Tinción Gram
Gram positivos Gram negativos
 Medios de cultivo

Todos los medios de

cultivo deben contener
nutrimentos esenciales
para el crecimiento de
los microorganismos.
Paneles de Cultivo recomendados por BCI
Tipo de Panel Medio de cultivo Medio de Cultivo NO
Recomendado SUGERIDO
Gram Positivo (PC#) Agar soya Tripticasa con Los medios de Cultivo
5% de Sangre de Carnero que contengan
Agar Chocolate antibióticos como el CAN
(Columbia Acido
Nalidixico)
Gram Negativo (NC#) Agar soya Tripticasa con Medios de cultivo como
5% de Sangre de Carnero EMB (Azul de Metileno y
Agar Chocolate Eosina) o Xilosa Lisina
Mac Conkey (última Desoxycolato (XLD) no
opción) deben ser usados

Strpetococos TSA con 5% sangre de

(MICroSTREP plus and carnero o agar chocolate
MICroFAST panels)
Siembra

– Técnicas de
sembrado (estría
cruzada para
agotamiento de
inóculo)

– Aislar colonias
bacterianas.
Incubación

– Incubación 35°C ± 2°C .

– 18-24 horas para obtener

crecimiento bacteriano
Requerimientos para el crecimiento bacteriano
● Humedad -Deben usarse medios de transporte inmediatamente después de la toma de
muestra para prevenir la pérdida de la viabilidad y la humedad.

● pH –Los microorganismos crecen mejor con un pH de entre 6-8.

● Temperatura-Muchos patógenos crecen mejor a 35°C +/-2, durante 24 horas o más si es de

crecimiento lento.

● Nutrimentos esenciales –Tales como: H, C, N, Minerales, aminoácidos.

● Los microorganismos fastidiosos requieren medios enriquecidos.

● Atmósfera - Las bacterias aerobias crecen solo en la presencia de oxígeno. Las anaerobias
habitan y crecen en ausencia de oxígeno y se debe usar un medio de transporte para
anaerobios si es que se sospecha de este. Algunas bacterias fastidiosas, tales como
Streptococcus y Neisseria gonorrhoeae tienen un crecimiento óptimo con 5-10% de CO2.
 Características de las Colonias

– Crecimiento bacteriano.

– Tipo de colonia

– Morfología colonial

– Hemólisis (sangre)
 Selección de colonias

- Examine las colonias

Creci Reincubar o Identificación
aisladas 2 miento? Reportar como Negativo presuntiva
microscópicamente para
una confirmación
preliminar.

Morfología Exámen Pruebas

- Identificación del patógeno colonial Microscópico Presuntivas
sospechoso.

- Inocule el panel con una

3
solución de las colonias Pruebas Inoculación
selectivas Incubación
aisladas para la
identificación y las pruebas
de sensibilidad de los
patógenos sospechosos.
 PRUEBAS NECESARIAS ANTES DE PROCESAR UN PANEL
• TINCIÓN DE GRAM

• CATALASA

• OXIDASA
Paneles de MicroScan
 MicroScan® Paneles

Paneles
Paneles Rápidos
Especialidad

Paneles Paneles
convencionales Synergies plus
 Más Información– Paneles convencionales

 FORMATO:
 Sólo ID
 Sólo MIC
 ID + Break Point diluciones
 ID + MIC diluciones

 Sustratos de Identificación:
– Después de 16 – 42/44 horas de incubación, los resultados se basan en:
– Detección de cambios en el pH
– Asimilación de sustratos
 --- y/o ---
– Crecimiento en presencia de antimicrobianos

Diluciones de MIC:
 Proporciona diluciones dobles de cada antimicrobiano para precisar el MIC obtenido.
 Más Información– Paneles convencionales

 BREAK POINT Diluciones:

 Sólo 2 pozos de antimicrobiano en el breakpoint

 8 16
 Ventaja – Permite tener más antimicrobianos por panel
 Desventaja – No se sabe cuál es el MIC con exactitud lo cual puede ser un obstáculo al recetar la dosis

Indicadores de USO:
Paneles Gram Negativos:
 Aerobios y anaerobios facultativos (Crecimiento con o sin O2) bacilos gram negativos

PANELES GRAM POSITIVOS

 Cocos Gram Positivo aerobios y facultativos
 Algunos cocos gram positivos fastidiosos
 Listeria monocytogenes
 Tipos de Paneles MicroScan

1) Paneles para bacterias Gram positivas.

• Catalasa (+): Estafilococos y géneros relacionados

(Staphylococcus spp, Micrococcus sp. y Listereia monocytogenes

• Catalasa (-): Streptococcus spp. (incluyendo alfa y betahemlíticos)

y Enterococcus sp.
• 2) Paneles para bacterias Gram negativas.

• Fermentadores de glucosa. Tenemos como ejemplo las

Enterobacterias (Escherichia, Enterobacter, Citrobacter,
Salmonella, Shigella, Proteus, etc), Vibrio sp, Plesiomonas
shigelloides y Aeromonas hydrophila

• No fermentadores de glucosa. Los ejemplos : Pseudomonas spp,

Alcalígenes sp, Acinetobacter spp, Burkholderia sp.
– Los paneles convencionales MicroScan® para bacterias Gram positivas y
Gram negativas NO permiten la ID/PSA a los siguientes microorganismos
comunes en el laboratorio microbiológico:

– Géneros Haemophilus, Neisseria, Gardnerella y Moraxella (HNID)

– Hongos levaduriformes (Candida, Criptococcus, etc) (RY) Solo para hongos

levaduriformes

– Anaerobios estrictos Gram positivos y Gram negativos (RAID)

– Géneros Brucella, Corynebacterium, Chlamydia, Mycobacterium y

Mycoplasma , Bordetella pertusis
 CONSERVACIÓN DE LOS PANELES Y REACTIVOS.
Paneles

1) Conservar a 2º-25º C

2) No exponerlos directamente a una fuente de calor (luz solar).

3) Mantenerlos alejados de la humedad.

4) Mantenerlos en su empaque herméticamente sellado

5) Abrir únicamente cuando vaya a realizar la prueba.

Si lo abre y expone al ambiente, se empiezan a hidratar con la
humedad del ambiente y pueden echarse a perder tras un tiempo.

6) Si abre algún panel y no lo utiliza, manténgalo en su empaque

y séllelo perfectamente con cinta adhesiva.
 Preparación del panel
• Extraiga los paneles que va a utilizar
• NO LOS UTILICE si se ve alterada la integridad del envase (si no esta
sellado, o si está perforado o desgarrado)
• Corte la bolsa para abrirla y retire el panel
• NO SE DEBE UTILIZAR SI:
– No hay desecante o esta roto
– Los pocillos del panel están descoloridos (p.ej. PHO, distintos
antimicrobianos)
• Deje que los paneles se atemperen a Temp. Ambiente antes de
hidratarlos
• TODOS LOS PANELES SE DEBEN DE USAR EN EL TRASCURSO
DEL DIA O DESECHARLOS
 Condiciones de Almacenamiento y Envio de los Productos de MicroScan
Condiciones de Condiciones de
#Parte Descripción
almacenamiento envio
B1015-2 Inoculum H2O (3 mL) 60 PK 15 - 30 °C Ambiente
B1015-12 Inoculum Saline (3 mL) 60PK 15 - 30 °C Ambiente
B1015-7 Inoculum H2O with Pluronic D (25 mL) 60 PK 15 - 30 °C Ambiente
B1015-11 Inoculum Saline with Pluronic D (6.5 mL) 60 PK 15 - 30 °C Ambiente
B1015-25 Mueller Hinton Broth w/LHB (3%) (25 mL) 10 PK 2-8°C Controlada
B1015-16 HNID Inoculum Broth (1.7 mL) 60 PK 2-8°C Controlada
B1026-10D Prompt Inoculation System-D (30 mL) 60 PK 2-27°C Ambiente
 Condiciones de Almacenamiento y Envio de los Productos de MicroScan
Condiciones de Condiciones de
#Parte Descripción
almacenamiento envio
Reactivos
B1010-42A Alpha Naphthol 5%, (VP2) 15-30°C Ambiente
Alpha Naphthol, after reconstitution, (VP2) 2-30°C -
B1010-43 Potassium Hydroxide (KOH) 40%, (VP1) 15-30°C Ambiente
B1010-45 Dimethyl-alpha-naphthylamine 0.5%, (NIT2) 15-30°C Ambiente
B1015-44 Sulfanilic Acid 0.8%, (NIT1) 15-30°C Ambiente
B1015-41 Kovac’s 15-30°C Ambiente
B1015-48 Ferric Chloride 10% 15-30°C Ambiente
B1012-30B Peptidase 2-8°C Controlada
B1015-15 HNID Indole Reagent (HNID) 2-8°C Controlada
B1015-6 Ehrlich’s Reagent (RAID) 2-8°C Controlada
B1015-5 Xylene (RAID) 15-30°C Ambiente
B1015-17 Rapid Indole (RNID3) 2-8°C Controlada
B1015-3 Sodium Hydroxide (NaOH) .05N, (RYID) 15-30°C Ambient
B1013-3 Reagent QC Kit 2-8 °C Controlada
B1010-40 Mineral Oil 15-30°C Ambiente
B1010-51 Seal Strips (600) 15-30°C N/A
B1015-18 Yeast Turbidity Standard 15-30°C Ambiente
 Conservación de Reactivos
• El reactivo alfa-naftol viene deshidratado; reconstituir con 30 ml de etanol al 95%

• Indicaciones en la caja: Diluir con 30 mL de Etanol al 95% y mezcle

completamente. La estabilidad una vez reconstituido es de 14 días de 2-30 °C.

• Una vez reconstituido, es estable mientras presente una apariencia cristalina,

incolora o hasta moderadamente parda.

• Los reactivos, mientras permanezcan en su frasco ámbar y a la temperatura

adecuada, son aceptablemente viables para realizar pruebas hasta su fecha de
caducidad
 Condiciones de Almacenamiento y Envio de los Productos de MicroScan
Condiciones de Condiciones de
#Parte Descripción
almacenamiento envio
Paneles Inoculadores
B1013-4 Inoculators Dried (240) N/A N/A
B1013-6 Inoculators Rapid (240) N/A N/A
Paneles
B1017-70 Rapid Yeast ID (RYID) (20) 2-8 °C Controlada
B1017-2 Rapid Anaerobe ID (RAID) (20) 2-8 °C Controlada
B1012-10B HNID (20) 2-8 °C Controlada
B1027-101 ESβL plus 2-8 °C Controlada
B1027-XXX MICroSTREP plus 2-25°C Ambiente
B1017-XXX Dried Gram Positive 2-25°C Ambiente
B1017-XXX Dried Gram Negative 2-25°C Ambiente
B1017-110 Rapid Neg ID 3 2-25°C Controlada
B1017-165 Rapid Neg ID 4 2-25°C Ambiente
B1017-166 Rapid Pos ID 2 2-25°C Ambiente
 Preparación del inóculo - MÉTODO DE PROMPT

Sostener perpendicular y
firmemente el mango de la varilla
y tirar hacia abajo el collarín. No
retuerza ni doble la varilla.

Tocar con la punta de la varilla NO SE ADMITEN LAS

3 colonias aisladas cuyo tamaño sea al
menos tan grande como la punta de la TÉCNICAS DE FASE
varilla. LOGARITMICA Y
*NO RASPE NI PERFORE EL AGAR ESTACIONARIA CON
NOTA: en caso de colonias muy pequeñas, casi
LOS PRODUCTOS
milimétricas, continúe incubando la placa MICROSCAN
primaria hasta que alcancen el diámetro de la
punta de la varilla. Si es improbable como en el
caso se los estreptococos deberá usar otro
método como el de turbidez.
Preparación del inóculo - MÉTODO DE PROMPT
Estabilidad
4 hrs
Colonias mucoides o
muy pequeñas dejar
1 hr

6.9x105 UFC/mL

Agite la botella de 8 a 10
segundos para que las
bacterias se desprendan
del extremo de la varilla. Si
Destapar la ampolleta, Introducir la varilla, no se desprenden, deje
romper el tapón. presione y haga un reposar la solución durante
movimiento giratorio 5 minutos y agite de nuevo.
para asegurar que
este bien cerrado.
Preparación del inóculo - MÉTODO DE TURBIDEZ

• El sistema Prompt® para preparación del inóculo es un método rápido, sencillo y

estandarizado para la identificación con MicroScan®. Al utilizarlo, debe tener
precaución con aquellos microorganismos que generen colonias muy pequeñas (p.
ej., colonias de estreptococos) y colonias mucoides como en el caso de Proteus.

• En ocasiones, al utilizar el sistema Prompt® con estafilococos, el número de

unidades formadoras de colonias (UFC) puede ser mayor al esperado, lo cual
afecta los resultados de ciertos antibióticos dependientes del inóculo (quinolonas
como Ciprofloxacina, lincosamidas como Clindamicina, macrólidos como
Eritromicina) generando que la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) esté una
concentración más arriba de la esperada.
Preparación del inóculo - MÉTODO DE TURBIDEZ

• En estos casos, se recomienda utilizar el Método de Ajuste de Turbidez

para preparar el inóculo y confirmar los resultados. Este método también se
recomienda para confirmar y detectar estafilococos resistentes a la
Meticilina.

• SE RECOMIENDA PARA la inoculación directa de todos los cocos gram

positivos aerobios o para la detección de estafilococos resistentes a la
Meticilina.
 Preparación del Inoculo – METODO DE
TURBIDEZ
Tomar con aplicador de madera estéril o asa bacteriológica
4-5 colonias grandes
5-10 colonias pequeñas

Deben ser colonias morfológicamente similares y bien aisladas

de un cultivo de 18-24 horas de crecimiento provenientes de
agares recomendados por MicroScan® (no inhibitorios)
Medir turbidez
Suspender en 3 mL de agua de inóculo (catálogo B1015-2).

La turbidez final debe ser equivalente al tubo 0.5 del

nefelómetro de McFarland o 0.06 a 0.1 usando Turbidímetro
y tape bien

Agitar con Vortex de 2 a 3 seg

Preparación del Inoculo – METODO DE
TURBIDEZ

Con micro pipeta y punta estéril, tomar 0.1 mL (100 μl) de

la suspensión estandarizada.y

Adicionarla a 25 mL de agua para inóculo con Pluronic®

(catálogo B1015-7).

Tapar bien y agitar 8-10 veces para mezclar

La estabilidad 15 min
Preparación del inóculo
PANELES CONVENCIONALES POSITIVOS Y NEGATIVOS

Prepare el inóculo ajustado a 0.5 McFarland o 0.06-0.10 turbidez

5x105 UFC/mL
25 ml
100 µl
Pluronic Estabilidad 15 min
Etiquetar los paneles
3 ml Agite
Salina - P Usando el RENOK

Vacíe a: Inocular/
Rehidratar el
panel con 115 µl por pozo
Estabilidad 4 Panel
hrs inoculador
D
Botella de Prompt
WalkAway
6.9x105 UFC/mL
Colonias mucoides o muy pequeñas dejar 1 hr
 PANELES SYNERGIES PARA GRAM NEGATIVOS Y POSITIVOS

Dilución
3 ml 100 µl 25 ml
Salina - P pluronic Mezcle
ó
Caldo GP o LHB
Etiquetar los paneles
3 ml Vacíe a
Salina - P la parte pequeña Usando el RENOK,
del inoculador
Inocular/
Rehidratar el panel
25 ml
Vacíe a con 115 µl por pozo
pluronic – D
o la parte grande
Caldo GP o LHB del inoculador Panel
inoculador WalkAway Plus
R
Hidratación del panel
Inoculación del panel utilizando el sistema
Renok®
• El funcionamiento de la unidad
RENOK® consiste en que se hace el
vacío cuando se levanta una palanca.
•
• Una cámara en el interior de la unidad
deja entrar una cantidad de aire
controlada con precisión.

• El vacío que se produce provoca que el

inóculo se desplace a la tapa de
transferencia del inoculador. En la
unidad RENOK® no entra ningún tipo
de líquido por lo que la contaminación
del aparato puede controlarse más
fácilmente que con los métodos que
implican contacto directo.
Inoculación del panel utilizando el sistema
Renok®
Superficie plana, lisa y Colocar la tapa de
estable. Golpear suavemente las
transferencia sobre
Distribuir homogéneamente cuatro
la charola.
la suspensión en la charola esquinas de la tapa.
inoculadora.

Asegurarse de que no
hay burbujas.

Espere al menos 20
segundos para que la
tapa de transferencia
repose sobre la bandeja.
 Tomar el
RENOK llevar
la tapa de
trasferencia.

Jalar palanca central Colocarlo

sobre el panel
Retirar el RENOK® del pie. MicroScan
Apretar las palancas con el
pulgar y el anular
Colocar encima de la tapa
de transferencia.

OJO Dispensar
Verificar el nivel la
de inoculo en los suspensió
pocillos n en el
panel.
Desechar la tapa de transferencia
y la charola en contenedor para Para que no sufra ningún daño,
residuos biológicamente peligrosos coloque la unidad RENOK® en el pie
cuando no la esté utilizando.
Adición de aceite mineral

Adicionar 2 a 3 Gotas

Sistemas WA, lo realiza

automáticamente.
 Incubación de los paneles
• El WalkAway lo realiza de manera automática

• Fuera del instrumento:

– Apile los paneles en grupos de 3 a 5
– Para impedir la evaporación coloque una tapa o un panel cubridor
limpio para impedir la evaporación.

• Los paneles cubridores pueden volverse a usar, se pueden

limpiar con agua y jabón, no descontaminar con alcohol,
– Incube los paneles durante 16-20 horas a 35°C en incubador sin CO2
LECTURA DE LOS
PANELES
 PRUEBAS BACTERIOLÓGICAS

- Interpretar las pruebas 3

bioquímicas para la
identificación del aislado. Susceptibilidad

Genérico? Antimicrobiana
- Interpretar los resultados de
susceptibilidad a los
antibióticos para determinar el Identificación

más efectivo que puede usar Patógeno(s)

Drogas para
el Médico para tratar al
Nivel de Reportar
paciente contra el patógeno especie?
sospechoso.
 Lectura de los paneles puede realizarse de 3
maneras
• Sistema manual. El usuario revisa visualmente los resultados del panel y los
introduce al software MicroScan® LabPro®;

• Sistema automatizado: AutoScan-4®, registra los resultados de las bioquímicas

y del crecimiento en las concentraciones de antibióticos para generar la
identificación en género, especie y biotipo, así como la susceptibilidad
bacteriana.

• Sistema totalmente automatizado ó robotizado. WalkAway-40/96®, el cual se

encarga de la incubación, procesamiento, adición de aceite y reactivos, lectura
e impresión de resultados de los paneles, todo de manera automática y con la
mínima intervención del usuario.