Colorantes 3

Histoquímica:
Colorantes
Dr. Ulises MEJIA RODRIGUEZ

1) Toma de muestra
5) R
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c)ióRn
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ciuón ó n
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m
ciicócan
a 2)
Técnicas
histológicas
ia 3)
to m In
clu
ic ro sió
4) M n
Color
Característica psicofísica de la
luz que depende de las
distintas impresiones que
producen en el ojo las
radiaciones visibles de
diferente longitud de onda.
Tesis:
“Aplicación del colorante del
maiz morado en la tinción
nuclear de células presentes
en un corte histológico”
Autora: Paola Ofelia Uriol Bustamante

Cromóforo
Agrupaciones atómicas insaturadas
responsable que una sustancia
orgánica absorba luz en la zona visible
del espectro y por lo tanto, tenga color.
• Grupo cromóforo quinoide
• Grupo crómoforo azo -N=N-

• Grupo cromóforo nitroso -N=O
• Grupo cromóforo azoamino -N=N-NH
• Grupo cromóforo carbonilo -C=O
• Grupo cromóforo nitro -N=O
O
Cromógeno
Molécula que contiene algún
cromóforo; sustancia con
color pero no es un colorante
pues carece de la capacidad
de poder unirse al tejido de
manera permanente.
O2N NO2
NO2
Auxocromo
Radicales que comunican al
compuesto la propiedad de
disociación electrolítica,
ayuda a unir el colorante al
tejido a través de la
interacción química con sus
constituyentes.
• Auxocromo fenólico -OH
• Auxocromo sulfónico HSO3
• Auxocromo carboxilo COOH
• Auxocromo amino NH2
2,4,6-Trinitrofenol=ácido pícrico
OH
O2N NO2
+ H2O
NO2
O
O2N NO2
+
+ H
NO2
Clasificación de los
colorantes
• Por su origen:
–Naturales
• Animal (carmín)
• Vegetal (orceína)
–Artificiales o sintéticos o
colorantes de anilina
• Por tener un núcleo básico común:
–Nitroso y nitrocolorantes
–Colorantes azoicos
–Colorantes del difenil y
trifenilmetano
–Colorantes xanténicos
–Colorantes de las ftalocianinas
–Colorantes derivados de la
antraquinona
–Colorantes derivados de la
acridina
–Colorantes derivados de las
iminas quinónicas:
• Oxacínicos
• Tiacínicos
• Acínicos
Nitrocolorante
OH
O2N NO2
NO2
Colorantes azoicos
-N=N-
Trifenilmetano
H-C
Xanteno
O
• En función del grado de
ionización:
–Colorantes ácidos
–Colorantes básicos
–Colorantes neutros
–Colorantes indiferentes
Colorantes ácidos
Sales neutras cuya
propiedad colorante esta
unida al componente
ácido de la molécula.
Tetrabromofluoresceina de sodio
(eosina Y)
+ H20
+ Na+
Componente
incoloro
Componente ácido coloreado

Citoplasma rosado
Colorantes básicos
Sales neutras cuya
propiedad colorante esta
unida al componente
básico de la molécula.
Cloro.hexametil.pararrosanilina=cristal violeta
+ H2 0
+ Cl -
Componente
incoloro
Componente básico coloreado

Colorantes neutros
Sales neutras complejas, mezcla
de un colorante de naturaleza
ácida (eosina) con otro de tipo
básico (azul de metileno). La
oxidación del azul de metileno
produce los azures de metileno.
Después de la disociación de la
molécula colorante, sobre el
tejido se observa tres colores:
iAzul por el azul de metileno.
iRosado por la eosina.
iPúrpura por metacromasia de
los azures y del azul de
metileno.
• Wright
• Giemsa
• Leishman
• May Grünwald
The granules in eosinophils stain bright red
with the giemsa stain in this case of acute esophagitis
The
granules in eosinophils stain bright red with
the giemsa stain in this case of acute esophagitis.
Examen fresco sin coloración Tripanosomas
Microfilarias
Field
Giemsa Bartonella baciliformes
Wright Leptospira
Extendidos o Leishman Plasmodium
gota gruesa
Genner-Giemsa Tripanosomas
May-Grünwald Giemsa Leishmanias
Hematoxilina-eosina Microfilarias
Chlamydia trachomatis
Calymmatobacterium
granulomatis
Floxina azul de toluidina
Plasmodium
Secciones Giemsa modificado por Wolbach
quirúrgicas, biopsias, Tripanosomas
May Grünwald-Giemsa
coágulos Leishmanias
Hematoxilina férrica-eosina
Toxoplasma gondii
Microfilaria
Colorantes indiferentes
Sales neutras complejas,
solubles en soluciones
alcohólicas. Colorean sustancias
que tienen poder disolvente
superior al del líquido que ha
servido para prepararlo.
• Sudan III
• Sudan IV
• Oil red
• Sudan black b
Coloración con Sudan:
• Difusión:
Sudan III
Sudan IV
0il red
Sudan black B
Método de coloración de
hematoxilina - eosina
Hematoxilina (C.I. 75290)
• Sustancia orgánica.
• Haematoxylum campechianum.
• America central.
• Introducida por Waldeyer en
1863.
Hematoxilina
+ HgO
Hemateína
-
+ (SO4)2AlK
-
• Laca alumínica+.
• Hemalumbre de Harris+.
• Hematoxilina de Harris+.
Eosina A (C.I.45380)
• Eosina amarillenta (A, Y).
• Familia de los colorantes xanténicos.
• Colorante ácido.
• Fluorescente.
Tetrabromofluoresceina de sodio
(eosina A)
Coloración de hematoxilina - eosina
• La aplicación del método de coloración

hematoxilina-eosina, es utilizada por
primera vez por Carl Busch (1877)
• Aumenta el contraste de las estructuras y
hace a los tejidos visibles y diferenciables
unos de otros.
Coloración de hematoxilina - eosina
• Permiten reconocer algunos componentes
tisulares por tinción diferencial.
• Imparten sus colores en diversas medidas,
con lo cual se puede apreciar grados de
intensidad en la coloración.
Coloración Colorantes Núcleo Citoplasma Fibras Fibras
colágenas musculares
Hematoxilina Hematoxilina Azul o - - -
- eosina de Harris morado
Eosina Y - Rosado Rosado Rosado
"Me lo contaron y lo olvidé;
lo vi y lo entendí; lo hice y lo
aprendí."
Confucio
Mecanismos generales
de la coloración
• Químicos.
• Físicos.
• Físico-químicos.
Mecanismos químicos
• Enunciada por Ehrlich (1879)
• Unión entre el colorante y ciertas
estructuras del tejido se da por
cargas.
• Enlace salinos.
• Basofilia
• Acidofilia.
Termino Definición Colorantes Ejemplos
Basófilo Partes de la célula Azul de toluidina, Núcleo (ácido

o de tejidos que azul de metileno, desoxirribonucleico ADN)
se tiñen hematoxilina de
fácilmente con Harris
colorantes básicos
Ácidófilo Partes de la célula Eosina Y, Orange G, Citoplasma (proteínas)

o de tejidos que fucsina ácida
se tiñen
fácilmente con
colorantes ácidos
Mecanismos físicos
• Ligado a las propiedades de difusión
y disolución del colorante sobre el
tejido.
• El colorante es más soluble en el
tejido que en el disolvente.
• El disolvente actúa como medio de
transporte.
Mecanismos físico-químicos
• Formación de uniones
intermoleculares por:
– Atracción electrostática
– Fuerzas de tensión superficial.
Aplicación de
colorantes en
hematología
Aplicación de
colorantes en
microbiología
Coloración de Gram Diagnóstico
Gram Negativos Gram Positivos

Coloración de Ziehl Neelsen Diagnóstico
Para microorganismos alcohol-ácido resistente
Para microorganismos alcohol-resistente

E. Histolytica- E. dispar
(Morfología).
E. Histolytica-Trofozoito E. dispar-Trofozoito
hematófago
Morfología de Proglótides.
(ramificaciones uterinas.)
T. Saginata. T. Solium.

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Dr. Ulises MEJIA RODRIGUEZ

Autora: Paola Ofelia Uriol Bustamante

• Grupo crómoforo azo -N=N-

• Grupo cromóforo nitro -N=O

Componente ácido coloreado

Componente básico coloreado

• La aplicación del método de coloración

Basófilo Partes de la célula Azul de toluidina, Núcleo (ácido

Ácidófilo Partes de la célula Eosina Y, Orange G, Citoplasma (proteínas)

Gram Negativos Gram Positivos

Para microorganismos alcohol-ácido resistente

Para microorganismos alcohol-resistente

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